RU2627191C2 - Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения - Google Patents
Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2627191C2 RU2627191C2 RU2013154302A RU2013154302A RU2627191C2 RU 2627191 C2 RU2627191 C2 RU 2627191C2 RU 2013154302 A RU2013154302 A RU 2013154302A RU 2013154302 A RU2013154302 A RU 2013154302A RU 2627191 C2 RU2627191 C2 RU 2627191C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- heavy chain
- fusion protein
- seq
- binding fragment
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 241000282465 Canis Species 0.000 title claims description 136
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims description 48
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims description 48
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 title claims description 20
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 138
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 106
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 106
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims abstract description 101
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims abstract description 53
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 50
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 230000006870 function Effects 0.000 claims abstract description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 85
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 23
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 15
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 11
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 11
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 claims description 10
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 9
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 claims description 9
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 8
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims description 7
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 7
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 239000013019 capto adhere Substances 0.000 claims description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 claims description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 claims description 4
- 206010058019 Cancer Pain Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 claims 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 abstract 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 104
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 102
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 102
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 58
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 20
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 20
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 18
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 17
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 16
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 15
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 13
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 12
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 11
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 11
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 9
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 9
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 7
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 6
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 5
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 5
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 5
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 5
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 5
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 5
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 5
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 5
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 5
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 4
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 4
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 4
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 3
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 3
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 3
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 3
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 3
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 2
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101100495232 Homo sapiens MS4A1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 101100404651 Mus musculus Ngf gene Proteins 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 102000003683 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000099 Neurotrophin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000004140 Oncostatin M Human genes 0.000 description 2
- 108090000630 Oncostatin M Proteins 0.000 description 2
- 208000004550 Postoperative Pain Diseases 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 2
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 description 2
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 206010053552 allodynia Diseases 0.000 description 2
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011833 dog model Methods 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000027950 fever generation Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- -1 merpidine Chemical compound 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 2
- 229940097998 neurotrophin 4 Drugs 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 2
- 230000020341 sensory perception of pain Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 206010044652 trigeminal neuralgia Diseases 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 59096-14-9 Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1[14C](O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000002110 C2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050009459 C2 domains Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000824799 Canis lupus dingo Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010028773 Complement C5 Proteins 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010013886 Dysaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 description 1
- ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N Meloxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=NC=C(C)S1 ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000004230 Neurotrophin 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008866 Prostaglandin E receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010088540 Prostaglandin E receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000674 adrenergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000842 anti-protozoal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003904 antiprotozoal agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036782 biological activation Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N buprenorphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]11CC[C@]3([C@H](C1)[C@](C)(O)C(C)(C)C)OC)CN2CC1CC1 RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N 0.000 description 1
- 229960001736 buprenorphine Drugs 0.000 description 1
- 229960001113 butorphanol Drugs 0.000 description 1
- IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N butorphanol Chemical compound N1([C@@H]2CC3=CC=C(C=C3[C@@]3([C@]2(CCCC3)O)CC1)O)CC1CCC1 IFKLAQQSCNILHL-QHAWAJNXSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000004706 cardiovascular dysfunction Effects 0.000 description 1
- IVUMCTKHWDRRMH-UHFFFAOYSA-N carprofen Chemical compound C1=CC(Cl)=C[C]2C3=CC=C(C(C(O)=O)C)C=C3N=C21 IVUMCTKHWDRRMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003184 carprofen Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000014564 chemokine production Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- WAZQAZKAZLXFMK-UHFFFAOYSA-N deracoxib Chemical compound C1=C(F)C(OC)=CC=C1C1=CC(C(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 WAZQAZKAZLXFMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003314 deracoxib Drugs 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N fentanyl Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C(=O)CC)C(CC1)CCN1CCC1=CC=CC=C1 PJMPHNIQZUBGLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002428 fentanyl Drugs 0.000 description 1
- FULAPETWGIGNMT-UHFFFAOYSA-N firocoxib Chemical compound C=1C=C(S(C)(=O)=O)C=CC=1C=1C(C)(C)OC(=O)C=1OCC1CC1 FULAPETWGIGNMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002524 firocoxib Drugs 0.000 description 1
- MGCCHNLNRBULBU-WZTVWXICSA-N flunixin meglumine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.C1=CC=C(C(F)(F)F)C(C)=C1NC1=NC=CC=C1C(O)=O MGCCHNLNRBULBU-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- 229960000469 flunixin meglumine Drugs 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229960001929 meloxicam Drugs 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229960000805 nalbuphine Drugs 0.000 description 1
- NETZHAKZCGBWSS-CEDHKZHLSA-N nalbuphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]1(O)CC[C@@H]3O)CN2CC1CCC1 NETZHAKZCGBWSS-CEDHKZHLSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 229940032018 neurotrophin 3 Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- ZEXGDYFACFXQPF-UHFFFAOYSA-N robenacoxib Chemical compound OC(=O)CC1=CC(CC)=CC=C1NC1=C(F)C(F)=CC(F)=C1F ZEXGDYFACFXQPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000205 robenacoxib Drugs 0.000 description 1
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003238 somatosensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/10—Organic compounds
- A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
- A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
- C07K16/467—Igs with modifications in the FR-residues only
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Представлены антитело и слитый белок для применения в терапевтическом лечении собаки, содержащие специфичные изотипы тяжелой цепи. Аминокислотная последовательность тяжелой цепи минимизирует активацию эффекторных функций иммунной системы при связывании антитела или слитого белка с целевым антигеном. Также предложены способы очистки указанного антитела и указанного слитого белка. Изобретение может быть использовано для лечения патологических состояний, таких как боль, воспалительные состояния и раковые состояния у собаки. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 15 ил., 8 пр.
Description
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к собачьим или собачьего происхождения антителам, которые имеют специфичные константные участки тяжелых цепей, для применения в качестве антагонистов растворимых внеклеточных медиаторов и/или рецепторов клеточной поверхности. Настоящее изобретение относится к терапевтическому применению антител или их фрагментов в способах селективного лечения состояний, таких как воспаление, боль, злокачественное заболевание или инфекция у собаки.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
Рекомбинантные иммуноглобулины и слитые белки, сконструированные с использованием фрагментов константных доменов иммуноглобулинов, применяют для лечения многих заболеваний человека, в том числе воспалительных заболеваний (например, ревматоидного артрита, псориаза, воспалительного заболевания кишечника), аллергий (например, астмы), злокачественных заболеваний (например, лимфомы, рака молочной железы, колоректального рака), инфекционных заболеваний (например, инфекции RSV), боли (например, боли при остеоартрите, боли при злокачественном заболевании, боли в пояснице) и глазного заболевания (например, возрастной дегенерации желтого пятна).
Молекулярные цели для терапии предусматривают цитокины и хемокины (например, интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-5 (IL-5), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GCSF), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор), факторы роста (например, фактор роста нервов (NGF), фактор роста эндотелиальных клеток сосудов (VEGF), фактор некроза опухолей (TNF)), рецепторы клеточной поверхности (например, HER-2, VEGFR, EGFR, CD20), связанные с клеточной поверхностью факторы роста (например, непроцессированный фактор некроза опухоли), вирусы (например, RSV) и компоненты каскада комплемента (например, С5). Известны многие другие цели, для которых доказано участие в процессах заболевания (например, описанные в версии 1.3.1 базы данных IMGT/MAb-DB от 14 декабря 2011 г. (URL: www.imgt.org/mAb-DB/query), содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки).
Нативные иммуноглобулины продуцируются в виде различных основных подтипов, включающих иммуноглобулин G (IgG), иммуноглобулин A (IgA), иммуноглобулин М (IgM) или иммуноглобулин Е (IgE), и в ответ на инфекцию эти иммуноглобулины выполняют различные роли в узнавании патогена посредством связывания с целевыми антигенами, нейтрализации, разрушения и удаления. Иммуноглобулин G вырабатывается в виде нескольких различных изотипов (также известных как изоформы), таких как (у людей) IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Эти изотипы антител варьируют по структуре, в особенности, в отношении различий в аминокислотных последовательностях константного участка, особенно, вокруг шарнирного участка константного домена (Fc) между доменами С1 и С2.
Различные изотипы антител также отличаются по отношению к последующим эффекторным функциям, которые антитело опосредует. Например, последовательность константного участка антитела может опосредовать сильное влияние на характеристики, такие как эффекторные функции (ADCC, фиксирование и активацию комплемента), фармакокинетические показатели и физические свойства антитела. Антитела, характеризующиеся различными изотипами, также отличаются по их способности связываться с рецепторами Fc IgG на иммунных клетках. У людей IgG1 и IgG3 являются активными в вовлечении комплемента в обеспечение разрушения цели с помощью каскада ферментов комплемента в крови (CDC: зависимая от комплемента цитотоксичность), и, аналогичным образом, IgG1 и IgG3 связывают рецепторы Fc на иммунных клетках, которые нацеливают на связанный антиген для разрушения путем опосредованной антителом клеточной цитотоксичности (ADCC). Напротив, IgG2 и IgG4 не вовлекают комплемент или не активируют опосредованную ADCC атаку, а просто связываются с целевым антигеном с высокой аффинностью для того, чтобы ингибировать или нейтрализовать его активность.
Рекомбинантные иммуноглобулины и слитые белки, созданные из таковых, разработаны с учетом активности изотипа Fc, если целью является лечение заболевания. Например, при рассмотрении терапевтического подхода, который направлен на применение антител для целевого уничтожения раковых клеток человека, предпочтительным является конструирование рекомбинантного иммуноглобулина из доменов Fc изотипов IgG1 или IgG3, поскольку применение этих изотипов будет стимулировать иммуноопосредованные разрушительные механизмы, такие как CDC и ADCC. Напротив, при нацеливании растворимых медиаторов в контексте чувствительных тканей человека домен Fc либо упускают (например, при лечении человеческой возрастной дегенерации желтого пятна фрагменты Fab, нацеливающиеся на VEGF, являются предпочтительными), или конструируют с использованием доменов Fc IgG2 или IgG4 (например, нацеливание на фактор роста нервов в контексте невропатической или воспалительной боли, или на С5 комплемента при нефрите, псориазе или ревматоидном артрите). Эти принципы также применяют к иммуноглобулиновым слитым белкам, таким как растворимые слитые белки рецептора Fc TNF, при лечении состояний, таких как ревматоидный артрит, которое базируется на терапевтических средствах на основе Fc IgG1 человека.
У собак и других видов, таких как мыши и лошади, также существуют изоформы иммуноглобулина, но они характеризуются недостаточной гомологией между собой для определения a priori того, какая последовательность будет активной или неактивной в индуцировании последующих эффекторных функций, таких как CDC или ADCC. Более того, многочисленные иммуноглобулины у видов варьируют (например, у собаки имеется четыре иммуноглобулина IgG, которые определяют как caIgG-A, caIgG-B, caIgG-C и caIgG-D (Tang et al., 2001)). У лошадей имеется семь изотипов IgG (Wagner, 2006).
Только лишь анализом последовательности или гомологии последовательностей невозможно определить, будет ли конкретный изотип иммуноглобулина отличных от человека видов активным или неактивным в отношении опосредования связывания рецептора Fc и последующей эффекторной функции. Тем не менее, если это известно, эта информация будет иметь существенное значение, поскольку выбор изотипа константных участков для образования антитела может быть важным для обеспечения терапевтической эффективности антитела или терапевтических средств на основе антитела, таких как, связывающий фрагмент антитела или слитый белок.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
В результате глубокой экспериментальной работы автором настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что у изотипов собачьего иммуноглобулина IgG имеются общие характеристики с человеческими антителами IgG, такие, что некоторые изотипы антител IgG активны по отношению к активизации иммунных эффекторных функций, тогда как другие изотипы антител IgG не активируют иммунные эффекторные функции и являются, соответственно, неактивными. Более того, по отношению к четырем известным тяжелым цепям собачьих иммуноглобулинов (известным как НСА (caIgG-A), HCB (caIgG-B), HCC (caIgG-C) и HCD (caIgG-D)) автор настоящего изобретения неожиданно установил, что константные домены тяжелых цепей двух (caIgG-B и caIgG-C) из четырех тяжелых цепей собачьих иммуноглобулинов при конструировании в виде различных рекомбинантных форм, нацеливающихся на различные терапевтические цели, связывают комплемент, в то время как другие два (caIgG-A и caIgG-D) нет.
Соответственным образом, настоящее изобретение относится к определенным рекомбинантным собачим иммуноглобулинам или слитым белкам, созданным из них, которые могут быть использованы в терапии собак, если желательно разрушение цели (например, при лечении злокачественного или инфекционного заболевания), и к некоторым другим изоформам, которые могут быть предпочтительны для видов терапевтического лечения собак, если желательна скорее нейтрализация цели, а не уничтожение цели (например, при лечении боли).
Настоящее изобретение, таким образом, относится к рекомбинантным собачьим иммуноглобулинам, которые могут различаться по их способности или отсутствию способности связываться с первым компонентом каскада комплемента на основе изотипа их константного домена тяжелой цепи. В результате и впервые рекомбинантные собачьи иммуноглобулины могут быть отобраны по их предполагаемому применению в лечении заболевания у собак для задач, при которых предполагаемую цель отбирают для иммуноопосредованного разрушения через опосредованную комплементом цитотоксичность (CDC; например, для применения в уничтожении собачьих опухолей in vivo), или при которых цель отбирают просто для нейтрализации при отсутствии нежелательного иммуноопосредованного разрушения (например, в непосредственной близости от нервов или в глазу).
