JP6797111B2 - イヌpd−l1と結合するpd−l1抗体 - Google Patents
イヌpd−l1と結合するpd−l1抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6797111B2 JP6797111B2 JP2017516842A JP2017516842A JP6797111B2 JP 6797111 B2 JP6797111 B2 JP 6797111B2 JP 2017516842 A JP2017516842 A JP 2017516842A JP 2017516842 A JP2017516842 A JP 2017516842A JP 6797111 B2 JP6797111 B2 JP 6797111B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- antibody
- canine
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000282465 Canis Species 0.000 title claims description 415
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 title claims description 242
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 title claims description 242
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 305
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 263
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 217
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 217
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 215
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 208
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 85
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 56
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 52
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 50
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 46
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 45
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 45
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 37
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 19
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 18
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 17
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 11
- 102220580177 Non-receptor tyrosine-protein kinase TYK2_D31A_mutation Human genes 0.000 claims description 8
- 102220516944 Period circadian protein homolog 3_N63A_mutation Human genes 0.000 claims description 8
- 102220029901 rs140332992 Human genes 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- 102200068095 rs121913658 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220056600 rs146394306 Human genes 0.000 claims description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 102200081484 rs1553259760 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 102200068100 rs104894368 Human genes 0.000 claims 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 103
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 96
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 70
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 66
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 56
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 54
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 53
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 52
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 41
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 37
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 35
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 29
- 230000006870 function Effects 0.000 description 29
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 26
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 23
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 23
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 22
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 22
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 20
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 14
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 13
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 13
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 13
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 12
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 12
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 12
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 10
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 7
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 5
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 5
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 4
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 3
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 description 3
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282373 Panthera pardus Species 0.000 description 3
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 3
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 3
- 108091007744 Programmed cell death receptors Proteins 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102100039856 Histone H1.1 Human genes 0.000 description 2
- 101001035402 Homo sapiens Histone H1.1 Proteins 0.000 description 2
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 101000859077 Mus musculus Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000282374 Puma concolor Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000009464 antigen specific memory response Effects 0.000 description 2
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 2
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- RZSIBGYUCGYDKG-VIFPVBQESA-N (3s)-3-methyl-1-[4-(trifluoromethyl)-1-benzofuran-7-yl]piperazine Chemical compound C1CN[C@@H](C)CN1C1=CC=C(C(F)(F)F)C2=C1OC=C2 RZSIBGYUCGYDKG-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 241001455214 Acinonyx jubatus Species 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 241000879755 Caracal Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 241000282323 Felidae Species 0.000 description 1
- 241000401950 Felinae Species 0.000 description 1
- 241000282327 Felis silvestris Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 102100029100 Hematopoietic prostaglandin D synthase Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108091006054 His-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022949 Immunoglobulin kappa variable 2-29 Human genes 0.000 description 1
- 238000001265 Jonckheere trend test Methods 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000721701 Lynx Species 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 101100370002 Mus musculus Tnfsf14 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000023178 Musculoskeletal disease Diseases 0.000 description 1
- 241001195348 Nusa Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241000282372 Panthera onca Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241001147389 Panthera uncia Species 0.000 description 1
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 1
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001313871 Puma Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical class N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000009172 cell transfer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000000205 computational method Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 1
