RU2447145C2 - Микроорганизм-носитель нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины - Google Patents
Микроорганизм-носитель нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины Download PDFInfo
- Publication number
- RU2447145C2 RU2447145C2 RU2009122560/10A RU2009122560A RU2447145C2 RU 2447145 C2 RU2447145 C2 RU 2447145C2 RU 2009122560/10 A RU2009122560/10 A RU 2009122560/10A RU 2009122560 A RU2009122560 A RU 2009122560A RU 2447145 C2 RU2447145 C2 RU 2447145C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- toxin
- protein
- microorganism
- expression
- secretion
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 124
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 114
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 114
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 113
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 96
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 40
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 title description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 title description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims abstract description 145
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 102
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 83
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 73
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 47
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims abstract description 38
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 25
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 23
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 138
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 136
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 79
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 claims description 78
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 claims description 77
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 68
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 68
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 60
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 58
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 47
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims description 43
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims description 43
- 101100381978 Mus musculus Braf gene Proteins 0.000 claims description 42
- KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 1-n-(4-chlorophenyl)-6-methyl-5-n-[3-(7h-purin-6-yl)pyridin-2-yl]isoquinoline-1,5-diamine Chemical compound N=1C=CC2=C(NC=3C(=CC=CN=3)C=3C=4N=CNC=4N=CN=3)C(C)=CC=C2C=1NC1=CC=C(Cl)C=C1 KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 33
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 32
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 32
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 30
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 30
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 30
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 30
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 26
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 24
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 24
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 claims description 23
- -1 H-Ras Proteins 0.000 claims description 20
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 claims description 19
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 18
- 101150024289 hly gene Proteins 0.000 claims description 18
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 claims description 16
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 15
- 101000697856 Rattus norvegicus Bile acid-CoA:amino acid N-acyltransferase Proteins 0.000 claims description 15
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 13
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 claims description 13
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 13
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 claims description 12
- 108010069584 Type III Secretion Systems Proteins 0.000 claims description 12
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 claims description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 claims description 11
- 101100180602 Caenorhabditis elegans csnk-1 gene Proteins 0.000 claims description 11
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 claims description 11
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims description 11
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 claims description 11
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 241000186781 Listeria Species 0.000 claims description 10
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 claims description 10
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 claims description 10
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 claims description 10
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 10
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims description 9
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 9
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 9
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 claims description 8
- 102100033479 RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 8
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 claims description 8
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 claims description 8
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 102100020814 Sequestosome-1 Human genes 0.000 claims description 7
- 241000607768 Shigella Species 0.000 claims description 7
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 claims description 7
- 108010073429 Type V Secretion Systems Proteins 0.000 claims description 7
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 claims description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 7
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 claims description 7
- 102100024458 Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Human genes 0.000 claims description 6
- 108010017898 Shiga Toxins Proteins 0.000 claims description 6
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 claims description 6
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims description 6
- 102100039094 Tyrosinase Human genes 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 claims description 6
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 claims description 5
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 108010008681 Type II Secretion Systems Proteins 0.000 claims description 5
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 102100037263 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710092462 Alpha-hemolysin Proteins 0.000 claims description 4
- 102100033806 Alpha-protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 102100033086 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1 Human genes 0.000 claims description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 102100040753 Casein kinase II subunit alpha' Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100037916 Cyclin-dependent kinase 11B Human genes 0.000 claims description 4
- 102100028554 Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A Human genes 0.000 claims description 4
- 101000600756 Homo sapiens 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000944250 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000892015 Homo sapiens Casein kinase II subunit alpha' Proteins 0.000 claims description 4
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000838016 Homo sapiens Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A Proteins 0.000 claims description 4
- 101001018978 Homo sapiens MAP kinase-interacting serine/threonine-protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000896657 Homo sapiens Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase BUB1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 101000585262 Homo sapiens Serine/threonine kinase-like domain-containing protein STKLD1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000628647 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 24 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000880431 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 4 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000588553 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek9 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000596093 Homo sapiens Transcription initiation factor TFIID subunit 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100033610 MAP kinase-interacting serine/threonine-protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100021691 Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase BUB1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100035044 Myosin light chain kinase, smooth muscle Human genes 0.000 claims description 4
- 101000822797 Naja naja Long neurotoxin 5 Proteins 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 102100024924 Protein kinase C alpha type Human genes 0.000 claims description 4
- 101150055709 SNF1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 4
- 102100029854 Serine/threonine kinase-like domain-containing protein STKLD1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100026764 Serine/threonine-protein kinase 24 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100037629 Serine/threonine-protein kinase 4 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100031206 Serine/threonine-protein kinase N1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100031398 Serine/threonine-protein kinase Nek9 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025559 Serine/threonine-protein kinase SBK2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710152798 Serine/threonine-protein kinase SBK2 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100023085 Serine/threonine-protein kinase mTOR Human genes 0.000 claims description 4
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 claims description 4
- 102100035222 Transcription initiation factor TFIID subunit 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010064721 Type I Secretion Systems Proteins 0.000 claims description 4
- 108010046504 Type IV Secretion Systems Proteins 0.000 claims description 4
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 4
- 229960001231 choline Drugs 0.000 claims description 4
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 4
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 claims description 4
- 101150019464 ARAF gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100034111 Activin receptor type-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 claims description 3
- 101710197219 Alpha-toxin Proteins 0.000 claims description 3
- 102100032187 Androgen receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010062544 Apoptotic Protease-Activating Factor 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100034524 Apoptotic protease-activating factor 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 101100064323 Arabidopsis thaliana DTX47 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 3
- 108700003785 Baculoviral IAP Repeat-Containing 3 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000051819 Baculoviral IAP Repeat-Containing 3 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100027522 Baculoviral IAP repeat-containing protein 7 Human genes 0.000 claims description 3
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 claims description 3
- 101150012716 CDK1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100026251 Caenorhabditis elegans atf-2 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100439046 Caenorhabditis elegans cdk-2 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100005789 Caenorhabditis elegans cdk-4 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100495324 Caenorhabditis elegans cdk-7 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 241000010804 Caulobacter vibrioides Species 0.000 claims description 3
- 101710168515 Cell surface glycoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 claims description 3
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010068192 Cyclin A Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002427 Cyclin B Human genes 0.000 claims description 3
- 108010068150 Cyclin B Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003910 Cyclin D Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000259 Cyclin D Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003909 Cyclin E Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000257 Cyclin E Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002495 Cyclin H Human genes 0.000 claims description 3
- 108010068237 Cyclin H Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025191 Cyclin-A2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101100499270 Drosophila melanogaster Diap1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100023272 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 108050002772 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100037024 E3 ubiquitin-protein ligase XIAP Human genes 0.000 claims description 3
- 108010051542 Early Growth Response Protein 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100023226 Early growth response protein 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000044591 ErbB-4 Receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 3
- 102100025614 Galectin-related protein Human genes 0.000 claims description 3
- 101100272587 Gallus gallus ITA gene Proteins 0.000 claims description 3
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 claims description 3
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 claims description 3
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101000799140 Homo sapiens Activin receptor type-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001136592 Homo sapiens Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 claims description 3
- 101000864831 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Sgk3 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001050288 Homo sapiens Transcription factor Jun Proteins 0.000 claims description 3
- 101000611023 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001046426 Homo sapiens cGMP-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101150032161 IAP1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 claims description 3
- 108700027766 Listeria monocytogenes hlyA Proteins 0.000 claims description 3
- 101710164436 Listeriolysin O Proteins 0.000 claims description 3
- 108010068305 MAP Kinase Kinase 5 Proteins 0.000 claims description 3
- 108010075654 MAP Kinase Kinase Kinase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100033115 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100032543 Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 3-phosphatase and dual-specificity protein phosphatase PTEN Human genes 0.000 claims description 3
- 101710124951 Phospholipase C Proteins 0.000 claims description 3
- 102100036691 Proliferating cell nuclear antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 108010029869 Proto-Oncogene Proteins c-raf Proteins 0.000 claims description 3
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 3
- 101710141955 RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 3
- 101710099182 S-layer protein Proteins 0.000 claims description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 3
- 102100028948 Serine/threonine-protein kinase TAO1 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002259 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010000449 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 claims description 3
- 108010048992 Transcription Factor 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 claims description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102100035101 Transcription factor 7-like 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100023132 Transcription factor Jun Human genes 0.000 claims description 3
- 101710102803 Tumor suppressor ARF Proteins 0.000 claims description 3
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 claims description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 3
- 108700031544 X-Linked Inhibitor of Apoptosis Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002776 alpha toxin Substances 0.000 claims description 3
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 claims description 3
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 claims description 3
- 102100022422 cGMP-dependent protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000032823 cell division Effects 0.000 claims description 3
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 claims description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 3
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 claims description 3
- 108010030017 midkine receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 claims description 3
- 230000004963 pathophysiological condition Effects 0.000 claims description 3
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 claims description 3
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 claims description 3
- 102100027962 2-5A-dependent ribonuclease Human genes 0.000 claims description 2
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102100022528 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038079 AP2-associated protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025995 AarF domain-containing protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036409 Activated CDC42 kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034135 Activin receptor type-1C Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021886 Activin receptor type-2A Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027647 Activin receptor type-2B Human genes 0.000 claims description 2
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 102100022089 Acyl-[acyl-carrier-protein] hydrolase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010083528 Adenylate Cyclase Toxin Proteins 0.000 claims description 2
- 101710082399 Alpha-protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100025511 Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024003 Arf-GAP with SH3 domain, ANK repeat and PH domain-containing protein 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039339 Atrial natriuretic peptide receptor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039341 Atrial natriuretic peptide receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035958 Atypical kinase COQ8A, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035952 Atypical kinase COQ8B, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 102000004000 Aurora Kinase A Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000461 Aurora Kinase A Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032306 Aurora kinase B Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026630 Aurora kinase C Human genes 0.000 claims description 2
- 108010014380 Autophagy-Related Protein-1 Homolog Proteins 0.000 claims description 2
- 102100035080 BDNF/NT-3 growth factors receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 108091005625 BRD4 Proteins 0.000 claims description 2
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 102100026596 Bcl-2-like protein 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021738 Beta-adrenergic receptor kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037281 Beta-adrenergic receptor kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025422 Bone morphogenetic protein receptor type-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101000964894 Bos taurus 14-3-3 protein zeta/delta Proteins 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 102100029894 Bromodomain testis-specific protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033641 Bromodomain-containing protein 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033642 Bromodomain-containing protein 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029895 Bromodomain-containing protein 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025589 CaM kinase-like vesicle-associated protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021535 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021534 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033087 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1B Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033093 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025232 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit beta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025228 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit delta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025227 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit gamma Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022789 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type IV Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034356 Casein kinase I isoform alpha-like Human genes 0.000 claims description 2
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000005483 Cell Cycle Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010031896 Cell Cycle Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034744 Cell division cycle 7-related protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 241000186581 Clostridium novyi Species 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000009738 Connective Tissue Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 108010024986 Cyclin-Dependent Kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010025464 Cyclin-Dependent Kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010025454 Cyclin-Dependent Kinase 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010025468 Cyclin-Dependent Kinase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023263 Cyclin-dependent kinase 10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038111 Cyclin-dependent kinase 12 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038114 Cyclin-dependent kinase 13 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038113 Cyclin-dependent kinase 14 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033250 Cyclin-dependent kinase 15 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033245 Cyclin-dependent kinase 16 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033234 Cyclin-dependent kinase 17 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033144 Cyclin-dependent kinase 18 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036239 Cyclin-dependent kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034741 Cyclin-dependent kinase 20 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036329 Cyclin-dependent kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036252 Cyclin-dependent kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026804 Cyclin-dependent kinase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026810 Cyclin-dependent kinase 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024456 Cyclin-dependent kinase 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024457 Cyclin-dependent kinase 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031679 Cyclin-dependent kinase-like 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031685 Cyclin-dependent kinase-like 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031684 Cyclin-dependent kinase-like 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031683 Cyclin-dependent kinase-like 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034746 Cyclin-dependent kinase-like 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026805 Cyclin-dependent-like kinase 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024829 DNA polymerase delta catalytic subunit Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022204 DNA-dependent protein kinase catalytic subunit Human genes 0.000 claims description 2
- 101100457345 Danio rerio mapk14a gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100457347 Danio rerio mapk14b gene Proteins 0.000 claims description 2
- 108010031042 Death-Associated Protein Kinases Proteins 0.000 claims description 2
- 102100038587 Death-associated protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038605 Death-associated protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038606 Death-associated protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029638 Dual serine/threonine and tyrosine protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023266 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023275 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023274 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023332 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040862 Dual specificity protein kinase CLK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040844 Dual specificity protein kinase CLK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040856 Dual specificity protein kinase CLK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040858 Dual specificity protein kinase CLK4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036492 Dual specificity testis-specific protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036498 Dual specificity testis-specific protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023115 Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023114 Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023112 Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029505 E3 ubiquitin-protein ligase TRIM33 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029493 EKC/KEOPS complex subunit TP53RK Human genes 0.000 claims description 2
- 101150097734 EPHB2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 102100030011 Endoribonuclease Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030013 Endoribonuclease Human genes 0.000 claims description 2
- 108010055323 EphB4 Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101150078651 Epha4 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101150025643 Epha5 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100021600 Ephrin type-A receptor 10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021616 Ephrin type-A receptor 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021605 Ephrin type-A receptor 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021604 Ephrin type-A receptor 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021606 Ephrin type-A receptor 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021601 Ephrin type-A receptor 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030779 Ephrin type-B receptor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031968 Ephrin type-B receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031982 Ephrin type-B receptor 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031983 Ephrin type-B receptor 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031984 Ephrin type-B receptor 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036725 Epithelial discoidin domain-containing receptor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710131668 Epithelial discoidin domain-containing receptor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 102100021808 Eukaryotic elongation factor 2 kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034174 Eukaryotic translation initiation factor 2-alpha kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 102100026130 Extracellular tyrosine-protein kinase PKDCC Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029531 Fas-activated serine/threonine kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027844 Fibroblast growth factor receptor 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023734 G protein-coupled receptor kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023685 G protein-coupled receptor kinase 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023686 G protein-coupled receptor kinase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 claims description 2
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 claims description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 claims description 2
- 102100022975 Glycogen synthase kinase-3 alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038104 Glycogen synthase kinase-3 beta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022662 Guanylyl cyclase C Human genes 0.000 claims description 2
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 102100035108 High affinity nerve growth factor receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032822 Homeodomain-interacting protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032827 Homeodomain-interacting protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032826 Homeodomain-interacting protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022603 Homeodomain-interacting protein kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 101001080057 Homo sapiens 2-5A-dependent ribonuclease Proteins 0.000 claims description 2
- 101000677993 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000742699 Homo sapiens AP2-associated protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000720055 Homo sapiens AarF domain-containing protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000928956 Homo sapiens Activated CDC42 kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000799193 Homo sapiens Activin receptor type-1C Proteins 0.000 claims description 2
- 101000970954 Homo sapiens Activin receptor type-2A Proteins 0.000 claims description 2
- 101000937269 Homo sapiens Activin receptor type-2B Proteins 0.000 claims description 2
- 101000824278 Homo sapiens Acyl-[acyl-carrier-protein] hydrolase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000693801 Homo sapiens Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000961044 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide receptor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000961040 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide receptor 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000875771 Homo sapiens Atypical kinase COQ8A, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000875775 Homo sapiens Atypical kinase COQ8B, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000798306 Homo sapiens Aurora kinase B Proteins 0.000 claims description 2
- 101000765862 Homo sapiens Aurora kinase C Proteins 0.000 claims description 2
- 101000596896 Homo sapiens BDNF/NT-3 growth factors receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000751445 Homo sapiens Beta-adrenergic receptor kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000806653 Homo sapiens Beta-adrenergic receptor kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934635 Homo sapiens Bone morphogenetic protein receptor type-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000794028 Homo sapiens Bromodomain testis-specific protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000871850 Homo sapiens Bromodomain-containing protein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000871851 Homo sapiens Bromodomain-containing protein 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000978379 Homo sapiens C-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000978381 Homo sapiens C-C motif chemokine 14 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000990005 Homo sapiens CLIP-associating protein 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000932896 Homo sapiens CaM kinase-like vesicle-associated protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000971625 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000971617 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944254 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1B Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944249 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101001077352 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit beta Proteins 0.000 claims description 2
- 101001077338 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit delta Proteins 0.000 claims description 2
- 101001077334 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type II subunit gamma Proteins 0.000 claims description 2
- 101000974816 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type IV Proteins 0.000 claims description 2
- 101000994694 Homo sapiens Casein kinase I isoform alpha-like Proteins 0.000 claims description 2
- 101000892026 Homo sapiens Casein kinase II subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000945740 Homo sapiens Cell division cycle 7-related protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000749824 Homo sapiens Connector enhancer of kinase suppressor of ras 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868333 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000908138 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000738400 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 11B Proteins 0.000 claims description 2
- 101000884345 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 12 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000884348 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 13 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000884374 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 14 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944355 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 15 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944357 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 16 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944358 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 17 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944341 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 18 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944345 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 19 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000945708 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 20 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000715946 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000911952 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000980937 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000980930 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase 9 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777728 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase-like 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777764 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase-like 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777768 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase-like 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777775 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase-like 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000945692 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase-like 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000909198 Homo sapiens DNA polymerase delta catalytic subunit Proteins 0.000 claims description 2
- 101000619536 Homo sapiens DNA-dependent protein kinase catalytic subunit Proteins 0.000 claims description 2
- 101000956145 Homo sapiens Death-associated protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000956149 Homo sapiens Death-associated protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000865739 Homo sapiens Dual serine/threonine and tyrosine protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101001115394 Homo sapiens Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001115395 Homo sapiens Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000624594 Homo sapiens Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000749294 Homo sapiens Dual specificity protein kinase CLK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000749291 Homo sapiens Dual specificity protein kinase CLK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000749304 Homo sapiens Dual specificity protein kinase CLK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000749298 Homo sapiens Dual specificity protein kinase CLK4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000714159 Homo sapiens Dual specificity testis-specific protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000714156 Homo sapiens Dual specificity testis-specific protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001049990 Homo sapiens Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001049991 Homo sapiens Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001049983 Homo sapiens Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000634991 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase TRIM33 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001125560 Homo sapiens EKC/KEOPS complex subunit TP53RK Proteins 0.000 claims description 2
- 101001010787 Homo sapiens Endoribonuclease Proteins 0.000 claims description 2
- 101000967216 Homo sapiens Eosinophil cationic protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000898673 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000898696 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000898708 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000898676 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001064150 Homo sapiens Ephrin type-B receptor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001064458 Homo sapiens Ephrin type-B receptor 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001064451 Homo sapiens Ephrin type-B receptor 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000895759 Homo sapiens Eukaryotic elongation factor 2 kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000926508 Homo sapiens Eukaryotic translation initiation factor 2-alpha kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000691796 Homo sapiens Extracellular tyrosine-protein kinase PKDCC Proteins 0.000 claims description 2
- 101000917570 Homo sapiens Fas-activated serine/threonine kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000917134 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000829481 Homo sapiens G protein-coupled receptor kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000829476 Homo sapiens G protein-coupled receptor kinase 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000829473 Homo sapiens G protein-coupled receptor kinase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 claims description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000903717 Homo sapiens Glycogen synthase kinase-3 alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000899808 Homo sapiens Guanylyl cyclase C Proteins 0.000 claims description 2
- 101001066435 Homo sapiens Hepatocyte growth factor-like protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000596894 Homo sapiens High affinity nerve growth factor receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101001066404 Homo sapiens Homeodomain-interacting protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001066401 Homo sapiens Homeodomain-interacting protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001066389 Homo sapiens Homeodomain-interacting protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001045363 Homo sapiens Homeodomain-interacting protein kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101100508538 Homo sapiens IKBKE gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101000649963 Homo sapiens Inactive serine/threonine-protein kinase VRK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000606465 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000741965 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase PRAG1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001043764 Homo sapiens Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000852815 Homo sapiens Insulin receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000926535 Homo sapiens Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000977768 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-associated kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000977771 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-associated kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000852255 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-associated kinase-like 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001137640 Homo sapiens Kinase suppressor of Ras 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001005128 Homo sapiens LIM domain kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001042360 Homo sapiens LIM domain kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000941877 Homo sapiens Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001064870 Homo sapiens Lon protease homolog, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000762967 Homo sapiens Lymphokine-activated killer T-cell-originated protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000573522 Homo sapiens MAP kinase-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059429 Homo sapiens MAP/microtubule affinity-regulating kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059427 Homo sapiens MAP/microtubule affinity-regulating kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059535 Homo sapiens Megakaryocyte-associated tyrosine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000687968 Homo sapiens Membrane-associated tyrosine- and threonine-specific cdc2-inhibitory kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628547 Homo sapiens Metalloreductase STEAP1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018259 Homo sapiens Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018300 Homo sapiens Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018294 Homo sapiens Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018298 Homo sapiens Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628949 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628967 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 11 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628954 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 12 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628968 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 13 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000976899 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 15 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001052490 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001052477 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000950710 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000950687 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000950695 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000950669 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 9 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000958409 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001005605 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 12 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001005609 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 13 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001005550 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 14 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001005556 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 19 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018141 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018149 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 21 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001018196 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001055097 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001055091 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001055085 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 9 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059991 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059990 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059989 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059984 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001011663 Homo sapiens Mixed lineage kinase domain-like protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000584208 Homo sapiens Myosin light chain kinase 2, skeletal/cardiac muscle Proteins 0.000 claims description 2
- 101001022780 Homo sapiens Myosin light chain kinase, smooth muscle Proteins 0.000 claims description 2
- 101000654298 Homo sapiens N-terminal kinase-like protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000970023 Homo sapiens NUAK family SNF1-like kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000663003 Homo sapiens Non-receptor tyrosine-protein kinase TNK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000844245 Homo sapiens Non-receptor tyrosine-protein kinase TYK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001108314 Homo sapiens Nuclear receptor-binding protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000577339 Homo sapiens Nuclear receptor-binding protein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000585675 Homo sapiens Obscurin Proteins 0.000 claims description 2
- 101000598781 Homo sapiens Oxidative stress-responsive serine-rich protein 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101100244966 Homo sapiens PRKX gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101000692672 Homo sapiens Phosphoinositide 3-kinase regulatory subunit 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000731078 Homo sapiens Phosphorylase b kinase gamma catalytic chain, liver/testis isoform Proteins 0.000 claims description 2
- 101001126783 Homo sapiens Phosphorylase b kinase gamma catalytic chain, skeletal muscle/heart isoform Proteins 0.000 claims description 2
- 101001126417 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000836974 Homo sapiens Protein O-mannose kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051777 Homo sapiens Protein kinase C alpha type Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051767 Homo sapiens Protein kinase C beta type Proteins 0.000 claims description 2
- 101001026854 Homo sapiens Protein kinase C delta type Proteins 0.000 claims description 2
- 101001026852 Homo sapiens Protein kinase C epsilon type Proteins 0.000 claims description 2
- 101000971400 Homo sapiens Protein kinase C eta type Proteins 0.000 claims description 2
- 101000971404 Homo sapiens Protein kinase C iota type Proteins 0.000 claims description 2
- 101000971468 Homo sapiens Protein kinase C zeta type Proteins 0.000 claims description 2
- 101000613717 Homo sapiens Protein odd-skipped-related 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000983155 Homo sapiens Protein-associating with the carboxyl-terminal domain of ezrin Proteins 0.000 claims description 2
- 101000878540 Homo sapiens Protein-tyrosine kinase 2-beta Proteins 0.000 claims description 2
- 101000606502 Homo sapiens Protein-tyrosine kinase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000686031 Homo sapiens Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Proteins 0.000 claims description 2
- 101001125116 Homo sapiens Putative serine/threonine-protein kinase PRKY Proteins 0.000 claims description 2
- 101000779418 Homo sapiens RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000798015 Homo sapiens RAC-beta serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000798007 Homo sapiens RAC-gamma serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000712530 Homo sapiens RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001109145 Homo sapiens Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001089266 Homo sapiens Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001089248 Homo sapiens Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000899806 Homo sapiens Retinal guanylyl cyclase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001009847 Homo sapiens Retinal guanylyl cyclase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000927796 Homo sapiens Rho guanine nucleotide exchange factor 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000669917 Homo sapiens Rho-associated protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000669921 Homo sapiens Rho-associated protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000829506 Homo sapiens Rhodopsin kinase GRK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000871032 Homo sapiens Rhodopsin kinase GRK7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944909 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase alpha-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944921 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase alpha-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000945090 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase alpha-3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000945093 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase alpha-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000945096 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase alpha-5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051723 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase alpha-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051706 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase beta-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051714 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase beta-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051707 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase delta-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001051709 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase-related protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000654257 Homo sapiens SCY1-like protein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000617778 Homo sapiens SNF-related serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000826081 Homo sapiens SRSF protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000826077 Homo sapiens SRSF protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000826079 Homo sapiens SRSF protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000642656 Homo sapiens STE20-related kinase adapter protein beta Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701497 Homo sapiens STE20/SPS1-related proline-alanine-rich protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000654734 Homo sapiens Septin-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000648174 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628578 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 16 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000661821 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 17A Proteins 0.000 claims description 2
- 101000661819 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 17B Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628575 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 19 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628693 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 25 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701393 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 26 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000880439 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701391 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 31 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000697591 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 32A Proteins 0.000 claims description 2
- 101000697600 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 32B Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701396 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 33 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701395 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 35 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701405 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 36 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000701401 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 38 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000697608 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 38-like Proteins 0.000 claims description 2
- 101000880461 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 40 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000771237 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase A-Raf Proteins 0.000 claims description 2
- 101000695043 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase BRSK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000794043 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase BRSK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777293 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Chk1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000777277 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Chk2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001026870 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase D1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001026885 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase D3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000885321 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase DCLK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000885387 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase DCLK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000885383 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase DCLK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001006988 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase H2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001047642 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase LATS1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001047637 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase LATS2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001038337 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase LMTK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001038335 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase LMTK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001038341 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase LMTK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000576901 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MRCK alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000576904 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MRCK beta Proteins 0.000 claims description 2
- 101000576907 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MRCK gamma Proteins 0.000 claims description 2
- 101001129076 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase N1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000691459 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase N2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000600885 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase NIM1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001123846 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001123814 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001123812 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek11 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000601441 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000601456 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000601460 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000601467 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000588540 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000588545 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000588548 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Nek8 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001098464 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase OSR1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000987310 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000987315 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000987297 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000987295 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000983111 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PAK 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000605835 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000691614 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PLK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000582914 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PLK4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000577652 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PRP4 homolog Proteins 0.000 claims description 2
- 101000754913 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase RIO2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000864057 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase SMG1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000628562 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase STK11 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000864806 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Sgk2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000838596 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase TAO3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000665442 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase TBK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000607332 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase ULK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000607339 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase ULK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000809308 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase ULK4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000649929 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase VRK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000649931 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase VRK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000770770 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase WNK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000770774 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase WNK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000742982 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase WNK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000742986 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase WNK4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001036145 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase greatwall Proteins 0.000 claims description 2
- 101000989953 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase haspin Proteins 0.000 claims description 2
- 101000623857 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase mTOR Proteins 0.000 claims description 2
- 101000595531 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase pim-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001001648 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase pim-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001001645 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase pim-3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000799194 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase receptor R3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000637839 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase tousled-like 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000637847 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase tousled-like 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000651178 Homo sapiens Striated muscle preferentially expressed protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000625846 Homo sapiens TBC domain-containing protein kinase-like protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000662997 Homo sapiens TRAF2 and NCK-interacting protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000759318 Homo sapiens Tau-tubulin kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000772231 Homo sapiens Testis-specific serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000772239 Homo sapiens Testis-specific serine/threonine-protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000794197 Homo sapiens Testis-specific serine/threonine-protein kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000794199 Homo sapiens Testis-specific serine/threonine-protein kinase 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000794200 Homo sapiens Testis-specific serine/threonine-protein kinase 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000796673 Homo sapiens Transformation/transcription domain-associated protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101000844519 Homo sapiens Transient receptor potential cation channel subfamily M member 6 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000844518 Homo sapiens Transient receptor potential cation channel subfamily M member 7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000766332 Homo sapiens Tribbles homolog 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000766349 Homo sapiens Tribbles homolog 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000766345 Homo sapiens Tribbles homolog 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000659324 Homo sapiens Twinfilin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000795921 Homo sapiens Twinfilin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000823271 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ABL2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000997835 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934996 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000661459 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase STYK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000587313 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase Srms Proteins 0.000 claims description 2
- 101000820294 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase Yes Proteins 0.000 claims description 2
- 101000818543 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Proteins 0.000 claims description 2
- 101001103033 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000720059 Homo sapiens Uncharacterized aarF domain-containing protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000720061 Homo sapiens Uncharacterized aarF domain-containing protein kinase 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000693630 Homo sapiens Uncharacterized serine/threonine-protein kinase SBK3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000621390 Homo sapiens Wee1-like protein kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 101000739853 Homo sapiens [3-methyl-2-oxobutanoate dehydrogenase [lipoamide]] kinase, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101001117146 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101001117143 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 2, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000734338 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 3, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000734339 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 4, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 2
- 101000994496 Homo sapiens cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944219 Homo sapiens cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta Proteins 0.000 claims description 2
- 101000944207 Homo sapiens cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit gamma Proteins 0.000 claims description 2
- 101001046427 Homo sapiens cGMP-dependent protein kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000926525 Homo sapiens eIF-2-alpha kinase GCN2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108060006678 I-kappa-B kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001284 I-kappa-B kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028288 Inactive serine/threonine-protein kinase VRK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039813 Inactive tyrosine-protein kinase 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038659 Inactive tyrosine-protein kinase PRAG1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021892 Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021857 Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon Human genes 0.000 claims description 2
- 108091006081 Inositol-requiring enzyme-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039137 Insulin receptor-related protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034170 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023530 Interleukin-1 receptor-associated kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023533 Interleukin-1 receptor-associated kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036433 Interleukin-1 receptor-associated kinase-like 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 206010061252 Intraocular melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 102100021000 Kinase suppressor of Ras 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026023 LIM domain kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021756 LIM domain kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010020246 Leucine-Rich Repeat Serine-Threonine Protein Kinase-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032656 Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032693 Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 102100026753 Lymphokine-activated killer T-cell-originated protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 108010068342 MAP Kinase Kinase 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010068353 MAP Kinase Kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028397 MAP kinase-activated protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028396 MAP kinase-activated protein kinase 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026299 MAP kinase-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010041980 MAP-kinase-activated kinase 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010041164 MAP-kinase-activated kinase 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028920 MAP/microtubule affinity-regulating kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028913 MAP/microtubule affinity-regulating kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 108700012928 MAPK14 Proteins 0.000 claims description 2
- 101150003941 Mapk14 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100024299 Maternal embryonic leucine zipper kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 101710154611 Maternal embryonic leucine zipper kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028905 Megakaryocyte-associated tyrosine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 206010027145 Melanocytic naevus Diseases 0.000 claims description 2
- 102100024262 Membrane-associated tyrosine- and threonine-specific cdc2-inhibitory kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026712 Metalloreductase STEAP1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033268 Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033253 Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033251 Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033252 Microtubule-associated serine/threonine-protein kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026931 Mitogen-activated protein kinase 10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026929 Mitogen-activated protein kinase 11 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026932 Mitogen-activated protein kinase 12 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026930 Mitogen-activated protein kinase 13 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000054819 Mitogen-activated protein kinase 14 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023483 Mitogen-activated protein kinase 15 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024192 Mitogen-activated protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024189 Mitogen-activated protein kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037801 Mitogen-activated protein kinase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037805 Mitogen-activated protein kinase 7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037808 Mitogen-activated protein kinase 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037809 Mitogen-activated protein kinase 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038243 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025180 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 12 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025184 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 13 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025211 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 14 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025217 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 19 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033058 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033054 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 21 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033127 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026889 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026907 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 8 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026909 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028199 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028192 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028193 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028194 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030177 Mixed lineage kinase domain-like protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030788 Myosin light chain kinase 2, skeletal/cardiac muscle Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030782 Myosin light chain kinase family member 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710087570 Myosin light chain kinase family member 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710198035 Myosin light chain kinase, smooth muscle Proteins 0.000 claims description 2
- 108010052185 Myotonin-Protein Kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100022437 Myotonin-protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031703 N-terminal kinase-like protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029166 NT-3 growth factor receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021732 NUAK family SNF1-like kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 claims description 2
- 102100037669 Non-receptor tyrosine-protein kinase TNK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032028 Non-receptor tyrosine-protein kinase TYK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021858 Nuclear receptor-binding protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028790 Nuclear receptor-binding protein 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030127 Obscurin Human genes 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 101700056750 PAK1 Proteins 0.000 claims description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 claims description 2
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 claims description 2
- 241000193465 Paeniclostridium sordellii Species 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 102100026481 Phosphoinositide 3-kinase regulatory subunit 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032391 Phosphorylase b kinase gamma catalytic chain, liver/testis isoform Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030278 Phosphorylase b kinase gamma catalytic chain, skeletal muscle/heart isoform Human genes 0.000 claims description 2
- 108010051742 Platelet-Derived Growth Factor beta Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 claims description 2
- 108010015499 Protein Kinase C-theta Proteins 0.000 claims description 2
- 108010003506 Protein Kinase D2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028655 Protein O-mannose kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024923 Protein kinase C beta type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037340 Protein kinase C delta type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037339 Protein kinase C epsilon type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021556 Protein kinase C eta type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037314 Protein kinase C gamma type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021557 Protein kinase C iota type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021566 Protein kinase C theta type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021538 Protein kinase C zeta type Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026829 Protein-associating with the carboxyl-terminal domain of ezrin Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037787 Protein-tyrosine kinase 2-beta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039810 Protein-tyrosine kinase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023347 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029403 Putative serine/threonine-protein kinase PRKY Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032315 RAC-beta serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032314 RAC-gamma serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010079933 Receptor-Interacting Protein Serine-Threonine Kinase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100022501 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022502 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033729 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033734 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 102100022663 Retinal guanylyl cyclase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030847 Retinal guanylyl cyclase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039313 Rho-associated protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039314 Rho-associated protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023742 Rhodopsin kinase GRK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033536 Ribosomal protein S6 kinase alpha-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033534 Ribosomal protein S6 kinase alpha-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033643 Ribosomal protein S6 kinase alpha-3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033644 Ribosomal protein S6 kinase alpha-4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033645 Ribosomal protein S6 kinase alpha-5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024897 Ribosomal protein S6 kinase alpha-6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024908 Ribosomal protein S6 kinase beta-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024917 Ribosomal protein S6 kinase beta-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024913 Ribosomal protein S6 kinase delta-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024914 Ribosomal protein S6 kinase-related protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031698 SCY1-like protein 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022010 SNF-related serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 108060006706 SRC Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001332 SRC Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023010 SRSF protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023015 SRSF protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023017 SRSF protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035929 STE20-related kinase adapter protein beta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030491 STE20/SPS1-related proline-alanine-rich protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032743 Septin-4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028900 Serine/threonine-protein kinase 10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026758 Serine/threonine-protein kinase 16 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037955 Serine/threonine-protein kinase 17A Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037959 Serine/threonine-protein kinase 17B Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026757 Serine/threonine-protein kinase 19 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026737 Serine/threonine-protein kinase 25 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030617 Serine/threonine-protein kinase 26 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030618 Serine/threonine-protein kinase 31 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028032 Serine/threonine-protein kinase 32A Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028030 Serine/threonine-protein kinase 32B Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030515 Serine/threonine-protein kinase 33 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030620 Serine/threonine-protein kinase 35 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030513 Serine/threonine-protein kinase 36 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030514 Serine/threonine-protein kinase 38 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027898 Serine/threonine-protein kinase 38-like Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037627 Serine/threonine-protein kinase 40 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029437 Serine/threonine-protein kinase A-Raf Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028623 Serine/threonine-protein kinase BRSK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029891 Serine/threonine-protein kinase BRSK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031081 Serine/threonine-protein kinase Chk1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031075 Serine/threonine-protein kinase Chk2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037310 Serine/threonine-protein kinase D1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037312 Serine/threonine-protein kinase D2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037311 Serine/threonine-protein kinase D3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039758 Serine/threonine-protein kinase DCLK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039775 Serine/threonine-protein kinase DCLK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039774 Serine/threonine-protein kinase DCLK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028475 Serine/threonine-protein kinase H2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024031 Serine/threonine-protein kinase LATS1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024043 Serine/threonine-protein kinase LATS2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040293 Serine/threonine-protein kinase LMTK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040292 Serine/threonine-protein kinase LMTK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100040291 Serine/threonine-protein kinase LMTK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025352 Serine/threonine-protein kinase MRCK alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025347 Serine/threonine-protein kinase MRCK beta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025345 Serine/threonine-protein kinase MRCK gamma Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026180 Serine/threonine-protein kinase N2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037345 Serine/threonine-protein kinase NIM1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028751 Serine/threonine-protein kinase Nek1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028774 Serine/threonine-protein kinase Nek10 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028775 Serine/threonine-protein kinase Nek11 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037703 Serine/threonine-protein kinase Nek2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037706 Serine/threonine-protein kinase Nek3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037705 Serine/threonine-protein kinase Nek4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037702 Serine/threonine-protein kinase Nek5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031401 Serine/threonine-protein kinase Nek6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031400 Serine/threonine-protein kinase Nek7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037143 Serine/threonine-protein kinase OSR1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027939 Serine/threonine-protein kinase PAK 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027911 Serine/threonine-protein kinase PAK 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027940 Serine/threonine-protein kinase PAK 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100027941 Serine/threonine-protein kinase PAK 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026840 Serine/threonine-protein kinase PAK 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038376 Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026209 Serine/threonine-protein kinase PLK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030267 Serine/threonine-protein kinase PLK4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028868 Serine/threonine-protein kinase PRP4 homolog Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022090 Serine/threonine-protein kinase RIO2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029938 Serine/threonine-protein kinase SMG1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026715 Serine/threonine-protein kinase STK11 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710106079 Serine/threonine-protein kinase TAO1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028954 Serine/threonine-protein kinase TAO3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038192 Serine/threonine-protein kinase TBK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039988 Serine/threonine-protein kinase ULK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039987 Serine/threonine-protein kinase ULK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039985 Serine/threonine-protein kinase ULK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038455 Serine/threonine-protein kinase ULK4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028235 Serine/threonine-protein kinase VRK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028234 Serine/threonine-protein kinase VRK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029064 Serine/threonine-protein kinase WNK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029063 Serine/threonine-protein kinase WNK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038115 Serine/threonine-protein kinase WNK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038101 Serine/threonine-protein kinase WNK4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039278 Serine/threonine-protein kinase greatwall Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029332 Serine/threonine-protein kinase haspin Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036077 Serine/threonine-protein kinase pim-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036120 Serine/threonine-protein kinase pim-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036119 Serine/threonine-protein kinase pim-3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034136 Serine/threonine-protein kinase receptor R3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032015 Serine/threonine-protein kinase tousled-like 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032014 Serine/threonine-protein kinase tousled-like 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 102100027659 Striated muscle preferentially expressed protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024750 TBC domain-containing protein kinase-like protein Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033456 TGF-beta receptor type-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033455 TGF-beta receptor type-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037671 TRAF2 and NCK-interacting protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102000003608 TRPM6 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000003611 TRPM7 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100023276 Tau-tubulin kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029350 Testis-specific serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029355 Testis-specific serine/threonine-protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030168 Testis-specific serine/threonine-protein kinase 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030167 Testis-specific serine/threonine-protein kinase 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030141 Testis-specific serine/threonine-protein kinase 6 Human genes 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 102100022011 Transcription intermediary factor 1-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022012 Transcription intermediary factor 1-beta Human genes 0.000 claims description 2
- 101710177718 Transcription intermediary factor 1-beta Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032762 Transformation/transcription domain-associated protein Human genes 0.000 claims description 2
- 108010092867 Transforming Growth Factor beta Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 108010011702 Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 108010082684 Transforming Growth Factor-beta Type II Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100026387 Tribbles homolog 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026394 Tribbles homolog 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100026390 Tribbles homolog 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036223 Twinfilin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031721 Twinfilin-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022651 Tyrosine-protein kinase ABL2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033438 Tyrosine-protein kinase JAK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025387 Tyrosine-protein kinase JAK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022356 Tyrosine-protein kinase Mer Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037781 Tyrosine-protein kinase STYK1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029654 Tyrosine-protein kinase Srms Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021788 Tyrosine-protein kinase Yes Human genes 0.000 claims description 2
- 102100021125 Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039616 Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025993 Uncharacterized aarF domain-containing protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025996 Uncharacterized aarF domain-containing protein kinase 5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025558 Uncharacterized serine/threonine-protein kinase SBK3 Human genes 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005969 Uveal melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 108010053100 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033179 Vascular endothelial growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims description 2
- 101150040313 Wee1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023037 Wee1-like protein kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037607 [3-methyl-2-oxobutanoate dehydrogenase [lipoamide]] kinase, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024150 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 2, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034824 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 3, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 102100034825 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 4, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 108700000711 bcl-X Proteins 0.000 claims description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003362 bronchogenic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 108010018804 c-Mer Tyrosine Kinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100029402 cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit PRKX Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033065 cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta Human genes 0.000 claims description 2
- 102100033064 cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit gamma Human genes 0.000 claims description 2
- 102100022421 cGMP-dependent protein kinase 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 102100034175 eIF-2-alpha kinase GCN2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010054372 insulin receptor-related receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 claims description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 2
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 claims description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000025440 neoplasm of neck Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000002575 ocular melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 2
- 108040000983 polyphosphate:AMP phosphotransferase activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 108010062154 protein kinase C gamma Proteins 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 108010071511 transcriptional intermediary factor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064892 trkC Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 claims 4
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 claims 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims 1
- 102100033088 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1D Human genes 0.000 claims 1
- 102100033089 Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1G Human genes 0.000 claims 1
- 102100037398 Casein kinase I isoform epsilon Human genes 0.000 claims 1
- 102100023401 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 6 Human genes 0.000 claims 1
- 101150076616 EPHA2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 claims 1
- 102100038595 Estrogen receptor Human genes 0.000 claims 1
- 208000009849 Female Genital Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 claims 1
- 101000944258 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1D Proteins 0.000 claims 1
- 101000944259 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type 1G Proteins 0.000 claims 1
- 101001026376 Homo sapiens Casein kinase I isoform epsilon Proteins 0.000 claims 1
- 101000624426 Homo sapiens Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 6 Proteins 0.000 claims 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 claims 1
- 101000916644 Homo sapiens Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Proteins 0.000 claims 1
- 101001005602 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 11 Proteins 0.000 claims 1
- 101001059982 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 5 Proteins 0.000 claims 1
- 101000635935 Homo sapiens Myosin-IIIa Proteins 0.000 claims 1
- 101000583016 Homo sapiens Myosin-IIIb Proteins 0.000 claims 1
- 101000756066 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase RIO1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000838579 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase TAO1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000838578 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase TAO2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000759314 Homo sapiens Tau-tubulin kinase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000823316 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ABL1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 claims 1
- 102100034069 MAP kinase-activated protein kinase 2 Human genes 0.000 claims 1
- 108010041955 MAP-kinase-activated kinase 2 Proteins 0.000 claims 1
- 102100028198 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Human genes 0.000 claims 1
- 102100025207 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 11 Human genes 0.000 claims 1
- 102100028195 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 5 Human genes 0.000 claims 1
- 102100030743 Myosin-IIIa Human genes 0.000 claims 1
- 102100030369 Myosin-IIIb Human genes 0.000 claims 1
- 101100131116 Oryza sativa subsp. japonica MPK3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 claims 1
- 101100456045 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) map3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 claims 1
- 102100022261 Serine/threonine-protein kinase RIO1 Human genes 0.000 claims 1
- 102100030069 Serine/threonine-protein kinase Sgk2 Human genes 0.000 claims 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 claims 1
- 102100023277 Tau-tubulin kinase 1 Human genes 0.000 claims 1
- 102100022596 Tyrosine-protein kinase ABL1 Human genes 0.000 claims 1
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 claims 1
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 claims 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010022946 erythrogenic toxin Proteins 0.000 claims 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000020615 rectal carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 46
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 abstract description 36
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 71
- 230000004044 response Effects 0.000 description 36
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 32
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 32
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 31
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 31
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 30
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 30
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 30
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 26
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 17
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 17
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 17
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 13
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 12
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 12
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 10
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 7
- 101150037081 aroA gene Proteins 0.000 description 7
- 101150087320 ctxB gene Proteins 0.000 description 7
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 6
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 241001167018 Aroa Species 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 101100491986 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) aromA gene Proteins 0.000 description 5
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 5
- 101710140958 Formimidoyltetrahydrofolate cyclodeaminase Proteins 0.000 description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 5
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 5
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 4
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 4
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 4
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 4
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000016379 mucosal immune response Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 3
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 3
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 2
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 2
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108010073254 Colicins Proteins 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 2
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 2
- 101710147195 Hemolysin A Proteins 0.000 description 2
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 2
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 2
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001044384 Mus musculus Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 2
- 102000012515 Protein kinase domains Human genes 0.000 description 2
- 108050002122 Protein kinase domains Proteins 0.000 description 2
- 108700033844 Pseudomonas aeruginosa toxA Proteins 0.000 description 2
- 206010039587 Scarlet Fever Diseases 0.000 description 2
- 102100030071 Serine/threonine-protein kinase Sgk3 Human genes 0.000 description 2
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 2
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 2
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 2
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 2
- 102000050152 human BRAF Human genes 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150059846 trpS gene Proteins 0.000 description 2
- 101150004782 trpS2 gene Proteins 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 2
- HONKEGXLWUDTCF-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-2-methyl-4-phosphonobutanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@](N)(C)CCP(O)(O)=O HONKEGXLWUDTCF-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 2-chloro-n-[[(2r,3s,5r)-3-hydroxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl]acetamide Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CNC(=O)CCl)[C@@H](O)C1 SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 0.000 description 1
- YLDPIHLIWYLZID-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-2,2-dimethyl-3'-[2-(2-methylpropanoyl)-4-oxoquinazolin-3-yl]spiro[3ah-imidazo[1,2-a]indole-4,5'-oxolane]-1,2'-dione Chemical compound C12N(O)C(C)(C)C(=O)N2C2=CC=CC=C2C1(OC1=O)CC1N1C(=O)C2=CC=CC=C2N=C1C(=O)C(C)C YLDPIHLIWYLZID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000710 AB5 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 101150082952 ACTA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010006533 ATP-Binding Cassette Transporters Proteins 0.000 description 1
- 102000005416 ATP-Binding Cassette Transporters Human genes 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100039182 Ankyrin repeat and protein kinase domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 description 1
- 101100378273 Brachyspira hyodysenteriae acpP gene Proteins 0.000 description 1
- 206010006417 Bronchial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108091011896 CSF1 Proteins 0.000 description 1
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100322954 Cereibacter sphaeroides cfxB gene Proteins 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 206010008617 Cholecystitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710082261 Competence-stimulating peptide Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 101000851211 Crotalus ruber ruber Snake venom metalloproteinase HT-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 108010061573 Dermatophagoides pteronyssinus antigen p 5 Proteins 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710138858 DnaJ homolog subfamily C member 5 Proteins 0.000 description 1
- 101150016325 EPHA3 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 208000030820 Ebola disease Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010055211 EphA1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100030322 Ephrin type-A receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030324 Ephrin type-A receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 101100183027 Escherichia coli (strain K12) marR gene Proteins 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 108010074124 Escherichia coli Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 206010017918 Gastroenteritis viral Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 101000889403 Homo sapiens Ankyrin repeat and protein kinase domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000616438 Homo sapiens Microtubule-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001052493 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001018145 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001018147 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001055092 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000726974 Homo sapiens Ribosomal protein S6 kinase-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001006996 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase H1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000270878 Hyla Species 0.000 description 1
- 206010021531 Impetigo Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 206010023927 Lassa fever Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 241000222732 Leishmania major Species 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 101100098690 Listeria monocytogenes serovar 1/2a (strain ATCC BAA-679 / EGD-e) hly gene Proteins 0.000 description 1
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000000932 Marburg Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011013 Marburg hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010027260 Meningitis viral Diseases 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 208000037942 Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection Diseases 0.000 description 1
- 102100021794 Microtubule-associated protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033059 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100033060 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100026888 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 7 Human genes 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010029443 Nocardia Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010029444 Nocardiosis Diseases 0.000 description 1
- 108010075205 OVA-8 Proteins 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 208000009362 Pneumococcal Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035728 Pneumonia pneumococcal Diseases 0.000 description 1
- 206010035737 Pneumonia viral Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 206010037151 Psittacosis Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010037688 Q fever Diseases 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 101100322958 Rhodobacter capsulatus cbbA gene Proteins 0.000 description 1
- 102100030864 Ribosomal protein S6 kinase-like 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010039207 Rocky Mountain Spotted Fever Diseases 0.000 description 1
- 102000018673 SEC Translocation Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010091732 SEC Translocation Channels Proteins 0.000 description 1
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 1
- 241000392514 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Dublin Species 0.000 description 1
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 1
- 101100406813 Salmonella typhimurium (strain LT2 / SGSC1412 / ATCC 700720) pagC gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 102100028474 Serine/threonine-protein kinase H1 Human genes 0.000 description 1
- 201000010001 Silicosis Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010043841 Tick-borne fever Diseases 0.000 description 1
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 101710117021 Tyrosine-protein phosphatase YopH Proteins 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 101100113494 Vibrio cholerae serotype O1 (strain ATCC 39315 / El Tor Inaba N16961) ctxB gene Proteins 0.000 description 1
- 201000006449 West Nile encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- CTCBPRXHVPZNHB-VQFZJOCSSA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate;(2r,3r,4s,5r)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O.C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O CTCBPRXHVPZNHB-VQFZJOCSSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229940029202 anti-idiotypic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 101150085125 apr gene Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001484 arginines Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N beta-L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009267 bronchiectasis Diseases 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- CSVGEMRSDNSWRF-UHFFFAOYSA-L disodium;dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP(O)([O-])=O.OP(O)([O-])=O CSVGEMRSDNSWRF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000028104 epidemic louse-borne typhus Diseases 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010032719 erythrogen Proteins 0.000 description 1
- NSYZCCDSJNWWJL-YXOIYICCSA-N erythromycin ethylsuccinate Chemical compound O1[C@H](C)C[C@H](N(C)C)[C@@H](OC(=O)CCC(=O)OCC)[C@@H]1O[C@H]1[C@@](O)(C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)[C@@H](CC)OC(=O)[C@H](C)[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(OC)C2)[C@@H]1C NSYZCCDSJNWWJL-YXOIYICCSA-N 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 101150070420 gyrA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 108010005397 hemolysin B Proteins 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 101150021605 hlyA gene Proteins 0.000 description 1
- 229930186900 holotoxin Natural products 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000007579 human kallikrein-related peptidase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010071652 human kallikrein-related peptidase 3 Proteins 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 201000001371 inclusion conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 108010071397 lactoferrin receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000022288 lymphocyte chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012907 medicinal substance Substances 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 201000000901 ornithosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 101150028857 phoP gene Proteins 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 206010035653 pneumoconiosis Diseases 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 206010036807 progressive multifocal leukoencephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 102000009929 raf Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010077182 raf Kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 102220012991 rs111033344 Human genes 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 101150089436 tcdB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150107585 tetA gene Proteins 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 206010044325 trachoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- 206010061393 typhus Diseases 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 201000010044 viral meningitis Diseases 0.000 description 1
- 208000009421 viral pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
- C12N15/625—DNA sequences coding for fusion proteins containing a sequence coding for a signal sequence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/036—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif targeting to the medium outside of the cell, e.g. type III secretion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/55—Fusion polypeptide containing a fusion with a toxin, e.g. diphteria toxin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микроорганизму-носителю нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины, включающему первый компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, второй компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один белковый токсин и/или по меньшей мере одну субъединицу белкового токсина, третий компонент, состоящий по меньшей мере из одного первого подкомпонента, представленного по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере одну систему транспорта, которая облегчает экспрессию продуктов экспрессии первого и второго компонентов на наружной поверхности микроорганизма и/или облегчает секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и/или кодирующей по меньшей мере одну сигнальную последовательность, которая облегчает секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и/или, необязательно, из второго подкомпонента, представленного по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один белок для лизиса микроорганизма в цитозоле клеток млекопитающих и для внутриклеточного высвобождения плазмид или векторов экспрессии, которые содержатся в лизированном микроорганизме, и четвертый компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью для по меньшей мере одной последовательности активации для экспрессии по меньшей мере одного из первого, второго и третьего компонентов, где указанная последовательность активации может быть активирована в микроорганизме и/или является специфической для клетки ткани, специфической для опухолевой клетки, макрофаг-специфической, дендрит-специфической, лимфоцит-специфической, функция-специфической или неспецифической в отношении клетки, причем любой первый, второй, третий или четвертый компоненты, представленные в микрорганизме более одного раза, являются независимо друг от друга идентичными или отличающимися, при этом первый и второй компонент отличны друг от друга. Кроме того, описаны лекарственное средство для стимулирования иммунного ответа и фармацевтическая композиция на основе указанного микроорганизма, способы получения указанного микроорганизма, соответствующие экспрессионная плазмида и вектор экспрессии для получения указанного микроорганизма. Изобретение позволяет получать новые противоопухолевые вакцины, которые индуцируют сильный системный клеточный ответ иммунной системы, что повышает эффективность противоопухолевой терапии. 9 н. и 12 з.п. ф-лы, 18 ил., 8 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к микроорганизмам как носителям гетерогенных нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины, способу их получения, а также соответствующим плазмидам или векторам экспрессии. Данные микроорганизмы можно использовать как лекарственные средства, в частности, как противоопухолевые вакцины для лечения различных опухолей.
Уровень техники
Иммунотерапия рака дает многообещающую возможность лечения опухолей. Множество клинических исследований с использованием различных подходов сосредоточивается на ее эффективности у пациентов. В принципе показано различие между пассивной и активной иммунотерапией.
Активная иммунотерапия направлена на индукцию связанного с вакциной опухолеспецифического иммунного ответа. Последний в настоящее время исследуют в клинических условиях с использованием ряда различных подходов. Например, имеются так называемые цельноклеточные вакцины, исходным материалом для которых являются опухолевые клетки, которые либо получают непосредственно от пациента (аутологичные) или выделяют из соответствующих клеточных линий (гетерологичные). Затем данные клетки, как правило, инактивируют, дифференцированно проводят манипуляции и вводят (обратно вводят) пациенту.
Напротив, антигенспецифические вакцины включают один или более опухолеспецифических антигенов, частей антигенов или ДНК, кодирующую специфический антиген, а также так называемые антиидиотипические вакцины. Обычно данные вакцины не являются выделенными, но их инъецируют в комбинации с подходящим носителем. Следовательно, с одной стороны, используют различные классические адъюванты, но также используют комбинации с биологическими иммуностимуляторами, такими как цитокины.
С целью иммуностимуляции используют подходы, которые включают антиген-ассоциированные иммуностимуляторы, такие как столбнячный токсин. Более того, имеются попытки использования антигенов в комбинации с дендритными клетками. И, наконец, имеется ряд попыток использования рекомбинантных живых вакцин с вирусными или бактериальными носителями.
Слитые белки бактериальных токсинов, такие как столбнячный токсин, шига-токсин, летальный токсин или холерный токсин, в качестве адъювантов с антигеном используют как вакцины, особенно противоинфекционные, уже давно (см. статью Freytag и Clements, 1999). Кроме того, нативные токсины, часто слитые со специфической в отношении клетки молекулой-мишенью, такой как молекула клеточной поверхности опухолевых клеток, также используют с целью разрушения клеток-мишеней.
В таком случае, слитые белки с нативным токсином, который, как правило, включает ферментную группу и белок-связывающий домен, проявляют свой оптимальный эффект при использовании в качестве вспомогательных лекарственных веществ (см. статью Freytag и Clements, 1999). С помощью данных вакцин получают удовлетворительный иммунный ответ даже после иммунизации через слизистые и особенно после пероральной иммунизации. Сложности с данными слитыми белками заключаются в том, что нативные токсины являются высокотоксичными и, вследствие этого, не могут быть использованы для человека (см. статью Holmgren et al., 2005).
Целое направление исследований, таким образом, занимается детоксификацией токсинов, которые в то же время сохраняют эффект в качестве вспомогательных лекарственных веществ. Однако, поскольку в большинстве случаев данный эффект совпадает с ферментной активностью, которая ответственна за токсический эффект (см. статью Lycke et al., 1992), детоксификация не может быть проведена прямым путем, даже если это представляется возможным для некоторых токсинов, которые не теряют своей ферментной адъювантной активности (см. статьи Hormozi et al., 1999; Lycke et al., 1992).
В случае холерного токсина (СТ) предпринят ряд попыток детоксификации (см. статьи Agren et al., 1999; Byun et al., 2001; Eriksson et al., 2004; Kweon et al., 2002; Sanchez et al., 2002), в которых, однако, преобладает использование вспомогательного лекарственного вещества для слизистых (см. работу Freytag и Clements). Вследствие этого главным образом эффективная индукция ответа антител (в основном IgA слизистых), которые получают усиленную связанную с токсином поддержку Т-клеток с рестрикцией МНС (главного комплекса гистосовместимости) класса II, является основным предварительным условием для вспомогательного лекарственного средства для слизистых для вакцины, которая состоит из белка-антигена и слитого или совместно используемого токсина (см. статью Freytag и Clements).
Что касается холерного токсина, особенно его В-субъединицы (CtxB), то его тестируют как адъювант, поскольку он является ответственным за связывание с рецептором GM-1 и не проявляет токсических эффектов, будучи выделенным (см. статью Holmgren et al.). Слияния белка с CtxB характеризуются в основном индукцией так называемых Th2 иммунных ответов. Они представляют собой Т-клеточные ответы, которые главным образом характеризуются цитокинами, такими как ИЛ-4 или ИЛ-6, и которые в основном вызывают индукцию антител, но которые совсем не инициируют или наиболее ограниченно инициируют клеточный иммунный ответ, в частности, цитотоксических Т-клеток (CTL) (см. статью Holmgren et al.).
Кроме того, CtxB в качестве адъюванта для слизистых индуцирует системную толерантность к белку-антигену. Системная толерантность описывает истощение или инактивацию антиген-специфических лимфоцитов, в частности, Т-клеток или В-клеток. Подход данного типа, вследствие этого, неприменим для индукции системного иммунного ответа (см. статью Holmgren et al.).
В противоположность применению на слизистых внутрибрюшинное или подкожное применение слитого белка токсин-антиген способно индуцировать системный, а также низкий цитотоксический ответы. Это в действительности используют для противоопухолевой вакцинации в модельных системах (см., например, работу (Becerra et al., 2003)). Однако данный ответ также получают с самим очищенным антигеном и главным образом в зависимости от используемого адъюванта. За исключением того факта, что измеренные ответы CTL на модели являются очень низкими, отсутствуют доказательства того, что защита в той же мере зависит от данных эффектов. Более того, антиген не применяют перорально, но только путем прямой инъекции (s.c. (подкожной), i.d. (внутрикожно), i.m. (внутримышечно), i.p. (внутрибрюшинно)) антигена.
Антигенные белки, слитые с детоксифицированным токсином, как правило, неэффективны при применении в качестве противоопухолевой вакцины. Основными причинами являются, если они вообще имеются, лишь низкая индукция системного иммунного ответа или даже, в случае CtxB, индукция системной толерантности, а также индукция ограниченных слизистой антител и иммунных ответов типа Th2.
В статье McSorley et al., например, показано, что назальная иммунизация слитым белком CtxB-антиген (который для противоопухолевой вакцины представляет предпочтительный путь индукции системного ответа) предпочтительно переносится и, вследствие этого, инактивирует Th1-клетки, тогда как Th2-клетки не подвергаются воздействию (см. статью McSorley et al., 1998). Ответы Th2 характеризуются Т-хелперными клетками, которые преимущественно продуцируют ИЛ-4 или ИЛ-6. Данные цитокины особенно ответственны за инициацию продукции антител В-клетками, которые обеспечивают защиту в случае самых распространенных вакцин. Напротив, Т-клетки Th1 в основном секретируют ИЛ-2 и ИФН-γ соответственно цитокины, которые играют роль в клеточном иммунном ответе. В зависимости от цели стратегии иммунизации имеет большое значение, инициируется ли вызываемый антителами иммунный ответ Th2 (так называемый сдвиг Th2) или вызываемый клетками ответ Th1 (так называемый сдвиг Th1).
Напротив, системная индукция Th1-доминирующего клеточного иммунного ответа с помощью ИФН-γ, дающая Т-клетки хелперы, и индукция цитотоксических Т-клеток (CTL) является необходимой для иммунотерапии опухолей.
Предшествующий уровень техники показывает, что токсины могут действовать как адъюванты. В частности, холерный токсин (СТ) показывает сильный адъювантный эффект. Однако данный эффект существенно ослабляется, как только токсин детоксифицируют. Что касается его субъединицы CtxB, пероральное применение даже индуцирует системную толерантность. Данной проблемы можно частично избежать путем назального применения. Однако если используют назальное введение, возникают другие проблемы, в частности, такие как ассоциированные с субъединицей CtxB, затрагивающие экспрессию рецептора GM-1 в головном мозге (см. статью van Ginkel et al., 2000), которые выражаются в повышенном риске развития определенных тяжелых побочных эффектов (см. статью Mutsch et al., 2004).
Для преодоления данных проблем возможно генерировать рекомбинантные живые вакцины, которые соэкспрессируют токсины и (гетерологичные) антигены. Данная возможность уже рассматривалась в связи с противоинфекционными вакцинами, т.е. вакцинами, которые направлены на специфический патоген, например на возбудитель туберкулеза, и предназначены для индукции иммунитета против данного патогена.
В процессе разработки данных противоинфекционных вакцин уже получены рекомбинантные токсины, слитые с соответствующими (гетерологичными) антигенами, с использованием ряда рекомбинантных бактериальных штаммов, которые вводят перорально как в случае живой, так и инактивированной вакцины. В большинстве случаев генерированные штаммы экспрессируют только рекомбинантный токсин. Вследствие этого данные подходы в основном направлены на иммунизацию исключительно против самого токсина (индукцию ответа антител) и, следовательно, штамма, экспрессирующего токсина (патогена). Данные типы вакцин непригодны для применения в качестве потенциальных противоопухолевых вакцин при лечении опухолей и неудивительно, что в соответствующих испытаниях не упоминают о какой-либо возможности данного применения (см. статью Reveneau et al., 2002), (см. статью Vertiev et al., 2001), (см. статьи Freytag и Clements, 1999; Jackson et al., 1996).
Что касается данных противоинфекционных вакцин, в процессе индукции ответа антител токсин не работает как адъювант, в данном случае преобладает индукция иммунного ответа антител слизистых. Данные испытания противоинфекционных вакцин не включают или включают только очень слабый системный иммунный ответ. В противоположность противоопухолевым вакцинам данные вакцины не осуществляют индукцию клеточного иммунного ответа, особенно цитотоксических Т-клеток. Бактериальные патогены, экспрессирующие токсин, обычно относятся к внеклеточному живому типу и, вследствие этого, не участвуют в активации CTL, т.е. защита, представляемая данными противоинфекционными вакцинами, является CTL-независимой.
В упомянутых испытаниях вакцин использованы следующие бактериальные штаммы: рекомбинантные Lactobacilli (см. статью Reveneau et al., 2002), Listeria (см. статью Vertiev et al., 2001), Bacillus anthracis (см. статьи Mendelson et al., 2005; Mesnage et al., 1999), Shigellae (см. статьи Andersen et al., 2000; Tzschaschel et al., 1996b), E. coli (см. статью Walker et al., 1992), Vibrio (см. статьи Butterton et al., 1995; Chen et al., 1998; Thungapathra et al., 1999) и Salmonella (см. статью Jackson et al., 1996).
Кроме того, пытались усилить иммунные ответы слизистых путем поверхностной презентации (см. статью Konieczny et al., 2000) или секреции токсина в качестве гетерологичного антигена (Salmonella, Shigellae (см. статьи Garmory et al., 2003; Orr et al., 1999; Su et al., 1992; Tzschaschel et al., 1996a; Tzschaschel et al., 1996b), Yersinia (см. статью Sory и Cornelis, 1990), Vibrio (cm. статью Ryan et al., 1997a), E. coli (см. статью Zhu et al., 2006)). Однако в данных дополнительных случаях сами токсины представляют антигены, в отношении которых направлен иммунный ответ.
Таким образом, следует отметить, что токсины не действуют как адъюванты и в описанных исследованиях не планируют экспрессировать токсины в виде слитых белков с дополнительным отдельным (гетерологичным) антигеном. Более того, слитые белки с СТ или CtxB не были генерированы с данными системами, и это не предполагалось.
Следовательно, слитые белки, упомянутые в вышеприведенных документах, представляют собой слитые белки пептидного сигнала секреции, такого как HlyA, и белка токсина, а не слитые белки, состоящие из токсина и (гетерологичного) антигена.
Главной целью данных исследований является просто получить оптимальный иммунный ответ слизистых (см. статью Tzschaschel et al., 1996a). Индукцией системного иммунного ответа не занимаются. До настоящего времени, если сравнивать в целом, анализы системных иммунных ответов были ограничены только антителами (в частности, системными IgA), поскольку защита в моделях данного типа главным образом опосредуемая антителами (ср., например, [31]). Индукция системного клеточного иммунного ответа, в частности ответа цитолитических Т-клеток, не описана. Слияние с сигналом секреции в основном использовали для повышения растворимости токсинов и повышения их стабильности соответственно, поскольку сильная абсолютная цитоплазматическая экспрессия часто приводит в результате к продукции нерастворимых агрегатов (см. статью Gentschev et al., 2002a).
В данном аспекте ряд авторов обращает внимание на то, что белки с сигналом секреции вызывают быстрое цитоплазматическое разложение (см. статью Tzschaschel et al., 1996a), тогда как другие наблюдают стабилизацию (см. статью Orr et al., 1999). Предшествующий уровень техники, следовательно, в данном случае имеет противоречия. До настоящего времени предшествующие эксперименты с секретируемыми токсинами (токсин + сигнал секреции), прежде всего, направлены на повышение стабильности, которая очевидным образом не достигается во всех случаях.
Одна причина безусловно обнаружена в изменяющейся интенсивности экспрессии и стабильности плазмид. В статье Tzschaschel et al. описано, что используемая плазмидная система высоко нестабильна и, кроме того, без селекции просто найдена в нескольких бактериях. В качестве возможного решения авторы используют хромосомную интеграцию посредством минитранспозона (см. статьи Tzschaschel et al., 1996a; Tzschaschel et al., 1996b).
Однако данная система имеет ряд недостатков. С одной стороны, точка интеграции не определена, что может привести к нежелательному фенотипическому изменению штамма-хозяина (например, повышенной/пониженной экспрессии фланкирующих генов). С другой стороны, ожидаемый уровень экспрессии при использовании одной геномной копии только низкий, что оказывает отрицательное воздействие на иммуногенность. Кроме прочего, хромосомная интеграция транспозона относительно нестабильна, поскольку она очень часто приводит к спонтанным эксцизиям по сторонам повторяющихся элементов.
Как отмечено выше, предшествующий уровень техники является противоречивым в отношении стабильности секретируемого гетерологичного токсина.
В статье Garmory et al. даже предполагают, что секреция гетерологичного антигена не обладает каким-либо особенным преимуществом в отношении иммуногенности (см. статьи Garmory et al., 2002; Roland et al., 2005). В других случаях повышенный системный ответ антител на секретируемый токсин после внутривенного введения в действительности наблюдают, но не после перорального введения. Напротив, пероральное введение, пусть даже косвенно, является частью проблемы (см. статью Roland et al., 2005).
В конечном счете исследования с грамположительным штаммом (Lactobacillus plantarum), который продуцирует столбнячный токсин, не показывают существенных различий в индукции системного ответа антител по сравнению со штаммами, которые секретируют токсин, присутствует ли он в связанном с их мембраной виде, или они содержат токсин в цитоплазме (см. статью Reveneau et al., 2002).
Системные клеточные иммунные ответы, в частности ответы цитотоксических Т-клеток, и полученная в результате защита не исследованы и не описаны.
Таким образом, на основании вышеприведенных данных по предшествующему уровню техники, касающихся противоинфекционных вакцин на основе токсинов, нельзя утверждать, представляет ли секреция токсина, используемого в качестве адъюванта, преимущество в плане индукции системного (клеточного) иммунного ответа. Напротив, вышеприведенные исследования скорее указывают на проблему стабильности и отмечают потерю положительного эффекта секретируемого гетерологичного токсина. Слитые белки, состоящие из сигнала, токсина и гетерологичного антигена, совсем не описаны или не предполагаются.
В вышеприведенных абзацах представлен предшествующий уровень техники, который описывает бактериальные носители, которые гетерологично экспрессируют токсины и могут быть использованы в качестве противоинфекционных вакцин. В приведенных примерах осуществлены в основном модификации, касающиеся экспрессии или стабильности токсинов и их растворимости, например инсерция сильного экспрессирующего промотора или слияния токсина с сигналом секреции.
Другие авторы получают также исследованные генетические слияния токсинов с гетерологичными антигенами в живых вакцинах. В данных случаях токсин в основном используют в качестве адъюванта. В ряде случаев (например, см. статью Brassier et al., 2000) гетерологичный антиген действует как адъювант, а токсин как подходящий антиген.
Однако важно отметить, что в упомянутых случаях экспрессия конструкции слитых генов токсина-антигена происходит исключительно цитоплазматически или периплазматически. Конструкция токсин-антиген не слита с дополнительным сигналом секреции (который может привести к его полной секреции) и не секретируется непосредственно.
В процессе получения данных конструкций слитых генов токсина-антигена используют рекомбинантную Е. coli (см. статью Clemens et al., 2004), Bacillus anthracis (см. статью Brassier et al., 2000), Shigella (см. статьи Koprowski et al., 2000; Ranallo et al., 2005; Zheng et al., 2005) и штаммы Vibrio (см. статью Silva et al., 2003). Для Salmonella (см. обзор в статье (Garmory et al., 2002)) описаны также слияния вариантов СТ с антигенами (см. статьи Hajishengallis et al., 1996; Huang et al., 2000) или других токсинов с антигенами (см. статьи Barry et al., 1996; Cardenas и Clements, 1993; Chabalgoity et al., 1997; Chabalgoity et al., 1996; Chabalgoity et al., 2000; Chabalgoity et al., 1995; Chacon et al., 1996; Jagusztyn-Krynicka et al., 1993; Khan et al., 1994a; Khan et al., 1994b; Lee et al., 2000; Pogonka et al., 2003; Schodel et al., 1990; Smerdou et al., 1996; Ward et al., 1999; Wu et al., 2000).
В большинстве данных случаев основное внимание сосредоточено на индукции иммунного ответа слизистых (антител), и для индукции системного иммунного ответа выбирают только подкожное, но не пероральное применение [36].
Несколько работ с Salmonella в качестве поддерживающего штамма ограничены простой характеризацией штамма (см. статьи Gomez-Duarte et al., 1995; Jagusztyn-Krynicka et al., 1993), в других только анализируют ответ антител слизистых и/или системный ответ антител и/или защиту (см. статьи Barry et al., 1996; Cardenas и Clements, 1993; Dunstan et al., 2003; Hajishengallis et al., 1996; Harokopakis et al., 1997; Khan et al., 1994a; Khan et al., 1994b; Pogonka et al., 2003; Smerdou et al., 1996; Somner et al., 1999). Во всех данных случаях, где попутно используют слияние антигена и столбнячного токсина и которые используют исключительно в качестве противоинфекционных вакцин, системные клеточные иммунные ответы, особенно ответы цитотоксических Т-клеток, не изучали.
Вследствие этого, с иммунологической точки зрения из данных исследований нельзя сделать никаких заключений относительно потенциального применения в качестве противоопухолевой вакцины, поскольку они сосредоточены на опосредованных антителами эффектах в качестве противоинфекционных вакцин.
Исследования, которые включают анализ изотипа исследуемого иммунного ответа, по-видимому, являются более подходящими. В действительности в данных случаях непосредственно измеряют клеточные иммунные ответы, но изотипический профиль ответа антител позволяет сделать заключение относительно сдвига Th1/Th2 иммунного ответа. Изотипы антител, подобных lgGI, связаны с ответами Th2, и изотипы, подобные lgG2a, ассоциированы с ответами TM. Как уже отмечали, ответы ТМ представляют собой преобладающие клеточные иммунные ответы, тогда как ответы Th2 в основном представляют гуморальные ответы, направляемые антителами. Кроме того, в данных исследованиях не описывают противоопухолевые вакцины, и в них не предполагают какого-либо применения противоопухолевого агента.
Одно исследование противоинфекционной вакцины на основе Salmonella в качестве носителя, которая экспрессирует слитый белок столбнячного токсина и антигена, осуществлено на собаках. Низкие уровни ответов антител, которые индуцированы у собак, показывают сдвиг ТМ, касающийся профиля антител, следовательно, ответа, который сильно коррелирует с иммунным ответом клеточного типа (см. статью Chabalgoity et al., 2000). Надо отметить, что иммунология собак недостаточно изучена и, вследствие этого, неясно, в какой степени профиль антител собаки может дать информацию относительно сдвига Th1.
Исследования на мышах, проведенные той же группой с использованием сравнимых конструкций, показали тем не менее профиль антител с одинаковым уровнем для lgG1, что для lgG2a, что будет указывать на смешанный ответ Th1/Th2.
Интересно, что имеющийся иммунитет к столбнячному токсину, который обнаружен у большинства людей вследствие предшествующих иммунизации, вызывает иную относительно сильную индукцию lgG1, тогда как lgG2a почти не индуцируется. Это ясно указывает на другое соотношение Th2 (см. статью Chabalgoity et al., 1995). По данной причине живая вакцина на основе столбнячного токсина в качестве противоопухолевой вакцины является очень вредной для использования на человеке. Вследствие этого можно ожидать, что сильный вызываемый антителами ответ Th2 индуцируется у большинства данных пациентов, которые демонстрируют специфический ответ на столбнячный токсин.
Только в некоторых исследованиях также анализируют клеточный иммунный ответ и сравнивают генетические конструкции со слитым токсином и без него. В одном случае, например, слияние антигена со столбнячным токсином и без него сравнивают на Salmonella (см. статью Lee et al.). В данном случае слитая конструкция столбнячного токсина и антигена главным образом повышает общий уровень антител, тогда как профиль Th1/Th2 мало изменяется. Даже антиген-специфическая секреция Т-клетками CD4+ типичных цитокинов Th1, таких как ИФН-γ и ИЛ-2 соответственно, показывает только слабое отклонение. В более раннем исследовании той же группы измеряют также уровни ИФН-γ. Однако не представлено никакого сравнения с конструкциями без столбнячного токсина (см. статью Chabalgoity et al.). В других исследованиях с различными грамположительными бактериальными носителями, подобными Shigella (см. статьи Koprowski et al., Ranallo et al., Zheng et al.) или Vibrio (см. статьи Campos et al., Ryan et al.), не анализируют ни изотипы, ни клеточные иммунные ответы. Подводя итоги, можно утверждать, что упомянутые исследования ясно сосредоточены на индукции направляемого антителами гуморального иммунного ответа. В действительности используют генетические конструкции токсина и антигена, но они не имеют сигнала секреции и они непосредственно не секретируются. Однако ни при каких условиях не анализировали системные клеточные иммунные ответы, в частности ответы цитотоксических Т-клеток. К тому же данные клеточные ответы цитотоксических Т-клеток не могут быть выведены из гуморального ответа антител и не могут быть определены, если ответ антител включает Th1/Th2.
Однако, это именно те клеточные иммунные ответы цитотоксических Т-клеток, которые важны для использования в лечении путем противоопухолевой вакцинации.
Тем не менее, в плане слияний токсин-антиген, которые ограничены только противоинфекционными вакцинами для слизистых, состояние уровня техники не допускает никакого утверждения относительно возможного использования каких-либо данных конструкций в качестве противоопухолевых вакцин.
Как уже отмечено, экспрессию генетических слитых конструкций осуществляют без помощи системы секреции. Токсины и конструкции токсин-антиген, соответственно, как правило, расположены цитоплазматически, а также периплазматически, т.е. между двумя мембранами. Для индукции эффективного клеточного иммунного ответа токсин должен быть свободно доступен для антиген-презентирующей клетки (АРС). Как правило, нативный токсин продуцируется в периплазме грамотрицательных бактерий. Это достаточно для полных иммунных ответов слизистых, поскольку периплазматические токсины могут выйти из периплазмы в толстой кишке и, следовательно, также являются доступными (см. статью Hunt и Hardy, 1991). Однако это не принимают во внимание, если носитель направлен на антигенпрезентирующие клетки вне толстой кишки, такие как, например, пейеровы бляшки или лимфатические органы, такие как лимфатические узлы или селезенка.
В принципе, два фактора являются важными в плане эффективности противоопухолевой вакцины: индукция клеточного иммунного ответа Th1-типа и участие компонентов врожденной иммунной системы, таких как NK-клетки, NKT-клетки и γ-δ Т-клетки, которые играют важную роль в плане эффективности противоопухолевой терапии (см. статью Dunn et al., 2004).
Важность данных компонентов врожденных иммунных систем лежит на множестве уровней. Должным образом активированные NK- и γ-δ Т-клетки способны локально продуцировать большие количества ИФН-γ. Данный интерферон, который также продуцируется специфическими Th1-поляризованными Т-клетками, имеет множество функций, относящихся к терапии опухолей. Одной из его главных функций является ингибирование ангиогенеза, которое перекрывает снабжение опухоли кислородом и питательными веществами и приводит фактически к голоданию опухоли. Кроме того, NK-клетки имеют рецепторы, которые распознают молекулы МНС класса I. Если данные молекулы присутствуют на клетке, NK-клетки ингибируются.
Что касается вакцины, которая индуцирует специфические цитотоксические Т-клетки, то опухолевые клетки могут быть уничтожены данными CTL. Если опухолевая клетка теряет свою способность экспрессировать молекулы МНС класса I, что очень часто имеет место в опухолях, специфические цитотоксические Т-клетки неэффективны. Вследствие этого в данном случае ингибирование NK-клеток прекращается, и они способны непосредственно элиминировать опухолевые клетки.
Следовательно было бы идеальным, если бы противоопухолевая вакцина эффективно индуцировала оба компонента. Имеются противоречивые данные относительно сдвига Th1-Th2 слитого токсина-адъюванта. Как обсуждалось ранее, слитые конструкции токсин-антиген, используемые в выделенном виде, очевидным образом индуцируют сильный Th2-поляризованный иммунный ответ. Ряд авторов, кроме того, описывает низкий уровень сдвига для живых носителей; другие авторы отмечают небольшой Th1-сдвиг.
Однако данные результаты снова основаны исключительно на несекретируемых конструкциях. Индукцию врожденного иммунитета с помощью данных типов противоинфекционных вакцин никогда не сравнивали и не предусматривали.
Как уже отмечено, главная причина состоит в том, что имеющиеся вакцины представляют собой противоинфекционные вакцины для слизистых, а не противоопухолевые вакцины. Вследствие этого индукция Th1-иммунных ответов, иммунных ответов CTL и ответов врожденной иммунной системы не были в центре внимания. Напротив, что касается противоопухолевых вакцин, индукция данных иммунных ответов обязательна.
Интересно, что в биологии клетки нативные токсины обычно используют как ингибиторы путей передачи сигнала. Так, среди прочего показано, что нативный токсин коклюша, но не холерный токсин, способен ингибировать определенный тип апоптоза NK-клеток (см. статью Ramirez et al., 1994). Другое научное исследование способно показать, что холерный токсин, но не его В-субъединица, блокирует специфические функции NK-клеток (см. статью Poggi et al., 1996). Нативный токсин коклюша используют для ингибирования хемотаксиса лимфоцитов (см. статью Spangrude et al., 1985). Даже если данные исследования не относятся к противоопухолевой вакцинации, компетентный специалист в области техники мог бы сделать заключение о том, что использование токсинов в качестве противоопухолевых вакцин было бы вредным, поскольку ответ врожденной иммунной системы, важный для терапии опухолей, более ингибируется, чем индуцируется.
Другие научные исследования способны показать, что токсины, подобные нативному токсину коклюша (не инактивированному токсину коклюша), эффективно индуцируют компоненты врожденной иммунной системы. Касательно иммунотерапии опухолей это будет означать, что если их вообще будут использовать, то следует использовать нативные токсины. Однако по причинам токсичности данный тип введения недопустим. Кроме того, данная индукция неизбежно приводила бы к Тh2-направляемому вторичному иммунному ответу, который в свою очередь будет вредным для лечения опухолей (см. статью Boyd et al., 2005). Следовательно, касательно индукции врожденного иммунного ответа, в предшествующем уровне техники не описана и не предусмотрена противоопухолевая вакцинация. Напротив, критический анализ литературы даже мешает использованию токсинов при лечении опухолей.
Интересным, тем не менее, является анализ синергического эффекта токсинов или их субъединиц с другими стимуляторами, такими как иммуностимулирующие олигонуклеотиды ДНК с гипометилированными мотивами CpG (CpG ODN) (см. статью Holmgren et al., 2005) или липосахариды (LPS). В случае LPS в основном индукция моноцитов, по-видимому, повышается главным образом посредством В-субъединицы токсинов, тогда как она ингибируется токсином в целом (голотоксином) (см. статью Hajishengallis et al., 2004). Однако данные исследования основаны исключительно на использовании очищенных слитых конструкций токсин-антиген, к которым добавляют субстанции, подобные LPS или CpG в качестве адъювантов. Кроме того, анализ в данном случае проводят только на макрофагах, которые индуцируют адаптивный иммунный ответ, но непосредственно не действуют на опухоли. Следовательно, данные исследования не имеют существенного значения касательно индукции компонентов врожденной иммунной системы, в частности, NK-клеток, которые могут непосредственно действовать на опухоли.
Другие исследования, однако, показывают, что NK-клетки могут быть активированы и хемотаксически привлечены токсинами, подобными экзотоксину A Pseudomonas aeruginosa (см. статью Muhlen et al., 2004). В зависимости от экспериментальной системы можно также индуцировать Th1-ответы, хотя вследствие этого главным образом происходит супрессия NK-клеток и Th1-ответов (см. статью Michalkiewicz et al., 1999). Тем не менее, данные исследования в основном направлены на анализ гепатотоксичности энтеротоксина А и не относятся к противоопухолевой вакцинации. Интересно, что эффекты являются в высокой степени дозозависимыми, и только незначительное изменение дозы может инвертировать эффекты. Хотя авторы не могли показать, какой ответ эффективно имеет место in vivo. Вследствие этого данные не дают предсказания, какие эффекты могут иметь место, если токсин или даже детоксифицированный токсин используют в качестве адъюванта.
В общем и целом иммунный ответ в сильной степени зависит от используемой конкретной системы. В большинстве случаев противоинфекционая вакцина для слизистых направлена на локальную манипуляцию с иммунной системой в слизистой с целью индукции эффективного иммунного ответа в слизистых (см. статью Lycke, 2005). Однако данные исследования не включают разработку противоопухолевой вакцины. Кроме того, в данных исследованиях отсутствует информация об индукции системных клеточных иммунных ответов, в частности ответов цитотоксических Т-клеток, которые являются основными для противоопухолевой вакцинации.
Уже показано, что секреция гетерологичного антигена дает преимущества системному иммунному ответу (см. статью Hess et al., 1996). Однако описанные секретируемые антигены не являются секретируемыми конструкциями токсин-антиген; токсины или их субъединицы не используют. Достигаемые таким образом иммунные ответы в модели трансгенной опухоли также в высокой степени ограничены (см. статью Gentschev et al., 2005). Действительно, в данном случае могут быть индуцированы слабые ответы антител и цитотоксических Т-клеток, которые частично защищают от развития опухоли. Однако, не только сами иммунные ответы, но и сама защита ограничена. Аналогично в данных исследованиях противоопухолевой вакцинации отсутствует сравнение с несекретируемыми конструкциями. Более того, сравнительные исследования не проводили в контексте противоопухолевой вакцинации (см. статью Hess et al., 1996) и, они противоречат дальнейшим исследованиям, в которых не наблюдают какого-либо преимущества в отношении секреции (см. статьи Garmory et al., 2002; Roland et al., 2005). В итоге и как отмечено ранее, предшествующий уровень техники очень противоречив в плане секреции и в общем и целом не дает никакого намека касательно потенциальных преимуществ секретируемых конструкций токсин-антиген при лечении опухолей. Напротив, критический анализ имеющейся литературы в значительной мере противоречит данному типу применения.
Бактериальные токсины (см. статью Todar, 2002): на химическом уровне существует два типа бактериальных токсинов, липополисахариды, которые связаны с клеточными стенками грамотрицательных бактерий, и белки, которые высвобождаются из бактериальных стенок и могут действовать на тканевые участки, удаленные от области бактериального роста. Связанные с клеткой липополисахаридные (LPS) токсины называют эндотоксинами, и внеклеточные способные к диффузии токсины называют экзотоксинами.
Экзотоксины, как правило, представляют собой растворимые белки, секретируемые живыми бактериями в период экспоненциального роста, но в ряде случаев они высвобождаются путем лизиса бактериальной клетки. Продукция токсина, как правило, специфична в отношении определенных видов бактерий, которые вызывают заболевание, ассоциированное с токсином (например, только Clostridium tetani продуцирует столбнячный токсин; только Corynebacterium diphtheriae продуцирует дифтерийный токсин). Как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии продуцируют растворимые белковые токсины.
В общем имеется три класса белковых (экзо)токсинов: (i) токсины типа I (суперантигены), которые связываются с поверхностью клетки-хозяина и модулируют иммунный ответ, но не транслоцируются в клетку, (ii) токсины типа II (порообразующие токсины), которые действуют на мембрану клетки-хозяина и вызывают вытекание из клетки-хозяина и ее гибель, и (iii) токсины типа III (A-B токсины), которые связываются с клеткой-хозяином посредством специфического рецептора и транслоцируются в клетку, становятся в ней активными и модифицируют белки или другие компоненты клетки-хозяина.
Как показано выше, токсины типа III, действующие внутриклеточно в отношении клеток-хозяев, состоят из двух компонентов: один компонент (субъединица А) отвечает за ферментную активность токсина, другой компонент (субъединица В) участвует в связывании со специфическим рецептором на мембране клетки-хозяина и переносе фермента через мембрану. Ферментный компонент неактивен до тех пор, пока не высвободится из нативного (А+В) токсина. Выделенные А-субъединицы ферментативно активны, но лишены способности связывания и входа в клетку. Выделенные В-субъединицы могут связываться с клетками-мишенями (и даже блокировать связывание нативного токсина), но они нетоксичны.
Существует ряд путей, которыми можно синтезировать и собрать субъединицы токсина: А+В показывает, что токсин синтезирован и секретируется в виде двух отдельных белковых субъединиц, которые взаимодействуют на поверхности клетки-мишени; А-В или А-5В или АВ5 показывает, что А- и В-субъединицы синтезируются раздельно, но связаны нековалентными связями во время секреции и связываются со своей мишенью; 5В ил В5 показывает, что домен связывания белка состоит из 5 идентичных субъединиц. АВ или А/В показывает токсин, синтезированный в виде одного полипептида, разделенного на домены А и В, которые могут быть разделены путем протеолитического расщепления. Примерами токсинов АВ или А/В являются дифтерийный токсин, экзотоксин А, ботулинический токсин и столбнячный токсин. Примерами токсинов А-5В или АВ5 являются холерный токсин и шига-токсин, тогда как токсин сибирской язвы LF и токсин сибирской язвы EF являются примерами токсинов А-В.
Дальнейшие имеющие отношение к делу документы предшествующего уровня техники включают следующие:
Michl et al. описывают использование бактерий и бактериальных токсинов в качестве лечебных факторов для солидных опухолей. Раскрывают слитые конструкции токсин-антиген, а также бактериальную направленность данной конструкции. Исследуют использование дифтерийного токсина (DT), экзотоксина A Pseudomonas (РЕ) и энтеротоксина Clostridium perfringens (СРЕ). Однако авторы не упоминают использование холерного токсина и не показывают или не представляют заметную секрецию слитых конструкций токсин-антиген, выделенных из бактерий (см. статью Michl и Gress, 2004).
Lahiri представляет обзор по различным бактериальным токсинам и обсуждает их разнообразное применение. Хотя автор упоминает слитые белки токсин-антиген, он не говорит о холерном токсине и бактериальной направленности секретируемых слитых конструкций токсин-антиген (см. статью Lahiri, 2000).
Lavelle et al. раскрывает молекулы инфекционных агентов в качестве иммуномодулирующих лекарственных препаратов. Авторы также отмечают слитые белки холерного токсин-антигена, поданные конструкции используют только непосредственно как белки и не в качестве генетически модифицированных живых вакцин (см. статью Lavelle et al., 2004).
Заявка WO 01/74383 направлена на химерные иммуногены для слизистых типа антиген-энтеротоксин и, кроме того, в ней упоминают использование субъединиц холерного токсина А2 и В. Однако, данные химерные иммуногены всегда включают субъединицы А2 и В одновременно и предназначены для использования в иммунизации через слизистые, но не в лечении опухолей.
Заявка WO 02/077249 описывает авирулентные мутантные штаммы Yersinia enterocolitica, предназначенные для доставки гетерологичных белков к специфическим мутантным клеткам-мишеням. Кроме того, упоминают использование субъединицы А1 холерного токсина, но патентный документ не говорит о секреции и относится только к лечению инфекций и инфекционных состояний.
Заявка WO 2004/018630 раскрывает рекомбинантные двухцепочечные PHK-фаги, кодирующие двухцепочечную эукариотическую экспрессирующую кассету. Хотя упоминают субъединицу А холерного токсина, документ не имеет дальнейшей значимости. Holmgren et al. дают краткий обзор, касающийся области иммунизации слизистых и адъювантов. Авторы обсуждают в числе прочего эффекты холерного токсина как адъювантов для слизистых, но не раскрывают информацию о генетических экспрессирующих системах или живых вакцинах и, кроме того, не говорят о противоопухолевой терапии (см. статью Holmgren et al., 2003).
Holmgren и Czerkinsky приводят также обзор по иммунитету слизистых и вакцинам. Однако данная статья ограничена только противоинфекционными факторами и в ней не обсуждают или не представляют очевидное возможное применение в области противоопухлевой терапии (см. статью Holmgren и Czerkinsky, 2005).
В другом обзоре, написанном Freytag и Clements, обсуждают адъюванты для слизистых в плане применения в противоинфекционной иммунотерапии. Хотя холерный токсин отмечают в качестве адъювантов для слизистых, авторы не говорят о секретируемых конструкциях токсин-антиген и противоопухолевой терапии как возможной области применения (см. статью Freytag и Clements, 2005).
Shaw и Starnbach описывают использование модифицированных бактериальных токсинов для доставки вакцинных антигенов. Однако в статье не упоминают холерный токсин и, кроме того, ограничиваются прямым применением слитых белков токсин-антиген для целей вакцинации (см. статью Shaw и Starnbach, 2003).
Заявка WO 03/072789 направлена на микроорганизмы как носители нуклеотидных последовательностей, кодирующих клеточные антигены, используемые для лечения опухолей. Хотя патентный документ упоминает секрецию и использование в области противоопухолевой терапии, он совсем не говорит о бактериальных токсинах и слитых белках. В работах Gentschev, Dietrich и Goebel, а также Gentschev et al. описывают бактериальную направленность и ее использование в разработке противоопухолевой вакцины. Однако в двух данных документах не упоминают о применении бактериальных токсинов и слитых белков в противоопухолевой терапии (см. статьи Gentschev et al., 2002a; Gentschev et al., 2002b).
Заявка WO 98/23763 раскрывает клетки Vibrio cholerae, экспрессирующие субъединицы В и D гемолизина E. coli наряду со слитым полипептидом, который включает гетерологичный антиген, слитый с hylA. Далее описан вакцинный штамм Vibrio cholerae, который экспрессирует субъединицу В холерного токсина и слитый полипептид секреторной сигнальной последовательности, гетерологичного антигена и субъединице А2 холерного токсина. Наконец, описан слитый полипептид, который включает субъединицу В холерного токсина, слитую с антигенной частью субъединицы А или В токсина С.difficile. Однако в патентной заявке не упоминают использование слитого белка белкового токсина с антигеном гетерологичного небелкового токсина в противоопухолевой терапии.
Dietrich с соавт. обсуждают два инструмента для доставки вакцины - гемолизин А и Ns-териолизин, которые можно использовать для получения опосредованного клетками иммунитета. Однако не упоминают никаких слитых белков типа белковый токсин - гетерологичный антиген или совместной экспрессии (см. статью Dietrich et al., 2003).
Gentschev et al. описывают использование системы секреции α-гемолизина Escherichia coli для доставки антигена в вакцинном штамме Salmonella typhi Ty21. Однако авторы не упоминают об использовании бактериальных токсинов и слитых белков в противоопухолевой терапии (см. статью Gentschev et al., 2004).
Заявка WO 02/47727 направлена на лечебные факторы, включающие В-субъединицу белкового токсина. Документ раскрывает только слитые белки CtxB и EtxB с вирусным антигеном. Не упоминают никакую бактериальную вакцину или доставку бактериальной вакцины.
Cheng-hua S и соавт. описывают слияние генов В-субъединицы холерного токсина и эпитопа HBV PreS2 и антигенность слитого белка в исследованиях прямой иммунизации. Однако не упоминают никакую бактериальную вакцину или доставку бактериальной вакцины (см. статью Cheng-hua et al., 1995).
Sanchez et al. раскрывают, что ген В-субъединицы холерного токсина повышает цитотоксические ответы иммуноглобулина А, Th1-типа и CD8+ при внутрикожном совместном введении с ДНК-вакциной (см. статью Sanchez et al., 2004). Однако в данном подходе авторы используют ДНК в качестве носителя, который действует как стимулирующий Th1 адъювант для самой себя. Кроме того, белки продуцируются клетками-хозяевами и не доставляются непосредственно или с помощью бактериального носителя и, вследствие этого, непосредственно доступны для эукариотических клеток.
Заявка WO 01/29233 направлена на химерные иммуногенные композиции и кодирующие их нуклеиновые кислоты. Однако не упоминают никакую бактериальную вакцину или доставку бактериальной вакцины.
Заявка WO 2007/044406 относится к способам стимуляции иммунного ответа с использованием системы доставки бактериального антигена, которая основана на SopE, несущем сигнал секреции типа III. Однако в патентной заявке не упоминают использование бактериальных токсинов и слитых белков в противоопухолевой терапии.
В итоге, из предшествующего уровня техники можно заключить, что невозможно создать нативные токсины для использования у человека вследствие их сильной токсичности. Кроме того, их использование в противоопухолевой терапии было бы вредным, поскольку подавлялся бы ответ врожденной иммунной системы, в частности NK-клеток. Однако, это тот иммунный ответ, который является важным компонентом успешной противоопухолевой терапии, поскольку опухолевые клетки очень часто утрачивают свою способность экспрессировать молекулы МНС класса I и вследствие этого устойчивы к распознаванию и атаке CTL.
Использование субъединиц детоксифицированного токсина, с другой стороны, отдельно или слитых с (гетерологичными) белками антигенов приводит в результате к сильно аттенюированному адъювантному эффекту и/или даже индуцированной системной толерантности иммунной системы, а также ограниченным слизистыми иммунным ответам антител и Th2-типа.
Кроме того, секреция слитых белков (гетерологичный) антиген-токсин, которая описана только в разделе противоинфекционных вакцин (т.е. затрагивает антиген или даже сам токсин), как считают, не только не проявляет преимуществ относительно цитоплазматической экспрессии, но, в общем, скорее является неприемлемой. В общем и в целом не представлен ни подход противоопухолевой терапии, ни системная индукция Th1-преобладающего клеточного иммунного ответа с использованием Т-клеток-хелперов, продуцирующих ИФН-γ, ни индукция CTL, и не описана или не достигнута активация врожденной иммунной системы, все аспекты, которые необходимы для противоопухолевой терапии.
Раскрытие изобретения
Целью настоящего изобретения является получение новых противоопухолевых вакцин, посредством которых индуцируют сильный системный клеточный ответ иммунной системы и может быть достигнута эффективная противоопухолевая терапия.
Цель настоящего изобретения неожиданно осуществлена в одном аспекте путем получения микроорганизма в качестве носителя нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины, включающего следующие компоненты:
первый компонент (I) в виде по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один полный или неполный антиген из по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка,
второй компонент (II) в виде по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один белковый токсин и/или по меньшей мере одну субъединицу белкового токсина,
третий компонент (III), состоящий по меньшей мере из одного первого подкомпонента (III-а) в виде по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере одну систему транспорта, которая обеспечивает возможность экспрессии продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II) на наружной поверхности микроорганизма и/или обеспечивает возможность секреции продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II) и/или кодирующую по меньшей мере одну сигнальную последовательность, которая обеспечивает возможность секреции продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II) и/или, необязательно,
второго подкомпонента (III-б) в виде по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один белок для лизиса микроорганизма в цитозоле клеток млекопитающих и для внутриклеточного высвобождения плазмид или векторов экспрессии, которые содержатся в лизированном микроорганизме, и
и четвертый компонент (IV) в виде по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности для по меньшей мере одной последовательности активации для экспрессии по меньшей мере одного компонента (I)-(III), причем указанная последовательность активации может быть активирована в микроорганизме и/или является специфической для клетки ткани, специфической для опухолевой клетки, макрофаг-специфической, дендрит-специфической, лимфоцит-специфической, функция-специфической или неспецифической в отношении клетки.
Вышеперечисленные любые из компонентов (I)-(IV) могут присутствовать либо один, либо несколько раз и, если какой-либо из компонентов (I)-(IV) присутствует несколько раз, он может независимо друг от друга быть либо идентичным, либо отличающимся.
В предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, включающий вышеописанные компоненты (I)-(IV), причем компонент (I) и компонент (II) неидентичны, т.е. компонент (I) не кодирует по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белковый токсин и/или по меньшей мере одну субъединицу белкового токсина.
Термин "специфический в отношении клетки ткани" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к последовательности(ям) активации, которая специфически активирована в клетках ткани-мишени, таких как, например, гормон-зависимые промоторы в тканях простаты.
Термин "специфический в отношении опухолевых клеток" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к последовательности(ям) активации, которая специфически активирована в опухолевых клетках, таких как промоторные элементы, активированные действием опухолеспецифических онкогенов.
Термин "макрофаг-специфический" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к последовательности(ям) активации, которая специфически активирована в макрофагах, таких как промоторные элементы, которые кодируются макрофаг-специфическими генами, например, геном, кодирующим F4/80.
Термин "дендрит-специфический" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к последовательности(ям) активации, которая специфически активирована в дендритных клетках, таких как промоторные элементы, контролирующие экспрессию В7.1. Термины "дендрит-специфический" и "специфический в отношении дендритных клеток" эквиваленты, т.е. они имеют одинаковое значение и оба относятся к дендритным клеткам.
Термин "лимфоцит-специфический" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к элементам, которые специфически активированы в клетках лимфоцитарной линии, таким как промоторные элементы, регулирующие экспрессию молекул CD3 в Т-клетках, или промоторные элементы, регулирующие экспрессию CD20 в зрелых В-клетках.
Термин "функция-специфический" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к последовательности(ям) активации, которая специфически активирована в клеточном контексте, например, в опухолевых клетках, которые утратили экспрессию р53, или последовательности(ям) активации, которая активирована в бактериях в зависимости от контекста, например клеточной локализации или давления кислорода.
Термин "неспецифический в отношении клетки" в сочетании с компонентом (IV) на протяжении настоящего изобретения относится к последовательности(ям) активации, которая повсеместно активна, таким как конститутивно активные бактериальные промоторы.
Термин "нуклеотидная последовательность" на протяжении настоящего изобретения относится к dsDNA, ssDNA, dsRNA, ssRNA или гибридам dsDNA/RNA. Предпочтительной является dsDNA.
Термин "антиген" на протяжении настоящего изобретения относится к молекулам, которые взаимодействуют с антителами, т.е. которые способны генерировать антитела. Некоторые антигены сами по себе не вызывают продукцию антител; только те, которые могут индуцировать продукцию антител, называют иммуногенами. Для цели настоящего изобретения предусматривают включение всех известных антигенов. В уровень знаний компетентного специалиста в области техники входит найти необходимую информацию относительно потенциальных антигенов с помощью баз данных и/или экспериментального скрининга без излишних усилий. Примерами антигенов являются в числе прочих клеточных антигенов специфические антигены клеток ткани (например, клеток ткани, из которых происходит опухоль), клеточные белковые антигены, вирусные антигены, вирусные белковые антигены и т.п. Предпочтительными являются белковые антигены. Кроме того, предпочтительны гетерологичные антигены или чужеродные антигены, т.е. антигены, которые не являются эндогенными для соответствующего микроорганизма, представленного в изобретении, или антигены, которые не экспрессируются соответствующим микроорганизмом, представленным в изобретении, в естественных условиях, но интродуцированы с помощью стандартных молекулярных биотехнологических способов.
Термин "полный антиген" на протяжении настоящего изобретения относится к полным молекулам, которые реагируют с антителами согласно вышеприведенному определению. Примерами полных антигенов являются, например, белки полной длины (непроцессированные), которые также предпочтительны.
Термин "неполный антиген" на протяжении настоящего изобретения относится к специфическим частям молекул, которые реагируют с антителами согласно вышеприведенному определению. Частичные антигены могут представлять собой, например, белковые мотивы, такие как аминокислотные петли в белках, домены протеинкиназы, эпитопы и т.п. Предпочтительными являются домены протеинкиназы и эпитопы, последние из которых представляют собой специфические центры антигена, распознаваемого антителом (называемые также антигенными детерминантами).
Термины "дикий тип" и "мутантный" в сочетании с термином "белок" на протяжении настоящего изобретения относятся к белкам, состоящим из их любой "природной" преобладающей последовательности аминокислот (кодируемой соответствующей нуклеотидной последовательностью), и белкам, которые включают одну или более мутаций в их последовательностях аминокислот (кодируемых соответствующей нуклеотидной последовательностью) по сравнению с последовательностью дикого типа соответственно. Предпочтительно, когда белки дикого типа и/или мутантные белки выделены из опухолевых клеток. Что касается неполных антигенов, предпочтительно, кроме того, чтобы последовательность охватывала мутации, т.е. выбирают эпитоп, который предпочтительно включает одну или более мутаций, например, эпитоп B-Raf V600E.
Микроорганизмы в понимании изобретения представляют собой бактерии, грамположительные бактерии, грамотрицательные бактерии и эукариотические клетки, из которых последние включают одноклеточные паразиты, дрожжи, опухолевые клетки и клетки клеточных линий, такие как Sacharomyces cerevisiae, Leishmania spp., аутологичные выделенные у пациента опухолевые клетки и опухолевые клеточные линии. Данные микроорганизмы, как правило, используют в качестве носителей для переноса нуклеотидных последовательностей, являющихся чужеродными (гетерологичными или гетерогенными) для микроорганизма. Предпочтительно, когда используют бактерии, которые аттенюированы по вирулентности, например бактерии, которые несут делецию или инактивированный ген aroA, aro, asd, gal, pur, cya, crp, phoP/Q, omp или представляют собой температурочувствительные мутанты (см. статью Cardenas и Clements, 1992). Кроме того, предпочтительной в качестве микроорганизма, включающего вышеуказанные компоненты (I)-(IV), является грамотрицательная, аттенюированная, факультативно внутриклеточная бактерия в качестве носителя, который способен преодолевать слизистую оболочку кишки (например, Salmonella spp. или Shigella spp.).
В предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, включающий вышеуказанные компоненты (I)-(IV), причем микроорганизм выбран из группы, состоящей из "бактерии, грамположительной бактерии, грамотрицательной бактерии, эукариотической клетки" и предпочтительно выбран из группы, состоящей из "Escherichia spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Yersinia spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio spp., Vibrio cholerae, Listeria spp., Listeria monocytogenes, Shigella spp., Shigella flexneri", причем предпочтительно, когда вирулентность микроорганизма аттенюирована. Кроме того, предпочтительный Vibrio cholerae исключен из определенных выше микроорганизмов.
Термин "spp." в связи с любым микроорганизмом предусматривает включение для цели настоящего изобретения всех членов данного рода, включая виды, подвиды и др. Термин "Salmonella spp.", например, предусматривает включение всех членов рода Salmonella, таких как Salmonella typhi и Salmonella typhimurium.
В другом предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным определениям, в котором по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, соответствующий компоненту (I), выбран из группы, состоящей из следующих белков дикого типа и их известных мутантов: "рецептор; внеклеточная, трансмембранная или внутриклеточная часть рецептора; молекула адгезии; внеклеточная, трансмембранная или внутриклеточная часть молекулы адгезии; белок сигнальной трансдукции; белок клеточного цикла; фактор транскрипции; белок дифференцировки; эмбриональный белок; вирусный белок; аллерген; белок микробного патогена; белок эукариотического патогена; белок антигена рака яичка; белок опухолевого антигена и/или специфический белок клетки ткани", причем клетка ткани выбрана из группы, состоящей из "щитовидной железы, молочной железы, слюнной железы, лимфатического узла, слизистой оболочки желудка, почки, яичника, простаты, шейки матки, серозной оболочки мочевого пузыря и невуса".
Что касается мутантного белка, то мутация может быть онкогенной и может быть вызывать утрату или расширение его исходных клеточных функций.
Данные антигены осуществляют в клетке контроль клеточного роста и деления клетки и представлены на клеточной мембране нормальных клеток, например, посредством молекулы МНС класса I. В опухолевых клетках данные гены часто сверхэкспрессируются или специфически мутируют. Данные мутации могут иметь ограничения функций супрессоров онкогенов или, как следствие, активации протоонкогенов в онкогены и могут быть включены сами по себе или, обыкновенно, со сверхэкспрессией в рост опухоли. Данные клеточные антигены представлены на мембране опухолевых клеток и, таким образом, представляют антигены на опухолевых клетках, однако, не вызывая иммунную реакцию, воздействующую на опухолевое заболевание пациента. Rapp (US 5156841) уже описал использование онкопротеинов, т.е. продуктов экспрессии онкогенов в качестве иммуногена для противоопухолевых вакцин.
Примерами антигенов и их (онкогенных) мутаций, соответствующих изобретению, являются i) рецепторы, такие как Her-2/neu, андрогенный рецептор, эстрогенный рецептор, лактоферриновый рецептор, midkine-рецептор, рецептор EGF, рецептор ERBB2, ERBB4, рецептор TRAIL, FAS, рецептор TNFα, рецептор TGF-β; ii) белки сигнальной трансдукции, такие как c-Raf (Raf-1), A-Raf, B-Raf, B-Raf V599E, B-Raf V600E, B-Raf KD, домен киназы B-Raf V600E, домен киназы KD B-Raf V600E, B-Raf V600E, домен киназы B-Raf, домен киназы KD B-Raf, Ras, Bcl-2, Bcl-X, Bcl-W, Bfl-1, Brag-1, Mcl-1, A1, Bax, BAD, Bak, Bcl-Xs, Bid, Bik, Hrk, Bcr/abl, Myb, C-Met, IAP1, IAO2, XIAP, ML-IAP LIVIN, сурвивин, APAF-1; iii) белки контроля клеточного цикла, такие как циклин D(1-3), циклин Е, циклин А, циклин В, циклин Н, Cdk-1, Cdk-2, Cdk-4, Cdk-6, Cdk-7, Cdc25C, p16, p15, p21, p27, p18, pRb, p107, p130, E2F(1-5), GAAD45, MDM2, PCNA, ARF, PTEN, APC, BRCA, p53 и гомологи; iv) факторы транскрипции, такие как С-Мус, NFκB, c-Jun, ATF-2, Sp1; v) эмбриональные белки, такие как карциноэмбриональный антиген, α-фетопротеин, MAGE, MAGE-1, MAGE-3, NY-ESO-1, PSCA; vi) антигены дифференцировки, такие как MART, Gp100, тирозиназа, GRP, TCF-4, основной миелин, α-лактальбумин, GFAP, простатаспецифический антиген (PSA), фибриллярный кислый белок, тирозиназа, EGR-1, MUC1; vii) вирусные антигены, такие как следующие вирусы: ВИЧ, HPV, HCV, HPV, EBV, CMV, HSV, вируса гриппа, вируса гриппа типа А, вируса гриппа типа A (H5N1) и (H3N2), вируса гриппа типа В, вируса гриппа типа С; гемагглютининов, гемагглютинина Н1, гемагглютинина Н5, гемагглютинина Н7, гемагглютинина НА1 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1), гемагглютинина НА12 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1), гемагглютинина НА12С (предпочтительно из вируса гриппа А (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1), нейрамидаза, микробные антигены: р60, LLO, уреаза и т.п., антигены эукариотических патогенов: CSP (малярия), калфлагин (трипаносома), СРВ (Leishmania major) и т.п.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным определениям, причем по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, соответствующий компоненту (I), выбран из группы, состоящей из следующих белков дикого типа и их известных мутантов: Her-2/neu, андрогенный рецептор, эстрогенный рецептор, midkine-рецептор, рецептор EGF, рецептор ERBB2, ERBB4, рецептор TRAIL, FAS, рецептор TNFα, рецептор TGF-β, лактоферриновый рецептор, основной миелин, α-лактальбумин, GFAP, фибриллярный кислый белок, тирозиназа, EGR-1, MUC1, c-Raf (Raf-1), A-Raf, B-Raf, B-RafV599E, B-RafV600E, B-Raf KD, домен киназы B-RafV600E, B-Raf V600E KD, домен киназы KD B-RafV600E, домен киназы В-Raf, домен киназы KD B-Raf, N-Ras, K-Ras, H-Ras, Bcl-2, Bcl-X, Bcl-W, Bfl-1, Brag-1, Mcl-1, A1, Bax, BAD, Bak, Bcl-Xs, Bid, Bik, Hrk, Bcr/abl, Myb, C-Met, IAP1, IA02, XIAP, ML-IAP LIVIN, сурвивин, APAF-1, циклин D(1-3), циклин Е, циклинА, циклин В, циклин Н, Cdk-1, Cdk-2, Cdk-4, Cdk-6, Cdk-7, Cdc25C, p16, p15, p21, p27, p18, pRb, p107, p130, E2F(1-5), GAAD45, MDM2, PCNA, ARF, PTEN, APC, BRCA, Akt, PI3K, mTOR, p53 и гомологи, C-Myc, NFκB, c-Jun, ATF-2, Sp1, простатаспецифический антиген (PSA), карциноэмбриональный антиген, α-фетопротеин, PAP; PSMA; STEAP; MAGE, MAGE-1, MAGE-3, NY-ESO-1, PSCA, MART, Gp100, тирозиназа, GRP, TCF-4, вирусные антигены вирусов ВИЧ, HPV, HCV, HPV, EBV, CMV, HSV, вируса гриппа, вируса гриппа типа А, вируса гриппа типа A (H5N1) и (H3N2), вируса гриппа типа В, вируса гриппа типа С; гемагглютининов, гемагглютинина Н1, гемагглютинина Н5, гемагглютинина Н7, гемагглютинина НА1 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1 (KAN-1)2004(H5N1), гемагглютинина НА12 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1), гемагглютинина НА12С (предпочтительно из вируса гриппа А (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1), нейрамидазы, р60, LLO, уреазы, CSP, калфлагина и/или СРВ".
В еще одном предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующим вышеприведенным определениям, причем по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, соответствующий компоненту (I), выбран из группы киназ, состоящей из следующих белков дикого типа и их известных мутантов (регистрационные номера приводят в скобках: AAK1 (NM 014911), AATK (NM 004920), ABU (NM 005157), ABL2(NM 005158), ACK1 (NM 005781), ACVR1 (NM 001105), ACVR1 В (NM 020328), ACVR2 (NM 001616), ACVR2B (NM 001106), ACVRL1 (NM 000020), ADCK1 (NM 020421), ADCK2 (NM 052853), ADCK4 (NM 024876), ADCK5 (NM 174922), ADRBK1 (NM 001619), ADRBK2 (NM 005160), AKT1 (NM 005163), AKT2 (NM 001626), AKT3 (NM 005465), ALK (NM 004304), ALK7 (NM 145259), ALS2CR2 (NM 018571), ALS2CR7 (NM 139158), AMHR2 (NM 020547), ANKK1 (NM 178510), ANKRD3 (NM 020639), APEG1 (NM 005876), ARAF (NM 001654), ARK5 (NM 014840), ATM (NM 000051), ATR (NM 001184), AURKA (NM 003600), AURKB (NM 004217), AURKC (NM 003160), AXL (NM 001699), BCKDK (NM 005881), BCR (NM 004327), BIKE(NM 017593), BLK (NM 001715), BMPR1 A(NM 004329), BMPR1 В (NM 001203), BMPR2 (NM 001204), BMX (NM 001721), BRAF (NM 004333), BRD2 (NM 005104), BRD3 (NM 007371), BRD4 (NM 014299), BRDT (NM 001726), BRSK1 (NM 032430), BRSK2 (NM 003957), ВТК (NM 000061), BUB1 (NM 004336), BUB1 В (NM 001211), CABC1 (NM 020247), CAMK1 (NM 003656), CaMK1b (NM 198452), CAMK1 D (NM 020397), CAMK1 G (NM 020439), CAMK2A (NM 015981), CAMK2B (NM 001220), CAMK2D (NM 001221), CAMK2G (NM 001222), CAMK4 (NM 001744), CAMKK1 (NM 032294), CAMKK2 (NM 006549), CASK (NM 003688), CCRK (NM 012119), CDC2 (NM 001786), CDC2L1 (NM 001787), CDC2L5 (NM 003718), CDC42BPA (NM 014826), CDC42BPB (NM 006035), CDC7L1 (NM 003503), CDK10 (NM 003674), CDK11 (NM 015076), CDK2 (NM 001798), CDK3 (NM 001258), CDK4 (NM 000075), CDK5 (NM 004935), CDK6 (NM 001259), CDK7 (NM 001799), CDK8 (NM 001260), CDK9 (NM 001261), CDKL1 (NM 004196), CDKL2 (NM 003948), CDKL3 (NM 016508), CDKL4 (NM 001009565), CDKL5 (NM 003159), CHEK1 (NM 001274), CHUK (NM 001278), CIT (NM 007174), CLK1 (NM 004071), CLK2 (NM 003993), CLK3 (NM 003992), CLK4 (NM 020666), CRK7 (NM 016507), CSF1 R (NM 00521 1), CSK (NM 004383), CSNK1 A1 (NM 001892), CSNK1 D (NM 001893), CSNK1 E (NM 001894), CSNK1 G1 (NM 022048), CSNK1 G2 (NM 001319), CSNK1 G3 (NM 004384), CSNK2A1 (NM 001895), CSNK2A2 (NM 001896), DAPK1 (NM 004938), DAPK2 (NM 014326), DAPK3 (NM 001348), DCAMKL1 (NM 004734), DCAMKL2(NM 152619), DCAMKL3 (XM 047355), DDR1 (NM 013993), DDR2 (NM 006182), DMPK (NM 004409), DMPK2 (NM 017525.1), DYRK1 A (NM 001396), DYRK1 В (NM 006484), DYRK2 (NM 006482). DYRK3 (NM 003582), DYRK4 (NM 003845), EEF2K (NM 013302), EGFR (NM 005228), EIF2AK3 (NM 004836), EIF2AK4 (NM_001013703), EPHA1 (NM 005232), EPHA10 (NM 001004338), EPHA2 (NM 004431), EPHA3 (NM 005233), EPHA4 (NM 004438), EPHA5 (NM 004439), EPHA6 (XM 114973), EPHA7 (NM 004440), EPHA8 (NM 020526), EPHB1 (NM 004441), EPHB2 (NM 017449), EPHB3 (NM 004443), EPHB4 (NM 004444), EPHB6 (NM 004445), ERBB2 (NM 004448), ERBB3 (NM 001982), ERBB4 (NM 005235), ERK8 (NM 139021), ERN1 (NM 001433), ERN2 (NM 033266), FASTK (NM 025096), FER (NM 005246), FES (NM 002005), FGFR1 (NM 000604), FGFR2 (NM 022970), FGFR3 (NM 000142), FGFR4 (NM 022963), FGR (NM 005248), FLJ23074 (NM 025052), FLJ23119 (NM 024652), FLJ23356 (NM 032237), FLT1 (NM 002019), FLT3 (NM 0041 19), FLT4 (NM 002020), FRAP1 (NM 004958), FRK (NM 002031), FYN (NM 002037), GAK (NM 005255), GPRK5 (NM 005308), GPRK6 (NM 002082), GPRK7 (NM 139209), GRK4 (NM 005307), GSG2 (NM 031965), GSK3A (NM 019884), GSK3B (NM 002093), GUCY2C (NM 004963), GUCY2D (NM 000180), GUCY2F (NM 001522), H11 (NM 014365), HAK(NM 052947), HCK (NM 0021 10), HIPK1 (NM 152696), HIPK2 (NM 022740), HIPK3 (NM 005734), HIPK4 (NM 144685), HRI (NM 014413), HUNK(NM 014586), ICK (NM 016513), 1GF1 R (NM 000875), IKBKB (NM 001556), IKBKE (NM 014002), ILK (NM 004517), INSR (NM 000208), INSRR (NM 014215), IRAKI (NM 001569), IRAK2 (NM 001570), IRAK3 (NM 007199), IRAK4 (NM 016123), ITK (NM 005546), JAK1 (NM 002227), JAK2 (NM 004972), JAK3 (NM 000215), KDR (NM 002253), KIS (NM 144624), KIT (NM 000222), KSR (XM 290793), KSR2 (NM 173598), LAK(NM 025144), LATS1 (NM 004690), LATS2 (NM 014572), LCK (NM 005356), LIMK1 (NM 016735), LIMK2 (NM 005569), LMR3 (XM 055866), LMTK2 (NM 014916), LOC149420 (NM 152835), LOC51086 (NM 015978), LRRK2 (XM 058513), LTK (NM 002344), LYN (NM 002350), MAK (NM 005906), MAP2K1 (NM 002755), MAP2K2 (NM 030662), MAP2K3 (NM 002756), MAP2K4 (NM 003010), MAP2K5 (NM 002757), MAP2K6 (NM 002758), MAP2K7 (NM 005043), MAP3K1 (XM 042066), MAP3K10 (NM 002446), MAP3K11 (NM 002419), MAP3K12 (NM 006301), MAP3K13 (NM 004721), MAP3K14 (NM 003954), MAP3K2 (NM 006609), MAP3K3 (NM 002401), MAP3K4 (NM 005922), MAP3K5 (NM 005923), MAP3K6 (NM 004672), MAP3K7 (NM 003188), MAP3K8 (NM 005204), MAP3K9 (NM 033141), MAP4K1 (NM 007181), MAP4K2 (NM 004579), MAP4K3 (NM 003618), MAP4K4 (NM 145686), MAP4K5 (NM 006575), MAPK1 (NM 002745), MAPK10 (NM 002753), MAPK11 (NM 002751), MAPK12 (NM 002969), MAPK13 (NM 002754), MAPK14 (NM 001315), MAPK3 (NM 002746), MAPK4 (NM 002747), MAPK6 (NM 002748), MAPK7 (NM 002749), MAPK8 (NM 002750), MAPK9 (NM 002752), MAPKAPK2 (NM 032960), MAPKAPK3 (NM 004635), MAPKAPK5 (NM 003668), MARK (NM 018650), MARK2 (NM 017490), MARK3 (NM 002376), MARK4 (NM 031417), MAST1 (NM 014975), MAST205 (NM 0151 12), MAST3 (XM 038150), MAST4 (XM 291 141), MASTL (NM 032844), MATK (NM 139355), MELK (NM 014791), MERTK (NM 006343), MET (NM 000245), MGC33182 (NM 145203), MGC42105 (NM 153361), MGC43306 (C9orf96), MGC8407 (NM 024046), MIDORI (NM 020778), MINK (NM 015716), MKNK1 (NM 003684), MKNK2 (NM 017572), MLCK (NM 182493), MLK4 (NM 032435), MLKL (NM 152649), MOS (NM 005372), MST1 R (NM 002447), MST4 (NM 016542), MUSK (NM 005592), MYLK (NM 053025), MYLK2 (NM 0331 18). MY03A (NM 017433), MY03B (NM 138995), NEK1 (NM 012224), NEK10 (NM 152534), NEK11 (NM 024800), NEK2 (NM 002497), NEK3 (NM 002498), NEK4 (NM 003157), NEK5 (MGC75495), NEK6 (NM 014397), NEK7 (NM 133494), NEK8 (NM 178170), NEK9 (NM 0331 16), NLK (NM 016231), NPR1 (NM 000906), NPR2 (NM 003995), NRBP (NM 013392), NRBP2 (NM 178564), NRK (NM 198465), NTRK1 (NM 002529), NTRK2 (NM 006180), NTRK3 (NM 002530), OBSCN (NM 052843), OSR1 (NM 005109), PACE-1 (NM 020423), PAK1 (NM 002576), PAK2 (NM 002577), PAK3 (NM 002578), PAK4 (NM 005884), PAK6 (NM 020168), PAK7 (NM 020341), PASK (NM 015148), PCTK1 (NM 006201), PCTK2 (NM 002595), PCTK3 (NM 212503), PDGFRA (NM 006206), PDGFRB (NM 002609), PDK1 (NM 002610), PDK2 (NM 00261 1), PDK3 (NM 005391), PDK4 (NM 002612), PDPK1 (NM 002613), PFTK1 (NM 012395), PHKG1 (NM 006213), PHKG2 (NM 000294), PIK3R4 (NM 014602), PIM1 (NM 002648), PIM2 (NM 006875), PIM3 (NM 001001852), PINK1 (NM 032409), PKE (NM 173575), PKMYT1 (NM 004203), pknβ (NM 013355), PLK (NM 005030), PLK3 (NM 004073), PRKAA1 (NM 006251), PRKAA2 (NM 006252), PRKACA (NM 002730), PRKACB (NM 002731), PRKACG (NM 002732), PRKCA (NM 002737), PRKCB1 (NM 002738), PRKCD (NM 006254), PRKCE (NM 005400), PRKCG (NM 002739), PRKCH (NM 006255), PRKCI (NM 002740), PRKCL1 (NM 002741), PRKCL2 (NM 006256), PRKCM (NM 002742), PRKCN (NM 005813), PRKCQ (NM 006257), PRKCZ (NM 002744), PRKD2 (NM 016457), PRKDC (NM 006904), PRKG1 (NM 006258), PRKG2 (NM 006259), PRKR (NM 002759), PRKWNK1 (NM 018979), PRKWNK2 (NM 006648), PRKWNK3 (NM 020922), PRKWNK4 (NM 032387), PRKX (NM 005044), PRKY (NM 002760), PRPF4B (NM 003913), PSKH1 (NM 006742), PSKH2 (NM 033126), PTK2 (NM 005607), PTK2B (NM 004103), PTK6 (NM 005975), PTK7 (NM 002821), PTK9 (NM 002822), PTK9L(NM 007284), PXK (NM 017771), QSK (NM 025164), RAD53 (NM 007194), RAF1 (NM 002880), RAGE (NM 014226), RET (NM 020975), RHOK (NM 002929), R10K1 (NM 031480), RIOK2 (NM 018343), RIPK1 (NM 003804), RIPK2 (NM 003821), RIPK3 (NM 006871), RIPK5 (NM 015375), RNASEL(NM 021133), ROCK1 (NM 005406), ROCK2 (NM 004850), ROR1 (NM 005012), ROR2 (NM 004560), ROS1 (NM 002944), RPS6KA1 (NM 002953), RPS6KA2 (NM 021135), RPS6KA3 (NM 004586), RPS6KA4 (NM 003942), RPS6KA5 (NM 004755), RPS6KA6 (NM 014496), RPS6KB1 (NM 003161), RPS6KB2 (NM 003952), RPS6KC1 (NM 012424), RPS6KL1 (NM 031464), RYK (NM 002958), SBK (XM 370948), SCYL1 (NM 020680), SCYL2 (NM 017988), SGK (NM 005627), SgK069 (SU SgK069), SgK085 (XM 373109), SgK110 (SU SgKHO), SGK2 (NM 016276), SgK223 (XM 291277), SgK269 (XM 370878), SgK424 (CGP SgK424), SgK493 (SU_SgK493), SgK494 (NM 144610), SgK495 (NM 032017), SGKL(NM 013257), SK681 (NM 001001671), SLK (NM 014720), SMG1 (NM 015092), SNARK (NM 030952), SNF1 LK (NM 173354), SNF1 LK2 (NM 015191), SNK (NM 006622), SNRK (NM 017719), SRC (NM 005417), SRMS (NM 080823), SRPK1 (NM 003137), SRPK2 (NM 003138), SSTK (NM 032037), STK10 (NM 005990), STK11 (NM 000455), STK16 (NM 003691), STK17A (NM 004760), STK17B (NM 004226), STK18 (NM 014264), STK19 (NM 032454), STK22B (NM 053006), STK22C (NM 052841), STK22D (NM 032028), STK23 (NM 014370), STK24 (NM 003576), STK25 (NM 006374), STK3 (NM 006281), STK31 (NM 031414), STK32B (NM 018401), STK33 (NM 030906), STK35 (NM 080836), STK36 (NM 015690), STK38 (NM 007271), STK38L (NM 015000), STK39 (NM 013233), STK4 (NM 006282), STLK5 (NM 001003787), STYK1 (NM 018423), SUDD (NM 003831), SYK (NM 003177), TAF1 (NM 138923), TAF1 L (NM 153809), TA01 (NM 004783), TAOK1 (NM 020791), TAOK3 (NM 016281), TBCK (NM 0331 15), TBK1 (NM 013254), TEC (NM 003215), TEK (NM 000459), TESK1 (NM 006285), TESK2 (NM 007170), ТЕХ14 (NM 031272), TGFBR1 (NM 004612), TGFBR2 (NM 003242), TIE (NM 005424), TIF1 (NM 003852), TLK1 (NM 012290), TLK2 (NM 006852), TNIK (NM 015028), TNK1 (NM 003985), TOPK (NM 018492), TP53RK (NM 033550), TRAD (NM 007064), TRIB1 (NM 025195), TRIB2 (NM 021643), TRIB3 (NM 021 158), TRIM28 (NM 005762), TRIM33 (NM 015906), TRIO (NM 0071 18), TRPM6 (NM 017662), TRPM7 (NM 017672), TRRAP (NM 003496), TSSK4 (NM 174944), TTBK1 (NM 032538), TTBK2 (NM 173500), TTK (NM 003318), TTN (NM 003319), TXK (NM 003328), TYK2 (NM 003331), TYR03 (NM 006293), ULK1 (NM 003565), ULK2 (NM 014683), ULK3 (NM 015518), ULK4 (NM 017886), VRK1 (NM 003384), VRK2 (NM 006296), VRK3 (NM 016440), WEE1 (NM 003390), Wee1 B (NM 173677), YANK1 (NM 145001), YES1(NM 005433), ZAK (NM 016653), и/или ZAP70 (NM 001079)".
Термин "аллерген" в контексте настоящего изобретения относится к полным или неполным антигенам, как определено в данном контексте, которые вызывают гиперчувствительность и/или аллергические реакции. Примерами являются Der p 5 (клещи), Bet v1 (пыльца березы), Phl p 1 (пыльца злаков), Asp f I/a (Aspergillus), PLA 2 (пчела), Hev b (латекс) (см. статью Schmid-Grendelmeier и Crameri, 2001).
Антигены микробных и эукариотических патогенов и антигены рака яичка приведены в перечне выше.
На протяжении настоящего изобретения белковые токсины и/или их субъединицы, соответствующие компоненту (II), предпочтительно представляют собой бактериальные белковые токсины, более предпочтительно - экзотоксины. Примерами бактериальных экзотоксинов являются токсины типа I (суперантигены), токсины типа II (порообразующие токсины) и (iii) токсины типа III (A-B токсины). В предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным описаниям, причем компонент (II) выбран из группы, состоящей из "бактериального токсина, энтеротоксина, экзотоксина, токсина типа I, токсина типа II, токсина типа III, токсина типа IV, токсина типа V, токсина RTX, токсина АВ, токсина A-B, токсина А/В, токсина А+В, токсина А-5В и/или токсина АВ5.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным описаниям, причем компонент (II) выбран из группы, состоящей из "токсина аденилатциклазы, токсина сибирской язвы, токсина сибирской язвы (EF), токсина сибирской язвы (LF), ботулинического токсина, холерного токсина (СТ, Ctx), субъединицы холерного токсина В (СТВ, CtxB), дифтерийного токсина (DT, Dtx), токсина Е. coli LT, термолабильного энтеротоксина Е. coli (LT), субъединицы В термолабильного энтеротоксина Е. coli (LTB), токсина Е. coli ST, термостабильного энтеротоксина Е. coli (ST), эритрогенного токсина, токсина эксфолиатина, экзотоксина А, энтеротоксина Perfringens, токсина коклюша (РТ, Ptx), шига-токсина (ST, Stx), субъединицы В шига-токсина (STB, StxB), шига-подобного токсина, энтеротоксинов Staphylococcus, столбнячного токсина (ТТ), токсина синдрома токсического шока (TSST-1), веро-токсина (VT), токсина А (ТА) и токсина В (ТВ) Clostridium difficile, летального токсина (LT) и геморрагического токсина (НТ) Clostridium sordellii, α-токсина (AT) Clostridium novyi".
Однако если холерный токсин или его субъединицу CtxB используют в качестве токсинов, соответствующих компоненту (II), представленному в изобретении, предпочтительно не использовать Vibrio cholerae в качестве бактериального носителя (микроорганизма).
В предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведеным определениям, причем компонент (I) и компонент (II) связаны друг с другом, чтобы обеспечить возможность экспрессии и/или секреции слитого белка, кодируемого обоими компонентами. Более предпочтительно, когда данный слитый белок выбран из группы, состоящей из "CtxB-PSA, CtxB-B-Raf V600E KD (киназа dead), CtxB-домен киназы B-Raf V600E, CtxB-домен киназы KD B-Raf V600E (киназа dead), CtxB-B-Raf, CtxB-B-Raf KD (киназа dead), CtxB-домен киназы KD B-Raf (киназа dead), CtxB-HA1 (субъединицы 1 гемагглютинина вируса гриппа), CtxB-HA12C".
Секреция представляет собой процесс отделения, превращения и высвобождения химических агентов из клетки, либо секретируемой химической субстанции, либо количества субстанции. Секреция не уникальна только для эукариот; она присутствует также у бактерий и архей. Транспортеры типа АТФ-связывающей кассеты распространены во всех трех типах живых организмов. Система Sec также является другой консервативной системой, которая гомологична транслокону в эукариотическом эндоплазматическом ретикулюме, состоящему из комплекса транслокона Sec 61 у дрожжей и комплексу Sec Y-E-G у бактерий. Грамотрицательные бактерии имеют две мембраны, делая, таким образом, секрецию более сложной. Вследствие этого у грамотрицательных бактерий имеется по меньшей мере пять специализированных систем секреции:
(1) Система секреции типа I: Такая же, как вышеупомянутые транспортеры АТФ-связывающей кассеты.
(2) Система секреции типа II: от системы Sec зависит, перейдет ли белок внутреннюю мембрану, и от другой специальной системы, перейдет ли он наружную мембрану. Бактериальные пили используют модификации системы sec, но отличаются от системы типа I.
(3) Система секреции типа III (T3SS): она гомологична бактериальному флагеллярному базальному телу. Она похожа на молекулярный шприц, через который бактерия (например, Shigella или Yersinia) может инъецировать белки в эукариотические клетки. Низкая концентрация Са2+ в цитозоле отрывает вход, который регулирует T3SS. Система Hrp у патогенов растений инъецирует в растения шпильки через подобные механизмы.
(4) Система секреции типа IV: Она гомологична механизму конъюгации бактерий (и архейных жгутиковых). Она способна транспортировать как ДНК, так и белки. Она обнаружена у Agrobacterium tumefaciens, которая использует данную систему для интродукции Ti-плазмиды и белков хозяину, у которого развивается корончатый галл (опухоль). Helicobacter pylori использует систему секреции IV, чтобы ввести Cag А в эпителиальные клетки желудка. Bordetella pertussis, возбудитель коклюша, секретирует токсин коклюша частично посредством системы типа IV.
(5) Система секреции типа V, также называемая системой аутотранспортеров: Она использует систему sec для перехода через внутреннюю мембрану. Белки, которые используют данный путь, обладают способностью формировать β-бочку на С-конце и встраиваться в наружную мембрану для транспорта остальной части пептида из клетки. Наконец, β-бочка может отщепляться и оставаться в наружной мембране. Некоторые считают, что из данных остатков аутотранспортеров образуются порины, которые подобны β-бочкам.
Бактерии, а также митохондрии и хлоропласты также используют много других специальных транспортных систем, таких как путь двойной транслокации аргинина (Tat), который, в противоположность Sec-зависимому экспорту, транспортирует полностью уложенные белки через мембрану. Название данной системы происходит из необходимости присутствия двух следующих друг за другом аргининов в сигнальной последовательности, требующихся для направленности на данную систему. Секреция у грамотрицательных бактерий включает преодоление внутренней и наружной мембран с помощью подходящей системы секреции, подобной, например, системе секреции Hly типа I или типа III или аутоторанспортеру AIDA. У грамположительных бактерий система секреции должна преодолевать внутреннюю мембрану и клеточную стенку, что у большинства штаммов может достигаться слиянием с подходящим сигналом секреции.
Подкомпонент (III-а) представляет собой по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере одну транспортную систему, которая обеспечивает возможность экспрессии продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II) на наружной поверхности микроорганизма и/или обеспечивает возможность секреции продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II). Соответствующий компонент необязательно может либо секретироваться, либо экспрессироваться на мембране микроорганизма, т.е. быть связанным с мембраной. Данные транспортные системы представляют собой, например i) систему секреции типа I, систему секреции типа II, систему секреции типа III, систему секреции типа IV, систему секреции типа V, ii) гемолизиновую транпортную систему (сигнал) Е. coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора); следует использовать следующие транспортные сигналы: для секреции - С-концевой транспортный сигнал HlyA в присутствии белков HlyB и HlyD; для связанной с мембраной экспрессии - С-концевой транспортный сигнал HlyA в присутствии белка HlyB, iii) гемолизиновую транспортную систему (сигнал) Е. coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD, под контролем не-hly-специфического бактериального промотора), iv) транспортный сигнал для белка S-слоя (RsaA) Caulobacter crescentus; следует использовать следующие транспортные сигналы: для секреции и связанной с мембраной экспрессии - С-концевой транспортный сигнал RsaA, v) транспортный сигнал для белка TolC Escherichia coli; следует использовать следующие транспортные сигналы: связанной с мембраной экспрессии - N-концевой транспортный сигнал TolC (полный мембранный белок TolC Е. coli представляет собой многофункциональный порообразующий белок наружной мембраны Е. coli, который служит в дополнение к таким функциям, как прием колицина Е1 (см. статью Morona et al., 1983) и секреция колицина V (см. статью Fath et al., 1991), так же как рецептор для фага U3 (см. статью Austin et al., 1990); данный белок обнаружен не только в Е. coli, но также во множестве грамотрицательных бактерий (см. статью Wiener, 2000); локализация в наружной мембране и широкое распространение делают TolC идеальным кандидатом для представления гетерологичных антигенов, чтобы, например, вызвать иммунную реакцию.
Грамположительные бактерии не заключены в наружную мембрану. Секреция в данных случаях происходит проще и обычно не требует специального механизма секреции для транспорта через клеточную мембрану и клеточную стенку. В случае грамположительных бактерий сигналы секреции слиты по N-концу с гетерологичным белком и, как правило, необходимы и достаточны для секреции. Белки, для которых описаны данные сигнальные последовательности, включают в основном все секретируемые бактериальные белки. Примерами для листерий являются сигналы секреции, выделенные из листериолизина, р60 или ActA. В общем аналогичный подход применяют к эукариотическим клеткам, где сигнальная последовательность (например, универсальный сигнал секреции Vtgss), направляющая белок на эндоплазматический ретикулюм в отсутствие сигнала удерживания, необходима и достаточна для секреции.
Необязательный второй подкомпонент (III-б) представляет собой по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белок для лизиса микроорганизма в цитозоле клеток млекопитающих и для внутриклеточного высвобождения плазмид или векторов экспрессии, которые содержатся в лизированном микроорганизме. Данные литические белки (эндолизины) представляют собой, например, белки лизиса, специфические для Listeria, такие как PLY551 (см. статью Loessner et al., 1995) и/или специфический для Listeria холин под контролем промотора листерий. Предпочтительный вариант осуществления данного изобретения представляет собой комбинацию различных подкомпонентов (III-b), например комбинацию белка лизиса и холина.
Оба подкомпонента (III-а) и/или (III-б) могут быть независимо друг от друга конститутивно активными.
В предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным определениям, причем подкомпонент (III-а) выбран из группы, состоящей из "системы секреции типа I, системы секреции типа II, системы секреции типа III, системы секреции типа IV, системы секреции типа V, гемолизиновой системы транспорта (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора), гемолизиновой системы транспорта (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем не-hly-специфического промотора), транспортного сигнала для белка S-слоя (Rsa A) Caulobacter crescentus, транспортного сигнала для белка TolC Escherichia coli, сигнала секреции Vtgss и/или сигналов секреции, выделенных из листериолизина, р60 и/или ActA", и причем подкомпонент (III-б) выбран из группы, состоящей из "эндолизинов, литического белка грамположительных бактерий, литического белка Listeria monocytogenes, PLY551 Listeria monocytogenes и/или холина Listeria monocytogenes".
В следующем предпочтительном варианте осуществления такой же подкомпонент (III-а) обеспечивает возможность экспрессии продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II) на наружной поверхности микроорганизма и/или обеспечивает возможность секреции продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II). Именно в данном предпочтительном варианте осуществления подкомпонент (III-а) представляет собой по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую только одну транспортную систему, которая обеспечивает возможность сопутствующей экспрессии продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II) на наружной поверхности микроорганизма и/или обеспечивает возможность сопутствующей секреции продуктов экспрессии компонента (I) и компонента (II), причем данный предпочтительный подкомпонент (III-а) представляет собой по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую гемолизиновую транспортную систему (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора) или гемолизиновую транспортную систему (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем не-hly-специфического бактериального промотора).
В еще одном предпочтительном варианте осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным определениям, причем в соответствии с подкомпонентом (III-а) продукты экспрессии компонентов (I) и компонента (II) секретируются. Более предпочтительно, когда компонент (I) и компонент (II) связаны друг с другом, экспрессируются вместе в виде слитого белка, кодируемого обоими компонентами. Наиболее предпочтительно, когда данный слитый белок выбран из группы, состоящей из "CtxB-PSA, CtxB-B-Raf V600E KD (киназа dead), CtxB-домен киназы B-Raf V600E, CtxB-B-домен киназы KD Raf V600E (киназа dead), CtxB-B-Raf, CtxB-B-Raf KD (киназа dead), CtxB-B-домен киназы KD Raf (киназа dead), CtxB-HA1 (субъединица 1 гемагглютинина вируса гриппа), CtxB-HA12C".
На протяжении настоящего изобретения, термин "секреция" относится к секреции белкового антигена, белкового токсина и/или слитого белка токсин-антиген через обе мембраны грамотрицательной бактерии или через внутреннюю мембрану и клеточную стенку грамположительной бактерии в прилегающую среду посредством надлежащей системы секреции, такой как проиллюстрированные выше.
Поскольку известно, что при использовании системы секреции, такой как гемолизиновая система секреции типа I из Е. coli, продукт секреции, как правило, обнаруживают во всех клеточных фракциях: цитоплазматически, ассоциированным с мембраной и локализованным в аутомембранных пузырьках и полностью секретируемым в прилегающую среду (см. статью Balsalobre et al., 2006), на протяжении настоящего изобретения не требуется, чтобы секреция была полной. Однако желательна и предпочтительна полная или почти полная секреция, т.е. большая часть полностью секретируемого продукта секреции.
Компонент (IV) представляет собой по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность для по меньшей мере одной последовательности активации для экспрессии одного или более компонентов (I) - (III), причем указанная последовательность активации может быть активирована в микроорганизме и/или является специфической для клетки ткани, специфической для опухолевой клетки, макрофаг-специфической, дендрит-специфической, лимфоцит-специфической, функция-специфической или неспецифической в отношении клетки.
Если экспрессия является мембрана-связанной на наружной поверхности микроорганизма, то предпочтительно, когда последовательность активации выбирают так, чтобы она была способна активироваться в микроорганизме. Данные последовательности активации представляют собой, например: i) конститутивно активные промоторные участки, такие как промоторный участок с "сайтом связывания рибосом" (RBS) гена β-лактамазы Е. coli или гена tetA (см. статью Busby и Ebright, 1994), эндогенный промотор локуса hly Е. coli; ii) промоторы, которые способны индуцироваться, предпочтительно промоторы, которые становятся активными после входа в клетку. К ним принадлежит промотор actA L monocytogenes (см. статью Dietrich et al., 1998) или промотор pagC S. typhimurium (см. статью Bumann, 2001).
Если плазмиды высвобождаются из микроорганизма после его лизиса в цитозоле клетки млекопитающего, последовательность активации не является специфической в отношении клетки, но специфической в отношении клетки ткани, специфической в отношении клеточного цикла или функция-специфической. Предпочтительно, когда выбирают такие последовательности активации, которые особенно активируются в макрофагах, дендритных клетки и лимфоцитах.
В следующем предпочтительном вариант осуществления предусматривают микроорганизм, соответствующий вышеприведенным определениям, в котором компонент (I) выбран из группы, состоящей из B-Raf V600E, домена киназы B-Raf V600E, B-Raf V600E KD (киназа dead), домена киназы KD B-Raf V600E (киназа dead), B-Raf KD (киназа dead), домена киназы B-Raf, домена киназы KD B-Raf (киназа dead), простата-специфического антигена (PSA), гемагглютинина НА1 (предпочтительно из вируса гриппа А (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1), гемагглютинина НА12 (предпочтительно из вируса гриппа А (A/Thailand/1(KAN-1)2004(Н5М1), гемагглютинина НА12С (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1 (KAN-1)2004(H5N1)"; компонент (II) выбран из группы, состоящей из "субъединицы В холерного токсина (СТВ, CtxB), субъединицы В термолабильного энтеротоксина Е. coli (LTB), столбнячного токсина (ТТ)"; подкомпонент (III-а) выбран из группы, состоящей из "сигнала гемолизинового транспорта HlyA Escherichia coli вместе с компонентами системы секреции Hly (нуклеотидными последовательностями, включающими HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора)"; компонент (IV) выбран из группы, состоящей из "эндогенного промотора локуса hly Е. coli", причем компонент (I) и компонент (II) связаны друг с другом, чтобы обеспечить возможность экспрессии слитого белка, кодируемого обоими компонентами, и причем слитый белок секретируется.
Проиллюстрированные выше микроорганизмы, соответствующие компонентам (I)-(IV), а также предпочтительные варианты осуществления далее называют микроорганизмами, соответствующими изобретению.
Микроорганизмы, соответствующие изобретению, преимущественно подходят для использования в противоопухолевой терапии в качестве живых вакцин в ходе получения направленности на опухоль. Именно посредством микроорганизмов, соответствующих изобретению, которые действуют как носители генетической информации, гетерологичные антигены совместно с белковыми токсинами транспортируются в область опухоли, экспрессируются как слитые белки и секретируются in situ.
Микроорганизмы, соответствующие изобретению, неожиданно и преимущественно характеризуются посредством эффективной и повышенной экспрессии и секреции транспортируемых, кодируемых и экспрессируемых слитых белков токсин-антиген, т.е. никакие цитоплазматические и/или периплазматические агрегаты не присутствуют.
Более того, путем введения микроорганизмов, соответствующих изобретению, неожиданно вызывают сильный системный клеточный ответ иммунной системы по сравнению с перорально вводимыми белковыми вакцинами, которые, напротив, индуцируют системную толерантность иммунной системы.
Наиболее заметно, что, кроме индукции системного клеточного ответа иммунной системы Th1-типа, микроорганизмы, соответствующие изобретению, вызывают активацию цитотоксических Т-клеток (CTL) CD8+ с рестрикцией МНС класса I и сильно повышают данный иммунный ответ CTL.
Кроме того, в дополнение к индукции и/или повышению уровня сильных клеточных системных Th1- и CTL-ответов иммунной системы врожденная иммунная система, например NK-клетки, NKT-клетки и/или γ-δ T-клетки, также неожиданно активируются микроорганизмами, соответствующими изобретению, синергическим образом.
При использовании холерного токсина в качестве компонента токсина, микроорганизмы, соответствующие изобретению, обладают преимуществом в том, что у человека отсутствует обычно существующий конституциональный иммунитет против токсина (в отличие от столбнячного токсина, например, вследствие противостолбнячной вакцинации в детстве). Вследствие этого предпочтительно использование холерного токсина и/или его субъединиц, в частности, CtxB.
Микроорганизмы, соответствующие изобретению, особенно подходят для перорального применения в направленной противоопухолевой (иммуно)терапии на основе живой вакцины. Вследствие этого можно улучшить соблюдение пациентами режима и схемы лечения.
Однако микроорганизмы, соответствующие изобретению, не ограничены применением только в противоопухолевой терапии. В принципе микроорганизмы, соответствующие изобретению, подходят также для лечения и/или профилактики всех данных заболеваний, для которых требуется терапия, в которой обязательна индукция системного клеточного Th1-ответа иммунной системы. Примеры данных инфекционных заболеваний включают, но без ограничения перечисленным, ВИЧ, грипп, HCV и другие вирусные болезни, Mycobacterium tuberculosis, Listeria monocytogenes и другие бактериальные заболевания.
Микроорганизмы, соответствующие изобретению, в полной мере подходят для лечения заболеваний, подобных гриппу, при которых необходима оптимальная защита посредством комбинации ответа иммунной системы слизистых и системного клеточного иммунного ответа. Кроме того, их можно было бы использовать для специфической индукции Th1-подобного иммунитета при аллергических заболеваниях, например аллергическом рините. В данном случае антиген представлял бы собой аллерген, который сливают с компонентом белкового токсина, и принцип действия соответствующей вакцины состоял бы в сдвиге иммунного ответа с Th2-преобладающего иммунного ответа в отношении аллергена при аллергических реакциях (заболеваниях) к Th1-иммунному ответу.
Предпочтительным способом введения является пероральное введение. В предпочтительном варианте осуществления штамм Salmonella, соответствующий данному изобретению, ферментируют в подходящей среде, собирают и промывают центрифугированием и затем получают и стабилизируют с использованием соответствующих субстанций и лиофилизируют. Лиофилизированной субстанцией наполняют устойчивые в желудке капсулы, содержащие количества живых клеток предпочтительно от 109 до 1010 бактерий. Капсулы перорально принимают с жидкостью.
Альтернативно лиофилизированные бактерии, как описано выше, распространяют вместе с пакетиками, содержащими буфер, который может нейтрализовать желудочную кислоту (фармацевтический набор). В предпочтительном варианте осуществления данный буфер представляет собой карбонатный буфер. Непосредственно перед применением буфер готовят с водой и принимают, сразу после этого принимают лиофилизированные бактерии, смешанные с водой.
Еще одной альтернативой является использование замороженных бактерий. В данном случае после промывания бактерии стабилизируют с помощью стабилизатора, предпочтительно сахарозы или глицерина, и затем замораживают и хранят при -80°C, предпочтительно в концентрациях от 109 до 1010 бактерий/дозу. Предпочтительно, когда данный препарат используют в фармацевтическом наборе, как описано выше, в сочетании с карбонатным буфером.
В предпочтительном варианте осуществления предусматривают фармацевтическую композицию, включающую по меньшей мере один микроорганизм, соответствующий изобретению, предпочтительно по меньшей мере один лиофилизированный микроорганизм, соответствующий изобретению, и фармацевтически приемлемый носитель, предпочтительно капсулы.
Компоненты (I)-(IV), соответствующие настоящему изобретению, вводят в микроорганизмы, соответствующие изобретению, способами, хорошо известными специалисту в области техники. Если микроорганизмы представлены бактериями, компоненты вводят в плазмиды или векторы экспрессии, и плазмиды или векторы экспрессии переносят в бактерии. Способы молекулярно-биологического клонирования и трансформации, пригодные для получения плазмид, векторов экспрессии и микроорганизмов, соответствующих изобретению, хорошо известны специалисту в области техники и представляют собой рутинную экспериментальную работу.
Другим объектом изобретения является введение лекарственного препарата, включающего микроорганизмы, соответствующие изобретению. Введение проводят местно или системно, например орально, перорально, ректально, в эпидермис, подкожно, внутримышечно, в полость тела, в орган, в опухоль или в кровоток.
Данные лекарственные препараты представляют собой, например, суспензии микроорганизмов, соответствующих изобретению, в растворах, известных фармацевтам, подходящих для инъекций.
В частном варианте осуществления, предметом настоящего изобретения является пероральное или ректальное введение лекарственного препарата, соответствующего изобретению, для лечения и/или профилактики заболеваний. Введение проводят однократно или несколько раз. При каждом введении вводят приблизительно 10-1011 микроорганизмов, соответствующих изобретению. Если введение данного количества микроорганизмов, соответствующих изобретению, не вызывает достаточной иммунной реакции, количество, предназначенное для инъекции, увеличивают.
После введения микроорганизмов, соответствующих изобретению, толерантность в отношении клетки, презентирующей компонент (I), например, опухолевой клетке или клетке ткани, из которой происходит опухоль, нарушается и запускается сильный системный иммунный ответ, направленный на опухоль и/или клетки ее ткани. В зависимости от выбора компонента (I) данная клеточная иммунная реакция направлена либо исключительно в отношении опухоли, либо, кроме того, в отношении опухолевых клеток, включающих клетки ткани, из которой происходят опухолевые клетки.
В другом аспекте задачей настоящего изобретения является получение лекарственного препарата, включающего по меньшей мере один микроорганизм, соответствующий изобретению, включающий проиллюстрированные выше генетические компоненты (I) - (IV) или по меньшей мере одну фармацевтическую композицию, как определено в данном контексте.
В предпочтительном варианте осуществления микроорганизмы, соответствующие изобретению, могут быть использованы для получения лекарственного препарата для лечения и/или профилактики физиологических и/или патофизиологических состояний, выбранных из группы, состоящей из "неконтролируемого деления клеток, злокачественных опухолей, доброкачественных опухолей, солидных опухолей, сарком, карцином, гиперпролиферативных нарушений, карциноидов, сарком Эвинга, сарком Капоши, опухолей головного мозга, опухолей, происходящих из головного мозга, и/или нервной системы, и/или мозговых оболочек, глиом, нейробластом, рака желудка, рака почки, карциномы почечных клеток, рака простаты, карцином простаты, опухолей соединительных тканей, сарком мягких тканей, опухолей поджелудочной железы, опухолей печени, опухолей головы, опухолей шеи, рака пищевода, рака щитовидной железы, остеосарком, ретинобластом, тимомы, рака яичка, рака легкого, бронхиальных карцином, рака молочной железы, карцином молочной железы, рака кишки, колоректальных опухолей, карцином толстой кишки, карцином прямой кишки, гинекологических опухолей, опухолей яичника/овариальных опухолей, рака матки, рака шейки матки, карцином шейки матки, рака тела матки, карцином тела, эндометриальных карцином, рака мочевого пузыря, рака полости, рака кожи, базалиом, спиналиом, меланом, внутриглазных меланом, лейкоза, хронического лейкоза, острого лейкоза, лимфом, инфекции, вирусной или бактериальной инфекции, гриппа, хронического воспаления, отторжения органа и/или аутоиммунных заболеваний".
Бактериальные инфекции включают, но без ограничения перечисленным, сибирскую язву, бактериальный менингит, ботулизм, бруцеллез, камплобактериоз, болезнь кошачьих царапин, холеру, дифтерию, эпидемический тиф, импетиго, легиогеллез, лепру (болезнь Гансена), лептоспироз, листериоз, лаймскую болезнь, мелиоидоз, инфекцию MRSA (метициллин-резистентных стафилококков), нокардиоз, коклюш (судорожный кашель), чуму, пневмококковую пневмонию, пситтакоз, Ку-лихорадку, пятнистую лихорадку Скалистых гор (RMSF), сальмонеллез, скарлатину, шигеллез, сифилис, столбняк, трахому, туберкулез, туляремию, брюшной тиф, тиф, инфекции мочевых путей, вызываемые бактериями сердечные заболевания.
Вирусные инфекции включают, но без ограничения перечисленным, СПИД, связанный со СПИДом комплекс (ARC), ветрянку (ветряную оспу), простуду, цитомегаловирусную инфекцию, колорадскую клещевую лихорадку, лихорадку Денге, геморрагическую лихорадку Эбола, ящур, гепатит, простой герпес, опоясывающий лишай, HPV, инфлюэнцу (грипп), лихорадку Ласса, корь, марбургскую геморрагическую лихорадку, инфекционный мононуклеоз, паротит, полиомиелит, прогрессирующую многоочаговую лейкоэнцефалопатию, бешенство, краснуху, САРС (атипичную пневмонию), оспу (натуральную оспу), вирусный энцефалит, вирусный гастроэнтерит, вирусный менингит, вирусную пневмонию, лихорадку Западного Нила, желтую лихорадку.
Хронические воспаления или хронические воспалительные заболевания включают, но без ограничения перечисленным, хронический холецистит, бронхектаз, ревматоидный артрит, тиреоидит Хашимото, воспалительную болезнь кишки (язвенный колит и болезнь Крона), силикоз и другой пневмокониоз.
Аутоиммунные заболевания включают, но без ограничения перечисленным, системные синдромы, такие как SLE, синдром Шегрена, склеродерму, ревматоидный артрит и полимиозит, а также местные синдромы, такие как IDDM (инсулинозависимый сахарный диабет), тиреоидит Хашимото, болезнь Аддисона, обыкновенная пузырчатка, псориаз, атопический дерматит, атопический синдром, астма, аутоиммунная гемолитическая анемия, рассеянный склероз.
Соответствующие лекарственные препараты, включающие по меньшей мере один микроорганизм, как описано в данном контексте, или по меньшей мере одну фармацевтическую композицию, как определено в данном контексте согласно всем описанным в данном контексте вариантам осуществления, предназначенным для применения для лечения и/или профилактики физиологических и/или патофизиологических состояний, как описано и определено в данном контексте, также включены в настоящее изобретение.
В другом аспекте задачей настоящего изобретения является получение плазмиды или вектора экспрессии, включающих компоненты (I)-(IV), как проиллюстрировано в данном контексте. Предпочтительным является микроорганизм, соответствующий изобретению, который несет по меньшей мере одну плазмиду или вектор экспрессии, включающие компоненты (I)-(IV), как проиллюстрировано в данном контексте.
В другом аспекте задачей настоящего изобретения является осуществление способа получения микроорганизма, соответствующего изобретению, причем получают плазмиду или вектор экспрессии, как проиллюстрировано в данном контексте, и трансформируют микроорганизм данной плазмидой или вектором экспрессии.
В другом аспекте задачей настоящего изобретения является способ получения фармацевтического набора, включающего по меньшей мере один микроорганизм, соответствующий изобретению, или фармацевтическую композицию, как описано выше, либо лекарственный препарат, как описано выше, и фармакологически приемлемый буфер, предпочтительно карбонатный буфер.
Краткое описание чертежей
На фигуре 1 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') сигнала секреции гемолизина A (hlyA) E. coli. Сайт Nsil подчеркнут.
На фигуре 2 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') гемолизина В (NyB) E. coli транспортной системы типа 1 гемолизина E. coli.
На фигуре 3 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') гемолизина D (MyD) E. coli транспортной системы типа 1 гемолизина E. coli.
На фигуре 4 представлена нуклеотидная последовательность (5'-3') человеческого простата-специфического антигена (PSA) без сигнального пептида, регистрационный номер М26663 (мРНК простата-специфического антигена Homo, полные cds), участок 100-807 (соответствующий пептид: АА 26-261).
На фигуре 5 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') субъединицы В холерного токсина (CtxB) без сигнального пептида, охватывающий участок 204-494, регистрационный номер K01170 (гены toxA и toxB Vibrio cholerae для субъединиц А2 холерного энтеротоксина А2 (γ).
На фигуре 6 представлена нуклеотидная последовательность (5'-3') домена киназы B-Raf (B-Raf KD) человеческого белка B-raf (BRAF), регистрационный номер М95712 (мРНК белка B-raf Homo sapiens (BRAF), полные cds), участок 1403-2359 без участка 1448-1477 (соответствующий пептид: АА 448-766 без АА 463-472), включающий мутацию V600E.
На фигуре 7 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') эпитопа человеческого B-Raf V600E с рестрикцией HLA B27.
На фигуре 8 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') генетически слитой конструкции CtxB - PSA - HlyA.
На фигуре 9 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') генетически слитой конструкции Ctx - B-Raf V600E - HlyA.
На фигуре 10 представлена нуклеотидная последовательность (5'>3') генетически слитой конструкции CtxB - домен киназы KD B-Raf V600E - HlyA.
На фигуре 11 представлена функциональная экспрессия и секреция слитых белков PSA-CtxB в различных видах бактерий, рекомбинантных по pMKhly-PSA-CtxB.
На фигуре 12 представлены спленоциты, секретирующие ИФН-γ, в качестве меры ответов Т-клеток CD8+ и врожденной иммунной системы (NK-клеток) у мышей, иммунизированных различными живыми вакцинными носителями.
На фигуре 13 представлено уменьшение объема опухоли в ответ на иммунизацию различными живыми вакцинными носителями.
На фигуре 14 представлены спленоциты, секретирующие ИФН-γ, в качестве меры ответов Т-клеток CD8+ и врожденной иммунной системы (NK-клеток) у мышей, иммунизированных различными живыми вакцинами, несущими различные иммунологические адъюванты со слитыми конструкциями CtxB-OVA.
На фигуре 15 представлена эффективная экспрессия и функциональная секреция слитых белков гемагглютинин Н1 куриного гриппа - CtxB в ветеринарном вакцинном штамме, включающем полную последовательность гемагглютинина H5N1 (НА1+НА2, представлено, НА12) без трансмембранного участка (НА12с). Живая аттенюированная Salmonella enterica, серовар Ty-phimurium vacT (gyrA D87G) и живая аттенюированная Salmonella enterica серовар Enteritidis vacE (штамм Sm24/Rif12/Ssq), обе фирмы Lohmann Animal Health GMBH & CO KG.
На фигуре 16 представлена нуклеотидная последовательность, кодирующая слитый белок CtxB-HA12c-HlyA.
На фигуре 17 представлена экспрессия и секреция слитого белка с использованием вектора pMBKDC, электропорированного в штамм Salmonella typhi Ty21a и другие бактериальные штаммы:
A) ряды А1-А3: Анализ супернатанта согласно ТР StMoBKDC с использованием антитела к B-Raf для детекции. Ряд А1: S. typhi Ty21a pMoBKDC, А2: S. typhi Ty21a, A3: S. typhimurium aroA. Слитый белок BRaf-V600E KD-CtxB отмечен вверху стрелкой и имеет предполагаемый размер приблизительно 48 кД. Белковый маркер: предварительно окрашенная белковая лестница Bench-Mark, No 10748-010.
B) анализ, аналогичный А с использованием недавно полученного антитела к HlyA в качестве антитела для детекции. Ряды 1 и 2: конструкции StMoPC, ряд 3: S. typhi Ty21a MoBKDC; ряд 4: Е. coli MoBKDC, ряд 5: S. typhi Ty21a, ряд 6: S. typhimurium aroA. Белковый маркер: предварительно окрашенная белковая лестница Bench-Mark, No 10748-010 Invitrogen BenchMark, партия 1315592.
На фигуре 18 представлена полная нуклеотидная последовательность (5'>3') ненагруженного вектора pMKhlyi.
Содержание всех приведенных ссылок и патентов таким образом включено в данное описание в виде ссылки во всей их полноте. Изобретение более подробно раскрывается с помощью следующих примеров, однако без ограничения ими.
Осуществление изобретения
Примеры
Пример 1: Конструирование, экспрессия и секреция слитых белков PSA-CtxB в различных штаммах бактериальных носителей
Для доказательства осуществимости и демонстрации эффективности системы секреции гемолизина типа I E. coli секретировать слитые белки опухолевых антигенов, в данном случае простата-специфического антигена (PSA), и компонентов белковых токсинов, в данном случае CtxB, в качестве адъюванта конструируют слитый белок PSA-CtxB, как описано в данном контексте. Экспрессию и секрецию исследуют на различных грамотрицательных бактериальных штаммах, которые потенциально эффективны в качестве живых вакцинных штаммов в противоопухолевой терапии. Молекулярно-биологическое клонирование основано на плазмиде/векторе экспрессии pMOhlyl, которые описаны ранее (см. статьи Gentschev et al., 2005; Gentschev et al., 1996, WO 03/072789).
1A Конструирование устойчивого к к анамицину производного вектора экспрессии pMOhlyl
Замену кассеты устойчивости кампициллину pMOhlyl осуществляют, как описано в статье Datsenko и Wanner, 2000.
Вкратце, смысловой праймер Р1 (5'-GAGTATTCAACATTTCCGTGTCGC CCTTATTCCCTTTTTTGGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC-S') и антисмысловой праймер Р2 (5'-GCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCATATGAATATCCTCCTTA-S') и плазмиду pKD4 в качестве матрицы используют для ПЦР с целью получения фрагмента, несущего ген устойчивости к канацицину (KanR), фланкированный участками, гомологичными гену устойчивости к ампициллину (неподчеркнутые). Штамм Е. coli BW251 14, несущий плазмиду pKD46 и направленную плазмиду pMOhlyl, выращивают при 37°C с среде LB (Difco) с добавлением 0,2% L-(+)-арабинозы в течение 3-4 часов перед трансформацией ПЦР-фрагментом.
После трансформации бактериальные клетки распределяют на пластинках агара LB, содержащего 25 мкг/мл канамицина, и инкубируют при 37°C в течение ночи. На следующий день клоны KanR снимают и инкубируют в течение дополнительных 48 ч в среде LB, содержащей 50 мкг/мл канамицина, чтобы избавиться от всех плазмид, обусловливающих устойчивость к ампициллину.
Наконец, селектируют клоны с KanR и чувствительным к ампициллину фенотипом. Замену гена ApR кассетой KanR подтверждают с помощью ПЦР и секвенирования. Полученную в результате плазмиду называют pMKhlyl.
1В Клонирование плазмиды pMKhly-PSA
Смысловой праймер PSA-Nsi1 (5'-GATTGGTGATGCATCCCTCAT-S'; рестрикционные сайты Nsil подчеркнуты) и антисмысловой праймер PSA-Nsi2 (5'-GGTGCTCATGCATTGGCCACG-3') используют для амплификации фрагмента ДНК, кодирующуго PSA, с помощью ПЦР. ПЦР проводят в циклере Thermal Cycler 60 (Biometra, Göttingen, Germany) в течение 30 циклов при 94°C в течение 1 мин, 54°C в течение 1 мин и 72°C в течение 2 мин.
После разрезания рестрикционным ферментом Nsil фрагмент ДНК, несущий ген psa вводят в единственный сайт Nsil экспортирующего вектора pMKhly1. Полученную в результате плазмиду pMKhly-PSA выделяют из Е. coli DH5α (Invitrogene, Germany), анализируют с использованием рестрикционного анализа и секвенируют.
1C Клонирование плазмиды pMKhly-PSA/CtxB
Смысловой праймер Ptac-Sall (5'-AAAAAAGTCGACGGCTGTGCAGGTCGTAAATCACTGC-3') и антисмысловой праймер Ptac-NotI (5'-AAAAAAGCGGCCGCGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCC-3') используют для амплификации с помощью ПЦР фрагмента ДНК из 201 пары оснований, кодирующего промотор Ptac из плазмиды pGEX-6p-1 (Amersham Bioscience, Germany). ПЦР проводят в термоциклере T3 (Biometra, Germany): в течение 30 циклов при 95°C в течение 30 сек, 55°C в течение 30 сек и 72°C в течение 90 сек. Смысловой праймер Rbs-Notl-прямой (5'-AAAAAAGCGGCCGCTAAGGATGAATTATGATTAAATTAAAATTTGG-S') и антисмысловой праймер ctb-Sall обратный (5'-TTTATAGTCGACTTAATTTGCCATACTAATTGCGGCAATCGC-S') используют для амплификации с помощью ПЦР фрагмента ДНК из 413 пар оснований, кодирующего сайт связывания рибосом, и полной кодирующей CtxB из V. cholerae El tor. ПЦР проводят в термоциклере ТЗ (Biometra, Germany): стадия 1-30 циклов при 95°C в течение 30 сек, 50°C в течение 30 сек и 72°C в течение 2 мин. После очистки с помощью набора Qiaquick PCR Purification Kit (Qiagen, Germany) и разрезания обоих фрагментов рестрикционным ферментом NotI два фрагмента лигируют, получая в результате фрагмент из 594 пар оснований Ptac-cfxB. Полученный в результате фрагмент также очищают и после разрезания рестрикционным ферментом Sail фрагмент Ptac-cfxB вводят в единственный сайт Sail экспортирующего вектора pMKhly-PSA. Полученную в результате плазмиду pMKhly-PSA/CtxB выделяют из Е. coli DH5α (Invitrogene, Germany), анализируют и секвенируют.
1D Клонирование слитой конструкции PSA-CtxB-HlyAs
Смысловой праймер 5'ctxB Nsil (5'-GCATATGCACATGCATCACCTCAAAATATTACTGAT-3') и антисмысловой праймер 3' ctxB Srfl Nsil (5'-GGCTTTTTTATATCTTATGCATGCCCGGGCATTGCGGCAATCGC-3') (сайт Srfl выделен жирным шрифтом) используют для амплификации посредством ПЦР фрагмента ДНК из ~300 пар оснований, представляющего ген ctxB из V. cholerae El tor. После очистки с помощью набора Qiaquick PCR Purification Kit (Qiagen, Germany) и разрезания рестрикционным ферментом Nsil фрагмент ДНК, несущий целый ген ctxB без N-концевой сигнальной последовательности вводят в единственный сайт Nsil экспортирующего вектора pMKhly1. Полученную в результате плазмиду pMKhly-CtxB выделяют из Е. coli DH5α (Life Technologies), анализируют и секвенируют. Человеческий ген psa амплифицируют из плазмиды pCDNA3PSA с помощью ПЦР с использованием праймеров 5-PSA-Blunt (5'-GTGGGAGGCTGGGAGTGC-3') и 3-PSA-Blunt (5'-GGGGTTGGCCACGATGGT-S'). ПЦР проводят в циклере Thermal Cycler 60 (Biometra, Göttingen, Germany) в течение 30 циклов при 94°C в течение 1 мин, 56°C в течение 1 мин и 72°C в течение 2 мин. Затем продукт ДНК 0,7 т.п.н. клонируют в сайт Srfl pMKhly-CtxB. Полученную в результате плазмиду pMKhly-CtxB-PSA проверяют с помощью рестрикционного анализа и секвенирования.
1Е Экспрессия и секреция слитых белков в различных бактериальных штаммах
Используя стандартные способы электропорации плазмидой pMKhly-CtxB-PSA трансформируют электрокомпетентные бактериальные штаммы. Устойчивые к канамицину отдельные колонии снимают и выращивают в среде BHI (Beckton Dickinson, USA: телячий головной мозг, экстракт из 200 г, 6,0 г/л; бычье сердце, экстракт из 250 г, 9,8 г/л; протеозопептон 10,0 г/л; хлорид натрия 5,0 г/л; декстроза 2,0 г/л; динатрийфосфат 2,5 г/л) до густоты 1×109 клеток/мл. После выращивания 20 мл культуры центрифугируют в течение 30 мин при 4000 об/мин (3000 g) в центрифуге Heraeus при 4°C. 18 мл супернатанта переносят в свежую пробирку. Затем добавляют 1,8 мл ТСА (трихлоруксусной кислоты, Applichem, Germany), жидкость перемешивают и инкубируют в течение по меньшей мере 1 часа на льду. После инкубирования суспензию центрифугируют в течение 30 мин при 4000 об/мин (3000 g) в центрифуге Heraeus при 4°C. Супернатант сливают с осадка и осадок промывают 1 мл ацетона р.а. (чистого для анализа) (Applichem, Germany). Осадок центрифугируют в течение 10 минут при 4000 об/мин (3000 g) в центрифуге Heraeus при 4°C. Осадок сушат на воздухе и помещают в 150 мкл 5х буфера Леммли (70 мМ Трис-HCl, рН 6,8, 40% (об./об.) глицерина, 3% (об./об.) додецил сульфата натрия, 5% (об./об.) 2-меркаптоэтанола и 0,05% (масс./об.) бромфенолового синего) с добавлением или без добавления β-меркаптоэтанола (см. статью Laemmli, 1970). Для каждой дорожки при SDS PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия) используют 20 мкл раствора. Разделенные белки электрофоретически переносят (вестерн-блот) на нитроцеллюлозную мембрану Hybond ECL (Amersham-Pharmacia, Little Chalfont, UK) и блокируют в течение ночи PBS (хлорид калия 0,20 г/л, дигидрофосфат калия 0,20 г/л, хлорид натрия 8,00 г/л, дигидрофосфат динатрий безводный 1,15 г/л), содержащим 1% BSA (бычий сывороточный альбумин). Мембрану промывают в PBS-Твин 0,05%, инкубируют с поликлональным кроличьим антителом к PSA (1:750, DAKO, Denmark), антителом k CtxB (1:1000, Zytomed, Berlin, Germany) или антителом к HlyAs (см. статью Gentschev et al., 1996)) и затем инкубируют с HRP (пероксидза хрена)-связанным IgG к кролику (1/2000; Dianova, Hamburg, Germany) в течение 1 часа. Вестерн-блот проявляют с помощью набора с усиленной флуоресценцией (GE Healthcare Life Science, Germany).
На фигуре 11 представлена функциональная экспрессия и секреция слитых белков PSA-CtxB в ряде бактериальных штаммов, включая Escherichia coli spp., Salmonella dublin, Citrobacter spp, Salmonella typhi Ty21a, Salmonella typhimurium spp, Erwinia spp и Shigella flexneri spp.
Штамм Salmonella typhi Ty21a, экспрессирующий и секретирующий слитый белок PSA-CtxB депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под номером DSM 19244.
Пример 2: Иммунный ответ и защита от прививания опухолевых клеток у мышей, иммунизированных штаммами Salmonella, секретирующими слитые белки опухолевых антигенов и CtxB или CtxB в виде монокомпонента
Посредством следующих экспериментов повышенная защитная эффективность секретируемых слитых белков опухолевых антигенов и белковых токсинов продемонстрирована на модели опухолей у животных. Для данной модели штамм Salmonella typhimurium aroA (SL7207) pMKhly-CtxB-PSA, экспрессирующий и секретирующий слитый белок CtxB-PSA сравнивают с другими контрольными штаммами.
2А Способы иммунизации
Мышей DBA/2 иммунизируют три раза с интервалом 3 недели. Для иммунизации бактериями животных предварительно лечат введением 50 мкл 7% NaHCO3 внутрижелудочно с целью повышения внутрижелудочного рН. Через 5-10 минут после предварительного лечение вводят 5×108 живых нечувствительных к канамицину бактерий в объеме 100 мкл PBS внутрижелудочно. В качестве контроля мышей иммунизируют внутримышечно голой (депротеинизированной) плазмидной ДНК, кодирующей PSA (рсДНК-PSA), как описано в статье Fensterle et al., 2005.
2В Т-клеточные ответы
Через семь дней после последней иммунизации спленоциты иммунизированных мышей получают, как опубликовано ранее (см. статью Fensterle et al., 1999), пропусканием селезенки через сетку с последующим лизисом эритроцитов. Анализ ELISPOT для детекции PSA-специфических Т-клеток CD8+ проводят согласно способу, опубликованному в статье Fensterle et al., 1999. Вкратце, для анализа ex vivo PSA-специфических Т-клеток CD8+ 96-луночные нитроцеллюлозные планшеты (Millititer HA; Millipore, Bedford, MA) покрывают 5 мкг/мл моноклонального антитела (mAb) к мышиному ИФН-γ R4 (PharMingen) в 100 мкл карбонатного буфера (см. статью Fensterle et al., 1999), рН 9,6. После инкубирования в течение ночи при 4°C и блокирования 1% BSA в PBS добавляют 1×105 спленоцитов, полученных от вакцинированных мышей в 100 мкл RP10 (см. статью Fensterle et al., 1999)/лунку.
Для анализа ответа Т-клеток CD8+ используют экспрессирующий PSA клон клеток Р815 PPSA 24; вкратце, данный клон экспрессирует PSA полной длины посредством промотора CMV, кодируемый плазмидой pCDNA3 (см. статью Fensterle et al., 2005). После инкубирования в течение 20-22 ч при 37°C, 5% CO2 в присутствии 30 ед./мл ИЛ-2 планшеты промывают и инкубируют в течение дополнительных 2 ч со 100 мкл биотинилированного mAb XMB1.2 к мышиному ИФН-γ (0,25 мкг/мл, PharMingen). Планшеты промывают и инкубируют в течение 1 ч при 37°C в присутствии 100 мкл разведения 1/20000 связанного с щелочной фосфатазой стрептавидина (PharMingen). Пятна визуализируют добавлением 50 мкл готового к применению субстрата BCIP/NBT (Sigma, St. Louis, МО), растворенного в воде. Пятна подсчитывают под препаровальным микроскопом при 3-кратном увеличении.
Частоту пептид-специфических Т-клеток (CTL) выражают как число ИФН-γ-секретирующих клеток/105 спленоцитов. Для анализа ответов Т-клеток после повторной стимуляции 2,5×107 спленоцитов повторно стимулируют 2×106 облученных экспрессирующих PSA клеток Р815 (см. статью Fensterle et al., 2005) в среде RP10 (см. статью Fensterle et al., 1999) в присутствии 60 ед./мл рекомбинантного ИЛ-2 в течение 5 дней. Анализ ELISPOT проводят, как описано выше, используя различные количества повторно стимулированных клеток (105, 3×104, 104 или 3×103/лунку), смешанных с 4×105 фидерных клеток (= свежеполученных спленоцитов от непримированных (наивных) мышей DBA/2) и 105 клеток PPSA24.
Индукция клеточного иммунного ответа, особенно цитотоксических Т-клеток CD8+, играет важную роль в плане эффективности противоопухолевой терапии (см. статьи Boon et al., 2006; Rosenberg, 2001). Вследствие этого сначала тестируют эффективность рекомбинантного бактериального штамма Salmonella typhimurium (SL7207), несущего вектор экспрессии pMKhly-CtxB-PSA, в индукции PSA-специфического иммунного ответа Т-клеток CD8+.
Для этой цели 64 самок мышей DBA-2 в возрасте 10-14 недель иммунизируют перорально рекомбинантным SL7207/pMKhly-CtxB (n=10), SL7207/pMKhly-CtxB-PSA (n=10), SL7207/pMKhly-PSA (n=10), SL7207/pMKhly-PSA/CxtB (n=10), SL7207/pMKhly1 (n=7) и голой рсДНК3-PSA (n=10) в качестве положительного контроля, как описано в данном контексте.
На фигуре 12 представлены данные ELISPOT, показывающие, что иммунизированные ДНК мыши демонстрируют выраженные ответы Т-клеток CD8+. После повторной стимуляции явные иммунные ответы определяют у животных, вакцинированных Salmonella, секретирующей белок PSA, слитый с CtxB, но не штаммами, секретирующими PSA в виде монокомпонента или раздельно PSA и CtxB. Интересно, что животные, вакцинированные Salmonella, секретирующей токсин CtxB в виде монокомпонента, также проявляют существенные иммунные ответы после повторной стимуляции. Данные ответы наиболее вероятно обусловлены NK-клетками или другими клетками врожденной иммунной системы, которая неспецифически распознает клеточную линию-мишень. Следовательно, на основании данных по секретируемому CtxB в виде монокомпонента можно заключить, что иммунный ответ, наблюдаемый для секретируемого слитого белка CtxB-PSA (секретирующие ИФН-γ спленоциты) состоит из ответа Т-клеток CD8+, а также выраженного ответа врожденной иммунной системы (наиболее вероятно, NK-клеток).
2С Защита от прививания опухолевых клеток
Для анализа защитной способности иммунизации 6-7 мышей/группу иммунизируют согласно вышеописанной схеме. Через три недели после третьей иммунизации мышам прививают PPSA 24 (см. выше) путем подкожной инъекции 1×106 клеток с каждого бока выбритой кожи живота. Мышей мониторируют в течение 14 дней на предмет появления опухолей и оценивают объем опухолей путем измерения самого большого (а) и самого маленького (b) диаметра опухоли. Объем опухоли рассчитывают как тело, образуемое вращением эллипса, используя следующую формулу:
Анализируют значимость результатов посредством одностороннего ANOVA и повторного теста множественного сравнения Даннетта с использованием пакета программ Graph Pad Prism. Повторный тест проводят только в случае, когда ANOVA показывает значимость результатов.
На фигуре 13 представляют результаты как среднее ±SD (стандартная ошибка). В день 6, 9, 12 и 14 наблюдают существенные защитные эффекты. Как ожидают, вакцинация голой ДНК включает в качестве контроля мышей, полностью защищенных от роста опухолей. Однако вакцинация голой ДНК показывает самое большее среднюю эффективность у человека. Что касается бактериальных конструкций, то вакцинный штамм SL7207/pMKhly-CtxB-PSA (экспрессирующий и секретирующий слитый белок CtxB-PSA) оказывается наиболее эффективным. Он существенно уменьшает объем опухоли в 9, 12 и 14 после прививания опухоли. Известно также, что штамм SL7207/pMKhly-CtxB уменьшает рост опухоли на величины, сравнимые с SL7207/pMKhly-CtxB-PSA, в день 14. Хотя недостоверно, данный задерживающий эффект хорошо согласуется с клеточным ответом, который измеряют с помощью анализа ELISPOT. Более того, штамм SL7207/pMKhly-PSA также дает значительную защиту в день 14, что показывает, что данный штамм также индуцирует Т-клеточный ответ, который ниже порога определения. Напротив, штамм SL7207/pMKhly-PSA/CxtB не индуцирует соответствующий эффект и остается в том же диапазоне, что SL7207/pMKhly1 как монокомпонент.
Пример 3: Экспрессия и секреция слитого белка онкоген-токсин в S. typhi Ty21a
Аналогично примеру 1 используют другой опухолевый антиген, домен киназы онкогена B-Raf V600E с делецией 10 аа (аминокислот) в домене киназы (домен киназы BRaf V600E киназа dead (KD) или, сокращенно, BRaf* KD, более коротко BKD). Слитый белок данного онкогена и компонентов белкового токсина, в данном случае CtxB, в качестве адъюванта, конструируют, как описано в данном контексте. Экспрессию и секрецию демонстрируют на человеческом вакцинном штамме S. typhi Ty21 а. Молекулярное клонирование основано на использовании плазмиды/вектора экспрессии pMOhlyl, который описан ранее (см. статьи Gentschevet al., 2005; Gentschev et al., 1996), и способ клонирования аналогичен описанному в примере 1 данной заявки. Полученный в результате вектор называют pMBKDC. Последовательность слитого белка приведена на фигуре 10.
На фигуре 17 показана экспрессия и секреция слитого белка с использованием вектора pMBKDC, электропорированного в штамм Salmonella typhi Ty21a и другие бактериальные штаммы.
Штамм Salmonella typhi Ty21a, экспрессирующий и секретирующий слитый белок BKD-CtxB, депонирован в Немецкой коллекции Микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под номером DSM 19245.
Пример 4: Сравнение слитой конструкции OVA-CtxB с другими генетически кодируемыми иммунологическими адъювантами
Для сравнения иммунологической эффективности слитых белков токсин-антиген, секретируемых живыми вакцинами, конструируют слитый белок, включающий широко используемый для иммунологических исследований антиген, куриный овальбумин (OVA), и CtxB.
Смысловой праймер Nsil-OVA-прямой 5' - CAT GTA TGC ATT AGC CAT GGT ATA CCT GG-3' и антисмысловой праймер Nsil-OVA-обратный 5'-TTT TTT ATG CAT AAG GG AAA CAC CAC ATC TGC C-3' используют для амплификации посредством ПЦР фрагмента ДНК из 1033 пар оснований, представляющий собой ген ova (NM205152). После очистки с помощью набора QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, Germany) и разрезания рестрикционным ферментом Nsil фрагмент ДНК, несущий целый ген ova без N-концевой сигнальной последовательности, вводят в единственный сайт Nsil экспортирующего вектора pMKhlyl. Полученную в результате плазмиду pMKhly-Ova выделяют из Е. coli DH5α (Life Technologies), анализируют и секвенируют.
Смысловой праймер 5'cfxB Nsil (5'-GCATATGCAATGCATCACCTCAAAATATTACTGAT-3') и антисмысловой праймер 3' ctxB Srfl Nsil (5'-GGCTTTTTTATATCTTATGCATGCCC GGGCATTGCGGCAATCGC-3') (сайт Srfl выделен жирным шрифтом) используют для амплификации с помощью ПЦР фрагмента ДНК из ~300 пар оснований, представляющий собой ген ctxB из V. cholerae El tor. После очистки с помощью набора QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, Germany) и разрезания рестрикционным ферментом Nsil фрагмент ДНК, несущий целый ген ctxB без N-концевой сигнальной последовательности, вводят в единственный сайт Nsil экспортирующего вектора pMKhly1. Полученную в результате плазмиду pMKhly-CtxB выделяют из Е. coli DH5α (Life Technologies), анализируют и секвенируют. Человеческий ген ova амплифицируют из плазмиды pCl- OVA с помощью ПЦР с использованием праймеров 5-OVA-Sfrl GCC АТС ATG ТСА GCT СТА и 3-OVA-Sfrl AGG GGA ААС АСА ТСТ GCC. ПЦР проводят в циклере Thermal Cycler 60 (Biometra, Göttingen, Germany) в течение 30 циклов 1 мин при 94°C, 1 мин при 49°C и 2 мин 30 сек при 72°C. Затем продукт ДНК 1,1 т.п.н. клонируют в сайт Srfl pMKhly-CtxB. Полученную в результате плазмиду pMKhly-CtxB-OVA проверяют с помощью рестрикционного анализа и секвенирования.
Способность данного слитого белка вызывать иммунные ответы Th1 сравнивают со способностью кодируемого вектором pMKhly OVA в виде монокомпонента в комбинации с плазмидами, доставляющими ДНК (кодирующими белки под контролем эукариотического промотора), кодирующими интерфероны (ИФН-γ), интерлейкины (ИЛ-12) и хемокины (IP-10).
Способы иммунизации и анализ ELISPOT осуществляют, как описано выше. Вкратце, мышей C57BL/6 иммунизируют перорально три раза различными штаммами. Через 7 дней после конечной иммунизации спленоциты удаляют, повторно стимулируют в течение 5 дней и исследуют с помощью анализа ELISPOT. Для повторной стимуляции спленоцитов используют клетки, обработанные в импульсном режиме пептидом SIINFEKL (буквы означают аминокислоты), эпитопом овальбумина Н-2b с рестрикцией МНС-1.
На фигуре 14 показана повышенная эффективность слитого белка, включающего куриный овальбумин (OVA) и CtxB, в индукции OVA-специфических ответов Т-клеток CD8+ и потенциальных ответов врожденной иммунной системы по сравнению с конструкциями, совместно доставляющими ИФН-γ или IP-10. Он проявляет эффективность, близкую к эффективности штамма с конструкцией совместной доставки ИЛ-12.
Пример 5: Экспрессия и секреция вирусных антигенов
Пригодность микроорганизмов, соответствующих изобретению, для экспрессии и секреции какого-либо (неопухолевого) антигена демонстрируют посредством экспрессии белка гемагглютинина H1 вируса куриного гриппа H5N1, слитого с CtxB в ветеринарном вакцинном штамме Salmonella typhimurium VacT.
Смысловой праймер 5'-HA-G: 5'-ATC TGT CAA ATG GAG AAA-3' и антисмысловой праймер 3-НА12С: 5'-TAC TCC ACT TAT TTC CTC TCT-3' используют в ПЦР, амплифицируя фрагмент ДНК, кодирующий Н5 без С-концевого мембранного домена (Н12С). Затем продукт ПЦР клонируют в сайт Srfl pMKhly-CtxB. Полученную в результате плазмиду pMKhly-CtxB-H12C исследуют посредством рестрикционного анализа и секвенирования. Штамм S. typhimurium VacT/pMKhly-CtxB-H12C эффективно экспрессирует и секретирует гибридный белок Н5, как показано с помощью иммуноблоттинга с поликлональными антителами, образующимися к CtxB и HlyA (см. фиг.2). Количество секретируемого Н5 составляет 2-3 мкг белка/мл супернатанта в условиях эксперимента.
Бактерии выращивают в среде ВНI до густоты 1×109 клеток/мл. 20 мл культуры центрифугируют в течение 30 мин при 4000 об/мин (3000 g) и 4°C в центрифуге Hereaus. 18 мл супернатанта переносят в свежую пробирку. Затем добавляют 1,8 мл ТСА (трихлоруксусной кислоты, Applichem, Germany), жидкость перемешивают и инкубируют на льду в течение по меньшей мере 1 часа. После инкубирования суспензию центрифугируют в течение 30 мин при 4000 об/мин (3000 g) в центрифуге Heraeus при 4°C. Супернатант сливают с осадка и осадок промывают 1 мл ацетона р.а. (чистого для анализа) (Applichem, Germany); осадок центрифугируют в течение 10 минут при 4000 об/мин (3000 g) при 4°C в центрифуге Heraeus. Осадок сушат на воздухе и помещают в 150 мкл 5х буфера Леммли. Для каждой дорожки при SDS PAGE используют 20 мкл раствора. Разделенные белки электрофоретически переносят (вестерн-блот) на нитроцеллюлозную мембрану Hybond ECL (Amersham-Pharmacia, Little Chalfont, UK) и блокируют в течение ночи PBS, содержащим 1% BSA. Мембрану промывают в РВS-Твин 0,05%, инкубируют с поликлональным кроличьим антителом к CtxB (1:1000, Zytomed, Berlin, Germany) или антителом к HlyAs (см. статью Gentschev et al., 1996)) и затем инкубируют с HRP-связанным IgG к кролику (1/2000; Dianova, Hamburg, Germany) в течение 1 часа. Вестерн-блот проводят с использованием набора с усиленной флуоресценцией (GE Healthcare Life Science, Germany).
На фигуре 15 представлена эффективная экспрессия и функциональная секреция слитого белка HA12C-CtxB в ветеринарном вакцинном штамме Salmonella typhimurium VacT.
Пример 6: Экспрессия и секреция слитых белков токсинных адъювантов и опухолевых антигенов посредством систем секреции типа III
Некоторые грамотрицательные бактерии несут системы секреции типа III, которые можно использовать для секреции антигенов. Как правило, данные системы можно использовать для непосредственной инъекции гетерологичных антигенов в клетки. В данном примере токсинный компонент Yersinia, который служит в качестве сигнала секреции (YopE), генетически слит с фрагментом термолабильной субъединицы энтеротоксина В (LT-B), служащим в качестве адъюванта, и опухолевым антигеном PSA. Данная конструкция должна экспрессироваться в подходящих, предпочтительно аттенюированных штаммах Yersinia, которые приводят к секреции слитого белка путем эндогенного механизма секреции типа III с помощью сигнальной последовательности YopE.
В данном примере генетическое слияние YopE18-LT-B-PSA клонируют в сайт EcoRI плазмиды paCYC1 84 для использования конструкции с такой же ориентацией, в которой используют ген, с получением продукта, экспрессируемого плазмидой, кодирующей промотор cat (http://www.fermentas.com/techinfo/nucleicacids/mappacyc184.htm). Для повышенного уровня экспрессии можно использовать любой подходящий промотор.
В дальнейшем иллюстрируют способ клонирования. Хромосомную ДНК из Е. coli, включающую субъединицу В термолабильного энтеротоксина, или вектор, включающий данную последовательность (GenBank регистрационный номер AF242418), амплифицируют, используя следующие праймеры в реакции ПЦР:
Eco-yope18-f (включающий сайт EcoRI site + сигнальную последовательность YopE18):
5'-CTGAATTCATGAAAATATCATCATTTATTTCTACATCACTGCCCCTGCCGGCATCAGTGTCAATAAAGTAAAATGTTATGTTTTAT3' (5'-участок показан черным: сайт EcoRI+3 основания 5', показан красным: последовательность, кодирующая сигнал для секреции типа III белка YopE (aa 1-18), GenBank регистрационный No M92066; участок, выделенный курсивом: участок гомологии гена LT-B (GB регистрационный No AF242418), основания 4-28).
Фосфорилированный обратный праймер LT-B-r: 5'GTTTTCCATACTGATTGCCGCAATTGAATTGG-3' (обратная цепь 372-341 GB AF242418).
Параллельно последовательность PSA, как описано в данной заявке, из вектора pMKCtxB-PSA амплифицируют, используя следующие праймеры: фосфорилированный прямой праймер psa-f: 5'-GTGGGAGGCTGGGAGTGCGAG-3', обратный праймер psa-eco-r: 5'-CCTGAATTCTTAGACGTGATACCTTGAAGCAC (5', показано черным: сайт EcoRI+3 основания 5', показаны синим: стоп-кодон, показан черным: 3'-участок последовательности PSA, данная заявка).
Затем два фрагмента лигируют с помощью ДНК-лигазы в подходящих условиях. После лигирования новый фрагмент амплифицируют во второй реакции ПЦР, используя праймеры Eco-yope18-f и PSA-Eco-R, описанные выше.
Полученный в результате фрагмент очищают, используя подходящий набор очистки для ПЦР, с целью удаления буфера и олигонуклеотидов и затем разрезают ферментом EcoRI в подходящих условиях реакции. Полученный в результате фрагмент из 1040 пар оснований очищают, используя электрофорез в агарозном геле, и лигируют в разрезанный EcoRI вектор paCYC184. После секвенирования выбирают устойчивые к тетрациклину, чувствительные к cm (канамицину) клоны, которые имеют правильную последовательность, интегрированную в той ориентации, что ген cm, и трансформируют подходящий штамм Yersinia, используя электропорацию. Данный вакцинный штамм будет секретировать слияние LT-B-PSA посредством эндогенной системы секреции типа III.
Пример 7: Экспрессия и секреция слияний токсин-антиген в грамположительных бактериях
Грамположительные и отрицательные бактерии имеют различные предварительные условия для секреции. Грамотрицательные бактерии имеют две мембраны и, вследствие этого, механизм секреции в дополнение к сигналам секреции является необходимым для полной секреции. В случае грамположительных бактерий достаточно сигнальной последовательности секреции.
В данном примере описана система для секреции слияния столбнячный токсоид-PSA в Listeria с использованием сигнала секреции р60. На первой стадии вектор pUC18(PS)actAOVATinlA (см. статью Loeffler et al., 2006) разрезают, используя Nsil, и затем обрабатывают, 3'-5' экзонуклеазой в подходящих условиях. Наконец, фрагмент очищают электрофорезом на агарозном геле.
Параллельно фрагмент С столбнячного токсоида (GenBank регистрационный номер No. M 12739) амплифицируют из подходящего источника, например, геномной ДНК из штамма Clostridium tetanii, с использованием следующих фосфорилированных праймеров:
tetc прямой: 5'-TAAAAATCTGGATTGTTGGGTTG-3', где подчеркнутое дополнительное основание введено, чтобы обеспечить правильную рамку слияния.
tetc обратный: 5'-ATCATTTGTCCATCCTTCATCTG-3'.
Фрагмент BRAF KD амплифицируют из плазмиды рМО BKDC, описанной в данной заявке, с использованием фосфорилированных праймеров:
br прямой: 5'-GATTGGGAGATTCCTGATG-3'
br обратный: 5'-CCCGTGG ACAGG AAACGCACC-3'.
Оба фрагмента очищают с использованием подходящего набора для ПЦР-очистки и затем лигируют с помощью ДНК-лигазы в подходящих условиях. После лигирования фрагмент очищают снова, используя подходящий набор для ПЦР-очистки, и амплифицируют, используя tetc прямой и br обратный праймер. После амплификации полученный в результате фрагмент из 2280 пар оснований очищают электрофорезом на агарозном геле и лигируют в очищенный фрагмент 3'-5' экзонуклеазы Nsil pUC18(PS)actAOVATinlA. После лигирования и трансформации E. coli отбирают клон, несущий фрагмент в рамке считывания. Затем плазмиду разрезают, используя PstI и SacI, и фрагмент из 2837 пар оснований очищают, используя гель-электрофорез, и лигируют в соответствующим образом разрезанный PstI и SacI и очищают вектор рSР118 (см. статью Loeffler et al., 2006). Полученным в результате вектором pSP118-act-TetC-BRaf*KD трансформируют штамм Listeria, несущий делецию trpS, например Listeria monocytogenes у trps у aroA/В (см. статью Loeffler et al., 2006). В данном исследовании плазмиду стабилизируют с помощью trpS на основе плазмиды ("Сбалансированная летальная система"), и плазмида кодирует фаговый лизин, что приводит к внутриклеточному лизису штамма. Кассету act-TetC-BRaf*KD экспрессируют главным образом в эукариотических клетках-хозяевах под контролем промотора actA, в которых происходит некоторое внеклеточное вытекание (Loeffler et al., 2006). Сигнальная последовательность кассеты actA приводит к секреции слитого белка TetC-BRaf*KD.
Пример 8: Эукариотические клетки, секретирующие слияния токсин-антиген
В данном примере конструируют эукариотическую клеточную линию, например, опухолевую клеточную линию, которая секретирует слитый белок CtxB-PSA. Для этой цели используют универсальный сигнал секреции (US 6733997), который в принципе обеспечивает секрецию соответствующей экспрессирующей кассеты в клетках различной природы, включая клетки млекопитающих, дрожжи и прокариотические клетки.
На первом этапе слияние CtxB-BRaf* KD амплифицируют из плазмиды рМО BKDC (см. данную заявку), используя следующие праймеры:
СВ-прямой: 5'-atcGGATCCTCAAAATATTACTGATTTGTGTGC-3' (строчные буквы: спейсер подчеркнут: сайт BamHI, прописные буквы: CtxB 5')
СВ-обратный: 5'-tagGGATCCTTAGTGGACAGGAAACGCACCATATCC-3' (строчные буквы: спейсер подчеркнут: сайт BamHI, курсив: стоп-кодон, прописные буквы: BRaf* KD 3'). Затем продукт ПЦР очищают, используя подходящий набор для ПЦР-очистки, и потом частично разрезают (фрагмент включает внутренний сайт BamHI) с помощью BamHI. Фрагмент частичного разрезания из 1231 пары оснований выделяют с помощью электрофореза на агарозном геле и затем лигируют в разрезанную BamHI и гель-очищенную плазмиду pVtgEGFP (патентная заявка США 6733997). Потом отбирают клон, несущий в ориентации рамки считывания с Vtgss, и называют pVtgCtxBRAf. Данной плазмидой можно трансформировать посредством электропорации эукариотическую клеточную линию, которую можно выбрать с помощью селекционной кассеты kan/neo. Клеточные линии могут представлять собой стабилизированные клеточные линии, подобные раковым клеточным линиям, предназначенным для использования в качестве гетерологичной противораковой вакцины, или опухолевым клеткам, выделенным у пациента, предназначенным для использования в качестве аутологичных противораковых вакцин. В любом случае сигнал секреции Vtgss, кодируемый вектором pVtgEGFP, генетически слитый с CtxB-BRaf*KD, будет приводить в результате к секреции слитого белка.
Используя аналогичный подход, слитые белки можно также экспрессировать в дрожжах. В качестве примера демонстрируют модифицированную стратегию клонирования, как показано на фиг.11 заявки US 6733997. На первом этапе кассету, включающую слияние Vtgss-CtxB-BRaf*KD из вышеописанной плазмиды pVtgCtxBRAf, вырезают с помощью Eagl и Eco47III и вводят в вектор pBSPGK (см. US 6733997, фиг.11). Затем полученный в результате вектор разрезают Sacl и HindIII и фрагмент, включающий элемент PGK и слияние Vtgss-CtxB-BRaf*KD интегрируют в соответствующий участок вектора pYEX-S1 аналогично описанию заявки US 6733997 (см. фиг.11). Полученной в результате плазмидой можно трансформировать путем электропорации штаммы дрожжей, такие как Saccharomyces cerevisiae. Дрожжи будут экспрессировать и секретировать слитый белок и могут быть использованы для целей вакцинации.
Сокращения
ABC - | АТФ-связывающая кассета |
AIDA - | адгезин, участвующий в диффузной адгезии |
АРС - | антиген-презентирующая клетка |
aroA - | ген aroA |
AT - | α-токсин |
АТФ - | аденозинтрифосфат |
B-Raf KD - | домен киназы B-Raf |
BSA - | бычий сывороточный альбумин |
Саg А - | главный ассоциированный с заболеванием белок вирулентности Helicobacter pylori |
СРЕ - | энтеротоксин Clostridiurn perfringens |
CpG - | последовательности ДНК, содержащие гипометилированные иммуностимулирующие последовательности ДНК, включающие мотивы CpG |
CT/Ctx - | холерный токсин |
CTB/CtxB - | субъединица В холерного токсина |
CTL - | цитотоксические Т-клетки CD8+ (Т-клетки киллеры) |
CMV - | цитомегаловирус |
ДНК - | дезоксирибонуклеиновая кислота |
ds - | двухцепочечная |
DT/Dtx - | дифтерийный токсин |
Е. coli - | Escherichia coli |
EBV - | вирус Эпштейна-Барр |
рецептор GM-1 - | рецептор моносиалоганглиозидазы 1 |
НА - | гемагглютинин |
HCV - | вирус гепатита С |
ВИЧ - | вирус иммунодефицита человека |
Hly - | гемолизин |
HPV - | вирус папилломы человека |
НТ - | геморрагический токсин |
i.d. - | внутрикожно |
i.m. - | внутримышечный |
i.p.- | внутрибрюшинно |
ИФН - | интерферон |
IgA - | иммуноглобулин изотипа А |
IgG - | иммуноглобулин изотипа G |
ИЛ - | интерлейкин |
KD - | киназа dead |
LPS - | липополисахарид |
LT - | термолабильный энтеротоксин Е. coli |
LT - | летальный токсин |
LTB - | субъединица В термолабильного энтеротоксина Е. coli |
mAb - | моноклональное антитело |
МНС - | главный комплекс гистосовместимости |
МК-клетка - | натуральная клетка-киллер |
МКТ-клетка - | Т-клетка натуральный киллер |
PAGE - | электрофорез в полиакриламидном геле |
PBS - | забуференный фосфатом солевой раствор |
ПЦР - | полимеразная цепная реакция |
РЕ - | экзотоксин A Pseudomonas |
PSA - | простата-специфический антиген |
PT/Ptx - | токсин коклюша |
PHK - | рибонуклеиновая кислота |
s.c. - | подкожный |
SDS - | додецилсульфат натрия |
Sec - | главный секреторный (Sec) путь |
Ss - | одноцепочечный |
ST - | термостабильный энтеротоксин Е. coli |
ST/Stx - | шига-токсин |
STB/StxB - | субъединица В шига-токсина |
T3SS - | система секреции типа III |
Tat - | двойная транслокация аргинина |
ТСА - | трихлоруксусная кислота |
Th1 (клетка) - | воспалительные Т-клетки CD44+ |
Th2 (клетка) - | Т-клетки-хелперы CD4+ |
TSST-1 - | токсин синдрома токсического шока |
ТТ - | столбнячный токсин |
VT - | Vero-токсин |
Библиография
Agren, L С, Ekman, L, Lowenadler, В., Nedrud, J. G., and Lycke, N. Y. (1999). Adjuvanticity of the cholera toxin A1-based gene fusion protein, CTA1-DD, is critically dependent on the ADP-ribosyltransferase and Ig-binding activity (Адъювантность слитого белка на основе гена холерного токсина A1, СТА1-DD, в существенной степени зависит от активности АДФ-рибозилтрансферазы и lg-связывающей активности. J Immunol 162, 2432-2440.
Anderson, R.J., Pasetti, M.F., Sztein, M.В., Levine, M.M., and Noriega, F.R. (2000). Delta guaBA attenuated Shigella flexneri 2a strain CVD 1204 as a Shigella vaccine and as a live mucosal delivery system for fragment С of tetanus toxin. (Дельта guaBA аттенюированный штамм Shigella flexneri 2a CVD 1204 как вакцина против Shigella и как живая система доставки через слизистые для фрагмента С столбнячного токсина). Vaccine 18, 2193-2202.
Austin, E.A., Graves, J.F., Hite, L.A., Parker, С.Т., and Schnaitman, C.A. (1990). Genetic analysis of lipopolysaccharide core biosynthesis by Escherichia coli K-12: insertion mutagenesis of the rfa locus. (Генетический анализ биосинтеза липополисахаридного ядра Escherichia coli K-12: инсерционный мутагенез локуса rfa). J Bacteriol 172, 5312-5325.
Balsalobre, С, Silvan, J.M., Berglund, S., Mizunoe, Y., UhNn, B.E., and Wai, S.N. (2006). Release of the type I secreted alpha-haemolysin via outer membrane vesicles from Escherichia coll. (Высвобождение секретируемого α-гемолизина типа I через пузырьки наружной мембраны из Escherichia coli). Mol Microbiol 59, 99-112.
Barry, E. M., Gomez-Duarte, O., Chatfield, S., Rappuoli, R., Pizza, M., Losonsky, G., Galen, J., and Levine, M.M. (1996). Expression and immunogenicity of pertussis toxin 81 subunit-tetanus toxin fragment С fusions in Salmonella typhi vaccine strain CVD 908. (Экспрессия и иммуногенность слияний субъединица S1 токсина коклюша-фрагмента С столбнячного токсина). Infect Immun 64, 4172-4181.
Becerra, J.С, Arthur, J.F., Landucci, G.R., Forthal, D.N. and Theuer, C.P. (2003). CD8+ T-cell mediated tumor protection by Pseudomonas exotoxin fused to ovalbumin in C57BL/6mice. (Опосредованная Т-клетками CD8+ противоопухолевая защита посредством экзотоксина Pseudomonas, слитого с овальбумином, у мышей C57BL/6). Surgery 133, 404-410.
Boon, Т., Coulie, P. G., Van den Eynde, B. J., and van der Bruggen, P. (2006). Human Т cell responses against melanoma. (Ответы человеческих Т-клеток в отношении меланомы). Annu Rev Immunol 24, 175-208.
Boyd, A.P., Ross, P.J., Conroy, H., Mahon, N., Lavelle, E.C, and Mills, K.H. (2005). Bordetella pertussis adenylate cyclase toxin modulates innate and adaptive immune responses: distinct roles for acylation and enzymatic activity in immunomodulation and cell death, (токсин аденилатциклаза Bordetella pertussis модулирует врожденный и адаптивный иммунный ответы: особая роль ацилирования и ферментной активности в иммуномодуляции и гибели клетки). J Immunol 175, 730-738.
Brassier, F., Weber-Levy, M., Mock, M., and Sirard, J.C. (2000). Protective antigen-mediated antibody response against a heterologous protein produced in vivo by Bacillus anthracis. (Защитный опосредованный антигеном ответ антител в отношении гетерологичного белка, продуцируемого in vivo Bacillus anthracis). Infect Immun 68, 5731-5734.
Bumann, D. (2001). Regulated antigen expression in live recombinant Salmonella enterica serovarTyphimurium strongly affects colonization capabilities and specific CD4(+)-T-cell responses. (Регулируемая экспрессия антигена в живой рекомбинантной Salmonella enterica серовар Typhimurium сильно влияет на способности колонизации и специфические ответы Т-клеток CD4+). Infect Immun 69, 7493-7500.
Busby, S., and Ebright, R. H. (1994). Promoter structure, promoter recognition, and transcription activation in prokaryotes. (Структура промотора, распознавание промоторов и активация транскрипции у прокариот). Cell 79, 743-746.
Butterton, J.R., Beattie, D.Т., Gardel, C. L, Carroll, P.A., Hyman, Т., Killeen, K.P., Mekalanos, J.J., and Calderwood, S.B. (1995). Heterologous antigen expression in Vibrio cholerae vector strains. (Экспрессия гетерологичного антигена в векторных штаммах Vibrio cholerae) Infect Immun 63, 2689-2696.
Byun, Y., Ohmura, M., Fujihashi, K., Yamamoto, S., McGhee, J. R., Udaka, S., Kiyono, H., Takeda, Y., Kohsaka, Т., and Yuki, Y. (2001). Nasal immunization with E. coli vero-toxin 1 (VT1)-B subunit and a nontoxic mutant of cholera toxin elicits serum neutralizing antibodies. (Назальная иммунизация В-субъединицей веро-токсина 1 (VT1) E. coli и нетоксичный мутантхолерного токсина вызывает образование сывороточных нейтрализующих антител). Vaccine 19, 2061-2070.
Campos, J., Martinez, E., Marrero, K., Silva, Y., Rodriguez, B. L, Suzarte, E., Ledon, Т., and Fando, R. (2003). Novel type of specialized transduction for CTX phi or its satellite phage RS1 mediated by filamentous phage VGJ phi in Vibrio cholerae. (Новый тип специализированной трансдукции для CTX phi или его сателлитного фага RS1, опосредованной филаментозным фагом VGJ phi в Vibrio cholerae) J Bacteriol 185, 7231-7240.
Cardenas, L, and Clements, J.D. (1992). Oral immunization using live attenuated Salmonella spp. as carriers of foreign antigens. (Пероральная иммунизация с использованием живой аттенюированной Salmonella spp. как носителя чужеродных антигенов). Clin Microbiol Rev 5, 328-342.
Cardenas, L, and Clements, J.D. (1993). Development of mucosal protection against the heat-stable enterotoxin (ST) of Escherichia coli by oral immunization with a genetic fusion delivered by a bacterial vector. (Развитие защиты слизистой от термостабильного энтеротоксина (ST) Escherichia coli путем пероральной иммунизации генетическим слиянием, доставляемым бактериальным вектором). Infect Immun 61, 4629-4636.
Chabalgoity, J.A., Harrison, J.A., Esteves, A., Demarco de Hormaeche, R., Ehrlich, R., Khan, С.М., and Hormaeche, С.Е. (1997). Expression and immunogenicity of an Echinococcus granulosus fatty acid-binding protein in live attenuated Salmonella vaccine strains. (Экспрессия и иммуногенность связывающего жирные кислоты белка Echinococcus granulosus в живых аттенюированных вакцинных штаммах Salmonella). Infect Immun 65, 2402-2412.
Chabalgoity, J.A., Khan, С.М., Nash, A.A., and Hormaeche, С.Е. (1996). A Salmonella typhimurium htrA live vaccine expressing multiple copies of a peptide comprising amino acids 8-23 of herpes simplex virus glycoprotein D as a genetic fusion to tetanus toxin fragment С protects mice from herpes simplex virus infection. (Живая вакцина на основе Salmonella typhimurium htrA, экспрессирующая множество копий пептида, содержащего аминокислоты 8-23 гликопротеина D вируса простого герпеса в виде генетического слияния с фрагментом С столбнячного токсина, защищает мышей от инфекции вируса простого герпеса). Mol Microbiol 19, 791-801.
Chabalgoity, J. A., Moreno, M., Carol, H., Dougan, G., and Hormaeche, C. E. (2000). Salmonella typhimurium as a basis for a live oral Echinococcus granulosus vaccine. (Salmonella typhimurium как основа для живой пероральной вакцины Echinococcus granulosus). Vaccine 19, 460-469.
Chabalgoity, J.A., Villareal-Ramos, В., Khan, С.M., Chatfield, S.N., de Hormaeche, R.D., and Hormaeche, C.E. (1995). Influence of preimmunization with tetanus toxoid on immune responses to tetanus toxin fragment C-guest antigen fusions in a Salmonella vaccine carrier. (Влияние предварительной иммунизации столбнячным токсоидом на иммунные ответы в отношении слияний фрагмент С столбнячного токсина - чужеродный антиген и вакцинном носителе Salmonella). Infect Immun 63, 2564-2569.
Chacon, M.R., Londono, P., Dougan, G., and Selkirk, M.E. (1996). Heterologous expression of the cuticular-glutathione peroxidase of lymphatic filariae in an attenuated vaccine strain of Salmonella typhimurium abrogates H-2 restriction of specific antibody responses. (Гетерологичная экспрессия кутикулярной глутатион-пероксидазы лимфатических фибрилл в аттенюированном вакцинном штамме Salmonella typhimurium отменяет Н-2-рестрикцию ответов специфических антител). Parasite Immunol 18, 307-316.
Chen, I., Finn, Т. M., Yanqing, L, Guoming, Q., Rappuoli, R., and Pizza, M. (1998). A recombinant live attenuated strain of Vibrio cholerae induces immunity against tetanus toxin and Bordetella pertussis tracheal colonization factor. (Рекомбинантный живой аттенюированный штамм Vibrio cholerae индуцирует иммунитет в отношении столбнячного токсина и трахеального фактора колонизации Bordetella pertussis). Infect Immun 66, 1648-1653.
Cheng-hua, S., Cheng, C, Jing-sheng, Z., Jiezhi., L, and Qing-jun, M. (1995). Gene fusion of cholera toxin В subunit and HBV PreS2 epitope and the antigenicity of fusion protein. (Слияние генов В-субъединицы холерного токсина и эпитопа HBV PreS2 и антигенность слитого белка). Vaccine 13, 933-937.
Clemens, J., Savarino, S., Abu-Elyazeed, R., Safwat, M., Rao, M., Wierzba, Т., Svennerholm, A.M., Holmgren, J., Frenck, R., Park, E., and Naficy, A. (2004). Development of pathogenicity-driven definitions of outcomes for a field trial of a killed oral vaccine against enterotoxigenic Escherichia coli in Egypt: application of an evidence-based method. (Разработка обусловливаемых патогенностью определений конечных итогов для полевых испытаний убитой пероральной вакцины против энтеротоксигенной Escherichia coli в Египте, применение метода на основе доказательств). J Infect Dis 189, 2299-2307.
Datsenko, К.A., and Wanner, В.L. (2000). One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. (Одностадийная инактивация хромосомных генов в Escherichia coli K-12 с использованием продуктов ПЦР). Proc Natl Acad Sci USA 97, 6640-6645.
Dietrich, G., Bubert, A., Gentschev, I., Sokolovic, Z., Simm, A., Catic, A., Kaufmann, S.H., Hess, J., Szalay, A.A., and Goebel, W. (1998). Delivery of antigen-encoding plasmid DNA into the cytosol of macrophages by attenuated suicide Usteria monocytogenes. (Доставка кодирующей антиген плазмидной ДНКв цитозоль макрофагов посредством аттенюированной суицидной Usteria monocytogenes). Nat Biotechnol 16, 181-185.
Dietrich, G., Viret, JF, and Gentschev, I. (2003). Haemolysin A and listeriolysin - two vaccine delivery tools for the induction of cell-mediated immunity. (Гемолизин А и листериолизин - два инструмента доставки вакцины для индукции опосредованного клетками иммунитета). Int. J. Parasitol 33, 495-505.
Dunn, G.P., Old, L.J., and Schreiber, R.D. (2004). The immunobiology of cancer immunosurveillance and immunoediting. (Иммунобиология иммуновыживаемости и иммунокоррекции рака) Immunity 21, 137-148.
Dunstan, S.J., Simmons, C.P., and Strugnell, R.A. (2003). In vitro and in vivo stability of recombinant plasmids in a vaccine strain of Salmonella enterica var. typhimurium. (Стабильность in vitro и in vivo рекомбинантных плазмид в вакцинном штамме Salmonella enterica var. typhimurium). FEMS Immunol Med Microbiol37, 111-119.
Eriksson, A.M., Schon, K.M., and Lycke, N.Y. (2004). The cholera toxin-derived CTA1-DD vaccine adjuvant administered intranasallydoes not cause inflammation or accumulate in the nervous tissues. (Вакцинный адъювант CTA1-DD, полученный из холерного токсина, вводимый интраназально, не вызывает воспаления или накопления в нервных тканях). J Immunol 173, 3310-3319.
Fath, M.J., Skvirsky, R.C, and Kolter, R. (1991). Functional complementation between bacterial MDR-like export systems: colicin V, alpha-hemolysin, and Erwinia protease. (Функциональная комплементация между бактериальными MDR-подобными системами экспорта: колицином V, α-гемолизином и протеазой Erwinia). J Bacteriol 173, 7549-7556.
Fensterle, J., Grode, L, Hess, J., and Kaufmann, S. H. E. (1999). Effective DNA vaccination against listeriosis by prime/boost inoculation with the gene gun. (Эффективная ДНК-вакцинация против листериоза путем первичной/бустерной инокуляции гена gun). J Immunol 163, 4510-4518.
Fensterle, J., Schwartz, V., Riedmiller, H., and Rapp, U. R. (2005). Animal models for DNA vaccination against prostate cancer using PSA encoding plasmids. (Модели на животных ДНК-вакцинации против рака простаты с использованием PSA-кодирующих плазмид). Onkologie 28 (доп. 2), 52.
Freytag, L.С, and Clements, J.D. (1999). Bacterial toxins as mucosal adjuvants. (Бактериальные токсины как адъюванты для слизистых). Curr Top Microbiol Immunol 236, 215-236.
Freytag, L.С., and Clements, J.D. (2005). Mucosal adjuvants (Адъюванты для слизистых). Vaccine 23, 1804-1813.
Garmory, H.S., Brown, K.A., and Titball, R.W. (2002). Salmonella vaccines for use in humans: present and future perspectives. (Вакцины на основе Salmonella, предназначенные для применения у человека, настоящее и будущие перспективы). FEMS Microbiol Rev 26, 339-353.
Garmory, H.S., Titball, R.W., Griffin, K.F., Hahn, U., Bohm, R., and Beyer, W. (2003). Salmonella enterica serovar typhimurium expressing a chromosomally integrated copy of the Bacillus anthracis protective antigen gene protects mice against an anthrax spore challenge. (Salmonella enterica серовар typhimurium, экспрессирующая хромосомно интегрированную копию гена защитного антигена Bacillus anthracis, защищает мышей от заражения спорами сибирской язвы). Infect Immun 71, 3831-3836.
Gentschev, I., Dietrich, G., and Goebel, W. (2002a). The E. coli alpha-hemolysin secretion system and its use in vaccine development. (Система секреции α-гемолизина E. coli и ее использование в разработке вакцин) Trends Microbiol 10, 39-45.
Gentschev, I., Dietrich, G., Spreng, S., Pilgrim, S., Stritzker, J., Kolb-Maurer, A., and Goebel, W. (2002b). Delivery of protein antigens and DNA by attenuated intracellular bacteria. (Доставка белковых антигенов и ДНК посредством аттенюированных внутриклеточных бактерий). Int J Med Microbiol 291, 577-582.
Gentschev, I., Fensterle, J., Schmidt, A., Potapenko, Т., Troppmair, J., Goebel, W., and Rapp, U.R. (2005). Use of a recombinant Salmonella enterica serovar typhimurium strain expressing C-Raf for protection against C-Raf induced lung adenoma in mice. (Использование рекомбинантного штамма Salmonella enterica serovar typhimurium, экспрессирующего C-Raf для защиты от индуцированной С-raf аденомы легкого у мышей). ВМС Cancer 5, 15.
Gentschev, I., Mollenkopf, H., Sokolovic, Z., Hess, J., Kaufmann, S.H., and Goebel, W. (1996). Development of antigen-delivery systems, based on the Escherichia coli hemolysin secretion pathway. (Разработка систем доставки антигена на основе пути секреции гемолизина Escherichia coli) Gene 179, 133-140.
Gentschev, I., Dietrich, G., Spreng, S., Neuhaus, В., Maier, E., Benz, R., Goebel, W., Fensterle, J., and Rapp, UR. (2004). Use of the alpha-hemolysin secretion system of Escherichia coli for antigen delivery in the Salmonella typhi Ty21a vaccine strain. (Использование системы секреции α-гемолизина Escherichia coli для доставки антигена в вакцинном штамме Salmonella typhi Ty21a). Int J Med Microbiol 294, 363-371.
Gomez-Duarte, О.G., Galen, J., Chatfield, S.N., Rappuoli, R., Eidels, L, and Levine, M.M. (1995). Expression of fragment С of tetanus toxin fused to a carboxyl-terminal fragment of diphtheria toxin in Salmonella typhi CVD 908 vaccine strain. (Экспрессия фрагмента С столбнячного токсина, слитого в карбоксил-концевым фрагментом дифтерийного токсина в вакцинном штамме Salmonella typhi CVD 908). Vaccine 13, 1596-1602.
Hajishengallis, G., Harokopakis, E., Hollingshead, S.K., Russell, M.W., and Michaiek, S.M. (1996). Construction and oral immunogenicity of a Salmonella typhimurium strain expressing a streptococcal adhesin linked to the A2/B subunits of cholera toxin. (Конструирование и пероральная иммуногенность штамма Salmonella typhimurium, экспрессирующего стрептококковый адгезин, связанный с субъединицами A2/B холерного токсина). Vaccine 14, 1545-1548.
Hajishengallis, G., Nawar, H., Tapping, R.I., Russell, M.W., and Connell, T.D. (2004). The Type II heat-labile enterotoxins LT-IIa and LT-IIb and their respective В pentamers differentially induce and regulate cytokine production in human monocytic cells. (Термолабильные энтеротоксины типа II LT-IIa и их соответствующие В-пентамеры дифференцирование индуцируют и регулируют продукцию человеческих моноцитарных клеток). Infect Immun 72, 6351-6358.
Harokopakis, E., Hajishengallis, G., Greenway, T.E., Russell, M.W., and Michaiek, S.M. (1997). Mucosal immunogenicity of a recombinant Salmonella typhimurium-cloned heterologous antigen in the absence or presence of coexpressed cholera toxin A2 and В subunits. (Иммуногенность для слизистых клонированного в рекомбинантную Salmonella typhimurium гетерологичного антигена в отсутствие или в присутствии соэкспрессированных A2- и В-субъединиц холерного токсина) Infect Immun 65, 1445-1454.
Hess, J., Gentschev, I., Miko, D., Welzel, M., Ladel, C, Goebel, W., and Kaufmann, S.H. (1996). Superior efficacy of secreted over somatic antigen display in recombinant Salmonella vaccine induced protection against listenosis. (Повышенная эффективность представления секретированного относительно соматического антигена в вакцине на основе рекомбинантной Salmonella, индуцирующей защиту от листериоза). Proc Natl Acad Sci USA 93, 1458-1463.
Holmgren, J., Adamsson, J., Anjuere, F., Clemens, J., Czerkinsky, C, Eriksson, K., Flach, C.F., George-Chandy, A., Harandi, A.M., Lebens, M., et al. (2005). Mucosal adjuvants and anti-infection and anti-immunopathology vaccines based on cholera toxin, cholera toxin В subunit and CpG DNA. (Адъюванты для слизистых и вакцины против инфекций и иммунопатологий на основе субъединицы В холерного токсина и ДНК CpG). Immunol Lett 97, 181-188.
Holmgren, J., and Czerkinsky, C. (2005). Mucosal immunity and vaccines. (Иммунитет слизистых и вакцины). Nat Med 11, S45-53.
Holmgren, J., Czerkinsky, C, Eriksson, K., and Mharandi, A. (2003). Mucosal immunisation and adjuvants: a brief overview of recent advances and challenges. (Иммунизация и адъюванты для слизистых - краткий обзор современных достижений и проблем). Vaccine 21 доп. 2, S89-95.
Hormozi, K., Parton, R., and Coote, J. (1999). Adjuvant and protective properties of native and recombinant Bordetella pertussis adenylate cyclase toxin preparations in mice. (Адъювантные и защитные свойства препаратов токсина аденилатциклазы нативной и рекомбинантной Bordetella pertussis у мышей). FEMS Immunol Med Microbiol 23, 273-282.
Huang, Y., Hajishengallis, G., and Michaiek, S.M. (2000). Construction and characterization of a Salmonella enterica serovar typhimurium clone expressing a salivary adhesin of Streptococcus mutans under control of the anaerobically inducible nirB promoter. (Конструирование и характеризация клона Salmonella enterica серовар typhimurium, экспрессирующего слюнный адгезин Streptococcus mutans под контролем энаэробного индуцируемого промотора nirB). Infect Immun 68, 1549-1556.
Hunt, P.D., and Hardy, S.J. (1991). Heat-labile enterotoxin can be released from Escherichia coli cells by host intestinal factors. (Термолабильный энтеротоксин может быть высвобожден из клеток Escherichia coli посредством кишечных факторов хозяина). Infect Immun 59, 168-171.
Jackson, R.J., Marinaro, M., VanCott, J.L, Yamamoto, M., Okahashi, N., Fujihashi, K., Kiyono, H., Chatfield, S.N., and McGhee, J.R. (1996). Mucosal immunity: regulation by helper Т cells and a novel method for detection. (Иммунитет слизистых - регуляция Т-клетками-хелперами и новый метод детекции). J Biotechnol 44, 209-216.
Jagusztyn-Krynicka, E.K., Clark-Curtiss, J.E., and Curtiss, R., 3rd (1993). Escherichia coli heat-labile toxin subunit В fusions with Streptococcus sobrinus antigens expressed by Salmonella typhimurium oral vaccine strains: importance of the linker for antigenicity and biological activities of the hybrid proteins. (Слияния В-субъединицы термолабильного токсина Escherichia coli с антигенами Streptococcus sobrinus, экспрессируемыми пероральными вакцинными штаммами Salmonella typhimurium - важность линкера для антигенности и биологической активности гибридных белков). Infect Immun 61, 1004-1015.
Khan, С.M., Villarreal-Ramos, В., Pierce, R.J., Demarco de Hormaeche, R., McNeNI, H., Ali, Т., Chatfield, S., Capron, A., Dougan, G., and Hormaeche, C. E. (1994a). Construction, expression, and immunogenicity of multiple tandem copies of the Schistosoma mansoni peptide 115-131 of the P28 glutathione S-transferase expressed as C-terminal fusions to tetanus toxin fragment С in a live aro-attenuated vaccine strain of Salmonella. (Конструирование, экспрессия и иммуногенность множества тандемных копий пептида 115-131 глутатион-трансферазы S Schistosoma mansoni P28, экспрессируемой в виде С-концевых слияний с фрагментом С столбнячного токсина в живом aro-аттенюированном вакцинном штамме Salmonella). J Immunol 153, 5634-5642.
Khan, С.М., Villarreal-Ramos, В., Pierce, R.J., Riveau, G., Demarco de Hormaeche, R., McNeill, H., Ali, Т., Fairweather, N., Chatfield, S., Capron, A., and et al. (1994b). Construction, expression, and immunogenicity of the Schistosoma mansoni P28 glu-tathione S-transferase as a genetic fusion to tetanus toxin fragment С in a live Aro attenuated vaccine strain of Salmonella. (Конструирование, экспрессия и иммуногенность глутатион-трансферазы S Schistosoma mansoni P28 как генетического слияния с фрагментом С столбнячного токсина в живом Aro-аттенюированном вакцинном штамме Salmonella). Proc Natl Acad Sci USA 91, 11261-11265.
Konieczny, М.P., Suhr, М., Noll, A., Autenrieth, I.B., and Alexander Schmidt, М. (2000). Cell surface presentation of recombinant (poly-) peptides including functional T- cell epitopes by the AIDA autotransporter system. (Презентация на клеточной поверхности рекомбинантных полипептидов, включающих функциональные Т-клеточные эпитопы, посредством системы аутотранспортеров AIDA). FEMS Immunol Med Microbiol 27, 321-332.
Koprowski, H., 2nd, Levine, М.М., Anderson, R.J., Losonsky, G., Pizza, М., and Barry, E.М. (2000). Attenuated Shigella flexneri 2a vaccine strain CVD 1204 expressing colonization factor antigen I and mutant heat-labile enterotoxin of enterotoxigenic Escherichia coli. (Аттенюированный вакцинный штамм Shigella flexneri 2a CVD 1204, экспрессирующий антиген фактора колонизации и мутантный термолабильный энтеротоксин энтеротоксигенной Escherichia coli). Infect Immun 68, 4884-4892.
Kweon, M.N., Yamamoto, M., Watanabe, F., Tamura, S., Van Ginkel, F.W., Miyauchi, A., Takagi, H., Takeda, Y., Hamabata, Т., Fujihashi, K., et al. (2002). A nontoxic chimeric enterotoxin adjuvant induces protective immunity in both mucosal and systemic compartments with reduced IgE antibodies. (Адъювант на основе нетоксичного химерного энтеротоксина индуцирует защитный иммунитет в обоих, слизистом и системном отделах с пониженным уровнем антител IgE). J Infect Dis 186, 1261-1269.
Laemmli, U.К. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. (Расщепление структурных белков во время сборки бактериофага T4). Nature 227, 680-685.
Lahiri, S.S. (2000). Bacterial toxins - an overview. (Бактериальные токсины - обзор) J Nat Toxins 9, 381-408.
Lavelle, E.C, McGuirk, P., and Mills, K.H. (2004). Molecules of infectious agents as immunomodulatory drugs. (Молекулы инфекционных агентов как иммуномодулирующие лекарственные препараты). Curr Top Med Chem 4, 499-508.
Lee, J.J., Sinha, K.A., Harrison, J.A., de Hormaeche, R.D., Riveau, G., Pierce, R.J., Capron, A., Wilson, R.A., and Khan, C.M. (2000). Tetanus toxin fragment C expressed in live Salmonella vaccines enhances antibody responses to its fusion partner Schistosoma haematobium glutathione S-transferase. (Фрагмент С столбнячного токсина, экспрессируемый в живых вакцинах Salmonella, усиливает ответы антител на его партнера слияния глутатион S-трансферазу Schistosoma haematobium). Infect Immun 68, 2503-2512.
Loeffler, D.I., Schoen, C.U., Goebel, W., and Pilgrim, S. (2006). Comparison of different live vaccine strategies in vivo for delivery of protein antigen or antigen-encoding DNA and mRNA by virulence-attenuated Listeria monocytogenes. (Сравнение различных стратегий живых вакцин in vivo для доставки белкового антигена или кодирующей антиген ДНК и мРНК с использованием Listeria monocytogenes с аттенюированной вирулентностью). Infect Immun 74, 3946-3957.
Loessner, M.J., Wendlinger, G., and Scherer, S. (1995). Heterogeneous endolysins in Listeria monocytogenes bacteriophages: a new class of enzymes and evidence for conserved holin genes within the siphoviral lysis cassettes. (Гетерогенные эндолизины бактерифагов Listeria monocytogenes - новый класс ферментов и подтверждение присутствия консервативных генов холина в сифовирусных лизирующих кассетах). Mol Microbiol 16, 1231-1241.
Lycke, N. (2005). From toxin to adjuvant: basic mechanisms for the control of mucosal IgA immunity and tolerance. (От токсина к адъюванту - основные механизмы контроля иммунитета IgA слизистых и толерантности). Immunol Lett 97, 193-198.
Lycke, N., Tsuji, Т., and Holmgren, J. (1992). The adjuvant effect of Vibrio cholerae and Escherichia coli heat-labile enterotoxins is linked to their ADP-ribosyltransferase activity. (Адъювантный эффект термолабильных энтеротоксинов Vibrio cholerae и Escherichia coli связан с активностью АДФ-рибозилтрансферазы). Eur J Immunol 22, 2277-2281.
McSorley, S.J., Rask, C, Pichot, R., Julia, V., Czerkinsky, C, and Glaichenhaus, N. (1998). Selective tolerization of Th1-like cells after nasal administration of a cholera toxoid-LACK conjugate. (Избирательная толеризация Th1-подобных клеток после назального введения конъюгата холерный токсоид-LACK). Eur J Immunol 28, 424-432.
Mendelson, 1., Gat, O., Aloni-Grinstein, R., Altboum, Z., Inbar, I., Kronman, C, Bar-Haim, E., Cohen, S., Velan, В., and Shafferman, A. (2005). Efficacious, nontoxigenic Bacillus anthracis spore vaccines based on strains expressing mutant variants of lethal toxin components. (Эффективные нетоксигенные споровые вакцины Bacillus anthracis на основе штаммов, экспрессирующих мутантные варианты компонентов летального токсина). Vaccine, 23, 5688-5697.
Mesnage, S., Weber-Levy, M., Haustant, M., Mock, M., and Fouet, A. (1999). Cell surface-exposed tetanus toxin fragment С produced by recombinant Bacillus anthracis protects against tetanus toxin. (Фрагмент С столбнячного токсина, представляемого на клеточной поверхности, продуцируемый рекомбинантным Bacillus anthracis, защищает от столбнячного токсина). Infect Immun 67, 4847-4850.
Michalkiewicz, J., Stachowski, J., Barth, C, Patzer, J., Dzierzanowska, D., and Madalinski, K. (1999). Effect of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A on IFN-gamma synthesis: expression of costimulatory molecules on monocytes and activity of NK cells. (Эффект эндотоксина A Pseudomonas aeruginosa на синтез ИФН-γ: экспрессия костимулирующих молекул на моноциты и активность NK-клеток). Immunol Lett 69, 359-366.
Michl, P., and Gress, T.M. (2004). Bacteria and bacterial toxins as therapeutic agents for solid tumors. (Бактерии и бактериальные токсины в качестве лечебных факторов для солидных опухолей). Curr Cancer Drug Targets 4, 689-702.
Morona, R., Manning, P.A., and Reeves, P. (1983). Identification and characterization of the TolC protein, an outer membrane protein from Escherichia coli. (Идентификация и характеризация белка TolC, белка наружной мембраны из Escherichia coli). J Bacteriol 153, 693-699.
Muhlen, K.A., Schumann, J., Wittke, F., Stenger, S., Van Rooijen, N., Van Kaer, L, and Tiegs, G. (2004). NK cells, but not NKT cells, are involved in Pseudomonas aeruginosa exotoxin A-induced hepatotoxicity in mice. (NK-клетки, но не NKT-клетки участвуют в гепатотоксичности, индуцируемой экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa, у мышей). J Immunol 172, 3034-3041.
Mutsch, M., Zhou, W., Rhodes, P., Bopp, M., Chen, R.Т., Under, Т., Spyr, C, and Steffen, R. (2004). Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell's palsy in Switzerland. (Использование инактивированной интраназальной вакцины против гриппа и риск развития паралича Белла в Швейцарии). N Engl J Med 350, 896-903.
Orr, N., Galen, J.E., and Levine, M.M. (1999). Expression and immunogenicity of a mutant diphtheria toxin molecule, CRM(197), and its fragments in Salmonella typhi vaccine strain CVD 908-htrA. (Экспрессия и иммуногенность мутантной молекулы дифтерийного токсина CRM(197) и ее фрагментов в вакцинном штамме Salmonella typhi CVD 908-htrA). Infect Immun 67, 4290-4294.
Poggi, A., Spada, F., Costa, P., Tomasello, E., Revello, V., Pella, N., Zocchi, M.R., and Moretta, L. (1996). Dissection of lymphocyte function-associated antigen 1-dependent adhesion and signal transduction in human natural killer cells shown by the use of cholera or pertussis toxin. (Анализ ассоциированной с функцией лимфоцитов антиген 1-зависимой адгезии и сигнальной трансдукции в человеческих натуральных клетках-киллерах, показанной с использованием холерного токсина или токсина коклюша) Eur J Immunol 26, 967-975.
Pogonka, Т., Klotz, С, Kovacs, F., and Lucius, R. (2003). A single dose of recombinant Salmonella typhimurium induces specific humoral immune responses against heterologous Eimeria tenella antigens in chicken. (Однократная доза рекомбинантной Salmonella typhimurium индуцирует специфические гуморальные иммунные ответы в отношении гетерологичных антигенов Eimeria tenella у кур). Int J Parasitol 33, 81-88.
Ramirez, R., Carracedo, J., Zamzami, N., Castedo, M., and Kroemer, G. (1994). Pertussis toxin inhibits activation-induced cell death of human thymocytes, pre-B leukemia cells and monocytes. (Токсин коклюша ингибирует индуцированную активацией гибель человеческих тимоцитов, предлейкозных В-клеток и моноцитов). J Exp Med 180, 1147-1152.
Ranallo, R.Т., Fonseka, С.P., Cassels, F., Srinivasan, J., and Venkatesan, M.M. (2005). Construction and characterization of bivalent Shigella flexneri 2a vaccine strains SC608 (pCFAI) and SC608(pCFAI/LTB) that express antigens from enterotoxigenic Escherichia coli. (Конструирование и характеризация бивалентных вакцинных штаммов Shigella flexneri 2a SC608(pCFAI) и SC608(pCFAI/LTB), которые экспрессируют антигены из энтеротоксигенной Escherichia coli). Infect Immun 73, 258-267.
Reveneau, N., Geoffroy, M. С, Locht, С, Chagnaud, P., and Mercenier, A. (2002). Comparison of the immune responses induced by local immunizations with recombinant Lactobacillus plantarum producing tetanus toxin fragment С in different cellular locations. (Сравнение иммунных ответов, индуцированных местными иммунизациями рекомбинантной Lactobacillus plantarum, продуцирующей фрагмент С столбнячного токсина в различных местоположениях клетки). Vaccine 20, 1769-1777.
Roland, K. L, Tinge, S. A., Killeen, K. P., and Kochi, S. K. (2005). Recent advances in the development of live, attenuated bacterial vectors. (Современные достижения в создании живых аттенюированных бактериальных векторов). Curr Opin Mol Ther 7, 62-72.
Rosenberg, S. A. (2001). Progress in human tumour immunology and immunotherapy. (Развитие иммунологии и иммунотерапии опухолей человека). Nature 411, 380-384.
Ryan, E.Т., Butterton, J.R., Smith, R.N., Carroll, P.A., Crean, T.I., and Calderwood, S.B. (1997a). Protective immunity against Clostridium difficile toxin A induced by oral immunization with a live, attenuated Vibrio cholerae vector strain. (Защитный иммунитет против токсина A Clostridium difficile, индуцируемый пероральной иммунизацией живым аттенюированным векторным штаммом Vibrio cholerae). Infect Immun 65, 2941-2949.
Ryan, E.Т., Butterton, J.R., Zhang, Т., Baker, M.A., Stanley, S.L., Jr., and Calderwood, S.B. (1997b). Oral immunization with attenuated vaccine strains of Vibrio cholerae expressing a dodecapeptide repeat of the serine-rich Entamoeba histolytica protein fused to the cholera toxin B subunit induces systemic and mucosal antiamebic and anti-V. cholerae antibody responses in mice. (Пероральная иммунизация аттенюированными вакцинными штаммами Vibrio cholerae, экспрессирующими додекапептидный повтор богатого серином белка Entamoeba histolytica, слитый с В-субъединице и холерного токсина, индуцирует системный и слизистый ответы антиамебных антител и антител κ V. cholerae у мышей). Infect Immun 65, 3118-3125.
Sanchez, J., Wallerstrom, G., Frednksson, M., Angstrom, J., and Holmgren, J. (2002). Detoxification of cholera toxin without removal of its immunoadjuvanticity by the addition of (STa-reIated) peptides to the catalytic subunit. A potential new strategy to generate immunostimulants for vaccination. (Детоксификация холерного токсина без удаления его иммуноадъювантности путем добавления (STa-родственных) пептидов к каталитической субъединице. Потенциальная новая стратегия генерации иммуностимуляторов для вакцинации). J Biol Chem 277, 33369-33377.
Sanchez, AE., Aquino, G., Ostoa-Saloma, P., Laclette, JP., and Rocha-Zavaleta, L (2004). Cholera toxin B-subunit gene enhances mucosal Immunoglobulin A, Th1-type and CD8+ cytotoxic responses when co-administered intradermally with a DNA vaccine. (Ген В-субъединицы холерного токсина усиливает ответы иммуноглобулина А слизистых, Th1-типа и цитотоксических ответов CD8+ при совместном введении внутрикожно с ДНК-вакциной). Clinic Diagnost Laborat Immun 11, 711-719.
Schmid-Grendelmeier, P., and Crameri, R. (2001). Recombinant allergens for skin testing. (Рекомбинантные аллергены для кожного тестирования). Int Arch Allergy Immunol 125, 96-111.
Schodel, F., Enders, G., Jung, M.C, and Will, H. (1990). Recognition of a hepatitis В virus nucleocapsid T-cell epitope expressed as a fusion protein with the subunit В of Escherichia coli heat labile enterotoxin in attenuated salmonellae. (Распознавание Т-клеточного эпитопа нуклеокапсида вируса гепатита С, экспрессируемого в виде слитого белка с субъединицей В термолабильного энтеротоксина Escherichia coli в аттенюированных сальмонеллах). Vaccine 8, 569-572.
Shaw, C.A., and Starnbach, M.N. (2003). Using Modified Bacterial Toxins to Deliver Vaccine Antigens. ASM News 69, 384-389. Silva, A.J., Mohan, A., and Benitez, J.A. (2003). Cholera vaccine candidate 638: intranasal immunogenicity and expression of a foreign antigen from the pulmonary pathogen Coccidioides immitis. (Кандидат холерной вакцины 638 - интраназальная иммуногенность и экспрессия чужеродного антигена, выделенного из легочного патогена Coccidioides immitis). Vaccine 21, 4715-4721.
Smerdou, С, Anton, I.M., Plana, J., Curtiss, R., 3rd, and Enjuanes, L (1996). A continuous epitope from transmissible gastroenteritis virus S protein fused to E. coli heat-labile toxin В subunit expressed by attenuated Salmonella induces serum and secretory immunity. (Постоянный эпитоп из S-белка трансмиссивного вируса гастроэнтерита, слитый с субъединицей В термолабильного токсина E. coli, экспрессируемый аттенюированной Salmonella, индуцирует сывороточный и секреторный иммунитет). Virus Res 41, 1-9.
Somner, E.A., Ogun, S.A., Sinha, K.A., Spencer Valero, L.M., Lee, J.J., Harrison, J.A., Holder, A.A., Hormaeche, C.E., and Khan, C.M. (1999). Expression of disulphide - bridge-dependent conformational epitopes and immunogenicity of the carboxy-terminal 19 kDa domain of Plasmodium yoelii merozoite surface protein-1 in live attenuated Salmonella vaccine strains. (Экспрессия зависимых от дисульфидных мостиков конформационных эпитопов и иммуногенность карбокси-концевого домена 19 кД поверхностного белка-1 мерозитов Plasmodium yoelii в живых аттенюированных вакцинных штаммах Salmonella. Microbiology 145 (часть 1), 221-229.
Sory, M.P., and Cornelis, G.R. (1990). Delivery of the cholera toxin В subunit by using a recombinant Yersinia enterocolitica strain as a live oral carrier. (Доставка субъединицы В холерного токсина с использованием рекомбинантного штамма Yersinia enterocolitica в качестве живого перорального носителя). Res Microbiol 141, 921-929.
Spangrude, G.J., Sacchi, F., Hill, H.R., Van Epps, D.E., and Daynes, R.A. (1985). Inhibition of lymphocyte and neutrophil chemotaxis by pertussis toxin. (Ингибирование хемотаксиса лимфоцитов и нейтрофилов посредством токсина коклюша). J Immunol 135, 4135-4143.
Su, G.F., Brahmbhatt, H.N., de Lorenzo, V., Wehland, J., and Timmis, K.N. (1992). Extracellular export of Shiga toxin B-subunit/haemolysin A (C-terminus) fusion protein expressed in Salmonella typhimurium aroA-mutant and stimulation of B-subunit specific antibody responses in mice. (Внеклеточный экспорт слитого белка В-субъединицы шига-токсина/гемолизина А (С-конца), экспрессируемого в мутанте Salmonella typhimurium aroA, и стимуляция ответов В-субъединица-специфических антител у мышей). Microb Pathog 13, 465-476.
Thungapathra, M., Sharma, С, Gupta, N., Ghosh, R.K., Mukhopadhyay, A., Koley, H., Nair, G.В., and Ghosh, A. (1999). Construction of a recombinant live oral vaccine from a non-toxigenic strain of Vibrio cholerae 01 serotype inaba biotype E1 Tor and assessment of its reactogenicity and immunogenicity in the rabbit model. (Конструирование рекомбинантной живой пероральной вакцины из нетоксигенного штамма Vibrio cholerae 01 серотип inaba биотип E1 Tor и оценка его реактогенности и иммуногенности на модели на кроликах). Immunol Lett 68, 219-227.
Todar, K. (2002). Mechanism of bacterial pathogenicity: protein toxins. Todar's Online Textbook of Bacteriology. (Механизм бактериальной патогенности: белковые токсины. Основное руководство по бактериологии Тодара): http://textbookofbacteriology.net/proteintoxins.html.
Tzschaschel, В.D., Guzman, С.A., Timmis, K.N., and de Lorenzo, V. (1996а). An Escherichia coli hemolysin transport system-based vector for the export of polypeptides: export of Shiga-like toxin NeB subunit by Salmonella typhimurium aroA. (Система транспорта гемолизина Escherichia coli на основе вектора для экспорта полипептидов: экспорт субъединицы NeB шига-подобного токсина посредством Salmonella typhimurium aroA). Nat Biotechnol 14, 765-769.
Tzschaschel, В.D., Klee, S.R., de Lorenzo, V., Timmis, K.N., and Guzman, C.A. (1996b). Towards a vaccine candidate against Shigella dysenteriae 1: expression of the Shiga toxin B-subunit in an attenuated Shigella flexneri aroD carrier strain. (К созданию потенциальной вакцины против Shigella dysenteriae 1: экспрессия В-субъединицы шига-токсина в аттенюированном штамме-носителе Shigella flexneri aroD). Microb Pathog 21, 277-288.
van Ginkel, F.W., Jackson, R.J., Yuki, Y., and McGhee, J.R. (2000). Cutting edge: the mucosal adjuvant cholera toxin redirects vaccine proteins into olfactory tissues. (Дающее преимущество свойство - адъювантный холерный токсин для слизистых перенаправляет вакцинные белки в обонятельные ткани). J Immunol 165, 4778-4782.
Vertiev, Y.V., Zdanovsky, A.G., Shevelev, А.В., Bonnskaya, S. A., Gening, E.L., Martin, Т., Ivanov, P.A., and Yankovsky, N.K. (2001). Recombinant Listeria strains producing the nontoxic L-chain of botulinum neurotoxin A in a soluble form. (Рекомбинантные штаммы Listeria, продуцирующие нетоксичную L-цепь ботулинического нейротоксина А в растворимой форме). Res Microbiol 152, 563-567.
Walker, M.J., Rohde, M., Timmis, K.N., and Guzman, C.A. (1992). Specific lung mucosal and systemic immune responses after oral immunization of mice with Salmonella typhimurium aroA, Salmonella typhi Ty21a, and invasive Escherichia coli expressing recombinant pertussis toxin S1 subunit. (Специфические легочные ответы слизистых и системные иммунные ответы после пероральной иммунизации мышей Salmonella typhimurium aroA, Salmonella typhi Ty21 а и инвазионной Escherichia coli, экспрессирующей рекомбинантную S1-субъединицу токсина коклюша). Infect Immun 60, 4260-4268.
Ward, S.J., Douce, G., Figueiredo, D., Dougan, G., and Wren, B.W. (1999). Immunogenicity of a Salmonella typhimurium aroA aroD vaccine expressing a nontoxic domain of Clostridium difficile toxin А. (Иммуногенность вакцины Salmonella typhimurium aroA aroD, экспрессирующей нетоксичный домен токсина A Clostridium difficile). Infect Immun 67, 2145-2152.
Wiener, M.С. (2000). Bacterial export takes its Tol. (Бактериальный экспорт использует свой Tol). Structure 8, FM 71-175.
Wu, S., Beier, M., Sztein, M.В., Galen, J., Pickett, Т., Holder, A.A., Gomez-Duarte, O.G., and Levine, M.M. (2000). Construction and immunogenicity in mice of attenuated Salmonella typhi expressing Plasmodium falciparum merozoite surface protein 1 (MSP-1) fused to tetanus toxin fragment (Конструирование и иммуногенность у мышей аттенюированной Salmonella typhi, экспрессирующей поверхностный белок 1 мерозоитов Plasmodium falciparum (MSP-1), слитый с фрагментом С столбнячного токсина). J Biotechnol 83, 125-135.
Zheng, J.P., Zhang, Z.S., Li, S.Q., Liu, X.X., Yuan, S. L1 Wang, P., Zhan, D.W., Wang, L C, and Huang, C.F. (2005). Construction of a novel Shigella live-vector strain co-expressing CS3 and LTB/STm of enterotoxigenic E. coli. (Конструирование нового живого векторного штамма Shigella, соэкспрессирующего CS3 и LTB/STm энтеротоксигенной E. coli). World J Gastroenterol 11, 3411-3418.
Zhu, C, Ruiz-Perez, F., Yang, Z., Мао, Y., Hackethal, V.L, Greco, K.М., Choy, W., Davis, K., Butter-ton, J.R., and Boedeker, E.C. (2006). Delivery of heterologous protein antigens via hemolysin or autotransporter systems by an attenuated ler mutant of rabbit enteropathogenic Escherichia coli. (Доставка гетерологичных белковых антигенов посредством систем гемолизина или аутотранспортеров с помощью ler-мутанта или кроличьей энтеропатогенной Escherichia coli). Vaccine 24, 3821-3831.
Claims (21)
1. Микроорганизм-носитель нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины, включающий первый компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один полный или неполный антиген из по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, второй компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один белковый токсин и/или по меньшей мере одну субъединицу белкового токсина, третий компонент, состоящий по меньшей мере из одного первого подкомпонента, представленного по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере одну систему транспорта, облегчающую экспрессию продуктов экспрессии первого и второго вышеупомянутых компонентов на наружной поверхности микроорганизма и/или облегчающую секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и/или кодирующей по меньшей мере одну сигнальную последовательность, которая облегчает секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и/или, необязательно, из второго подкомпонента, представленного по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один белок для лизиса микроорганизма в цитозоле клеток млекопитающих и для внутриклеточного высвобождения плазмид или векторов экспрессии, которые содержатся в лизированном микроорганизме, и четвертый компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью для по меньшей мере одной последовательности активации для экспрессии по меньшей мере одного первого, второго или третьего компонентов, при этом указанная последовательность активации активируется в микроорганизме и/или является специфической для клетки ткани, специфической для опухолевой клетки, макрофаг-специфической, дендрит-специфической, лимфоцит-специфической, функция-специфической или неспецифической в отношении клетки, причем любой первый, второй, третий или четвертый компоненты, представленные в указанном микроорганизме более одного раза, являются независимо друг от друга идентичными или отличающимися, при этом первый и второй компоненты отличны друг от друга.
2. Микроорганизм по п.1, который выбран из группы, включающей бактерии, грамположительной бактерии, грамотрицательной бактерии и эукариотической клетки, а именно, Escherichia spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Yersinia spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio spp., Vibrio cholerae, Listeria spp., Listeria monocytogenes, Shigella spp., Shigella flexneri, Yersinia spp.H Pseudomonas spp., при этом вирулентность микроорганизма может быть аттенюирована.
3. Микроорганизм по п.1, который выбран из группы, включающей бактерии, грамположительной бактерии, грамотрицательной бактерии и эукариотической клетки, а именно, Escherichia spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Yersinia spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio spp., Listeria spp., Listeria monocytogenes, Shigella spp., Shigella flexneri, Yersinia spp.H Pseudomonas spp., при этом вирулентность микроорганизма может быть аттенюирована.
4. Микроорганизм по п.1, в котором по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, соответствующий первому компоненту, выбран из группы, включающей следующие белки дикого типа и их известные мутантные формы: рецептор, внеклеточная, трансмембранная или внутриклеточная часть рецептора, молекула адгезии, внеклеточная, трансмембранная или внутриклеточная часть молекулы адгезии, белок сигнальной трансдукции, белок клеточного цикла, фактор транскрипции, белок дифференцировки, эмбриональный белок, вирусный белок, аллерген, белок микробного патогена, белок эукариотического патогена, белок антигена рака яичка, белок опухолевого антигена и/или специфический белок клетки ткани, где клетка ткани выбрана из группы, включающей клетку щитовидной железы, молочной железы, слюнной железы, лимфатического узла, слизистой оболочки желудка, почки, яичника, простаты, шейки матки, серозной оболочки мочевого пузыря и невуса.
5. Микроорганизм по п.4, в котором по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, соответствующий первому компоненту, выбран из группы, включающей следующие белки дикого типа и их известные мутантные формы: Her-2/neu, андрогенный рецептор, эстрогенный рецептор, midkine-рецептор, рецептор EGF, рецептор ERBB2, ERBB4, рецептор TRAIL, FAS, рецептор TNFα, рецептор TGF-β, лактоферриновый рецептор, основной миелин, α-лактальбумин, GFAP, фибриллярный кислый белок, тирозиназа, EGR-1, MUC1, c-Raf (Raf-1), A-Raf, B-Raf, B-RafV599E, B-RafV600E, B-Raf KD, домен киназы B-RafV600E, B-Raf V600E KD, домен киназы KD B-RafV600E, домен киназы B-Raf, домен киназы KD B-Raf, N-Ras, K-Ras, H-Ras, Bcl-2, Bcl-X, Bcl-W, Bfl-1, Brag-1, Mcl-1, Al, Bax, BAD, Bak, Bcl-Xs, Bid, Bik, Hrk, Bcr/abl, Myb, C-Met, IAP1, IAO2, XIAP, ML-IAP LIVIN, сурвивин, APAF-1, циклин D(1-3), циклин E, циклин А, циклин В, циклин H, Cdk-1, Cdk-2, Cdk-4, Cdk-6, Cdk-7, Cdc25C, p16, p15, p21, p27, p18, pRb, p107, p130, E2F(1-5), GAAD45, MDM2, PCNA, ARF, PTEN, APC, BRCA, Akt, PI3K, mTOR, p53 и гомологи, C-Myc, NFkB, c-Jun, ATF-2, Sp1, простата-специфический антиген (PSA), карциноэмбриональный антиген, α-фетопротеин, PAP; PSMA; STEAP; MAGE, MAGE-1, MAGE-3, NY-ESO-1, PSCA, MART, GplOO, тирозиназа, GRP, TCF-4, вирусные антигены вирусов ВИЧ, HPV, HCV, HPV, EBV, CMV, HSV, вируса гриппа, вируса гриппа типа А, вируса гриппа типа А (H5N1) и (H3N2), вируса гриппа типа В, вируса гриппа типа С, гемагглютинины, гемагглютинин H1, гемагглютинин Н5, гемагглютинин Н7, гемагглютинин НА1 (предпочтительно из вируса гриппа А (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1)),гемагглютинин НА 12 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1)), гемагглютинин НА12С (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1 (KAN-1)2004(H5N-1)), нейрамидазу, р60, LLO, уреазу, CSP, калфлагин и/или СРВ, или в котором по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, соответствующий первому компоненту, выбран из группы киназ, включающей следующие белки дикого типа и их известные мутантные формы: (регистрационные номера приведены в скобках): AAK1 (NM 014911), AATK (NM 004920), ABL1 (NM 005157), ABL2 (NM 005158), ACK1 (NM 005781), ACVR1 (NM 001105), ACVR1B (NM 020328), ACVR2 (NM 001616), ACVR2B (NM 001106), ACVRL1 (NM 000020), ADCK1 (NM 020421), ADCK2 (NM 052853), ADCK4 (NM 024876), ADCK5 (NM 174922), ADRBK1 (NM 001619), ADRBK2 (NM 005160), AKT1 (NM 005163), AKT2 (NM 001626), AKT3 (NM 005465), ALK (NM 004304), ALK7 (NM 145259), ALS2CR2 (NM 018571), ALS2CR7 (NM 139158), AMHR2 (NM 020547), ANKK1 (NM 178510), ANKRD3 (NM 020639), APEG1 (NM 005876), ARAF (NM 001654), ARK5 (NM 014840), ATM (NM 000051), ATR (NM 001184), AURKA (NM 003600), AURKB (NM 004217), AURKC (NM 003160), AXL (NM 001699), BCKDK (NM 005881), BCR (NM 004327), BIKE (NM 017593), BLK (NM 001715), BMPR1 A (NM 004329), BMPR1 В (NM 001203), BMPR2 (NM 001204), BMX (NM 001721), BRAF (NM 004333), BRD2 (NM 005104), BRD3 (NM 007371), BRD4 (NM 014299), BRDT (NM 001726), BRSK1 (NM 032430), BRSK2 (NM 003957), BTK (NM 000061), BUB1 (NM 004336), BUB1 В (NM 001211), CABC1 (NM 020247), CAMK1 (NM 003656), CaMK1b (NM 198452), CAMK1D (NM 020397), CAMK1G (NM 020439), CAMK2A (NM 015981), CAMK2B (NM 001220), CAMK2D (NM 001221), CAMK2G (NM 001222), CAMK4 (NM 001744), CAMKK1 (NM 032294), CAMKK2 (NM 006549), CASK (NM 003688), CCRK (NM 012119), CDC2 (NM 001786), CDC2L1 (NM 001787), CDC2L5 (NM 003718), CDC42BPA (NM 014826), CDC42BPB (NM 006035), CDC7L1 (NM 003503), CDK10 (NM 003674), CDK11 (NM 015076), CDK2 (NM 001798), CDK3 (NM 001258), CDK4 (NM 000075), CDK5 (NM 004935), CDK6 (NM 001259), CDK7 (NM 001799), CDK8 (NM 001260), CDK9 (NM 001261), CDKL1 (NM 004196), CDKL2 (NM 003948), CDKL3 (NM 016508), CDKL4 (NM 001009565), CDKL5 (NM 003159), CHEK1 (NM 001274), CHUK (NM 001278), CIT (NM 007174), CLK1 (NM 004071), CLK2 (NM 003993), CLK3 (NM 003992), CLK4 (NM 020666), CRK7 (NM 016507), CSF1R (NM 005211), CSK (NM 004383), CSNK1 A1 (NM 001892), CSNK1 D(NM 001893), CSNK1E (NM 001894), CSNK1 G1 (NM 022048), CSNK1 G2 (NM 001319), CSNK1 G3 (NM 004384), CSNK2A1 (NM 001895), CSNK2A2 (NM 001896), DAPK1 (NM 004938), DAPK2 (NM 014326), DAPK3 (NM 001348), DCAMKL1 (NM 004734), DCAMKL2 (NM 152619), DCAMKL3 (XM 047355), DDR1 (NM 013993), DDR2(NM 006182), DMPK (NM 004409), DMPK2 (NM 017525.1), DYRK1 A (NM 001396), DYRK1 В (NM 006484), DYRK2 (NM 006482), DYRK3 (NM 003582), DYRK4 (NM 003845), EEF2K (NM 013302), EGFR (NM 005228), EIF2AK3 (NM 004836), EIF2AK4 (NM_001013703), EPHA1 (NM 005232), EPHA10 (NM 001004338), EPHA2 (NM 004431), EPHA3 (NM 005233), EPHA4 (NM 004438), EPHA5 (NM 004439), EPHA6 (XM 114973), EPHA7 (NM 004440), EPHA8 (NM 020526), EPHB1 (NM 004441), EPHB2 (NM 017449), EPHB3 (NM 004443), EPHB4 (NM 004444), EPHB6 (NM 004445), ERBB2 (NM 004448), ERBB3 (NM 001982), ERBB4 (NM 005235), ERK8 (NM 139021), ERN1 (NM 001433), ERN2 (NM 033266), FASTK (NM 025096), FER (NM 005246), FES (NM 002005), FGFR1 (NM 000604), FGFR2 (NM 022970), FGFR3 (NM 000142), FGFR4 (NM 022963), FGR (NM 005248), FLJ23074 (NM 025052), FLJ23119 (NM 024652), FLJ23356 (NM 032237), FLT1 (NM 002019), FLT3 (NM 0041 19), FLT4 (NM 002020), FRAP1 (NM 004958), FRK (NM 002031), FYN (NM 002037), GAK (NM 005255), GPRK5 (NM 005308), GPRK6 (NM 002082), GPRK7 (NM 139209), GRK4 (NM 005307), GSG2 (NM 031965), GSK3A (NM 019884), GSK3B (NM 002093), GUCY2C (NM 004963), GUCY2D (NM 000180), GUCY2F (NM 001522), H11 (NM 014365), HAK (NM 052947), HCK (NM 0021 10), HIPK1 (NM 152696), HIPK2 (NM 022740), HIPK3 (NM 005734), HIPK4 (NM 144685), HRI (NM 014413), HUNK (NM 014586), ICK (NM 016513), IGF1 R (NM 000875), IKBKB (NM 001556), IKBKE (NM 014002), ILK (NM 004517), INSR (NM 000208), INSRR (NM 014215), IRAKI (NM 001569), IRAK2 (NM 001570), IRAK3 (NM 007199), IRAK4 (NM 016123), ITK (NM 005546), JAK1 (NM 002227), JAK2 (NM 004972), JAK3 (NM 000215), KDR (NM 002253), KIS (NM 144624), KIT (NM 000222), KSR (XM 290793), KSR2 (NM 173598), LAK (NM 025144), LATS1 (NM 004690), LATS2 (NM 014572), LCK (NM 005356), LIMK1 (NM 016735), LIMK2 (NM 005569), LMR3 (XM 055866), LMTK2 (NM 014916), LOC149420 (NM 152835), LOC51086 (NM 015978), LRRK2 (XM 058513), LTK (NM 002344), LYN (NM 002350), MAK (NM 005906), MAP2K1 (NM 002755), MAP2K2 (NM 030662), MAP2K3 (NM 002756), MAP2K4 (NM 003010), MAP2K5 (NM 002757), MAP2K6 (NM 002758), MAP2K7 (NM 005043), MAP3K1 (XM 042066), MAP3K10 (NM 002446), MAP3K11 (NM 002419), MAP3K12 (NM 006301), MAP3K13 (NM 004721), MAP3K14 (NM 003954), MAP3K2 (NM 006609), MAP3K3 (NM 002401), MAP3K4 (NM 005922), MAP3K5 (NM 005923), MAP3K6 (NM 004672), MAP3K7 (NM 003188), MAP3K8 (NM 005204), MAP3K9 (NM 033141), MAP4K1 (NM 007181), MAP4K2 (NM 004579), MAP4K3 (NM 003618), МАР4К4 (NM 145686), MAP4K5 (NM 006575), MAPK1 (NM 002745), MAPK10 (NM 002753), MAPK11 (NM 002751), MAPK12 (NM 002969), МАРК13 (NM 002754), MAPK14 (NM 001315), MAPK3 (NM 002746), MAPK4 (NM 002747), MAPK6 (NM 002748), MAPK7 (NM 002749), MAPK8 (NM 002750), MAPK9 (NM 002752), MAPKAPK2 (NM 032960), MAPKAPK3 (NM 004635), MAPKAPK5 (NM 003668), MARK (NM 018650), MARK2 (NM 017490), MARK3 (NM 002376), MARK4 (NM 031417), MAST1 (NM 014975), MAST205 (NM 015112), MAST3 (XM 038150), MAST4 (XM 291141), MASTL (NM 032844), MATK (NM 139355), MELK (NM 014791), MERTK (NM 006343), MET (NM 000245), MGC33182 (NM 145203), MGC42105 (NM 153361), MGC43306 (C9orf96), MGC8407 (NM 024046), MIDORI (NM 020778), MINK (NM 015716), MKNK1 (NM 003684), MKNK2 (NM 017572), MLCK (NM 182493), MLK4 (NM 032435), MLKL (NM 152649), MOS (NM 005372), MST1 R (NM 002447), MST4 (NM 016542), MUSK (NM 005592), MYLK (NM 053025), MYLK2 (NM 0331 18), MYO3A (NM 017433), MYO3B (NM 138995), NEK1 (NM 012224), NEK10 (NM 152534), NEK11 (NM 024800), NEK2 (NM 002497), NEK3 (NM 002498), NEK4 (NM 003157), NEK5 (MGC75495), NEK6 (NM 014397), NEK7 (NM 133494), NEK8 (NM 178170), NEK9 (NM 0331 16), NLK (NM 016231), NPR1 (NM 000906), NPR2 (NM 003995), NRBP (NM 013392), NRBP2 (NM 178564), NRK (NM 198465), NTRK1 (NM 002529), NTRK2 (NM 006180), NTRK3 (NM 002530), OBSCN (NM 052843), OSR1 (NM 005109), PACE-1 (NM 020423), PAK1 (NM 002576), PAK2 (NM 002577), PAK3 (NM 002578), PAK4 (NM 005884), PAK6 (NM 020168), PAK7 (NM 020341), PASK (NM 015148), PCTK1 (NM 006201), PCTK2 (NM 002595), PCTK3 (NM 212503), PDGFRA (NM 006206), PDGFRB (NM 002609), PDK1 (NM 002610), PDK2 (NM 00261 1), PDK3 (NM 005391), PDK4 (NM 002612), PDPK1 (NM 002613), PFTK1 (NM 012395), PHKG1 (NM 006213), PHKG2 (NM 000294), PIK3R4 (NM 014602), PIM1 (NM 002648), PIM2 (NM 006875), PIM3 (NM 001001852), PINK1 (NM 032409), PKE (NM 173575), PKMYT1 (NM 004203), pknβ (NM 013355), PLK (NM 005030), PLK3 (NM 004073), PRKAA1 (NM 006251), PRKAA2 (NM 006252), PRKACA (NM 002730), PRKACB (NM 002731), PRKACG (NM 002732), PRKCA (NM 002737), PRKCB1 (NM 002738), PRKCD (NM 006254), PRKCE (NM 005400), PRKCG (NM 002739), PRKCH (NM 006255), PRKCI (NM 002740), PRKCL1 (NM 002741), PRKCL2 (NM 006256), PRKCM (NM 002742), PRKCN (NM 005813), PRKCQ (NM 006257), PRKCZ (NM 002744), PRKD2 (NM 016457), PRKDC (NM 006904), PRKG1 (NM 006258), PRKG2 (NM 006259), PRKR (NM 002759), PRKWNK1 (NM 018979), PRKWNK2 (NM 006648), PRKWNK3 (NM 020922), PRKWNK4 (NM 032387), PRKX (NM 005044), PRKY (NM 002760), PRPF4B (NM 003913), PSKH1 (NM 006742), PSKH2 (NM 033126), PTK2 (NM 005607), PTK2B (NM 004103), PTK6 (NM 005975), PTK7 (NM 002821), PTK9 (NM 002822), PTK9L (NM 007284), PXK (NM 017771), QSK (NM 025164), RAD53 (NM 007194), RAF1 (NM 002880), RAGE (NM 014226), RET (NM 020975), RHOK (NM 002929), RIOK1 (NM 031480), RIOK2 (NM 018343), RIPK1 (NM 003804), RIPK2 (NM 003821), RIPK3 (NM 006871), RIPK5 (NM 015375), RNASEL (NM 021133), ROCK1 (NM 005406), ROCK2 (NM 004850), ROR1 (NM 005012), ROR2 (NM 004560), ROS1 (NM 002944), RPS6KA1 (NM 002953), RPS6KA2 (NM 021135), RPS6KA3 (NM 004586), RPS6KA4 (NM 003942), RPS6KA5 (NM 004755), RPS6KA6 (NM 014496), RPS6KB1 (NM 003161), RPS6KB2 (NM 003952), RPS6KC1 (NM 012424), RPS6KL1 (NM 031464), RYK (NM 002958), SBK (XM 370948), SCYL1 (NM 020680), SCYL2 (NM 017988), SGK (NM 005627), SgK069 (SU SgK069), SgK085 (XM 373109), SgK110 (SU_SgKHO), SGK2 (NM 016276), SgK223 (XM 291277), SgK269 (XM 370878), SgK424 (CGP SgK424), SgK493 (SU_SgK493), SgK494 (NM 144610), SgK495 (NM 032017), SGKL (NM 013257), SK681 (NM 001001671), SLK (NM 014720), SMG1 (NM 015092), SNARK (NM 030952), SNF1 LK (NM 173354), SNF1 LK2 (NM 015191), SNK (NM 006622), SNRK (NM 017719), SRC (NM 005417), SRMS (NM 080823), SRPK1 (NM 003137), SRPK2 (NM 003138), SSTK (NM 032037), STK10 (NM 005990), STK11 (NM 000455), STK16 (NM 003691), STK17A (NM 004760), STK17B (NM 004226), STK18 (NM 014264), STK19 (NM 032454), STK22B (NM 053006), STK22C (NM 052841), STK22D (NM 032028), STK23 (NM 014370), STK24 (NM 003576), STK25 (NM 006374), STK3 (NM 006281), STK31 (NM 031414), STK32B (NM 018401), STK33 (NM 030906), STK35 (NM 080836), STK36 (NM 015690), STK38 (NM 007271), STK38L (NM 015000), STK39 (NM 013233), STK4 (NM 006282), STLK5 (NM 001003787), STYK1 (NM 018423), SUDD (NM 003831), SYK (NM 003177), TAF1 (NM 138923), TAF1 L (NM 153809), TAO1 (NM 004783), TAOK1 (NM 020791), TAOK3 (NM 016281), TBCK (NM 0331 15), TBK1 (NM 013254), TEC (NM 003215), ТЕК (NM 000459), TESK1 (NM 006285), TESK2 (NM 007170), TEX 14 (NM 031272), TGFBR1 (NM 004612), TGFBR2 (NM 003242), TIE (NM 005424), TIF1 (NM 003852), TLK1 (NM 012290), TLK2 (NM 006852), TNIK (NM 015028), TNK1 (NM 003985), TOPK (NM 018492), TP53RK (NM 033550), TRAD (NM 007064), TRIB1 (NM 025195), TRIB2 (NM 021643), TRIB3 (NM 021 158), TRIM28 (NM 005762), TRIM33 (NM 015906), TRIO (NM 0071 18), TRPM6 (NM 017662), TRPM7 (NM 017672), TRRAP (NM 003496), TSSK4 (NM 174944), TTBK1 (NM 032538), TTBK2 (NM 173500), TTK (NM 003318), TTN (NM 003319), TXK (NM 003328), TYK2 (NM 003331), TYR03 (NM 006293), ULK1 (NM 003565), ULK2 (NM 014683), ULK3 (NM 015518), ULK4 (NM 017886), VRK1 (NM 003384), VRK2 (NM 006296), VRK3 (NM 016440), WEE1 (NM 003390), Wee1 В (NM 173677), YANK1 (NM 145001), YES1 (NM 005433), ZAK (NM 016653) и/или ZAP70 (NM 001079).
6. Микроорганизм по п.1, в котором второй компонент выбран из группы, включающей бактериальный токсин, энтеротоксин, экзотоксин, токсин типа I, токсин типа II, токсин типа III, токсин типа IV, токсин типа V, токсин RTX, токсин АВ, токсин А-В, токсин А/В, токсин А+В, токсин А-5 В и токсин АВ5.
7. Микроорганизм по п.6, в котором второй компонент выбран из группы, включающей токсин аденилатциклазы, токсин сибирской язвы, токсин сибирской язвы (EF), токсин сибирской язвы (LF), ботулинический токсин, холерный токсин (СТ, Ctx), субъединицу холерного токсина В (СТВ, CtxB), дифтерийный токсин (DT, Dtx), токсин Е. coli LT, термолабильный энтеротоксин Е. coli (LT), субъединицу В термолабильного энтеротоксина Е. coli (LTB), токсин Е. coli ST, термостабильный энтеротоксин Е. coli (ST), эритрогенный токсин, токсин эксфолиатина, экзотоксин А, энтеротоксин Perfringens, токсин коклюша (РТ, Ptx), шига-токсин (ST, Stx), субъединицу В шига-токсина (STB, StxB), шига-подобный токсин, энтеротоксины Staphylococcus, столбнячный токсин (ТТ), токсин синдрома токсического шока (TSST-1), веро-токсин (VT), токсин А (ТА) и токсин В (ТВ) Clostridium difficile, летальный токсин (LT) и геморрагический токсин (НТ) из Clostridium sordellii и α-токсин (AT) из Clostridium novyi.
8. Микроорганизм по п.1, в котором первый и второй компоненты связаны друг с другом с облегчением экспрессии и/или секреции слитого белка, кодируемого обоими вышеуказанными компонентами.
9. Микроорганизм по п.8, в котором слитый белок выбран из группы, включающей CtxB-PSA, CtxB-B-RafV600E KD, CtxB-домен киназы В-RafV600E, CtxB-домен киназы KD B-Raf V600E, CtxB-B-Raf, CtxB-B-Raf KD, CtxB домен киназы KD B-Raf, CtxB-HAl и CtxB-HA12C.
10. Микроорганизм по п.1, в котором первый подкомпонент выбран из группы, включающей систему секреции типа I, систему секреции типа II, систему секреции типа III, систему секреции типа IV, систему секреции типа V, гемолизиновую систему транспорта (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора), гемолизиновую систему транспорта (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем не-hly-специфического бактериального промотора), транспортный сигнал для белка S-слоя (Rsa A) Caulobacter crescentus, транспортный сигнал для белка TolC Escherichia coli, сигнал секреции Vtgss и сигналы секреции, выделенные из листериолизина, р60 и/или ActA, а второй подкомпонент выбран из группы, включающей эндолизины, литический белок грамположительных бактерий, литический белок Listeria monocytogenes, PLY551 Listeria monocytogenes и холин Listeria monocytogenes.
11. Микроорганизм по п.10, в котором первый подкомпонент представляет собой по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую только одну транспортную систему, которая облегчает сопутствующую экспрессию продуктов экспрессии первого и второго компонентов на наружной поверхности микроорганизма и/или облегчает сопутствующую секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую гемолизиновую транспортную систему (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора) или гемолизиновую транспортную систему (сигнал) Escherichia coli (нуклеотидные последовательности, включающие HlyA, HlyB и HlyD под контролем не-hly-специфического бактериального промотора).
12. Микроорганизм по п.1, в котором в присутствии первого подкомпонента секретируются продукты экспрессии первого и второго компонентов.
13. Микроорганизм по п.1, в котором первый компонент выбран из группы, включающей B-RafV600E, домен киназы B-RafV600E, В-RafV600E KD, домен киназы KD B-RafV600E, B-Raf KD, домен киназы В-Raf, домен киназы KD B-Raf, простата-специфический антиген (PSA), гемагглютинин НА1 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1)), гемагглютинин НА 12 (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1)), гемагглютинин НА12С (предпочтительно из вируса гриппа A (A/Thailand/1(KAN-1)2004(H5N1)), второй компонент выбран из группы, включающей субъединицу В холерного токсина (СТВ, CtxB), субъединицу В термолабильного энтеротоксина Е. coli (LTB), столбнячный токсин (ТТ), первый подкомпонент выбран из группы, включающей сигнал гемолизинового транспорта HlyA Escherichia coli вместе с компонентами системы секреции Hly (нуклеотидными последовательностями, включающими HlyA, HlyB и HlyD под контролем hly-специфического промотора), четвертый компонент выбран из группы, включающей эндогенный промотор локуса hly Е. coli, при этом первый и второй компоненты связаны друг с другом с облегчением экспрессии секретируемого слитого белка, кодируемого обоими вышеуказанными компонентами.
14. Фармацевтическая композиция для стимулирования иммунного ответа, включающая по меньшей мере один микроорганизм, предпочтительно в лиофилизированной форме, по любому из пп.1-13 и фармацевтически приемлемый носитель предпочтительно в виде капсулы.
15. Лекарственное средство для стимулирования иммунного ответа, включающее по меньшей мере один микроорганизм по любому из пп.1-13 или по меньшей мере одну фармацевтическую композицию по п.14.
16. Применение микроорганизма по любому из пп.1-13 для приготовления лекарственного средства для лечения и/или профилактики физиологических и/или патофизиологических состояний, выбранных из группы, включающей неконтролируемое деление клеток, злокачественные опухоли, доброкачественные опухоли, солидные опухоли, саркому, карциному, гиперпролиферативные нарушения, карциноиды, саркому Эвинга, саркому Капоши, опухоли головного мозга, опухоли, происходящие из головного мозга, и/или нервной системы, и/или мозговых оболочек, глиом, нейробластомы, рак желудка, рак почки, карциному почечных клеток, рак простаты, карциному простаты, опухоли соединительных тканей, саркому мягких тканей, опухоли поджелудочной железы, опухоли печени, опухоли головы, опухоли шеи, рак пищевода, рак щитовидной железы, остеосаркому, ретинобластому, тимому, рак яичка, рак легкого, бронхиальные карциномы, рак молочной железы, карциному молочной железы, рак кишки, колоректальные опухоли, карциному толстой кишки, карциному прямой кишки, гинекологические опухоли, опухоли яичника/овариальные опухоли, рак матки, рак шейки матки, карциному шейки матки, рак тела матки, карциному тела, эндометриальные карциномы, рак мочевого пузыря, рак полости, рак кожи, базалиому, спиналиому, меланому, внутриглазные меланомы, лейкоз, хронический лейкоз, острый лейкоз, лимфому, инфекцию, вирусную или бактериальную инфекцию, грипп, хроническое воспаление, отторжение органа и аутоиммунные заболевания.
17. Экспрессионная плазмида, включающая первый, второй третий и четвертый компоненты микроорганизма по любому из пп.1-13.
18. Способ получения микроорганизма по любому из пп.1-13, в котором получают экспрессионную плазмиду по п.17, а затем трансформируют микроорганизм данной плазмидой.
19. Вектор экспрессии, включающий первый, второй, третий и четвертый компоненты микроорганизма по любому из пп.1-13.
20. Способ получения микроорганизма по любому из пп.1-13, в котором получают вектор экспрессии по п.19, а затем трансформируют микроорганизм данным вектором экспрессии.
21. Фармацевтический набор для стимулирования иммунного ответа, включающий по меньшей мере один микроорганизм по любому из пп.1-13 или фармацевтическую композицию по п.14, или лекарственное средство по п.15 и фармакологически приемлемый буфер, предпочтительно карбонатный буфер.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US86548406P | 2006-11-13 | 2006-11-13 | |
EP06123974A EP1921149A1 (en) | 2006-11-13 | 2006-11-13 | Microorganisms as carriers of nucleotide sequences coding for antigens and protein toxins, process of manufacturing and uses thereof |
EP06123974.5 | 2006-11-13 | ||
US60/865,484 | 2006-11-13 | ||
US60/939,140 | 2007-05-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009122560A RU2009122560A (ru) | 2010-12-20 |
RU2447145C2 true RU2447145C2 (ru) | 2012-04-10 |
Family
ID=37846081
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009122560/10A RU2447145C2 (ru) | 2006-11-13 | 2007-11-13 | Микроорганизм-носитель нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8669091B2 (ru) |
EP (2) | EP1921149A1 (ru) |
JP (1) | JP5479102B2 (ru) |
KR (1) | KR101505413B1 (ru) |
CN (1) | CN101595219B (ru) |
AR (1) | AR063795A1 (ru) |
AT (1) | ATE469971T1 (ru) |
AU (1) | AU2007321266B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0719003A2 (ru) |
CA (1) | CA2669219A1 (ru) |
CY (1) | CY1111035T1 (ru) |
DE (1) | DE602007006985D1 (ru) |
DK (1) | DK2092067T3 (ru) |
ES (1) | ES2347019T3 (ru) |
HK (1) | HK1138314A1 (ru) |
HR (1) | HRP20100466T1 (ru) |
IL (1) | IL198736A0 (ru) |
ME (1) | ME01846B (ru) |
MX (1) | MX2009005038A (ru) |
NO (1) | NO20092278L (ru) |
NZ (1) | NZ576947A (ru) |
PL (1) | PL2092067T3 (ru) |
PT (1) | PT2092067E (ru) |
RS (1) | RS51416B (ru) |
RU (1) | RU2447145C2 (ru) |
SI (1) | SI2092067T1 (ru) |
TW (1) | TWI394834B (ru) |
UA (1) | UA94974C2 (ru) |
WO (1) | WO2008058944A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200903022B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2760521C2 (ru) * | 2016-09-27 | 2021-11-26 | Вало Терапьютикс Ой | Негенетическая модификация оболочечных вирусов |
Families Citing this family (58)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2331271B1 (es) * | 2007-06-29 | 2010-10-14 | Universidad Del Pais Vasco | Metodo para la internalizacion de bacterias no invasivas en celulas eucariotas. |
US8877201B2 (en) | 2007-10-25 | 2014-11-04 | Wake Forest University Health Sciences | Bordetella outer-membrane protein antigens and methods of making and using the same |
AR070568A1 (es) * | 2008-02-05 | 2010-04-21 | Aeterna Zentaris Gmbh | Bacterias recombinantes con un sistema de secrecion de hemolisina de e. coli y expresion y /o secrecion incrementada de hlya, proceso para producirlas, y sus usos |
US20120020996A1 (en) * | 2008-08-06 | 2012-01-26 | Jonathan Lewis Telfer | Vaccines against clostridium difficile and methods of use |
KR101104077B1 (ko) * | 2008-10-14 | 2012-01-11 | 건국대학교 산학협력단 | Egr-1의 발현을 증가시키는 활성을 갖는 신규한 엔터로박테리아속에 속하는 신규균주 및 그 균주를 포함하는 조성물의 항암제로서의 용도 |
CN101480489B (zh) * | 2008-12-03 | 2012-07-04 | 中国人民解放军第三军医大学 | 疟原虫环子孢子蛋白抗肿瘤增殖和迁移的新用途 |
US8524220B1 (en) | 2010-02-09 | 2013-09-03 | David Gordon Bermudes | Protease inhibitor: protease sensitivity expression system composition and methods improving the therapeutic activity and specificity of proteins delivered by bacteria |
US9597379B1 (en) | 2010-02-09 | 2017-03-21 | David Gordon Bermudes | Protease inhibitor combination with therapeutic proteins including antibodies |
US8771669B1 (en) | 2010-02-09 | 2014-07-08 | David Gordon Bermudes | Immunization and/or treatment of parasites and infectious agents by live bacteria |
GB2478734A (en) * | 2010-03-15 | 2011-09-21 | Sense Proteomic Ltd | Auto-antibody biomarkers of prostate cancer |
KR101229596B1 (ko) * | 2010-05-13 | 2013-02-04 | 한국외국어대학교 연구산학협력단 | 사람 락토페리신 펩티드의 대장균 발현 플라스미드 및 그 용도 |
WO2012028741A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Intercell Ag | Isolated polypeptide of the toxin a and toxin b proteins of c. difficile and uses thereof |
US9856492B2 (en) * | 2011-03-02 | 2018-01-02 | Futuragene Israel Ltd. | Bacterial resistant transgenic plants having dysfunctional T3SS proteins |
CN103687611A (zh) | 2011-03-11 | 2014-03-26 | 阿德瓦希斯公司 | 基于李斯特菌属的佐剂 |
CN103987396A (zh) * | 2011-09-06 | 2014-08-13 | 新加坡科技研究局 | 多肽疫苗 |
US11680273B2 (en) | 2011-09-23 | 2023-06-20 | Loma Linda University | Treatment of autoimmune diseases |
EP3760226A1 (en) | 2011-09-23 | 2021-01-06 | Loma Linda University | Bacterial strains expressing methylase genes and uses thereof |
EP2583975A1 (en) * | 2011-10-21 | 2013-04-24 | Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf | Agents and methods for the expression and secretion of peptides and proteins |
US9902760B2 (en) * | 2011-11-23 | 2018-02-27 | Bioven 3 Limited | Recombinant proteins and their therapeutic uses |
JP2015511602A (ja) | 2012-03-12 | 2015-04-20 | アドバクシス, インコーポレイテッド | リステリアワクチン処理後のサプレッサー細胞機能抑制 |
US9499856B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-11-22 | The Board Institute, Inc. | DDR2 mutations in squamous cell lung cancer |
CN104470537B (zh) * | 2012-05-23 | 2017-04-26 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 表达鼠疫耶尔森氏菌F1‑V融合蛋白的伤寒沙门氏菌Ty21a及其用途 |
EP2878672A4 (en) * | 2012-07-26 | 2016-02-17 | Nat Cancer Ct | FUSIONSGEN OF CEP55-GEN AND RET-GEN |
US9593339B1 (en) | 2013-02-14 | 2017-03-14 | David Gordon Bermudes | Bacteria carrying bacteriophage and protease inhibitors for the treatment of disorders and methods of treatment |
CA2904506A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Bioven 3 Limited | Self-assembling synthetic proteins |
EP2792686A1 (en) | 2013-04-17 | 2014-10-22 | Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf | Methods for the expression of peptides and proteins |
LT2988762T (lt) | 2013-04-25 | 2018-09-25 | Vaximm Ag | Vektoriai, sukonstruoti salmonella pagrindu, skirti vėžio imunoterapijai, nukreiptai į vilmso naviko geną wt1 |
CN105017256A (zh) | 2014-04-29 | 2015-11-04 | 浙江导明医药科技有限公司 | 多氟化合物作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂 |
CA2948570C (en) * | 2014-05-21 | 2023-09-12 | Universitaet Basel | Bacteria-based protein delivery |
EP3166637B1 (en) | 2014-07-10 | 2020-01-29 | The J. David Gladstone Institutes | Compositions and methods for treating dengue virus infection |
WO2016019379A1 (en) * | 2014-08-01 | 2016-02-04 | Northwestern University | Bacterial toxins and uses thereof as ras specific proteases |
MA41218A (fr) * | 2014-12-19 | 2017-10-24 | Advaxis Inc | Combinaison de vaccin à base de listeria comportant des anticorps anti-ox40 ou anti-gitr |
CN106146508A (zh) * | 2015-03-19 | 2016-11-23 | 浙江导明医药科技有限公司 | 优化的联合用药及其治疗癌症和自身免疫疾病的用途 |
US9717745B2 (en) | 2015-03-19 | 2017-08-01 | Zhejiang DTRM Biopharma Co. Ltd. | Pharmaceutical compositions and their use for treatment of cancer and autoimmune diseases |
CA3018308A1 (en) * | 2015-04-28 | 2016-11-03 | Albert Einstein College Of Medicine, Inc. | Treatment of cancer using recall antigens delivered by attenuated bacteria |
JP7266834B2 (ja) | 2015-12-28 | 2023-05-01 | 北海道公立大学法人 札幌医科大学 | 腫瘍抗原ペプチド |
CN105601753A (zh) * | 2016-02-22 | 2016-05-25 | 潍坊医学院 | 结核杆菌噬菌体双组份融合溶菌蛋白及其制备方法和应用 |
SI3432916T1 (sl) | 2016-09-13 | 2020-01-31 | Allergan, Inc. | Stabilizirani ne-protein klostridijski toksin sestavki |
CA3037813A1 (en) | 2016-09-21 | 2018-03-29 | The Governors Of The University Of Alberta | Hepatitis c virus immunogenic compositions and methods of use thereof |
US11180535B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-11-23 | David Gordon Bermudes | Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria |
US11129906B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-09-28 | David Gordon Bermudes | Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria |
TW201922256A (zh) | 2017-10-27 | 2019-06-16 | 中國大陸商浙江導明醫藥科技有限公司 | 治療淋巴樣惡性疾病之方法 |
CN107858430B (zh) * | 2017-11-20 | 2019-01-04 | 武汉迈特维尔生物科技有限公司 | 一种用于诊断预示Her-2过表达型乳腺癌骨转移的基因诊断试剂盒 |
CN109593771B (zh) * | 2018-07-27 | 2022-03-29 | 四川大学华西医院 | 一种人类map2k5第1100位碱基突变基因及其检测试剂盒 |
CN109486832B (zh) * | 2018-12-29 | 2021-11-23 | 中国农业科学院棉花研究所 | 一种创建有限生长株型棉花的方法 |
CN110330548B (zh) * | 2019-06-28 | 2021-03-09 | 哈尔滨医科大学 | 一种抗肿瘤多肽及其在制备抗肿瘤药物中的应用 |
CN110237240A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-09-17 | 上海市肺科医院 | 可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在治疗结核病中的应用 |
WO2021026335A1 (en) * | 2019-08-08 | 2021-02-11 | The Trustees Of Indiana University | Methods for identifying and treating urinary tract infections |
AU2020329191A1 (en) | 2019-08-12 | 2022-03-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Macrophage stimulating 1 receptor (MST1R) variants and uses thereof |
CN113694202B (zh) * | 2020-06-29 | 2023-03-31 | 江苏省中医院 | Ass1或bckdk抑制剂在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用 |
WO2022098213A1 (ko) * | 2020-11-09 | 2022-05-12 | 전남대학교 산학협력단 | 암의 예방 및 치료용 살모넬라 균주 및 이의 용도 |
KR102547393B1 (ko) * | 2021-04-19 | 2023-06-23 | 엠브릭스 주식회사 | 보툴리늄 독소 전위 도메인 및 엔도라이신을 포함하는 단백질 복합체 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
CN117741161A (zh) * | 2021-08-30 | 2024-03-22 | 河南中医药大学 | Plekho2和npm3自身抗体在制备检测桥本甲状腺炎阴虚火旺证试剂盒中的应用 |
CN114921546B (zh) * | 2022-05-13 | 2023-02-21 | 核工业总医院 | circHIPK2作为乳腺癌生物标志物的应用 |
GB202209115D0 (en) * | 2022-06-21 | 2022-08-10 | Chain Biotechnology Ltd | Compositions and methods |
WO2024054673A1 (en) * | 2022-09-09 | 2024-03-14 | Texas Tech University System | Listeria monocytogenes as a vector for tumor-specific delivery of chemotherapeutic agents |
CN115976033B (zh) * | 2022-12-14 | 2024-05-17 | 西南大学 | 瓜实蝇tssk1和tssk3基因及其应用 |
CN116875520A (zh) * | 2023-07-12 | 2023-10-13 | 吉林农业大学 | 表达核糖体失活蛋白的乳酸菌及其在抗轮状病毒中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2092556C1 (ru) * | 1995-08-29 | 1997-10-10 | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Способ введения чужеродных генов в геномы грамотрицательных микроорганизмов, плазмидный вектор ркс47м для введения чужеродных генов в геномы грамотрицательных микроорганизмов, способ конструирования плазмидного вектора ркс47м |
WO1998023763A1 (en) * | 1996-11-29 | 1998-06-04 | The General Hospital Corporation | Heterologous antigens in live cell v. cholerae strains |
RU2216590C1 (ru) * | 2002-02-26 | 2003-11-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Рекомбинантный аттенуированный штамм бактерий salmonella typhimurium t10/pkhbc - продуцент корового антигена вируса гепатита в |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02170053A (ja) * | 1988-12-23 | 1990-06-29 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 微生物の検出方法及び装置 |
AU4070097A (en) * | 1996-08-16 | 1998-03-06 | Uab Research Foundation, The | Mucosal immunogens for novel vaccines |
US20030235594A1 (en) * | 1999-09-14 | 2003-12-25 | Antigen Express, Inc. | Ii-Key/antigenic epitope hybrid peptide vaccines |
WO2001029233A2 (en) * | 1999-10-20 | 2001-04-26 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Chimeric immunogenic compositions and nucleic acids encoding them |
GB0030067D0 (en) * | 2000-12-11 | 2001-01-24 | Univ Bristol | Therapeutic agent |
DE10208653A1 (de) | 2002-02-28 | 2003-09-18 | Medinnova Ges Med Innovationen | Mikroorganismus als Träger von Nukleotidsequenzen kodierend für Zellantigene zur Behandlung von Tumoren |
-
2006
- 2006-11-13 EP EP06123974A patent/EP1921149A1/en not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-11-13 EP EP07822513A patent/EP2092067B1/en active Active
- 2007-11-13 RU RU2009122560/10A patent/RU2447145C2/ru active
- 2007-11-13 KR KR1020097012089A patent/KR101505413B1/ko active IP Right Grant
- 2007-11-13 AR ARP070105040A patent/AR063795A1/es unknown
- 2007-11-13 PT PT07822513T patent/PT2092067E/pt unknown
- 2007-11-13 ME MEP-2010-387A patent/ME01846B/me unknown
- 2007-11-13 DE DE602007006985T patent/DE602007006985D1/de active Active
- 2007-11-13 CA CA002669219A patent/CA2669219A1/en not_active Abandoned
- 2007-11-13 DK DK07822513.3T patent/DK2092067T3/da active
- 2007-11-13 SI SI200730328T patent/SI2092067T1/sl unknown
- 2007-11-13 CN CN200780044576.6A patent/CN101595219B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2007-11-13 US US11/939,254 patent/US8669091B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-11-13 RS RSP-2010/0387A patent/RS51416B/en unknown
- 2007-11-13 BR BRPI0719003-4A patent/BRPI0719003A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2007-11-13 MX MX2009005038A patent/MX2009005038A/es active IP Right Grant
- 2007-11-13 NZ NZ576947A patent/NZ576947A/en unknown
- 2007-11-13 UA UAA200906068A patent/UA94974C2/ru unknown
- 2007-11-13 AU AU2007321266A patent/AU2007321266B2/en not_active Ceased
- 2007-11-13 PL PL07822513T patent/PL2092067T3/pl unknown
- 2007-11-13 ES ES07822513T patent/ES2347019T3/es active Active
- 2007-11-13 JP JP2009536716A patent/JP5479102B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-11-13 WO PCT/EP2007/062237 patent/WO2008058944A1/en active Application Filing
- 2007-11-13 TW TW096142857A patent/TWI394834B/zh not_active IP Right Cessation
- 2007-11-13 AT AT07822513T patent/ATE469971T1/de active
-
2009
- 2009-05-04 ZA ZA200903022A patent/ZA200903022B/xx unknown
- 2009-05-13 IL IL198736A patent/IL198736A0/en active IP Right Grant
- 2009-06-12 NO NO20092278A patent/NO20092278L/no not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-01-21 HK HK10100634.0A patent/HK1138314A1/zh not_active IP Right Cessation
- 2010-08-19 CY CY20101100767T patent/CY1111035T1/el unknown
- 2010-08-25 HR HR20100466T patent/HRP20100466T1/hr unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2092556C1 (ru) * | 1995-08-29 | 1997-10-10 | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Способ введения чужеродных генов в геномы грамотрицательных микроорганизмов, плазмидный вектор ркс47м для введения чужеродных генов в геномы грамотрицательных микроорганизмов, способ конструирования плазмидного вектора ркс47м |
WO1998023763A1 (en) * | 1996-11-29 | 1998-06-04 | The General Hospital Corporation | Heterologous antigens in live cell v. cholerae strains |
RU2216590C1 (ru) * | 2002-02-26 | 2003-11-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Рекомбинантный аттенуированный штамм бактерий salmonella typhimurium t10/pkhbc - продуцент корового антигена вируса гепатита в |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2760521C2 (ru) * | 2016-09-27 | 2021-11-26 | Вало Терапьютикс Ой | Негенетическая модификация оболочечных вирусов |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2447145C2 (ru) | Микроорганизм-носитель нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины | |
US20090208461A1 (en) | Recombinant bacteria with e.coli hemolysin secretion system and increased expression and/or secretion of hlya, process of manufacturing and uses thereof | |
EP2942391B1 (en) | Methods for constructing antibiotic resistance free vaccines | |
US20040203039A1 (en) | Attenuated salmonella SP12 mutants as antigen carriers | |
CZ20011538A3 (cs) | Nezávisle fungující expresní kazeta, amplifikovatelný plazmidový replikon, bakteriální buňka, vakcinační vektor, podmíněně nestabilní plazmid, způsob vyvolání imunitní odpovědi, DNA a expresní plazmid | |
US9402889B2 (en) | Live, oral vaccine for protection against Shigella dysenteriae serotype 1 | |
CZ20031378A3 (cs) | Způsob exprese genu v bakteriální buňce, způsob vyvolání imunitní odezvy u hostitele a systém pro exprimování proteinu | |
WO2002077249A2 (en) | Type iii bacterial strains for use in medicine | |
EP3101134A1 (en) | Therapeutic vaccine for treating or preventing merkel cell polyoma virus-associated tumors | |
Hotz et al. | Improvement of the live vaccine strain Salmonella enterica serovar Typhi Ty21a for antigen delivery via the hemolysin secretion system of Escherichia coli | |
Hinc et al. | Peszyn ska-Sularz G |