Первый аспект настоящего изобретения относится к антителу, слитому белку или их связывающему фрагменту для применения в терапевтическом лечении собаки, при этом указанное антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, при этом аминокислотная последовательность тяжелой цепи минимизирует активацию последующих эффекторных функций иммунной системы при связывании антитела, слитого белка или связывающего фрагмента с их целевым антигеном.
Согласно некоторым вариантам осуществления терапевтическое лечение собаки относится к лечению боли или воспаления, или ассоциированного с таковыми состояния, такого как артрит или артритическое состояние.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, содержащих константный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, при этом аминокислотная последовательность тяжелой цепи минимизирует активацию последующих эффекторных функций иммунной системы, если антитело, слитый белок или связывающий фрагмент связываются с их целевым антигеном, в получении лекарственного препарата для применения в лечении боли или воспаления у собаки или ассоциированного с таковыми состояния, такого как артрит или артритическое состояние.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, подавления или облегчения боли или воспаления, или ассоциированного с таковыми состояния, такого как артрит или артритическое состояние, у собаки, нуждающейся в этом, предусматривающему стадии
- получения антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые специфично связываются с целевым антигеном, которые обладают специфичной функцией в лечении или предотвращении боли или воспаления, при этом антитело, слитый белок или их связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, и при этом антитело, слитый белок или их связывающий фрагмент не активируют последующие эффекторные функции иммунной системы, и
- введения терапевтически эффективного количества антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента собаке.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к антителу собачьего происхождения, слитому белку или их связывающему фрагменту, которые имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, для применения в получении лекарственного препарата для лечения, подавления или облегчения боли или воспаления у собаки.
Согласно некоторым вариантам осуществления боль представляет собой невропатическую боль. В частности, боль может быть периоперационной, послеоперационной или болью после хирургического вмешательства. Послеоперационная боль может возникать после любой операционной процедуры, которая у собак может предусматривать без ограничения ортопедическое хирургическое вмешательство, хирургическое вмешательство на мягких тканях, овариогистерэктомические процедуры, кастрационные процедуры и т.п. Согласно определенным вариантам осуществления боль представляет собой хроническую боль, ассоциированную со злокачественным заболеванием или злокачественным состоянием (онкологическую боль). Согласно определенным вариантам осуществления боль ассоциируется с ревматоидным артритом, остеоартритом, воспалением или пруритом или возникает из-за таковых.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения артрита или артритического состояния у собаки, предусматривающему стадии
- получения антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые специфично связываются с целевым антигеном, которые обладают специфичной функцией в лечении или предотвращении боли или воспаления, при этом антитело, слитый белок или их связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:13, и при этом антитело, слитый белок или их связывающий фрагмент не активируют последующих эффекторных функций иммунной системы, и
- введения терапевтически эффективного количества антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента собаке, нуждающейся в таком лечении.
Согласно некоторым вариантам осуществления вышеупомянутый способ в соответствии с настоящим изобретением, кроме того, предусматривает стадию совместного введения по меньшей мере одного дополнительного средства, которое может усиливать и/или дополнять эффективность антитела в соответствии с настоящим изобретением. Например, антитело или его связывающий антиген фрагмент могут вводиться совместно с по меньшей мере одним анальгетическим средством, NSAID, опиоидным средством, кортикостероидом или стероидом. Примеры приемлемых анальгетиков включают без ограничения буторфанол, 10 бупренорфин, фентанил, флуниксин меглумин, мерпидин, морфин, налбуфин и их производные. Приемлемые NSAID включают без ограничения ацетаминофен, ацетилсалициловую кислоту, карпрофен, этодолак, кетопрофен, мелоксикам, фирококсиб, робенакоксиб, деракоксиб и т.п.
Согласно некоторым вариантам осуществления вышеупомянутые способы могут сопровождаться введением по меньшей мере одного дополнительного средства. Указанное средство может быть терапевтически активным средством, которым может быть одно или несколько из группы, выбранной из антибиотических, противогрибковых, антипротозойных, противовирусных или подобных терапевтических средств. Более того, по меньшей мере одно дополнительное средство может быть ингибитором медиатора(ов) воспаления, таким как антагонист PGE-рецептора, иммуносупрессивным средством, таким как циклоспорин, противовоспалительным глюкокортикоидом. В следующих определенных аспектах по меньшей мере одно дополнительное средство может быть средством, которое используется для лечения когнитивной дисфункции или расстройства, такого как потеря памяти, или родственных состояний, которые могут стать более распространенными у старых собак. Более того, по меньшей мере одно дополнительное средство может быть противогипертоническим или другим соединением, используемым для лечения сердечнососудистой дисфункции, например, для лечения гипертонии, ишемии миокарда, застойной сердечной недостаточности и т.п. Более того, по меньшей мере одно дополнительное средство может быть диуретиком, сосудорасширяющим средством, антагонистом бета-адренергического рецептора, ингибитором ангиотензин-II-превращающего фермента, блокатором кальциевых каналов и ингибитором редуктазы HMG-CoA.
Согласно некоторым вариантам осуществления вышеупомянутых аспектов настоящего изобретения последующие эффекторные функции иммунной системы выбирают из группы, состоящей из зависимой от комплемента цитотоксичности (CDC), зависимой от антитела опосредованной клеткой цитотоксичности (ADCC) и зависимого от антитела клеточного патогенеза (ADCP). Согласно некоторым вариантам осуществления аминокислотная последовательность константного домена тяжелой цепи ингибирует связывание тяжелой цепи с C1q, которое предотвращает индукцию каскада комплемента и зависимую от комплемента цитотоксичность (CDC).
Согласно некоторым вариантам осуществления целевой антиген является растворимым медиатором. Согласно некоторым вариантам осуществления целевой антиген является фактором роста нервов (NGF). Согласно некоторым вариантам осуществления антитело специфично связывается с рецептором и антагонизирует рецептор, который опосредует боль или воспаление. Согласно некоторым вариантам осуществления целевой антиген может быть выбран из группы, состоящей без ограничения из цитокинов или хемокинов (например, интерлейкина-1 и родственных интерлейкинов IL-2 - IL-35, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, эритропоэтина, тромбопоэтина, ингибирующего лейкоз фактора, цилиарного нейротрофического фактора, онкостатина М, факторов роста (например, фактора роста нервов (NGF), нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), нейротрофина-3, нейротрофина-4, сосудистого эндотелиального фактора роста клеток (VEGF), фактора некроза опухолей (TNF), рецепторов клеточной поверхности (например, HER-2, VEGFR, EGFR, CD20), связанных с клеточной поверхностью факторов роста (например, непроцессированного фактора некроза опухоли), вирусов (например, RSV) и компонентов каскада комплемента (например, С5, С5а).
Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение относится к антителу, слитому белку или их связывающему фрагменту для применения в терапевтическом лечении собаки, при этом указанное антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:14, при этом аминокислотная последовательность тяжелой цепи опосредует активацию последующих эффекторных функций иммунной системы при связывании антитела, слитого белка или связывающего фрагмента с целевым антигеном.
Согласно некоторым вариантам осуществления терапевтическое лечение собаки относится к лечению ракового или злокачественного состояния.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, содержащих константный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:14, при этом аминокислотная последовательность тяжелой цепи опосредует активацию последующих эффекторных функций иммунной системы при связывании антитела, слитого белка или связывающего фрагмента с целевым антигеном, в получении медицинского препарата для применения в лечении ракового или злокачественного состояний у собаки.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения или предотвращения ракового или злокачественного состояния у собаки, предусматривающему стадии
- получения антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые специфично связываются с целевым антигеном, которые обладают специфичной функцией в лечении ракового или злокачественного состояния, при этом антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:14, и при этом антитело, слитый белок или связывающий фрагмент активируют последующие эффекторные функции иммунной системы, и
- введения терапевтически эффективного количества антитела, слитого белка или связывающего фрагмента собаке, нуждающейся в таком лечении.
Согласно некоторым вариантам осуществления вышеупомянутый способ в соответствии с настоящим изобретением, кроме того, предусматривает стадию совместного введения по меньшей мере одного дополнительного средства, которое может усиливать и/или дополнять эффективность антитела в соответствии с настоящим изобретением.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антитела собачьего происхождения, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:14, в получении медицинского препарата для лечения ракового или злокачественного состояний у собаки.
Согласно некоторым вариантам осуществления в вышеупомянутых аспектах настоящего изобретения последующие эффекторные функции иммунной системы выбирают из группы, содержащей зависимую от комплемента цитотоксичность (CDC), зависимую от антитела опосредованную клеткой цитотоксичность (ADCC) и зависимый от антитела клеточный патогенез (ADCP). Согласно определенным вариантам осуществления аминокислотная последовательность константного домена тяжелой цепи обеспечивает связывание тяжелой цепи с C1q, что предотвращает индукцию каскада комплемента и зависимую от комплемента цитотоксичность (CDC). Согласно некоторым вариантам осуществления константный домен тяжелой цепи обеспечивает связывание с рецепторами Fc, которые могут в свою очередь опосредовать ADCP и/или ADCC иммунные ответы.
Согласно некоторым вариантам осуществления целевой антиген представляет собой раковый специфичный антиген. Согласно следующим определенным вариантам осуществления настоящего изобретения целевой антиген может быть выбран из группы связанных с мембраной белков, экспрессированных на клетках опухоли собаки. Согласно следующим вариантам осуществления настоящего изобретения связанные с мембраной белки опухоли собаки могут быть выбраны из группы белков, включающих в себя CD2, CD4, CD8, CD20, EGFR, VEGFR, HER2 и т.п. Согласно следующим определенным вариантам осуществления целевой антиген может быть выбран из группы, состоящей без ограничения из цитокинов и хемокинов (например, интерлейкина-1 (IL-1), IL-2, IL-3 и интерлейкинов в числовом значении до IL-35, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, эритропоэтина, тромбопоэтина, ингибирующего лейкоз фактора, цилиарного нейротрофического фактора, онкостатина М), факторов роста (например, фактора роста нервов (NGF), нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), нейротрофина-3, нейротрофина-4, сосудистого эндотелиального фактора роста клеток (VEGF), фактора некроза опухолей (TNF)), рецепторов клеточной поверхности (например, HER-2, VEGFR, EGFR, CD20), связанных с поверхностью клеток факторов роста (например, непроцессированного фактора некроза опухоли), вирусов (например, RSV) и компонентов каскада комплемента (например, С5, С5а).
Еще один аспект настоящего изобретения относится к антителу, слитому белку или их связывающему фрагменту для применения в лечении состояния у собаки, при этом антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, который не связывается с C1q при связывании антитела, слитого белка или связывающего фрагмента с их целевым антигеном, и при этом антитело, слитый белок или связывающий фрагмент могут быть очищены с использованием хроматографии на основе белка А.
Согласно некоторым вариантам осуществления указанное антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13. Согласно некоторым вариантам осуществления указанные антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:15.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антитела, слитого белка или связывающего фрагмента, которые содержат константный домен тяжелой цепи, который не связывается с C1q при связывании антитела, слитого белка или связывающего фрагмента со своим целевым антигеном, и при этом антитело, слитый белок или связывающий фрагмент могут быть очищены с использованием хроматографии на основе белка А, в получении медицинского препарата для лечения состояния, ассоциированного с болью и/или воспалением, у собаки.
Согласно некоторым вариантам осуществления указанные антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13. Согласно некоторым вариантам осуществления указанные антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:15.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, подавления или облегчения боли или воспаления, или ассоциированного с таковыми, состояния, такого как артрит или артритическое состояние, у собаки, нуждающейся в этом, предусматривающему стадии
- получения антитела, слитого белка или связывающего фрагмента, которые содержат константный домен тяжелой цепи, который не связывается с C1q при связывании антитела с его целевым антигеном, и при этом антитело может быть очищено с использованием хроматографии на основе белка А, и
- введения терапевтически эффективного количества антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента собаке.
Согласно некоторым вариантам осуществления указанное антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13. Согласно некоторым вариантам осуществления указанное антитело, слитый белок или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:15.
Различные другие аспекты настоящего изобретения относятся к (i) нуклеиновым кислотам, которые кодируют любые из вышеупомянутых антител, слитых белков или фрагментов антител в соответствии с настоящим изобретением, (ii) векторам, которые несут указанные нуклеиновые кислоты, (iii) клеткам-хозяевам, несущим указанные векторы. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам получения антител и слитых белков, определенных в вышеупомянутых формулировках настоящего изобретения. Еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическим композициям, которые содержат антитела или слитые белки в соответствии с настоящим изобретением вместе по меньшей мере с одним носителем, разбавителем или наполнителем.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к рекомбинантному антителу, слитому белку или их связывающему фрагменту, которые могут быть терапевтически введены собаке для специфичного связывания с целевым антигеном и которые, кроме того, опосредуют иммунный ответ, характеризующийся связыванием C1q комплемента с указанным антителом, слитым белком или их связывающим фрагментом и ассоциированный с зависимой от комплемента цитотоксичностью, при этом тяжелая цепь антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента содержит изотип В константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСВ, caIgG-В), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, изотип С константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСС, caIgG-C), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, или изотип С тяжелой цепи агликозилированной формы собачьего иммуноглобулина (НСС, caIgG-C), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые содержат изотип В константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСВ, caIgG-B), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, изотип С константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСС, caIgG-C), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, или изотип С тяжелой цепи агликозилированной формы собачьего иммуноглобулина (НСС, caIgG-C), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, в получении медицинского препарата для применения в лечении состояния, при котором требуется специфичное связывание с целевым антигеном, и при котором желателен иммунный ответ, характеризующийся связыванием C1q комплемента с указанным антителом, слитым белком или их связывающим фрагментом и ассоциированный с зависимой от комплемента цитотоксичностью.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения ракового состояния у собаки, предусматривающему стадии
- получения иммуноглобулина, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые обладают специфичностью связывания с опухолевым специфичным антигеном и которые, кроме того, содержат изотип В константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСВ, caIgG-B), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9, изотип С константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСС, caIgG-C), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, или изотип С тяжелой цепи агликозилированной формы собачьего иммуноглобулина (НСС, caIgG-C), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, и
- введения терапевтически эффективного количества иммуноглобулина, слитого белка или связывающего фрагмента собаке, нуждающейся в этом.
Различные следующие аспекты настоящего изобретения относятся к антителам или слитым белкам, которые связываются с желаемым целевым антигеном и которые содержат константные домены тяжелых цепей, не связывающиеся с C1q, и которые, следовательно, не опосредуют иммунный ответ с вовлечением зависимой от комплемента цитотоксичности.
Соответственным образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к рекомбинантному антителу, слитому белку или их связывающему фрагменту, которые могут быть терапевтически введены собаке для специфичного связывания с целевым антигеном, при этом константный домен антитела или слитого белка не связывается с C1q комплемента, и при этом тяжелая цепь константного домена содержит изотип А константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСА, caIgG-A), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, изотип D константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (HCD, caIgG-D), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, или изотип В константного домена тяжелой цепи агликозилированной формы собачьего иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13 (НСВ*, caIgG-B).
Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антитела, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые содержат изотип А константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСА, caIgG-A), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, изотип D константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (HCD, caIgG-D), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, или изотип В константного домена тяжелой цепи агликозилированной формы собачьего иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13 (НСВ*, caIgG-B), в получении медицинского препарата для применения в лечении состояния, при котором требуется специфичное связывание с целевым антигеном, и при котором не желателен иммунный ответ, характеризующийся связыванием C1q комплемента с указанными антителом, слитым белком или их связывающим фрагментом и ассоциированный с зависимой от комплемента цитотоксичностью.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения состояния у собаки, предусматривающему стадии
- получения иммуноглобулина, слитого белка или их связывающего фрагмента, которые характеризуются специфичностью связывания с опухолевым специфичным антигеном и которые, кроме того, содержат изотип А константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (НСА, caIgG-А), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, изотип D константного домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина (HCD, caIgG-D), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, или изотип В константного домена тяжелой цепи агликозилированной формы собачьего иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13 (HCB*, caIgG-B), и
- введения терапевтически эффективного количества иммуноглобулина, слитого белка или связывающего фрагмента собаке, нуждающейся в этом.
Согласно некоторым вариантам осуществления агликозилированная форма константного домена, разработанная для конструирования антитела с отсутствующей CDC активностью, является аланин-замещенной агликозилированной формой тяжелой цепи НСВ, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6 (обозначенной НСВ*). В различных других аспектах настоящего изобретения антитела, включающие тяжелые цепи НСА, HCD, или не обладающие активностью CDC агликозилированные формы НСА, НСВ или HCD (НСА*, НСВ* или HCD*: SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 и SEQ ID NO:15), направлены на собачьи факторы роста, гормоны, цитокины, хемокины или другие растворимые медиаторы, такие как компоненты каскада комплемента. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела, содержащие тяжелые цепи НСА, HCD или НСВ*, направлены на собачий фактор роста нервов (NGF) с целью нейтрализации биологической активности собачьего NGF у собак без индуцирования CDC.
Согласно конкретным вариантам осуществления вышеупомянутые аспекты настоящего изобретения относятся к антителу, являющемуся моноклональным антителом. Согласно следующим вариантам осуществления антитело является химерным антителом. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело является канинизированным антителом, то есть антителом, которое содержит аминокислотную последовательность, которая была деиммунизирована таким образом, что нейтрализующиеся антитела не будут продуцироваться снова при введении собаке. Как правило, константные домены тяжелых цепей антитела отбирают или модифицируют путем замещения или делеции аминокислот так, что константные домены не опосредуют последующие эффекторные функции. Согласно конкретным вариантам осуществления антитело может быть конъюгировано по меньшей мере с одной репортерной молекулой.
Согласно следующим конкретным вариантам осуществления по меньшей мере один остаток в константном домене антител или слитых белков в соответствии с вышеупомянутыми аспектами настоящего изобретения может быть замещен или подвергнут делеции для предотвращения гликозилирования остатка. Следующий аспект настоящего изобретения относится к константному домену тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина, который может быть слит полностью или частично с внеклеточным доменом рецептора цитокина или хемокина или другого трансмембранного белка (например, рецептора TNF), в соответствии с чем целый константный домен тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина или его фрагмент отбирают из группы НСА, HCD или НСВ*, если желательно, чтобы слитый белок собачьего внеклеточного домена и тяжелой цепи иммуноглобулина не активировал CDC (например, если слитые белки TNF и рецептора Fc разработаны для нейтрализации растворимого TNF), или константный домен тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина отбирают из группы НСВ, НСС или НСС*, если наоборот желательно, чтобы слитый белок собачьего внеклеточного домена и тяжелой цепи иммуноглобулина активировал CDC (например, если слитые белки TNF и рецептора Fc разработаны для уничтожения клеток воспаления, несущих ассоциированный с мембраной TNF).
Следующие аспекты настоящего изобретения относятся к слитым белкам собачьего рецептора Fc, которые могут быть выбраны из группы внеклеточных доменов связанных с мембраной рецепторов, обнаруженных на собачьих клетках, слитых с участками Fc домена тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина. Другой аспект настоящего изобретения относится к содержащим тяжелые цепи НСВ, НСС или НСС* антителам, направленным против CD20 для индуцирования CDC в собачьих экспрессирующих CD20 клетках, таких как клетки собачьей лимфомы, посредством связывания этих антител с CD20 на их поверхности.
Кроме того, предпочтительно чтобы канинизированные антитела не были перекрестно-реактивными к каким-либо другим эпигонам, присутствующим у собак, а также, чтобы не образовывались нейтрализующие антитела против антител в соответствии с настоящим изобретением при введении их собаке.
Согласно следующим конкретным вариантам осуществления в антителах или слитых белках в соответствии с настоящим изобретением могут быть выполнены модификации аминокислотной последовательности константных областей тяжелой цепи. Указанная модификация может предусматривать добавление, замещение или делецию одного или нескольких аминокислотных остатков. Указанные аминокислотные изменения, как правило, осуществляют, чтобы модифицировать функциональные характеристики антитела. Например, аминокислотная модификация может быть выполнена для предотвращения последующих эффекторных функций, опосредованных константными доменами антитела, например, путем предотвращения способности антитела связываться с рецепторами Fc, активировать комплемент или индуцировать ADCC. Кроме того, модификации могут быть выполнены на аминокислотных остатках шарнирной области константного домена тяжелой цепи для модификации периода полувыведения антитела из кровотока при введении его собаке.
Согласно некоторым вариантам осуществления настоящее изобретение относится к мультиспецифичным или мультивалентным антителам, содержащим антитело или связывающий фрагмент в соответствии с настоящим изобретением, соединенные или конъюгированные с другими антителами с различными специфичностями связывания, для применения в комбинированной терапии. Мультиспецифичное антитело содержит по меньшей мере одно антитело или связывающий фрагмент, специфичные к первому эпитопу, и по меньшей мере один связывающий участок, специфичный к другому эпитопу, присутствующему на антигене, или к другому антигену. Мультивалентное антитело содержит антитела или связывающие фрагменты антител, которые обладают специфичностью связывания к тому же эпитопу. Соответствующим образом, согласно конкретным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к слитому белку антитела, содержащему четыре или более Fv-участков или Fab-участков антител в соответствии с настоящим изобретением. Согласно следующим конкретным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к биспецифичному антителу, в котором антитело или его связывающий фрагмент в соответствии с настоящим изобретением связываются со вторым антителом или его связывающим фрагментом, которые обладают специфичностью связывания по отношению ко второй цели, при этом указанная цель не является первым антигеном. Такие мультивалентные, биспецифичные или мультиспецифичные антитела могут быть получены с помощью различных рекомбинантных способов, хорошо известных специалисту в данной области.
Согласно некоторым вариантам осуществления антитело, слитый белок или связывающий антиген фрагмент вводят собаке как часть вышеупомянутых способов с дозой от приблизительно 0,01 мг/кг массы тела до приблизительно 10 мг/кг массы тела, в частности, от 0,03 мг/кг массы тела до приблизительно 3 мг/кг массы тела.
Различные другие аспекты настоящего изобретения относятся к композиции, содержащей антитело, слитый белок или их связывающий фрагмент в соответствии с каким-либо вышеупомянутым аспектом настоящего изобретения. Согласно некоторым вариантам осуществления композиция, кроме того, содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. Согласно конкретным вариантам осуществления композиция также может содержать по меньшей мере одно анальгетическое средство, NSAID, опиоидное средство, кортикостероид или стероид.
Различные другие аспекты настоящего изобретения относятся к выделенной нуклеиновой кислоте, которая кодирует антитело, слитый белок или связывающие фрагменты антитела в соответствии с настоящим изобретением. Соответствующим образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к выделенной нуклеиновой кислоте, которая кодирует антитело, слитый белок или связывающий антиген фрагмент в соответствии с каким-либо из вышеупомянутых аспектов настоящего изобретения. Согласно некоторым вариантам осуществления выделенная нуклеиновая кислота, кроме того, кодирует одну или несколько функционально связанных с ней регуляторных последовательностей.
Следующий аспект относится к вектору экспрессии, содержащему полинуклеотид, кодирующий вариабельный домен тяжелой и/или легкой цепи или константный домен тяжелой и/или легкой цепи в соответствии с настоящим изобретением. Согласно некоторым вариантам осуществления вектор экспрессии, кроме того, содержит одну или несколько регуляторных последовательностей. Согласно некоторым вариантам осуществления вектор представляет собой плазмиду или ретровирусный вектор. Еще один аспект относится к клетке-хозяину, включающей в себя вектор экспрессии в соответствии с вышеупомянутым аспектом настоящего изобретения. Следующий аспект настоящего изобретения относится к клетке-хозяину, которая продуцирует антитело в соответствии с каким-либо из вышеупомянутых аспектов настоящего изобретения.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу получения антитела или слитого белка в соответствии с настоящим изобретением, предусматривающему стадию культивирования клетки-хозяина в соответствии с вышеупомянутым аспектом настоящего изобретения для обеспечения экспрессии клеткой антитела. Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу получения антитела или слитого белка в соответствии с настоящим изобретением, предусматривающему стадии экспрессии одного или нескольких полинуклеотидов/нуклеиновых кислот или векторов в соответствии с вышеупомянутыми аспектами настоящего изобретения, которые экспрессируют легкие и/или тяжелые цепи антител в соответствии с настоящим изобретением в приемлемой клетке-хозяине, извлечения экспрессированных полипептидов, которые могут быть экспрессированы в клетке-хозяине вместе или по отдельности в различных клетках-хозяевах, и выделения антител. Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, облегчения или подавления боли у собаки, предусматривающему стадию введения собаке эффективного количества полинуклеотида, который кодирует антитело или слитый белок с константным доменом тяжелой цепи, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8 - SEQ ID NO:11.
Очистка собачьего антитела
В случае тех собачьих антител, с которыми желательной является нейтрализация цели при отсутствии нежелательной иммунной эффекторной активности, автор настоящего изобретения неожиданно обнаружил, что нативные изоформы собачьих тяжелых цепей, у которых отсутствует активность CDC, также очень слабо связывают, если вообще связывают, белок A Staphylococcus, и, следовательно, этот общепринятый способ очистки антител не может быть использован в производстве. Автор настоящего изобретения описывает три пути преодоления данного ограничения - посредством применения альтернативных стратегий очистки и посредством мутации тяжелой цепи для предотвращения гликозилирования в ходе продуцирования. Автором настоящего изобретения согласно этим способам были получены очищенные антитела, и было продемонстрировано, что они обладают желаемыми свойствами, являясь безопасными и эффективными in vivo у собак без нежелательной иммуногенности.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу очистки иммуноглобулина собачьего происхождения или иммуноглобулина, или слитого белка, содержащего собачий константный домен тяжелой цепи изотипа А (НСА, caIgG-A), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, или константный домен тяжелой цепи изотипа D собачьего иммуноглобулина (HCD, caIgG-D), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, из исходной смеси, предусматривающему стадии
(i) получения исходной смеси, содержащей целевые иммуноглобулины или слитые белки,
(ii) подвержения исходной смеси анионообменной хроматографии;
(iii) подвержения исходной смеси хроматографии гидрофобного взаимодействия и
(iv) подвержения исходной смеси эксклюзионной хроматографии.
Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает стадию замены буфера в фосфатно-буферном солевом растворе. Как правило, способом получают очищенное антитело, которое фракционируется с высокой степенью чистоты и биоактивности.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу получения агликозилированной формы собачьего антитела, которое может быть очищено с помощью хроматографии на основе белка А.
Различные другие аспекты настоящего изобретения относятся к собачьему или собачьего происхождения антителу или слитому белку, полученным в соответствии с каким-либо из способов, определенных в настоящем документе, для применения в терапевтическом лечении собаки. Различные другие аспекты относятся к применению антитела против собачьего NGF в получении медицинского препарата для применения в лечении у собаки иммуноопосредованного состояния или ассоциированного с болью состояния.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу очистки иммуноглобулина собачьего происхождения или иммуноглобулина, или слитого белка, содержащих собачий константный домен тяжелой цепи изотипа А (НСА, caIgG-A), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, или константный домен тяжелой цепи собачьего иммуноглобулина изотипа D (HCD, caIgG-D), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, из исходной смеси, предусматривающему стадии
(i) получения исходной смеси, содержащей целевые иммуноглобулины,
(ii) подвержения исходной смеси аффинной хроматографии Capto adhere и
(iii) подвержения исходной смеси анионообменной хроматографии.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к антителу или слитому белку, полученному способом очистки в соответствии с вышеупомянутым аспектом настоящего изобретения, для применения в лечении собаки.
