RU2818586C2

RU2818586C2 - Антитела против собачьего ctla-4

Info

Publication number: RU2818586C2
Application number: RU2022103095A
Authority: RU
Inventors: Мохамад МОРСИ; Юаньчжэн ЧЖАН; Иан ТАРПИ
Original assignee: Интервет Интернэшнл Б.В.
Priority date: 2019-07-15
Filing date: 2020-07-15
Publication date: 2024-05-03

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделенному антителу млекопитающего или его антигенсвязывающему фрагменту, которое связывается с собачьим белком 4, ассоциированным с цитотоксическими T-лимфоцитами, (CTLA-4), а также к композиции, его содержащей. Изобретение эффективно для повышения активности иммунной клетки собаки. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 7 ил., 8 табл., 8 пр.

Description

Перекрестные ссылки на родственные заявки

Эта заявка испрашивает приоритет в соответствии с 35 U.S.C. § 119 (e) на основании временных заявок США No. 62/874 287 от 15 июля 2019 г., No. 62/926 047, от 25 октября 2019 г.и No. 63/048 873, от 7 июля 2020 г., содержание заявок США No. 62/926 047 и No. 63/048873 включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к антителам к белкам, участвующим в костимулирующих или коингибиторных сигнальных путях, включающих CTLA-4. Более конкретно, настоящее изобретение также относится к канинизированным антителам к собачьему CTLA-4, которые имеют специфические последовательности и высокую аффинность связывания с собачьим CTLA-4. Настоящее изобретение также относится к применению антител по настоящему изобретению для лечения онкологических заболеваний у собак.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Инициирование или прекращение иммунных ответов опосредуется сигнальными путями, которые активируются сложными взаимодействиями между набором белков, экспрессируемых на поверхности многих иммунных клеток, в первую очередь Т-лимфоцитов и антигенпрезентирующих клеток (APC). Костимулирующие сигнальные пути приводят к развитию иммунных ответов и, как было показано, опосредуются, в первую очередь, посредством взаимодействия CD28 на поверхности Т-клеток и B7.1 (также известного как CD80) и B7.2 (также известного как CD86) на поверхности APC. Считается, что B7.1 и B7.2 выполняют аналогичные функции.

Напротив, коингибирующие пути приводят к ингибированию или прекращению иммунных ответов и, как было показано, опосредуются посредством взаимодействия между белком 4, ассоциированным с цитотоксическими T-лимфоцитами, (CTLA-4) на Т-клетках и белками CD80/CD86 на APC. Дополнительные коингибирующие сигнальные пути, как было показано, опосредуются посредством взаимодействия между рецептором 1 запрограммированной клеточной смерти (PD-1) на Т-клетках и белками лигандов 1 или 2 рецептора запрограммированной клеточной смерти (PD-L1/PD-L2) на APC. Кроме того, также было показано, что взаимодействие между PD-L1 и CD80 также может приводить к ингибирующим сигналам в Т-клетках.

CD80 и CD86 являются членами суперсемейства иммуноглобулинов (Ig) [Sharpe and Freeman, Nature Reviews, 2: 116-126 (2002)]. CD80 экспрессируется на активированных В-клетках, активированных Т-клетках, а также на макрофагах и дендритных клетках [Swanson and Hall, Eur J. Immunol., 23:295-298 (1993); Razi-Wolfe et al., PNAS, 89:4210-4214 (1992)]. CD86 конститутивно экспрессируется на дендритных клетках, клетках Лангерганса и В-клетках. Кроме того, CD86 экспрессируется на моноцитах и активируется после стимуляции IFN-гамма [Larsen et al., Immunol., 152: 5208-5219 (1994); Inaba, J. Exp.Med. 180: 1849-1860 (1994)].

CD80 и CD86 связываются с CD28 и CTLA-4 с различными функциональными последствиями [Linsley et al., PNAS, 87: 5031-5035 (1990); Linsley et al., J. Exp.Med., 173: 721-730 (1991); Azuma et al., Nature 366: 76-79 (1993); Freeman et al., Science 262: 909-912 (1993)]. Связывание CD80 и CD86 с CTLA-4 имеет гораздо более высокую аффинность, чем связывание CD80/CD86 с CD28 [van der Merwe, J. Exp.Med. 185: 393-402 (1997)].

CD28 представляет собой гомодимерный гликопротеин, который является членом суперсемейства Ig [Aruffo and Seed, PNAS, 84: 8573-8577 (1987)]. Зрелый белок имеет единственный внеклеточный вариабельный домен из 134 аминокислотных остатков, содержащий гексапептидный мотив MYPPPY, который необходим для связывания противорецептора [Riley and June, Blood, 105: 13-21 (2005)]. Цитоплазматический домен CD28 из 41 аминокислоты содержит четыре остатка тирозина, которые могут фосфорилироваться при активации [Sharpe and Freeman, Nat. Rev. Immunol., 2: 116-126 (2002)]. CD28 экспрессируется на большинстве CD4⁺Т-клеток и примерно на 50% CD8⁺Т-клеток [Gross et al., J. Immunol., 149: 380388 (1992); Riley and June, Blood,105:13-21 (2005)]. После лигирования Т-клеточного рецептора (TCR) связывание B7.1/B7.2 с CD28 обеспечивает критический костимулирующий сигнал для Т-клетки, позволяющий активировать Т-клетки и последующее развитие иммунного ответа [Reiser et al., PNAS, 89: 271-275 (1992); Jenkins et al., J. Immunol., 147: 2461-2466 (1991)]. Было показано, что в отсутствие сигнала CD28 Т-клетки подвергаются апоптозу или переходят в состояние невосприимчивости [Jenkins et al., J. Exp.Med. 165: 302-319 (1987); Jenkins et al., PNAS, 84: 5409-5413 (1987); Schwartz, Science, 248: 1349-1356 (1990)]. Связывание CD28-B7.1/B7.2 может изменять пороговый уровень лигирования TCR (например, количество комплекса антиген-MHC), необходимый для активации, сокращать время, необходимое для стимуляции наивных клеток, и увеличивать величину ответа Т-клеток. [Soskic et al., Advances in Immunology,124:96-123 (2014)].

CTLA-4 (CD152) также является членом суперсемейства Ig и состоит из единственного внеклеточного домена, трансмембранного домена и короткого цитоплазматического хвоста [Swanson, Immunology; 1010: 169-177 (2000)]. Кроме того, CTLA-4 имеет примерно 30% аминокислотной идентичности с CD28. CTLA-4 не экспрессируется конститутивно на наивных Т-клетках, хотя он быстро активируется вскоре после лигирования CD28 и активации Т-клеток с пиковым уровнем экспрессии CTLA-4 примерно через 48-96 часов после начальной активации Т-клеток [Alegre et al., J. Immunol., 157: 4762-4770 (1996); Freeman et al., J. Immunol., 149: 3795-3801 (1992)]. CTLA-4 связывается как с B7.1, так и с B7.2 с гораздо более высокой аффинностью, чем CD28 [van der Merwe et al., J. Exp.Med., 185: 393-402 (1997)]. Однако, в отличие от стимулирующих эффектов связывания CD28 B7.1 или B7.2, CTLA-4 действует как ингибирующий рецептор, который жизненно важен для подавления иммунного ответа [Walnus et al., Immunity, 1: 405- 413 (1994); Walnus, J.Exp.Med., 183: 2541-2550 (1996); Krummeland Allison, J. Exp.Med., 183: 2533-2540 (1996)]. Механизм, с помощью которого CTLA-4 опосредует свои иммунные ингибирующие функции, связан с его способностью действовать как конкурентный ингибитор взаимодействия между CD28 и CD80/CD86 [обзор в Swanson, Immunology, 1010: 169-177 (2000)]. Критическая роль CTLA-4 в подавлении иммунитета продемонстрирована на мышах с дефицитом CTLA-4, которые умирают в возрасте 3-5 недель из-за развития лимфопролиферативного заболевания, характеризующегося инфильтрацией Т-лимфоцитами множества органов [Tivol et al., Immunity, 3: 541-5417 (1995); Waterhouse et al., Science, 270: 985-988 (1995)]. Было также продемонстрировано, что последствия нокаута CTLA-4 зависят от взаимодействия CD28 с его лигандами CD80 и CD86, что демонстрируется отсутствием заболевания у мышей с тройным нокаутом CTLA-4/CD80/CD86 [Mandelbrot et al., J. Exp.Med., 189: 435-440 (1999)]. Это также подтверждается защитой от лимфопролиферации, обеспечиваемой повторным введением CTLA-4 Ig мышам с нокаутом CTLA-4 [Tivol et al., J. Immunol., 158: 5091-5094 (1997)].

Кроме того, было показано, что блокирование эффекта CTLA-4 с помощью антител усиливает ответы Т-клеток in vitro и in vivo и усиливает противоопухолевые иммунные ответы [Leach et al., Science, 271: 1734-1736 (1996)]. На основании этих результатов была предпринята разработка блокаторов CTLA-4, таких как моноклональные антитела, для обеспечения терапевтических возможностей лечения онкологических заболеваний [Hodi et al., PNAS, 100 (8): 4712-4717 (2003); Phan GQ et al., PNAS, 100 (14): 8372-8377 (2003); Attia, Journal of Clinical Oncology, 23(25):6043-6053 (2005); Comin-Anduix et al., Journal of Translational Medicine, 6: 22-22 (2008); WO2000037504 A2; США 8 017 114 В2; WO2010097597A1; WO2012120125 A1; и Boutros et al., Nat Rev Clin Oncol., 13 (8): 473-486 (2016)].

PD-1 является членом семейства иммуномодулирующих рецепторов CD28/CTLA-4. PD-1 также является членом суперсемейства Ig и содержит внеклеточный вариабельный домен, который связывает его лиганды, и цитоплазматический хвост, который связывает сигнальные молекулы [обзор в Zak et al., Cell Structure, 25: 1163-1174 (2017)]. Цитоплазматический хвост PD-1 содержит два сигнальных мотива на основе тирозина [Zhang et al., Immunity 20: 337-347 (2004)]. Экспрессия PD-1 не обнаруживается на нестимулированных Т-клетках, В-клетках или миелоидных клетках. Однако экспрессия PD1 в этих клетках повышается после активации [Chemnitz et al., J. Immunol., 173: 945-954 (2004); Petrvas et al., J. Exp.Med., 203: 2281-2292 (2006)]. PD-1 наиболее близок к CTLA-4, имея с ним приблизительно 24% аминокислотной идентичности [Jin et al., Current Topics in Microbiology and Immunology, 350: 17-37 (2010)]. PD-1 ослабляет активацию Т-клеток при связывании с PD-L1 и PD-L2, которые экспрессируются на поверхности APC. Связывание любого из этих лигандов с PD-1 негативно регулирует передачу сигналов антигена через Т-клеточный рецептор (TCR). На сегодняшний день обнаружено, что только PD-L1 и PD-L2 действуют как лиганды для PD-1. Как и CTLA-4, лигирование PD-1, по-видимому, передает отрицательный иммуномодулирующий сигнал. Лигирование PD-1 с помощью PD-L1 или PD-L2 приводит к ингибированию TCR-опосредованной пролиферации и продукции цитокинов [Jin et al., Current Topics in Microbiology and Immunology, 350: 17-37 (2010)]. В отличие от животных с дефицитом CTLA-4, мыши с дефицитом PD-1 умирают намного позже и демонстрируют признаки аутоиммунитета, хотя тяжесть наблюдаемых эффектов не так велика, как у животных с дефицитом CTLA-4 [Nishimura et al., Immunity, 11 (2): 141-151 (1999); Nishimura et al., Science, 291 (5502): 319-322 (2001)]. Хотя сигнальные пути PD-1 в настоящее время интенсивно исследуются, на сегодняшний день исследования показывают, что взаимодействия PD-L1/PD-L2/PD-1 участвуют в негативной регуляции некоторых иммунных ответов из-за ослабления сигналов ниже по сигнальному пути от стимуляции TCR, приводящего к снижению секреции цитокинов и нарушению пролиферации Т-клеток и снижению продукции цитотоксических молекул Т-клетками [Freeman et al., J. Exp.Med., 192 (7): 1027-1034 (2000)].

PD-L1 (CD274) представляет собой мембранный белок типа 1 и состоит из IgV-подобных и IgC-подобных внеклеточных доменов, гидрофобного трансмембранного домена и состоящего из 30 аминокислот короткого цитоплазматического хвоста с неизвестными свойствами сигнальной трансдукции. PD-L1 признан членом семейства B7 и имеет приблизительно 20% аминокислотной идентичности с членами семейства B7. PDL1 связывается со своим рецептором PD-1, обнаруженным на активированных Т-клетках, В-клетках и миелоидных клетках. PD-L1 также связывается с костимулирующей молекулой CD80, но не с CD86 [Butte et al., Immunology, 45 (13): 3567-3572 (2008)]. Аффинность CD80 к PD-L1 является промежуточной между его аффинностью к CD28 и CTLA-4. Родственная молекула PD-L2 не имеет аффинности ни к CD80, ни к CD86, но связана с PD-1 в качестве рецептора. Взаимодействие PD-L1 с его рецептором PD-1 на Т-клетках доставляет сигнал, который ингибирует TCR-опосредованную продукцию IL-2 и пролиферацию Т-клеток. Связывание PD-L1 с PD-1 также способствует понижающей модуляции TCR, индуцированной лигандом, во время презентации антигена наивным Т-клеткам. Кроме того, связывание PD-L1 с CD80 на Т-клетках приводит к апоптозу Т-клеток. Роль PD1 и PD-L1 как ингибиторов активации Т-клеток была продемонстрирована во многих исследованиях. На основании этих результатов была предпринята разработка блокаторов PD-1 и PD-L1, таких как моноклональные антитела, для обеспечения терапевтических возможностей для лечения онкологических и инфекционных заболеваний.

Гуманизированные моноклональные антитела, которые блокируют связывание и активность собачьих PD-1, PDL1 и CTLA-4, были разработаны и в настоящее время доступны для использования при лечении людей, у которых диагностирован один из нескольких различных типов онкологических заболеваний. Аналогичным образом также сообщалось о канинизированных моноклональных антителах, которые блокируют связывание и активность собачьих PD-1 и PDL1 [US 9944704 B2, US 10106607 B2 и US.2018/0237535A1, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме]. Однако до сих пор не было сообщений о канинизированных моноклональных антителах, которые блокируют связывание и активность собачьего CTLA-4.

Цитирование любой ссылки настоящего описания не следует рассматривать как допущение того, что такая ссылка доступна в качестве «предшествующего уровня техники» по отношению к настоящей заявке.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к антителам против собачьего белка 4, ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами, (CTLA-4), которые связываются с собачьим CTLA-4. В конкретных вариантах осуществления антитела к собачьему CTLA-4 специфически связываются с собачьим CTLA-4. В более конкретных вариантах осуществления антитела к собачьему CTLA-4 также обладают способностью блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80. В других конкретных вариантах осуществления антитела к собачьему CTLA-4 также обладают способностью блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86. В других конкретных вариантах осуществления антитела к собачьему CTLA-4 обладают способностью как блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80, так и блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86.

Кроме того, настоящее изобретение относится к определяющим комплементарность областям (CDR), содержащимся в этих антителах, и к комбинации этих CDR (например, полученных из мышиных антител против собачьего CTLA-4) в каркасах собаки с образованием канинизированных антител против собачьего CTLA-4. Настоящее изобретение также относится к применению таких антител при лечении таких состояний, как онкологическое заболевание.

Соответственно, настоящее изобретение относится к уникальным наборам CDR из шести (6) иллюстративных мышиных антител против собачьего CTLA-4. Шесть иллюстративных мышиных антител против собачьего CTLA-4 имеют уникальные наборы CDR, то есть три CDR легкой цепи: CDR легкой цепи 1 (CDRL1), CDR легкой цепи 2 (CDRL2) и CDR легкой цепи 3 (CDRL3), и три CDR тяжелой цепи: CDR тяжелой цепи 1 (CDRH1), CDR тяжелой цепи 2 (CDRH2) и CDR тяжелой цепи 3 (CDRH3). Как подробно описано ниже, имеется существенная гомология последовательностей в каждой группе CDR и даже некоторая избыточность (например, см. набор V_L CDR-3 ниже в Таблице 1). Следовательно, настоящее изобретение относится не только к аминокислотным последовательностям шести CDR из шести иллюстративных мышиных антител против собачьего CTLA-4, но также относится к консервативно модифицированным вариантам этих CDR, а также вариантам, которые включают (например, имеют общую) одинаковую каноническую структура и/или связываются с одним или более (например, 1, 2, 3, 4 или более) аминокислотными остатками собачьего CTLA-4, которые содержатся в эпитопе собачьего CTLA-4.

Один аспект настоящего изобретения относится к антителам млекопитающего, которые связываются с собачьим белком 4, ассоциированным с цитотоксическими T-лимфоцитами, (CTLA-4). В конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению представляет собой мышиное антитело. В предпочтительных вариантах осуществления антитела млекопитающих по настоящему изобретению, включающие мышиные антитела по настоящему изобретению, или их антигенсвязывающие фрагменты представляют собой канинизированные антитела или их канинизированные антигенсвязывающие фрагменты.

В конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих специфически связываются с собачьим CTLA-4. В более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающего к собачьему CTLA-4 также обладают способностью блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80. В других конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих к собачьему CTLA-4 также обладают способностью блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86. В других конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих к собачьему CTLA-4 обладают способностью как блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80, так и блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86.

В некоторых вариантах осуществления антитела млекопитающих, которые связываются с собачьим CTLA-4, представляют собой выделенные антитела. Настоящее изобретение также относится к антигенсвязывающим фрагментам любого из этих антител млекопитающих, которые связываются с собачьим CTLA-4. В конкретных вариантах осуществления антитела содержат три определяющие комплементарность области легкой цепи (CDR): CDR легкой цепи 1 (CDRL1), CDR легкой цепи 2 (CDRL2) и CDR легкой цепи 3 (CDRL3); и три CDR тяжелой цепи: CDR тяжелой цепи 1 (CDRH1), CDR тяжелой цепи 2 (CDRH2) и CDR тяжелой цепи 3 (CDRH3).

В конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 90 или вариант SEQ ID NO: 90, который включает каноническую структуру класса 7. В более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRH2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 88 или вариант SEQ ID NO: 88, который включает каноническую структуру класса 2A. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRH1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, CDRH1, которая содержит консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 86 или вариант SEQ ID NO: 86, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 96 или вариант SEQ ID NO: 96, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRL2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 94 или вариант SEQ ID NO: 94, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 92, или Вариант SEQ ID NO: 92, который включает каноническую структуру класса 4.

В альтернативных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 102 или вариант SEQ ID NO: 102, который включает каноническую структуру класса 9. В более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRH2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 100 или вариант SEQ ID NO: 100, который включает каноническую структуру класса 4. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRH1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, CDRH1, которая содержит консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 98 или вариант SEQ ID NO: 98, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 108 или вариант SEQ ID NO: 108, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 106 или вариант SEQ ID NO: 106, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 104, или Вариант SEQ ID NO: 104, который включает каноническую структуру класса 1.

В других альтернативных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 113 или вариант SEQ ID NO: 113, который включает каноническую структуру класса 7. В более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRH2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 88 или вариант SEQ ID NO: 88, который включает каноническую структуру класса 2A. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRH1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, CDRH1, которая содержит консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 86 или вариант SEQ ID NO: 86, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 96 или вариант SEQ ID NO: 96, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 94 или вариант SEQ ID NO: 94, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 117, или вариант SEQ ID NO: 117, который включает каноническую структуру класса 4.

Еще в других альтернативных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 115 или вариант SEQ ID NO: 115, который включает каноническую структуру класса 7. В более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRH2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 88 или вариант SEQ ID NO: 88, который включает каноническую структуру класса 2A. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRH1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, CDRH1, которая содержит консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 86 или вариант SEQ ID NO: 86, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 96 или вариант SEQ ID NO: 96, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 122 или вариант SEQ ID NO: 122, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 119, или вариант SEQ ID NO: 119, который включает каноническую структуру класса 4.

В других альтернативных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 114 или вариант SEQ ID NO: 114, который включает каноническую структуру класса 7. В более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRH2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 111 или вариант SEQ ID NO: 111, который включает каноническую структуру класса 2A. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRH1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109, CDRH1, которая содержит консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 109 или вариант SEQ ID NO: 109, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 96 или вариант SEQ ID NO: 96, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRL2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 121 или вариант SEQ ID NO: 121, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 118, или вариант SEQ ID NO: 118, который включает каноническую структуру класса 4.

Еще в других альтернативных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 116 или вариант SEQ ID NO: 116, который включает каноническую структуру класса 12. В более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит CDRH2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 112 или вариант SEQ ID NO: 112, который включает каноническую структуру класса 2A. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRH1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110, CDRH1, которая содержит консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 110 или вариант SEQ ID NO: 110, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL3, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 124 или вариант SEQ ID NO: 124, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL2, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 123 или вариант SEQ ID NO: 123, который включает каноническую структуру класса 1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент также дополнительно содержит CDRL1, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, консервативно модифицированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 120, или вариант SEQ ID NO: 120, который включает каноническую структуру класса 2.

Как указано выше, канинизированные антитела к собачьему CTLA-4 или их канинизированные антигенсвязывающие фрагменты являются важным аспектом настоящего изобретения, и настоящее изобретение обеспечивает канинизированные антитела млекопитающих, включая канинизированные мышиные антитела, из всех таких антител млекопитающих. Соответственно, настоящее изобретение также относится к выделенному канинизированному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которое специфически связывается с CTLA-4, и содержит тяжелую цепь собачьего IgG и собачью легкую цепь каппа или лямбда. В конкретных вариантах осуществления этого типа собачья легкая цепь каппа или лямбда содержит три определяющих комплементарность области легкой цепи (CDR): CDR легкой цепи 1 (CDRL1), CDR легкой цепи 2 (CDRL2) и CDR легкой цепи 3 (CDRL3); и тяжелая цепь собачьего IgG содержит три CDR тяжелой цепи: CDR тяжелой цепи 1 (CDRH1), CDR тяжелой цепи 2 (CDRH2) и CDR тяжелой цепи 3 (CDRH3), которые получены из мышиных антител против собачьего CTLA-4. Конкретные варианты осуществления канинизированных антител и их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению связываются с собачьим CTLA-4 и/или блокируют связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80 и/или собачьим CD86.

Канинизированное антитело по настоящему изобретению или его канинизированный антигенсвязывающий фрагмент может содержать IgGD, который содержит шарнирную область, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128. В родственном варианте осуществления шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 129. Еще в одном родственном варианте осуществления шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130. Еще в одном родственном варианте осуществления шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 131.

В альтернативных вариантах осуществления канинизированное антитело содержит тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления этого типа тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 61. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64. В конкретных вариантах осуществления этого типа тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 63. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления этого типа тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 65. В более конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 49. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 51. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 53.

В альтернативных вариантах осуществления канинизированное антитело содержит модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74. В конкретном варианте этого типа модифицированная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 73. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76. В конкретном варианте этого типа модифицированная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 75. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78. В конкретных вариантах осуществления этого типа модифицированная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 77. В более конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50. В конкретном варианте этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 49. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52. В конкретном варианте этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 51. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54. В конкретном варианте осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 53.

В конкретных вариантах осуществления канинизированные антитела содержат тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52. В других вариантах осуществления канинизированные антитела содержат тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54.

В альтернативных вариантах осуществления канинизированные антитела содержат модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52. В других вариантах осуществления канинизированные антитела содержат модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54.

В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68. В конкретных вариантах осуществления этого типа тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 67. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления этого типа тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 69. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72. В конкретных вариантах осуществления этого типа тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 71. В более конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 55. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 57. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 59.

В альтернативных вариантах осуществления канинизированное антитело содержит модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80. В конкретном варианте осуществления этого типа модифицированная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 79. В других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82. В конкретном варианте этого типа модифицированная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 81. Еще в других вариантах осуществления канинизированное антитело содержит модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84. В конкретных вариантах осуществления этого типа модифицированная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 83. В более конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 55. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 57. В других конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело дополнительно содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60. В конкретных вариантах осуществления этого типа легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 59.

В конкретных вариантах осуществления канинизированные антитела содержат модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58. В других вариантах осуществления канинизированные антитела содержат тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.

В альтернативных вариантах осуществления канинизированные антитела содержат модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58. В других вариантах осуществления канинизированные антитела содержат модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84, и легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.

Настоящее изобретение также относится к антителам млекопитающих или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с собачьим CTLA-4 с константой диссоциации (Kd), которая ниже 1×10^-12 M (например, 5×10^-13 M или ниже). В других вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 с константой диссоциации от 1×10^-5 M до 1×10^-12 М. В более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 с константой диссоциации от 1×10^-7 М до 1×10^-11 М. В еще более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 с константой диссоциации от 1×10^-8 М до 1×10^-11 М. В еще более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 с константой диссоциации от 1×10^-8 M до 1×10^-10 M.

Настоящее изобретение также относится к антителам млекопитающих или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью ассоциации (k_on) выше чем 1×10⁷ M^{-1 с-1}. В других вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью ассоциации от 1×10² M^{-1 с-1} до 1×10⁷ M^{-1 с-1}. В более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью ассоциации от 1×10³ M^{-1 с-1} до 1×10⁶ M^{-1 с-1}. В еще более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью ассоциации от 1×10³ M^{-1 с-1} до 1×10⁵ M^{-1 с-1}. В еще более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью ассоциации от 1×10⁴ M^{-1 с-1} до 1×10⁵ M^{-1 с-1}.

Настоящее изобретение дополнительно относится к антителам млекопитающих или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью диссоциации (k_off) ниже, чем 1×10^-7 с^-1. В других вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью диссоциации от 1×10^-3 с^-1 до 1×10^-8 с^-1. В более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью диссоциации от 1×10^-4 с^-1 до 1×10^-7 с^-1. В еще более конкретных вариантах осуществления антитела млекопитающих или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с собачьим CTLA-4 со скоростью диссоциации от 1×10^-5 с^-1 до 1×10^-7 с^-1.

В конкретных вариантах осуществления антитело млекопитающего по настоящему изобретению (включая химерные антитела) блокирует связывание собачьего CD80 и/или CD86 с собачьим CTLA-4. В более конкретных вариантах осуществления антитело блокирует связывание собачьего CD80 и/или CD86 с собачьим CTLA-4 с минимальной ЕС50 от 1×10^-8 M до 1×10^-9 M или даже в более низкой концентрации. В еще более конкретных вариантах осуществления ЕС50 составляет от 5×10^-9 M до 5×10^-13 М. В еще более конкретных вариантах осуществления ЕС50 составляет от 5×10^-9 M до 5×10^-11 М.

Соответственно, в конкретных вариантах осуществления антитела по настоящему изобретению могут проявлять одно, два, три, четыре или все из этих свойств, то есть вышеупомянутые константы диссоциации с собачьим CTLA-4, указанные выше скорости связывания с собачьим CTLA-4, указанные выше скорости диссоциации от связывающего комплекса антитело-собачий CTLA-4 или эффективное лечение онкологического заболевания у больного животного.

Настоящее изобретение также относится к канинизированным антителам млекопитающих и антигенсвязывающим фрагментам, которые перекрестно конкурируют с антителами млекопитающих, описанными в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления канинизированные антитела млекопитающих перекрестно конкурируют с антителом, содержащим 6 CDR 45A9 [см. Таблицу 1 ниже]. В родственных вариантах осуществления канинизированные антитела млекопитающих перекрестно конкурируют с антителом, содержащим 6 CDR 27G12 [см. Таблицу 1 ниже]. Еще в других родственных вариантах осуществления канинизированные антитела млекопитающих перекрестно конкурируют с антителом, содержащим 6 CDR 22A11. [см. Таблицу 1 ниже]. Еще в других родственных вариантах осуществления канинизированные антитела млекопитающих перекрестно конкурируют с антителом, содержащим 6 CDR 110E3 [см. Таблицу 1 ниже]. В конкретных вариантах осуществления канинизированные антитела млекопитающих перекрестно конкурируют с антителом, содержащим 6 CDR 12B3 [см. Таблицы 1 и 3 ниже]. В других конкретных вариантах осуществления канинизированные антитела млекопитающих перекрестно конкурируют с антителом, содержащим 6 CDR 39A11 [см. Таблицы 1 и 3 ниже]. В конкретных вариантах осуществления анализ представляет собой стандартный анализ связывания. В одном таком варианте осуществления стандартный анализ связывания проводят с помощью BIACore®. В другом таком варианте осуществления стандартный анализ связывания проводят с помощью ИФА. Еще в одном таком варианте осуществления стандартный анализ связывания проводят с помощью проточной цитометрии.

Как указано выше, антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты) по настоящему изобретению, включая вышеупомянутые антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты), могут быть моноклональными антителами (и их антигенсвязывающими фрагментами), антителами млекопитающих (и их антигенсвязывающими фрагментами), например, мышиными (мышиные) антителами (и их антигенсвязывающими фрагментами), канинизированными антителами (и их антигенсвязывающими фрагментами), включая канинизированные мышиные антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты). В некоторых вариантах осуществления антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты) являются выделенными.

В предпочтительных вариантах осуществления канинизированное антитело по настоящему изобретению или его антигенный фрагмент связывается с эпитопом аминокислотной последовательности собачьего CTLA-4. В конкретном варианте осуществления канинизированное антитело взаимодействует с одним или более аминокислотными остатками в положениях T35, R38, T51, T53, Y90, K93, Y98 и Y102 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 138. В другом варианте осуществления канинизированное антитело взаимодействует с одним или более аминокислотными остатками в положениях 35T, R38, S42, K93 и Y102 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 138.

Настоящее изобретение также относится к канинизированным антителам, которые связываются с одним или более эпитопами или их частями аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136 и SEQ ID NO: 137. В конкретных вариантах осуществления канинизированное антитело по настоящему изобретению или его антигенный фрагмент связывается с эпитопом или его частью, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 132. В более конкретном варианте осуществления этого типа эпитоп или его часть состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 134. В другом варианте осуществления этого типа эпитоп или его часть состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 135. В некоторых вариантах осуществления эпитоп или его часть состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 133. В более конкретном варианте осуществления этого типа эпитоп или его часть состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 136. В родственных вариантах осуществления канинизированные антитела связываются с одним или более эпитопами или их частями, которые состоят из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134 и/или SEQ ID NO: 136 и/или SEQ ID NO: 135.

Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам (включая выделенные и/или рекомбинантные нуклеиновые кислоты), которые кодируют любую из легких цепей канинизированного антитела по настоящему изобретению. Точно так же настоящее изобретение относится к выделенным нуклеиновым кислотам (включая выделенные и/или рекомбинантные нуклеиновые кислоты), которые кодируют любую из тяжелых цепей канинизированного антитела по настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к экспрессирующим векторам, которые содержат одну или более нуклеиновых кислот (включая выделенные нуклеиновые кислоты) по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также относится к клеткам-хозяевам, которые содержат один или более экспрессирующих векторов по настоящему изобретению.

В конкретных вариантах осуществления, антитело представляет собой рекомбинантное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В родственных вариантах осуществления вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи соединены гибким линкером с образованием одноцепочечного антитела. В конкретных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab-фрагмент. В других вариантах осуществления, антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab'-фрагмент. Еще в других вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой фрагмент (Fab')2. Еще в других вариантах осуществления, антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой диантитело. В конкретном варианте осуществления, антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой домен-содержащее антитело. В конкретных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой однодоменное антитело.

В конкретных вариантах осуществления канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или антигенсвязывающий фрагмент связывается с CTLA-4 у животного (например, собаки), которое подвергают лечению от онкологического заболевания. В более конкретных вариантах осуществления введение канинизированного мышиного антитела против собачьего CTLA-4 или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению служит для облегчения одного или более симптомов онкологического заболевания у животного (например, собаки), которое подвергают лечению.

Настоящее изобретение также относится к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим мышиные антитела против собачьего CTLA-4 или их части. В родственных вариантах осуществления, такие антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут использоваться для получения лекарственного средства для лечения онкологического заболевания у собаки. Альтернативно или совместно, в настоящем изобретении предложено применение любого из антител или фрагментов антител по настоящему изобретению для диагностических целей. Еще в дополнительных вариантах осуществления предложен набор, содержащий любое из канинизированных антител или антигенсвязывающих фрагментов, раскрытых в настоящем описании.

Настоящее изобретение также относится к выделенным пептидам, которые связываются с канинизированным антителом по настоящему изобретению, которые содержат от 5 до 25 аминокислотных остатков и которые на 90% или более идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 132. В конкретных вариантах осуществления выделенные пептиды идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 132. В более конкретных вариантах осуществления выделенные пептиды содержат от 10 до 20 аминокислотных остатков. В родственных вариантах осуществления выделенные пептиды связываются с канинизированным антителом по настоящему изобретению, содержат от 5 до 25 аминокислотных остатков и на 90% или более идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 133. В конкретных вариантах осуществления выделенные пептиды идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 133. В более конкретных вариантах осуществления этого типа выделенные пептиды содержат от 10 до 20 аминокислотных остатков.

В других вариантах осуществления выделенные пептиды, которые связываются с канинизированным антителом по настоящему изобретению, содержат аминокислотные последовательности, которые на 90% или более идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 134. В других вариантах осуществления выделенные пептиды содержат аминокислотные последовательности, которые идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 134. В других вариантах осуществления выделенные пептиды, которые связываются с канинизированным антителом по настоящему изобретению, содержат аминокислотные последовательности, которые на 90% или более идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 135. В других вариантах осуществления выделенные пептиды содержат аминокислотные последовательности, которые идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 135. В других вариантах осуществления выделенные пептиды, которые связываются с канинизированным антителом по настоящему изобретению, содержат аминокислотные последовательности, которые на 90% или более идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 136. В других вариантах осуществления выделенные пептиды содержат аминокислотные последовательности, которые идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 136.

Кроме того, настоящее изобретение относится к слитым белкам, которые содержат такие выделенные пептиды, которые связываются с канинизированным антителом по настоящему изобретению. Настоящее изобретение дополнительно относится к слитым белкам, которые содержат любой из вышеупомянутых пептидов. В конкретном варианте осуществления слитый белок содержит такой антигенный пептид и Fc-область антитела IgG млекопитающего, отличного от собаки. В более конкретном варианте осуществления слитый белок содержит Fc-область антитела IgG млекопитающего, отличного от собаки. В некоторых вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой мышиный IgG. В альтернативных вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой IgG человека. В других вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой IgG лошади. В других вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собак, представляет собой IgG свиньи. Еще в других вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой IgG крупного рогатого скота.

В конкретных вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой IgG1. В других вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой IgG2a. В других вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собаки, представляет собой IgG3. Еще в других вариантах осуществления антитело IgG млекопитающего, отличного от собак, представляет собой IgG4. В других вариантах осуществления слитый белок включает любой из вышеупомянутых антигенных пептидов и мальтоза-связывающий белок. Еще в других вариантах осуществления слитый белок содержит любой из вышеупомянутых антигенных пептидов и бета-галактозидазу. В других вариантах осуществления слитый белок содержит любой из вышеуказанных антигенных пептидов и глутатионстрансферазу. Еще в других вариантах осуществления слитый белок содержит любой из вышеупомянутых антигенных пептидов и тиоредоксин. В других вариантах осуществления слитый белок содержит любой из вышеуказанных антигенных пептидов и Gro EL. Еще в других вариантах осуществления слитый белок содержит любой из вышеупомянутых антигенных пептидов и NusA.

Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам (включая выделенные и/или рекомбинантные нуклеиновые кислоты), которые кодируют один или более выделенных иммуногенных и/или антигенных пептидов и/или слитых белков по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также относится к экспрессирующим векторам, содержащим такие выделенные нуклеиновые кислоты, а также к клеткам-хозяевам, которые содержат один или более экспрессирующих векторов по настоящему изобретению.

Фармацевтические композиции могут также содержать антигенные пептиды (включая выделенные антигенные пептиды) собачьего CTLA-4, слитые белки, содержащие антигенные пептиды собачьего CTLA-4 по настоящему изобретению, нуклеиновые кислоты (включая выделенные нуклеиновые кислоты), кодирующие антигенные фрагменты, и/или слитые белки по настоящему изобретению, экспрессирующие векторы, содержащие такие нуклеиновые кислоты или любую их комбинацию, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Кроме того, настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие антитела против собачьего CTLA-4 (включая канинизированные мышиные антитела против собачьего CTLA-4) или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению. Такие фармацевтические композиции можно использовать для лечения онкологического заболевания, инфекции или инфекционного заболевания, использовать в качестве вакцинного адъюванта и/или в способе повышения активности иммунной клетки, включающем введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции.

В конкретных вариантах осуществления такие фармацевтические композиции дополнительно содержат антитело против собачьего PD-1 (включая канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-1) или его антигенсвязывающий фрагмент. В более конкретных вариантах осуществления антитело против собачьего PD-1 представляет собой канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-1 или антигенсвязывающий фрагмент канинизированного мышиного антитела против собачьего PD-1.

В родственных вариантах осуществления такие фармацевтические композиции дополнительно содержат антитело против собачьего PDL1 (включая канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-L1) или его антигенсвязывающий фрагмент. В конкретных вариантах осуществления антитело против собачьего PD-L1 представляет собой канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-1 или антигенсвязывающий фрагмент канинизированного мышиного антитела против собачьего антитела против PD-1.

Соответственно, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат один, два, три или более из следующих элементов: антитело против собачьего PD-L1, антитело против собачьего PD-1, антитело против собачьего CTLA-4, антигенсвязывающий фрагмент антитела против собачьего PD-L1, антигенсвязывающий фрагмент антитела против собачьего PD-1 или антигенсвязывающий фрагмент антитела против собачьего CTLA-4. В конкретных вариантах осуществления такие антитела против собачьего белка (т.е. против собачьего PD-L1, PD-1 или CTLA-4) или их антигенсвязывающие фрагменты представляют собой мышиные антитела против собачьего белка. В других вариантах осуществления такие антитела против собачьего белка или их антигенсвязывающие фрагменты представляют собой канинизированные антитела против собачьего белка. В более конкретных вариантах осуществления антитела против собачьего белка или их антигенсвязывающие фрагменты представляют собой канинизированные мышиные антитела против собачьего белка.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам повышения активности иммунной клетки, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления способ используют при лечении онкологического заболевания. В других вариантах осуществления, способ используют при лечении инфекции или инфекционного заболевания. Еще в других вариантах осуществления, канинизированное антитело по настоящему изобретению или его антигенсвязывающий фрагмент применяют в качестве вакцинного адъюванта. В конкретных вариантах осуществления фармацевтическая композиция, содержащая канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент, может быть введена до, после или одновременно с канинизированным мышиным антителом против собачьего PD-1 или его антигенсвязывающим фрагментом и/или канинизированным мышиным антителом против собачьего PD-L1 или его антигенсвязывающим фрагментом.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут лучше понятны при ссылке на следующее краткое описание чертежей и на подробное описание.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фигуре 1 показана активность связывания шести антител с собачьим CTLA-4 (cCTLA-4). Соответственно, на Фигуре 1 изображен график количества индивидуальных собачьих антител против CTLA-4 в нг/мл (Ab Log), добавленных к собачьему CTLA-4 в ИФА, демонстрирующий связывающую активность антител с cCTLA-4. Индивидуальные антитела к собачьему CTLA-4 обозначены как 27G12, 110E3, 12B3, 45A9, 39A11 и 22A11.

На Фигуре 2 изображены антитела, блокирующие взаимодействие собачьего CD86 с CTLA-4. На Фигуре показан график количества индивидуальных собачьих антител против CTLA-4 в нг/мл (Ab Log), добавленных к cCTLA-4, чтобы препятствовать связыванию собачьих CTLA-4 с CD86. Индивидуальные антитела к собачьему CTLA-4 обозначены как 39A11, 27G12, 45A9, 12B3, 110E3 и 22A11. Как видно, антитела могут блокировать взаимодействие собачьего CD86 с CTLA-4.

На Фигуре 3 показаны антитела, блокирующие взаимодействие собачьего CD80 с CTLA-4. На фигуре показан график количества индивидуальных собачьих антител против CTLA-4 в нг/мл (Ab Log), добавленных к cCTLA-4, чтобы препятствовать связыванию собачьих CTLA-4 с CD80. Индивидуальные антитела к собачьему CTLA-4 обозначены как 39A11, 27G12, 45A9,12B3, 110E3 и 22A11. Как видно, антитела также могут блокировать взаимодействие собачьего CD80 с CTLA-4.

На Фигурах 4A-4G изображены антитела, связывающиеся с клетками CHO, которые экспрессируют собачий CTLA-4. Фиг.4A представляет собой Iso-контроль, Фиг.4B - 39A11, Фиг.4C - 27G12, Фиг.4D - 12B3, Фиг.4E - 45A9, Фиг.4F - 110E3, а Фиг.4G - 22A11. Как видно, антитела могут связываться с клетками CHO, экспрессирующими cCTLA-4.

На Фигуре 5 изображена гистограмма, которая количественно определяет три уменьшающихся концентрации индивидуальных собачьих антител CTLA-4, добавленных в 25 мкг/мл, 50 мкг/мл или 100 мкг/мл (Ab), которые активируют собачьи клетки PBMC в присутствии конканавалина A (CoA) для продуцирования IFNγ. Тестируемые антитела нанесены на абсциссу и помечены как моноклональные антитела CTLA-4 (mAb xCTLA-4). Как можно видеть, антитела могут активировать собачьи клетки PBMC для продуцирования IFNγ.

На Фигуре 6 изображен график количества моноклональных антител CTLA-4 (xCTLA-4; Ab Log нг/мл), которые обладают такой же реактивностью по отношению к собачьим CTLA-4, как и родительские антитела. Результаты ИФА показывают, что как 12B3, так и 39A11 были успешно канинизированы. Канинизированные c12B3L3H2 и L3H3 обладают такой же реактивностью в отношении cCTLA-4, что и родительское 12B3, а канинизированное c39A11L3H3 обладает такой же реактивностью в отношении cCTLA-4, что и родительское 39A11.

На Фигуре 7A-7B представлены связывающие эпитопы на cCTLA-4 для c12B3 (Фигура 7A) и c39A11 (Фигура 7B). Изображены две области собачьего белка CTLA-4, которые имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 132 и SEQ ID NO: 133, соответственно (см. Таблицу 8 ниже). Оба антитела связываются с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 136, которая содержит мотив MYPPPY (SEQ ID NO: 137), и с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 134. c12B3 также связывается с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 135.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

СОКРАЩЕНИЯ

В тексте подробного описания и в примерах изобретения используются следующие сокращения:

ADCC Антитело-зависимая клеточная цитотоксичность

CDC Комплемент-зависимая циотоксичность

CDR Определяющая комплементарность область в вариабельных областях иммуноглобулина, определенная с использованием системы нумерации Kabat

CHO клетки Яичники китайского хомячка

EC50 концентрация, приводящая к 50% эффективности или связывания

ИФА твердофазный Иммуноферментный Анализ

FR Каркасная область антитела: вариабельные области иммуноглобулина за исключением области CDR.

HRP Пероксидаза хрена

IFN интерферон

IC50 концентрация, приводящая к 50% ингибирования

IgG Иммуноглобулин G

Kabat Система выравнивания и нумерации иммуноглобулинов, впервые разработанная Elvin A. Kabat [Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]

mAb Моноклональное антитело (также Mab или MAb)

MES 2-(N-морфолин)этансульфокислота

MOA Механизм действия

NHS Сыворотка здорового человека

ПЦР Полимеразная цепная реакция

PK Фармакокинетика

SEB Энтеротоксин B стафилококка

TT Столбнячный анатоксин

V область Сегмент цепей IgG, последовательность которого является вариабельной между разными антителами. Он простирается до остатка Kabat 109 в легкой цепи и 113 в тяжелой цепи.

V_H Вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина

V_L Вариабельная область легкой цепи иммуноглобулина

VK Вариабельная область легкой цепи каппа иммуноглобулина

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Для того чтобы легче понять изобретение, ниже специально приведены определения некоторых технических и научных терминов. До тех пор пока специально не определено иное где-либо в настоящем описании, все остальные технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют общепринятые значения, понятные специалисту в области, к которой относится изобретение.

При использовании в настоящем описании, включая прилагаемую формулу изобретения, формы единственного числа включает их соответствующие множественные значения до тех пор, пока контекст ясно не указывает иное.

«CTLA-4» представляет собой сокращение от «белка 4, ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами», также известного как CD152 (кластер дифференцировки 152), который представляет собой рецептор белка, который функционирует как иммунная контрольная точка и подавляет иммунные ответы. Аминокислотная последовательность собачьего CTLA-4 представляет собой SEQ ID NO: 126. Настоящее изобретение также относится к канинизированным мышиным антителам к собачьему CTLA-4.

«Активация» при применении к клеткам или к рецепторам относится к активации или к обработке клетки или рецептора с помощью лиганда до тех пор, пока не указано иное с помощью контекста или в прямой форме. «Активация» может относиться к активации клеток, регулируемой внутренними механизмами, а также внешними факторами или факторами окружающей среды.

«Лиганд» охватывает природные и синтетические лиганды, например, цитокины, варианты цитокинов, аналоги, мутантные белки и связывающие соединение, выделенные из антител. «Лиганд» также охватывает низкомолекулярные соединения, например, пептидомиметики цитокинов и пептидомиметики антител.

«Активность» молекулы может описывать или относиться к связыванию молекулы с лигандом или с рецептором, к каталитической активности; к способности стимулировать экспрессию генов и клеточную сигнальную систему, к дифференцировке или созреванию; к антигенной активности, к модулированию активностей других молекул и тому подобное. «Активность» молекулы также может относиться к активности в модулировании или поддержании межклеточных взаимодействий, например, адгезии, или активности в поддержании структуры клетки, например, клеточных мембран или цитоскелета. «Активность» также может означать специфическую активность, например, [каталитическая активность]/[мг белка] или [иммунологическая активность]/[мг белка], концентрация в биологическом компартменте и т.п. «Активность» может относиться к модулированию компонентов врожденного или приобретенного иммунитета.

«Введение» и «лечение» применительно к животному, например собаке, клетке, ткани, органу или биологической жидкости, относятся к контакту экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического агента или композиции с животным, например, собакой, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. Обработка клетки охватывает контакт реагента с клеткой, а также контакт реагента с жидкостью, где жидкость находится в контакте с клеткой.

«Введение» и «лечение» также означают лечение in vitro и ex vivo, например, клетки, реагентом, диагностическим, связывающим соединением или другой клеткой.

Термин «объект» включает любой организм, предпочтительно животное, более предпочтительно млекопитающее (например, собаку, кошку или человека) и наиболее предпочтительно собаку.

«Лечить» или «лечение» означает введение терапевтического агента, такого как композиция, содержащая любое из антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, внутрь или экстракорпорально, например, собаке или пациенту, имеющему один или более симптомов заболевания, или подозрение на заболевание, в отношении которого агент обладает терапевтической активностью.

Обычно агент вводят в количестве, эффективном для облегчения и/или облегчения одного или более симптомов заболевания у подвергающегося лечению субъекта или популяции, либо путем индукции регресса или ингибирования прогрессирования такого симптома(симптомов) в любой клинически измеримой степени. Количество терапевтического агента, которое эффективно для облегчения какого-либо конкретного симптома заболевания (также называемое «терапевтически эффективное количество»), может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние болезни, возраст и масса пациента (например, собаки), и от способности фармацевтической композиции вызывать целевой ответ у пациента. Облегчение или улучшение симптома заболевания можно оценить с помощью любого клинического измерения, как правило, используемого ветеринарами или другими медицинскими работниками, для оценки состояния тяжести или прогрессии данного симптома. В то время как вариант осуществления настоящего изобретения (например, способ лечения или готовое изделие) может быть не эффективным в облегчении симптомов целевого заболевания у каждого пациента, он должен облегчать симптомы целевого заболевания у статистически значимого количества пациентов, как определено с помощью статистического теста, известного в данной области, такого как тест Стъюдента, критерий хиквадрат, U-тест Манна и Уитни, критерий Крускала-Уоллиса (H-тест), Критерий Джонкхиера-Терпстра и критерий Уилкоксона.

«Лечение», применительно к человеку, ветеринарии (например, к собаке) или объекту исследования, относится к терапевтическому лечению, а также к исследованиям и диагностическим применениям. «Лечение» применительно к человеку, ветеринарии (например, собаке) или объекту исследования, клетке, ткани или органу включает контакт антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, например, с собакой или другим животным, клеткой, тканью, физиологическим компартментом или физиологической жидкостью.

Используемый в настоящем описании термин «собака» включает всех домашних собак, семейство волчьих или семейство псовых до тех пор, пока не указано иное.

Используемый в настоящем описании термин «кошка» относится к любому члену семейства кошачьих. Члены этого семейства включают диких, зоопарковских и домашних представителей, включая домашних кошек, чистопородных и/или беспородных домашних кошек, выставочных кошек, лабораторных кошек, клонированных кошек и диких или одичавших кошек.

Используемый в настоящем описании термин «собачий каркас» относится к аминокислотной последовательности тяжелой цепи и легкой цепи собачьего антитела, кроме остатков гипервариабельной области, определенных здесь как остатки CDR. Что касается канинизированного антитела, в большинстве вариантов осуществления аминокислотные последовательности нативных собачьих CDR заменены соответствующими чужеродными CDR (например, из мышиного антитела) в обеих цепях. Необязательно тяжелая и/или легкая цепи собачьего антитела могут содержать некоторые чужеродные остатки, не относящиеся к CDR, например, для сохранения конформации чужеродных CDR внутри собачьего антитела и/или для модификации функции Fc, как проиллюстрировано ниже.

Было обнаружено, что собачий CTLA-4 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126 (включая сигнальную последовательность). В конкретном варианте осуществления собачий CTLA-4 кодируется нуклеиновой кислотой, которая содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 125. Последовательности собачьего CTLA-4 могут отличаться, например, наличием консервативных вариаций в неконсервативных областях, но собачий CTLA-4 будет иметь по существу ту же биологическую функцию, что и собачий CTLA-4, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126.

Используемый в настоящем описании термин «замена аминокислотного остатка» другим аминокислотным остатком в аминокислотной последовательности антитела, например, эквивалентен «замене аминокислотного остатка» другим аминокислотным остатком и означает, что конкретный аминокислотный остаток в конкретном положении в аминокислотной последовательности был заменен (или заменен) другим аминокислотным остатком. Такие замены могут быть специально разработаны, т.е. целенаправленные замены аланина серином в конкретном положении в аминокислотной последовательности, например, с помощью технологии рекомбинантной ДНК. Альтернативно, конкретный аминокислотный остаток или цепочка аминокислотных остатков антитела могут быть заменены одним или более аминокислотными остатками с помощью более естественных процессов отбора, например, на основе способности антитела, продуцируемого клеткой, связываться с заданной областью на этом антигене, например антигене, содержащем эпитоп или его часть, и/или антитело, содержащее конкретную CDR, которая сохраняет ту же каноническую структуру, что и заменяемая CDR. Такие замены/замены могут привести к получению «вариантов» CDR и/или вариантов антител.

Костимулирующие сигнальные пути приводят к развитию иммунных ответов и, как было показано, опосредуются взаимодействием CD28 на поверхности Т-клеток и CD80 (также известного как B7.1) и CD86 (также известного как B7.2). CTLA-4 связывается как с CD80, так и с CD86 с гораздо более высокой аффинностью, чем CD28, и, таким образом, действует как ингибирующий рецептор, который жизненно важен для подавления иммунного ответа. Действительно, механизм, с помощью которого CTLA-4 опосредует свои иммунные ингибирующие функции, связан с его способностью действовать в качестве конкурентного ингибитора взаимодействия CD28 с CD80 и CD86. Соответственно, в настоящем изобретении описано получение и характеристика моноклональных антител, которые блокируют связывание собачьего CD80 и собачьего CD86 с CTLA-4 и, таким образом, разрешает костимулирующую передачу сигналов за счет связывания собачьего CD28 с собачьими CD80 и CD86. Таким образом, эти антитела могут применяться для лечения онкологического заболевания, а также других заболеваний у домашних животных, как описано в настоящем описании.

Конкретная аминокислотная последовательность собачьего CTLA-4 обычно по меньшей мере на 90% идентична собачьему CTLA-4, содержащему аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, за исключением сигнальной последовательности. В некоторых случаях собачий CTLA-4 может быть по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96%, 97%, 98% или на 99% идентичен собачьему CTLA-4, содержащему аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, за исключением сигнальной последовательности. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность собачьего CTLA-4 будет демонстрировать не более чем 10 аминокислотных отличий от собачьего CTLA-4, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, за исключением сигнальной последовательности. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность собачьего CTLA-4 может отображать не более чем 5 или даже не более чем 4, 3, 2 или 1 аминокислотных отличий от собачьего CTLA-4, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, за исключением сигнальной последовательности. Процент идентичности может определяться, как описано в настоящем описании ниже.

Термин «иммунный ответ» относится к действию, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитарных клеток, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых указанными выше клетками или печенью (включая антитела, цитокины и комплемент), что приводит к селективному повреждению, разрушению или удалению из организма млекопитающего (например, тела собаки) опухолевых клеток, клеток или тканей, инфицированных патогенами, или инвазивных патогенов.

Антитела против собачьего CTLA-4

Настоящее изобретение относится к выделенным антителам (в частности, мышиным антителам против собачьего CTLA-4 и их канинизированным антителам) или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с собачьим CTLA-4, и к применениям таких антител или их фрагментов. В конкретных вариантах осуществления предложены CDR из мышиных антител против собачьих CTLA-4, которые, как было показано, как и связываются с собачьим CTLA-4, так и блокируют связывание собачьего CTLA-4 с одним или обоими его лигандами, собачьим CD86 или CD80. Эти CDR могут быть вставлены в модифицированный собачий каркас собачьего антитела для создания канинизированного мышиного антитела против собачьего CTLA-4.

Используемый в настоящем описании термин «антитело против собачьего CTLA-4» относится к антителу, которое было индуцировано против собачьего CTLA-4 (например, у млекопитающего, такого как мышь или кролик), и которое специфически связывается с собачьим CTLA-4. Антитело, которое «специфически связывается с собачьим CTLA-4» и, в частности, с собачьим CTLA-4, или антитело, которое «специфически связывается с полипептидом, содержащим аминокислотную последовательность собачьего CTLA-4», представляет собой антитело, которое проявляет преимущественное связывание с собачьим CTLA-4 по сравнению с другие собачьи антигенами, но эта специфичность не требует абсолютной специфичности связывания. Антитело против собачьего CTLA-4 считается «специфическим» для собачьего CTLA-4, если его связывание является определяющим для присутствия собачьего CTLA-4 в образце, который ограничен собачьими белками, или если оно способно изменять активность собачьего CTLA-4 без чрезмерного вмешательства в активность других молекул в образце собаки, например без получения нежелательных результатов, таких как ложные положительные результаты в диагностическом контексте или побочные эффекты в терапевтическом контексте. Степень специфичности, необходимая для антитела против собачьего CTLA-4, может зависеть от предполагаемого использования антитела и, в любом случае, определяется его пригодностью для использования по назначению. Антитело или связывающее соединение, полученное из антигенсвязывающего сайта антитела, рассматриваемого способа связывается со своим антигеном или его вариантом или мутеином с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза больше, предпочтительно по меньшей мере в десять раз больше, более предпочтительно, по меньшей мере, в 20 раз больше, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере, в 100 раз больше, чем аффинность к любому другому собачьему антигену.

В данном контексте считается, что антитело специфически связывается с полипептидом, содержащим данную антигенную последовательность (в данном случае часть аминокислотной последовательности собачьего CTLA-4), если оно связывается с полипептидами, составляющими часть аминокислотной последовательности собачьего CTLA-4, но не связывается с другими собачьими белками, лишенными этой части последовательности собачьего CTLA-4. Например, антитело, которое специфически связывается с полипептидом, содержащим собачий CTLA-4, может связываться с меченной FLAG® формой собачьего CTLA-4, но не будет связываться с другими собачьими белками, меченными FLAG®. Антитело или связывающее соединение, происходящее из антигенсвязывающего сайта антитела, связывается со своим собачьим антигеном или его вариантом или мутеином «со специфичностью», когда оно имеет аффинность к этому собачьему антигену или его варианту или мутеину, которая по меньшей мере в десять раз больше, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз больше и даже более предпочтительно по меньшей мере в 100 раз больше, чем его аффинность к любому другому протестированному собачьему антигену.

Используемый в настоящем описании термин «антитело» относится к любой форме антитела, которая проявляет желаемую биологическую активность. Таким образом, он используется в самом широком смысле и конкретно охватывает, но не ограничивается этим, моноклональные антитела (включая полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), канинизированные антитела, полностью собачьи антитела, химерные антитела и камелизированные однодоменные антитела. «Родительские антитела» представляют собой антитела, полученные путем воздействия на иммунную систему антигена перед модификацией антител для предполагаемого использования, такого как канинизация антитела для использования в качестве терапевтического антитела для собак.

В контексте настоящего описания, если не указано иное, «фрагмент антитела» или «антигенсвязывающий фрагмент» относится к антигенсвязывающим фрагментам антител, то есть фрагментам антител, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном, связанным с полноразмерным антителом, например фрагменты, которые сохраняют одну или более областей CDR. Примеры антигенсвязывающих фрагментов включают в частности Fab-, Fab'-, F(ab')2-, и Fv-фрагменты; диантитела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител, например, sc-Fv; наноантитела и полиспецифичные антитела, образованные из фрагментов антител.

«Fab-фрагмент» состоит из одной легкой цепи, а также CH1 и вариабельной области одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовывать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи. «Fab-фрагмент» может быть продуктом расщепления антитела папаином.

Область «кристаллизующегося фрагмента» («Fc») содержит два фрагмента тяжелой цепи, содержащие домены CH3 и CH2 антитела. Два фрагмента тяжелой цепи удерживаются вместе двумя или более дисульфидными связями и гидрофобными взаимодействиями доменов CH3.

«Фрагмент Fab'» содержит одну легкую цепь и часть или фрагмент одной тяжелой цепи, которая содержит домен V_H и домен CH1, а также область между доменами CH1 и CH2, так что межцепочечная дисульфидная связь может быть образована между две тяжелые цепи двух фрагментов Fab' с образованием молекулы F(ab')2.

«Фрагмент F(ab')2» содержит две легкие цепи и две тяжелые цепи, содержащие часть константной области между доменами CH1 и CH2, так что между двумя тяжелыми цепями образуется межцепочечная дисульфидная связь. Таким образом, фрагмент F(ab')2 состоит из двух фрагментов Fab', которые удерживаются вместе дисульфидной связью между двумя тяжелыми цепями. «Фрагмент F(ab')2» может быть продуктом пепсинового расщепления антитела.

«Область Fv» содержит вариабельные области как тяжелой, так и легкой цепей, но не имеет константных областей.

Термин «одноцепочечное Fv» или «scFv» антитело относится к фрагментам антитела, содержащим домены V_H и V_L антитела, где эти домены присутствуют в одной полипептидной цепи. Как правило, полипептид Fv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами V_H и V_L, который позволяет scFv образовывать желаемую структуру для связывания антигена. [См. Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113 Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp.269-315 (1994); WO 88/01649; и US 4946778 и US 5260203].

В данном контексте, антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент, которое «блокирует», «является блокирующим» или «блокирует связывание» собачьего CTLA-4 с его партнером по связыванию (лигандом), например собачьим CD80 или собачьим CD 86, представляет собой антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент, который блокирует (частично или полностью) связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86 и/или CD80, как определено в стандартных анализах связывания (например, BIACore®, ИФА или проточной цитометрии). Такое «блокирование» проиллюстрировано в Примере 4 ниже с использованием анализа блокирования на основе ИФА.

Используемый в настоящем описании термин «каноническая структура» относится к локальной конформации, которая может быть принята каждой из гипервариабельных областей тяжелой и легкой цепи антитела в пределах каркасной области, в которой они находятся. Для каждой гипервариабельной области существует небольшое количество канонических структур (обычно обозначаемых простыми целыми числами, такими как 1 или 2 и т.д.), которые можно предсказать с большой точностью по аминокислотным последовательностям соответствующей гипервариабельной области [особенно в контексте аминокислотной последовательности его каркаса для соответствующих вариабельных доменов против собачьего CTLA-4]. Эти канонические структуры могут быть определяющими в отношении того, приведет ли модификация аминокислотной последовательности данной CDR к сохранению или потере способности связываться с его антигенным партнером по связыванию [См. Chothia and Lesk, Canonical Structures for the hypervariable regions of immunoglobulins, J. Mol. Biol. 196:901-917(1987); Chothia et al., Conformation of immunoglobulin hypervaribale regions, Nature, 34:877-883(1989); and Al-Lazikani et al., Standard Conformations for the canonical structures of immunoglobulins, J. Mol. Biol. 273: 927-948 (1997)].

«Доменное антитело» представляет собой иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина, содержащий только вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи. В некоторых случаях две или более областей V_H ковалентно соединяются с пептидным линкером для создания двухвалентного доменного антитела. Две области V_H двухвалентного доменного антитела могут нацеливаться на один и тот же или разные антигены.

«Двухвалентное антитело» включает два антигенсвязывающих сайта. В некоторых случаях два сайта связывания имеют одинаковую антигенную специфичность. Однако двухвалентные антитела могут быть биспецифичными (см. ниже).

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения моноклональные антитела также включают камелизированные однодоменные антитела. [См., например, Muyldermans et al., Trends Biochem. Sci. 26:230 (2001); Reichmann et al.,J. Immunol. Methods 231:25 (1999); WO 94/04678; WO 94/25591; U.S. 6,005,079]. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к однодоменным антителам, содержащим два домена V_H с такими модификациями, что образуются однодоменные антитела.

Используемый в настоящем описании термин «диантитела» относится к небольшим фрагментам антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, причем эти фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), связанный с вариабельным доменом легкой цепи (V_L) в той же полипептидной цепи (V_H-V_L или V_L-V_H). При использовании линкера, который является слишком коротким чтобы позволить спаривание между двумя вариабельными доменами на одной и той же цепи, домены диантитела вынуждены спариваться с комплементарными доменами связывания другой цепи и создают два антигенсвязывающих сайта. [См. EP 0404097 B1; WO 93/11161; и Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]. Для обзора сконструированных вариантов антител [обычно см. Holliger and Hudson Nat. Biotechnol. 23: 1126-1136 (2005)].

Обычно антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению сохраняет по меньшей мере 10% своей активности связывания с собачьим CTLA-4 (по сравнению с исходным антителом), когда эта активность выражается на молярной основе. Предпочтительно антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению сохраняет по меньшей мере 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100% или более аффинности связывания собачьего CTLA-4 в качестве родительского антитела. Также предполагается, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может включать консервативные или неконсервативные аминокислотные замены (называемые «консервативными вариантами» или «функционально консервативными вариантами» антитела), которые существенно не изменяют его биологическую активность.

«Выделенное антитело» относится к статусу очистки и в таком контексте означает молекулу, которая по существу свободна от других биологических молекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другой материал, такой как клеточный дебрис и ростовая среда. Как правило, термин «выделенный» не предназначен для обозначения полного отсутствия такого материала или отсутствия воды, буферов или солей, если только они не присутствуют в количествах, которые существенно мешают экспериментальному или терапевтическому применению связывающего соединения, как описано здесь.

В данном контексте «химерное антитело» представляет собой антитело, имеющее вариабельный домен из первого антитела и константный домен из второго антитела, где первое и второе антитело относятся к разным видам. [U.S. 4816567; и Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)]. Обычно вариабельные домены получают из антитела от экспериментального животного («родительское антитело»), такого как грызун, а последовательности константных доменов получают из антител животного-объекта, например человека или собаки, так что полученное химерное антитело будет с меньшей вероятностью вызвать неблагоприятный иммунный ответ у человека или собаки, соответственно, чем родительское (например, грызуна) антитело.

Используемый в настоящем описании термин «канинизированное антитело» относится к формам антител, которые содержат последовательности как собачьих, так и не собачьих (например, мышиных) антител. В общем, канинизированное антитело будет включать практически все из, по меньшей мере, одного или более обычно двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют таковым у иммуноглобулина, отличного от собачьего (например, содержащего 6 CDR мышиного антитела против собачьего CTLA-4, как проиллюстрировано ниже), и все или по существу все каркасные области (FR) (и обычно весь или по существу весь оставшийся каркас) являются таковыми из последовательности собачьего иммуноглобулина. Как проиллюстрировано здесь, канинизированное антитело включает как три CDR тяжелой цепи, так и три CDR легкой цепи из мышиного антитела против собачьего CTLA-4 вместе с собачьим каркасом или модифицированным собачьим каркасом. Модифицированный собачий каркас включает одну или более замен аминокислот, как проиллюстрировано здесь, которые дополнительно оптимизируют эффективность канинизированного антитела, например, для увеличения его связывания с собачьим CTLA-4 и/или его способности блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьими CD86 и/или CD80.

Термин «полностью собачье антитело» относится к антителу, которое содержит белковые последовательности только собачьего иммуноглобулина. Полностью собачьи антитела могут содержать мышиные углеводные цепи, если они продуцируются у мыши, в клетке мыши или в гибридоме, полученной из клетки мыши. Точно так же «мышиное антитело» относится к антителу, которое содержит только последовательности иммуноглобулина мыши. Альтернативно, полностью собачье антитело может содержать крысиные углеводные цепи, если оно продуцируется крысой, крысиной клеткой или гибридомой, полученной из крысиной клетки. Аналогичным образом, «крысиное антитело» относится к антителу, которое содержит только последовательности иммуноглобулина крысы.

Существует четыре известных подтипа тяжелой цепи IgG собачьего IgG, и они называются IgG-A, IgG-B, IgG-C и IgG-D. Два известных подтипа легкой цепи называются лямбда и каппа.

Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепи образуют сайт связывания антитела. Таким образом, вообще интактное антитело содержит два сайта связывания. За исключением бифункциональных или биспецифических антител два сайта связывания, в основном, одинаковые.

Как правило, вариабельные домены обеих, тяжелой и легкой, цепей содержат три гипервариабельные области, также называемые гипервариабельными областями (CDR), локализованными внутри относительно консервативных каркасных областей (FR). CDR обычно выравниваются по каркасным областям, что позволяет связываться со специфическим эпитопом. Вообще, от N-конца к C-концу вариабельные домены обеих цепей, легкой и тяжелой, содержат FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Распределение аминокислот в каждом домене, как правило, согласуется с определениями Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat, Adv. Prot. Chem. 32:1-75 (1978); Kabat, et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Chothia, et al., J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987) или Chothia, et al., Nature 342: 878-883 (1989)].

Используемый в настоящем описании термин «гипервариабельная область» относится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за антигенное связывание. Гипервариабельная область содержит аминокислотные остатки из «определяющей комплементарность области» или «CDR» (т.е. CDRL1, CDRL2 и CDRL3 в вариабельном домене легкой цепи и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 в вариабельном домене тяжелой цепи). [См. Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), для определения областей CDR антитела по последовательности; см. также Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987), определение областей CDR антитела по структуре]. При использовании в настоящем описании, термин «каркасные» или «FR» остатки относится к таким остаткам вариабельных доменов, отличным от остатков гипервариабельных областей, определенных в настоящем описании как CDR-остатки.

В конкретных вариантах осуществления изобретения, помимо связывания и активации собачьих иммунных клеток, собачье или канинизированное антитело против CTLA-4 оптимально имеет два атрибута:

1. Оно лишено эффекторных функций, таких как антитело-зависимая цитотоксичность (ADCC) и комплемент-зависимая цитотоксичность (CDC), и

2. легко очищается в больших масштабах с использованием стандартных промышленных технологий, таких как хроматография на протеине А.

Ни один из природных изотипов собачьего IgG не удовлетворяет обоим критериям. Например, IgG-B может очищаться с использованием протеина A, но при этом оно имеет высокий уровень ADCC-активности. С другой стороны, IgG-A слабо связывается с протеином A, но также проявляет активность ADCC. Более того, ни IgG-C, ни IgG-D нельзя очистить на колонках с протеином А, хотя IgG-D не проявляет активности ADCC. (IgG-C имеет значительную ADCC-активность). Одним из способов решения этих проблем в настоящем изобретении является предложение модифицированных собачьих антител IgG-B, специфичных к CTLA-4, которые лишены эффекторных функций, таких как ADCC, и которые могут быть легко очищены с использованием стандартной хроматографии на основе протеина A.

В альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения собачьи антитела IgG-B или IgG-C, специфичные к CTLA-4, намеренно не модифицируются для удаления/существенного уменьшения эффекторных функций, таких как ADCC, и, следовательно, сохраняют эффекторные функции, такие как ADCC.

«Гомология» относится к сходству между двумя полинуклеотидными последовательностями или между двумя полипептидными последовательностями, когда они оптимально выравнены. Когда положение в обеих из двух сравниваемых последовательностей занято одним и тем же основанием или субъединицей мономера аминокислоты, например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то молекулы гомологичны в этом положении. Процент гомологии представляет собой количество гомологичных положений, общих для двух последовательностей, деленное на общее количество сравниваемых положений × 100. Например, если 6 из 10 положений в двух последовательностях совпадают или гомологичны, когда последовательности оптимально выровнены, то две последовательности гомологичны на 60%. Как правило, сравнение осуществляют, когда две последовательности выровнены с получением максимального процента гомологии.

«Выделенная молекула нуклеиновой кислоты» означает ДНК или РНК геномного происхождения, мРНК-, кДНК- или синтетического происхождения, или некоторую их комбинацию, которая не связана со всем или частью полинуклеотида, в котором выделенный полинуклеотид встречается в природе или связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе. Для целей настоящего описания, следует понимать, что «молекула нуклеиновой кислоты, содержащая» конкретную нуклеотидную пследовательность, не охватывает интактные хромосомы. Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, «содержащие» конкретные последовательности нуклеиновых кислот, могут включать дополнительно к конкретным последовательностям кодирующие последовательности до десяти или даже до двадцати или более других белков или их частей, или их фрагментов, или могут включать функционально связанные регуляторные последовательности, которые контролируют экспрессию кодирующей области упомянутых последовательностей нуклеиновых кислот, и/или могут включать векторные последовательности.

Фраза «контрольные последовательности» относится к ДНК-последовательностям, необходимым для экспрессии функционально связанной кодирующей области в конкретном организме-хозяине. Контрольные последовательности, которые подходят для прокариот, например, включают промотор, необязательно последовательность оператора и сайт связывания рибосом. Известно, что эукариотические клетки используют промоторы, сигналы полиаденилирования и энхансеры.

Последовательность нуклеиновой кислоты является «функционально связанной», если она находится в функциональном взаимодействии с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, ДНК для пред-последовательности или секреторного лидера функционально связана с ДНК для полипептида, если она экспрессируется как пред-белок, который участвует в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он влияет на транскрипцию последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью, если он расположен так, чтобы облегчить трансляцию. Обычно «функционально связанный» означает, что связываемые последовательности ДНК являются смежными, а в случае секреторного лидера - смежными и находятся в рамке считывания. Однако энхансеры не должны быть непрерывными. Связывание осуществляется лигированием по подходящим сайтам рестрикции. Если таких сайтов не существует, синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры используют в соответствии с обычной практикой.

При использовании в настоящем описании выражения «клетка», «клеточная линия» и «клеточная культура» используются взаимозаменяемо и все такие обозначения включают потомство. Таким образом, слова «трансформанты» и «трансформированные клетки» включают первичную рассматриваемую клетку и полученные из нее культуры без учета количества переносов. Также понятно, что не все потомство будет иметь точно идентичное содержание ДНК, что связано с преднамеренными или со спонтанными мутациями. Включено мутантное потомство, которое обладает такой же функцией или биологической активностью, которые выявляются при скрининге в исходно трансформированной клетке. В случае, где подразумеваются различные обозначения, это будет понятно из контекста.

Используемый в настоящем описании термин «зародышевая последовательность» относится к нереаранжированным ДНК-последовательностям иммуноглобулинов. Можно использовать любой подходящий источник нереаранжированных последовательностей иммуноглобулинов. Последовательности зародышевой линии человека могут быть получены, например, из баз данных зародышевой линии JOINSOLVER® на веб-сайте Национального института артрита и скелетно-мышечных и кожных заболеваний Национального института здравоохранения США. Последовательности зародышевой линии мыши могут быть получены, например, как описано в Giudicelli et al. [Nucleic Acids Res. 33: D256-D261 (2005)].

Свойства мышиных антител против собачьего CTLA-4 и

канинизированных мышиных антител против собачьего CTLA-4

Настоящее изобретение относится к выделенным мышиным антителам против собачьего CTLA-4 и их канинизированным антителам, способам применения этих антител или их антигенсвязывающих фрагментов при лечении заболевания, например, лечения онкологического заболевания у собак. У собак имеется четыре тяжелые цепи IgG, обозначаемые как A, B, C и D. Эти тяжелые цепи представляют четыре различных подкласса IgG собаки, которые обозначаются как IgGA, IgGB, IgGC и IgGD. Каждая из двух тяжелых цепей состоит из одного вариабельного домена (V_H) и трех константных доменов, называемых СН-1, СН-2 и СН-3. Домен CH-1 соединен с доменом CH-2 через аминокислотную последовательность, называемую «шарнир» или, альтернативно, «шарнирная область».

ДНК и аминокислотные последовательности этих четырех тяжелых цепей были впервые идентифицированы Tang et al. [Vet. Immunol. Immunopathol. 80: 259-270 (2001)]. Последовательности аминокислот и ДНК для этих тяжелых цепей также доступны в базах данных GenBank. Например, аминокислотная последовательность тяжелой цепи IgGA имеет номер доступа AAL35301.1, IgGB имеет номер доступа AAL35302.1, IgGC имеет номер доступа AAL35303.1, а IgGD имеет номер доступа (AAL35304.1). Собачьи антитела также содержат два типа легких цепей, каппа и лямбда. ДНК и аминокислотную последовательность этих легких цепей можно получить из баз данных GenBank. Например, аминокислотная последовательность легкой цепи каппа имеет номер доступа ABY 57289.1, а легкая цепь лямбда имеет номер доступа ABY 55569.1.

В настоящем изобретении аминокислотная последовательность для каждого из четырех Fc-фрагментов собачьего IgG основана на идентифицированной границе доменов CH1 и CH2, как определено Tang et al, выше. Канизированные мышиные антитела против собачьего CTLA-4, которые связываются с собачьим CTLA-4, включают, но не ограничиваются этим: антитела, которые содержат тяжелые цепи собачьих IgG-A, IgG-B, IgG-C и IgG-D и/или собачьи легкие цепи каппа вместе с CDR мышиных антител против собачьего CTLA-4. Соответственно, в настоящем изобретении предложены выделенные мышиные антитела против собачьего CTLA-4 и/или канинизированные мышиные антитела против собачьего CTLA-4 или их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с собачьим CTLA-4 и блокируют связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86 и/или собачьим CD80.

Настоящее изобретение также относится к полноразмерным собачьим тяжелым цепям, которые могут быть сопоставлены с соответствующими легкими цепями для получения канинизированного антитела. Соответственно, настоящее изобретение дополнительно относится к канинизированным мышиным антителам против собачьего антигена (включая выделенные мышиные антитела против собачьего CTLA-4) и к способам применения этих антител или их антигенсвязывающих фрагментов при лечении заболевания, например, лечения онкологического заболевания у собак.

Настоящее изобретение также относится к канинизированным мышиным антителам против собачьего CTLA-4, которые содержат кристаллизующуюся область собачьего фрагмента (cFc-область), в которой cFc был генетически модифицирован для усиления, уменьшения или устранения одной или более эффекторных функций. В одном из аспектов настоящего изобретения генетически модифицированная cFc снижает или устраняет одну или более эффекторных функций. В другом аспекте изобретения генетически модифицированная cFc усиливает одну или более эффекторных функций. В некоторых вариантах осуществления генетически модифицированная cFc-область представляет собой генетически модифицированную Fc-область собачьего IgGB. В другом таком варианте осуществления генетически модифицированная cFc-область представляет собой генетически модифицированную Fc-область собачьего IgGC. В конкретном варианте осуществления эффекторная функция представляет собой антителозависимую цитотоксичность (ADCC), которая усиливается, снижается или устраняется. В другом варианте осуществления эффекторная функция представляет собой комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC), которая усиливается, снижается или устраняется. Еще в одном варианте осуществления cFc-область была генетически модифицирована для усиления, уменьшения или устранения как ADCC, так и CDC.

Для создания вариантов собачьего IgG, лишенных эффекторных функций, был создан ряд мутантных тяжелых цепей собачьего IgG. Эти варианты могут включать одну или более из следующих одиночных или комбинированных замен в Fc-части аминокислотной последовательности тяжелой цепи: P4A, D31A, N63A, G64P, T65A, A93G и P95A. Варианты тяжелых цепей (т.е. содержащие такие аминокислотные замены) клонировали в экспрессирующие плазмиды и трансфецировали в клетки НЕК 293 плазмиду, содержащую ген, кодирующий легкую цепь. Интактные антитела, экспрессированные и очищенные из клеток HEK 293, оценивали на связывание с FcγRI и C1q, чтобы оценить их потенциал для опосредования иммунных эффекторных функций. [См. Патент США 10106607 B2, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме].

Настоящее изобретение также относится к модифицированным собачьим IgGD, которые вместо его естественного шарнирного участка IgGD содержат шарнирную область из:

IgGA: fnecrctdtppcpvpep, SEQ ID NO: 128;

IgGB: pkrengrvprppdcpkcpapem, SEQ ID NO: 129; или

IgGC: akececkcncnncpcpgcgl, SEQ ID NO: 130.

Альтернативно, шарнирная область IgGD может быть генетически модифицирована путем замены остатка серина остатком пролина, то есть pkestckci P pcpvpes, SEQ ID NO: 131 (с остатком пролина (P) подчеркнутым и выделенным жирным шрифтом вместо встречающегося в природе остатка серина). Такие модификации могут привести к тому, что собачий IgGD лишится обмена Fab-плечей. Модифицированные собачьи IgGD могут быть сконструированы с использованием стандартных методов технологии рекомбинантной ДНК [например, Maniatis et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (1982)]. Чтобы сконструировать эти варианты, нуклеиновые кислоты, кодирующие аминокислотную последовательность собачьего IgGD, можно модифицировать так, чтобы она кодировала модифицированные IgGD. Затем модифицированные последовательности нуклеиновых кислот клонируют в экспрессирующие плазмиды для экспрессии белка.

Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с собачьим CTLA-4, может содержать три, четыре, пять или шесть определяющих комплементарность областей (CDR) мышиного антитела против собачьего белка, как описано в настоящем описании. Три, четыре, пять или шесть CDR могут быть независимо выбраны из последовательностей CDR, представленных ниже. В дополнительном варианте осуществления выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с собачьим CTLA-4, содержит легкую цепь каппа или лямбда собачьего антитела, содержащую CDR-1, CDR-2 и/или CDR3 мышиной легкой цепи, и IgG тяжелой цепи собачьего антитела, содержащий CDR-1, CDR-2 и/или CDR3 мышиной тяжелой цепи.

В других вариантах осуществления изобретение относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфически связываются с собачьим CTLA-4 и имеют легкие цепи каппа или лямбда собачьего антитела, содержащие заданный набор из трех CDR, имеющих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 92, 94 и 96 для V_LCDR-1, V_LCDR-2 и V_LCDR-3, соответственно, и IgG тяжелой цепи собачьего антитела, содержащие данный набор из трех CDR, имеющих по меньшей мере 80% 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 86, 88 и 90 для V_HCDR-1, V_HCDR-2 и V_HCDR-3, соответственно; или легкие цепи каппа или лямбда собачьего антитела, содержащие заданный набор из трех CDR, имеющих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 104, 106, и 108, для V_LCDR-1, V_LCDR-2 и V_LCDR-3, соответственно, и IgG тяжелой цепи собачьего антитела, содержащего набор различных CDR, имеющих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 98, 100 и 102 для V_HCDR-1, V_HCDR-2 и V_HCDR-3, соответственно; или легкие цепи каппа или лямбда собачьего антитела, содержащие заданный набор из трех CDR, содержащих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 117, 94 и 96, для V_LCDR-1, V_LCDR-2 и V_LCDR-3, соответственно, и IgG тяжелой цепи собачьего антитела, содержащего набор различных CDR, имеющих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 86, 88 и 113 для V_HCDR-1, V_HCDR-2 и V_HCDR-3, соответственно; легкие цепи каппа или лямбда собачьего антитела, содержащие заданный набор из трех CDR, имеющих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 119, 122 и 96 для V_LCDR-1, V_LCDR-2 и V_LCDR-3, соответственно, и IgG тяжелой цепи собачьего антитела, содержащего набор различных CDR, имеющих по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 86, 88 и 115 для V_HCDR-1, V_HCDR-2 и V_HCDR-3, соответственно; проявляя при этом целевые связывающие и функциональные свойства. В другом варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит собачий каркас, содержащий комбинацию последовательности тяжелой цепи IgG с легкой цепью каппа или лямбда, имеющей один или более из вышеупомянутых наборов из трех CDR легкой цепи и трех CDR тяжелой цепи, содержащих 0, 1, 2, 3, 4 или 5 консервативных или неконсервативных аминокислотных замен, все еще демонстрируя целевые связывающие и функциональные свойства.

Идентичность последовательности относится к степени, в которой аминокислоты двух полипептидов являются аналогичными в эквивалентных положениях, при оптимальном выравнивании двух последовательностей. В данном контексте одна аминокислотная последовательность на 100% «идентична» второй аминокислотной последовательности, если аминокислотные остатки обеих последовательностей идентичны. Соответственно, аминокислотная последовательность на 50% «идентична» второй аминокислотной последовательности, когда 50% аминокислотных остатков двух аминокислотных последовательностей идентичны. Сравнение последовательностей выполняется по непрерывному блоку аминокислотных остатков, содержащимся в данном белке, например, белке или части сравниваемого полипептида. В конкретных вариантах осуществления учитываются выбранные делеции или вставки, которые в противном случае могли бы изменить соответствие между двумя аминокислотными последовательностями.

Сходство последовательностей включает идентичные остатки и неидентичные биохимически родственные аминокислоты. Обсуждаются биохимически родственные аминокислоты, которые обладают схожими свойствами и могут быть взаимозаменяемыми.

«Консервативно модифицированные варианты» или «консервативная замена» относится к заменам аминокислот в белке другими аминокислотами, имеющими аналогичные характеристики (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформацию и жесткость основной цепи и т.д.), таким образом, что изменения часто могут быть сделаны без изменения биологической активности белка. Специалисты в данной области признают, что, как правило, замены отдельных аминокислот в несущественных областях полипептида существенно не изменяют биологическую активность [см., например, Watson et al., Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224 (4th Ed.; 1987)]. Кроме того, замены структурно или функционально сходных аминокислот с меньшей вероятностью нарушают биологическую активность. Типичные консервативные замены представлены непосредственно в таблице A ниже.

Функционально-консервативные варианты антител по изобретению также рассматриваются настоящим изобретением. «Функционально-консервативные варианты» в контексте настоящего описания относятся к антителам или фрагментам, в которых один или более аминокислотных остатков был изменен без изменения целевого свойства, такого как аффинность к антигену и/или специфичность. Такие варианты включают, но не ограничиваются ими, замену аминокислоты на аминокислоту, имеющую аналогичные свойства, такие как консервативные замены аминокислот в Таблице А выше.

Нуклеиновые Кислоты

Настоящее изобретение дополнительно включает нуклеиновые кислоты, кодирующие иммуноглобулиновые цепи мышиных антител против собачьего CTLA-4 и/или канинизированных мышиных антител против собачьего CTLA-4 и их антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании (см., например, примеры ниже).

В настоящее изобретение также включены нуклеиновые кислоты, которые кодируют полипептиды иммуноглобулинов, содержащие аминокислотные последовательности, которые идентичны по меньшей мере примерно на 70%, предпочтительно идентичны по меньшей мере примерно на 80%, более предпочтительно идентичны по меньшей мере примерно на 90% и наиболее предпочтительно идентичны по меньшей мере примерно на 95% (например, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) аминокислотным последовательностям канинизированных антител, представленных в настоящем описании, когда сравнение выполняется с помощью алгоритма BLAST, в котором параметры алгоритма выбраны, чтобы получить наибольшее совпадение между соответствующими последовательностями по всей длине соответствующих контрольных последовательностей. Настоящее изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, которые кодируют полипептиды иммуноглобулинов, содержащие аминокислотные последовательности, которые схожи по меньшей мере примерно на 70%, предпочтительно схожи по меньшей мере примерно на 80%, более предпочтительно по схожи меньшей мере примерно на 90% и наиболее предпочтительно схожи по меньшей мере примерно на 95% (например, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) с любой из эталонных аминокислотных последовательностей, когда сравнение выполняется с помощью алгоритма BLAST, где параметры алгоритма выбираются так, чтобы дать наибольшее соответствие между соответствующими последовательностями по всей длине соответствующих контрольных последовательностей.

В данном контексте идентичность нуклеотидной и аминокислотной последовательностей в процентах может быть определена с использованием C, MacVector (MacVector, Inc. Cary, NC 27519), Vector NTI (Informax, Inc. MD), Oxford Molecular Group PLC (1996) и алгоритма Clustal W с параметрами выравнивания по умолчанию и параметрами по умолчанию для идентификации. Эти коммерчески доступные программы также можно использовать для определения сходства последовательностей с использованием тех же или аналогичных параметров по умолчанию. В качестве альтернативы можно использовать расширенный поиск Blast в условиях фильтрации по умолчанию, например, с помощью программы pileup GCG (Genetics Computer Group, Руководство по программе для пакета GCG, версия 7, Мэдисон, Висконсин) с параметрами по умолчанию.

Следующие ссылки относятся к алгоритмам BLAST, часто используемым для анализа последовательностей: АЛГОРИТМЫ BLAST: Altschul, S.F., et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990); Gish, W., et al., Nature Genet. 3:266-272 (1993); Madden, T.L., et al., Meth. Enzymol. 266:131-141(1996); Altschul, S.F., et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997); Zhang, J., et al., Genome Res. 7:649-656 (1997); Wootton, J.C., et al., Comput. Chem. 17:149-163 (1993); Hancock, J.M. et al., Comput. Appl. Biosci. 10: 67-70 (1994); СИСТЕМЫ ОЦЕНКИ ВЫРАВНИВАНИЯ: Dayhoff, M.O., et al., «A model of evolutionary change in proteins» in Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp.345-352, (1978); Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., «Matrices for detecting distant relationships.» in Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, suppl. 3. (1978), М.О. Dayhoff (ed.), pp.353-358 (1978), Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., J. Mol. Biol. 219: 555-565 (1991); States, D.J., et al., Methods 3: 66-70 (1991); Henikoff, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919 (1992); Altschul, S.F., et al., J. Mol. Evol. 36:290-300 (1993); СТАТИСТИКА ВЫРАВНИВАНИЯ: Karlin, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268 (1990); Karlin, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci.USA 90: 5873-5877 (1993); Dembo, A., et al., Ann. Prob. 22:2022-2039 (1994); и Altschul, S.F. «Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments». in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), pp.1-14, Plenum, New York (1997).

В настоящем изобретении также предложены экспрессирующие векторы, содержащие нуклеиновые кислоты по изобретению, где нуклеиновая кислота функционально связана с контрольными последовательностями, которые распознаются клеткой-хозяином, когда она трансфецирована вектором. Также предложены клетки-хозяева, содержащие экспрессирующий вектор по настоящему изобретению, и способы получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, раскрытые в настоящем описании, включающие культивирование клетки-хозяина, несущей экспрессирующий вектор, кодирующий антитело или антигенсвязывающий фрагмент, в культуральной среде и выделение антигена или его антигенсвязывающий фрагмент из клетки-хозяина или культуральной среды.

Канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 может быть получено рекомбинантно способами, известными в данной области. Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии антител или фрагментов, раскрытых в настоящем описании, хорошо известны в данной области и включают множество иммортализованных клеточных линий, доступных из Американской Типированной Коллекции Клеточных Культур (ATCC). К ним относятся, среди прочего, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки NSO, SP2, клетки HeLa, клетки почек детеныша хомячка (BHK), клетки почек обезьяны (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2), клетки A549, клетки 3T3, клетки HEK-293 и ряд других клеточных линий. Клетки-хозяева млекопитающих включают клетки человека, мыши, крысы, собаки, обезьяны, свиньи, козы, коровы, лошади и хомяка. Особенно предпочтительные клеточные линии выбирают посредством определения того, в какой клеточной линии будет высокий уровень экспрессии. Другие клеточные линии, которые могут использоваться, представляют собой клеточные линии насекомых, такие как клетки Sf9, клетки амфибий, бактериальные клетки, растительные клетки и грибные клетки. Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, кодирующие тяжелую цепь или антигенсвязывающую часть или его фрагмент, легкую цепь и/или ее антигенсвязывающий фрагмент вводят в клетки-хозяева млекопитающих, антитела получают путем культивирования клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для того, чтобы дать возможность экспрессии антитела в клетках-хозяевах или более предпочтительно секреции антитела в культуральную среду, в которой растят клетки-хозяева.

Антитела могут быть извлечены из культуральной среды с использованием стандартных методов очистки белка. Кроме того, экспрессия антител по изобретению (или других их компонентов) из продуцирующих клеточных линий может повышаться с использованием ряда известных методов. Например, система экспрессии гена глутаминсинтетазы (система GS) является распространенным подходом для повышения экспрессии при определенных условиях. Система GS обсуждается в целом или частично в связи с Европейскими патентами No. 0216846 0256055 и 0323997 и Европейской патентной заявкой No. 89303964.4.

В общем, гликопротеины, продуцируемые в конкретной клеточной линии или трансгенном животном, будут иметь профиль гликозилирования, который характерен для гликопротеинов, продуцируемых в клеточной линии или трансгенном животном. Таким образом, конкретный профиль гликозилирования антитела будет зависеть от конкретной клеточной линии или трансгенного животного, используемых для продуцирования антитела. Однако настоящее изобретение включает все антитела, кодируемые молекулами нуклеиновых кислот, представленных в настоящем описании, независимо от профиля гликозилирования, который могут иметь антитела. Аналогичным образом, в конкретных вариантах осуществления могут быть полезными антитела с профилем гликозилирования, включающим только нефукозилированные N-гликаны, поскольку было показано, что эти антитела обычно проявляют более высокую эффективность, чем их фукозилированные аналоги как in vitro, так и in vivo [см., например, Shinkawa et al., J. Biol. Chem. 278: 3466-3473 (2003); Пат.США №6946292 и 7214775].

Настоящее изобретение также включает фрагменты антител мышиных антител против собачьего CTLA-4, описанных в настоящем документе. Фрагменты антител включают фрагменты F(ab)2, которые могут быть получены ферментативным расщеплением IgG, например, пепсином. Fab-фрагменты могут быть получены, например, восстановлением F(ab)2 дитиотреитолом или меркаптоэтиламином. Fab-фрагмент представляет собой цепь V_L-CL, присоединенную к цепи V_H-CH1 дисульфидным мостиком. Фрагмент F(ab)2 представляет собой два Fab-фрагмента, которые, в свою очередь, соединены двумя дисульфидными мостиками. Fab-часть молекулы F(ab)2 включает часть Fc-области, между которой расположены дисульфидные мостики. Фрагмент FV представляет собой область V_L или V_H.

В одном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область тяжелой цепи, например, константную область собаки, такую как константная область тяжелой цепи собачьего IgGA, IgGB, IgGC и IgGD или ее вариант.В другом варианте осуществления, антитело или антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область легкой цепи, например, константную область собачьей легкой цепи, как например, константную область собачьей легкой цепи лямбда или каппа или ее вариант.В качестве примера, но не ограничения, константная область тяжелой цепи собаки может происходить из IgG-B, а константная область легкой цепи собаки может происходить из каппа-цепи.

Конструирование антитела

Канинизированные мышиные антитела против собачьего CTLA-4 по настоящему изобретению могут быть сконструированы для включения модификаций собачьего каркаса и/или остатков собачьего каркаса в вариабельных доменах родительского (т.е. собачьего) моноклонального антитела, например для улучшения свойств антитела.

Связывание эпитопа и аффинность связывания

Настоящее изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые связываются с аминокислотными остатками того же эпитопа собачьего CTLA-4, что и раскрытые в настоящем описании мышиные антитела против собачьего CTLA-4. В конкретных вариантах осуществления мышиные антитела против собачьего CTLA-4 или их антигенсвязывающие фрагменты также способны ингибировать/блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86 и/или CD80. В родственных вариантах осуществления канинизированные мышиные антитела против собачьего CTLA-4 или их антигенсвязывающие фрагменты также способны ингибировать/блокировать связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86 и/или CD80.

Экспериментальные и диагностические применения

Мышиные антитела против собачьего CTLA-4 и/или канинизированные антитела против собачьего CTLA-4 или их антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению также могут быть полезны в диагностических анализах собачьего белка CTLA-4, например, для определения его экспрессии в комбинации с и/или по отношению к раку.

Например, такой способ включает следующие стадии:

(а) покрывают субстрат (например, поверхность лунки микропланшета, например, пластикового планшета) мышиным антителом против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающим фрагментом;

(b) наносят образец для тестирования на присутствие собачьего CTLA-4 на субстрат;

(c) промывают планшет, чтобы удалить несвязанный материал в образце;

(d) наносят детектируемые меченые антитела (например, ферментно-связанные антитела), которые также специфичны к антигену CTLA-4;

(e) промывают субстрат, чтобы удалить несвязанные меченые антитела;

(f) если меченые антитела связаны с ферментом, применяют химическое вещество, которое ферментом преобразуется во флуоресцентный сигнал; и

(g) детектируют присутствие меченого антитела.

В другом варианте осуществления меченое антитело метят пероксидазой, которая взаимодействует с ABTS [например, 2,2'-азино-бис (3-этилбензтиазолин-6-сульфоновая кислота)] или 3,3',5,5'-тетраметилбензидином (TMB) для изменения цвета, которое можно детектировать. Альтернативно, меченое антитело метят детектируемым радиоизотопом (например, 3H), который может быть обнаружен сцинтилляционным счетчиком в присутствии сцинтиллятора. Мышиные антитела против собачьих CTLA-4 по изобретению можно использовать в процедуре вестерн-блоттинга или иммуноблоттинга.

Такая процедура образует часть настоящего изобретения и включает, например:

(i) контакт мембраны или другого твердого субстрата, подлежащего тестированию на наличие связанного собачьего CTLA-4 или его фрагмента, с канинизированным мышиным антителом против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению. Такая мембрана может иметь форму мембраны на основе нитроцеллюлозы или винила [например, поливинилиденфторида (PVDF)], на которую переносили белки, подлежащие тестированию на присутствие собачьего CTLA-4 в неденатурирующем геле PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле) или геле SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия), (например, после электрофоретического разделения в геле). Перед контактом мембраны с канинизированным мышиным антителом против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающим фрагментом мембрану необязательно блокируют, например, обезжиренным сухим молоком или подобным, чтобы связать неспецифические сайты связывания белка на мембране.

(ii) промывание мембраны один или более раз для удаления несвязавшегося канинизированного мышиного антитела против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающего фрагмента и других несвязанных веществ; и

(iii) детектирование связанного канинизированного мышиного антитела против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающего фрагмента.

Детектирование связанного антитела или антигенсвязывающего фрагмента может осуществляться путем связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с вторичным антителом (антитело против иммуноглобулина), которое помечено с возможностью детектирования, и затем путем детектирования присутствия вторичного антитела.

Мышиные антитела против собачьего CTLA-4, канинизированные мышиные антитела против собачьего CTLA-4 и/или их антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, также могут быть использованы для иммуногистохимии. Такой способ составляет часть настоящего изобретения и включает, например, (1) контакт клетки, подлежащей тестированию на присутствие собачьего CTLA-4, например, с мышиным антителом против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающим фрагментом по настоящему изобретению; и (2) детектирование антитела или фрагмента на клетке или внутри нее. Если антитело или антигенсвязывающий фрагмент само по себе помечено детектируемой меткой, то оно может быть детектировано напрямую. Альтернативно, антитело или антигенсвязывающий фрагмент может связываться со вторичным антителом, меченным детектируемой меткой, которое детектируют.

Методы визуализации включают визуализацию SPECT (однофотонная эмиссионная компьютерная томография) или PET (позитрон-эмиссионная томография). Метки включают, например, йод-123 (¹²³I) и технеций-99m (^99mTc), например, в комбинации с визуализацией SPECT или ¹¹C, ¹³N, ¹⁵O или ¹⁸F, например, в комбинации с визуализацией PET или Индий-111 [см., например, Gordon и др., International Rev. Neurobiol. 67: 385-440 (2005)].

Перекрестно-блокирующие антитела

Кроме того, антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению включает любое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с тем же эпитопом собачьего CTLA-4, с которым связываются обсуждаемые в настоящем описании антитела и фрагменты, и любое антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которое перекрестно блокирует (частично или полностью) или перекрестно блокируется (частично или полностью) антителом или фрагментом, обсуждаемым в настоящем описании, для связывания собачьего CTLA-4; а также любой его вариант.

Перекрестно-блокирующие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, обсуждаемые в настоящем описании, могут быть идентифицированы на основе их способности перекрестно конкурировать с антителами, раскрытыми в настоящем описании (на основе CDR, как представлено ниже в Примере 5), то есть 45A9, 27G12, 22A11, 110E3; и более конкретно, 12B3 и/или 39A11 в стандартных анализах связывания (например, BIACore®, ИФА, как проиллюстрировано ниже, или проточная цитометрия). Например, можно использовать стандартные анализы ИФА, в которых рекомбинантный собачий белок CTLA-4 иммобилизован на планшете, одно из антител помечено флуоресцентной меткой, и оценивается способность немеченых антител конкурировать за связывание меченого антитела. Дополнительно или альтернативно, анализ BIAcore® можно использовать для оценки способности антител к перекрестной конкуренции. Способность тестируемого антитела ингибировать связывание, например, 27G12, 45A9, 110E3 и/или 22A11; и даже более конкретно 12B3 и/или 39A11, с собачьим CTLA-4 демонстрирует, что тестируемое антитело может конкурировать с 27G12, 45A9, 110E3 и/или 22A11, и/или 12B3, и/или 39A11 за связывание с собачьим CTLA-4 и, таким образом, может в некоторых случаях связываются с одним и тем же эпитопом на собачьем CTLA-4 как 27G12, 45A9, 110E3 и/или 22A11, и/или 12B3, и/или 39A11. Как указано выше, антитела и фрагменты, которые связываются с тем же эпитопом, что и любое из антител против собачьего CTLA-4 или их фрагментов по настоящему изобретению, также составляют часть настоящего изобретения.

Фармацевтические композиции и Введение

Для приготовления фармацевтических или стерильных композиций канинизированного мышиного антитела против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающего фрагмента его можно смешать с фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным веществом. [См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences и Фармакопея США: Национальный формуляр, Mack Publishing Company, Истон, Пенсильвания (1984)].

Составы терапевтических и диагностических агентов могут быть приготовлены путем смешивания с приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами в форме, например, лиофилизированных порошков, суспензий, водных растворов или суспензий [см., например, Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner и Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY]. В одном варианте осуществления антитела против CTLA-4 по настоящему изобретению разбавляют до подходящей концентрации в растворе ацетата натрия с pH 5-6, и для придания тоничности добавляют NaCl или сахарозу. Дополнительные агенты, такие как полисорбат 20 или полисорбат 80, могут быть добавлены для повышения стабильности.

Токсичность и терапевтическая эффективность композиций антител, вводимых отдельно или в комбинации с другим агентом, можно определить стандартными фармацевтическими процедурами на культурах клеток или экспериментальных животных, например, для определения LD50 (доза, летальная для 50% популяции) и ED50 (доза, терапевтически эффективная для 50% популяции). Соотношение доз между токсическим и терапевтическим эффектами представляет собой терапевтический индекс (LD50/ED50). В конкретных аспектах, целевыми являются антитела, демонстрирующие высокие терапевтические индексы. Данные, полученные из таких анализов клеточных культур и исследований на животных, могут использоваться при составлении диапазона дозировки для применения у собак. Дозировка таких соединений предпочтительно находится в диапазоне циркулирующих концентраций, который включает ED50 с небольшой токсичностью или без нее. Дозировка может варьироваться внутри данного диапазона в зависимости от применяемой дозировки и пути введения.

Способ введения может варьироваться. Подходящие пути введения включают пероральный, ректальный, чрезслизистый, интестинальный, парентеральный; внутримышечный, подкожный, внутрикожный, костномозговой, внутриоболочечный, прямой внутрижелудочковый, внутривенный, внутрибрюшинный, интраназальный, внутриглазной, ингаляционный, инсуфляционный, местный, кожный, чрескожный или внутриартериальный. В конкретных вариантах осуществления канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент можно вводить инвазивным путем, например путем инъекции. В дополнительных вариантах осуществления изобретения канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент или его фармацевтическая композиция вводится внутривенно, подкожно, внутримышечно, внутриартериально или путем ингаляции, с доставкой в виде аэрозоля. Введение неинвазивными путями (например, перорально; например, в пилюле, капсуле или таблетке) также входит в объем настоящего изобретения.

Композиции могут вводить с использованием медицинских устройств, известных в данной области. Например, фармацевтическая композиция по изобретению может вводиться путем инъекции с помощью иглы для подкожных инъекций, включая, например, предварительно заполненный шприц или автоинжектор. Фармацевтические композиции, раскрытые в настоящем описании, также можно вводить с использованием безыгольного гиподермического инъекционного устройства; такого как устройства, раскрытые в Патентах No.: 6620135; 6096002; 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556.

Фармацевтические композиции, раскрытые в настоящем описании, также можно вводить с помощью инфузии. Примеры хорошо известных имплантатов и модулей для введения фармацевтических композиций включают: Патент США No. 4487603, в котором раскрыт имплантируемый насос для микроинфузий для дозирования препарата котролируемым путем; Патент США No. 4447233, в котором раскрыт насос для инфузии препарата для доставки препарата с точной скоростью инфузии; Патент США No. 4447224, в котором раскрыто имплантируемое устройство для инфузии с изменяемым потоком для непрерывной доставки лекарственного средства; Патент США No. 4439196, в котором раскрыта осмотическая система доставки лекарственного средства, содержащая многокамерные компартменты. Специалисту в данной области хорошо известно множество таких имплантов, систем доставки и модулей.

Альтернативно, можно вводить мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 местным, а не системным образом, например, путем инъекции антитела непосредственно в сустав, пораженный артритом, или в вызванное патогеном поражение, характеризующееся иммунопатологией, часто в составе депо или с замедленным высвобождением. Кроме того, можно вводить антитело в системе направленной доставки лекарственного средства, например, в липосоме, покрытой тканеспецифическим антителом, нацеленным, например, на артритный сустав или вызванное патогеном поражение, характеризующееся иммунопатологией. Липосомы будут направлены в пораженную ткань и селективно поглощены там.

Схема введения зависит от нескольких факторов, включая метаболизм терапевтического антитела в сыворотке или ткани, уровень симптомов, иммуногенность терапевтического антитела и доступность клеток-мишеней в биологической матрице. Предпочтительно, схема введения доставляет достаточное количество терапевтического антитела для воздействия на улучшение целевого болезненного состояния при одновременной минимизации нежелательных побочных эффектов. Соответственно, количество доставляемого биологического препарата частично зависит от конкретного терапевтического антитела и тяжести состояния, которое подвергается лечению. Доступны инструкции по выбору подходящих доз терапевтических антител [см., например, Wawrzynczak Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK (1996); Kresina (ed.) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY (1991); Bach (ed.) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY (1993); Baert, et al. New Engl. J. Med. 348: 601-608 (2003); Milgrom et al. New Engl. J. Med. 341:1966-1973 (1999); Slamon et al. New Engl. J. Med. 344:783-792 (2001); Beniaminovitz et al. New Engl. J. Med. 342: 613-619 (2000); Ghosh et al. New Engl. J. Med. 348: 24-32 (2003); Lipsky et al. New Engl. J. Med. 343: 1594-1602 (2000)].

Подходящую дозу определяет ветеринар, например, с использованием параметров или факторов, известных или предполагаемых в данной области как влияющих на лечение. Как правило, доза начинается с количества, чуть меньшего, чем оптимальная доза, и повышается маленькими шагами до тех пор, пока не будет достигнут целевой или оптимальный эффект относительно любого негативного побочного эффекта. Важные диагностические меры включают симптомы, например, размер опухоли.

Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, раскрытые в настоящем описании, могут быть обеспечены путем непрерывной инфузии или с помощью доз, вводимых, например, ежедневно, 1-7 раз в неделю, еженедельно, раз в две недели, ежемесячно, раз в два месяца, ежеквартально, раз в полгода, ежегодно и т.д. Дозы могут вводиться, например, внутривенно, подкожно, местно, перорально, назально, ректально, внутримышечно, интрацеребрально, внутриспинально или путем ингаляции. Общая недельная доза обычно составляет по меньшей мере 0,05 мкг/кг массы тела, в более общем случае по меньшей мере 0,2 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 1 мкг/кг, 10 мкг/кг, 100 мкг/кг, 0,25 мг/кг, 1 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/мл, 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг или более [см., например, Yang, et al. New Engl. J. Med. 349:427-434 (2003); Herold, et al.New Engl. J. Med. 346:1692-1698 (2002); Liu, et al.J.Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456 (1999); Portielji, et al. Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144 (2003)]. Также могут быть предусмотрены дозы для достижения заранее определенной целевой концентрации канинизированного мышиного антитела против CTLA-4 в сыворотке пациента, например 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100, 300 мкг/мл или более. В других вариантах осуществления канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 по настоящему изобретению вводят подкожно или внутривенно, еженедельно, раз в две недели, «каждые 4 недели», ежемесячно, раз в два месяца или ежеквартально в количестве 10, 20, 50, 80, 100, 200, 500, 1000 или 2500 мг/на объект.

Антигенные пептиды (например, пептиды, содержащие эпитопы или их части из CTLA-4), которые распознаются антителами mAb против собачьего CTLA-4, также можно использовать в качестве вакцин для выработки антител, которые блокируют связывание собачьего CTLA-4 с собачьими CD80 и/или CD86. Такие вакцины могут быть полезны в качестве терапевтических вакцин от таких заболеваний, как онкологическое заболевание. Чтобы использовать эти антигенные пептиды в качестве вакцин, один или более из этих пептидов могут быть связаны химически или с помощью технологий рекомбинантной ДНК с другим белком-носителем, чтобы повысить иммуногенность этих пептидов и вызвать выработку пептид-специфических антител. Способы соединения пептидов с белками-носителями известны специалистам в данной области. Пептидные вакцины можно использовать для вакцинации животных внутримышечно, подкожно, перорально, с помощью спрея или in ovo. Пептидные вакцины могут использоваться в виде субъединичных белков, экспрессируемых из бактериальных, вирусных, дрожжевых или бакуловирусных систем. Альтернативно такие пептидные вакцины могут быть доставлены после введения множества вирусных или бактериальных векторов, которые экспрессируют такие пептидные вакцины, что может быть осуществлено методами, известными специалистам в данной области. Пептидные вакцины могут вводиться в дозах от 1 до 1000 мкг и необязательно могут содержать адъювант и приемлемый фармацевтический носитель.

Используемый в настоящем описании термин «ингибировать», или «лечить», или «лечение» включает отсрочку развития симптомов, связанных с расстройством, и/или уменьшение тяжести симптомов такого расстройства. Термины дополнительно включают улучшение существующих неконтролируемых или нежелательных симптомов, предотвращение дополнительных симптомов и улучшение или предотвращение причин, обуславливающих такие симптомы. Таким образом, термины обозначают, что положительный результат был получен у позвоночного объекта (например, собаки) с расстройством, заболеванием или симптомом или с возможностью развития такого расстройства, заболевания или симптома.

Используемые в настоящем описании термины «терапевтически эффективное количество», «терапевтически эффективная доза» и «эффективное количество» относятся к количеству канинизированного мышиного антитела против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, которое при введении отдельно или в комбинации с дополнительным терапевтическим агентом в клетку, ткань или объекту, эффективно, чтобы вызвать измеримое улучшение одного или более симптомов заболевания или состояния или прогрессирования такого заболевания или состояния. Терапевтически эффективная доза также относится к тому количеству связывающего соединения, которое достаточно для того, чтобы привести, по меньшей мере, к частичному облегчению симптомов, например, к лечению, исцелению, профилактике или облегчению соответствующего медицинского состояния или к увеличению скорости лечения, излечения, предотвращения или улучшения таких состояний. При применении к индивидуальному активному ингредиенту, который вводят индивидуально, терапевтически эффективная доза относится только к такому ингредиенту. При применении к комбинации, терапевтически эффективная доза относится к объединенным количествам активных ингредиентов, которые приводят к получению терапевтического эффекта при введении либо в комбинации, последовательно, либо одновременно. Эффективное количество терапевтического средства приведет к улучшению диагностического показателя или параметра по меньшей мере на 10%; обычно по меньшей мере на 20%; предпочтительно по меньшей мере примерно на 30%; более предпочтительно по меньшей мере на 40% и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 50%. Эффективное количество также может приводить к улучшению объективного показателя в случаях, где объективные показатели используют для оценки тяжести заболевания.

Другие комбинированные терапии

Как описано ранее, канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент и/или антигенный пептид по настоящему изобретению можно вводить совместно с одним или более другими терапевтическими агентами (такими как ингибитор, как обсуждается в следующем абзаце) и/или с канинизированным мышиным антителом против собачьего PD-1 [см., например, US 9944704 B2 и US 10106107 B2, содержание каждого из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме] и/или с канинизированным мышиным антителом против собачьего PD-L1 [см., например, US 20180237535 A1, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме]. Антитело (антитела) может быть связано с агентом (в виде иммунокомплекса) и/или может вводиться отдельно от агента или другого антитела. В последнем случае (раздельное введение) антитела можно вводить до, после или одновременно с агентом или можно вводить совместно с другими известными методами лечения.

Наборы

Кроме того, предложены наборы, содержащие один или более компонентов, которые включают, но не ограничиваются ими, антитело или антигенсвязывающий фрагмент, как обсуждается в настоящем описании, которое специфически связывается с CTLA-4 (например, канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или его антигенсвязывающий фрагмент) в комбинации с одним или более дополнительными компонентами, включая канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-1 и/или канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-L1. Связывающие композиции, описанные непосредственно выше, могут быть приготовлены в виде чистой композиции или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем в фармацевтической композиции.

В одном варианте осуществления набор включает связывающую композицию по настоящему изобретению (например, канинизированное мышиное антитело против собачьего CTLA-4 или его фармацевтическую композицию в одном контейнере (например, в стерильном стеклянном или пластиковом флаконе), канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-1 и/или канинизированное мышиное антитело против собачьего PD-L1 или их фармацевтическую композицию (композиции) в другом контейнере (например, в стерильном стеклянном или пластиковом флаконе).

Если набор включает фармацевтическую композицию для парентерального введения пациенту, набор также может включать устройство для выполнения такого введения. Например, набор может включать одну или более гиподермических игл или других устройств для инъекции, как обсуждалось выше. Набор также может включать лист-вкладыш, включающий информацию, касающуюся фармацевтических композиций и лекарственных форм в наборе. Как правило, такая информация помогает владельцам домашних животных и ветеринарам эффективно и безопасно использовать прилагаемые фармацевтические композиции и лекарственные формы. Например, следующая информация касательно комбинации по изобретению может быть представлена во вкладыше: фармакокинетика, фармакодинамика, клинические исследования, параметры эффективности, показания к применению, противопоказания, предупреждения, предостережения, побочные реакции, передозировки, корректные дозировки и введение, как поставляется, корректные условия хранения, ссылки, информация производителя/поставщика и патентная информация.

Для удобства антитело или специфический связывающий агент, раскрытое в настоящем описании, может быть предоставлено в наборе, то есть в виде упакованной комбинации реагентов в заранее определенных количествах с инструкциями по выполнению диагностического или детектирующего анализа. Если антитело или антитела помечены ферментом, набор будет включать субстраты и кофакторы, необходимые для фермента (например, предшественник субстрата, который обеспечивает детектируемый хромофор или флуорофор). Кроме того, могут быть добавлены другие добавки, такие как стабилизаторы, буферы (например, блокирующий буфер или лизирующий буфер) и т.п.Относительные количества различных реагентов могут широко варьироваться для обеспечения концентраций реагентов в растворе, которые по существу оптимизируют чувствительность анализа. Конкретно, реагенты могут предлагаться в виде сухих порошков, обычно лиофилизированных, включающих вспомогательные вещества, которые при растворении обеспечивают раствор реагентов, имеющих подходящую концентрацию.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

Получение мышиных моноклональных антител к собачьему CTLA-4 и соответствующих химерных антител мышь-собака

Моноклональные антитела мыши были получены с использованием технологии мышиных гибридом с собачьим рекомбинантным белком CTLA-4 (cCTLA-4) в качестве иммуногена. Положительные клоны гибридомы отбирали на основе реактивности антитела с cCTLA-4 и блокирования взаимодействия собачьего CD86 или CD80 с cCTLA-4 (блокирующая активность) с помощью анализов ИФА и FACS. Отобранные гибридомные клоны секвенировали быстрой амплификацией концов кДНК (RACE) для фрагментов антител с последовательностями V_H и V_L. Шесть отобранных моноклональных антител обозначены как: 12B3, 27G12, 39A11, 45A9, 110E3 и 22A11, соответственно. Аминокислотные последовательности шести антител представляют собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10 и 12 для вариабельной области тяжелой цепи, соответственно, и SEQ ID NO: 14, 16, 18, 20, 22 и 24 для вариабельная область легкой цепи, соответственно. CDR подчеркнуты в последовательностях, представленных ниже [см. также Таблицу 1 ниже]. Соответствующие нуклеотидные последовательности, которые кодируют идентифицированные выше аминокислотные последовательности соответствуют SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9 и 11 для вариабельной области тяжелой цепи, соответственно, и SEQ ID NO: 13, 15, 17, 19, 21 и 23 для вариабельной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидные последовательности вариабельных областей тяжелой цепи были слиты с нуклеотидной последовательностью модифицированной константной области тяжелой цепи собаки (CH1-шарнир-CH2-CH3), соответственно, для получения химерной «мышь-собака» нуклеотидной последовательности тяжелой цепи, SEQ ID NO: 25, 27, 29, 31, 33 и 35. Жирным шрифтом выделены вариабельные области. Нуклеотидные последовательности вариабельной области легкой цепи были слиты с нуклеотидной последовательностью константного домена легкой цепи каппа собаки, соответственно, для получения химерной «мышь-собака» нуклеотидной последовательности легкой цепи, SEQ ID NO: 37, 39, 41, 43, 45 и 47. Вариабельные области выделены жирным шрифтом. Аминокислотные последовательности, кодируемые химерными «мышь-собака» нуклеотидными последовательностями тяжелой цепи, соответствуют SEQ ID NO: 26, 28, 30, 32, 34 и 36. Аминокислотные последовательности, кодируемые химерными «мышь-собака» нуклеотидными последовательностями легкой цепи, соответствуют SEQ ID NO: 38, 40, 42, 44, 46 и 48. Вариабельные области выделены жирным шрифтом, а CDR подчеркнуты. Химерные «человек-собака» тяжелые и легкие цепи клонировали в отдельные экспрессирующие плазмиды с использованием стандартных методов молекулярной биологии. Плазмиды, содержащие гены тяжелой и легкой цепей, трансфецировали в клетки НЕК 293, и экспрессированные антитела очищали из супернатанта клеток НЕК 293 с использованием Протеина А.

ПРИМЕР 2

АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ CDR МЫШИ

CDR мышиных моноклональных антител против собачьего CTLA-4 перечислены в Таблице 1 ниже.

Таблица 1
АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ CDR МЫШИ
VH CDR-1	Аминокислотная последовательность	SEQ ID NO:
12B3	AsnTyrGlyMetAsn	86
45A9	AsnTyrGlyMetAsn	86
27G12	ThrTyrGlyValSer	109
39A11	AspTyrTyrMetSer	98
110E3	AsnTyrGlyMetAsn	86
22A11	SerTyrTrpMetHis	110
VH CDR-2
12B3	TrpIleAsnThrTyrThrGlyGluProThrTyrAlaAspAspPheLysGly	88
45A9	TrpIleAsnThrTyrThrGlyGluProThrTyrAlaAspAspPheLysGly	88
27G12	TrpIleAsnThrTyrSerGlyMetProThrTyrValAspAspPheLysGly	111
39A11	PheIleArgAsnLysAlaAsnGlyTyrThrThrGluTyrSerAlaSerLeu LysGly	100
110E3	TrpIleAsnThrTyrThrGlyGluProThrTyrAlaAspAspPheLysGly	88
22A11	AsnIleAsnProSerAsnGlyGlyThrArgPheAsnGluLysPheLysAsn	112
VH CDR-3
12B3	ArgSerIleTyrTyrProTyr	90
45A9	ArgGlyThrTyrTyrArgPro	113
27G12	ArgGlyIleSerPheAspTyr	114
39A11	PheGlyLeuMetTyrTyrPheAspTyr	102
110E3	ArgGlyValArgLeuAspTyr	115
22A11	SerAsnTyrGlySerGlyTrpAlaTrpPheAlaTyr	116
VL CDR-1
12B3	ArgSerSerGlnSerIleValTyrSerAsnGlyAsnThrTyrLeuGlu	92
45A9	ArgSerSerGlnSerIleValTyrSerHisGlyAsnThrTyrLeuGlu	117
27G12	LysSerSerGlnSerIleValTyrIleAsnGlyAsnThrTyrLeuGlu	118
39A11	ArgAlaSerSerSerValSerSerSerTyrLeuHis	104
110E3	ArgSerSerGlnSerIleValTyrIleSerGlySerThrTyrLeuGlu	119
22A11	HisAlaSerGlnAsnIleAsnValTrpLeuSer	120
VL CDR-2
12B3	LysValSerAsnArgPheSer	94
45A9	LysValSerAsnArgPheSer	94
27G12	LysValSerLysArgPheSer	121
39A11	SerThrSerAsnLeuAlaSer	106
110E3	LysValSerSerArgPheSer	122
22A11	LysSerSerAsnLeuHisThr	123
VL CDR-3
12B3	PheGlnGlySerHisValProTrpThr	96
45A9	PheGlnGlySerHisValProTrpThr	96
27G12	PheGlnGlySerHisValProTrpThr	96
39A11	GlnGlnTyrSerGlyLeuProLeuThr	108
110E3	PheGlnGlySerHisValProTrpThr	96
22A11	GlnGlnGlyGlnSerTyrProTrpThr	124

Назначение индивидуальных канонических структур для шести CDR каждого из шести антител представлено в Таблице 2 ниже.

Таблица 2:
КАНОНИЧЕСКИЕ СТРУКТУРЫ CDR МЫШИ
Антитело	L1	L2	L3	H1	H2	H3
12B3	4	1	1	1	2A	7
27G12	4	1	1	1	2A	7
39A11	1	1	1	1	4	9
45A9	4	1	1	1	2A	7
22A11	2	1	1	1	2A	12
110E3	4	1	1	1	2A	7

ПРИМЕР 3

Реактивность химерных антител с собачьим CTLA-4

Химерное антитело обычно обладает той же реактивностью, что и его родительское мышиное антитело. Чтобы подтвердить реактивность шести антител с cCTLA-4, были продуцированы химерные антитела «мышь-собака» и протестированы на их реактивность с cCTLA-4 с помощью ИФА следующим образом:

1. Наносили покрытие в виде 200 нг/лунку cCTLA-4 на иммунопланшете и инкубировали планшет при 4°C в течение ночи.

2. Планшет промывали 3 раза PBS с 0,05% Tween 20 (PBST).

3. Блокировали планшет 0,5% BSA в PBS в течение 45-60 мин при комнатной температуре.

4. Планшет промывали 3 раза PBST.

5. Трехкратно разводили антитела в каждом столбце или ряду планшета для разведения.

6. Переносили разведенные антитела в каждый столбец или ряд планшета и инкубировали планшет в течение 45-60 мин при комнатной температуре.

7. Планшет промывали 3 раза PBST.

8. В каждую лунку планшета добавляли разбавленный 1:2000 меченный пероксидазой хрена Fc против собачьего IgG и инкубировали планшет в течение 45-60 мин при комнатной температуре.

9. Планшет промывали 3 раза PBST.

10. Добавляли субстрат TMB в каждую лунку планшета и инкубировали планшет в течение 10-15 минут при комнатной температуре, чтобы была возможность проявки цвета.

11. Добавляли 100 мкл 1,5 М фосфорной кислоты в каждую лунку для остановки реакции.

12. Считывали планшет при 450 нм с эталонной длиной волны 540 нм.

Результаты ИФА показывают, что химерные антитела могут связываться с cCTLA-4 [см. Фигуру 1].

ПРИМЕР 4

БЛОКИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ХИМЕРНЫХ АНТИТЕЛ В ОТНОШЕНИИ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ СОБАЧЬЕГО CD86 ИЛИ CD80 С СОБАЧНЫМ CTLA-4

Для исследования блокирующей активности химерных антител был проведен анализ блокирования на основе ИФА следующим образом:

1. Наносили покрытие в виде 200 нг/на лунку cCTLA-4 в иммунопланшете и инкубировали планшет при 4°C в течение ночи.

2. Промывали планшет 3 раза PBS с 0,05% Tween 20 (PBST).

3. Блокировали планшет 0,5% BSA в PBS на 45-60 мин при комнатной температуре.

4. Планшет промывали 3 раза PBST.

5. Трехкратно разбавляли антитела в каждом столбце или ряду планшета для разведения, а затем добавляли 100 нг/на лунку биотинилированного CD86 или CD80. Далее смешивали с антителами.

6. Переносили смесь в каждый столбец или ряд иммунопланшета и инкубировали планшет в течение 45-60 мин при комнатной температуре.

7. Планшет промывали 3 раза PBST.

8. В каждую лунку планшета добавляли разбавленный 1:2000 стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена, и инкубировали планшет в течение 45-60 мин при комнатной температуре.

9. Планшет промывали 3 раза PBST.

10. Добавляли субстрат TMB в каждую лунку планшета и инкубировали планшет в течение 10-15 минут при комнатной температуре для проявки цвета.

Было обнаружено, что химерные антитела блокируют взаимодействие cCTLA-4 с CD86 [Фигура 2] и с CD80 [Фигура 3].

ПРИМЕР 5

АНАЛИЗ FACS ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ СВЯЗЫВАЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ

ХИМЕРНЫХ АНТИТЕЛ НА CHO-cCTLA-4

Была создана клеточная линия CHO-K1, стабильно экспрессирующая cCTLA-4. Клетки использовали для тестирования связывающей и блокирующей активности антител в проточном анализе FACS. Чтобы проверить cCTLA-4-связывающую активность химерных антител, FACS-анализ проводили следующим образом:

1. Выращивали клетки CHO-K1-cCTLA-4 в культуральной среде в колбе Т-75. Клетки пассировали, когда конфлюэнтность клеток достигала 90%.

Питательная среда: F12K (Gibco, номер в каталоге 21127-022), 10% FBS (Gibco, номер в каталоге 10099-141) и пуромицин 4 мкг/мл (Gibco, номер в каталоге A1113803).

2. Клетки открепляли раствором трипсин-ЭДТА, ресуспендировали клетки в культуральной среде и подсчитывали жизнеспособные клетки с жизнеспособностью более 95%.

3. Клетки центрифугировали, супернатант аспирировали, затем ресуспендировали клетки в буфере FACS (Thermo Fisher Scientific, номер в каталоге BDB554656) до 1×10⁷ клеток/мл.

4. Добавляли антитело в 100 мкл клеток, инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин при осторожном встряхивании.

5. Клетки промывали 3×250 мкл буфера FACS и ресуспендировали клетки в 100 мкл буфера FACS.

6. Окрашивали клетки FITC-конъюгированным антителом против собачьего IgG, инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин при осторожном встряхивании.

7. Клетки промывали 3×250 мкл буфера FACS и ресуспендировали клетки в 500 мкл буфера FACS.

8. Считывали 10000 клеток с помощью проточной цитометрии.

Результаты FACS показывают, что химерное антитело может связываться с клетками CHO-cCTLA-4 [см. Фигуры 4A-4G].

ПРИМЕР 6

ГЕНЕРИРОВАНИЕ ИНТЕРФЕРОН ГАММА (IFNγ) СОБАЧЬИХ PBMC, АКТИВИРОВАННЫХ ХИМЕРНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

Выделение мононуклеарных клеток периферической крови собак

1. Отбирали ~ 20 мл цельной крови в пробирку с ЭДТА или гепарином натрия.

2. Переносили кровь в полистирольную пробирку на 50 мл и разбавляли в соотношении 50:50 HBSS (Thermo Fisher Scientific, номер в каталоге 21022CM).

3. Добавляли 15 мл Ficoll-Plaque Plus в четыре пробирки SepMate™ по 50 мл (STEMCELL Technologies, номер в каталоге 15460). Затем медленно добавляли ~ 10 мл разведенной крови 50:50 на стенку каждой пробирки SepMate™, содержащей фиколл.

4. Пробирки центрифугировали при 1200xg в течение 20 минут.

5. Клетки собирали из границы раздела градиента и переносили клетки в полипропиленовую пробирку на 50 мл. Добавляли HBSS до отметки 40-45 мл и центрифугировали клетки при 800xg в течение 10 минут.

6. Отбрасывали супернатант, ресуспендировали клетки в 40-45 мл HBSS и снова центрифугировали пробирку при 800xg в течение 10 минут.

7. Отбрасывали супернатант и ресуспендировали клетки из каждой пробирки с 2 мл Среды для лимфоцитов собак (среда RPMI, Lonza, номер в каталоге 12-167Q). Клетки объединяли от одного и того же животного.

8. Брали небольшие аликвоты клеточной суспензии, смешивали с 0,04% трипановым синим и подсчитывали количество клеток.

9. Клеточную суспензию хранили при 2-7°C до использования, но не более чем за 24 часа до использования.

Анализ пролиферации клеток для мононуклеаров периферической крови собак

1. Разводили антитела в среде для лимфоцитов собак для достижения конечной концентрации 40 мкг/мл (готовили 160 мкг/мл) и стерилизовали с использованием шприцевого фильтра 0,2 мкм. Двукратно разводили антитела в стерильном планшете для разведения и откладывали.

2. Разводили клетки до 2,5×10⁶ клеток/мл в среде для лимфоцитов собак и распределяли по 100 мкл на лунку всего 96-луночного культурального планшета.

3. Разводили Con A в среде для лимфоцитов собак до достижения конечной концентрации 250 нг/мл (готовили 1000 нг/мл), стерилизовали с использованием шприцевого фильтра 0,2 мкм и добавляли 50 мкл во все лунки. (Не добавляли Con A в один столбец из восьми лунок для контроля только с клетками и в лунки, предназначенные для контроля только «клетки+mAb».)

4. Добавляли 100 мкл среды для лимфоцитов собак на лунку в лунки только для клеток и 50 мкл среды в колонку, содержащую контрольные лунки с Con A (Con A+клетки без обработки mAb).

5. В дублированные лунки добавляли 50 мкл разведенных mAb.

6. Инкубировали планшеты при 36±2°C, 4-6% CO₂ в увлажненном инкубаторе в течение 68-124 часов.

IFNγ ИФА

1. Через 68-124 часов после инкубации планшет центрифугировали при 800xg в течение 10 минут.

2. Собирали супернатант из каждой лунки и пул дублировали. Эти образцы можно заморозить при температуре ≤ -50°C для дальнейшего использования или немедленного тестирования.

3. При необходимости разводили образцы супернатанта соответствующим образом и выполняли IFN-гамма-ИФА в соответствии с инструкциями к набору для IFN-гамма-ИФА Quantikine для собак [R&D Systems номер в каталоге CAIF00].

Результаты демонстрируют, что отобранные антитела, включая 12B3, могут активировать собачьи Т-клетки для продуцирования IFNγ [см. Фигуру 5 ниже].

ПРИМЕР 7

КОНСТРУКЦИЯ КАНИНИЗИРОВАННОГО МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА 2B3 И 39A11 ПРОТИВ cCTLA-4

Обладая сильной аффинностью связывания с cCTLA-4 и их блокирующей активностью в отношении cCTLA-4 с его лигандами, CD86 и CD80, мышиные антитела 12B3 и 39A11 были отобраны для создания исходных канинизированных антител. Для выполнения процесса канинизации была определена последовательность ДНК, кодирующая тяжелую и легкую цепи собачьего IgG. ДНК- и белковая последовательность собачьей тяжелой и легкой цепи известны в данной области и могут быть получены путем поиска в генной и белковой базах данных NCBI. Существует четыре известных IgG-подтипа IgG собаки, и они называются IgGA, IgGB, IgGC и IgGD. Подобно человеческому IgG1, собачий IgGB обладает сильной эффекторной функцией. Чтобы нокаутировать эффекторную функцию IgGB, был сконструирован модифицированный IgGB (IgGBm), удаляющий нативные функции ADCC и CDC [см. US 10106107 B2, полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме]. В собачьих антителах есть два типа легких цепей, которые называются каппа и лямбда. Не ограничиваясь каким-либо конкретным подходом, общий процесс производства канинизированных тяжелых и легких цепей, которые можно смешивать в различных комбинациях для получения канинизированных mAb против собачьего CTLA-4, может включать следующий протокол:

i) Идентифицировали CDR H и L цепей отобранных антител. Обратно транслировали аминокислотные последовательности CDR в подходящую последовательность ДНК.

ii) Идентифицировали подходящую последовательность ДНК для H и L цепи собачьего IgG (например, тяжелой цепи IgGB и легкой каппа-цепи).

iii) Идентифицированы последовательности ДНК, кодирующие эндогенные CDR H- и L-цепей собачьего IgG, ДНК указанной выше последовательности.

iv) Заменяли последовательность ДНК, кодирующую эндогенные CDR H и L цепей собак, на последовательности ДНК, кодирующие CDR отобранных антител. Кроме того, необязательно заменяли ДНК, кодирующую некоторые аминокислотные остатки каркасной области собаки, на ДНК, кодирующую отобранные аминокислотные остатки из отобранных каркасных областей антитела.

v) Синтезировали ДНК из стадии (iv) и клонировали ее в подходящую экспрессирующую плазмиду.

vi) Трансфецировали синтезированные плазмиды в клетки НЕК 293.

vii) Очищали экспрессированное канинизированное антитело из супернатанта НЕК 293.

viii) Тестировали очищенное канинизированное антитело на связывание с собачьим CTLA-4.

Нуклеотидные и аминокислотные последовательности CDR 12B3 и 39A11 представлены в Таблице 3 ниже.

Таблица 3
НУКЛЕОТИДНЫЕ И АМИНОКИСЛОТНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ CDR, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ КАНИЗИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ
AB	CDR	ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ	Тип	SEQ ID NO:
12B3
	H-1	Aactatggaatgaac	NA	85
	H-1	NYGMN	AA	86
	H-2	Tggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaaggga	NA	87
	H-2	WINTYTGEPTYADDFKG	AA	88
	H-3	cggtcaatttattacccgtac	NA	89
	H-3	RSIYYPY	AA	90
	L-1	agatctagtcagagcattgtatatagtaatggaaacacctatttagaa	NA	91
	L-1	RSSQSIVYSNGNTYLE	AA	92
	L-2	aaagtttccaaccgattttct	NA	93
	L-2	KVSNRFS	AA	94
	L-3	tttcaaggttcacatgttccgtggacg	NA	95
	L-3	FQGSHVPWT	AA	96
39A11
	H-1	gattactacatgagc	NA	97
	H-1	DYYMS	AA	98
	H-2	tttattagaaacaaagctaatggttacacaacagagtacagcgcatctctgaagggt	NA	99
	H-2	FIRNKANGYTTEYSASLKG	AA	100
	H-3	tttgggttaatgtactactttgactac	NA	101
	H-3	FGLMYYFDY	AA	102
	L-1	agggccagctcaagtgtaagttccagttacttgcac	NA	103
	L-1	rasssvsssylh	AA	104
	L-2	agcacatccaacttggcttct	NA	105
	L-2	stsnlas	AA	106
	L-3	cagcagtacagtggtctcccactcacg	NA	107
	L-3	qqysglplt	AA	108

Конструировали набор канинизированных последовательностей легкой и тяжелой цепей. Их идентификационные номера указаны в Таблицах 4-6 ниже.

ТАБЛИЦА 4
SEQ ID NO: КАНИНИЗИРОВАННЫЕ ЛЕГКИЕ ЦЕПИ 12B3 AND 39A11
Канинизированная легкая цепь	SEQ ID NO.(ДНК)²	SEQ ID NO. (Аминокислота)¹
12B3 VL1	49	50
12B3 VL2	51	52
12B3 VL3	53	54
39A11 VL1	55	56
39A11 VL2	57	58
39A11 VL3	59	60
¹ CDR подчеркнуты; ² в следующих последовательностях вариабельные области выделены жирным шрифтом.

ТАБЛИЦА 5
SEQ ID NO: КАНИНИЗИРОВАННОЙ ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ 12B3 И 39A11 С IgGB ДИКОГО ТИПА (натуральный)
Канинизированная тяжелая цепь	SEQ ID NO. (ДНК)²	SEQ ID NO. (Аминокислота)¹
12B3 VH1	61	62
12B3 VH2	63	64
12B3 VH3	65	66
39A11 VH1	67	68
39A11 VH2	69	70
39A11 VH3	71	72
¹ CDR подчеркнуты; ² в следующих последовательностях вариабельные области выделены жирным шрифтом.

ТАБЛИЦА 6
SEQ ID NO: КАНИНИЗИРОВАННОЙ ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ 2B3 И 39A11 С IgGBm (модифицированный IgGB)
Канинизированная тяжелая цепь	SEQ ID NO. (ДНК)²	SEQ ID NO. (Аминокислота)¹
12B3 VH1	73	74
12B3 VH2	75	76
12B3 VH3	77	78
39A11 VH1	79	80
39A11 VH2	81	82
39A11 VH3	83	84
¹ CDR подчеркнуты; ² в следующих последовательностях вариабельные области выделены жирным шрифтом.

ТАБЛИЦА 7
РОДСТВЕННЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ПРЕДШЕСТВУЮЩЕГО УРОВНЯ ТЕХНИКИ
Белок	SEQ ID NO. (Нуклеиновая кислота)	SEQ ID NO. (Аминокислота)
Собачий CTLA-4, с сигнальной последовательностью	125	126
Собачий IgGBm		127
IgGA (шарнир)		128
IgGB(шарнир)		129
IgGC(шарнир)		130
Modified IgGD(шарнир)		131
Собачий CTLA-4, без сигнальной последовательности		138

Настоящее изобретение относится к канинизированным антителам 12B3 и 39A11, образованным комбинацией канинизированных тяжелых и легких цепей каждого антитела, представленного в таблицах выше; такие антитела демонстрируют особенно прочное связывание с cCTLA-4. Как показано на Фигуре 6, результаты ИФА демонстрируют, что оба, 12B3 и 39A11, успешно канинизированы. Канинизированные c12B3L3H2 и L3H3 обладают такой же реактивностью с cCTLA-4, что и родительское 12B3; канинизированное c39A11L3H3 обладает такой же реактивностью с cCTLA-4, что и родительское 39A11. Химеры 12B3 и 39A11 представляют собой их родительские антитела.

НУКЛЕОТИДНЫЕ (NA) и АМИНОКИСЛОТНЫЕ (AA) ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

SEQ ID NO: 1: NA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 12B3

cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctgggtataccttcacaaactatggaatgaactgggtgaagcaggctccaggaaagggtttaaagtggatgggctggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctatttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacatggctacatatttctgtgcaagacggtcaatttattacccgtactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO: 2: AA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 12B3

QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTG

EPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARRSIYYPYWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO: 3: NA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 27G12

cagatccagttggtacagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctgggtataccttcacaacctatggagtgagctgggtgaaacaggctccaggaaagggtttaaggtggatgggctggataaacacctactctggaatgccaacatatgttgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctttttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctatatatttctgtgcaagacggggtatctcctttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO: 4: AA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 27G12

SEQ ID NO: 5: NA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 39A11

gaggtgaagctggtggagtctggaggaggcttggtacagcctgggggttccctgagtctctcctgtgcaacttctggattcaccttcagtgattactacatgagctgggtccgccagtctccggggaaggcacttgagtggatgggttttattagaaacaaagctaatggttacacaacagagtacagcgcatctctgaagggtcggttcaccatctccagagataattcccaaagcatcctctatcttcaaatgaatgtcctgagagctgaggacagtgccacttattactgtgtaagatttgggttaatgtactactttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO: 6: AA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 39A11

EVKLVESGGGLVQPGGSLSLSCATSGFTFSDYYMSWVRQSPGKALEWMGFIRNKANG

YTTEYSASLKGRFTISRDNSQSILYLQMNVLRAEDSATYYCVRFGLMYYFDYWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO: 7: NA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 45A9

cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctgggtataccttcacaaactatggaatgaactgggtgaagcaggctccaggaaagggtttaaagtggatgggctggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctatttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctacatatttctgtgcaagaagggggacctactataggccctggggccaaggcaccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO: 8: AA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 45A9

QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTG

EPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARRGTYYRPWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO: 9: NA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 110E3

cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctggatataccttcacaaactatggaatgaactgggtgaagcaggctccaggaaagggtttaaagtggatgggctggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaagggacgggttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctttttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctacatatttctgtgcaaggcggggggtacgactggactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca

SEQ ID NO: 10: AA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 110E3

QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTG

EPTYADDFKGRVAFSLETSASTAFLQINNLKNEDTATYFCARRGVRLDYWGQGTTLTVSS

SEQ ID NO: 11: NA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 22A11

caggtccaactgcagcagcctgggactgaactggtgaagcctggggcttcagtgaagctgtcctgcaaggcctctggctataccttcaccagctactggatgcactgggtgaagcagaggcctggacaaggccttgagtggattggaaatatcaatcctagcaatggtggtactaggttcaatgagaagttcaagaacaaggccacactgactgaagacaaatcctccagcacagcctacatgcagctcagtagcctgacatctgaggactctgcggtctattattgtgcaagatcgaactacggtagtggctgggcctggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgca

SEQ ID NO: 12: AA-последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного моноклонального антитела 22A11

QVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNG

GTRFNEKFKNKATLTEDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSNYGSGWAWFAYWG

QGTLVTVSA

SEQ ID NO: 13: NA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 12B3

gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtatatagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO: 14: AA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 12B3

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO: 15: NA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 27G12

Gatgttttgatgacccagactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcacgcctccatctcttgcaaatctagtcagagcattgtatatattaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaagccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaacgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO: 16: AA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 27G12

SEQ ID NO: 17: NA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 39A11

gaaaatgtgctcatccagtctccagcaatcatgtctgcttctccaggggaaaaggtcaccatgacctgcagggccagctcaagtgtaagttccagttacttgcactggtaccagcagaagtcaggtgcctcccccaaactctggatttttagcacatccaacttggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttattctctcacaatcaacagtgtggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcagtacagtggtctcccactcacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaa

SEQ ID NO: 18: AA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 39A11

SEQ ID NO: 19: NA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 45A9

gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagtattgtatatagtcatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaaggtcctgatctacaaagtttccaaccgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO: 20: AA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 45A9

SEQ ID NO: 21: NA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 110E3

gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtatatattagtggaagcacctatttagaatggtatctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccagtcgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO: 22: AA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 110E3

SEQ ID NO: 23: NA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 22A11

gacatccagatgaaccagtctccatccagtctgtctgcatcccttggagacacaattaccatcacttgccatgccagtcagaacattaatgtttggttaagctggtaccagcagaaaccaggaaatattcctaaacttttgatctataagtcttccaacttgcacacaggcgtcccatcaaggtttagtggcagtggatctggaacaggtttcacattaaccatcagcagcctgcagcctgaagacattgccacttactactgtcaacagggtcaaagttatccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa

SEQ ID NO: 24: AA-последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного моноклонального антитела 22A11

SEQ ID NO: 25: NA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 12B3

cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctgggtataccttcacaaactatggaatgaactgggtgaagcaggctccaggaaagggtttaaagtggatgggctggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctatttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacatggctacatatttctgtgcaagacggtcaatttattacccgtactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcgagcaccaccgcgccgagcgtgtttccgctggcgccgagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggcgctggcgtgcctggtgagcggctattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcatacctttccgagcgtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcatggtgaccgtgccgagcagccgctggccgagcgaaacctttacctgcaacgtggcgcatccggcgagcaaaaccaaagtggataaaccggtgccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttaacggcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaagcgctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa

SEQ ID NO: 26: AA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 12B3

SEQ ID NO: 27: NA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 27G12

cagatccagttggtacagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctgggtataccttcacaacctatggagtgagctgggtgaaacaggctccaggaaagggtttaaggtggatgggctggataaacacctactctggaatgccaacatatgttgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctttttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctatatatttctgtgcaagacggggtatctcctttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcgagcaccaccgcgccgagcgtgtttccgctggcgccgagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggcgctggcgtgcctggtgagcggctattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcatacctttccgagcgtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcatggtgaccgtgccgagcagccgctggccgagcgaaacctttacctgcaacgtggcgcatccggcgagcaaaaccaaagtggataaaccggtgccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttaacggcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaagcgctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa

SEQ ID NO: 28: AA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 27G12

SEQ ID NO: 29: NA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 39A11

gaggtgaagctggtggagtctggaggaggcttggtacagcctgggggttccctgagtctctcctgtgcaacttctggattcaccttcagtgattactacatgagctgggtccgccagtctccggggaaggcacttgagtggatgggttttattagaaacaaagctaatggttacacaacagagtacagcgcatctctgaagggtcggttcaccatctccagagataattcccaaagcatcctctatcttcaaatgaatgtcctgagagctgaggacagtgccacttattactgtgtaagatttgggttaatgtactactttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcgagcaccaccgcgccgagcgtgtttccgctggcgccgagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggcgctggcgtgcctggtgagcggctattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcatacctttccgagcgtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcatggtgaccgtgccgagcagccgctggccgagcgaaacctttacctgcaacgtggcgcatccggcgagcaaaaccaaagtggataaaccggtgccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttaacggcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaagcgctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa

SEQ ID NO: 30: AA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 39A11

SEQ ID NO: 31: NA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 45A9

cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctgggtataccttcacaaactatggaatgaactgggtgaagcaggctccaggaaagggtttaaagtggatgggctggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctatttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctacatatttctgtgcaagaagggggacctactataggccctggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcgagcaccaccgcgccgagcgtgtttccgctggcgccgagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggcgctggcgtgcctggtgagcggctattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcatacctttccgagcgtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcatggtgaccgtgccgagcagccgctggccgagcgaaacctttacctgcaacgtggcgcatccggcgagcaaaaccaaagtggataaaccggtgccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttaacggcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaagcgctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa

SEQ ID NO: 32: AA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 45A9

SEQ ID NO: 33: NA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 110E3

cagatccagttggtgcagtctggacctgagctgaagaagcctggagagacagtcaagatctcctgcaaggcttctggatataccttcacaaactatggaatgaactgggtgaagcaggctccaggaaagggtttaaagtggatgggctggataaacacctacactggagagccaacatatgctgatgacttcaagggacgggttgccttctctttggaaacctctgccagcactgcctttttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctacatatttctgtgcaaggcggggggtacgactggactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcgagcaccaccgcgccgagcgtgtttccgctggcgccgagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggcgctggcgtgcctggtgagcggctattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcatacctttccgagcgtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcatggtgaccgtgccgagcagccgctggccgagcgaaacctttacctgcaacgtggcgcatccggcgagcaaaaccaaagtggataaaccggtgccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttaacggcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaagcgctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa

SEQ ID NO: 34: AA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 110E3

SEQ ID NO: 35: NA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 22A11

caggtccaactgcagcagcctgggactgaactggtgaagcctggggcttcagtgaagctgtcctgcaaggcctctggctataccttcaccagctactggatgcactgggtgaagcagaggcctggacaaggccttgagtggattggaaatatcaatcctagcaatggtggtactaggttcaatgagaagttcaagaacaaggccacactgactgaagacaaatcctccagcacagcctacatgcagctcagtagcctgacatctgaggactctgcggtctattattgtgcaagatcgaactacggtagtggctgggcctggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgcagcgagcaccaccgcgccgagcgtgtttccgctggcgccgagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggcgctggcgtgcctggtgagcggctattttccggaaccggtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcatacctttccgagcgtgctgcagagcagcggcctgtatagcctgagcagcatggtgaccgtgccgagcagccgctggccgagcgaaacctttacctgcaacgtggcgcatccggcgagcaaaaccaaagtggataaaccggtgccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtggatctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttaacggcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaagcgctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa

SEQ ID NO: 36: AA-последовательность тяжелой цепи химерного антитела мышь-собака 22A11

SEQ ID NO: 37: NA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 12B3

gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtatatagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgcaacgatgcgcagccggcggtgtatctgtttcagccgagcccggatcagctgcataccggcagcgcgagcgtggtgtgcctgctgaacagcttttatccgaaagatattaacgtgaaatggaaagtggatggcgtgattcaggataccggcattcaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctatagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgaatatctgagccatgaactgtatagctgcgaaattacccataaaagcctgccgagcaccctgattaaaagctttcagcgcagcgaatgccagcgcgtggat

SEQ ID NO: 38: AA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 12B3

SEQ ID NO: 39: NA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 27G12

gatgttttgatgacccagactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcacgcctccatctcttgcaaatctagtcagagcattgtatatattaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaagccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaacgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgcaacgatgcgcagccggcggtgtatctgtttcagccgagcccggatcagctgcataccggcagcgcgagcgtggtgtgcctgctgaacagcttttatccgaaagatattaacgtgaaatggaaagtggatggcgtgattcaggataccggcattcaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctatagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgaatatctgagccatgaactgtatagctgcgaaattacccataaaagcctgccgagcaccctgattaaaagctttcagcgcagcgaatgccagcgcgtggat

SEQ ID NO: 40: AA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 27G12

SEQ ID NO: 41: NA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 39A11

gaaaatgtgctcatccagtctccagcaatcatgtctgcttctccaggggaaaaggtcaccatgacctgcagggccagctcaagtgtaagttccagttacttgcactggtaccagcagaagtcaggtgcctcccccaaactctggatttttagcacatccaacttggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttattctctcacaatcaacagtgtggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcagtacagtggtctcccactcacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaacgcaacgatgcgcagccggcggtgtatctgtttcagccgagcccggatcagctgcataccggcagcgcgagcgtggtgtgcctgctgaacagcttttatccgaaagatattaacgtgaaatggaaagtggatggcgtgattcaggataccggcattcaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctatagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgaatatctgagccatgaactgtatagctgcgaaattacccataaaagcctgccgagcaccctgattaaaagctttcagcgcagcgaatgccagcgcgtggat

SEQ ID NO: 42: AA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 39A11

SEQ ID NO: 43: NA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 45A9

gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagtattgtatatagtcatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaaccaggccagtctccaaaggtcctgatctacaaagtttccaaccgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgcaacgatgcgcagccggcggtgtatctgtttcagccgagcccggatcagctgcataccggcagcgcgagcgtggtgtgcctgctgaacagcttttatccgaaagatattaacgtgaaatggaaagtggatggcgtgattcaggataccggcattcaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctatagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgaatatctgagccatgaactgtatagctgcgaaattacccataaaagcctgccgagcaccctgattaaaagctttcagcgcagcgaatgccagcgcgtggat

SEQ ID NO: 44: AA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 45A9

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC RSSQSIVYSHGNTYLE WYLQKPGQSPKVLIY KVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC FQGSHVPWT FGGGTKLEIKRNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD

SEQ ID NO: 45: NA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 110E3

gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtatatattagtggaagcacctatttagaatggtatctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccagtcgattttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgcaacgatgcgcagccggcggtgtatctgtttcagccgagcccggatcagctgcataccggcagcgcgagcgtggtgtgcctgctgaacagcttttatccgaaagatattaacgtgaaatggaaagtggatggcgtgattcaggataccggcattcaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctatagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgaatatctgagccatgaactgtatagctgcgaaattacccataaaagcctgccgagcaccctgattaaaagctttcagcgcagcgaatgccagcgcgtggat

SEQ ID NO: 46: AA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 110E3

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC RSSQSIVYISGSTYLE WYLQKPGQSPKLLIY KVSSRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC FQGSHVPWT FGGGTKLEIKRNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD

SEQ ID NO: 47: NA-последовательность легкой цепи химерного моноклонального антитела мышь-собака 22A11

gacatccagatgaaccagtctccatccagtctgtctgcatcccttggagacacaattaccatcacttgccatgccagtcagaacattaatgtttggttaagctggtaccagcagaaaccaggaaatattcctaaacttttgatctataagtcttccaacttgcacacaggcgtcccatcaaggtttagtggcagtggatctggaacaggtttcacattaaccatcagcagcctgcagcctgaagacattgccacttactactgtcaacagggtcaaagttatccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgcaacgatgcgcagccggcggtgtatctgtttcagccgagcccggatcagctgcataccggcagcgcgagcgtggtgtgcctgctgaacagcttttatccgaaagatattaacgtgaaatggaaagtggatggcgtgattcaggataccggcattcaggaaagcgtgaccgaacaggatagcaaagatagcacctatagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgaatatctgagccatgaactgtatagctgcgaaattacccataaaagcctgccgagcaccctgattaaaagctttcagcgcagcgaatgccagcgcgtggat

SEQ ID NO: 48: AA-последовательность легкой цепи химерного антитела мышь-собака 22A11

SEQ ID NO: 49: NA-последовательность легкой цепи канинизированного 12B3 (VL1)

gatattgtgatgacccagaccccgctgagcctgagcgtgagcccgggcgaaccggcgagcattagctgccgcagcagccagagcattgtgtatagcaacggcaacacctatctggaatggtttcagcagaaaccgggccagagcccgcagcgcctgatttataaagtgagcaaccgctttagcggcgtgccggatcgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgcgcattagccgcgtggaagcggatgatgcgggcgtgtattattgctttcagggcagccatgtgccgtggacctttggcggcggcaccaaactggaaattaaaaggaacgacgctcagccagccgtgtacctcttccagccttcgccggaccagcttcatacggggtcagcgtcggtggtgtgcctgttgaactcgttttaccccaaggacattaacgtgaagtggaaggtagacggggtaattcaagacactggcattcaagagtccgtcacggaacaagactcaaaagactcaacgtattcactgtcgtcaaccttgacgatgtcaagcaccgagtatcttagccatgagctgtattcgtgcgagatcacccacaagtccctcccctccactcttatcaaatcctttcagcggtcggaatgtcagcgggtcgat

SEQ ID NO: 50: AA-последовательность легкой цепи канинизированного 12B3 (VL1)

SEQ ID NO: 51: NA-последовательность легкой цепи канинизированного 12B3 (VL2)

gatattgtgatgacccagaccccgctgagcctgagcgtgagcccgggcgaaccggcgagcattagctgccgcagcagccagagcattgtgtatagcaacggcaacacctatctggaatggtatcagcagaaaccgggccagagcccgaaactgctgatttataaagtgagcaaccgctttagcggcgtgccggatcgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgcgcattagccgcgtggaagcggatgatgcgggcgtgtattattgctttcagggcagccatgtgccgtggacctttggcggcggcaccaaactggaaattaaaaggaacgacgctcagccagccgtgtacctcttccagccttcgccggaccagcttcatacggggtcagcgtcggtggtgtgcctgttgaactcgttttaccccaaggacattaacgtgaagtggaaggtagacggggtaattcaagacactggcattcaagagtccgtcacggaacaagactcaaaagactcaacgtattcactgtcgtcaaccttgacgatgtcaagcaccgagtatcttagccatgagctgtattcgtgcgagatcacccacaagtccctcccctccactcttatcaaatcctttcagcggtcggaatgtcagcgggtcgat

SEQ ID NO: 52: AA-последовательность легкой цепи канинизированного 12B3 (VL2)

SEQ ID NO: 53: NA-последовательность легкой цепи канинизированного 12B3 (VL3)

gatgtgctgatgacccagaccccgctgagcctgagcgtgagcccgggcgaaccggcgagcattagctgccgcagcagccagagcattgtgtatagcaacggcaacacctatctggaatggtatctgcagaaaccgggccagagcccgaaactgctgatttataaagtgagcaaccgctttagcggcgtgccggatcgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttaccctgcgcattagccgcgtggaagcggatgatgcgggcgtgtattattgctttcagggcagccatgtgccgtggacctttggcggcggcaccaaactggaactgaaaaggaacgacgctcagccagccgtgtacctcttccagccttcgccggaccagcttcatacggggtcagcgtcggtggtgtgcctgttgaactcgttttaccccaaggacattaacgtgaagtggaaggtagacggggtaattcaagacactggcattcaagagtccgtcacggaacaagactcaaaagactcaacgtattcactgtcgtcaaccttgacgatgtcaagcaccgagtatcttagccatgagctgtattcgtgcgagatcacccacaagtccctcccctccactcttatcaaatcctttcagcggtcggaatgtcagcgggtcgat

SEQ ID NO: 54: AA-последовательность легкой цепи канинизированного 12B3 (VL3)

SEQ ID NO: 55: NA-последовательность легкой цепи канинизированного 39A11 (VL1)

gaaattgtgatgacccagagcccggcgagcctgagcctgagccaggaagaaaaagtgaccattacctgccgcgcgagcagcagcgtgagcagcagctatctgcattggtatcagcagaaaccgggccaggcgccgaaactgctgatttatagcaccagcaacctggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattttagctttaccattagcagcctggaaccggaagatgtggcggtgtattattgccagcagtatagcggcctgccgctgacctttggcggcggcaccaaactggaaattaaaaggaacgacgctcagccagccgtgtacctcttccagccttcgccggaccagcttcatacggggtcagcgtcggtggtgtgcctgttgaactcgttttaccccaaggacattaacgtgaagtggaaggtagacggggtaattcaagacactggcattcaagagtccgtcacggaacaagactcaaaagactcaacgtattcactgtcgtcaaccttgacgatgtcaagcaccgagtatcttagccatgagctgtattcgtgcgagatcacccacaagtccctcccctccactcttatcaaatcctttcagcggtcggaatgtcagcgggtcgat

SEQ ID NO: 56: AA-последовательность легкой цепи канинизированного 39A11 (VL1)

SEQ ID NO: 57: NA-последовательность легкой цепи канинизированного 39A11 (VL2)

gaaaacgtgctgacccagagcccggcgagcctgagcctgagccaggaagaaaaagtgaccattacctgccgcgcgagcagcagcgtgagcagcagctatctgcattggtatcagcagaaaccgggccaggcgccgaaactgtggatttttagcaccagcaacctggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccgattatagctttaccattagcagcctggaaccggaagatgtggcggtgtattattgccagcagtatagcggcctgccgctgacctttggcggcggcaccaaactggaactgaaaaggaacgacgctcagccagccgtgtacctcttccagccttcgccggaccagcttcatacggggtcagcgtcggtggtgtgcctgttgaactcgttttaccccaaggacattaacgtgaagtggaaggtagacggggtaattcaagacactggcattcaagagtccgtcacggaacaagactcaaaagactcaacgtattcactgtcgtcaaccttgacgatgtcaagcaccgagtatcttagccatgagctgtattcgtgcgagatcacccacaagtccctcccctccactcttatcaaatcctttcagcggtcggaatgtcagcgggtcgat

SEQ ID NO: 58: AA-последовательность легкой цепи канинизированного 39A11 (VL2)

SEQ ID NO: 59: NA-последовательность легкой цепи канинизированного 39A11 (VL3)

gaaaacgtgctgacccagagcccggcgagcctgagcctgagcccgggcgaaaaagtgaccattacctgccgcgcgagcagcagcgtgagcagcagctatctgcattggtatcagcagaaaccgggccagagcccgaaactgtggatttttagcaccagcaacctggcgagcggcgtgccgagccgctttagcggcagcggcagcggcaccagctatagctttaccattagcagcctggaaccggaagatgtggcggtgtattattgccagcagtatagcggcctgccgctgacctttggcggcggcaccaaactggaactgaaaaggaacgacgctcagccagccgtgtacctcttccagccttcgccggaccagcttcatacggggtcagcgtcggtggtgtgcctgttgaactcgttttaccccaaggacattaacgtgaagtggaaggtagacggggtaattcaagacactggcattcaagagtccgtcacggaacaagactcaaaagactcaacgtattcactgtcgtcaaccttgacgatgtcaagcaccgagtatcttagccatgagctgtattcgtgcgagatcacccacaagtccctcccctccactcttatcaaatcctttcagcggtcggaatgtcagcgggtcgat

SEQ ID NO: 60: AA-последовательность легкой цепи канинизированного 39A11 (VL3)

SEQ ID NO: 61: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH1) с IgGB

gaagtgcagctggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgtggcgagcggctatacctttaccaactatggcatgaactgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctgcagtgggtggcgtggattaacacctataccggcgaaccgacctatgcggatgattttaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacaccctgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgccgcagcatttattatccgtattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggaccttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcaacggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 62: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH1) с IgGB

SEQ ID NO: 63: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH2) с IgGB

gaaattcagctggtgcagagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggctatacctttaccaactatggcatgaactgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctgcagtggatgggctggattaacacctataccggcgaaccgacctatgcggatgattttaaaggccgctttacctttagcctggataacgcgaaaaacaccctgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtatttttgcgcgcgccgcagcatttattatccgtattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggaccttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcaacggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 64: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH2) с IgGB

SEQ ID NO: 65: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH3) с IgGB

gaaattcagctggtgcagagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcgtgcgcctgagctgcaaagcgagcggctatacctttaccaactatggcatgaactgggtgaaacaggcgccgggcaaaggcctgcagtggatgggctggattaacacctataccggcgaaccgacctatgcggatgattttaaaggccgctttacctttagcctggataacgcgaaaaacaccgcgtatctgcagattaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtatttttgcgcgcgccgcagcatttattatccgtattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggaccttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcaacggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 66: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH3) с IgGB

SEQ ID NO: 67: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH1) с IgGB

gaagtgcagctggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgtggcgagcggctttacctttagcgattattatatgagctgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatgggtggcgtttattcgcaacaaagcgaacggctataccaccgaatatagcgcgagcctgaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacatggcgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgcgagctttggcctgatgtattattttgattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggaccttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcaacggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 68: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH1) с IgGB

SEQ ID NO: 69: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH2) с IgGB

gaagtgcagctggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgcgaccagcggctttacctttagcgattattatatgagctgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggatgggctttattcgcaacaaagcgaacggctataccaccgaatatagcgcgagcctgaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacatggcgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgtgcgctttggcctgatgtattattttgattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggaccttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcaacggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 70: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH2) с IgGB

SEQ ID NO: 71: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH3) с IgGB

gaagtgaaactggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgcgaccagcggctttacctttagcgattattatatgagctgggtgcgccaggcgccgggcaaagcgctggaatggatgggctttattcgcaacaaagcgaacggctataccaccgaatatagcgcgagcctgaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgtgcgctttggcctgatgtattattttgattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggaccttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcaacggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 72: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH3) с IgGB

SEQ ID NO: 73: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH1) с IgGBm

gaagtgcagctggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgtggcgagcggctatacctttaccaactatggcatgaactgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctgcagtgggtggcgtggattaacacctataccggcgaaccgacctatgcggatgattttaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacaccctgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgcgcgccgcagcatttattatccgtattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggctcttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcgccggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 74: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH1) с IgGBm

SEQ ID NO: 75: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH2) с IgGBm

gaaattcagctggtgcagagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcaaagcgagcggctatacctttaccaactatggcatgaactgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctgcagtggatgggctggattaacacctataccggcgaaccgacctatgcggatgattttaaaggccgctttacctttagcctggataacgcgaaaaacaccctgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtatttttgcgcgcgccgcagcatttattatccgtattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggctcttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcgccggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 76: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH2) с IgGBm

SEQ ID NO: 77. NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH3) с IgGBm

gaaattcagctggtgcagagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcgtgcgcctgagctgcaaagcgagcggctatacctttaccaactatggcatgaactgggtgaaacaggcgccgggcaaaggcctgcagtggatgggctggattaacacctataccggcgaaccgacctatgcggatgattttaaaggccgctttacctttagcctggataacgcgaaaaacaccgcgtatctgcagattaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtatttttgcgcgcgccgcagcatttattatccgtattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggctcttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcgccggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 78: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 12B3 (VH3) с IgGBm

SEQ ID NO: 79: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH1) с IgGBm

gaagtgcagctggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgtggcgagcggctttacctttagcgattattatatgagctgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatgggtggcgtttattcgcaacaaagcgaacggctataccaccgaatatagcgcgagcctgaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacatggcgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgcgagctttggcctgatgtattattttgattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggctcttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcgccggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 80: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH1) с IgGBm

SEQ ID NO: 81: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH2) с IgGBm

gaagtgcagctggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgcgaccagcggctttacctttagcgattattatatgagctgggtgcgccaggcgccgggcaaaggcctggaatggatgggctttattcgcaacaaagcgaacggctataccaccgaatatagcgcgagcctgaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacatggcgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgtgcgctttggcctgatgtattattttgattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggctcttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcgccggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 82: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH2) с IgGBm

SEQ ID NO: 83: NA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH3) с IgGBm

gaagtgaaactggtggaaagcggcggcgatctggtgaaaccgggcggcagcctgcgcctgagctgcgcgaccagcggctttacctttagcgattattatatgagctgggtgcgccaggcgccgggcaaagcgctggaatggatgggctttattcgcaacaaagcgaacggctataccaccgaatatagcgcgagcctgaaaggccgctttaccattagccgcgataacgcgaaaaacatgctgtatctgcagatgaacagcctgcgcgcggaagataccgcggtgtattattgcgtgcgctttggcctgatgtattattttgattattggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagcgcttccacaaccgcgccatcagtctttccgttggccccatcatgcgggtcgacgagcggatcgactgtggccctggcgtgcttggtgtcgggatactttcccgaacccgtcacggtcagctggaactccggatcgcttacgagcggtgtgcatacgttcccctcggtcttgcaatcatcagggctctactcgctgtcgagcatggtaacggtgccctcatcgaggtggccctccgaaacgttcacatgtaacgtagcacatccagcctccaaaaccaaggtggataaacccgtgccgaaaagagagaatgggcgggtgcctcgaccccctgattgccccaagtgtccggctccggaaatgctcggtggaccctcagtgtttatcttccctccgaagcccaaggacactctgctgatcgcgcgcactccagaagtaacatgtgtagtggtggctcttgatcccgaggaccccgaagtccagatctcctggtttgtagatgggaaacagatgcagaccgcaaaaactcaacccagagaggagcagttcgccggaacataccgagtggtatccgtccttccgattggccaccaggactggttgaaagggaagcagtttacgtgtaaagtcaacaataaggggttgcctagccctattgagcggacgatttcgaaagctaggggacaggcccaccagccatcggtctatgtccttccgccttcccgcgaggagctctcgaagaatacagtgagccttacatgcctcattaaggatttcttcccgcctgatatcgacgtagagtggcaatcaaacggtcaacaggagccggaatccaagtatagaaccactccgccccagcttgacgaggacggatcatactttttgtattcaaaactgtcggtggataagagccggtggcagagaggtgacaccttcatctgtgcggtgatgcacgaagcactccataatcactacacccaagagagcctctcgcattcccccggaaag

SEQ ID NO: 84: AA-последовательность тяжелой цепи канинизированного 39A11 (VH3) с IgGBm

SEQ ID NO: 125: NA-последовательность собачьего CTLA-4 (NCBI Эталонная последовательность: NP_001003106).

atggcgggctttggctttcgccgccatggcgcgcagccggatctggcgagccgcacctggccgtgcaccgcgctgtttagcctgctgtttattccggtgtttagcaaaggcatgcatgtggcgcagccggcggtggtgctggcgagcagccgcggcgtggcgagctttgtgtgcgaatatggcagcagcggcaacgcggcggaagtgcgcgtgaccgtgctgcgccaggcgggcagccagatgaccgaagtgtgcgcggcgacctataccgtggaagatgaactggcgtttctggatgatagcacctgcaccggcaccagcagcggcaacaaagtgaacctgaccattcagggcctgcgcgcgatggataccggcctgtatatttgcaaagtggaactgatgtatccgccgccgtattatgtgggcatgggcaacggcacccagatttatgtgattgatccggaaccgtgcccggatagcgattttctgctgtggattctggcggcggtgagcagcggcctgtttttttatagctttctgattaccgcggtgagcctgagcaaaatgctgaaaaaacgcagcccgctgaccaccggcgtgtatgtgaaaatgccgccgaccgaaccggaatgcgaaaaacagtttcagccgtattttattccgattaac

SEQ ID NO: 126: AA-последовательность собачьего CTLA-4 (NCBI Эталонная последовательность: NP_001003106).SEQ ID NO: 138, зрелая последовательность (т.е., без сигнальной последовательности) выделено жирным шрифтом:

SEQ ID NO: 127: Генетически модифицированная cFc-область собачьего IgG B (из U.S. 10106107 B2)

ПРИМЕР 8

КАРТИРОВАНИЕ ЭПИТОПА КАНИНИЗИРОВАННОГО МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА 2B3 И 39A11 ПРОТИВ cCTLA-4

Взаимодействие антител с их родственными белковыми антигенами опосредуется связыванием определенных аминокислот антител (паратопов) со специфическими аминокислотами (эпитопами) антигенов-мишеней. Эпитоп представляет собой антигенную детерминанту, которая вызывает специфическую реакцию иммуноглобулина. Эпитоп состоит из группы аминокислот на поверхности антигена. Интересующий белок может содержать несколько эпитопов, которые распознаются разными антителами. Эпитопы, распознаваемые антителами, классифицируются как линейные или конформационные эпитопы. Линейные эпитопы образуются отрезком непрерывной последовательности аминокислот в белке, в то время как конформационные эпитопы состоят из аминокислот, которые прерываются (например, располагаются далеко друг от друга) в первичной аминокислотной последовательности, но объединяются в трехмерной белковой структуре.

Картирование эпитопов относится к процессу идентификации аминокислотных последовательностей (т.е. эпитопов), которые распознаются антителами на своих антигенах-мишенях. Идентификация эпитопов, распознаваемых моноклональными антителами (mAb) на антигенах-мишенях, имеет важные применения. Например, это может помочь в разработке новых терапевтических средств, диагностических средств и вакцин. Картирование эпитопов также может помочь в выборе оптимизированных терапевтических mAb и помочь выяснить механизмы их действия. Информация об эпитопах собачьего CTLA-4 может также выявить уникальные эпитопы и определить защитные или патогенные эффекты вакцин. Идентификация эпитопа также может привести к разработке субъединичных вакцин на основе химического или генетического связывания идентифицированного пептидного эпитопа с белком-носителем или другими иммуностимулирующими агентами.

Картирование эпитопа может быть выполнено с использованием поликлональных или моноклональных антител, и несколько методов используются для идентификации эпитопа в зависимости от предполагаемой природы эпитопа (т.е. линейной или конформационной). Картирование линейных эпитопов является более эффективным и его относительно проще осуществить. Для этой цели в коммерческих службах картирования линейных эпитопов часто используется сканирование пептидов. В этом случае перекрывающийся набор коротких пептидных последовательностей целевого белка химически синтезируется и тестируется на их способность связываться с интересующими антителами. Стратегия является быстрой, высокопроизводительной и относительно недорогой в исполнении. С другой стороны, картирование прерывистого эпитопа является более сложным с технической точки зрения и требует более специализированных методов, таких как совместная рентгеновская кристаллография моноклонального антитела вместе с его белком-мишенью, водородно-дейтериевый обмен (H/D), масс-спектрометрия в комбинации с ферментативным расщеплением, а также несколько других методов, известных специалистам в данной области.

Картирование эпитопов собачьего рецептора альфа CTLA-4 с помощью масс-спектроскопии:

Чтобы определить эпитоп для канинизированного 12B3 (например, 12B3L2H3) и 39A11 (например, 39A11L3H3) на собачьем CTLA-4, каждый из комплексов cCTLA-4/c12B3L2H3 и cCTLA-4/c39A11L2H3 инкубировали с дейтерированными кросс-линкерами и подвергали мультиферментативному расщеплению. После обогащения перекрестно связанных пептидов образцы анализировали масс-спектрометрией высокого разрешения (nLC-LTQ-Orbitrap MS), а полученные данные анализировали с использованием программного обеспечения XQuest и Stavrox.

Анализ показывает, что c12B3L2H3 взаимодействует с аминокислотными остатками в положениях 35, 38, 51, 53, 90, 93, 98 и 102 на cCTLA-4, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138 (Фиг.7A); c39A11L2H3 взаимодействует с аминокислотными остатками в положениях 35, 38, 42, 93 и 102 на cCTLA-4, содержащем аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138 (Фиг.7B). Две специфические области собачьего белка CTLA-4 изображены на Фиг.7A и 7B: аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 132 и SEQ ID NO: 133, соответственно, (см. Таблицу 8 ниже). Примечательно, что оба антитела связываются с SEQ ID NO: 134 и SEQ ID NO: 136, которые содержат мотив MYPPPY (SEQ ID NO: 137), на cCTLA-4. Мотив MYPPPY формирует петлю связывания с CD80 и CD86, которые являются консервативным мотивом для CTLA-4 у всех видов. c12B3 также, по-видимому, связывается с одной дополнительной областью собачьего CTLA-4, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135. В комбинации с результатами примера 4 результаты картирования эпитопа дополнительно подтверждают, что как c12B3, так и c39A11 являются функциональными антителами со способностью блокировать взаимодействие собачьего CTLA-4 с его лигандом CD80 и CD86. Более того, канинизированные антитела, которые связываются с эпитопами в SEQ ID NO: 134 и SEQ ID NO: 136, также являются частью настоящего изобретения.

ТАБЛИЦА 8
АМИНОКИСЛОТНЫЕ ОБЛАСТИ СОБАЧЬЕГО CTLA-4, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С 12B3 И C39A1
SEQ ID NO: 132	AEVRVTVLRQAGSQMTEVCAATYTVEDELAF
SEQ ID NO: 133	YICKVELMYPPPYYVGMGNGT
SEQ ID NO: 134	TVLRQAGS
SEQ ID NO: 135	ATYTV
SEQ ID NO: 136	YICKVELMYPPPY
SEQ ID NO: 137	MYPPPY

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110>ИНТЕРВЕТ ИНТЕРНЭШНЛ Б.В.

<120>Антитела против собачьего CTLA-4

<130>24814-US-PCT

<150>US 62/874,287

<151>2019-07-15

<150>US 63/048,873

<151>2020-07-07

<150>US 62/926,047

<151>2019-10-25

<160>138

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>348

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>1

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180

gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac atggctacat atttctgtgc aagacggtca 300

atttattacc cgtactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348

<210>2

<211>116

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>2

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210>3

<211>348

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>3

cagatccagt tggtacagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca acctatggag tgagctgggt gaaacaggct 120

ccaggaaagg gtttaaggtg gatgggctgg ataaacacct actctggaat gccaacatat 180

gttgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgccttt 240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctatat atttctgtgc aagacggggt 300

atctcctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348

<210>4

<211>116

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>4

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Met Pro Thr Tyr Val Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Ile Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210>5

<211>360

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>5

gaggtgaagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc cctgagtctc 60

tcctgtgcaa cttctggatt caccttcagt gattactaca tgagctgggt ccgccagtct 120

ccggggaagg cacttgagtg gatgggtttt attagaaaca aagctaatgg ttacacaaca 180

gagtacagcg catctctgaa gggtcggttc accatctcca gagataattc ccaaagcatc 240

ctctatcttc aaatgaatgt cctgagagct gaggacagtg ccacttatta ctgtgtaaga 300

tttgggttaa tgtactactt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360

<210>6

<211>120

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>6

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Val Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210>7

<211>348

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>7

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180

gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagaaggggg 300

acctactata ggccctgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348

<210>8

<211>116

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>8

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Thr Tyr Tyr Arg Pro Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210>9

<211>348

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>9

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctggata taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180

gctgatgact tcaagggacg ggttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgccttt 240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aaggcggggg 300

gtacgactgg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348

<210>10

<211>116

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>10

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Val Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210>11

<211>363

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>11

caggtccaac tgcagcagcc tgggactgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60

tcctgcaagg cctctggcta taccttcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120

cctggacaag gccttgagtg gattggaaat atcaatccta gcaatggtgg tactaggttc 180

aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actgaagaca aatcctccag cacagcctac 240

atgcagctca gtagcctgac atctgaggac tctgcggtct attattgtgc aagatcgaac 300

tacggtagtg gctgggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360

gca 363

<210>12

<211>121

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>12

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Arg Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Glu Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Asn Tyr Gly Ser Gly Trp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210>13

<211>336

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>13

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagcattgta tatagtaatg gaaacaccta tttagaatgg

120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt

180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc

240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg

300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336

<210>14

<211>112

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>14

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>15

<211>336

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>15

gatgttttga tgacccagac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcacgcctcc 60

atctcttgca aatctagtca gagcattgta tatattaatg gaaacaccta tttagaatgg 120

tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaacgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg 300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336

<210>16

<211>112

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>16

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp His Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ile

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>17

<211>324

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>17

gaaaatgtgc tcatccagtc tccagcaatc atgtctgctt ctccagggga aaaggtcacc 60

atgacctgca gggccagctc aagtgtaagt tccagttact tgcactggta ccagcagaag 120

tcaggtgcct cccccaaact ctggattttt agcacatcca acttggcttc tggagtccct 180

gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttattctc tcacaatcaa cagtgtggag 240

gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtacagtg gtctcccact cacgttcgga 300

ggggggacca agctggaaat aaaa 324

<210>18

<211>108

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>18

Glu Asn Val Leu Ile Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Phe Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Leu Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210>19

<211>336

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>19

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagtattgta tatagtcatg gaaacaccta tttagaatgg 120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag gtcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg 300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336

<210>20

<211>112

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>20

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>21

<211>336

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>21

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagcattgta tatattagtg gaagcaccta tttagaatgg 120

tatctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc cagtcgattt 180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg 300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336

<210>22

<211>112

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>22

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ile

20 25 30

Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210>23

<211>321

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>23

gacatccaga tgaaccagtc tccatccagt ctgtctgcat cccttggaga cacaattacc 60

atcacttgcc atgccagtca gaacattaat gtttggttaa gctggtacca gcagaaacca 120

ggaaatattc ctaaactttt gatctataag tcttccaact tgcacacagg cgtcccatca 180

aggtttagtg gcagtggatc tggaacaggt ttcacattaa ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagacattg ccacttacta ctgtcaacag ggtcaaagtt atccgtggac gttcggtgga 300

ggcaccaagc tggaaatcaa a 321

<210>24

<211>107

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>24

Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ser Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210>25

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>25

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct

120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat

180

gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat

240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac atggctacat atttctgtgc aagacggtca

300

atttattacc cgtactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctcagc gagcaccacc

360

gcgccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc tgcggcagca ccagcggcag caccgtggcg

420

ctggcgtgcc tggtgagcgg ctattttccg gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc

480

agcctgacca gcggcgtgca tacctttccg agcgtgctgc agagcagcgg cctgtatagc

540

ctgagcagca tggtgaccgt gccgagcagc cgctggccga gcgaaacctt tacctgcaac

600

gtggcgcatc cggcgagcaa aaccaaagtg gataaaccgg tgccgaaacg cgaaaacggc

660

cgcgtgccgc gcccgccgga ttgcccgaaa tgcccggcgc cggaaatgct gggcggcccg

720

agcgtgttta tttttccgcc gaaaccgaaa gataccctgc tgattgcgcg caccccggaa

780

gtgacctgcg tggtggtgga tctggatccg gaagatccgg aagtgcagat tagctggttt

840

gtggatggca aacagatgca gaccgcgaaa acccagccgc gcgaagaaca gtttaacggc

900

acctatcgcg tggtgagcgt gctgccgatt ggccatcagg attggctgaa aggcaaacag

960

tttacctgca aagtgaacaa caaagcgctg ccgagcccga ttgaacgcac cattagcaaa

1020

gcgcgcggcc aggcgcatca gccgagcgtg tatgtgctgc cgccgagccg cgaagaactg

1080

agcaaaaaca ccgtgagcct gacctgcctg attaaagatt tttttccgcc ggatattgat

1140

gtggaatggc agagcaacgg ccagcaggaa ccggaaagca aatatcgcac caccccgccg

1200

cagctggatg aagatggcag ctattttctg tatagcaaac tgagcgtgga taaaagccgc

1260

tggcagcgcg gcgatacctt tatttgcgcg gtgatgcatg aagcgctgca taaccattat

1320

acccaggaaa gcctgagcca tagcccgggc aaa 1353

<210>26

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>26

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>27

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>27

cagatccagt tggtacagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca acctatggag tgagctgggt gaaacaggct

120

ccaggaaagg gtttaaggtg gatgggctgg ataaacacct actctggaat gccaacatat

180

gttgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgccttt

240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctatat atttctgtgc aagacggggt

300

atctcctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctcagc gagcaccacc

360

gcgccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc tgcggcagca ccagcggcag caccgtggcg

420

ctggcgtgcc tggtgagcgg ctattttccg gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc

480

agcctgacca gcggcgtgca tacctttccg agcgtgctgc agagcagcgg cctgtatagc

540

ctgagcagca tggtgaccgt gccgagcagc cgctggccga gcgaaacctt tacctgcaac

600

gtggcgcatc cggcgagcaa aaccaaagtg gataaaccgg tgccgaaacg cgaaaacggc

660

cgcgtgccgc gcccgccgga ttgcccgaaa tgcccggcgc cggaaatgct gggcggcccg

720

agcgtgttta tttttccgcc gaaaccgaaa gataccctgc tgattgcgcg caccccggaa

780

gtgacctgcg tggtggtgga tctggatccg gaagatccgg aagtgcagat tagctggttt

840

gtggatggca aacagatgca gaccgcgaaa acccagccgc gcgaagaaca gtttaacggc

900

acctatcgcg tggtgagcgt gctgccgatt ggccatcagg attggctgaa aggcaaacag

960

tttacctgca aagtgaacaa caaagcgctg ccgagcccga ttgaacgcac cattagcaaa

1020

gcgcgcggcc aggcgcatca gccgagcgtg tatgtgctgc cgccgagccg cgaagaactg

1080

agcaaaaaca ccgtgagcct gacctgcctg attaaagatt tttttccgcc ggatattgat

1140

gtggaatggc agagcaacgg ccagcaggaa ccggaaagca aatatcgcac caccccgccg

1200

cagctggatg aagatggcag ctattttctg tatagcaaac tgagcgtgga taaaagccgc

1260

tggcagcgcg gcgatacctt tatttgcgcg gtgatgcatg aagcgctgca taaccattat

1320

acccaggaaa gcctgagcca tagcccgggc aaa 1353

<210>28

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>28

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Met Pro Thr Tyr Val Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Ile Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>29

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>29

gaggtgaagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc cctgagtctc 60

tcctgtgcaa cttctggatt caccttcagt gattactaca tgagctgggt ccgccagtct

120

ccggggaagg cacttgagtg gatgggtttt attagaaaca aagctaatgg ttacacaaca

180

gagtacagcg catctctgaa gggtcggttc accatctcca gagataattc ccaaagcatc

240

ctctatcttc aaatgaatgt cctgagagct gaggacagtg ccacttatta ctgtgtaaga

300

tttgggttaa tgtactactt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca

360

gcgagcacca ccgcgccgag cgtgtttccg ctggcgccga gctgcggcag caccagcggc

420

agcaccgtgg cgctggcgtg cctggtgagc ggctattttc cggaaccggt gaccgtgagc

480

tggaacagcg gcagcctgac cagcggcgtg catacctttc cgagcgtgct gcagagcagc

540

ggcctgtata gcctgagcag catggtgacc gtgccgagca gccgctggcc gagcgaaacc

600

tttacctgca acgtggcgca tccggcgagc aaaaccaaag tggataaacc ggtgccgaaa

660

cgcgaaaacg gccgcgtgcc gcgcccgccg gattgcccga aatgcccggc gccggaaatg

720

ctgggcggcc cgagcgtgtt tatttttccg ccgaaaccga aagataccct gctgattgcg

780

cgcaccccgg aagtgacctg cgtggtggtg gatctggatc cggaagatcc ggaagtgcag

840

attagctggt ttgtggatgg caaacagatg cagaccgcga aaacccagcc gcgcgaagaa

900

cagtttaacg gcacctatcg cgtggtgagc gtgctgccga ttggccatca ggattggctg

960

aaaggcaaac agtttacctg caaagtgaac aacaaagcgc tgccgagccc gattgaacgc

1020

accattagca aagcgcgcgg ccaggcgcat cagccgagcg tgtatgtgct gccgccgagc

1080

cgcgaagaac tgagcaaaaa caccgtgagc ctgacctgcc tgattaaaga tttttttccg

1140

ccggatattg atgtggaatg gcagagcaac ggccagcagg aaccggaaag caaatatcgc

1200

accaccccgc cgcagctgga tgaagatggc agctattttc tgtatagcaa actgagcgtg

1260

gataaaagcc gctggcagcg cggcgatacc tttatttgcg cggtgatgca tgaagcgctg

1320

cataaccatt atacccagga aagcctgagc catagcccgg gcaaa 1365

<210>30

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>30

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Val Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>31

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>31

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct

120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat

180

gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat

240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagaaggggg

300

acctactata ggccctgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctcagc gagcaccacc

360

gcgccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc tgcggcagca ccagcggcag caccgtggcg

420

ctggcgtgcc tggtgagcgg ctattttccg gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc

480

agcctgacca gcggcgtgca tacctttccg agcgtgctgc agagcagcgg cctgtatagc

540

ctgagcagca tggtgaccgt gccgagcagc cgctggccga gcgaaacctt tacctgcaac

600

gtggcgcatc cggcgagcaa aaccaaagtg gataaaccgg tgccgaaacg cgaaaacggc

660

cgcgtgccgc gcccgccgga ttgcccgaaa tgcccggcgc cggaaatgct gggcggcccg

720

agcgtgttta tttttccgcc gaaaccgaaa gataccctgc tgattgcgcg caccccggaa

780

gtgacctgcg tggtggtgga tctggatccg gaagatccgg aagtgcagat tagctggttt

840

gtggatggca aacagatgca gaccgcgaaa acccagccgc gcgaagaaca gtttaacggc

900

acctatcgcg tggtgagcgt gctgccgatt ggccatcagg attggctgaa aggcaaacag

960

tttacctgca aagtgaacaa caaagcgctg ccgagcccga ttgaacgcac cattagcaaa

1020

gcgcgcggcc aggcgcatca gccgagcgtg tatgtgctgc cgccgagccg cgaagaactg

1080

agcaaaaaca ccgtgagcct gacctgcctg attaaagatt tttttccgcc ggatattgat

1140

gtggaatggc agagcaacgg ccagcaggaa ccggaaagca aatatcgcac caccccgccg

1200

cagctggatg aagatggcag ctattttctg tatagcaaac tgagcgtgga taaaagccgc

1260

tggcagcgcg gcgatacctt tatttgcgcg gtgatgcatg aagcgctgca taaccattat

1320

acccaggaaa gcctgagcca tagcccgggc aaa 1353

<210>32

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>32

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Thr Tyr Tyr Arg Pro Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>33

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>33

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctggata taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct

120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat

180

gctgatgact tcaagggacg ggttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgccttt

240

ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aaggcggggg

300

gtacgactgg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctcagc gagcaccacc

360

gcgccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc tgcggcagca ccagcggcag caccgtggcg

420

ctggcgtgcc tggtgagcgg ctattttccg gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc

480

agcctgacca gcggcgtgca tacctttccg agcgtgctgc agagcagcgg cctgtatagc

540

ctgagcagca tggtgaccgt gccgagcagc cgctggccga gcgaaacctt tacctgcaac

600

gtggcgcatc cggcgagcaa aaccaaagtg gataaaccgg tgccgaaacg cgaaaacggc

660

cgcgtgccgc gcccgccgga ttgcccgaaa tgcccggcgc cggaaatgct gggcggcccg

720

agcgtgttta tttttccgcc gaaaccgaaa gataccctgc tgattgcgcg caccccggaa

780

gtgacctgcg tggtggtgga tctggatccg gaagatccgg aagtgcagat tagctggttt

840

gtggatggca aacagatgca gaccgcgaaa acccagccgc gcgaagaaca gtttaacggc

900

acctatcgcg tggtgagcgt gctgccgatt ggccatcagg attggctgaa aggcaaacag

960

tttacctgca aagtgaacaa caaagcgctg ccgagcccga ttgaacgcac cattagcaaa

1020

gcgcgcggcc aggcgcatca gccgagcgtg tatgtgctgc cgccgagccg cgaagaactg

1080

agcaaaaaca ccgtgagcct gacctgcctg attaaagatt tttttccgcc ggatattgat

1140

gtggaatggc agagcaacgg ccagcaggaa ccggaaagca aatatcgcac caccccgccg

1200

cagctggatg aagatggcag ctattttctg tatagcaaac tgagcgtgga taaaagccgc

1260

tggcagcgcg gcgatacctt tatttgcgcg gtgatgcatg aagcgctgca taaccattat

1320

acccaggaaa gcctgagcca tagcccgggc aaa 1353

<210>34

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>34

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Val Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>35

<211>1368

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>35

caggtccaac tgcagcagcc tgggactgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60

tcctgcaagg cctctggcta taccttcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg

120

cctggacaag gccttgagtg gattggaaat atcaatccta gcaatggtgg tactaggttc

180

aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actgaagaca aatcctccag cacagcctac

240

atgcagctca gtagcctgac atctgaggac tctgcggtct attattgtgc aagatcgaac

300

tacggtagtg gctgggcctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct

360

gcagcgagca ccaccgcgcc gagcgtgttt ccgctggcgc cgagctgcgg cagcaccagc

420

ggcagcaccg tggcgctggc gtgcctggtg agcggctatt ttccggaacc ggtgaccgtg

480

agctggaaca gcggcagcct gaccagcggc gtgcatacct ttccgagcgt gctgcagagc

540

agcggcctgt atagcctgag cagcatggtg accgtgccga gcagccgctg gccgagcgaa

600

acctttacct gcaacgtggc gcatccggcg agcaaaacca aagtggataa accggtgccg

660

aaacgcgaaa acggccgcgt gccgcgcccg ccggattgcc cgaaatgccc ggcgccggaa

720

atgctgggcg gcccgagcgt gtttattttt ccgccgaaac cgaaagatac cctgctgatt

780

gcgcgcaccc cggaagtgac ctgcgtggtg gtggatctgg atccggaaga tccggaagtg

840

cagattagct ggtttgtgga tggcaaacag atgcagaccg cgaaaaccca gccgcgcgaa

900

gaacagttta acggcaccta tcgcgtggtg agcgtgctgc cgattggcca tcaggattgg

960

ctgaaaggca aacagtttac ctgcaaagtg aacaacaaag cgctgccgag cccgattgaa

1020

cgcaccatta gcaaagcgcg cggccaggcg catcagccga gcgtgtatgt gctgccgccg

1080

agccgcgaag aactgagcaa aaacaccgtg agcctgacct gcctgattaa agattttttt

1140

ccgccggata ttgatgtgga atggcagagc aacggccagc aggaaccgga aagcaaatat

1200

cgcaccaccc cgccgcagct ggatgaagat ggcagctatt ttctgtatag caaactgagc

1260

gtggataaaa gccgctggca gcgcggcgat acctttattt gcgcggtgat gcatgaagcg

1320

ctgcataacc attataccca ggaaagcctg agccatagcc cgggcaaa 1368

<210>36

<211>456

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>36

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Arg Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Glu Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Asn Tyr Gly Ser Gly Trp Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val

130 135 140

Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His

195 200 205

Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn

210 215 220

Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly

275 280 285

Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

290 295 300

Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln

340 345 350

Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn

355 360 365

Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile

370 375 380

Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr

385 390 395 400

Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr

405 410 415

Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe

420 425 430

Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu

435 440 445

Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>37

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>37

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagcattgta tatagtaatg gaaacaccta tttagaatgg

120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt

180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc

240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg

300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacgca acgatgcgca gccggcggtg

360

tatctgtttc agccgagccc ggatcagctg cataccggca gcgcgagcgt ggtgtgcctg

420

ctgaacagct tttatccgaa agatattaac gtgaaatgga aagtggatgg cgtgattcag

480

gataccggca ttcaggaaag cgtgaccgaa caggatagca aagatagcac ctatagcctg

540

agcagcaccc tgaccatgag cagcaccgaa tatctgagcc atgaactgta tagctgcgaa

600

attacccata aaagcctgcc gagcaccctg attaaaagct ttcagcgcag cgaatgccag

660

cgcgtggat 669

<210>38

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>38

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>39

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>39

gatgttttga tgacccagac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcacgcctcc 60

atctcttgca aatctagtca gagcattgta tatattaatg gaaacaccta tttagaatgg

120

tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaacgattt

180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc

240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg

300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacgca acgatgcgca gccggcggtg

360

tatctgtttc agccgagccc ggatcagctg cataccggca gcgcgagcgt ggtgtgcctg

420

ctgaacagct tttatccgaa agatattaac gtgaaatgga aagtggatgg cgtgattcag

480

gataccggca ttcaggaaag cgtgaccgaa caggatagca aagatagcac ctatagcctg

540

agcagcaccc tgaccatgag cagcaccgaa tatctgagcc atgaactgta tagctgcgaa

600

attacccata aaagcctgcc gagcaccctg attaaaagct ttcagcgcag cgaatgccag

660

cgcgtggat 669

<210>40

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>40

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp His Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ile

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>41

<211>657

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>41

gaaaatgtgc tcatccagtc tccagcaatc atgtctgctt ctccagggga aaaggtcacc 60

atgacctgca gggccagctc aagtgtaagt tccagttact tgcactggta ccagcagaag

120

tcaggtgcct cccccaaact ctggattttt agcacatcca acttggcttc tggagtccct

180

gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttattctc tcacaatcaa cagtgtggag

240

gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtacagtg gtctcccact cacgttcgga

300

ggggggacca agctggaaat aaaacgcaac gatgcgcagc cggcggtgta tctgtttcag

360

ccgagcccgg atcagctgca taccggcagc gcgagcgtgg tgtgcctgct gaacagcttt

420

tatccgaaag atattaacgt gaaatggaaa gtggatggcg tgattcagga taccggcatt

480

caggaaagcg tgaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct atagcctgag cagcaccctg

540

accatgagca gcaccgaata tctgagccat gaactgtata gctgcgaaat tacccataaa

600

agcctgccga gcaccctgat taaaagcttt cagcgcagcg aatgccagcg cgtggat 657

<210>42

<211>219

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>42

Glu Asn Val Leu Ile Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Phe Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Leu Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Asn Asp Ala

100 105 110

Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln Leu His Thr

115 120 125

Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr Pro Lys Asp

130 135 140

Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His Glu Leu

180 185 190

Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu Ile Lys

195 200 205

Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215

<210>43

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>43

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagtattgta tatagtcatg gaaacaccta tttagaatgg

120

tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag gtcctgatct acaaagtttc caaccgattt

180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc

240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg

300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacgca acgatgcgca gccggcggtg

360

tatctgtttc agccgagccc ggatcagctg cataccggca gcgcgagcgt ggtgtgcctg

420

ctgaacagct tttatccgaa agatattaac gtgaaatgga aagtggatgg cgtgattcag

480

gataccggca ttcaggaaag cgtgaccgaa caggatagca aagatagcac ctatagcctg

540

agcagcaccc tgaccatgag cagcaccgaa tatctgagcc atgaactgta tagctgcgaa

600

attacccata aaagcctgcc gagcaccctg attaaaagct ttcagcgcag cgaatgccag

660

cgcgtggat 669

<210>44

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>44

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>45

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>45

gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60

atctcttgca gatctagtca gagcattgta tatattagtg gaagcaccta tttagaatgg

120

tatctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc cagtcgattt

180

tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc

240

agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttccg

300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacgca acgatgcgca gccggcggtg

360

tatctgtttc agccgagccc ggatcagctg cataccggca gcgcgagcgt ggtgtgcctg

420

ctgaacagct tttatccgaa agatattaac gtgaaatgga aagtggatgg cgtgattcag

480

gataccggca ttcaggaaag cgtgaccgaa caggatagca aagatagcac ctatagcctg

540

agcagcaccc tgaccatgag cagcaccgaa tatctgagcc atgaactgta tagctgcgaa

600

attacccata aaagcctgcc gagcaccctg attaaaagct ttcagcgcag cgaatgccag

660

cgcgtggat 669

<210>46

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>46

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ile

20 25 30

Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>47

<211>654

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>47

gacatccaga tgaaccagtc tccatccagt ctgtctgcat cccttggaga cacaattacc 60

atcacttgcc atgccagtca gaacattaat gtttggttaa gctggtacca gcagaaacca

120

ggaaatattc ctaaactttt gatctataag tcttccaact tgcacacagg cgtcccatca

180

aggtttagtg gcagtggatc tggaacaggt ttcacattaa ccatcagcag cctgcagcct

240

gaagacattg ccacttacta ctgtcaacag ggtcaaagtt atccgtggac gttcggtgga

300

ggcaccaagc tggaaatcaa acgcaacgat gcgcagccgg cggtgtatct gtttcagccg

360

agcccggatc agctgcatac cggcagcgcg agcgtggtgt gcctgctgaa cagcttttat

420

ccgaaagata ttaacgtgaa atggaaagtg gatggcgtga ttcaggatac cggcattcag

480

gaaagcgtga ccgaacagga tagcaaagat agcacctata gcctgagcag caccctgacc

540

atgagcagca ccgaatatct gagccatgaa ctgtatagct gcgaaattac ccataaaagc

600

ctgccgagca ccctgattaa aagctttcag cgcagcgaat gccagcgcgt ggat 654

<210>48

<211>218

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>mus musculus-canis familiaris, химерная

<400>48

Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ser Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Asn Asp Ala Gln

100 105 110

Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln Leu His Thr Gly

115 120 125

Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

130 135 140

Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp Thr Gly Ile Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His Glu Leu Tyr

180 185 190

Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu Ile Lys Ser

195 200 205

Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215

<210>49

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>49

gatattgtga tgacccagac cccgctgagc ctgagcgtga gcccgggcga accggcgagc 60

attagctgcc gcagcagcca gagcattgtg tatagcaacg gcaacaccta tctggaatgg

120

tttcagcaga aaccgggcca gagcccgcag cgcctgattt ataaagtgag caaccgcttt

180

agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggca ccgattttac cctgcgcatt

240

agccgcgtgg aagcggatga tgcgggcgtg tattattgct ttcagggcag ccatgtgccg

300

tggacctttg gcggcggcac caaactggaa attaaaagga acgacgctca gccagccgtg

360

tacctcttcc agccttcgcc ggaccagctt catacggggt cagcgtcggt ggtgtgcctg

420

ttgaactcgt tttaccccaa ggacattaac gtgaagtgga aggtagacgg ggtaattcaa

480

gacactggca ttcaagagtc cgtcacggaa caagactcaa aagactcaac gtattcactg

540

tcgtcaacct tgacgatgtc aagcaccgag tatcttagcc atgagctgta ttcgtgcgag

600

atcacccaca agtccctccc ctccactctt atcaaatcct ttcagcggtc ggaatgtcag

660

cgggtcgat 669

<210>50

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>50

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>51

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>51

gatattgtga tgacccagac cccgctgagc ctgagcgtga gcccgggcga accggcgagc 60

attagctgcc gcagcagcca gagcattgtg tatagcaacg gcaacaccta tctggaatgg

120

tatcagcaga aaccgggcca gagcccgaaa ctgctgattt ataaagtgag caaccgcttt

180

agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggca ccgattttac cctgcgcatt

240

agccgcgtgg aagcggatga tgcgggcgtg tattattgct ttcagggcag ccatgtgccg

300

tggacctttg gcggcggcac caaactggaa attaaaagga acgacgctca gccagccgtg

360

tacctcttcc agccttcgcc ggaccagctt catacggggt cagcgtcggt ggtgtgcctg

420

ttgaactcgt tttaccccaa ggacattaac gtgaagtgga aggtagacgg ggtaattcaa

480

gacactggca ttcaagagtc cgtcacggaa caagactcaa aagactcaac gtattcactg

540

tcgtcaacct tgacgatgtc aagcaccgag tatcttagcc atgagctgta ttcgtgcgag

600

atcacccaca agtccctccc ctccactctt atcaaatcct ttcagcggtc ggaatgtcag

660

cgggtcgat 669

<210>52

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>52

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>53

<211>669

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>53

gatgtgctga tgacccagac cccgctgagc ctgagcgtga gcccgggcga accggcgagc 60

attagctgcc gcagcagcca gagcattgtg tatagcaacg gcaacaccta tctggaatgg

120

tatctgcaga aaccgggcca gagcccgaaa ctgctgattt ataaagtgag caaccgcttt

180

agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggca ccgattttac cctgcgcatt

240

agccgcgtgg aagcggatga tgcgggcgtg tattattgct ttcagggcag ccatgtgccg

300

tggacctttg gcggcggcac caaactggaa ctgaaaagga acgacgctca gccagccgtg

360

tacctcttcc agccttcgcc ggaccagctt catacggggt cagcgtcggt ggtgtgcctg

420

ttgaactcgt tttaccccaa ggacattaac gtgaagtgga aggtagacgg ggtaattcaa

480

gacactggca ttcaagagtc cgtcacggaa caagactcaa aagactcaac gtattcactg

540

tcgtcaacct tgacgatgtc aagcaccgag tatcttagcc atgagctgta ttcgtgcgag

600

atcacccaca agtccctccc ctccactctt atcaaatcct ttcagcggtc ggaatgtcag

660

cgggtcgat 669

<210>54

<211>223

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>54

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp

115 120 125

Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe

130 135 140

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln

145 150 155 160

Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu

180 185 190

Ser His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser

195 200 205

Thr Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215 220

<210>55

<211>657

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>55

gaaattgtga tgacccagag cccggcgagc ctgagcctga gccaggaaga aaaagtgacc 60

attacctgcc gcgcgagcag cagcgtgagc agcagctatc tgcattggta tcagcagaaa

120

ccgggccagg cgccgaaact gctgatttat agcaccagca acctggcgag cggcgtgccg

180

agccgcttta gcggcagcgg cagcggcacc gattttagct ttaccattag cagcctggaa

240

ccggaagatg tggcggtgta ttattgccag cagtatagcg gcctgccgct gacctttggc

300

ggcggcacca aactggaaat taaaaggaac gacgctcagc cagccgtgta cctcttccag

360

ccttcgccgg accagcttca tacggggtca gcgtcggtgg tgtgcctgtt gaactcgttt

420

taccccaagg acattaacgt gaagtggaag gtagacgggg taattcaaga cactggcatt

480

caagagtccg tcacggaaca agactcaaaa gactcaacgt attcactgtc gtcaaccttg

540

acgatgtcaa gcaccgagta tcttagccat gagctgtatt cgtgcgagat cacccacaag

600

tccctcccct ccactcttat caaatccttt cagcggtcgg aatgtcagcg ggtcgat 657

<210>56

<211>219

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>56

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Leu Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Asn Asp Ala

100 105 110

Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln Leu His Thr

115 120 125

Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr Pro Lys Asp

130 135 140

Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His Glu Leu

180 185 190

Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu Ile Lys

195 200 205

Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215

<210>57

<211>657

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>57

gaaaacgtgc tgacccagag cccggcgagc ctgagcctga gccaggaaga aaaagtgacc 60

attacctgcc gcgcgagcag cagcgtgagc agcagctatc tgcattggta tcagcagaaa

120

ccgggccagg cgccgaaact gtggattttt agcaccagca acctggcgag cggcgtgccg

180

agccgcttta gcggcagcgg cagcggcacc gattatagct ttaccattag cagcctggaa

240

ccggaagatg tggcggtgta ttattgccag cagtatagcg gcctgccgct gacctttggc

300

ggcggcacca aactggaact gaaaaggaac gacgctcagc cagccgtgta cctcttccag

360

ccttcgccgg accagcttca tacggggtca gcgtcggtgg tgtgcctgtt gaactcgttt

420

taccccaagg acattaacgt gaagtggaag gtagacgggg taattcaaga cactggcatt

480

caagagtccg tcacggaaca agactcaaaa gactcaacgt attcactgtc gtcaaccttg

540

acgatgtcaa gcaccgagta tcttagccat gagctgtatt cgtgcgagat cacccacaag

600

tccctcccct ccactcttat caaatccttt cagcggtcgg aatgtcagcg ggtcgat 657

<210>58

<211>219

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>58

Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Phe Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Leu Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Asn Asp Ala

100 105 110

Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln Leu His Thr

115 120 125

Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr Pro Lys Asp

130 135 140

Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His Glu Leu

180 185 190

Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu Ile Lys

195 200 205

Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215

<210>59

<211>657

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>59

gaaaacgtgc tgacccagag cccggcgagc ctgagcctga gcccgggcga aaaagtgacc 60

attacctgcc gcgcgagcag cagcgtgagc agcagctatc tgcattggta tcagcagaaa

120

ccgggccaga gcccgaaact gtggattttt agcaccagca acctggcgag cggcgtgccg

180

agccgcttta gcggcagcgg cagcggcacc agctatagct ttaccattag cagcctggaa

240

ccggaagatg tggcggtgta ttattgccag cagtatagcg gcctgccgct gacctttggc

300

ggcggcacca aactggaact gaaaaggaac gacgctcagc cagccgtgta cctcttccag

360

ccttcgccgg accagcttca tacggggtca gcgtcggtgg tgtgcctgtt gaactcgttt

420

taccccaagg acattaacgt gaagtggaag gtagacgggg taattcaaga cactggcatt

480

caagagtccg tcacggaaca agactcaaaa gactcaacgt attcactgtc gtcaaccttg

540

acgatgtcaa gcaccgagta tcttagccat gagctgtatt cgtgcgagat cacccacaag

600

tccctcccct ccactcttat caaatccttt cagcggtcgg aatgtcagcg ggtcgat 657

<210>60

<211>219

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>60

Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Phe Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Leu Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Asn Asp Ala

100 105 110

Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln Leu His Thr

115 120 125

Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr Pro Lys Asp

130 135 140

Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His Glu Leu

180 185 190

Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu Ile Lys

195 200 205

Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp

210 215

<210>61

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>61

gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgtgg cgagcggcta tacctttacc aactatggca tgaactgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctgcagtg ggtggcgtgg attaacacct ataccggcga accgacctat

180

gcggatgatt ttaaaggccg ctttaccatt agccgcgata acgcgaaaaa caccctgtat

240

ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgc gcgccgcagc

300

atttattatc cgtattgggg ccagggcacc accctgaccg tgagcagcgc ttccacaacc

360

gcgccatcag tctttccgtt ggccccatca tgcgggtcga cgagcggatc gactgtggcc

420

ctggcgtgct tggtgtcggg atactttccc gaacccgtca cggtcagctg gaactccgga

480

tcgcttacga gcggtgtgca tacgttcccc tcggtcttgc aatcatcagg gctctactcg

540

ctgtcgagca tggtaacggt gccctcatcg aggtggccct ccgaaacgtt cacatgtaac

600

gtagcacatc cagcctccaa aaccaaggtg gataaacccg tgccgaaaag agagaatggg

660

cgggtgcctc gaccccctga ttgccccaag tgtccggctc cggaaatgct cggtggaccc

720

tcagtgttta tcttccctcc gaagcccaag gacactctgc tgatcgcgcg cactccagaa

780

gtaacatgtg tagtggtgga ccttgatccc gaggaccccg aagtccagat ctcctggttt

840

gtagatggga aacagatgca gaccgcaaaa actcaaccca gagaggagca gttcaacgga

900

acataccgag tggtatccgt ccttccgatt ggccaccagg actggttgaa agggaagcag

960

tttacgtgta aagtcaacaa taaggggttg cctagcccta ttgagcggac gatttcgaaa

1020

gctaggggac aggcccacca gccatcggtc tatgtccttc cgccttcccg cgaggagctc

1080

tcgaagaata cagtgagcct tacatgcctc attaaggatt tcttcccgcc tgatatcgac

1140

gtagagtggc aatcaaacgg tcaacaggag ccggaatcca agtatagaac cactccgccc

1200

cagcttgacg aggacggatc atactttttg tattcaaaac tgtcggtgga taagagccgg

1260

tggcagagag gtgacacctt catctgtgcg gtgatgcacg aagcactcca taatcactac

1320

acccaagaga gcctctcgca ttcccccgga aag 1353

<210>62

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>63

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>63

gaaattcagc tggtgcagag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc aactatggca tgaactgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctgcagtg gatgggctgg attaacacct ataccggcga accgacctat

180

gcggatgatt ttaaaggccg ctttaccttt agcctggata acgcgaaaaa caccctgtat

240

ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt atttttgcgc gcgccgcagc

300

atttattatc cgtattgggg ccagggcacc accctgaccg tgagcagcgc ttccacaacc

360

gcgccatcag tctttccgtt ggccccatca tgcgggtcga cgagcggatc gactgtggcc

420

ctggcgtgct tggtgtcggg atactttccc gaacccgtca cggtcagctg gaactccgga

480

tcgcttacga gcggtgtgca tacgttcccc tcggtcttgc aatcatcagg gctctactcg

540

ctgtcgagca tggtaacggt gccctcatcg aggtggccct ccgaaacgtt cacatgtaac

600

gtagcacatc cagcctccaa aaccaaggtg gataaacccg tgccgaaaag agagaatggg

660

cgggtgcctc gaccccctga ttgccccaag tgtccggctc cggaaatgct cggtggaccc

720

tcagtgttta tcttccctcc gaagcccaag gacactctgc tgatcgcgcg cactccagaa

780

gtaacatgtg tagtggtgga ccttgatccc gaggaccccg aagtccagat ctcctggttt

840

gtagatggga aacagatgca gaccgcaaaa actcaaccca gagaggagca gttcaacgga

900

acataccgag tggtatccgt ccttccgatt ggccaccagg actggttgaa agggaagcag

960

tttacgtgta aagtcaacaa taaggggttg cctagcccta ttgagcggac gatttcgaaa

1020

gctaggggac aggcccacca gccatcggtc tatgtccttc cgccttcccg cgaggagctc

1080

tcgaagaata cagtgagcct tacatgcctc attaaggatt tcttcccgcc tgatatcgac

1140

gtagagtggc aatcaaacgg tcaacaggag ccggaatcca agtatagaac cactccgccc

1200

cagcttgacg aggacggatc atactttttg tattcaaaac tgtcggtgga taagagccgg

1260

tggcagagag gtgacacctt catctgtgcg gtgatgcacg aagcactcca taatcactac

1320

acccaagaga gcctctcgca ttcccccgga aag 1353

<210>64

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>64

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>65

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>65

gaaattcagc tggtgcagag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cgtgcgcctg 60

agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc aactatggca tgaactgggt gaaacaggcg

120

ccgggcaaag gcctgcagtg gatgggctgg attaacacct ataccggcga accgacctat

180

gcggatgatt ttaaaggccg ctttaccttt agcctggata acgcgaaaaa caccgcgtat

240

ctgcagatta acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt atttttgcgc gcgccgcagc

300

atttattatc cgtattgggg ccagggcacc accctgaccg tgagcagcgc ttccacaacc

360

gcgccatcag tctttccgtt ggccccatca tgcgggtcga cgagcggatc gactgtggcc

420

ctggcgtgct tggtgtcggg atactttccc gaacccgtca cggtcagctg gaactccgga

480

tcgcttacga gcggtgtgca tacgttcccc tcggtcttgc aatcatcagg gctctactcg

540

ctgtcgagca tggtaacggt gccctcatcg aggtggccct ccgaaacgtt cacatgtaac

600

gtagcacatc cagcctccaa aaccaaggtg gataaacccg tgccgaaaag agagaatggg

660

cgggtgcctc gaccccctga ttgccccaag tgtccggctc cggaaatgct cggtggaccc

720

tcagtgttta tcttccctcc gaagcccaag gacactctgc tgatcgcgcg cactccagaa

780

gtaacatgtg tagtggtgga ccttgatccc gaggaccccg aagtccagat ctcctggttt

840

gtagatggga aacagatgca gaccgcaaaa actcaaccca gagaggagca gttcaacgga

900

acataccgag tggtatccgt ccttccgatt ggccaccagg actggttgaa agggaagcag

960

tttacgtgta aagtcaacaa taaggggttg cctagcccta ttgagcggac gatttcgaaa

1020

gctaggggac aggcccacca gccatcggtc tatgtccttc cgccttcccg cgaggagctc

1080

tcgaagaata cagtgagcct tacatgcctc attaaggatt tcttcccgcc tgatatcgac

1140

gtagagtggc aatcaaacgg tcaacaggag ccggaatcca agtatagaac cactccgccc

1200

cagcttgacg aggacggatc atactttttg tattcaaaac tgtcggtgga taagagccgg

1260

tggcagagag gtgacacctt catctgtgcg gtgatgcacg aagcactcca taatcactac

1320

acccaagaga gcctctcgca ttcccccgga aag 1353

<210>66

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>66

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>67

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>67

gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgtgg cgagcggctt tacctttagc gattattata tgagctgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctggaatg ggtggcgttt attcgcaaca aagcgaacgg ctataccacc

180

gaatatagcg cgagcctgaa aggccgcttt accattagcc gcgataacgc gaaaaacatg

240

gcgtatctgc agatgaacag cctgcgcgcg gaagataccg cggtgtatta ttgcgcgagc

300

tttggcctga tgtattattt tgattattgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc

360

gcttccacaa ccgcgccatc agtctttccg ttggccccat catgcgggtc gacgagcgga

420

tcgactgtgg ccctggcgtg cttggtgtcg ggatactttc ccgaacccgt cacggtcagc

480

tggaactccg gatcgcttac gagcggtgtg catacgttcc cctcggtctt gcaatcatca

540

gggctctact cgctgtcgag catggtaacg gtgccctcat cgaggtggcc ctccgaaacg

600

ttcacatgta acgtagcaca tccagcctcc aaaaccaagg tggataaacc cgtgccgaaa

660

agagagaatg ggcgggtgcc tcgaccccct gattgcccca agtgtccggc tccggaaatg

720

ctcggtggac cctcagtgtt tatcttccct ccgaagccca aggacactct gctgatcgcg

780

cgcactccag aagtaacatg tgtagtggtg gaccttgatc ccgaggaccc cgaagtccag

840

atctcctggt ttgtagatgg gaaacagatg cagaccgcaa aaactcaacc cagagaggag

900

cagttcaacg gaacataccg agtggtatcc gtccttccga ttggccacca ggactggttg

960

aaagggaagc agtttacgtg taaagtcaac aataaggggt tgcctagccc tattgagcgg

1020

acgatttcga aagctagggg acaggcccac cagccatcgg tctatgtcct tccgccttcc

1080

cgcgaggagc tctcgaagaa tacagtgagc cttacatgcc tcattaagga tttcttcccg

1140

cctgatatcg acgtagagtg gcaatcaaac ggtcaacagg agccggaatc caagtataga

1200

accactccgc cccagcttga cgaggacgga tcatactttt tgtattcaaa actgtcggtg

1260

gataagagcc ggtggcagag aggtgacacc ttcatctgtg cggtgatgca cgaagcactc

1320

cataatcact acacccaaga gagcctctcg cattcccccg gaaag 1365

<210>68

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>68

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Ser Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>69

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>69

gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgcga ccagcggctt tacctttagc gattattata tgagctgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctggaatg gatgggcttt attcgcaaca aagcgaacgg ctataccacc

180

gaatatagcg cgagcctgaa aggccgcttt accattagcc gcgataacgc gaaaaacatg

240

gcgtatctgc agatgaacag cctgcgcgcg gaagataccg cggtgtatta ttgcgtgcgc

300

tttggcctga tgtattattt tgattattgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc

360

gcttccacaa ccgcgccatc agtctttccg ttggccccat catgcgggtc gacgagcgga

420

tcgactgtgg ccctggcgtg cttggtgtcg ggatactttc ccgaacccgt cacggtcagc

480

tggaactccg gatcgcttac gagcggtgtg catacgttcc cctcggtctt gcaatcatca

540

gggctctact cgctgtcgag catggtaacg gtgccctcat cgaggtggcc ctccgaaacg

600

ttcacatgta acgtagcaca tccagcctcc aaaaccaagg tggataaacc cgtgccgaaa

660

agagagaatg ggcgggtgcc tcgaccccct gattgcccca agtgtccggc tccggaaatg

720

ctcggtggac cctcagtgtt tatcttccct ccgaagccca aggacactct gctgatcgcg

780

cgcactccag aagtaacatg tgtagtggtg gaccttgatc ccgaggaccc cgaagtccag

840

atctcctggt ttgtagatgg gaaacagatg cagaccgcaa aaactcaacc cagagaggag

900

cagttcaacg gaacataccg agtggtatcc gtccttccga ttggccacca ggactggttg

960

aaagggaagc agtttacgtg taaagtcaac aataaggggt tgcctagccc tattgagcgg

1020

acgatttcga aagctagggg acaggcccac cagccatcgg tctatgtcct tccgccttcc

1080

cgcgaggagc tctcgaagaa tacagtgagc cttacatgcc tcattaagga tttcttcccg

1140

cctgatatcg acgtagagtg gcaatcaaac ggtcaacagg agccggaatc caagtataga

1200

accactccgc cccagcttga cgaggacgga tcatactttt tgtattcaaa actgtcggtg

1260

gataagagcc ggtggcagag aggtgacacc ttcatctgtg cggtgatgca cgaagcactc

1320

cataatcact acacccaaga gagcctctcg cattcccccg gaaag 1365

<210>70

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>71

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>71

gaagtgaaac tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgcga ccagcggctt tacctttagc gattattata tgagctgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag cgctggaatg gatgggcttt attcgcaaca aagcgaacgg ctataccacc

180

gaatatagcg cgagcctgaa aggccgcttt accattagcc gcgataacgc gaaaaacatg

240

ctgtatctgc agatgaacag cctgcgcgcg gaagataccg cggtgtatta ttgcgtgcgc

300

tttggcctga tgtattattt tgattattgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc

360

gcttccacaa ccgcgccatc agtctttccg ttggccccat catgcgggtc gacgagcgga

420

tcgactgtgg ccctggcgtg cttggtgtcg ggatactttc ccgaacccgt cacggtcagc

480

tggaactccg gatcgcttac gagcggtgtg catacgttcc cctcggtctt gcaatcatca

540

gggctctact cgctgtcgag catggtaacg gtgccctcat cgaggtggcc ctccgaaacg

600

ttcacatgta acgtagcaca tccagcctcc aaaaccaagg tggataaacc cgtgccgaaa

660

agagagaatg ggcgggtgcc tcgaccccct gattgcccca agtgtccggc tccggaaatg

720

ctcggtggac cctcagtgtt tatcttccct ccgaagccca aggacactct gctgatcgcg

780

cgcactccag aagtaacatg tgtagtggtg gaccttgatc ccgaggaccc cgaagtccag

840

atctcctggt ttgtagatgg gaaacagatg cagaccgcaa aaactcaacc cagagaggag

900

cagttcaacg gaacataccg agtggtatcc gtccttccga ttggccacca ggactggttg

960

aaagggaagc agtttacgtg taaagtcaac aataaggggt tgcctagccc tattgagcgg

1020

acgatttcga aagctagggg acaggcccac cagccatcgg tctatgtcct tccgccttcc

1080

cgcgaggagc tctcgaagaa tacagtgagc cttacatgcc tcattaagga tttcttcccg

1140

cctgatatcg acgtagagtg gcaatcaaac ggtcaacagg agccggaatc caagtataga

1200

accactccgc cccagcttga cgaggacgga tcatactttt tgtattcaaa actgtcggtg

1260

gataagagcc ggtggcagag aggtgacacc ttcatctgtg cggtgatgca cgaagcactc

1320

cataatcact acacccaaga gagcctctcg cattcccccg gaaag 1365

<210>72

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>72

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>73

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>73

gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgtgg cgagcggcta tacctttacc aactatggca tgaactgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctgcagtg ggtggcgtgg attaacacct ataccggcga accgacctat

180

gcggatgatt ttaaaggccg ctttaccatt agccgcgata acgcgaaaaa caccctgtat

240

ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgc gcgccgcagc

300

atttattatc cgtattgggg ccagggcacc accctgaccg tgagcagcgc ttccacaacc

360

gcgccatcag tctttccgtt ggccccatca tgcgggtcga cgagcggatc gactgtggcc

420

ctggcgtgct tggtgtcggg atactttccc gaacccgtca cggtcagctg gaactccgga

480

tcgcttacga gcggtgtgca tacgttcccc tcggtcttgc aatcatcagg gctctactcg

540

ctgtcgagca tggtaacggt gccctcatcg aggtggccct ccgaaacgtt cacatgtaac

600

gtagcacatc cagcctccaa aaccaaggtg gataaacccg tgccgaaaag agagaatggg

660

cgggtgcctc gaccccctga ttgccccaag tgtccggctc cggaaatgct cggtggaccc

720

tcagtgttta tcttccctcc gaagcccaag gacactctgc tgatcgcgcg cactccagaa

780

gtaacatgtg tagtggtggc tcttgatccc gaggaccccg aagtccagat ctcctggttt

840

gtagatggga aacagatgca gaccgcaaaa actcaaccca gagaggagca gttcgccgga

900

acataccgag tggtatccgt ccttccgatt ggccaccagg actggttgaa agggaagcag

960

tttacgtgta aagtcaacaa taaggggttg cctagcccta ttgagcggac gatttcgaaa

1020

gctaggggac aggcccacca gccatcggtc tatgtccttc cgccttcccg cgaggagctc

1080

tcgaagaata cagtgagcct tacatgcctc attaaggatt tcttcccgcc tgatatcgac

1140

gtagagtggc aatcaaacgg tcaacaggag ccggaatcca agtatagaac cactccgccc

1200

cagcttgacg aggacggatc atactttttg tattcaaaac tgtcggtgga taagagccgg

1260

tggcagagag gtgacacctt catctgtgcg gtgatgcacg aagcactcca taatcactac

1320

acccaagaga gcctctcgca ttcccccgga aag 1353

<210>74

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>74

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>75

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>75

gaaattcagc tggtgcagag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc aactatggca tgaactgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctgcagtg gatgggctgg attaacacct ataccggcga accgacctat

180

gcggatgatt ttaaaggccg ctttaccttt agcctggata acgcgaaaaa caccctgtat

240

ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt atttttgcgc gcgccgcagc

300

atttattatc cgtattgggg ccagggcacc accctgaccg tgagcagcgc ttccacaacc

360

gcgccatcag tctttccgtt ggccccatca tgcgggtcga cgagcggatc gactgtggcc

420

ctggcgtgct tggtgtcggg atactttccc gaacccgtca cggtcagctg gaactccgga

480

tcgcttacga gcggtgtgca tacgttcccc tcggtcttgc aatcatcagg gctctactcg

540

ctgtcgagca tggtaacggt gccctcatcg aggtggccct ccgaaacgtt cacatgtaac

600

gtagcacatc cagcctccaa aaccaaggtg gataaacccg tgccgaaaag agagaatggg

660

cgggtgcctc gaccccctga ttgccccaag tgtccggctc cggaaatgct cggtggaccc

720

tcagtgttta tcttccctcc gaagcccaag gacactctgc tgatcgcgcg cactccagaa

780

gtaacatgtg tagtggtggc tcttgatccc gaggaccccg aagtccagat ctcctggttt

840

gtagatggga aacagatgca gaccgcaaaa actcaaccca gagaggagca gttcgccgga

900

acataccgag tggtatccgt ccttccgatt ggccaccagg actggttgaa agggaagcag

960

tttacgtgta aagtcaacaa taaggggttg cctagcccta ttgagcggac gatttcgaaa

1020

gctaggggac aggcccacca gccatcggtc tatgtccttc cgccttcccg cgaggagctc

1080

tcgaagaata cagtgagcct tacatgcctc attaaggatt tcttcccgcc tgatatcgac

1140

gtagagtggc aatcaaacgg tcaacaggag ccggaatcca agtatagaac cactccgccc

1200

cagcttgacg aggacggatc atactttttg tattcaaaac tgtcggtgga taagagccgg

1260

tggcagagag gtgacacctt catctgtgcg gtgatgcacg aagcactcca taatcactac

1320

acccaagaga gcctctcgca ttcccccgga aag 1353

<210>76

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>76

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>77

<211>1353

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>77

gaaattcagc tggtgcagag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cgtgcgcctg 60

agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc aactatggca tgaactgggt gaaacaggcg

120

ccgggcaaag gcctgcagtg gatgggctgg attaacacct ataccggcga accgacctat

180

gcggatgatt ttaaaggccg ctttaccttt agcctggata acgcgaaaaa caccgcgtat

240

ctgcagatta acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt atttttgcgc gcgccgcagc

300

atttattatc cgtattgggg ccagggcacc accctgaccg tgagcagcgc ttccacaacc

360

gcgccatcag tctttccgtt ggccccatca tgcgggtcga cgagcggatc gactgtggcc

420

ctggcgtgct tggtgtcggg atactttccc gaacccgtca cggtcagctg gaactccgga

480

tcgcttacga gcggtgtgca tacgttcccc tcggtcttgc aatcatcagg gctctactcg

540

ctgtcgagca tggtaacggt gccctcatcg aggtggccct ccgaaacgtt cacatgtaac

600

gtagcacatc cagcctccaa aaccaaggtg gataaacccg tgccgaaaag agagaatggg

660

cgggtgcctc gaccccctga ttgccccaag tgtccggctc cggaaatgct cggtggaccc

720

tcagtgttta tcttccctcc gaagcccaag gacactctgc tgatcgcgcg cactccagaa

780

gtaacatgtg tagtggtggc tcttgatccc gaggaccccg aagtccagat ctcctggttt

840

gtagatggga aacagatgca gaccgcaaaa actcaaccca gagaggagca gttcgccgga

900

acataccgag tggtatccgt ccttccgatt ggccaccagg actggttgaa agggaagcag

960

tttacgtgta aagtcaacaa taaggggttg cctagcccta ttgagcggac gatttcgaaa

1020

gctaggggac aggcccacca gccatcggtc tatgtccttc cgccttcccg cgaggagctc

1080

tcgaagaata cagtgagcct tacatgcctc attaaggatt tcttcccgcc tgatatcgac

1140

gtagagtggc aatcaaacgg tcaacaggag ccggaatcca agtatagaac cactccgccc

1200

cagcttgacg aggacggatc atactttttg tattcaaaac tgtcggtgga taagagccgg

1260

tggcagagag gtgacacctt catctgtgcg gtgatgcacg aagcactcca taatcactac

1320

acccaagaga gcctctcgca ttcccccgga aag 1353

<210>78

<211>451

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>78

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu

130 135 140

Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp

180 185 190

Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg

210 215 220

Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu Asp Pro Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr

275 280 285

Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln

305 310 315 320

Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210>79

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>79

gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgtgg cgagcggctt tacctttagc gattattata tgagctgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctggaatg ggtggcgttt attcgcaaca aagcgaacgg ctataccacc

180

gaatatagcg cgagcctgaa aggccgcttt accattagcc gcgataacgc gaaaaacatg

240

gcgtatctgc agatgaacag cctgcgcgcg gaagataccg cggtgtatta ttgcgcgagc

300

tttggcctga tgtattattt tgattattgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc

360

gcttccacaa ccgcgccatc agtctttccg ttggccccat catgcgggtc gacgagcgga

420

tcgactgtgg ccctggcgtg cttggtgtcg ggatactttc ccgaacccgt cacggtcagc

480

tggaactccg gatcgcttac gagcggtgtg catacgttcc cctcggtctt gcaatcatca

540

gggctctact cgctgtcgag catggtaacg gtgccctcat cgaggtggcc ctccgaaacg

600

ttcacatgta acgtagcaca tccagcctcc aaaaccaagg tggataaacc cgtgccgaaa

660

agagagaatg ggcgggtgcc tcgaccccct gattgcccca agtgtccggc tccggaaatg

720

ctcggtggac cctcagtgtt tatcttccct ccgaagccca aggacactct gctgatcgcg

780

cgcactccag aagtaacatg tgtagtggtg gctcttgatc ccgaggaccc cgaagtccag

840

atctcctggt ttgtagatgg gaaacagatg cagaccgcaa aaactcaacc cagagaggag

900

cagttcgccg gaacataccg agtggtatcc gtccttccga ttggccacca ggactggttg

960

aaagggaagc agtttacgtg taaagtcaac aataaggggt tgcctagccc tattgagcgg

1020

acgatttcga aagctagggg acaggcccac cagccatcgg tctatgtcct tccgccttcc

1080

cgcgaggagc tctcgaagaa tacagtgagc cttacatgcc tcattaagga tttcttcccg

1140

cctgatatcg acgtagagtg gcaatcaaac ggtcaacagg agccggaatc caagtataga

1200

accactccgc cccagcttga cgaggacgga tcatactttt tgtattcaaa actgtcggtg

1260

gataagagcc ggtggcagag aggtgacacc ttcatctgtg cggtgatgca cgaagcactc

1320

cataatcact acacccaaga gagcctctcg cattcccccg gaaag 1365

<210>80

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>80

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Ser Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>81

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>81

gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgcga ccagcggctt tacctttagc gattattata tgagctgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag gcctggaatg gatgggcttt attcgcaaca aagcgaacgg ctataccacc

180

gaatatagcg cgagcctgaa aggccgcttt accattagcc gcgataacgc gaaaaacatg

240

gcgtatctgc agatgaacag cctgcgcgcg gaagataccg cggtgtatta ttgcgtgcgc

300

tttggcctga tgtattattt tgattattgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc

360

gcttccacaa ccgcgccatc agtctttccg ttggccccat catgcgggtc gacgagcgga

420

tcgactgtgg ccctggcgtg cttggtgtcg ggatactttc ccgaacccgt cacggtcagc

480

tggaactccg gatcgcttac gagcggtgtg catacgttcc cctcggtctt gcaatcatca

540

gggctctact cgctgtcgag catggtaacg gtgccctcat cgaggtggcc ctccgaaacg

600

ttcacatgta acgtagcaca tccagcctcc aaaaccaagg tggataaacc cgtgccgaaa

660

agagagaatg ggcgggtgcc tcgaccccct gattgcccca agtgtccggc tccggaaatg

720

ctcggtggac cctcagtgtt tatcttccct ccgaagccca aggacactct gctgatcgcg

780

cgcactccag aagtaacatg tgtagtggtg gctcttgatc ccgaggaccc cgaagtccag

840

atctcctggt ttgtagatgg gaaacagatg cagaccgcaa aaactcaacc cagagaggag

900

cagttcgccg gaacataccg agtggtatcc gtccttccga ttggccacca ggactggttg

960

aaagggaagc agtttacgtg taaagtcaac aataaggggt tgcctagccc tattgagcgg

1020

acgatttcga aagctagggg acaggcccac cagccatcgg tctatgtcct tccgccttcc

1080

cgcgaggagc tctcgaagaa tacagtgagc cttacatgcc tcattaagga tttcttcccg

1140

cctgatatcg acgtagagtg gcaatcaaac ggtcaacagg agccggaatc caagtataga

1200

accactccgc cccagcttga cgaggacgga tcatactttt tgtattcaaa actgtcggtg

1260

gataagagcc ggtggcagag aggtgacacc ttcatctgtg cggtgatgca cgaagcactc

1320

cataatcact acacccaaga gagcctctcg cattcccccg gaaag 1365

<210>82

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>82

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>83

<211>1365

<212>ДНК

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>83

gaagtgaaac tggtggaaag cggcggcgat ctggtgaaac cgggcggcag cctgcgcctg 60

agctgcgcga ccagcggctt tacctttagc gattattata tgagctgggt gcgccaggcg

120

ccgggcaaag cgctggaatg gatgggcttt attcgcaaca aagcgaacgg ctataccacc

180

gaatatagcg cgagcctgaa aggccgcttt accattagcc gcgataacgc gaaaaacatg

240

ctgtatctgc agatgaacag cctgcgcgcg gaagataccg cggtgtatta ttgcgtgcgc

300

tttggcctga tgtattattt tgattattgg ggccagggca ccaccctgac cgtgagcagc

360

gcttccacaa ccgcgccatc agtctttccg ttggccccat catgcgggtc gacgagcgga

420

tcgactgtgg ccctggcgtg cttggtgtcg ggatactttc ccgaacccgt cacggtcagc

480

tggaactccg gatcgcttac gagcggtgtg catacgttcc cctcggtctt gcaatcatca

540

gggctctact cgctgtcgag catggtaacg gtgccctcat cgaggtggcc ctccgaaacg

600

ttcacatgta acgtagcaca tccagcctcc aaaaccaagg tggataaacc cgtgccgaaa

660

agagagaatg ggcgggtgcc tcgaccccct gattgcccca agtgtccggc tccggaaatg

720

ctcggtggac cctcagtgtt tatcttccct ccgaagccca aggacactct gctgatcgcg

780

cgcactccag aagtaacatg tgtagtggtg gctcttgatc ccgaggaccc cgaagtccag

840

atctcctggt ttgtagatgg gaaacagatg cagaccgcaa aaactcaacc cagagaggag

900

cagttcgccg gaacataccg agtggtatcc gtccttccga ttggccacca ggactggttg

960

aaagggaagc agtttacgtg taaagtcaac aataaggggt tgcctagccc tattgagcgg

1020

acgatttcga aagctagggg acaggcccac cagccatcgg tctatgtcct tccgccttcc

1080

cgcgaggagc tctcgaagaa tacagtgagc cttacatgcc tcattaagga tttcttcccg

1140

cctgatatcg acgtagagtg gcaatcaaac ggtcaacagg agccggaatc caagtataga

1200

accactccgc cccagcttga cgaggacgga tcatactttt tgtattcaaa actgtcggtg

1260

gataagagcc ggtggcagag aggtgacacc ttcatctgtg cggtgatgca cgaagcactc

1320

cataatcact acacccaaga gagcctctcg cattcccccg gaaag 1365

<210>84

<211>455

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>канинизированная mus musculus

<400>84

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala

130 135 140

Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro

195 200 205

Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly

210 215 220

Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu

260 265 270

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

275 280 285

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

325 330 335

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

340 345 350

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

370 375 380

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

420 425 430

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

435 440 445

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210>85

<211>15

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>85

aactatggaa tgaac 15

<210>86

<211>5

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>86

Asn Tyr Gly Met Asn

1 5

<210>87

<211>51

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>87

tggataaaca cctacactgg agagccaaca tatgctgatg acttcaaggg a 51

<210>88

<211>17

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>88

Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210>89

<211>21

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>89

cggtcaattt attacccgta c 21

<210>90

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>90

Arg Ser Ile Tyr Tyr Pro Tyr

1 5

<210>91

<211>48

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>91

agatctagtc agagcattgt atatagtaat ggaaacacct atttagaa 48

<210>92

<211>16

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>92

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210>93

<211>21

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>93

aaagtttcca accgattttc t 21

<210>94

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>94

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210>95

<211>27

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>95

tttcaaggtt cacatgttcc gtggacg 27

<210>96

<211>9

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>96

Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr

1 5

<210>97

<211>15

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>97

gattactaca tgagc 15

<210>98

<211>5

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>98

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210>99

<211>57

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>99

tttattagaa acaaagctaa tggttacaca acagagtaca gcgcatctct gaagggt 57

<210>100

<211>19

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>100

Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser

1 5 10 15

Leu Lys Gly

<210>101

<211>27

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>101

tttgggttaa tgtactactt tgactac 27

<210>102

<211>9

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>102

Phe Gly Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210>103

<211>36

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>103

agggccagct caagtgtaag ttccagttac ttgcac 36

<210>104

<211>12

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>104

Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His

1 5 10

<210>105

<211>21

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>105

agcacatcca acttggcttc t 21

<210>106

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>106

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210>107

<211>27

<212>ДНК

<213>Mus musculus

<400>107

cagcagtaca gtggtctccc actcacg 27

<210>108

<211>9

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>108

Gln Gln Tyr Ser Gly Leu Pro Leu Thr

1 5

<210>109

<211>5

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>109

Thr Tyr Gly Val Ser

1 5

<210>110

<211>5

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>110

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210>111

<211>17

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>111

Trp Ile Asn Thr Tyr Ser Gly Met Pro Thr Tyr Val Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210>112

<211>17

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>112

Asn Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Arg Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210>113

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>113

Arg Gly Thr Tyr Tyr Arg Pro

1 5

<210>114

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>114

Arg Gly Ile Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210>115

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>115

Arg Gly Val Arg Leu Asp Tyr

1 5

<210>116

<211>12

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>116

Ser Asn Tyr Gly Ser Gly Trp Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210>117

<211>16

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>117

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser His Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210>118

<211>16

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>118

Lys Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ile Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210>119

<211>16

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>119

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ile Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210>120

<211>11

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>120

His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser

1 5 10

<210>121

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>121

Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser

1 5

<210>122

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>122

Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser

1 5

<210>123

<211>7

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>123

Lys Ser Ser Asn Leu His Thr

1 5

<210>124

<211>9

<212>Белок

<213>Mus musculus

<400>124

Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Trp Thr

1 5

<210>125

<211>669

<212>ДНК

<213>Canis familiaris

<400>125

atggcgggct ttggctttcg ccgccatggc gcgcagccgg atctggcgag ccgcacctgg 60

ccgtgcaccg cgctgtttag cctgctgttt attccggtgt ttagcaaagg catgcatgtg

120

gcgcagccgg cggtggtgct ggcgagcagc cgcggcgtgg cgagctttgt gtgcgaatat

180

ggcagcagcg gcaacgcggc ggaagtgcgc gtgaccgtgc tgcgccaggc gggcagccag

240

atgaccgaag tgtgcgcggc gacctatacc gtggaagatg aactggcgtt tctggatgat

300

agcacctgca ccggcaccag cagcggcaac aaagtgaacc tgaccattca gggcctgcgc

360

gcgatggata ccggcctgta tatttgcaaa gtggaactga tgtatccgcc gccgtattat

420

gtgggcatgg gcaacggcac ccagatttat gtgattgatc cggaaccgtg cccggatagc

480

gattttctgc tgtggattct ggcggcggtg agcagcggcc tgttttttta tagctttctg

540

attaccgcgg tgagcctgag caaaatgctg aaaaaacgca gcccgctgac caccggcgtg

600

tatgtgaaaa tgccgccgac cgaaccggaa tgcgaaaaac agtttcagcc gtattttatt

660

ccgattaac 669

<210>126

<211>223

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>126

Met Ala Gly Phe Gly Phe Arg Arg His Gly Ala Gln Pro Asp Leu Ala

1 5 10 15

Ser Arg Thr Trp Pro Cys Thr Ala Leu Phe Ser Leu Leu Phe Ile Pro

20 25 30

Val Phe Ser Lys Gly Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala

35 40 45

Ser Ser Arg Gly Val Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Gly Ser Ser Gly

50 55 60

Asn Ala Ala Glu Val Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Gly Ser Gln

65 70 75 80

Met Thr Glu Val Cys Ala Ala Thr Tyr Thr Val Glu Asp Glu Leu Ala

85 90 95

Phe Leu Asp Asp Ser Thr Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Lys Val

100 105 110

Asn Leu Thr Ile Gln Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile

115 120 125

Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Val Gly Met Gly

130 135 140

Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser

145 150 155 160

Asp Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe

165 170 175

Tyr Ser Phe Leu Ile Thr Ala Val Ser Leu Ser Lys Met Leu Lys Lys

180 185 190

Arg Ser Pro Leu Thr Thr Gly Val Tyr Val Lys Met Pro Pro Thr Glu

195 200 205

Pro Glu Cys Glu Lys Gln Phe Gln Pro Tyr Phe Ile Pro Ile Asn

210 215 220

<210>127

<211>215

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>генетически модифицированная canis familiaris

<400>127

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

1 5 10 15

Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Leu

20 25 30

Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys

35 40 45

Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Gly

50 55 60

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu

65 70 75 80

Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser

85 90 95

Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro

100 105 110

Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr

115 120 125

Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp

130 135 140

Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser

165 170 175

Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile

180 185 190

Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser

195 200 205

Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

210 215

<210>128

<211>17

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>128

Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp Thr Pro Pro Cys Pro Val Pro Glu

1 5 10 15

Pro

<210>129

<211>22

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>129

Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys

1 5 10 15

Cys Pro Ala Pro Glu Met

20

<210>130

<211>20

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>130

Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys Asn Cys Asn Asn Cys Pro Cys Pro

1 5 10 15

Gly Cys Gly Leu

20

<210>131

<211>17

<212>Белок

<213>Искусственная последовательность

<220>

<223>генетически модифицированная canis familiarus

<400>131

Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys Ile Pro Pro Cys Pro Val Pro Glu

1 5 10 15

Ser

<210>132

<211>31

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>132

Ala Glu Val Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Gly Ser Gln Met Thr

1 5 10 15

Glu Val Cys Ala Ala Thr Tyr Thr Val Glu Asp Glu Leu Ala Phe

20 25 30

<210>133

<211>21

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>133

Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Val Gly

1 5 10 15

Met Gly Asn Gly Thr

20

<210>134

<211>8

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>134

Thr Val Leu Arg Gln Ala Gly Ser

1 5

<210>135

<211>5

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>135

Ala Thr Tyr Thr Val

1 5

<210>136

<211>13

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>136

Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr

1 5 10

<210>137

<211>6

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>137

Met Tyr Pro Pro Pro Tyr

1 5

<210>138

<211>186

<212>Белок

<213>Canis familiaris

<400>138

Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly Val

1 5 10 15

Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Gly Ser Ser Gly Asn Ala Ala Glu Val

20 25 30

Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Gly Ser Gln Met Thr Glu Val Cys

35 40 45

Ala Ala Thr Tyr Thr Val Glu Asp Glu Leu Ala Phe Leu Asp Asp Ser

50 55 60

Thr Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Lys Val Asn Leu Thr Ile Gln

65 70 75 80

Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu

85 90 95

Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Val Gly Met Gly Asn Gly Thr Gln Ile

100 105 110

Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Phe Leu Leu Trp

115 120 125

Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr Ser Phe Leu Ile

130 135 140

Thr Ala Val Ser Leu Ser Lys Met Leu Lys Lys Arg Ser Pro Leu Thr

145 150 155 160

Thr Gly Val Tyr Val Lys Met Pro Pro Thr Glu Pro Glu Cys Glu Lys

165 170 175

Gln Phe Gln Pro Tyr Phe Ile Pro Ile Asn

180 185

<---

Claims

1. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с собачьим белком 4, ассоциированным с цитотоксическими T-лимфоцитами, (CTLA-4), и блокирует связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80, блокирует связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86 или блокирует как связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD80, так и связывание собачьего CTLA-4 с собачьим CD86;

где указанное антитело содержит набор из шести областей, определяющих комплементарность, (CDR), три из которых представляют собой CDR легкой цепи: CDR легкой цепи 1 (CDRL1), CDR легкой цепи 2 (CDRL2) и CDR легкой цепи 3 (CDRL3); и три из которых представляют собой CDR тяжелой цепи: CDR тяжелой цепи 1 (CDRH1), CDR тяжелой цепи 2 (CDRH2) и CDR тяжелой цепи 3 (CDRH3);

где набор из шести CDR выбран из группы наборов, состоящих из (i), (ii), (iii), (iv), (v) и (vi);

где для набора (i):

CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 92;

CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 94, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 94;

CDRL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 96, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 96;

CDRH1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 86, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 86;

CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 88, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 88; и

CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 90, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 90;

где для набора (ii):

CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 104, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 104;

CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 106;

CDRL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 108;

CDRH1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 98, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 98;

CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 100, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 100; и

CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 102, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 102;

где для набора (iii):

CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 117, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 117;

CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 113, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 113;

где для набора (iv):

CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 119, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 119;

CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 122, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 122;

CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 115, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 115;

где для набора (v):

CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 118, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 118;

CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 121, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 121;

CDRH1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 109, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 109;

CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 111, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 111; и

CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 114, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 114; и

где для набора (vi):

CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 120, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 120;

CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 123, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 123;

CDRL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 124, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 124;

CDRH1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 110, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 110;

CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 112, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 112; и

CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 116, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 116.

2. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, которое представляет собой канинизированное антитело или его канинизированный антигенсвязывающий фрагмент.

3. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 2, которое содержит шарнирную область, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130 и SEQ ID NO: 131.

4. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 2 или 3, где

(a) CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 92;

(b) CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 94, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 94;

(c) CDRL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 96, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 96;

(d) CDRH1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 86, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 86;

(e) CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 88, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 88; и

(f) CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 90, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 90.

5. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 4, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64 и SEQ ID NO: 66; или

модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 78; или

легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 54, или

комбинацию указанной тяжелой цепи или указанной модифицированной тяжелой цепи с указанной легкой цепью.

6. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 5, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, или модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.

7. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 6, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54.

8. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 2 или 3, где

(a) CDRL1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 104, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 104;

(b) CDRL2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 106;

(c) CDRL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 108;

(d) CDRH1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 98, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 98;

(e) CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 100, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 100; и

(f) CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 102, консервативно модифицированного варианта SEQ ID NO: 102.

9. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 8, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70 и SEQ ID NO: 72; или

модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82 и SEQ ID NO: 84; или

легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 60, или

10. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 9, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72, или модифицированную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84.

11. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 10, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.

12. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 2-11, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент проявляют одно, два, три, четыре или все пять из следующих свойств:

(i) связывание с собачьим CTLA-4 с константой диссоциации (Kd) 1х10^-5 M - 1х10^-12 M;

(ii) связывание с собачьим CTLA-4 с константой скорости ассоциации (k_on) 1х10² M^-1⋅с^-1-1х10⁷ М^-1⋅с^-1;

(iii) связывание с собачьим CTLA-4 с константой скорости диссоциации (k_off) 1х10^-3 с^-1-1х10^-8 с^-1;

(iv) блокирование связывания собачьего CTLA-4 с собачьим CD80; и

(v) блокирование связывания собачьего CTLA-4 с собачьим CD86.

13. Выделенное антитело млекопитающего или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 2-12, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с любой одной или более аминокислотными последовательностями, выбранными из группы, состоящей из SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136 и SEQ ID NO: 137.

14. Фармацевтическая композиция для повышения активности иммунной клетки собаки, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 2-13 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

15. Способ повышения активности иммунной клетки собаки, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п. 14.