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 230000036581 peripheral resistance Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 102220056660 rs28936686 Human genes 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本出願は、2014年9月30日に出願された米国仮出願第62/057,541号および2015年6月8日に出願された米国仮出願第62/172,511号の利益を主張するものであり、これらの内容はいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の詳細な説明および実施例の全体にわたって、次の略語が用いられる:
ADCC 抗体依存性細胞傷害活性
CDC 補体依存性細胞傷害活性(cyotoxicity)
CDR ヒト抗体に関してKabatナンバリングシステムを用いて規定される、免疫グロブリン可変領域内の相補性決定領域
CHO チャイニーズハムスター卵巣
EC50 50%の有効性または結合をもたらす濃度
ELISA 酵素結合免疫吸着アッセイ
FR 抗体フレームワーク領域:CDR領域を除外した免疫グロブリン可変領域
HRP 西洋ワサビペルオキシダーゼ
IFN インターフェロン
IC50 50%阻害をもたらす濃度
IgG 免疫グロブリンG
Kabat Elvin A. Kabatが先駆けとなったヒト抗体に関する免疫グロブリンアラインメントおよびナンバリングシステム[Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)]
mAb モノクローナル抗体(MabまたはMAbも)
MES 2−(N−モルフォリノ)エタンスルホン酸
MOA 作用メカニズム
NHS 正常ヒト血清
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
PK 薬物動態学的
SEB スタフィロコッカス(Staphylococcus)エンテロトキシンB
TT 破傷風トキソイド
V領域 異なる抗体間で配列が変わるヒトIgG鎖のセグメント。軽鎖においてKabat残基109まで、重鎖においてKabat残基113まで広がっている。
VK 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
定義
本発明がより容易に理解され得るように、ある種の技術用語および科学用語を下に具体的に定義する。本書類のどこかで具体的に定義されないかぎり、本明細書中で用いられる全ての他の技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通例的に理解される意味を持つ。
本明細書中で用いられる抗体は、それがイヌ抗原、例えばイヌPD−L1のアミノ酸配列のその部分を含むポリペプチドに結合するが、イヌ抗原、例えばイヌPD−L1の配列のその部分を欠いた他のイヌタンパク質に結合しない場合に、所与の抗原配列(この場合、イヌ抗原、例えばイヌPD−L1のアミノ酸配列の部分)を含むポリペプチドに特異的に結合するといわれる。例えば、イヌPD−L1を含むポリペプチドに特異的に結合する抗体は、FLAG(登録商標)タグを付加した形態のイヌPD−L1に結合し得るが、他のFLAG(登録商標)タグを付加したイヌタンパク質に特異性を有して結合しない。抗体または抗体の抗原結合部位に由来する結合性化合物は、そのイヌ抗原またはそのバリアントもしくは変異タンパク質へのアフィニティーが試験された任意の他のイヌ抗原へのアフィニティーよりも少なくとも10倍大きい、より好ましくは少なくとも20倍大きい、およびよりいっそう好ましくは少なくとも100倍大きいとき、そのイヌ抗原またはそのバリアントもしくは変異タンパク質に「特異性を有して」結合する。
イヌにおいては、A、B、CおよびDと呼ばれる4つのIgG重鎖がある。これらの重鎖はイヌIgGの4つの異なるサブクラスを表し、IgGA、IgGB、IgGCおよびIgGDと呼ばれる。これら4つの重鎖のDNA配列およびアミノ酸配列は、Tangら[Vet.Immunol.Immunopathol.80:259−270(2001)]により最初に同定された。これらの重鎖に対するアミノ酸配列およびDNA配列は、GenBankデータベースからも入手可能である。例えば、IgGA重鎖のアミノ酸配列のアクセッション番号はAAL35301.1であり、IgGBのアクセッション番号はAAL35302.1であり、IgGCのアクセッション番号はAAL35303.1であり、IgGDのアクセッション番号は(AAL35304.1)である。イヌ抗体はまた2つのタイプの軽鎖、カッパおよびラムダを含有する。これらの軽鎖のDNA配列およびアミノ酸配列は、GenBankデータベースから入手することができる。例えば、カッパ軽鎖のアミノ酸配列のアクセッション番号はABY 57289.1であり、ラムダ軽鎖のアクセッション番号はABY 55569.1である。本発明において、4つのイヌIgG Fc断片の各々に対するアミノ酸配列は、上のTangらにより決定された、CH1ドメインおよびCH2ドメインの同定された境界に基づくものである。
1.エフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害活性(ADCC)および補体依存性細胞傷害活性(CDC)などの欠如
2.インビボでの比較的長い半減期;および
3.工業的な標準技術、例えばプロテインAクロマトグラフィーに基づくものなどを用いて大規模で容易に精製されること
を持つ。
本発明はさらに、本明細書中に開示されているイヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体およびその抗原結合断片の免疫グロブリン鎖をコードする核酸を含む(下の実施例を参照されたい)。
本発明のイヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体は、下に詳述されているように、例えば抗体の特性を改良するため、親の(すなわちイヌの)モノクローナル抗体のイヌフレーム内に改変を包含するように操作することができる。
4F9および/または5F12と交差競合する交差遮断抗体およびその抗原結合断片は、イヌ化交差遮断抗体およびその抗原結合断片を包含するものであって、本発明の一部である。加えて、本発明の抗イヌPD−L1抗体または断片のいずれかと同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片もまた、本発明の一部を形成する。交差遮断抗体および抗原結合断片は、標準的な結合アッセイ(例えば、BIACore(登録商標)、ELISAまたはフローサイトメトリー)において4F9および/または5F12と交差競合するそれらの能力に基づいて同定することができる。例えば、組換えイヌPD−L1タンパク質をプレート上に固定化し、抗体のうちの1つを蛍光標識し、競合して標識抗体の結合を外す非標識抗体の能力を調べる標準的なELISAアッセイを用いることができる。加えて、またはあるいは、BIAcore(登録商標)解析を用いてその抗体の交差競合する能力を評価することもできる。試験抗体の、例えば4F9および/または5F12のイヌPD−L1への結合を阻害する能力は、試験抗体がイヌPD−L1への結合について4F9および/または5F12と競合することができ、それゆえに、いくつかの場合において4F9および/または5F12と同じイヌPD−L1上のエピトープに結合し得ることを実証するものである。より特定の実施形態において、4F9および/または5F12と交差競合し、また4F9および/または5F12と同じイヌPD−L1上のエピトープに結合する交差遮断抗体およびその抗原結合断片も本発明の一部である。
抗イヌPD−L1 mAbにより認識されるエピトープ(またはその部分)を含むペプチドおよびかかるペプチドを含む融合タンパク質は、PD−L1のPD−1への結合を遮断してT細胞活性化および免疫応答の亢進をもたらす抗体を誘導するためのワクチンとして用いられ得る。かかるワクチンは、疾患、例えばがんなどのための治療ワクチンとして、または他のワクチンへの免疫応答のエンハンサーとして作用させるのに有用であり得る。これらのペプチドをワクチンとして用いるため、1または複数のこれらのペプチドは、これらのペプチドの免疫原性を増強してペプチド特異的抗体を誘導するために化学的にまたは組換えDNA技術を通じてキャリアタンパク質にカップリングされ得る。ペプチドをキャリアタンパク質にカップリングする技術は、当業者に公知である。ペプチド(および対応する融合タンパク質)ワクチンは、例えば筋肉内(IM)、皮下(S/C)、経口、噴霧または卵内経路により、動物にワクチン接種するために用いられ得る(下も参照されたい)。かかるワクチンは、細菌、ウイルス、酵母またはバキュロウイルスのウイルス系から発現されたサブユニットタンパク質として用いられ得る。あるいはかかるペプチド(または融合タンパク質)ワクチンは、当業者に公知の方法により実行することができる、かかるペプチドまたは融合タンパク質を発現する種々のウイルスベクターまたは細菌ベクターの投与の後に送達され得る。ペプチドまたは融合タンパク質ワクチンは、1〜1000μgの用量で投与され得るものであり、アジュバントおよび許容される薬学的担体を含有してもよい。
イヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体またはその抗原結合断片の医薬組成物または滅菌組成物を調製するため、これを薬学的に許容される担体または賦形剤と混合することができる[例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences and U.S.Pharmacopeia:National Formulary,Mack Publishing Company,Easton,PA(1984)を参照されたい]。
先に記載したように、イヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体またはその抗原結合断片は、1または複数の他の治療薬(例えば化学療法薬など)と共に投与され得る。抗体は、治療薬と連結されていてもよく(免疫複合体として)、または治療薬と別に投与することもできる。後者(別投与)の場合、抗体は、治療薬の前、後もしくは同時に投与することができ、または他の公知の治療と共に投与することができる。
さらに提供されるのは、1または複数の構成成分を含むキットであって、これは、限定されるものではないが、本明細書中に論じられているPD−L1と特異的に結合する抗体または抗原結合断片(例えばイヌ化マウス抗イヌPD−L1抗体またはその抗原結合断片)を1または複数の付加的な構成成分を伴って包含するものであり、この付加的な構成成分には、限定されるものではないが本明細書中に論じられているイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体もしくはその抗原結合断片、および/またはイヌ化マウス抗イヌCTLA−4抗体もしくはその抗原結合断片、薬学的に許容される担体および/または化学療法薬を包含するものである。代替的実施形態において、キットは、上で論じられているように、抗イヌPD−L1 mAbにより認識されるエピトープもしくはその部分(またはエピトープもしくはその部分を含む融合タンパク質)を含む1または複数のペプチドを含むことができる。結合性組成物および/または化学療法薬もしくはエピトープもしくはその部分を含むペプチド(またはエピトープもしくはその部分を含む融合タンパク質)は、医薬組成物中で、純粋な組成物としてまたは薬学的に許容される担体と組み合わせて製剤化することができる。
実施例1
イヌPD−1およびPD−L1
イヌPD−1およびPD−L1の配列:
2013年12月20日に出願された米国仮出願第61/918,946号および2014年7月30日に出願された第62/030,812号は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれ、配列番号49のイヌPD−1(cPD−1)に対する完全長ヌクレオチド配列[配列番号69はシグナル配列を包含する];配列番号50の対応する翻訳されたアミノ酸配列[配列番号70はシグナル配列を包含する];イヌPD−1の細胞外ドメイン(ECD)をコードするヌクレオチド配列、配列番号51;イヌPD−1のECDのアミノ酸配列、配列番号52;イヌPD−1 ECD+GTリンカーおよびヒトIgG1 Fc遺伝子のFc部のヌクレオチド配列、配列番号53;ならびにイヌPD−1 ECD+GTリンカーおよびヒトIgG1 Fc遺伝子のFc部のアミノ酸配列、配列番号54[配列番号81はシグナル配列を包含する]を提供する。
完全長イヌPD−1(cPD−1)をコードする核酸を、NCBI遺伝子バンクデータベースの検索を通じて同定した(アクセッション番号 XM_543338.4)。推定イヌPD−1タンパク質に相当する翻訳されたアミノ酸配列(アクセッション番号 XP_543338.3)を、遺伝子バンク(NCBI)タンパク質データベースの検索および同定されたアミノ酸配列とマウス、ネコおよびヒトのPD−1アミノ酸配列とのアラインメントを通じてさらに同定した。CHO細胞のためにコドン最適化された完全長イヌPD−1遺伝子に相当するDNA配列を合成し、p96793と名付けたプラスミド中にクローニングした。予測イヌPD−1のDNA配列およびタンパク質配列と既知のPD−1 DNA配列およびタンパク質配列との比較は、イヌPD−1の細胞外ドメイン(ECD)をコードするDNA配列およびイヌPD−1のECDのアミノ酸配列の同定を導いた。
完全長のイヌPD−L1をコードする核酸を、NCBI遺伝子バンクデータベースの検索を通じて同定した(アクセッション番号 XM_541302.4)。推定イヌPD−L1タンパク質に相当する翻訳されたアミノ酸配列(アクセッション番号 XP−541302.4)を、遺伝子バンク(NCBI)タンパク質データベースの検索および同定された配列と既知のPD−L1マウスおよびヒト配列とのアラインメントにより同定した。
PD−1ECD−HIS、PD−1ECD−Fc、PD−L1 ECD−HISおよびPD−L1ECD−Fcタンパク質をコードする発現プラスミドをHEK293細胞内にトランスフェクトし、Fc融合タンパク質に対してプロテインAを、またはHISタグ付加タンパク質に対してニッケル(Ni2+)カラムクロマトグラフィーを用いて、トランスフェクト細胞の上清からタンパク質を精製した。精製されたタンパク質を、下に詳述されているELISAまたは結合アッセイのために用いた。発現したタンパク質をSDS−PAGEゲルにより分析した。
ヌクレオチド配列 配列番号49はシグナル配列を伴わない。
完全長イヌPD−1 アミノ酸配列:シグナル配列は下線および太字
アミノ酸配列 配列番号50はシグナル配列を伴わない。
イヌPD−1細胞外ドメイン DNA配列:配列番号51(CHO細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
ctggattcccccgacagaccctggagccctctcaccttctcccctgcccagctgaccgtccaggaaggcgagaatgccaccttcacctgcagcctcgccgacatccccgacagcttcgtgctgaactggtacagactgagccccaggaaccagaccgacaagctggccgctttccaggaggacaggatcgaacccggcagggacaggaggtttagggtcatgaggctgcccaacggcagggacttccacatgtccatcgtggccgccagactgaacgactccggcatctacctgtgcggcgctatctacctgccccccaacacccagatcaacgagagccccagggccgaactgagcgtgacagagagaaccctggaacctcccacccagagcccttcccctcctcctagactgagcggacagctgcagggcctggtg
イヌPD−1細胞外ドメイン:配列番号52
LDSPDRPWSPLTFSPAQLTVQEGENATFTCSLADIPDSFVLNWYRLSPRNQTDKLAAFQEDRIEPGRDRRFRVMRLPNGRDFHMSIVAARLNDSGIYLCGAIYLPPNTQINESPRAELSVTERTLEPPTQSPSPPPRLSGQLQGLV
イヌPD−1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc DNA配列:配列番号53(HEK−293細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
ctggattcccccgacagaccctggagccctctcaccttctcccctgcccagctgaccgtccaggaaggcgagaatgccaccttcacctgcagcctcgccgacatccccgacagcttcgtgctgaactggtacagactgagccccaggaaccagaccgacaagctggccgctttccaggaggacaggatcgaacccggcagggacaggaggtttagggtcatgaggctgcccaacggcagggacttccacatgtccatcgtggccgccagactgaacgactccggcatctacctgtgcggcgctatctacctgccccccaacacccagatcaacgagagccccagggccgaactgagcgtgacagagagaaccctggaacctcccacccagagcccttcccctcctcctagactgagcggacagctgcagggcctggtgggtaccgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga
イヌPD−1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc融合タンパク質:シグナル配列は下線および太字:アミノ酸配列番号54はシグナル配列を伴わない。
完全長イヌPD−L1 DNA配列:シグナル配列は下線および太字
ヌクレオチド配列 配列番号55はシグナル配列を伴わない。
完全長イヌPD−L1:シグナル配列は下線および太字
アミノ酸配列 配列番号56はシグナル配列を伴わない。
イヌPD−L1細胞外ドメイン DNA配列:配列番号57(CHO細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
tttaccatcaccgtgtccaaggacctgtacgtggtcgagtacggcggcaatgtgaccatggagtgcaagttccccgtggagaagcagctgaacctgttcgccctcatcgtgtactgggagatggaggacaagaagatcatccagttcgtgaacggcaaggaggacctgaaggtgcagcactccagctactcccagagagcccagctgctgaaggaccagctgttcctgggcaaggccgccctgcagatcaccgacgtgagactgcaggacgccggcgtgtattgctgcctgatcggctacggaggcgccgactacaagaggatcaccctgaaggtgcatgcaccctacaggaacatcagccagaggatcagcgtcgatcccgtgaccagcgagcacgagctgatgtgccaagccgagggctatcccgaggccgaagtgatctggaccagcagcgaccacagggtcctgagcggcaagaccaccatcaccaacagcaacagggaggagaagctgttcaacgtgaccagcaccctcaacatcaacgccaccgccaacgagatcttctactgcaccttccagaggagcggccccgaagagaacaacaccgccgagctggtgatccccgagagactgcctgtgcctgccagcgagaggacccac
イヌPD−L1細胞外ドメインタンパク質:配列番号58
FTITVSKDLYVVEYGGNVTMECKFPVEKQLNLFALIVYWEMEDKKIIQFVNGKEDLKVQHSSYSQRAQLLKDQLFLGKAALQITDVRLQDAGVYCCLIGYGGADYKRITLKVHAPYRNISQRISVDPVTSEHELMCQAEGYPEAEVIWTSSDHRVLSGKTTITNSNREEKLFNVTSTLNINATANEIFYCTFQRSGPEENNTAELVIPERLPVPASERTH
イヌPD−L1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc DNA配列:配列番号59(HEK−293細胞内での発現のためにコドン最適化されている)
tttaccatcaccgtgtccaaggacctgtacgtggtcgagtacggcggcaatgtgaccatggagtgcaagttccccgtggagaagcagctgaacctgttcgccctcatcgtgtactgggagatggaggacaagaagatcatccagttcgtgaacggcaaggaggacctgaaggtgcagcactccagctactcccagagagcccagctgctgaaggaccagctgttcctgggcaaggccgccctgcagatcaccgacgtgagactgcaggacgccggcgtgtattgctgcctgatcggctacggaggcgccgactacaagaggatcaccctgaaggtgcatgcaccctacaggaacatcagccagaggatcagcgtcgatcccgtgaccagcgagcacgagctgatgtgccaagccgagggctatcccgaggccgaagtgatctggaccagcagcgaccacagggtcctgagcggcaagaccaccatcaccaacagcaacagggaggagaagctgttcaacgtgaccagcaccctcaacatcaacgccaccgccaacgagatcttctactgcaccttccagaggagcggccccgaagagaacaacaccgccgagctggtgatccccgagagactgcctgtgcctgccagcgagaggacccacggtaccgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga
イヌPD−L1細胞外ドメイン−ヒトIgG1 Fc 融合タンパク質:配列番号60
FTITVSKDLYVVEYGGNVTMECKFPVEKQLNLFALIVYWEMEDKKIIQFVNGKEDLKVQHSSYSQRAQLLKDQLFLGKAALQITDVRLQDAGVYCCLIGYGGADYKRITLKVHAPYRNISQRISVDPVTSEHELMCQAEGYPEAEVIWTSSDHRVLSGKTTITNSNREEKLFNVTSTLNINATANEIFYCTFQRSGPEENNTAELVIPERLPVPASERTHGTDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
マウス抗イヌPD−L1抗体
抗イヌPD−L1モノクローナル抗体の作成:
計3匹のBalb/cマウスに17日の期間にわたって複数回の免疫(毎回10μgを使用)を行った。免疫した抗原はイヌPD−L1 ECD−Fc融合タンパク質であった。免疫の後、血清を各マウスから採取し、イヌPD−L1 ECD−HISタグ付加タンパク質との反応性を試験した。血清抗PD−L1 ECD−HIS力価が最も高かったマウスの脾臓細胞を、骨髄腫P3X63Ag8.653細胞株と融合した。融合の約2週間後、推定ハイブリドーマ細胞からの上清を、PD−L1 ECD−HISタグ付加タンパク質へのそれらの反応性についてELISAにより試験した。ELISAにおいて強陽性シグナルを生じたハイブリドーマを限界希釈によりサブクローニングし、イヌPD−L1 ECD−HISタグ付加タンパク質への反応性を再度試験した。
ハイブリドーマにより分泌された抗体の、イヌPD−L1のECDへの反応性をELISAにより確認した。ハイブリドーマ細胞を、10〜30日間、CELLineバイオリアクタ(Integra−biosciences)を用いて培養した。最初に細胞を、4mMのL−グルタミンおよび10%のGibcoからのUltra Low IgGウシ胎仔血清(FBS)を補充したDMEM中で維持した。ハイブリドーマ細胞を、FBS濃度を20%まで増加させた15mLの同培地中で約2×106細胞/mLの細胞密度で、CELLineバイオリアクタ細胞チャンバー内に接種した。外部チャンバーを1Lの栄養培地(4mM L−グルタミンおよび2%標準的FBSを有するDMEM)で満たした。細胞チャンバー内のハイブリドーマ細胞を3〜7日かけて約2.5×107細胞/mLまで増やした。次いで、10mLの細胞懸濁液を細胞チャンバーから回収し、新たな培地で置き換えて細胞を再度増やし、その後に回収した。この手法を、各ハイブリドーマのクローンから適当量のmAbを得るために必要なだけ繰り返した。回収した細胞懸濁液を遠心分離し、上清を0.2ミクロンろ過膜を通してろ過した。抗体精製のため、各クローンの上清を、自然流下によってProtein G Sepharose 4 Fastフロー5mLカラム(GE Healthcare)を用いて精製した。Tris−EDTA(TE)バッファー pH8.0での洗浄後、結合した抗体を0.1Mグリシンバッファー、pH2.7を用いて希釈し、その後に1M Tris、pH8.0を用いてpH中和を行った。Centriprep YM−10,10kDa NMWL遠心ろ過ユニット(Millipore)を用いて抗体を濃縮し、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)にバッファー交換した。抗体濃度を分光光度法を用いて定量した。
完全長イヌPD−1遺伝子をプラスミドp96793内にクローニングした。このプラスミドにおいて、PD−1タンパク質の発現はhCMVプロモーターにより駆動される。CHO DXB11細胞(dhfr−)を、10%ウシ胎仔血清を補充したMEM−アルファ(Gibco)中で維持した。プラスミドp96793でのCHO細胞のトランスフェクションは、リポフェクトアミン(Invitrogen)を用いたリポソームを介した遺伝子送達によって、約6×106細胞を含有する75cm2フラスコ中で行った。48時間後、細胞を、10% FBSおよび400μg/mL ハイグロマイシンBを補充したヌクレオシドを含まないMEM−アルファ培地(選択培地)へと植え継いだ。限界希釈クローニングを、dhfr+、ハイグロマイシン抵抗性細胞のプールに対して実施した。イヌPD−1の発現について、免疫蛍光アッセイによりクローンを評価した。簡潔には、細胞単層を96ウェルプレート中で、80%アセトンで固定した。固定、乾燥させた細胞単層を次いでポリクローナルヤギ抗ヒトPD−1抗体(R&D Systems)と共に1時間インキュベートした。プレートをPBSで洗浄し、次いでフルオレセイン標識ウサギ抗ヤギIgG抗体(KPL)と共に1時間インキュベートした。プレートをPBSで洗浄した。蛍光を呈したクローンを増やし、細胞ストックを樹立した。
イヌPD−1を発現するCHO細胞株を基にした細胞ベースのELISA(CELISA)アッセイを用いて、イヌPD−L1とその受容体のイヌPD−1の間の相互作用を遮断する(例えば結合を遮断する)マウス抗イヌPD−L1抗体の能力を実証した。リガンド遮断は、イヌPD−L1/hFcタンパク質と共にこのアッセイを用いて次のように確認した:
1.96ウェルプレート内にcPD−1 CHO細胞を播種し、95〜100%コンフルエントまで細胞を増殖させる。
−3日目:1×103c/ウェル(1×105c/mL)
−2日目:2×104c/ウェル(2×105c/mL)
−1日目:4×104c/ウェル(4×105c/mL)
2.CHO培地中で抗cPDL1 mAbを3倍希釈する、30μg/mLから開始、100μL/ウェル。100μL/ウェルのCHO培地中にcPD−L1−hFcを4μg/mlになるように加え、希釈プレート中で37℃、5% CO2で振とうしながら60分間、共インキュベートする。
マウスVH鎖およびVL鎖のDNA配列ならびにそれらのCDRをコードするDNA配列を、標準的な分子生物学的方法を用いて、各ハイブリドーマからのmRNAの分離後に同定する。本明細書中に例示されている2つの抗体の軽鎖および重鎖の可変領域の配列は、下の表12中に与えられる。これらのハイブリドーマからのCDRの予測アミノ酸配列の配列番号は下の表2に収載される:
表2
CDRのアミノ酸配列
イヌ化およびイヌ化抗体の性質決定
イヌ化抗体を生産するため、イヌIgGの重鎖および軽鎖をコードするDNA配列を同定することが必要であった。イヌ重鎖のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、NCBI遺伝子データベースおよびタンパク質データベースから入手することができる。イヌIgGには4つの既知のIgGサブクラス:IgGA、IgGB、IgGCおよびIgGD、ならびに2つのタイプの軽鎖:カッパおよびラムダがある。表7は、改変されていないイヌFc断片のアミノ酸およびヌクレオチドの配列番号を収載している。
i)マウスmAbのVH鎖およびVL鎖のヌクレオチド配列を決定する;
ii)マウスmAbのH鎖CDRおよびL鎖CDRを同定する;
iii)イヌIgGの好適なH鎖およびL鎖を同定する;
iv)イヌIgG H鎖およびL鎖のヌクレオチド配列を決定する;
v)内因性のイヌH鎖CDRおよびL鎖CDRをコードするヌクレオチド配列を、それぞれのマウスCDRをコードするヌクレオチド配列で置き換える。また、いくつかのイヌフレームワーク残基をマウスフレームワーク領域から選択される残基で置き換えてもよい;
vi)ステップ(v)からのヌクレオチドを合成し、好適な発現プラスミド内に挿入し;適切な細胞、例えばHEK293細胞内にプラスミドをトランスフェクトする;
vii)HEK293上清からの発現抗体を精製する;そして
viii)イヌPD−L1への結合について精製抗体を試験する。
遺伝子改変イヌIgG
エフェクター機能を欠いたイヌIgGのバリアントを作成するため、多数の変異イヌIgGB重鎖を作成した[2014年7月30日に出願され、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる米国仮出願第62/030,812号を参照されたい]。これらのバリアントは、重鎖アミノ酸配列のFc部分中に、次の単一のまたは組み合わせた置換のうちの1つを包含し得る:P4A、D31A、N63A、G64P、T65A、A93GおよびP95A。バリアント重鎖(すなわちかかるアミノ酸置換を含有するもの)を発現プラスミド内にクローニングし、軽鎖をコードする遺伝子を含有するプラスミドと共にHEK293細胞にトランスフェクトした。HEK293細胞から発現され精製されたインタクトな抗体を、それらが免疫エフェクター機能を仲介する可能性を評価するため、FcγRIおよびC1qへの結合について調べた。表3は、遺伝子改変されたイヌ化重鎖、イヌ化重鎖;およびこれらの重鎖における遺伝子改変体をコードするプラスミドの例を収載している。バリアント重鎖を、遺伝子改変されたmAbにおけるエフェクター機能の評価のために用いた。全ての重鎖は、マウス抗イヌPD−1抗体からのCDRで構成されていた[上の米国仮出願第62/030,812号を参照されたい]。
cIgGB Fc[配列番号2]
LGGXSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVXLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFXXXYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKXLXSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
cIgGB Fc[配列番号1]
ctgggcggcnnnagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagataccctgctgattgcgcgcaccccggaagtgacctgcgtggtggtgnnnctggatccggaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaacagatgcagaccgcgaaaacccagccgcgcgaagaacagtttnnnnnnnnntatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgaaaggcaaacagtttacctgcaaagtgaacaacaaannnctgnnnagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagccgcgaagaactgagcaaaaacaccgtgagcctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggatattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcaccaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccaggaaagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGC Fc[配列番号4]
LGGXSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVXLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSXXXYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKXLXSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
cIgGC Fc[配列番号3]
ctgggcggcnnnagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctggtgaccgcgcgcaccccgaccgtgacctgcgtggtggtgnnnctggatccggaaaacccggaagtgcagattagctggtttgtggatagcaaacaggtgcagaccgcgaacacccagccgcgcgaagaacagagcnnnnnnnnntatcgcgtggtgagcgtgctgccgattggccatcaggattggctgagcggcaaacagtttaaatgcaaagtgaacaacaaannnctgnnnagcccgattgaagaaattattagcaaaaccccgggccaggcgcatcagccgaacgtgtatgtgctgccgccgagccgcgatgaaatgagcaaaaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagcaggaaccggaaagcaaatatcgcatgaccccgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcgcggcgatacctttatttgcgcggtgatgcatgaagcgctgcataaccattatacccagattagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(DヒンジのS−−>P)fabアーム交換[配列番号6]
PKESTCKCIPPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(DヒンジのS−−>P)fabアーム交換[配列番号5]
ccgaaagaaagcacctgcaaatgcattccgccgtgcccggtgccggaaagcctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctgcgcattacccgcaccccggaaattacctgcgtggtgctggatctgggccgcgaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaagaagtgcataccgcgaaaacccagccgcgcgaacagcagtttaacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattgaacatcaggattggctgaccggcaaagaatttaaatgccgcgtgaaccatattggcctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagcccgaaagaactgagcagcagcgataccgtgaccctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagccggaaccggaaagcaaatatcataccaccgcgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcagggcgatacctttacctgcgcggtgatgcatgaagcgctgcagaaccattataccgatctgagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(Aヒンジ)fabアーム交換[配列番号8]
FNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(Aヒンジ)fabアーム交換[配列番号7]
tttaacgaatgccgctgcaccgataccccgccgtgcccggtgccggaaccgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctgcgcattacccgcaccccggaaattacctgcgtggtgctggatctgggccgcgaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaagaagtgcataccgcgaaaacccagccgcgcgaacagcagtttaacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattgaacatcaggattggctgaccggcaaagaatttaaatgccgcgtgaaccatattggcctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagcccgaaagaactgagcagcagcgataccgtgaccctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagccggaaccggaaagcaaatatcataccaccgcgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcagggcgatacctttacctgcgcggtgatgcatgaagcgctgcagaac
cattataccgatctgagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(Bヒンジ)fabアーム交換[配列番号10]
PKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(Bヒンジ)fabアーム交換[配列番号9]
ccgaaacgcgaaaacggccgcgtgccgcgcccgccggattgcccgaaatgcccggcgccggaaatgctgggcggcccgagcgtgtttatttttccgccgaaaccgaaagatattctgcgcattacccgcaccccggaaattacctgcgtggtgctggatctgggccgcgaagatccggaagtgcagattagctggtttgtggatggcaaagaagtgcataccgcgaaaacccagccgcgcgaacagcagtttaacagcacctatcgcgtggtgagcgtgctgccgattgaacatcaggattggctgaccggcaaagaatttaaatgccgcgtgaaccatattggcctgccgagcccgattgaacgcaccattagcaaagcgcgcggccaggcgcatcagccgagcgtgtatgtgctgccgccgagcccgaaagaactgagcagcagcgataccgtgaccctgacctgcctgattaaagatttttttccgccggaaattgatgtggaatggcagagcaacggccagccggaaccggaaagcaaatatcataccaccgcgccgcagctggatgaagatggcagctattttctgtatagcaaactgagcgtggataaaagccgctggcagcagggcgatacctttacctgcgcggtgatgcatgaagcgctgcagaaccattataccgatctgagcctgagccatagcccgggcaaa
cIgGD Fc(Cヒンジ)fabアーム交換[配列番号12]
AKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc(Cヒンジ)fabアーム交換[配列番号11]
gccaaggagtgcgagtgcaagtgcaactgcaacaactgcccctgccccggctgcggcctgctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
野生型Fc
cIgGA Fc[配列番号62]
LGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGA Fc[配列番号61]
ctgggcggccccagcgtgctgatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgaggtgacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagagcagagagcagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcgacctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggcagagcccacaagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgagcatcacctgcctgatcaaggacttctacccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagaaagcacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgaccccttcacctgcgccgtgatgcacgagaccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
cIgGD Fc[配列番号64]
LGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
cIgGD Fc[配列番号63]
ctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
cIgGB Fc[配列番号66]
LGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
cIgGB Fc[配列番号65]
ctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacaccctgctgatcgccagaacccccgaggtgacctgcgtggtggtggacctggaccccgaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaagcagatgcagaccgccaagacccagcccagagaggagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgaagggcaagcagttcacctgcaaggtgaacaacaaggccctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagcagagaggagctgagcaagaacaccgtgagcctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaaccacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccaggagagcctgagccacagccccggcaag
cIgGC Fc[配列番号68]
LGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSNGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
cIgGC Fc[配列番号67]
ctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctggtgaccgccagaacccccaccgtgacctgcgtggtggtggacctggaccccgagaaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacagcaagcaggtgcagaccgccaacacccagcccagagaggagcagagcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgagcggcaagcagttcaagtgcaaggtgaacaacaaggccctgcccagccccatcgaggagatcatcagcaagacccccggccaggcccaccagcccaacgtgtacgtgctgccccccagcagagacgagatgagcaagaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagatcagcctgagccacagccccggcaag
個々の置換重鎖
4F9−VH3 cIgGB[配列番号26]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPASKTKVDKPVPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGXSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVXLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFXXXYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKXLXSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