Краткое описание графических материалов
На фиг.1А и 1В показано эквивалентное связывание антител против NGF (экспрессированных в супернатанте трансфицированных клеток СНО), сконструированных с использованием четырех различных изотипов собачьих тяжелых цепей (НСА, НСВ, НСС, HCD) против мышиного NGF посредством ELISA (фиг.1А), и эквивалентное ингибирование возрастания NGF клеток TF-1 (фиг.1В).
На фиг.2 показано дифференцированное связывание комплемента с NGF-связанными изотипами антитела против собачьего NGF, измеренное посредством ELISA на основе антитела против C1q.
На фиг.3а и 3b показано связывание захваченных NGF гликозилированных и агликозилированных форм канинизированных моноклональных антител против NGF с комплементом, измеренное посредством ELISA на основе антитела против C1q.
На фиг.4 показано связывание захваченных NGF канинизированных моноклональных антител (Mab) против NGF, MAb против собачьего VEGF и химерного MAb против человеческого CD20/собачьего НСВ, с комплементом, измеренное посредством ELISA на основе антитела против C1q. В частности, на фиг.4А, 4В и 4С показано связывание комплемента с антителами, сконструированными с использованием различных изотипов собачьих тяжелых цепей. Канинизированные моноклональные антитела (MAb) были экспрессированы в клетках СНО и тестированы на их способность связывать C1q комплемента. На панели А показано сравнение канинизированных антител против NGF (caN-HCB, caN-HCC) с изотипами гуманизированных антител (huN-G1, huN-G4); на панели В показаны антитела против VEGF, сконструированные с изотипами собачьих НСА (caV-HCA) и НСВ (caV-HCB); на панели С показано сравнение антитела против CD20, сконструированного с использованием изотипа НСВ (mub-HCA), с изотипом мышиного IgG2a (muB-2a).
На фиг.5 показано относительное извлечение изотипов антител против NGF, очищенных с помощью белка А и выявленных с использованием собачьего поликлонального иммуноглобулина против NGF с помощью вестерн-блота. Супернатанты согласно фиг.1 пропускали через колонку с белком А и элюировали специфично связанный материал. Равные объемы элюата подвергали SDS-PAGE. Собачьи изотипы НСА, НСС и HCD слабо связывались с белком А, на что указывало наличие значительного материала при промывании и потоке через фракции. На фиг.А-D показано относительное извлечение собачьих изотипов антител НСА, НСВ, НСС и HCD с помощью белка A: L - загрузка; W - промывание; Р - очистка; F - пропускание потока. В этом эксперименте использовали супернатант с антителом против NGF согласно фиг.1.
На фиг.6А и 6B показана количественная очистка антитела против собачьего NGF (изотипа НСА) с использованием трехстадийного способа (способ I), предусматривающего (1) анионообменную хроматографию, (2) хроматографию гидрофобного взаимодействия и (3) эксклюзионную хроматографию. На фиг.6А показаны результаты фракционирования с помощью эксклюзионной HPLC. На фиг.6B показан восстанавливающий SDS-PAGE фракций после каждой стадии. На фиг.6С и D показана количественная очистка антител против собачьего NGF в соответствии с настоящим изобретением с использованием двухстадийного способа (способ II), предусматривающего хроматографию Capto adhere и анионообменную хроматографию. На фиг.6С показан анализ на основе SDS-PAGE при невосстанавливающих и восстанавливающих условиях. На фиг.6С дорожка 1 представляет MW, дорожка 2 представляет 2 мкг/мл антитела против собачьего NGF и 0 мкл восстанавливающего средства, дорожка 3 представляет 4 мкг/мл антитела против собачьего NGF и 0 мкл восстанавливающего средства, дорожка 4 представляет 6 мкг/мл антитела против собачьего NGF и 0 мкл восстанавливающего средства, дорожка 5 представляет MW, дорожка 6 представляет 2 мкг/мл антитела против собачьего NGF и 3 мкл восстанавливающего средства, дорожка 7 представляет 4 мкг/мл антитела против собачьего NGF и 3 мкл восстанавливающего средства, дорожка 8 представляет 6 мкг/мл антитела против собачьего NGF и 3 мкл восстанавливающего средства, и дорожка 9 представляет MW. На фиг.6D показана эксклюзионная хроматография очищенного антитела против собачьего NGF.
На фиг.7 показано сравнение антитела против собачьего NGF (изотипа НСА), очищенного способам I и II. На фиг.7А показано сравнение с помощью невосстанавливающего и восстанавливающего SDS-PAGE. На фиг.7B показано сравнение с помощью ELISA на основе антитела против NGF.
На фиг.8 показано, что масса (верхняя панель) и температура (нижняя панель) тела являются стабильными после внутривенного введения антител против собачьего NGF (изотипа НСА, очищенного способом I) у собак.
На фиг.9 показан кинетический анализ концентрации в плазме моноклонального антитела против собачьего NGF после внутривенной инъекции собакам. Собаку породы бигль инъецировали внутривенно антителом против NGF при 2 мг/кг, образцы плазмы брали в указанные моменты времени и моноклональное антитело против NGF выявляли с помощью ELISA на основе NGF. Моноклональное антитело против собачьего NGF характеризовалось неожиданно длинной (бета) фазой полувыведения, составляющей приблизительно 9 дней.
На фиг.10 показано, что моноклональные антитела против собачьего NGF (изотипа НСА, очищенные способом I) уменьшают воспалительную боль у собак. Каолин инъецировали в подушечку лапы собак породы бигль в день -1, антитело или контроль-носитель в день 0 и хромоту измеряли визуально с помощью шкалы оценок.
Подробное раскрытие настоящего изобретения
После углубленной экспериментальной работы автор настоящего изобретения разработал и сконструировал несколько собачьих моноклональных антител с использованием различных изотипов константных доменов тяжелой цепи и неожиданно показал, что полезные свойства могут быть извлечены из их способности (или отсутствия способности) опосредовать последующие эффекторные функции и, в особенности, из их способности связываться с комплементом. Соответствующим образом, автор настоящего изобретения идентифицировал различные биологические эффекты, опосредуемые различными подтипами собачьего иммуноглобулина. Для связывающих комплемент изотипов собачьих антител этим полезным свойством является управление в клетках, связанных с теми же антителами, управляемой комплементом цитотоксичностью (CDC) in vivo. Примером того, когда желательно данное функциональное свойство, является противораковая терапия собаки, при которой антитела, направленные на опухолевые антигены, затем будут направлять систему комплемента на целевые клетки, которые были связанны с антителом, для уничтожения.
Напротив, изотипы антител, которые не связывают комплемент и поэтому не вызывают CDC, являются предпочтительными, если активность комплемента нежелательна, например, вблизи нервов, в глазу или в уже воспаленных тканях, или просто при желании снизить риск непредвиденных побочных проявлений антитела.
Таким образом, очевидно, что возможность предсказывать, какие собачьи изотипы являются приемлемыми для разработки и применения в методах лечения антителом у собак, является весьма желательной и полезной.
Были описаны четыре различных изотипа собачьего иммуноглобулина G (caIgG-А (изотип А собачьего иммуноглобулина G), caIgG-B, caIgG-C и caIgG-D, Tang et al., 2001). Для простоты (и для обеспечения отличия от различных конструкций антитела и от компонентов легкой цепи) константные домены тяжелых цепей называют в настоящем документе НСА (caIgG-A), HCB (caIgG-B), HCC (caIgG-C) и HCD (caIgG-D).
Очистка антител
Следующее неожиданное открытие было сделано автором настоящего изобретения в процессе очистки желаемых изоформ НСА и HCD антител против NGF, которые не связывались с белком А, лигандом, используемым в масштабах промышленного изготовления путем аффинной колоночной хроматографии на основе белка А, для проведения крупномасштабной очистки терапевтических белков. На фиг.5 показано относительное извлечение изоформ НСА, HCB, HCC и HCD антител против NGF с помощью аффинной хроматографии на основе белка А в небольшом масштабе. Следовательно, требовались другие способы для очистки изоформ НСА или HCD, поскольку они не могли быть очищены с использованием аффинной хроматографии на основе белка А. После углубленной экспериментальной работы автор настоящего изобретения неожиданно нашел два альтернативных способа (названных в настоящем документе способом I и способом II), которые могут быть использованы для очистки конструкции антитела caN-HCA-kLC или других собачьих антител, которые содержат изотип тяжелой цепи НСА или HCD.
Первый способ предусматривает объединение анионообменной хроматографии, хроматографии гидрофобного взаимодействия и эксклюзионной хроматографии. Второй способ предусматривает объединение аффинной хроматографии Capto adhere и анионообменной хроматографии. На фиг.6 показана очистка НСА, содержащего антитело против NGF, с помощью каждого из двух способов. Высоко чистый материал получали каждым способом, а с помощью обоих способов получали материал с подобной биоактивностью, измеренной с помощью ELISA на основе NGF (фиг.7). Поскольку изотипы НСА и HCD более похожи друг на друга, чем изотипы НСВ и НСС, способы применяют для обоих изотипов.
При дальнейшем изучении очистки антител автор настоящего изобретения неожиданно обнаружил, что агликозилированная форма изотипа НСВ* антитела против NGF, подобно изотипу НСВ, все же способна связывать белок А, и поэтому обладает желаемым свойством отсутствия активности CDC и очищается с помощью хроматографии на основе белка А.
Тестирование безопасности для собаки
Для демонстрации того, что антитела в соответствии с настоящим изобретением, которые разрабатывали с учетом отсутствия нежелательной активности CDC, являются безопасными при введении собакам, высоко очищенный изотип НСА антитела против NGF инъецировали трем собакам путем внутривенной инъекции (после предварительного одобрения Комитетом по этике в отношении животных (CRL, Ирландия)). На фиг.8 показано, что помимо отсутствия поведенческих изменений при наблюдении ветеринарами у трех собак не проявлялись изменение массы или пирексия после инъекции изотипа НСА антитела (однократная доза 2 мг/кг).
Кинетические показатели антитела изотипа НСА в плазме у трех собак согласовывалась с двухфазным распределением и механизмом выведения, характеризующимся длинным периодом полувыведения бета, составляющим приблизительно 9 дней (фиг.9). Отсутствие быстрого выведения в течение 14 дневного периода наблюдения согласовывалось с отсутствием ответа с участием антитела против собачьего антитела. Напротив, константные домены тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина являются иммуногенными у собак и быстро выводятся из плазмы через приблизительно 8 или 9 дней после инфузии (Richter 1999, Drug Met. Disp. 27, 21-25).
Собачья модель воспаления
Все эксперименты выполняли после предварительного одобрения Комитетом по этике в отношении животных (CRL, Ирландия). Собакам породы бигль инъецировали (=дней-1) каолин в подушечку одной задней лапы для образования саморазвивающегося воспаления, начинающегося через приблизительно 24 часа и вызывающего временную хромоту у собак. В этой модели, как только первоначальный воспалительный ответ на каолин отступает, собаки все меньше хромают в течение периода приблизительно 1-2 недели, а затем полностью излечиваются.
Группам из 3 собак внутривенно инъецировали либо моноклональные антитела против собачьего NGF при 200 мкг/кг массы тела, либо фосфатно-солевой буферный раствор, в качестве контроля-носителя (=день 0). Собак оценивали на хромоту в течение 7 дней при помощи метода визуальной оценки (оценка 0 - отсутствие хромоты (полная опора на конечность); оценка 1 - небольшая хромота (неполная опора на конечность, но хорошее хождение); оценка 2 - умеренная хромота (слабая опора на конечность и плохое хождение), оценка 3 - тяжелая хромота (отсутствие опоры на конечность)). Наблюдателям не было известно, какие собаки получали какие инъекции.
Результаты представлены на фиг.10. Оценки хромоты снижались у собак, получавших моноклональные антитела против NGF, в день 3 после инъекции по сравнению с получавшими контроль-носитель, что указывает на то, что моноклональные антитела против NGF влияли на снижение боли у собак в большей степени, чем наблюдали только с носителем. Отсроченная активность согласуется с плазменными фармакокинетическими показателями моноклональных антител против собачьего NGF, которые демонстрировали медленную фазу тканевого распределения (альфа), составляющую приблизительно 30 часов, и относительно низкую васкуляризацию области подушечки лапы. Результаты, представленные на фиг.10, показывают, что антитела против собачьего NGF в соответствии с настоящим изобретением снижают воспалительную боль у собак с последующим уменьшением хромоты.
Взятые вместе описанные автором настоящего изобретения результаты показывают, что очищенные собачьи антитела, сконструированные с использованием CDC-неактивного изотипа НСА, безопасны и эффективны у собак и характеризуются желаемым длительным периодом полувыведения.
Все документы, на которые ссылается настоящее описание, включены в настоящий документ посредством ссылки. Для специалистов в данной области будет очевидно, что различные модификации и вариации описанных вариантов осуществления настоящего изобретения не выходят за границы объема настоящего изобретения. Хотя настоящее изобретение описано по отношению к определенным предпочтительным вариантам осуществления, следует понимать, что настоящее изобретение не должно быть незаконно ограничено такими определенными вариантами осуществления. В действительности, различные модификации описанных способов осуществления настоящего изобретения, которые очевидны для специалистов в данной области, должны быть охвачены настоящим изобретением.
Определения
Если не указано иное, все используемые в настоящем документе технические и научные термины характеризуются значениями, обычно понимаемыми специалистом в области настоящего изобретения. Значение и сфера применения терминов должны быть ясными, однако, в случае какой-либо неясности приведенные в настоящем документе определения создадут прецедент по отношению к какому-либо словарному или не относящемуся к настоящему документу определению.
Во всем описании, если контекст не требует иного, термины «содержать» или «включать в себя» или вариации, такие как «содержит» или «содержащий», «включает в себя» или «включающий в себя», следует понимать как включение указанного целого значения или группы целых значений, но не исключение какого-либо другого целого значения или группы целых значений.
Используемые в настоящем документе термины в единственном числе включают в себя ссылки на единственное число и на множественное число, если в контексте четко не указано иное. Таким образом, например, ссылка на «активное средство» или на «фармакологически активное средство» предусматривает одно активное средство, а также два или несколько различных активных средств в комбинации, так ссылки на «носитель» предусматривают смеси двух или более носителей, а также один носитель и т.п. Кроме того, если контекст не требует иного, термины в единственном числе должны предусматривать множественное число, а термины во множественном числе должны предусматривать единственное число.
Определенный в настоящем документе термин «боль» означает неприятное сенсорное и эмоциональное переживание, ассоциированное с реальным или потенциальным повреждением ткани, или описанное по отношению к такому повреждению.
В отношении операционной или послеоперационной боли в Законе о защите животных США (Animal Welfare Act 2002. AWA regulations, CFR, Title 9 (Animals and Animal Products), Chapter 1 (Animal and Plant Health Inspection Service, Department of Agriculture). Subchapter A (Animal Welfare), Parts 1-4) определяют болезненную процедуру как какую-либо процедуру, которая, как резонно ожидается, может вызвать более чем слабую или кратковременную боль или дистресс у человека, подвергшегося этой процедуре, то есть, боль, превышающую таковую, вызванную инъекциями или другими незначительными процедурами. Поэтому, если собака подвергается болезненной хирургической процедуре, то животное должно получать послеоперационные анальгетические средства.
В другом случае собака может испытывать сильную или хроническую боль как результат ассоциированного клинического состояния, такого как ревматоидный артрит, остеоартрит, воспаление или раковое или злокачественное состояние.
Термин «ноцицепция» относится к восприятию неприятных раздражителей. Определенная в настоящем документе «невропатическая боль» (также известная как «невралгия») представляет собой боль, которая возникает в связи с проблемами с сигналами от нервов. Она может быть последствием поражения или заболевания, поражающего соматосенсорную систему. У невропатической боли существуют причины, и они могут быть ассоциированы с патологическими ощущениями, называемыми дизестезией, которые возникают спонтанно. В качестве альтернативы, они могут быть ассоциированы с аллодинией, возникающей, когда боль появляется или становится сильнее, с прикосновением или раздражителем, который в норме не вызывает боль. Например, слабое касание к лицу может вызвать боль, если имеется невралгия тройничного нерва, или давление постельного белья может вызвать боль при наличии диабетической невропатии. Невропатическая боль может также быть результатом аллодинии, при которой боль появляется или становится сильнее с прикосновением или раздражителем, которые в норме не вызывают боль. Например, слабое касание лица может вызвать боль, если субъект страдает невралгией тройничного нерва. Невропатическая боль, связанная с гипералгезией, означает то, что сильная боль возникает из-за раздражителя или прикосновения, которые в норме вызывают лишь слабый дискомфорт, в то время как парестезия означает, что дискомфортные или болезненные ощущения возникают даже тогда, когда ничего не контактирует с областью, вызывающей боль, например, булавки и иглы. Другие формы невропатической боли включают в себя прурит или зуд, которые могут быть ассоциированы с аллергическими или воспалительными реакциям на коже и с воспалительной болью в результате повреждения тканей и процессов регенерации.
Определенный в настоящем документе термин «нейтрализующее NGF антитело» или подобное описывает антитело, способное нейтрализовать биологическую активацию и передачу сигнала NGF. Нейтрализующее антитело, которое также может упоминаться как антагонистическое антитело или блокирующее антитело, специфично и предпочтительно избирательно связывается с NGF и ингибирует одну или несколько биологических активностей NGF. Например, нейтрализующее антитело может ингибировать связывание NGF с его целевым лигандом, например, связанные с клеточной мембраной рецепторы TrkA или р75.
Используемый в настоящем документе термин «биологическая активность» относится к какому-либо одному или нескольким характерным биологическим свойствам молекулы (будь то встречающиеся в природе как найденные in vivo, или обеспеченные или предоставленные рекомбинантными средствами). Биологические свойства включают без ограничения связывание и/или активацию рецептора, индукцию клеточной передачи сигнала или клеточной пролиферации, ингибирование роста клеток, индукцию продуцирования цитокинов или хемокинов, индукцию апоптоза и ферментативную активность.
Используемый в настоящем документе термин «определяющий комплементарность участок (CDR)» относится к аминокислотным последовательностям, которые вместе определяют аффинность и специфичность связывания природного Fv-участка нативного связывающего иммуноглобулин сайта, как это описано Kabat et al. (Kabat, E.A., Wu, T.T., Perry, H., Gottesman, K. and Foeller, C. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. NIH Publication No. 91-3242). Используемый в настоящем документе термин «каркасный участок (FR)» относится к аминокислотным последовательностям, расположенным между CDR. Эти части антитела служат для удерживания CDR в соответствующей ориентации (что позволяет CDR связывать антиген).
Используемый в настоящем документе термин «константный участок (CR)» относится к части молекулы антитела, которая обеспечивает эффекторные функции. В настоящем изобретении константные участки обычно означают, что собачьи константные участки, то есть константные участки канинизированных антител субъекта происходят от собачьих иммуноглобулинов.
Используемый в настоящем документе термин «химерное антитело» относится к антителу, содержащему последовательности, полученные из двух различных антител, которые обычно принадлежат к разным видам. Наиболее типично, химерные антитела содержат вариабельные домены, происходящие от донора, что определяет специфичность связи с целевым эпитопом, и константные домены, происходящие от антител, полученных от целевых видов, которым антитело должно быть введено.
Используемый в настоящем документе термин «иммуногенность» относится к измерению способности нацеливающего белка или терапевтической составляющей вызывать иммунный ответ (гуморальный и клеточный) при введении реципиенту. Настоящее изобретение относится к иммуногенности канинизированных антител субъекта. Предпочтительно антитела в соответствии с настоящим изобретением не обладают иммуногенностью, то есть против них не будут повышаться нейтрализующие антитела при введении собаке, и, кроме того, эффекторные функций не опосредуются Fc-участками антитела.
Используемый в настоящем документе термин «идентичность» или «идентичность последовательности» означает, что в любом конкретном положении аминокислотного остатка в выровненной последовательности аминокислотный остаток является идентичным у выровненных последовательностей. Используемый в настоящем документе термин «подобие» или «подобие последовательности» означает, что в любом конкретном положении в выровненных последовательностях аминокислотный остаток характеризуется подобным типом у последовательностей. Например, лейцин может быть заменен остатком изолейцина или валина. Это можно назвать консервативной заменой. Предпочтительно, если аминокислотные последовательности в соответствии с настоящим изобретением модифицированы путем консервативной замены любого из аминокислотных остатков, содержащихся в ней, эти изменения не влияют на специфичность связывания или функциональную активность полученного антитела по сравнению с немодифицированным антителом.
Идентичность последовательности применительно к (нативному) полипептиду в соответствии с настоящим изобретением и его функциональной производной относится к процентному отношению аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны остаткам соответствующего нативного полипептида, после выравнивания последовательностей и введения гэпов при необходимости для достижения максимального процентного отношения гомологии, и при этом какие-либо консервативные замены не рассматриваются как часть идентичности последовательности. Ни N-, ни C-концевые удлинения, ни вставки не должны расцениваться как снижение идентичности последовательности или гомологии. Методы и компьютерные программы для осуществления выравнивания двух или более аминокислотных последовательностей и определения их идентичности или гомологии последовательности хорошо известны специалисту в данной области. Например, процентное отношение идентичности или подобия 2 аминокислотных последовательностей можно легко рассчитать с использованием алгоритмов, например, BLAST (Altschul et al., 1990), FASTA (Pearson & Lipman, 1988) или алгоритма Smith-Waterman (Smith & Waterman, 1981).
Используемая в настоящем документе ссылка на аминокислотный остаток, обладающий «наивысшей гомологией» по отношению ко второму аминокислотному остатку, относится к аминокислотному остатку, у которого большинство характеристик или свойств являются общими со вторым аминокислотным остатком. При определении того, характеризуется ли аминокислотный остаток наивысшей гомологией по отношению ко второму аминокислотному остатку, оценка, как правило, может быть сделана исходя из таких факторов, как без ограничения заряд, полярность, гидрофобность, масса боковой группы и размер боковой группы.
Используемый в настоящем документе термин «соответствующая позиция» относится к аминокислотному остатку, присутствующему во второй последовательности в положении, соответствующем определенному аминокислотному остатку в первой последовательности, предназначен для указания позиции во второй последовательности, которая находится в том же положении в первой последовательности при выравнивании двух последовательностей с обеспечением максимальной идентичности последовательности у этих двух последовательностей. Аминокислотные остатки в соответствующих положениях имеют ту же нумерацию по Kabat.
Используемый в настоящем документе термин «состоит по сути из» или «состоящий по сути из» означает, что полипептид может обладать дополнительными признаками или элементами, кроме описанных, при условии, что такие дополнительные признаки или элементы не существенно влияют на способность антитела или фрагмента антитела обладать специфичностью связывания с собачьим NGF. То есть антитело или фрагменты антитела, содержащие полипептиды, могут обладать дополнительными признаками или элементами, которые не мешают способности антитела или фрагментов антитела связываться с собачьим NGF и антагонизировать функциональную активность собачьего NGF. Такие модификации могут быть введены в аминокислотную последовательность с целью снижения иммуногенности антитела. Например, полипептид, состоящий по сути из определенной последовательности, может содержать одну, две, три, четыре, пять или более дополнительных, удаленных или замещенных аминокислот на любом конце или на обоих концах последовательности, при условии, что эти аминокислоты не мешают, не подавляют, не блокируют или не прерывают роль антитела или фрагмента в связывании с собачьим NGF и блокировании его биологической функции. Подобным образом, молекула полипептида, которая обеспечивает антагонистические антитела против собачьего NGF в соответствии с настоящим изобретением, может быть химически модифицирована одной или несколькими функциональными группами при условии, что такие функциональные группы не влияют на способность антитела или фрагмента антитела связываться с собачьим NGF и антагонизировать его функцию.
Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» означает количество средства, связывающего соединения, малой молекулы, слитого белка или пептидомиметика в соответствии с настоящим изобретением, которое требуется для достижения необходимого терапевтического эффекта.
Используемые в настоящем документе взаимозаменяемые термины «полипептид», «пептид» или «белок» обозначают линейные ряды аминокислотных остатков, связанных друг с другом пептидными связями между альфа-амино- и карбоксигруппами смежных остатков. Аминокислотные остатки, как правило, находятся в естественной изомерной форме «L». Тем не менее, остатки в изомерной форме «D» могут быть замещены любым L-аминокислотным остатком, при условии сохранения полипептидом желаемого функционального свойства.
Определенный в настоящем документе термин «антитело» охватывает связывающие антиген белки, которые специфично связываются с представляющим интерес целевым антигеном, в данном случае с собачьим фактором роста нерва, содержащие один или несколько полипептидов, которые могут быть рекомбинантно получены или которые являются генетически кодируемыми генами иммуноглобулина или фрагментами генов иммуноглобулина. Термин «антитело» охватывает моноклональные и химерные антитела, в частности, канинизированные антитела, и, кроме того охватывает поликлональные антитела или антитела любого класса или подтипа. Термин «антитело», кроме того, распространяется на гибридные антитела, биспецифичные антитела, гетероантитела, а также на их функциональные фрагменты, которые остаются связывающими антиген.
Выражение «специфично связывается с» относится к связыванию антитела со специфичным белком или целью, которые присутствуют в гетерогенной популяции белков. Следовательно, при присутствии в специфичных условиях иммунного анализа антитела связываются с конкретным белком, в данном случае собачьим NGF, но не связываются в значительном количестве с другими белками, присутствующими в образце.
Определенный в настоящем документе термин «собачий» также может относиться к «собаке». Собаки могут быть классифицированы по принадлежности к подвиду с триномиальным названием Canis lupus familiaris (Canis familiaris domesticus) или Canis lupus dingo. Собаки включают в себя любые виды собак и включают в себя как дикие, так и одомашненные разновидности, последние также называются животными-компаньонами.
Далее настоящее изобретение будет описано со ссылкой на следующие примеры, которые приведены с целью иллюстрации и не должны рассматриваться как ограничивающие настоящее изобретение. Способы и методики в соответствии с настоящим изобретением в основном выполняли в соответствии со стандартными способами, хорошо известными в уровне техники и согласно описанным в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются во всем настоящем описании, если не указано иное.
Примеры
Пример 1: Разработка и получение антител против собачьего NGF, характеризующихся различными собачьими изотипами
Антитела против собачьего NGF (названные антителами caN) разрабатывали и конструировали с использованием идентичных вариабельных тяжелых доменов (VH), присоединенных к константным доменам тяжелой цепи (СН2 и СН3), выбранным из НСА (SEQ ID NO:1), НСВ (SEQ ID NO:2), HCC (SEQ ID NO:3) или HCD (SEQ ID NO:4). Вариабельную легкую цепь (VL) присоединяли к собачьему константному домену каппа (SEQ ID NO:5). Объединенные аминокислотные последовательности превращали в экспрессируемую форму в клетках млекопитающих с помощью оптимального отбора кодонов и полного химического генного синтеза, а также клонирования в вектор экспрессии клетки млекопитающего pcDNA3.1+. В частности, разработанные аминокислотные последовательности конструировали в синтетической cDNA-экспрессируемой форме и клонировали в вектор экспрессии клетки млекопитающего pcDNA3.1(+). Цельные последовательности антител получали путем объединения канинизированных последовательностей вариабельных доменов с C-концевыми собачьими последовательностями константной тяжелой или константной легкой цепи. Канинизированный домен VH aD11 объединяли с каждым из четырех изотипов НСА, НСВ, НСС и HCD тяжелой цепи (SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:4), a канинизированный домен VL aD11 с собачьим константным доменом каппа легкой цепи (SEQ ID NO:5). Объединенные аминокислотные последовательности преобразовывали в экспрессируемую в клетках млекопитающих форму путем оптимального отбора кодонов и полного химического генного синтеза, а также клонирования в вектор экспрессии клетки млекопитающих pcDNA3.1+.
Комбинации канинизированных плазмид cDNA тяжелой и легкой цепи (caN-HCA-kLC с использованием SEQ ID NO:5 с SEQ ID NO:1 (HCA); caN-HCB-kLC с использованием SEQ ID NO:5 с SEQ ID NO:2 (НСВ); caN-HCC-kLC с использованием SEQ ID NO:5 с SEQ ID NO:3 (НСС) и caN-HCD-kLC с использованием SEQ ID NO:5 с SEQ ID NO:4 (HCD)) трансфицировали в клетки СНО, супернатанты собирали и подвергали реакции с NGF в формате ELISA. После стадий инкубации и промывания связанное собачье антитело выявляли по способности реагирования со специфичным поликлональным козьим антителом против собачьего IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP) и разработанным с использованием ТМВ. Оптическую плотность полученного продукта измеряли при 450 нм и сравнивали с таковой от модельного трансфицированного пустым вектором супернатанта. Результаты связывания с NGF для 4 изотипов канинизированных антител показаны на фиг.1. Каждое из этих антител имеет одинаковую легкую цепь (caN-kLC), что представляет собой легкую цепь, содержащую собачий константный домен каппа. Каждое антитело содержит разный константный домен тяжелой цепи. Соответственно, специфичный вариабельный домен тяжелой цепи объединяли с одним из 4 различных константных доменов (caN-HCA, caN-HCB, caN-HCC или caN-HCD). Эквивалентное связывание с NGF наблюдали для каждого из собачьих изотипов тяжелых цепей.
Супернатанты антител тестировали на связывание NGF с использованием анализа ELISA (фиг.1А), а также на нейтрализацию NGF с использованием анализа ингибирования пролиферации клеток TF-1 (фиг.1B). Как можно видеть на фиг.1, четыре изотипа обладают эквивалентной активностью в этих анализах, то есть все они специфично связаны с собачьим NGF.
Пример 2: Индуцированная захваченными NGF канинизированными антителами депозиция комплемента
Четыре содержащих антитело супернатанта далее оценивали по их способности связывать комплемент при связывании с NGF с использованием ELISA на C1q комплемента. Планшеты покрывали 5 мкг/мл мышиного NGF по 100 мкл/лунка и блокировали 5% BSA/PBS. Покрытые лунки инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с супернатантами клеточной культуры, содержащими рекомбинантные канинизированные изотипы IgG против NGF, разведенные в PBS/1% BSA (100 мкл/лунка). Планшеты промывали и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с 100 мкл/лунка человеческой сыворотки крови, разведенной 1/100 в вероналовом буферном солевом растворе, содержащем 0,5 мМ MgCl2, 2 мМ CaCl2, 0,05% Tween-20, 0,1% желатина и 0,5% BSA. После промывания планшеты инкубировали с 100 мкл разведенного 1/800 конъюгированного с HRP овечьего антитела против C1q (Serotec) в PBS/1% BSA. После промывания планшеты проявляли путем добавления 100 мкл субстрата ТМВ. Связывание всего C1q комплемента выражали в виде А450 за вычетом фонового значения термоинактивированного комплемента. Проявление останавливали добавлением 100 мкл 2 н H2SO4 и считывали данные поглощения при 450 нм.
Результаты представлены на фиг.2. Эти результаты демонстрируют связывание C1q с иммобилизованными канинизированными антителами типа НСВ и НСС и отсутствие связывания C1q с канинизированными антителами типа НСА и HCD. При этом результаты неожиданно показали, что различные тяжелые цепи собачьего происхождения проявляют различные связывающие комплемент и, следовательно, активационные характеристики, а также что канинизированные антитела с тяжелыми цепями типа НСА и HCD неожиданно оказались предпочтительными для применения в антагонизировании собачьего NGF. Следовательно, способность продуцировать антитело, которое специфично связывается с собачьим NGF, но все же не опосредует CDC, очень полезна, поскольку антитело, которое специфично связывается с NGF, но которое опосредует иммунный ответ в непосредственной близости к экспрессирующим NGF клеткам было бы крайне нежелательным.
Пример 3: Связывание комплемента захваченными NGF N-гликозилированными и агликозилированными формами моноклональных антител против собачьего NGF с изотипами тяжелой цепи НСВ и НСС
Выполняли сравнение связывания N-гликозилированных и агликозилированных вариантов моноклональных антител против собачьего NGF с NGF и изотипов тяжелой цепи НСВ и НСС. Векторы экспрессии, кодирующие пары легких и тяжелых цепей, описанные в SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:2 (НСВ), SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:6 (НСВ*), SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:3 (НСС) или SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:7 (НСС*), совместно трансфицировали в клетки СНО и супернатанты сравнивали по связыванию с мышиным NGF с помощью ELISA. Результаты представлены на фиг.3. На левой панели показано выявление с помощью ELISA экспрессии MAb против NGF, сконструированных с тяжелой цепью НСВ (НСВ), агликозилированной формой тяжелой цепи НСВ (НСВ*), тяжелой цепью НСС (НСС) или агликозилированной формой тяжелой цепи НСС (НСС*), белые столбики на диаграмме показывают неразведенный супернатант, заштрихованные столбики - разведенный 1/10 супернатант, а С показывает неразведенный супернатант отрицательного контроля. Наблюдали эквивалентное связывание с NGF.
Подобным образом, антитела, разработанные для удаления N-связанного сайта гликозилирования константного домена НСВ и НСС (названных НСВ* (SEQ ID NO:6) и НСС* (SEQ ID NO:7)), экспрессировали совместно с легкой цепью и оценивали на активность комплемента (фиг.3) в попытке устранить их связывание комплемента. Удивительно, но агликозилированная форма НСВ* не была способна к связыванию комплемента, однако, агликозилированная форма НСС* сохраняла способность к связыванию комплемента. Идентификация гликозилированных и агликозилированных форм тяжелых цепей собачьего происхождения, которые не опосредовали фиксацию комплемента, является особенно полезным открытием, поскольку NGF является растворимым медиатором, участвующим в ноцицепции.
Супернатанты трансфицированных клеток СНО тестировали на их способность вовлекать комплемент с использованием описанного в примере 2 анализа ELISA на C1q. Результаты представлены на фиг.3, правая панель. Результаты на фиг.3 совместно показывают, что способность вовлекать C1q комплемента аннулировали путем удаления N-связанного сайта гликозилирования в тяжелой цепи типа В (НСВ*) и уменьшили подобной мутацией в тяжелой цепи типа С (НСС*).
Таким образом, в настоящем документе совершенно неожиданно показали, что если антитело содержит тяжелую цепь собачьего происхождения подтипов НСА, HCD или агликозилированной формы изотипа НСВ*, связывание антитела с собачьим NGF не приводит к активации комплемента (и, возможно, других последующих эффекторных функций, таких как ADCC и ADCP). Следовательно, указанные антитела для антагонизирования биологической функциональной активности цели, такой как собачий NGF, путем предотвращения связывания собачьего NGF со связанными с клеточной мембраной рецепторами TrkA или р75 ингибируют ассоциированный последующий внутриклеточный сигнальный каскад. Кроме того, поскольку экспрессия NGF часто происходит в непосредственной близости от нервов, такие антагонизирующие или нейтрализующие NGF антитела, которые содержат тяжелую цепь собачьего происхождения подтипов ПСА, HCD либо НСВ*, блокируют биологическую активность собачьего NGF без вовлечения более широкого иммунного ответа. Следовательно, результаты неожиданно показывают, что различные тяжелые цепи собачьего происхождения проявляют различные характеристики связывания и активации комплемента, и что канинизированные антитела с тяжелыми цепями типа НСА и HCD, как неожиданно показали, являются предпочтительными для использования в антагонизировании собачьего NGF. Идентификация тяжелых цепей собачьего происхождения, которые не опосредуют фиксацию комплемента, является особенно полезным открытием, поскольку NGF является растворимым медиатором. Такие функциональные свойства являются одновременно неожиданными и весьма желательными.
Пример 4: Получение антител с собачьими константными доменами тяжелой цепи к другим антигенам, VEGF и CD20, и их связывание с комплементом
Учитывая удивительный результат, заключающийся в том, что различные изотипы собачьих тяжелых цепей характеризуются дифференциальным связыванием с комплементом, антитела против VEGF и CD20 конструировали аналогичным образом с использованием собачьих константных доменов тяжелой цепи, экспрессированных в клетках СНО, с использованием того же метода, что описан в примере 1. Результаты анализа супернатантов этих антител в ELISA по комплементу представлены на фиг.4. Результаты сравнивали с антителами против NGF, описанными выше, по их способности вовлекать последующее связывание комплемента с его родственным антигеном.
Результаты представлены на фиг.4. На панели А показано, что канинизированные MAb против NGF, сконструированные с использованием изотипов В и С собачьей тяжелой цепи, и гуманизированные антитела, сконструированные с использованием изотипов IgG1 и IgG4 человеческой тяжелой цепи, захватывали на покрытые NGF планшеты, инкубировали с человеческой сывороткой крови и выявляли связанный C1q с помощью ELISA с использованием конъюгированных с HRP поликлональных антител против C1q. На панели В показаны результаты связывания C1q комплемента с захваченными VEGF канинизированными MAb против VEGF, сконструированными с использованием изотипов А и В собачей тяжелой цепи (SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9). На панели С показаны результаты связывания C1q комплемента с MAb против CD20, захваченным на пептид внеклеточного домена huCD20 (muB-2a: мышиное Mab против человеческого CD20 и muB-HCB: мышиное Mab против человеческого CD20, выраженное как химерный слитый белок с изотипом В собачей тяжелой цепи (SEQ ID NO:9). Связывание всего C1q комплемента, выражали как А450 за вычетом фонового значения термоинактивированного комплемента.
В совокупности эти данные показывают, что антитела против VEGF, сконструированные с использованием собачьих константных доменов тяжелой цепи НСВ, но не НСА, могут вовлекать комплемент, а антитело против CD20, сконструированное с использованием собачьего НСВ, может связать комплемент, а значит сравнимы с дифференциальным связыванием изотипов антитела против NGF с комплементом, описанным ранее. Таким образом, эти данные подтверждают удивительное наблюдение, что захваченные антигеном антитела, сконструированные с изотипами НСВ и НСС, связывают комплемент, в то время как с НСА и HCD - нет. Установление того факта, что изотипы НСВ и НСС связывают комплемент, является особенно полезным в уничтожении опухолевых клеток, например, экспрессирующих VEGF или экспрессирующих CD20 опухолевых клеток.
Результаты этих экспериментов подтверждают неожиданное заключение согласно примеру 1 о том, что антитела, содержащие изотипы НСА, HCD и агликозилированную форму НСВ (НСВ*) тяжелой цепи собачьего константного домена, дают иммуноглобулины, которые не опосредуют активность CDC. Соответственно, автор настоящего изобретения впервые определил, что такие тяжелые цепи собачьего происхождения находят применение в иммуноглобулинах для использования в терапевтических методах, при которых опосредованный CDC иммунный ответ является нежелательным. Примерами таких применений могут быть ингибирование собачьими иммуноглобулинами цитокинов или хемокинов, факторов роста, гормонов и других внеклеточных медиаторов, в том числе и комплемента как такового, in vivo, или лечение заболеваний, таких как боль, дегенерация желтого пятна или воспаление.
Помимо того, что изотипы НСА, HCD и НСВ* являются наиболее применимыми при разработке CDC неактивных антител, автор настоящего изобретения также неожиданно установил, что собачьи антитела изотипов НСВ (caIgG-B) и НСС (caIgG-C) применимы при разработке CDC активных антител. Такие антитела могут быть использованы при нацеливании на клетки для разрушения, например, в терапии злокачественных заболеваний. Существует множество человеческих опухолевых антигенов, на которые нацеливаются с использованием CDC активных антител, в том числе CD20, HER2 и EGFR, поэтому собачьи антитела, сконструированные с использованием изотипов НСВ и НСС, будут находить параллельное применение у собак.
Пример 5: Очистка моноклональных антител против NGF после экспрессии в клетках СНО
Поскольку собачьи моноклональные антитела против NGF изотипов НСА и HCD характеризуются желаемым отсутствием связывания с комплементом (фиг.2), но слабо связываются с белком A Staphylococcus (фиг.5), разрабатывали альтернативные методы очистки (фиг.6). Моноклональные антитела против собачьего NGF (сконструированные с использованием изотипа НСА тяжелой цепи) экспрессировали в клетках СНО и после глубоких экспериментов неожиданно обнаружили, что антитело против собачьего NGF может быть фракционировано до высокой степени чистоты (>89% мономерного пика IgG, как показано на фиг.6А, 6D) двумя альтернативными способами очистки.
В первом способе моноклональное антитело против собачьего NGF очищали с помощью анионообменной хроматографии, хроматографии с гидрофобным взаимодействием и эксклюзионной хроматографии (способ I - фиг.6А и B). Во втором способе антитело против NGF могло быть очищено с помощью аффинной хроматографии Capto adhere, за которой следует анионообменная хроматография (способ II - фиг.6С и D).
Основной пик очищенного с помощью любого метода моноклонального антитела против NGF соответствует молекулярной массе приблизительно 150 кДа. Сравнение по SDS-PAGE и ELISA (фиг.7) показывало, что способами I и II получали препараты антител подобной чистоты и биологической активности. Очищенные моноклональные антитела против NGF, полученные этими способами, тестировали в анализе нейтрализации NGF TF-1 (описанном на фиг.1) и показывали наличие высокой активности (IC50 13 рМ антитела против NGF нейтрализовало 37 рМ NGF; не показано).
Пример 6: Моноклональные антитела против собачьего NGF могут безопасно вводиться собакам внутривенно и не вызывать пирексию
Моноклональные антитела против собачьего NGF, полученные с помощью векторов экспрессии, содержащих собачью тяжелую цепь типа НСА, экспрессировали в клетки СНО и очищали с помощью комбинации ионообменной хроматографии, хроматографии с гидрофобным взаимодействием и эксклюзионной хроматографии (способ I, фиг.6А и В), а буфер заменяли на фосфатно-солевой буферный раствор. Антитела вводили внутривенно собакам породы бигль по 2 мг/кг массы тела и оценивали на наличие признаков токсичности путем визуального осмотра ветеринаром, на изменение массы тела, температуры тела и биохимии плазмы. На фиг.8 показаны измерения массы и температуры тела. Не наблюдали никаких изменений в этих или в каких-либо измеренных аналитах биохимии плазмы (в том числе в натрии, калии, хлориде, кальции, фосфате, мочевине, креатинине, глюкозе, холестерине, билирубине, аланинтрансаминазе, щелочной фосфатазе, амилазе, липазе, общем белке или альбумине, не показано).
Пример 7: Плазменные фармакокинетические показатели моноклональных антител против собачьего NGF (изотипа НСА) in vivo демонстрируют длительный период полувыведения из сыворотки крови и отсутствие иммуногенности
Моноклональные антитела против собачьего NGF, полученные с помощью векторов экспрессии, экспрессирующих тяжелую цепь собачьего типа НСА, экспрессировали в клетках СНО и очищали с помощью комбинации ионообменной хроматографии, хроматографии с гидрофобным взаимодействием и эксклюзионной хроматографии, а буфер заменяли на фосфатно-солевой буферный раствор (способ 1, фиг.6А и В). Антитела инъецировали внутривенно собакам породы бигль по 2 мг/кг массы тела и образцы плазмы отбирали в различные моменты времени в течение следующих 2 недель. Разведенные образцы плазмы оценивали на концентрацию антител против собачьего NGF с помощью ELISA с использованием NGF в качестве цели и вторичного реагента - конъюгированного с пероксидазой хрена поликлонального антитела против собачьего NGF и обрабатывали в соответствии с фиг.1. Результаты представлены на фиг.9. Измеренные плазменные концентрации согласовывались с двухфазной кинетикой, с фазой тканевого распределения (альфа) с периодом полувыведения приблизительно 33 часа и удивительно длинной фазой элиминации (бета), составляющей приблизительно 9 дней.
Отсутствие резкого снижения в плазме концентрации антитела против собачьего NGF через 100-300 часов показывает отсутствие в крови собаки ранее существовавших нейтрализующих антител к рекомбинантным моноклональным антителам против NGF, а также каких-либо еще нейтрализующих антител, образованных после инфузии. Для сравнения, рекомбинантные человеческие белки на основе иммуноглобулина нейтрализуются антителами в крови собаки через приблизительно 200 часов после инфузии (Richter et al, Drug Metabolism and Disposition 27:21, 1998). Поэтому данные результаты показывают, что антитела против собачьего NGF в соответствии с настоящим изобретение характеризуются длительным периодом полувыведения из сыворотки крови (приблизительно 9 дней) in vivo после внутривенной инъекции, и отсутствуют как ранее существовавшие антитела, так и вновь образованные антитела, которые с течением времени нейтрализуют инъецированные антитела против NGF.
Пример 8: Влияние моноклональных антител против собачьего NGF на снижение воспалительной боли in vivo
Терапия антителами
Моноклональные антитела против собачьего NGF, полученные с помощью векторов экспрессии, содержащих тяжелую цепь собачьего типа НСА, экспрессировали в клетки СНО и очищали с помощью комбинации ионообменной хроматографии, хроматографии с гидрофобным взаимодействием и эксклюзионной хроматографии (способ I), а буфер заменяли на фосфатно-солевой буферный раствор.
Собачья модель воспаления
Все эксперименты выполняли с предварительного одобрения Комитетом по этике в отношении животных (CRL, Ирландия). Собак породы бигль инъецировали (=день-1) каолином в подушечку одной задней лапы в целях создания самостоятельно развивающегося воспаления, начинающегося через приблизительно 24 часа и вызывающего у собак временную хромоту. В этой модели, как только начальная воспалительная реакция на каолин отступает, через приблизительно 1-2 недели собаки все меньше хромают, а затем полностью восстанавливаются.
Группам из 3 собак внутривенно инъецировали либо моноклональные антитела против собачьего NGF при 200 мкг/кг массы тела, либо фосфатно-солевой буферный раствор, в качестве контроля-носителя (=день 0). Собак оценивали на хромоту в течение 7 дней при помощи метода визуальной оценки (оценка 0 - отсутствие хромоты (полная опора на конечность); оценка 1 - небольшая хромота (неполная опора на конечность, но хорошее хождение); оценка 2 - умеренная хромота (слабая опора на конечность, и плохое хождение), оценка 3 - тяжелая хромота (отсутствие опоры на конечность)). Наблюдателям не было известно, какие собаки получали какие инъекции.
Результаты представлены на фиг.10. Оценки хромоты снижались у собак, получавших моноклональные антитела против NGF, в день 3 после инъекции по сравнению с получавшими контроль-носитель, что указывает на то, что моноклональные антитела против NGF влияли на снижение боли у собак в большей степени, чем наблюдали только с носителем. Отсроченная активность согласуется с плазменными фармакокинетическими показателями моноклональных антител против собачьего NGF, которые демонстрировали медленную фазу тканевого распределения (альфа), составляющую приблизительно 30 часов, и относительно низкую васкуляризацию области подушечки лапы. Результаты, представленные на фиг.10, показывают, что антитела против собачьего NGF в соответствии с настоящим изобретением снижают воспалительную боль у собак с последующим уменьшением хромоты.
Все документы, на которые ссылается настоящее описание, включены в настоящий документ посредством ссылки. Для специалистов в данной области будет очевидно, что различные модификации и вариации описанных вариантов осуществления настоящего изобретения не выходят за границы объема настоящего изобретения. Хотя настоящее изобретение описано по отношению к определенным предпочтительным вариантам осуществления, следует понимать, что настоящее изобретение не должно быть незаконно ограничено такими определенными вариантами осуществления. В действительности, различные модификации описанных способов осуществления настоящего изобретения, которые очевидны для специалистов в данной области, должны быть охвачены настоящим изобретением.
Claims (21)
1. Антитело или его связывающий фрагмент для применения в терапевтическом лечении собаки, если желательна нейтрализация мишени при отсутствии нежелательного иммуноопосредованного разрушения, при этом указанное антитело или связывающий фрагмент специфично связываются с целевым антигеном и имеют константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13, при этом аминокислотная последовательность тяжелой цепи минимизирует активацию последующих эффекторных функций иммунной системы при связывании антитела или связывающего фрагмента с их целевым антигеном.
2. Антитело или его связывающий фрагмент по п.1, при этом терапевтическое лечение собаки связано с лечением, ингибированием или облегчением боли или воспаления у собаки.
3. Антитело или его связывающий фрагмент по п.2, при этом боль выбрана из группы, состоящей из невропатической боли, онкологической боли, боли, ассоциированной с ревматоидным артритом или возникающей из-за ревматоидного артрита, боли, ассоциированной с остеоартритом или возникающей из-за остеоартрита, боли, ассоциированной с воспалением или возникающей из-за воспаления, или боли, ассоциированной с пруритом или возникающей из-за прурита.
4. Антитело или его связывающий фрагмент по п.3, при этом последующие эффекторные функции выбраны из группы, состоящей из опосредованной комплементом цитотоксичности, опосредованной антителом клеточной цитотоксичности и опосредованным антителом клеточным патогенезисом.
5. Антитело или его связывающий фрагмент по п.4, в котором антитело или связывающий фрагмент имеют константный домен тяжелой цепи, который не связывается с C1q, если антитело или связывающий фрагмент связаны с их целевым антигеном.
6. Антитело или его связывающий фрагмент по п.5, в котором антитело имеет тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 6.
7. Антитело или его связывающий фрагмент по любому из пп.1-6, при этом целевой антиген выбран из группы, состоящей из цитокина, хемокина, фактора роста, рецептора клеточной поверхности, вируса и компонента каскада комплемента.
8. Слитый белок для применения в терапевтическом лечении собаки, если желательна нейтрализация мишени при отсутствии нежелательного иммуноопосредованного разрушения, при этом указанный слитый белок содержит (i) связывающую часть, которая специфично связывается с целевым антигеном, и (ii) константный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13, при этом связывающая часть слита с константным доменом тяжелой цепи, и аминокислотная последовательность тяжелой цепи минимизирует активацию последующих эффекторных функций иммунной системы при связывании слитого белка с его целевым антигеном.
9. Слитый белок по п.8, при этом терапевтическое лечение собаки связано с лечением, ингибированием или облегчением боли или воспаления у собаки.
10. Слитый белок по п.9, при этом боль выбрана из группы, состоящей из невропатической боли, онкологической боли, боли, ассоциированной с ревматоидным артритом или возникающей из-за ревматоидного артрита, боли, ассоциированной с остеоартритом или возникающей из-за остеоартрита, боли, ассоциированной с воспалением или возникающей из-за воспаления, или боли, ассоциированной с пруритом или возникающей из-за прурита.
11. Слитый белок по п.10, при этом последующие эффекторные функции выбраны из группы, состоящей из опосредованной комплементом цитотоксичности, опосредованной антителом клеточной цитотоксичности и опосредованным антителом клеточным патогенезисом.
12. Слитый белок по п.11, при этом слитый белок имеет константный домен тяжелой цепи, который не связывается с C1q, если слитый белок фрагмент связан с его целевым антигеном.
13. Слитый белок по п.12, при этом слитый белок имеет тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 6.
14. Слитый белок по любому из пп.8-13, при этом целевой антиген выбран из группы, состоящей из цитокина, хемокина, фактора роста, рецептора клеточной поверхности, вируса и компонента каскада комплемента.
15. Способ очистки антитела или его связывающего фрагмента по любому из пп.1-7 или слитого белка по любому из пп.8-14 из исходной смеси, в котором антитело, слитый белок или связывающий фрагмент содержат собачий константный домен тяжелой цепи изотипа А, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или константный домен тяжелой цепи изотипа D собачьего иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, включающий стадии:
(i) получения исходной смеси, содержащей целевые антитела, слитые белки или их связывающие фрагменты, иммуноглобулины или слитые белки,
(ii) подвержения исходной смеси хроматографии с гидрофобным взаимодействием и
(iii) подвержения исходной смеси эксклюзионной хроматографии.
16. Способ очистки антитела или его связывающего фрагмента по любому из пп.1-7 или слитого белка по любому из пп.8-14 из исходной смеси, в котором антитело, слитый белок или их связывающий фрагмент содержат собачий константный домен тяжелой цепи изотипа А, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или константный домен тяжелой цепи изотипа D собачьего иммуноглобулина, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, из исходной смеси, включающий стадии:
(i) получения исходной смеси, содержащей целевые иммуноглобулины или слитые белки для аффинной хроматографии Capto adhere; и
(ii) подвержения исходной смеси анионообменной хроматографии.
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161483481P | 2011-05-06 | 2011-05-06 | |
US61/483,481 | 2011-05-06 | ||
GBGB1114858.2A GB201114858D0 (en) | 2011-08-29 | 2011-08-29 | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of using the same |
GB1114858.2 | 2011-08-29 | ||
US201161531439P | 2011-09-06 | 2011-09-06 | |
US61/531,439 | 2011-09-06 | ||
PCT/GB2012/051008 WO2012153126A1 (en) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Therapeutic canine immunoglobulins and methods of using the same |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016102995A Division RU2626527C1 (ru) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013154302A RU2013154302A (ru) | 2015-06-20 |
RU2627191C2 true RU2627191C2 (ru) | 2017-08-03 |
Family
ID=44838842
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013154304A RU2644235C2 (ru) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Антитела против фактора роста нервов и способы их получения и применения |
RU2013154302A RU2627191C2 (ru) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения |
RU2016102995A RU2626527C1 (ru) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013154304A RU2644235C2 (ru) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Антитела против фактора роста нервов и способы их получения и применения |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016102995A RU2626527C1 (ru) | 2011-05-06 | 2012-05-08 | Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10040849B2 (ru) |
EP (3) | EP3502137A1 (ru) |
JP (2) | JP2014522236A (ru) |
KR (4) | KR20160079939A (ru) |
CN (4) | CN105833268A (ru) |
AU (2) | AU2012252156B2 (ru) |
BR (2) | BR112013028523A8 (ru) |
CA (3) | CA2834992C (ru) |
DK (1) | DK2705057T3 (ru) |
ES (2) | ES2704036T3 (ru) |
GB (1) | GB201114858D0 (ru) |
HU (1) | HUE030654T2 (ru) |
MY (2) | MY161295A (ru) |
PL (1) | PL2705057T3 (ru) |
PT (1) | PT2705057T (ru) |
RU (3) | RU2644235C2 (ru) |
SG (5) | SG194796A1 (ru) |
WO (2) | WO2012153121A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2818586C2 (ru) * | 2019-07-15 | 2024-05-03 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Антитела против собачьего ctla-4 |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9498530B2 (en) | 2002-12-24 | 2016-11-22 | Rinat Neuroscience Corp. | Methods for treating osteoarthritis pain by administering a nerve growth factor antagonist and compositions containing the same |
ZA200504866B (en) | 2002-12-24 | 2006-11-29 | Rinat Neuroscience Corp | Anti-ngf antibodies and methods using same |
US10704021B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-07-07 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
BR112016014293B1 (pt) | 2013-12-20 | 2023-11-21 | Intervet International B.V | Região de fragmento cristalizável canino, anticorpo caninizado, e,composição farmacêutica |
CA2935960C (en) | 2014-01-08 | 2023-01-10 | Bart Lipkens | Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber |
RU2020117210A (ru) | 2014-09-30 | 2020-06-16 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Антитела к pd-l1, связывающие pd-l1 собаки |
CA3232537A1 (en) | 2015-04-02 | 2016-10-06 | Intervet International B.V. | Antibodies to canine interleukin-4 receptor alpha |
US9758575B2 (en) | 2015-04-06 | 2017-09-12 | Yung Shin Pharmaceutical Industrial Co. Ltd. | Antibodies which specifically bind to canine vascular endothelial growth factor and uses thereof |
US11708572B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-07-25 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic cell separation techniques and processes |
US11377651B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Cell therapy processes utilizing acoustophoresis |
CN107614683B (zh) * | 2015-05-22 | 2020-12-22 | 安斯泰来制药株式会社 | 新型抗人NGF抗体Fab片段 |
US20190292250A1 (en) * | 2015-08-31 | 2019-09-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Aav-anti-vegf for treating cancer in companion animals |
US11091556B2 (en) | 2015-12-18 | 2021-08-17 | Intervet Inc. | Caninized human antibodies to human IL-4R alpha |
CN108779172B (zh) | 2016-01-06 | 2022-02-08 | 定制药品研究株式会社 | 抑制vegf与nrp1结合的抗体 |
US11007259B2 (en) * | 2016-01-06 | 2021-05-18 | Order-Made Medical Research Inc. | High-affinity anti-VEGF antibody |
DK3416984T3 (da) * | 2016-02-18 | 2021-04-26 | Elanco Us Inc | Kimært hunde-anti-cd20-antistof |
US11214789B2 (en) | 2016-05-03 | 2022-01-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Concentration and washing of particles with acoustics |
EP3765499A1 (en) * | 2018-03-12 | 2021-01-20 | Zoetis Services LLC | Anti-ngf antibodies and methods thereof |
GB2578867A (en) * | 2018-10-09 | 2020-06-03 | Genome Res Ltd | Animal models and therapeutic molecules |
US20230348577A1 (en) | 2020-02-19 | 2023-11-02 | Adivo Gmbh | Modified fc regions |
US20230110287A1 (en) * | 2020-03-03 | 2023-04-13 | Scout Bio, Inc. | Antigen-binding molecules and uses thereof |
AU2021358987A1 (en) * | 2020-10-07 | 2023-05-11 | Zoetis Services Llc | Anti-ngf antibodies and methods of use thereof |
EP4339207A1 (en) | 2021-05-12 | 2024-03-20 | Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. | Antigen binding molecule specifically binding to rankl and ngf, and medical use thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001077332A2 (en) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Heska Corporation | Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors |
RU2367667C2 (ru) * | 2004-08-19 | 2009-09-20 | Дженентек, Инк. | Полипептидные варианты с измененной эффекторной функцией |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4376110A (en) | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
AU640397B2 (en) | 1989-08-25 | 1993-08-26 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Dog-mouse heterohybridoma and gene fragment coding for constant region of canine immunoglobulin |
JP2837240B2 (ja) * | 1990-06-07 | 1998-12-14 | 財団法人化学及血清療法研究所 | イヌ免疫グロブリンγ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片およびマウス×イヌキメラ抗体 |
AU2238292A (en) | 1991-06-14 | 1993-01-12 | Xoma Corporation | Microbially-produced antibody fragments and their conjugates |
WO1993011236A1 (en) | 1991-12-02 | 1993-06-10 | Medical Research Council | Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage |
GB9202796D0 (en) | 1992-02-11 | 1992-03-25 | Wellcome Found | Antiviral antibody |
SE9400088D0 (sv) | 1994-01-14 | 1994-01-14 | Kabi Pharmacia Ab | Bacterial receptor structures |
DE19742706B4 (de) | 1997-09-26 | 2013-07-25 | Pieris Proteolab Ag | Lipocalinmuteine |
AU2002218166A1 (en) | 2000-09-08 | 2002-03-22 | Universitat Zurich | Collections of repeat proteins comprising repeat modules |
US20050053973A1 (en) | 2001-04-26 | 2005-03-10 | Avidia Research Institute | Novel proteins with targeted binding |
US20030157561A1 (en) | 2001-11-19 | 2003-08-21 | Kolkman Joost A. | Combinatorial libraries of monomer domains |
US7321026B2 (en) | 2001-06-27 | 2008-01-22 | Skytech Technology Limited | Framework-patched immunoglobulins |
US20030190705A1 (en) | 2001-10-29 | 2003-10-09 | Sunol Molecular Corporation | Method of humanizing immune system molecules |
CA2469833C (en) * | 2001-12-21 | 2008-05-20 | Idexx Laboratories, Inc. | Canine immunoglobulin variable domains, caninized antibodies, and methods for making and using them |
CA2516454A1 (en) * | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Rinat Neuroscience Corp. | Methods for treating pain by administering a nerve growth factor antagonist and an nsaid and compositions containing the same |
JP4263951B2 (ja) * | 2003-06-20 | 2009-05-13 | 財団法人日本生物科学研究所 | イヌ化抗体の作成方法および使用 |
JP2005104936A (ja) * | 2003-10-01 | 2005-04-21 | Nippon Zenyaku Kogyo Kk | イヌtarc抗体 |
JP2005143436A (ja) | 2003-11-18 | 2005-06-09 | Nippon Zenyaku Kogyo Kk | イヌmdc |
ITRM20030601A1 (it) * | 2003-12-24 | 2005-06-25 | Lay Line Genomics Spa | Metodo per l'umanizzazione di anticorpi e anticorpi umanizzati con esso ottenuti. |
KR20060135060A (ko) * | 2004-04-07 | 2006-12-28 | 리나트 뉴로사이언스 코퍼레이션 | 신경성장인자 길항제의 투여에 의한 골암 통증의 치료방법 |
US7462697B2 (en) * | 2004-11-08 | 2008-12-09 | Epitomics, Inc. | Methods for antibody engineering |
ITRM20050290A1 (it) * | 2005-06-07 | 2006-12-08 | Lay Line Genomics Spa | Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato. |
US20070191272A1 (en) | 2005-09-27 | 2007-08-16 | Stemmer Willem P | Proteinaceous pharmaceuticals and uses thereof |
WO2009016164A1 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Glaxo Group Limited | Novel antibodies |
WO2009126730A2 (en) * | 2008-04-09 | 2009-10-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Canine single chain fragment variable antibody libraries and uses thereof |
WO2010027488A2 (en) | 2008-09-04 | 2010-03-11 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies |
US8569460B2 (en) * | 2009-03-25 | 2013-10-29 | Vet Therapeutics, Inc. | Antibody constant domain regions and uses thereof |
EP2413969A4 (en) | 2009-03-30 | 2012-09-05 | Boehringer Ingelheim Int | FUSION PROTEINS WITH DOG FC ELEMENTS |
WO2010117448A2 (en) | 2009-04-05 | 2010-10-14 | Provenance Biopharmaceuticals Corp. | Chimeric immunocytokines and methods of use thereof |
RS63063B1 (sr) * | 2010-08-19 | 2022-04-29 | Zoetis Belgium S A | Anti-ngf antitela i njihova upotreba |
WO2012129330A1 (en) | 2011-03-23 | 2012-09-27 | Option Pharmaceutical, Llc | Targeted cytokine for treatment of musculoskeletal diseases |
BR112013028655B1 (pt) | 2011-05-06 | 2022-08-16 | Zoetis Services Llc | Anticorpos anti-fator de crescimento neuronal, composição farmacêutica compreendendo os mesmos e kit para o tratamento de dor em felinos |
-
2011
- 2011-08-29 GB GBGB1114858.2A patent/GB201114858D0/en not_active Ceased
-
2012
- 2012-05-08 CA CA2834992A patent/CA2834992C/en active Active
- 2012-05-08 EP EP18205440.3A patent/EP3502137A1/en active Pending
- 2012-05-08 ES ES12723730T patent/ES2704036T3/es active Active
- 2012-05-08 CN CN201610180304.XA patent/CN105833268A/zh active Pending
- 2012-05-08 RU RU2013154304A patent/RU2644235C2/ru active
- 2012-05-08 JP JP2014509817A patent/JP2014522236A/ja active Pending
- 2012-05-08 CN CN201280033616.8A patent/CN103732622A/zh active Pending
- 2012-05-08 CA CA2835092A patent/CA2835092C/en active Active
- 2012-05-08 KR KR1020167017621A patent/KR20160079939A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-05-08 RU RU2013154302A patent/RU2627191C2/ru active
- 2012-05-08 BR BR112013028523A patent/BR112013028523A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-05-08 KR KR1020177016065A patent/KR20170070271A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-05-08 WO PCT/GB2012/051002 patent/WO2012153121A1/en active Application Filing
- 2012-05-08 SG SG2013081922A patent/SG194796A1/en unknown
- 2012-05-08 WO PCT/GB2012/051008 patent/WO2012153126A1/en active Application Filing
- 2012-05-08 AU AU2012252156A patent/AU2012252156B2/en active Active
- 2012-05-08 AU AU2012252151A patent/AU2012252151B2/en active Active
- 2012-05-08 CA CA2906505A patent/CA2906505C/en active Active
- 2012-05-08 EP EP12723733.7A patent/EP2705057B8/en active Active
- 2012-05-08 HU HUE12723733A patent/HUE030654T2/en unknown
- 2012-05-08 CN CN201280033531.XA patent/CN103732620B/zh active Active
- 2012-05-08 RU RU2016102995A patent/RU2626527C1/ru active
- 2012-05-08 PT PT127237337T patent/PT2705057T/pt unknown
- 2012-05-08 BR BR112013028654A patent/BR112013028654A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-05-08 SG SG10201607259TA patent/SG10201607259TA/en unknown
- 2012-05-08 KR KR1020137032543A patent/KR101783398B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-08 ES ES12723733.7T patent/ES2601400T3/es active Active
- 2012-05-08 CN CN201610287357.1A patent/CN105999261A/zh active Pending
- 2012-05-08 MY MYPI2013702079A patent/MY161295A/en unknown
- 2012-05-08 KR KR1020137032546A patent/KR101637502B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-08 SG SG10201500960TA patent/SG10201500960TA/en unknown
- 2012-05-08 SG SG2013081906A patent/SG194794A1/en unknown
- 2012-05-08 PL PL12723733T patent/PL2705057T3/pl unknown
- 2012-05-08 MY MYPI2013702082A patent/MY161724A/en unknown
- 2012-05-08 JP JP2014509820A patent/JP5990701B2/ja active Active
- 2012-05-08 SG SG10201500954WA patent/SG10201500954WA/en unknown
- 2012-05-08 EP EP12723730.3A patent/EP2705054B1/en active Active
- 2012-05-08 US US14/115,784 patent/US10040849B2/en active Active
- 2012-05-08 DK DK12723733.7T patent/DK2705057T3/en active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001077332A2 (en) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Heska Corporation | Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors |
RU2367667C2 (ru) * | 2004-08-19 | 2009-09-20 | Дженентек, Инк. | Полипептидные варианты с измененной эффекторной функцией |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PRESTA et al., Engineering of therapeutic antibodies to minimize immunogenicity and optimize function, ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, 2006, vol.58, no.5-6, pp.640-656. TANG L. et al., Cloning and characterization of cDNAs encoding four different canine immunoglobulin γ chains, Veterinary Immunology and Immunopathology, 2001, Vol.80, Issues 3-4, pp.259-270. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2818586C2 (ru) * | 2019-07-15 | 2024-05-03 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Антитела против собачьего ctla-4 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2627191C2 (ru) | Терапевтические собачьи иммуноглобулины и способы их применения | |
JP5969102B2 (ja) | 治療用イヌ免疫グロブリンおよびそれを用いる方法 | |
JP6526089B2 (ja) | 抗神経成長因子抗体ならびにそれを調製および使用する方法 | |
US20230312738A1 (en) | System and method for the development of cd30 bispecific antibodies for immunotherapy of cd30+ malignancies | |
US20140294815A1 (en) | Caninised tumour necrosis factor antibodies and methods of using the same | |
NZ617450B2 (en) | Therapeutic canine immunoglobulins and methods of using the same | |
JP2024075741A (ja) | イヌ化抗体 | |
TW201321406A (zh) | 腫瘤壞死因子抗體及使用其之方法 | |
NZ621619B2 (en) | Caninised tumour necrosis factor antibodies and methods of using the same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |