CN112007034B - Tlr激动剂与免疫检查点抑制剂、vegfr抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途 - Google Patents

Tlr激动剂与免疫检查点抑制剂、vegfr抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途 Download PDF

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Abstract

本申请中涉及TLR激动剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途。具体而言，本申请涉及的TLR激动剂为式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐，免疫检查点抑制剂选自PD‑1抑制剂、PD‑L1抑制剂或CTLA‑4抑制剂，VEGFR抑制剂为阿帕替尼或其可药用盐。
Figure DDA0002514780790000011

Description

TLR激动剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治 疗肿瘤药物中的用途
技术领域
本申请中涉及一种TLR激动剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
背景技术
蛋白质程序性死亡1(PD-1)是CD28受体家族的抑制性成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达。根据加入单克隆抗体后对提升T细胞增殖的功能性影响发现了家族最初的成员，CD28和ICOS。通过在凋亡细胞中筛选差异表达发现了PD-1。目前，已有小野公司的Nivolumab及Merck公司的Pembrolizumab成功获批上市，用于治疗不可切除或转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、晚期肾细胞癌、霍奇金淋巴瘤、复发性或转移性鳞状细胞癌等。
Toll样受体(toll-like receptors；TLRs)是参与先天免疫的一类重要蛋白质分子。TLRs是单体跨膜的非催化性受体，通常在岗哨细胞如巨噬细胞和树突状细胞中表达，可以识别由微生物产生的结构保守的分子。一旦这些微生物突破如皮肤或肠道粘膜的物理屏障，就会被TLRs识别，继而激活免疫细胞应答。(Mahla,RS.等人,Front Immunol.4:248(2013))。免疫系统之所以具有广泛识别病原微生物的能力，某种程度上是由于Toll样免疫受体的广泛存在。
在哺乳动物中至少有10种不同的TLRs。一些此类受体的配体和相应的信号级联放大已经被鉴定出。很多疾病、障碍与TLRs的异常有关，比如黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌(basalcellcarcinoma)、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺炎(COPD)、溃疡性结肠炎、肝纤维化，HBV、黄病毒科(Flaviviridae)病毒、HCV、HPV、RSV、SARS、HIV或流行性感冒的病毒感染等。
TLR7是TLRs(TLRs 3、7、8和9)亚组的成员，局限于专门检测非己核酸的细胞的内涵体隔室。TLR7在通过识别ssRNA抗病毒防御方面起关键作用(Diebold S.S.等,Science,2004:303,1529-1531；和Lund J.M.等,PNAS,2004:101,5598-5603)。目前，已上市的TLR7抑制剂主要用于表面给药，例如imiquimod用于治疗尖锐湿疣等。
WO2018095426A提供了一种TLR7激动剂，结构如下所示：
Figure BDA0002514780770000021
F Sato-Kaneko等人发现通过瘤内注射TLR激动剂及PD-1阻断剂的联合治疗可以激活肿瘤相关巨噬细胞(TAM)并诱导肿瘤特异性适应性免疫应答，在复发性或转移性头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)模型中抑制原发性肿瘤并预防转移(JCI Insight.2017Sep 21；2(18):e93397.)。
Yosuke Ota等人发现通过静脉注射TLR7激动剂DSP-0509联用抗PD-1抗体对于抗肿瘤免疫反应起到了协同作用(AACR 2018Proceedings:Abstracts 4726)。
Naoto Nishii等人发现在TLR7激动剂resiquimod与PD-L1抗体联用在小鼠头颈鳞癌模型SCCVII及结肠癌模型Colon 26的实验结果上认为低剂量瑞喹莫德可作为PD-1/PD-L1阻断治疗的伴侣药物(Oncotarget,2018,Vol.9,(No.17),pp:13301-13312)。
MEDIMMUNE公司开展了关于TLR/8激动剂MEDI9197与durvalumab联用治疗实体瘤或者T-细胞淋巴瘤的临床实验，目前尚未有结果(NCT02556463)。
WO2018068691公开了一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途。
发明内容
本申请提供一种TLR激动剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
本申请中提供的TLR激动剂可选式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐，
Figure BDA0002514780770000022
本申请中TLR激动剂的可药用盐可以是盐酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、戊酸盐、谷氨酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、香草酸盐、扁桃酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐或月桂基磺酸盐等，优选马来酸盐、盐酸盐，最优选二盐酸盐。
本申请中所述的免疫检查点抑制剂可选自程序性死亡-1(PD-1)抑制剂、程序性死亡配体-1(PD-L1)抑制剂或细胞毒性-T-淋巴细胞相关蛋白-4(CTLA-4)抑制剂。
在一些实施方案中，本申请中所述的PD-1受体抑制剂为可特异性的结合PD-1并抑制PD-1活性的抗体或者其抗原结合片段；所述PD-L1抑制剂为可特异性地结合PD-L1并抑制PD-L1活性的抗体或其抗原结合片段；所述CTLA-4抑制剂为可特异性的结合CTLA-4并抑制CTLA-4活性的抗体或其抗原结合片段。
本申请中所述的可特异性的结合PD-1并抑制PD-1活性的抗体或者其抗原结合片段即为抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
本申请中所述的可特异性地结合PD-L1并抑制PD-L1活性的抗体或其抗原结合片段即为抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
本申请中所述的可特异性的结合CTLA-4并抑制CTLA-4活性的抗体或其抗原结合片段即抗CTLA-4抗体其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本申请所述的PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
其中，前面所述的各CDR序列如下表所示：
名称 序列 编号
HCDR1 SYMMS SEQID NO：1
HCDR2 TISGGGANTYYPDSVKG SEQID NO：2
HCDR3 QLYYFDY SEQID NO：3
LCDR1 LASQTIGTWLT SEQID NO：4
LCDR2 TATSLAD SEQID NO：5
LCDR3 QQVYSIPWT SEQID NO：6
优选的，所述的PD-1抗体为人源化抗体或其片段。
在可选实施方案中，本申请中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段组成的组的抗体片段。
免疫球蛋白可以来源于任何通常已知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的Ab种类或亚类(例如，IgM或IgG1)。在一些可选实施方案中，本申请中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的重链恒定区，优选包含IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。
在另一些可选实施方案中，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含κ或λ的轻链恒定区的轻链恒定区。
进一步地，优选人源化抗体轻链可变区序列为如SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，所述变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基酸变化；所述人源化抗体重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。
前述的人源化抗体重、轻链的序列如下所示：
重链可变区
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSS
SEQID NO：9
轻链可变区
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIK
SEQID NO：10
优选的，所述人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基酸变化；所述人源化抗体重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。
在另一实施方案中，所述人源化抗体的轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。
所述人源化抗体重、轻链的序列如下所示：
重链
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQID NO：7
轻链
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQID NO：8
在一些实施方案中，VEGFR抑制剂选自VEGFR-2抑制剂，所述VEGFR-2可选阿帕替尼或其可药用盐。
一些实施方案中，阿帕替尼可药用盐选自甲磺酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、醋酸盐、二氟醋酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、萘磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、以及磷酸盐，在优选方案中，阿帕替尼的可药用盐为甲磺酸盐。
在一些实施方案中，将TLR激动剂的剂量可选0.0001-20.0mg/kg，可选0.001-10.0mg/kg，可选0.001-5.0mg/kg，可选0.001-1.0mg/kg。具体的，TLR激动剂的剂量为0.0010mg/kg、0.0015mg/kg、0.0020mg/kg、0.0025mg/kg、0.0030mg/kg、0.0035mg/kg、0.0040mg/kg、0.0045mg/kg、0.0050mg/kg、0.0055mg/kg、0.0060mg/kg、0.0065mg/kg、0.0070mg/kg、0.0075mg/kg、0.0080mg/kg、0.0085mg/kg、0.0090mg/kg、0.0095mg/kg、0.0100mg/kg、0.0105mg/kg、0.0110mg/kg、0.0115mg/kg、0.0120mg/kg、0.0125mg/kg、0.0130mg/kg、0.0135mg/kg、0.0140mg/kg、0.0145mg/kg、0.0150mg/kg、0.0155mg/kg、0.0160mg/kg、0.0165mg/kg、0.0170mg/kg、0.0175mg/kg、0.0180mg/kg、0.0185mg/kg、0.0190mg/kg、0.0195mg/kg、0.0200mg/kg、0.0205mg/kg、0.0210mg/kg、0.0215mg/kg、0.0220mg/kg、0.0225mg/kg、0.0230mg/kg、0.0235mg/kg、0.0240mg/kg、0.0245mg/kg、0.0250mg/kg、0.0255mg/kg、0.0260mg/kg、0.0265mg/kg、0.0270mg/kg、0.0275mg/kg、0.0280mg/kg、0.0285mg/kg、0.0290mg/kg、0.0295mg/kg、0.0300mg/kg、0.0305mg/kg、0.0310mg/kg、0.0315mg/kg、0.0320mg/kg、0.0325mg/kg、0.0330mg/kg、0.0335mg/kg、0.0340mg/kg、0.0345mg/kg、0.0350mg/kg、0.0355mg/kg、0.0360mg/kg、0.0365mg/kg、0.0370mg/kg、0.0375mg/kg、0.0380mg/kg、0.0385mg/kg、0.0390mg/kg、0.0395mg/kg、0.0400mg/kg、0.0405mg/kg、0.0410mg/kg、0.0415mg/kg、0.0420mg/kg、0.0425mg/kg、0.0430mg/kg、0.0435mg/kg、0.0440mg/kg、0.0445mg/kg、0.0450mg/kg、0.0455mg/kg、0.0460mg/kg、0.0465mg/kg、0.0470mg/kg、0.0475mg/kg、0.0480mg/kg、0.0485mg/kg、0.0490mg/kg、0.0495mg/kg、0.0500mg/kg、0.0505mg/kg、0.0510mg/kg、0.0515mg/kg、0.0520mg/kg、0.0525mg/kg、0.0530mg/kg、0.0535mg/kg、0.0540mg/kg、0.0545mg/kg、0.0550mg/kg、0.0555mg/kg、0.0560mg/kg、0.0565mg/kg、0.0570mg/kg、0.0575mg/kg、0.0580mg/kg、0.0585mg/kg、0.0590mg/kg、0.0595mg/kg、0.0600mg/kg、0.0605mg/kg、0.0610mg/kg、0.0615mg/kg、0.0620mg/kg、0.0625mg/kg、0.0630mg/kg、0.0635mg/kg、0.0640mg/kg、0.0645mg/kg、0.0650mg/kg、0.0655mg/kg、0.0660mg/kg、0.0665mg/kg、0.0670mg/kg、0.0675mg/kg、0.0680mg/kg、0.0685mg/kg、0.0690mg/kg、0.0695mg/kg、0.0700mg/kg、0.0705mg/kg、0.0710mg/kg、0.0715mg/kg、0.0720mg/kg、0.0725mg/kg、0.0730mg/kg、0.0735mg/kg、0.0740mg/kg、0.0745mg/kg、0.0750mg/kg、0.0755mg/kg、0.0760mg/kg、0.0765mg/kg、0.0770mg/kg、0.0775mg/kg、0.0780mg/kg、0.0785mg/kg、0.0790mg/kg、0.0795mg/kg、0.0800mg/kg、0.0805mg/kg、0.0810mg/kg、0.0815mg/kg、0.0820mg/kg、0.0825mg/kg、0.0830mg/kg、0.0835mg/kg、0.0840mg/kg、0.0845mg/kg、0.0850mg/kg、0.0855mg/kg、0.0860mg/kg、0.0865mg/kg、0.0870mg/kg、0.0875mg/kg、0.0880mg/kg、0.0885mg/kg、0.0890mg/kg、0.0895mg/kg、0.0900mg/kg、0.0905mg/kg、0.0910mg/kg、0.0915mg/kg、0.0920mg/kg、0.0925mg/kg、0.0930mg/kg、0.0935mg/kg、0.0940mg/kg、0.0945mg/kg、0.0950mg/kg、0.0955mg/kg、0.0960mg/kg、0.0965mg/kg、0.0970mg/kg、0.0975mg/kg、0.0980mg/kg、0.0985mg/kg、0.0990mg/kg、0.0995mg/kg、0.1000mg/kg、0.1005mg/kg、0.1010mg/kg、0.1015mg/kg、0.1020mg/kg、0.1025mg/kg、0.1030mg/kg、0.1035mg/kg、0.1040mg/kg、0.1045mg/kg、0.1050mg/kg、0.1055mg/kg、0.1060mg/kg、0.1065mg/kg、0.1070mg/kg、0.1075mg/kg、0.1080mg/kg、0.1085mg/kg、0.1090mg/kg、0.1095mg/kg、0.1100mg/kg、0.1105mg/kg、0.1110mg/kg、0.1115mg/kg、0.1120mg/kg、0.1125mg/kg、0.1130mg/kg、0.1135mg/kg、0.1140mg/kg、0.1145mg/kg、0.1150mg/kg、0.1155mg/kg、0.1160mg/kg、0.1165mg/kg、0.1170mg/kg、0.1175mg/kg、0.1180mg/kg、0.1185mg/kg、0.1190mg/kg、0.1195mg/kg、0.1200mg/kg、0.1205mg/kg、0.1210mg/kg、0.1215mg/kg、0.1220mg/kg、0.1225mg/kg、0.1230mg/kg、0.1235mg/kg、0.1240mg/kg、0.1245mg/kg、0.1250mg/kg、0.1255mg/kg、0.1260mg/kg、0.1265mg/kg、0.1270mg/kg、0.1275mg/kg、0.1280mg/kg、0.1285mg/kg、0.1290mg/kg、0.1295mg/kg、0.1300mg/kg、0.1305mg/kg、0.1310mg/kg、0.1315mg/kg、0.1320mg/kg、0.1325mg/kg、0.1330mg/kg、0.1335mg/kg、0.1340mg/kg、0.1345mg/kg、0.1350mg/kg、0.1355mg/kg、0.1360mg/kg、0.1365mg/kg、0.1370mg/kg、0.1375mg/kg、0.1380mg/kg、0.1385mg/kg、0.1390mg/kg、0.1395mg/kg、0.1400mg/kg、0.1405mg/kg、0.1410mg/kg、0.1415mg/kg、0.1420mg/kg、0.1425mg/kg、0.1430mg/kg、0.1435mg/kg、0.1440mg/kg、0.1445mg/kg、0.1450mg/kg、0.1455mg/kg、0.1460mg/kg、0.1465mg/kg、0.1470mg/kg、0.1475mg/kg、0.1480mg/kg、0.1485mg/kg、0.1490mg/kg、0.1495mg/kg、0.1500mg/kg。
在一些实施方案中，所述TLR激动剂剂量选自0.01-200mg，0.05-100mg，0.10-50mg，具体可选0.01mg、0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg、0.07mg、0.08mg、0.09mg、0.10mg、0.11mg、0.12mg、0.13mg、0.14mg、0.15mg、0.16mg、0.17mg、0.18mg、0.19mg、0.20mg、0.21mg、0.22mg、0.23mg、0.24mg、0.25mg、0.26mg、0.27mg、0.28mg、0.29mg、0.30mg、0.31mg、0.32mg、0.33mg、0.34mg、0.35mg、0.36mg、0.37mg、0.38mg、0.39mg、0.40mg、0.41mg、0.42mg、0.43mg、0.44mg、0.45mg、0.46mg、0.47mg、0.48mg、0.49mg、0.50mg、0.51mg、0.52mg、0.53mg、0.54mg、0.55mg、0.56mg、0.57mg、0.58mg、0.59mg、0.60mg、0.61mg、0.62mg、0.63mg、0.64mg、0.65mg、0.66mg、0.67mg、0.68mg、0.69mg、0.70mg、0.71mg、0.72mg、0.73mg、0.74mg、0.75mg、0.76mg、0.77mg、0.78mg、0.79mg、0.80mg、0.81mg、0.82mg、0.83mg、0.84mg、0.85mg、0.86mg、0.87mg、0.88mg、0.89mg、0.90mg、0.91mg、0.92mg、0.93mg、0.94mg、0.95mg、0.96mg、0.97mg、0.98mg、0.99mg、1.00mg、1.01mg、1.02mg、1.03mg、1.04mg、1.05mg、1.06mg、1.07mg、1.08mg、1.09mg、1.10mg、1.11mg、1.12mg、1.13mg、1.14mg、1.15mg、1.16mg、1.17mg、1.18mg、1.19mg、1.20mg、1.21mg、1.22mg、1.23mg、1.24mg、1.25mg、1.26mg、1.27mg、1.28mg、1.29mg、1.30mg、1.31mg、1.32mg、1.33mg、1.34mg、1.35mg、1.36mg、1.37mg、1.38mg、1.39mg、1.40mg、1.41mg、1.42mg、1.43mg、1.44mg、1.45mg、1.46mg、1.47mg、1.48mg、1.49mg、1.50mg、1.51mg、1.52mg、1.53mg、1.54mg、1.55mg、1.56mg、1.57mg、1.58mg、1.59mg、1.60mg、1.61mg、1.62mg、1.63mg、1.64mg、1.65mg、1.66mg、1.67mg、1.68mg、1.69mg、1.70mg、1.71mg、1.72mg、1.73mg、1.74mg、1.75mg、1.76mg、1.77mg、1.78mg、1.79mg、1.80mg、1.81mg、1.82mg、1.83mg、1.84mg、1.85mg、1.86mg、1.87mg、1.88mg、1.89mg、1.90mg、1.91mg、1.92mg、1.93mg、1.94mg、1.95mg、1.96mg、1.97mg、1.98mg、1.99mg、2.00mg、2.00mg、2.50mg、3.00mg、3.50mg、4.00mg、4.50mg、5.00mg、5.50mg、6.00mg、6.50mg、7.00mg、7.50mg、8.00mg、8.50mg、9.00mg、9.50mg、10.00mg、10.50mg、11.00mg、11.50mg、12.00mg、12.50mg、13.00mg、13.50mg、14.00mg、14.50mg、15.00mg、15.50mg、16.00mg、16.50mg、17.00mg、17.50mg、18.00mg、18.50mg、19.00mg、19.50mg、20.00mg、20.50mg、21.00mg、21.50mg、22.00mg、22.50mg、23.00mg、23.50mg、24.00mg、24.50mg、25.00mg、25.50mg、26.00mg、26.50mg、27.00mg、27.50mg、28.00mg、28.50mg、29.00mg、29.50mg、30.00mg、30.50mg、31.00mg、31.50mg、32.00mg、32.50mg、33.00mg、33.50mg、34.00mg、34.50mg、35.00mg、35.50mg、36.00mg、36.50mg、37.00mg、37.50mg、38.00mg、38.50mg、39.00mg、39.50mg、40.00mg、40.50mg、41.00mg、41.50mg、42.00mg、42.50mg、43.00mg、43.50mg、44.00mg、44.50mg、45.00mg、45.50mg、46.00mg、46.50mg、47.00mg、47.50mg、48.00mg、48.50mg、49.00mg、49.50mg、50.00mg。
可选的实施方案中，TLR激动剂的剂量选自0.10mg、0.15mg、0.20mg、0.25mg、0.30mg、0.35mg、0.40mg、0.45mg、0.50mg、0.55mg、0.60mg、0.65mg、0.70mg、0.75mg、0.80mg、0.85mg、0.90mg、0.95mg、1.0mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg。
可选的实施方案中，TLR激动剂的剂量选自0.5mg、1.0mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg。
可选的实施方案中，TLR激动剂的剂量选自.5mg、1mg、2.0mg、3mg、4.0mg、6.0mg、8mg、9mg、12mg。
本申请中TLR激动剂给药频率次为每日三次，日两次，每日一次，每两日一次，每三日一次，每四日一次，每五日一次，每六日一次，每周一次，每两周一次，每三周一次，每四周一次，优选每三日一次，每周一次或每两周一次。
可选的实施方案中，TLR激动剂给药频率次为每周一次。
可选的实施方案中，TLR激动剂给药频率次为每两周一次。
可选的实施方案中，TLR激动剂给药频率次为每三日一次。
在本申请中的某些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的剂量可以在以下范围内：0.1-10.0mg/kg、0.1-5mg/kg、1-5mg/kg、2-5mg/kg，例如，剂量可以是0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的剂量可以在以下范围内：1-1000mg、80-800mg、80-700mg、80-600mg、80-500mg、80-400mg、80-300mg、100-300mg或200-300mg。例如，剂量可以是1.0mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg、2.0mg、2.2mg、2.4mg、2.6mg、2.8mg、3.0mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4.0mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5.0mg、5.2mg、5.4mg、5.6mg、5.8mg、6.0mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7.0mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8.0mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9.0mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10.0mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、275mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg。
可选的实施方案中，免疫检查点抑制剂的剂量为80mg、100mg、160mg、200mg、240mg、300mg、320mg、400mg、500mg、600mg、700mg或800mg。
可选的实施方案中，免疫检查点抑制剂的量为200mg。
本申请可选的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的给药频次为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一个月一次、每三-六个月或更长一次的给药频次施用。
在可选的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的给药频次为每两周一次或每三周一次。
在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为100-500mg，可以为100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、500mg，优选200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg；给药频次为一日一次、两日一次、三日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次。
在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为250mg或375mg，给药频次为给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.25mg、0.30mg、0.35mg、0.40mg、0.45mg、0.50mg、0.55mg、0.60mg、0.65mg、0.70mg、0.75mg、0.80mg、0.85mg、0.90mg、0.95mg、1.00mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg，给药频次为每三日一次，每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为0.1-10.0mg/kg或1-1000mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.5mg、1.0mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg，给药频次为每三日一次、每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂选自抗PD-1抗体或其抗原结合片段或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段给药剂量为0.1-10.0mg/kg或1-1000mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.5mg、1.0mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg，给药频次为每三日一次、每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂选自抗PD-1抗体或其抗原结合片段或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段给药剂量为80mg、100mg、160mg、200mg、240mg、300mg、320mg、400mg、500mg、600mg、700mg或800mg，给药频次为每两周一次或每三周一次，VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.5mg、1.0mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg，给药频次为每三日次、每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂选自抗PD-1抗体或其抗原结合片段或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段给药剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次，VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自2.0mg、4.0mg、6.0mg、9mg、12mg，给药频次为每三日一次或每周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自2.0mg、4.0mg、6.0mg、9mg、12mg，给药频次为每三日一次或每周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自2.0mg、4.0mg、6.0mg、9mg、12mg，给药频次为每周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为2.0mg，给药频次为每周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为4.0mg，给药频次为每周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为6.0mg，给药频次为每周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为9mg，给药频次为每日一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为12mg，给药频次为每日一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.50mg、1mg、2mg、3mg，给药频次为每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.50mg、1mg、2mg、3mg，给药频次为每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为0.50mg，给药频次为每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为1mg，给药频次为每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为2mg，给药频次为每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为3mg，给药频次为每周一次或每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为0.50mg，给药频次为每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为1mg，给药频次为每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为2mg，给药频次为每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为3mg，给药频次为每两周一次；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请中所述肿瘤是选自非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌、肾细胞癌、骨髓瘤、直肠癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤和所述肿瘤的任何组合，优选肝细胞癌、直肠癌、结肠癌、非小细胞肺癌。
在可选实施方案中，本申请中所述肿瘤为肝细胞癌、肝内胆管细胞癌、胆管胰腺癌、混合型肝癌。
在可选实施方案中，本申请中所述的肿瘤为肺癌。
在可选实施方案中，本申请中述的肿瘤为非小细胞肺癌，本申请所述的非小细胞肺癌选自鳞状细胞癌和非鳞状细胞癌，优选非磷状细胞癌。
在可选实施方案中，本申请中述的肿瘤为直肠癌、结肠癌。
本发明所述联合的给药途径包括但不限于经口给药、胃肠外给药、经皮给药，所述胃肠外给药包括但不限于静脉注射、皮下注射、肌肉注射。
可以将本申请的免疫检查点抑制剂构成在组合物中，例如，含有抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。本文中使用的“药学上可接受的载体”包括生理学上相容的任意的和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。在一个实施方案中，用于含有抗体的组合物的载体适合静脉、肌肉、皮下、胃肠外、腹腔、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)，本申请的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的盐、抗氧化剂、水性和非水性载体，和/或佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。
在本申请中优选的实施方案中，所述的PD-1抗体或其抗原结合片段以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射或腹腔，注射前需将PD-1抗体或其抗原结合片段配制成可注射的形式。本申请特别优选的实施方案中抗PD-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含PD-1抗体或其抗原结合片段、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的PD-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式包含PD-1抗体或其抗原结合片段、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。
本申请中TLR激动剂的给药途径可以是与上述免疫检查点抑制剂相同或者不同，具体包括包括经口给药、鼻腔、局部、静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、病灶内、脊柱或其它胃肠外施用途径。
为方便给药，需要将TLR激动剂配置成组合物，TLR激动剂以口服方式给药时，组合物的载体包括但不限于填充剂、润滑剂、崩解剂、粘合剂等。
在一些实施方案中，所述TLR激动剂以病灶内(具体可为瘤内)注射给药的方式施与患者，组合物的载体包括但不限于缓冲剂、渗透压调节剂。
在可选的实施方案中，所述TLR激动剂的给药方式为口服给药、瘤内注射或者吸入给予包含TLR激动剂的药物组合物。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自2.0mg、4.0mg、6.0mg、9mg、12mg，给药频次为每三日一次或每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自2.0mg、4.0mg、6.0mg、9mg、12mg，给药频次为每三日一次或每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自2.0mg、4.0mg、6.0mg、9mg、12mg，给药频次为每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为2.0mg，给药频次为每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为4.0mg，给药频次为每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为6.0mg，给药频次为每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为9mg，给药频次为每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为12mg，给药频次为每周一次，口服给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.50mg、1mg、2mg、3mg，给药频次为每周一次或每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量选自0.50mg、1mg、2mg、3mg，给药频次为每周一次或每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为0.50mg，给药频次为每周一次或每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为1mg，给药频次为每周一次或每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为2mg，给药频次为每周一次或每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为3mg，给药频次为每周一次或每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为0.50mg，给药频次为每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为1mg，给药频次为每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为2mg，给药频次为每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
可选的实施方案中，TLR激动剂的给药剂量为3mg，给药频次为每两周一次，瘤内给药；免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，免疫检查点抑制剂的剂量为200mg，给药频次为每两周一次或每三周一次；VEGFR抑制剂的给药剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
本申请还提供了一种治疗肿瘤的方法，包括向患者施用TLR激动剂、免疫检查点抑制剂和VEGFR抑制剂。
本申请还涉及一种包含TLR激动剂、免疫检查点抑制剂以及VEGFR抑制剂，以及一种或多种药用载体、赋形剂、稀释剂的药物组合物。所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。例如，可以配制为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂。
本申请还提供了一种药物包装盒，其中包装有本发明所述的TLR激动剂、免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂的药物组合物。
本申请将TLR激动剂、免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合给药，从而增强了抗肿瘤活性，以及改善了肿瘤的治疗效果。
如无相反解释，本申请中术语具有如下含义：
本申请中所述的““联合”是一种给药方式，是指在一定时间期限内给予至少一种剂量的免疫检查点抑制剂、TLR激动剂和VEGFR抑制剂，其中三种药物都显示药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，优选4周内，3周内，2周内，1周内，或24小时以内。可以同时或不分先后顺序给予免疫检查点抑制剂、TLR激动剂和VEGFR抑制剂。这种期限包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予免疫检查点抑制剂、TLR激动剂和VEGFR抑制剂。
本申请中所述“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。在本申请中一个优选的实施方案中，所述的PD-1人源化抗体的CDR序列选自SEQ ID NO:1，2，3，4，5，6。
本申请中所述“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，以及与人PD-1结合的Fv片段sFv片段；包含本申请中所述抗体的选自SEQ IDNO:1至SEQ ID NO:6中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chain antibody)或单链Fv(sFv)。本申请中的术语“与PD-1结合”，指能与人PD-1相互作用。本申请中的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本申请中抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。
本申请中所述“免疫检查点抑制剂”不包含TLR激动剂。
本申请中所述“治疗有效量”或“治疗上有效的剂量”是当单独使用或与另一种治疗剂联合使用时保护主体免于疾病发作或促进疾病消退的药物的任何量，所述疾病消退通过疾病征状的严重程度的降低、无疾病征状阶段的频率和持续时间的增加、或由疾病折磨引起的损伤或失能的预防来证明。使用熟练的从业人员已知的多种方法可以评价治疗剂的促进疾病消退的能力，诸如在临床试验期间在人主体中，在预测对于人类的效力的动物模型系统中，或通过在体外测定法中测定所述药剂的活性。
附图说明
图1.MC38小鼠移植模型右侧肿瘤体积变化曲线；
图2.MC38小鼠移植模型左侧肿瘤体积变化曲线；
图3.MC38小鼠移植模型小鼠瘤重；
图4.MC38小鼠移植模治疗过程中荷瘤鼠体重变化曲线。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本申请，但这些实施例并非限制本申请的范围。
实施例1、临床前研究受试药式(I)所示化合物二盐酸盐(药物A)、PD-1抗体(药物B)、甲磺酸阿帕替尼在鼠源结肠癌MC38的huPD-1人源化转基因小鼠动物模型上的药效作用评价
1、实验材料
肿瘤细胞：MC38肿瘤细胞，P7代购买于南京银河生物医药有限公司。培养于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，细胞为贴壁细胞，按照常规使用含有EDTA的胰蛋白酶消化传代，每周传代两次，放置于37℃、5％CO2培养箱中继续培养。对数生长期的肿瘤细胞被用于进行体内移植瘤模型的建立。
实验动物：HuPD-1人源化转基因小鼠，45只，雌性，4-8周龄，合格证号为No.201807138，购买于南京银河生物医药有限公司。
受试药信息：
药物A
将式(I)所示化合物(40mg，0.105mmol，式(I)所示化合物采用WO2018095426公开的方法制备)溶于0.5mL异丙醇和四氢呋喃的混合溶剂(V/V＝1:1)中，搅拌全溶，升温至50℃，滴加4M氯化氢的异丙醇溶液(0.055mL，0.22mmol)，冷却至室温搅拌16小时，析出白色固体。反应液过滤，收集滤饼，真空干燥，得到药物A。
药物A依据表1处方配置。
表1
Figure BDA0002514780770000181
Figure BDA0002514780770000191
药物B
WO2017054646A公开的PD-1抗体，重、轻链的序列分别如SEQID NO：7、SEQID NO：8所示。
hIgG4
供应商：上海恒瑞医药有限公司。
2、实验方法和步骤
收集对数生长期MC38肿瘤细胞P10代，用PBS缓冲液调整细胞浓度为5x106/mL，接种0.1mL细胞悬液于huPD-1人源化转基因小鼠左侧和右侧双侧胁腹部。观察接种后小鼠并监测肿瘤的生长，在接种后第6天时荷瘤小鼠右侧胁腹部平均肿瘤体积达到117.5mm3，按照右侧肿瘤体积大小进行随机分组和给药观察，具体分组信息如下表2：
表2.给药和治疗
Figure BDA0002514780770000192
备注:p.o.:口服给药；i.p.:腹腔给药,给药体积为0.1mL/10g mice；i.t.:瘤内注射，给药体积为0.05mL/mouse，仅注射右侧肿瘤组织。
2)受试药、对照药配置方法见表3：
表3.
Figure BDA0002514780770000193
Figure BDA0002514780770000201
3)评估指标及数据统计分析
主要是检测受试药物对MC38小鼠结肠癌细胞移植瘤的生长抑制作用。
肿瘤体积和荷瘤鼠体重测量：使用游标卡尺每周二次测量，肿瘤体积计算公式为V＝0.5a x b2，a，b分别代表肿瘤的长度和宽度；
％T/C＝(T-T0)/(V-V0)x 100：
V0和T0分别是对照组和给药组内每只小鼠刚开始给药时的肿瘤体积大小，
V和T是分别是对照组和给药组给药后每次测量的肿瘤体积大小。
Mean％ΔInhibition(TGI％)
Mean％ΔInhibition＝((mean(C)-mean(C0))-(mean(T)-mean(T0)))/(mean(C)-mean(C0))*100％
T-给药组肿瘤体积
T0-给药组初始肿瘤体积
C-对照组肿瘤体积
C0-对照组初始肿瘤体积
实验结束后肿瘤块的重量。
本实验所有荷瘤小鼠在给药后第21天结束。
所有数据均采用Mean±SEM表示，使用统计学分析软件SPSS 20.0对数据进行分析，多组比较采用one-way ANOVA方法，两组对比采用Independent-Samples T test进行统计分析。*P<0.05将被认为具有统计学意义的显著性差异。
3、实验结果
3.1药物A给药侧(近端)的肿瘤抑瘤率和生长曲线
表4.治疗后小鼠给药侧(近端)肿瘤抑制率(Mean±SEM,n＝7-8)
Figure BDA0002514780770000211
注：*,v.s.空白；#,v.s.药物B+甲磺酸阿帕替尼
图1为药物A瘤内给药与PD-1单抗药物B及甲磺酸阿帕替尼联用对MC38小鼠皮下移植瘤的疗效(给药端，Mean±SEM，n＝7-8)注：*,v.s.空白；#,v.s.药物B+甲磺酸阿帕替尼。
3.2药物A非给药侧(远端)的肿瘤抑瘤率和生长曲线
表5.治疗后小鼠非给药侧(远端)肿瘤抑制率(Mean±SEM,n＝7-8)
Figure BDA0002514780770000212
注：*,v.s.空白；#,v.s.药物B+甲磺酸阿帕替尼
图2为药物A瘤内给药与PD-1单抗药物B及甲磺酸阿帕替尼联用对MC38小鼠皮下移植瘤的疗效(非给药端,Mean±SEM，n＝7-8)*,v.s.空白；#,v.s.药物B+甲磺酸阿帕替尼。
3.3受试化合物治疗过程中荷瘤鼠肿瘤体积
表6.治疗后小鼠给药侧(近端)肿瘤体积(Mean±SEM)n＝7-8
Figure BDA0002514780770000213
表7.治疗后小鼠非给药侧(远端)肿瘤体积(Mean±SEM)n＝7-8
Figure BDA0002514780770000221
3.4.受试化合物治疗后荷瘤鼠肿瘤重量
表8.肿瘤重量(g)(Mean±SEM,n＝7-8)
Figure BDA0002514780770000222
图3为药物A瘤内给药与PD-1单抗药物B及甲磺酸阿帕替尼联用对MC38小鼠皮下移植瘤的疗效(Mean TW±SEM，n＝7-8)；注：*,v.s.空白；#,v.s.药物B+甲磺酸阿帕替尼
3.5.受试化合物治疗过程中荷瘤鼠体重变化曲线具体见图4。
4.实验结果及讨论
本次实验采用小鼠双侧胁腹部皮下接种建立模型，瘤内注射药物A右侧肿瘤给药，不同给药组荷瘤鼠双侧肿瘤体积和给药后小鼠体重变化如图1-4。
药物A给药侧(近端)：和对照组相比，药物B和阿帕替尼联用显著抑制MC38小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05)，抑瘤率为54.2％。10μg/只和25μg/只药物A与药物B及甲磺酸阿帕替尼联用，同样显著抑制MC38小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.001)，抑瘤率分别为93.4％和88.8％。和两药联用相比，三药联用具有明显的协同抗肿瘤作用(P<0.05)。药物A非给药侧(远端)：和对照组相比，药物B和甲磺酸阿帕替尼联用显著抑制MC38小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05)，抑瘤率为50.4％。10μg/只和25μg/只药物A与药物B及阿帕替尼联用，同样显著抑制MC38小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01，P＝0.001)，抑瘤率分别为88.3％和74.6％。和两药联用相比，10μg/只药物A三药联用具有明显的协同抗肿瘤作用(P<0.05)。
荷瘤小鼠对两药或三药联用均能很好耐受，体重增长无明显变化。
序列表
<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司
上海恒瑞医药有限公司
苏州盛迪亚生物医药有限公司
<120> TLR激动剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 1
Ser Tyr Met Met Ser
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 2
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 3
Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 4
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Thr
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 5
Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 6
Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp Thr
1 5
<210> 7
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(443)
<223> 重链序列
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 8
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(214)
<223> 轻链序列
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 9
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(116)
<223> 重链可变区
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 轻链可变区
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

Claims (16)

1.一种TLR激动剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途，所述的TLR激动剂为式(I)所示化合物或其可药用盐
Figure FDA0003526464230000011
所述的免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或其抗原结合片段，所述抗PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
所述的VEGFR抑制剂为阿帕替尼或其可药用盐；
所述肿瘤为结肠癌。
2.根据权利要求1所述的用途，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体或其片段。
3.根据权利要求1所述的用途，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的重链恒定区。
4.根据权利要求1所述的用途，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。
5.根据权利要求2所述的用途，所述人源化抗体的轻链可变区序列为如SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，所述人源化抗体的重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体。
6.根据权利要求2所述的用途，所述人源化抗体的轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述人源化抗体的重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体。
7.根据权利要求2所述的用途，所述的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。
8.根据权利要求1-7任一项所述的用途，所述TLR激动剂为式(I)所示化合物二盐酸盐。
9.根据权利要求1-7任一项所述的用途，所述VEGFR抑制剂为甲磺酸阿帕替尼。
10.根据权利要求1所述的用途，所述免疫检查点抑制剂剂量选自0.1-10.0mg/kg或1-1000mg，给药频次为每周一次、每两周一次，每三周一次，每四周一次，一个月一次，每三至六个月一次。
11.根据权利要求1所述的用途，所述免疫检查点抑制剂给药频次为每两周一次或每三周一次。
12.根据权利要求1所述的用途，所述TLR激动剂的剂量选自0.0001-20.0mg/kg或0.01-200mg，给药频次为一日三次，一日两次，一日一次，每三日一次，每四日一次，每五日一次，每六日一次，每周一次，每两周一次，每三周一次，每四周一次。
13.根据权利要求1所述的用途，所述TLR激动剂的给药频次为每三天一次，每周一次或每两周一次。
14.根据权利要求1所述的用途，所述VEGFR抑制剂的剂量为100-500mg，给药频次为一日一次、两日一次、三日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
15.根据权利要求14所述的用途，所述VEGFR抑制剂的剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。
16.根据权利要求15所述的用途，所述VEGFR抑制剂的剂量为250mg或375mg。
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