4F9−VH3 cIgGB DNA[配列番号25]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccagcaagaccaaggtggacaagcccgtgcccaagagagagaacggcagagtgcccagaccccccgactgccccaagtgccccgcccccgagatgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacaccctgctgatcgccagaacccccgaggtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaagcagatgcagaccgccaagacccagcccagagaggagcagttcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgaagggcaagcagttcacctgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagcagagaggagctgagcaagaacaccgtgagcctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaaccacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccaggagagcctgagccacagccccggcaag
4F9−VH3 cIgGC[配列番号28]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSQSGSTVALACLVSGYIPEPVTVSWNSVSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPATNTKVDKPVAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGXSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVXLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSXXXYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKXLXSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
4F9−VH3 cIgGC DNA[配列番号27]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagccagagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacatccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcgtgagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccaccaacaccaaggtggacaagcccgtggccaaggagtgcgagtgcaagtgcaactgcaacaactgcccctgccccggctgcggcctgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctggtgaccgccagaacccccaccgtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgagaaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacagcaagcaggtgcagaccgccaacacccagcccagagaggagcagagcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgagcggcaagcagttcaagtgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgaggagatcatcagcaagacccccggccaggcccaccagcccaacgtgtacgtgctgccccccagcagagacgagatgagcaagaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagatcagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VH3 CIgGB[配列番号30]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPASKTKVDKPVPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGXSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVXLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFXXXYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKXLXSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
5F12−VH3 CIgGB DNA[配列番号29]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccagcaagaccaaggtggacaagcccgtgcccaagagagagaacggcagagtgcccagaccccccgactgccccaagtgccccgcccccgagatgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacaccctgctgatcgccagaacccccgaggtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaagcagatgcagaccgccaagacccagcccagagaggagcagttcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgaagggcaagcagttcacctgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagcagagaggagctgagcaagaacaccgtgagcctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaaccacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccaggagagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VH3−cIgGC Fc[配列番号32]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSQSGSTVALACLVSGYIPEPVTVSWNSVSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPATNTKVDKPVAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGXSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVXLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSXXXYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKXLXSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
5F12−VH3−cIgGC Fc DNA[配列番号31]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagccagagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacatccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcgtgagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggcccaccccgccaccaacaccaaggtggacaagcccgtggccaaggagtgcgagtgcaagtgcaactgcaacaactgcccctgccccggctgcggcctgctgggcggcnnnagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctggtgaccgccagaacccccaccgtgacctgcgtggtggtgnnnctggaccccgagaaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacagcaagcaggtgcagaccgccaacacccagcccagagaggagcagagcnnnnnnnnntacagagtggtgagcgtgctgcccatcggccaccaggactggctgagcggcaagcagttcaagtgcaaggtgaacaacaagnnnctgnnnagccccatcgaggagatcatcagcaagacccccggccaggcccaccagcccaacgtgtacgtgctgccccccagcagagacgagatgagcaagaacaccgtgaccctgacctgcctggtgaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagcaagtacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagagaggcgacaccttcatctgcgccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagatcagcctgagccacagccccggcaag
個々の置換されていないイヌ化重鎖および軽鎖
4F9−VH3−cIgGA Fc[配列番号34]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLHSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
4F9−VH3−cIgGA Fc[配列番号33]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgcacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgttcaacgagtgcagatgcaccgacacccccccctgccccgtgcccgagcccctgggcggccccagcgtgctgatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgaggtgacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagagcagagagcagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcgacctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggcagagcccacaagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgagcatcacctgcctgatcaaggacttctacccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagaaagcacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgaccccttcacctgcgccgtgatgcacgagaccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
4F9−VH3 cIgGD Fc[配列番号36]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASGFTFSYAMSWVRQAPGKGLQWMGTISDGGSYTHYPDNLMGRFTFSLDTAKNTAYLQLNSLRAEDTAVYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSTVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
4F9−VH3 cIgGD Fc[配列番号35]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcggcttcaccttcagctacgccatgagctgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatgggcaccatcagcgacggcggcagctacacccactaccccgacaacctgatgggcagattcaccttcagcctggacaccgccaagaacaccgcctacctgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcgccagagagagctacgacggctactacgtggccaactggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcaccgtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgcccaaggagagcacctgcaagtgcatcagcccctgccccgtgcccgagagcctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
4F9−VL3−cL−カッパ[配列番号38]
DIVMTQTPLSLSVSPGEPASMSCRASQSISNNLHWYRQKPGQSPQVLVKYASQSISGVPDRFIGSGSGTDFTLRISRVEADDLGVYYCQQSNSWPQTFGQGTKLELKRNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
4F9−VL3−cL−カッパ[配列番号37]
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgagcgtgagccccggcgagcccgccagcatgagctgcagagccagccagagcatcagcaacaacctgcactggtacagacagaagcccggccagagcccccaggtgctggtgaagtacgccagccagagcatcagcggcgtgcccgacagattcatcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgagaatcagcagagtggaggccgacgacctgggcgtgtactactgccagcagagcaacagctggccccagaccttcggccagggcaccaagctggagctgaagagaaacgacgcccagcccgccgtgtacctgttccagcccagccccgaccagctgcacaccggcagcgccagcgtggtgtgcctgctgaacagcttctaccccaaggacatcaacgtgaagtggaaggtggacggcgtgatccaggacaccggcatccaggagagcgtgaccgagcaggacagcaaggacagcacctacagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgagtacctgagccacgagctgtacagctgcgagatcacccacaagagcctgcccagcaccctgatcaagagcttccagagaagcgagtgccagagagtggac
5F12−VH3−cIgGA Fc[配列番号40]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLHSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
5F12−VH3−cIgGA Fc[配列番号39]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgcacagcctgagcagcatggtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgttcaacgagtgcagatgcaccgacacccccccctgccccgtgcccgagcccctgggcggccccagcgtgctgatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgaggtgacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagagcagagagcagcagttcaacggcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcgacctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggcagagcccacaagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgagcatcacctgcctgatcaaggacttctacccccccgacatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcaggagcccgagagaaagcacagaatgacccccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgaccccttcacctgcgccgtgatgcacgagaccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VH3−cIgGD Fc[配列番号42]
EVQLVQSGGDLVKPGGSVRLSCVASFTFDYYMNWVRQAPGKGLQWIGRWIFPGSGATYYNERFMGKATISADTAKNTAYMQLNSLRAEDTAVYYCLRSDWDVGDFWGQGTLVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSTVTVPSSRWPSETFTCNVVHPASNTKVDKPVPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFFPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
5F12−VH3−cIgGD Fc[配列番号41]
gaggtgcagctggtgcagagcggcggcgacctggtgaagcccggcggcagcgtgagactgagctgcgtggccagcttcaccttcgactactacatgaactgggtgagacaggcccccggcaagggcctgcagtggatcggcagatggatcttccccggcagcggcgccacctactacaacgagagattcatgggcaaggccaccatcagcgccgacaccgccaagaacaccgcctacatgcagctgaacagcctgagagccgaggacaccgccgtgtactactgcctgagaagcgactgggacgtgggcgacttctggggccagggcaccctggtgaccgtgagcagcgccagcaccaccgcccccagcgtgttccccctggcccccagctgcggcagcaccagcggcagcaccgtggccctggcctgcctggtgagcggctacttccccgagcccgtgaccgtgagctggaacagcggcagcctgaccagcggcgtgcacaccttccccagcgtgctgcagagcagcggcctgtacagcctgagcagcaccgtgaccgtgcccagcagcagatggcccagcgagaccttcacctgcaacgtggtgcaccccgccagcaacaccaaggtggacaagcccgtgcccaaggagagcacctgcaagtgcatcagcccctgccccgtgcccgagagcctgggcggccccagcgtgttcatcttcccccccaagcccaaggacatcctgagaatcaccagaacccccgagatcacctgcgtggtgctggacctgggcagagaggaccccgaggtgcagatcagctggttcgtggacggcaaggaggtgcacaccgccaagacccagcccagagagcagcagttcaacagcacctacagagtggtgagcgtgctgcccatcgagcaccaggactggctgaccggcaaggagttcaagtgcagagtgaaccacatcggcctgcccagccccatcgagagaaccatcagcaaggccagaggccaggcccaccagcccagcgtgtacgtgctgccccccagccccaaggagctgagcagcagcgacaccgtgaccctgacctgcctgatcaaggacttcttcccccccgagatcgacgtggagtggcagagcaacggccagcccgagcccgagagcaagtaccacaccaccgccccccagctggacgaggacggcagctacttcctgtacagcaagctgagcgtggacaagagcagatggcagcagggcgacaccttcacctgcgccgtgatgcacgaggccctgcagaaccactacaccgacctgagcctgagccacagccccggcaag
5F12−VL3−cLカッパ[配列番号44]
DIVMTQTPLSLSVSLGEPASISCRSSRSLLHTNGITYLSWYRQKPGQIPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEADDAGVYYCAQTLGLPRTFGQGTKVEIKRNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
5F12−VL3−cLカッパ[配列番号43]
gacatcgtgatgacccagacccccctgagcctgagcgtgagcctgggcgagcccgccagcatcagctgcagaagcagcagaagcctgctgcacaccaacggcatcacctacctgagctggtacagacagaagcccggccagatcccccagctgctgatctaccagatgagcaacctggccagcggcgtgcccgacagattcagcggcagcggcagcggcaccgacttcaccctgagaatcagcagagtggaggccgacgacgccggcgtgtactactgcgcccagaccctgggcctgcccagaaccttcggccagggcaccaaggtggagatcaagagaaacgacgcccagcccgccgtgtacctgttccagcccagccccgaccagctgcacaccggcagcgccagcgtggtgtgcctgctgaacagcttctaccccaaggacatcaacgtgaagtggaaggtggacggcgtgatccaggacaccggcatccaggagagcgtgaccgagcaggacagcaaggacagcacctacagcctgagcagcaccctgaccatgagcagcaccgagtacctgagccacgagctgtacagctgcgagatcacccacaagagcctgcccagcaccctgatcaagagcttccagagaagcgagtgccagagagtggac
マウス抗イヌPDL−1:4F9の可変領域
重鎖:DNA配列[配列番号73]
gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctatgccatgtcttgggttcgccagactccggacaagagactggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggaagttacacccactaccccgacaatttaatgggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaacctgtacctgcaaatgagccatctgaagtctgacgacacagccatgtattactgtgcacgagagagctatgatggttactacgtggctaactggggccaagggactctggtcactgtctcagca
重鎖:アミノ酸配列[配列番号74]
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPDKRLEWVATISDGGSYTHYPDNLMGRFTISRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARESYDGYYVANWGQGTLVTVSA
軽鎖:DNA配列[配列番号75]
gatattgtgctaactcagtctccagccaccctgtctgtgaatccaggagatagcgtcagtctttcctgcagggccagccaaagtattagcaacaacctacactggtatcaacaaaaatcacatgagtctccaaggcttctcatcaagtatgcttcccagtccatctctgggatcccctccaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcactctcagtatcaacagtgtggagactgaagattttggaatgtatttctgtcaacagagtaacagctggcctcagacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
軽鎖:アミノ酸配列[配列番号76]
DIVLTQSPATLSVNPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSNSWPQTFGGGTKLEIK
マウス抗イヌPDL−1:抗PDL−1 5F12の可変領域
重鎖:DNA配列[配列番号77]
caggtccagctacagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaagatatcctgcaaggcttctggctacaccttcactgactactatatgaattgggtgaaacagaggcctggacagggacttgagtggattggatggatttttcccggaagtggtgctacttactacaatgagaggttcatgggcaaggccacacttactgtggataaatcttccaacacagcctacatgttgttcagtagcctgacctctgaggactctgcggtctatttctgtttaagatctgactgggacgtcggggacttctggggccaaggcaccactctcacagtctcctca
重鎖:アミノ酸配列[配列番号78]
QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYMNWVKQRPGQGLEWIGWIFPGSGATYYNERFMGKATLTVDKSSNTAYMLFSSLTSEDSAVYFCLRSDWDVGDFWGQGTTLTVSS
軽鎖:DNA配列[配列番号79]
gatattgtgatgacgcaggctgcattctccaatccagtcactcttggaacatcagcttccatctcctgcaggtctagtaggagtctcctacatactaatggcatcacttatttgtcttggtttctgcagaagccaggccagtctcctcagctcctgatttatcagatgtccaaccttgcctcaggagtcccagacaggttcagtagcagtgggtcaggaactgatttcacactgagaatcagtagagtggaggctgaggatgtgggtatttattactgtgctcaaactctaggacttcctcggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
軽鎖:アミノ酸配列[配列番号80]
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSRSLLHTNGITYLSWFLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGIYYCAQTLGLPRTFGGGTKLEIK
抗イヌPD−L1抗体のエピトープマッピング
抗体とそれらの同族タンパク質抗原との相互作用は、抗体の特定アミノ酸(パラトープ)と標的抗原の特定アミノ酸(エピトープ)の結合を通じて仲介される。エピトープは、免疫グロブリンによる特異的反応を引き起こす抗原性決定基である。エピトープは、抗原の表面上のアミノ酸のグループからなる。目的タンパク質は、異なる抗体により認識されるいくつかのエピトープを含有し得る。抗体により認識されるエピトープは、線状エピトープまたは立体構造エピトープとして分類される。線状エピトープはタンパク質中のアミノ酸の一続きの連続配列により形成されるが、立体構造エピトープは一次アミノ酸配列中では不連続である(例えば遠く離れている)が、3次元タンパク質フォールディングの際には集合するアミノ酸から構成される。
化学的架橋および質量分析検出に基づく方法を使用して、抗イヌPD−L1 mAbにより認識されるエピトープを同定した[CovalX(登録商標) Instrument Incorporated]。イヌPD−L1のエピトープマッピングへのこの技術の適用は、表13中に収載されている示されたmAbにより認識されるエピトープの同定をもたらした。mAb 4F9を使用したイヌPD−L1のエピトープマッピングの結果は、このmAbが配列番号82により表されるアミノ酸配列および配列番号83により表されるアミノ酸配列から構成されるイヌPD−L1の細胞外ドメイン内に位置するエピトープを認識することを示す[表13を参照されたい]。さらには、mAb 5F12を使用したエピトープマッピング実験の結果は、このmAbが配列番号82により表されるアミノ酸配列から構成されるイヌPD−L1の細胞外ドメイン内に位置するエピトープを認識することを示す。注目すべきことに、本明細書中で同定されたイヌPD−L1上のエピトープの位置は、対応するヒトPD−L1について近年報告された位置と合理的に一致しており[Hao et al.,J.Mol.Recognit.28:269−276(2015)]、これは上で与えられた決定へのさらなる信頼を与えるものである。
Claims (16)
- 3つの軽鎖相補性決定領域(CDR):CDR light 1(CDRL1)、CDR light 2(CDRL2)およびCDR light 3(CDRL3);ならびに3つの重鎖CDR:CDR heavy 1(CDRH1)、CDR heavy 2(CDRH2)およびCDR heavy 3(CDRH3)である6つのCDRのセットを含む、イヌのプログラム死リガンド1(イヌPD−L1)と特異性を有して結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって:ここで、6つのCDRのセットは、以下の群から選択され;
(i)
CDRH1は、配列番号13のアミノ酸配列を含み;
CDRH2は、配列番号14のアミノ酸配列を含み;
CDRH3は、配列番号15のアミノ酸配列を含み;
CDRL1は、配列番号16のアミノ酸配列を含み;
CDRL2は、配列番号17のアミノ酸配列を含み;
CDRL3は、配列番号18のアミノ酸配列を含む;及び
(ii)
CDRH1は、配列番号19のアミノ酸配列を含み;
CDRH2は、配列番号20のアミノ酸配列を含み;
CDRH3は、配列番号21のアミノ酸配列を含み;
CDRL1は、配列番号22のアミノ酸配列を含み;
CDRL2は、配列番号23のアミノ酸配列を含み;
CDRL3は、配列番号24のアミノ酸配列を含む;
そして
前記抗体およびその抗原結合断片は、イヌPD−L1と結合し、イヌPD−L1のイヌプログラム死1(PD−1)への結合を遮断する、前記抗体またはその抗原結合断片。 - 抗体がイヌ化抗体である、請求項1の単離された抗体。
- 配列番号66および配列番号68よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むイヌ結晶性フラグメント領域(cFc領域)を含む、請求項2のイヌ化抗体またはその抗原結合断片であって;ここで、1から7個のアミノ酸残基が、P4、D31、N63、G64、T65、A93およびP95よりなる群から選択される指示された位置で置換されている前記イヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- 置換される1から7個のアミノ酸残基の置換が、P4A、D31A、N63A、G64A、T65A、A93GおよびP95Aよりなる群から選択される、請求項3のイヌ化抗体。
- 2つのアミノ酸置換D31A及びN63Aを含み、そして、P4、G64、T65、A93及びP95のアミノ酸配列は維持される、請求項4のイヌ化抗体。
- 配列番号62および配列番号64よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むイヌ結晶性フラグメント領域を含む、請求項2のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- 配列番号45、配列番号46、配列番号47および配列番号48よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒンジ領域を含む、請求項6のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- (i)配列番号26であって、242位のアミノ酸がプロリンであり、269位のアミノ酸がアラニンであり、301位のアミノ酸がアラニンであり、302位のアミノ酸がグリシンであり、303位のアミノ酸がスレオニンであり、331位のアミノ酸がアラニンであり、そして333位のアミノ酸がプロリンである、
(ii)配列番号28であって、240位のアミノ酸がプロリンであり、267位のアミノ酸がアラニンであり、299位のアミノ酸がアラニンであり、300位のアミノ酸がグリシンであり、301位のアミノ酸がスレオニンであり、329位のアミノ酸がアラニンであり、そして331位のアミノ酸がプロリンである、
(iii)配列番号30であって、240位のアミノ酸がプロリンであり、267位のアミノ酸がアラニンであり、299位のアミノ酸がアラニンであり、300位のアミノ酸がグリシンであり、301位のアミノ酸がスレオニンであり、329位のアミノ酸がアラニンであり、そして331位のアミノ酸がプロリンである、および、
(iv)配列番号32であって、238位のアミノ酸がプロリンであり、265位のアミノ酸がアラニンであり、297位のアミノ酸がアラニンであり、298位のアミノ酸がグリシンであり、299位のアミノ酸がスレオニンであり、327位のアミノ酸がアラニンであり、そして329位のアミノ酸がプロリンである、
よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項5のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。 - 配列番号34、配列番号36、配列番号40および配列番号42よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項7のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- 配列番号38および配列番号44よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含むイヌ軽鎖をさらに含む、請求項2、3、4、5、6、7、8または9のイヌ化抗体またはその抗原結合断片。
- イヌPD−L1に結合する際に前記抗体が配列番号82または配列番号83のアミノ酸配列内の少なくとも1個のアミノ酸に結合し;前記抗体およびその抗原結合断片がイヌPD−L1と結合し、イヌPD−L1のイヌPD−1への結合を遮断する、請求項2、3、4、5、6、7、8、9または10の単離された抗体またはその抗原結合断片。
- 請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11の抗体の軽鎖をコードする、単離された核酸。
- 請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11の抗体の重鎖をコードする、単離された核酸。
- 配列番号13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23および24よりなる群から選択される1または複数のアミノ酸配列をコードする、請求項12または13の単離された核酸。
- 請求項12、13または14の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11の抗体、請求項12、13または14の核酸、請求項15の発現ベクターまたはそれらの任意の組み合わせ、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462057541P | 2014-09-30 | 2014-09-30 | |
US62/057,541 | 2014-09-30 | ||
US201562172511P | 2015-06-08 | 2015-06-08 | |
US62/172,511 | 2015-06-08 | ||
PCT/EP2015/072324 WO2016050721A1 (en) | 2014-09-30 | 2015-09-29 | Pd-l1 antibodies binding canine pd-l1 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017534267A JP2017534267A (ja) | 2017-11-24 |
JP6797111B2 true JP6797111B2 (ja) | 2020-12-09 |
Family
ID=54207505
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017516842A Active JP6797111B2 (ja) | 2014-09-30 | 2015-09-29 | イヌpd−l1と結合するpd−l1抗体 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10550194B2 (ja) |
EP (1) | EP3201230B1 (ja) |
JP (1) | JP6797111B2 (ja) |
CN (2) | CN112851816B (ja) |
AU (2) | AU2015326996B2 (ja) |
BR (1) | BR112017006203A2 (ja) |
CA (1) | CA2961987A1 (ja) |
DK (1) | DK3201230T3 (ja) |
ES (1) | ES2853823T3 (ja) |
RU (2) | RU2722562C2 (ja) |
WO (1) | WO2016050721A1 (ja) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP4169951A1 (en) | 2008-12-09 | 2023-04-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function |
CN106029697B (zh) * | 2013-12-20 | 2021-06-04 | 英特维特国际股份有限公司 | 具有经修饰的ch2-ch3序列的犬抗体 |
CA2978942A1 (en) | 2015-03-13 | 2016-09-22 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Anti-pdl1 antibodies, activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof |
BR112017020915A2 (pt) | 2015-04-02 | 2018-07-10 | Intervet Int Bv | ?anticorpo de mamífero isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo caninizado ou fragmento de ligação ao antígeno caninizado do mesmo, anticorpo monoclonal caninizado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, peptídeo isolado, proteína de fusão, composição farmacêutica, e, método para diminuir a atividade de uma célula imune? |
US11091556B2 (en) | 2015-12-18 | 2021-08-17 | Intervet Inc. | Caninized human antibodies to human IL-4R alpha |
AU2017281830B2 (en) | 2016-06-20 | 2023-04-06 | Kymab Limited | Anti-PD-L1 antibodies |
CN110267674A (zh) * | 2016-07-08 | 2019-09-20 | 奥美药业有限公司 | 包含瘦素的融合蛋白及其生产和使用方法 |
ES2899036T3 (es) * | 2016-08-04 | 2022-03-09 | Innovent Biologics Suzhou Co Ltd | Nanocuerpo anti-PD-L1 y su uso |
US11312773B2 (en) * | 2016-08-15 | 2022-04-26 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Anti-PD-L1 antibody |
CA3040823A1 (en) * | 2016-10-17 | 2018-04-26 | Vetoquinol Sa | Modified antibody constant region |
AU2018242880B2 (en) * | 2017-03-27 | 2024-05-16 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Anti-PD-L1 antibody for detecting PD-L1 |
EP3630838A1 (en) | 2017-06-01 | 2020-04-08 | CytomX Therapeutics, Inc. | Activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof |
US20190100587A1 (en) * | 2017-10-02 | 2019-04-04 | Covagen Ag | IgG1 Fc MUTANTS WITH ABLATED EFFECTOR FUNCTIONS |
WO2019101196A1 (zh) * | 2017-11-27 | 2019-05-31 | 山东博安生物技术有限公司 | 抗pd-l1的抗体及其用途 |
CA3114796A1 (en) * | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Kindred Biosciences, Inc. | Fc variants with altered binding to neonatal fc receptor (fcrn) for veterinary use |
CN109452229B (zh) * | 2018-11-19 | 2021-10-22 | 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 | 狗源化pd-1基因改造动物模型的制备方法及应用 |
CA3123623A1 (en) * | 2018-12-27 | 2020-07-02 | Kindred Biosciences, Inc. | Igg fc variants for veterinary use |
CN110194799B (zh) * | 2019-06-03 | 2021-07-23 | 北京希诺谷生物科技有限公司 | 结合犬pd-1的抗犬pd-1抗体 |
JP2022541767A (ja) | 2019-07-15 | 2022-09-27 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | ヒト及びイヌctla-4に対するイヌ化抗体 |
JP2022542808A (ja) * | 2019-07-15 | 2022-10-07 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | イヌctla-4に対するイヌ化抗体 |
CN110590959B (zh) * | 2019-09-19 | 2021-01-05 | 北京伟杰信生物科技有限公司 | 重组犬pd-1融合蛋白及其制备方法与应用 |
US11834512B2 (en) | 2020-05-04 | 2023-12-05 | The Regents Of The University Of California | Inhibiting anti-ENPP1 antibodies |
AU2022321899A1 (en) * | 2021-08-06 | 2024-02-08 | Petmedix Ltd | Antibody fc variants |
WO2024107777A2 (en) * | 2022-11-15 | 2024-05-23 | Purdue Research Foundation | Canine pd-l1 antibody, antigen binding fragments thereof, and methods of use thereof |
WO2024145278A2 (en) | 2022-12-27 | 2024-07-04 | Invetx, Inc. | Polypeptides with altered binding to neonatal fc receptor (fcrn) and methods of use |
CN117343185B (zh) * | 2023-12-06 | 2024-03-01 | 北京伟杰信生物科技有限公司 | 一种抗犬pd-1抗体及其用途 |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2532910T3 (es) | 1998-04-02 | 2015-04-01 | Genentech, Inc. | Variantes de anticuerpos y fragmentos de los mismos |
WO2001077332A2 (en) | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Heska Corporation | Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors |
JP4409430B2 (ja) | 2002-07-03 | 2010-02-03 | 小野薬品工業株式会社 | 免疫賦活組成物 |
TW200902555A (en) | 2005-01-03 | 2009-01-16 | Hoffmann La Roche | Antibodies against IL-13 receptor alpha 1 and uses thereof |
PL2439273T3 (pl) | 2005-05-09 | 2019-08-30 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko białku programowanej śmierci komórki 1(pd-1) oraz metody leczenia nowotworów z wykorzystaniem przeciwciał anty-pd-1 samodzielnie lub w połączeniu z innymi immunoterapeutykami |
CN104356236B (zh) * | 2005-07-01 | 2020-07-03 | E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 | 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体 |
CA2691357C (en) | 2007-06-18 | 2014-09-23 | N.V. Organon | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
MX2010003720A (es) * | 2007-10-08 | 2010-10-20 | Intrexon Corp | Celulas dendriticas creadas por ingenieria genetica y usos para el tratamiento de cancer. |
EP2725037A1 (en) | 2008-09-04 | 2014-04-30 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies binding canine CD20 |
AU2013204861B2 (en) * | 2008-09-26 | 2016-05-12 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Human anti-PD-1, PD-L1, and PD-L2 antibodies and uses therefor |
CA2998281C (en) | 2008-09-26 | 2022-08-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Human anti-pd-1 antobodies and uses therefor |
WO2010110838A2 (en) | 2009-03-25 | 2010-09-30 | Vet Therapeutics Inc. | Antibody constant domain regions and uses thereof |
WO2010117448A2 (en) | 2009-04-05 | 2010-10-14 | Provenance Biopharmaceuticals Corp. | Chimeric immunocytokines and methods of use thereof |
JP2013512251A (ja) * | 2009-11-24 | 2013-04-11 | アンプリミューン、インコーポレーテッド | Pd−l1/pd−l2の同時阻害 |
US9616120B2 (en) | 2010-03-04 | 2017-04-11 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies directed to CD20 |
US8652470B2 (en) | 2010-03-04 | 2014-02-18 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies directed to CD52 |
SG194793A1 (en) | 2011-05-06 | 2013-12-30 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
GB2528401A (en) | 2011-05-06 | 2016-01-20 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
CA2834983C (en) | 2011-05-06 | 2020-11-17 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
GB201114858D0 (en) | 2011-08-29 | 2011-10-12 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of using the same |
CA2835094C (en) | 2011-05-06 | 2020-12-22 | David Gearing | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
KR20140063752A (ko) | 2011-08-30 | 2014-05-27 | 엔브이아이피 피티와이 리미티드 | 견화(犬化) 종양 괴사 인자 항체 및 그의 이용방법 |
EP2771694A4 (en) | 2011-10-26 | 2015-08-05 | Novartis Tiergesundheit Ag | MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHOD FOR THEIR USE |
SG11201402603WA (en) | 2011-11-28 | 2014-06-27 | Merck Patent Gmbh | Anti-pd-l1 antibodies and uses thereof |
CN106029697B (zh) * | 2013-12-20 | 2021-06-04 | 英特维特国际股份有限公司 | 具有经修饰的ch2-ch3序列的犬抗体 |
US10280223B2 (en) | 2014-07-09 | 2019-05-07 | Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd. | Anti-canine PD-1 antibody or anti-canine PD-L1 antibody |
US10800830B2 (en) * | 2014-08-08 | 2020-10-13 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | High affinity PD-1 agents and methods of use |
US20160129097A1 (en) * | 2014-11-06 | 2016-05-12 | Jeremy Delk | Method of processing a veterinary tumor vaccine and a veterinary tumor vaccine processing kit |
-
2015
- 2015-09-29 CN CN202110355046.5A patent/CN112851816B/zh active Active
- 2015-09-29 US US15/514,920 patent/US10550194B2/en active Active
- 2015-09-29 CA CA2961987A patent/CA2961987A1/en active Pending
- 2015-09-29 ES ES15771582T patent/ES2853823T3/es active Active
- 2015-09-29 AU AU2015326996A patent/AU2015326996B2/en active Active
- 2015-09-29 EP EP15771582.2A patent/EP3201230B1/en active Active
- 2015-09-29 BR BR112017006203-8A patent/BR112017006203A2/pt active Search and Examination
- 2015-09-29 RU RU2017114341A patent/RU2722562C2/ru active
- 2015-09-29 WO PCT/EP2015/072324 patent/WO2016050721A1/en active Application Filing
- 2015-09-29 DK DK15771582.2T patent/DK3201230T3/da active
- 2015-09-29 CN CN201580052709.9A patent/CN107074952B/zh active Active
- 2015-09-29 RU RU2020117210A patent/RU2020117210A/ru unknown
- 2015-09-29 JP JP2017516842A patent/JP6797111B2/ja active Active
-
2019
- 2019-12-18 US US16/718,729 patent/US11447561B2/en active Active
-
2021
- 2021-08-18 AU AU2021218094A patent/AU2021218094B2/en active Active
-
2022
- 2022-08-15 US US17/819,745 patent/US20220389114A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2722562C2 (ru) | 2020-06-01 |
CA2961987A1 (en) | 2016-04-07 |
US20220389114A1 (en) | 2022-12-08 |
RU2017114341A (ru) | 2018-11-09 |
EP3201230A1 (en) | 2017-08-09 |
CN112851816B (zh) | 2024-03-08 |
JP2017534267A (ja) | 2017-11-24 |
WO2016050721A1 (en) | 2016-04-07 |
AU2021218094B2 (en) | 2023-04-20 |
CN107074952B (zh) | 2021-04-09 |
DK3201230T3 (da) | 2021-02-15 |
US20180237535A1 (en) | 2018-08-23 |
AU2015326996B2 (en) | 2021-05-20 |
AU2021218094A1 (en) | 2021-09-09 |
CN107074952A (zh) | 2017-08-18 |
CN112851816A (zh) | 2021-05-28 |
US20200109212A1 (en) | 2020-04-09 |
RU2017114341A3 (ja) | 2019-07-17 |
BR112017006203A2 (pt) | 2018-05-02 |
US10550194B2 (en) | 2020-02-04 |
AU2015326996A1 (en) | 2017-03-23 |
ES2853823T3 (es) | 2021-09-17 |
EP3201230B1 (en) | 2020-12-23 |
US11447561B2 (en) | 2022-09-20 |
RU2020117210A (ru) | 2020-06-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6797111B2 (ja) | イヌpd−l1と結合するpd−l1抗体 | |
US20220204615A1 (en) | Caninized Antibodies |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170526 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170901 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180919 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190806 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191105 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200421 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200720 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200804 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201022 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201104 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20201117 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6797111 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |