RU2082760C1 - Лейстродуксин, способ получения лейстродуксина штамм streptomyces platensis - продуцент лейстродуксина, фармацевтическая композиция, обладающая кроветворной и противогрибковой активностью, лечебно-профилактическое средство - Google Patents
Лейстродуксин, способ получения лейстродуксина штамм streptomyces platensis - продуцент лейстродуксина, фармацевтическая композиция, обладающая кроветворной и противогрибковой активностью, лечебно-профилактическое средство Download PDFInfo
- Publication number
- RU2082760C1 RU2082760C1 SU925011385A SU5011385A RU2082760C1 RU 2082760 C1 RU2082760 C1 RU 2082760C1 SU 925011385 A SU925011385 A SU 925011385A SU 5011385 A SU5011385 A SU 5011385A RU 2082760 C1 RU2082760 C1 RU 2082760C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- doublet
- leistroduxin
- strain
- cells
- compounds
- Prior art date
Links
- 241000593945 Streptomyces platensis Species 0.000 title claims abstract description 16
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 title claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 27
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 53
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- -1 5-methylhexanoyloxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 45
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000018152 Cerebral disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010049657 Cerebral fungal infection Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920006172 Tetrafluoroethylene propylene Polymers 0.000 claims 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 19
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 abstract description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 abstract description 3
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 abstract 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 abstract 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 14
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical compound OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 6
- PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilane Chemical compound C[SiH](C)C PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 5
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- SNWWAFHAEURECF-OFOCFSLPSA-N [3-[(1z,3z,9e)-8-(2-aminoethyl)-10-(3-ethyl-6-oxo-2,3-dihydropyran-2-yl)-5,8-dihydroxy-7-phosphonooxydeca-1,3,9-trienyl]cyclohexyl] 5-methylhexanoate Chemical compound CCC1C=CC(=O)OC1\C=C\C(O)(CCN)C(OP(O)(O)=O)CC(O)\C=C/C=C\C1CC(OC(=O)CCCC(C)C)CCC1 SNWWAFHAEURECF-OFOCFSLPSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 description 3
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZYSAHMPRXHPPAK-QNIAGQLOSA-N leustroducsin b Chemical compound C1[C@@H](OC(=O)CCCC[C@@H](C)CC)CCC[C@H]1\C=C/C=C\[C@H](O)C[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@](O)(CCN)\C=C\[C@H]1[C@@H](CC)C=CC(=O)O1 ZYSAHMPRXHPPAK-QNIAGQLOSA-N 0.000 description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 2
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZBZEINGTVLIIY-VGHZCNFRSA-N [(1s,3r)-3-[(1z,3z,5r,7r,8r,9e)-8-(2-aminoethyl)-10-[(2s)-3-ethyl-6-oxo-2,3-dihydropyran-2-yl]-5,8-dihydroxy-7-phosphonooxydeca-1,3,9-trienyl]cyclohexyl] 7-methyloctanoate Chemical compound CCC1C=CC(=O)O[C@H]1\C=C\[C@](O)(CCN)[C@H](OP(O)(O)=O)C[C@@H](O)\C=C/C=C\[C@H]1C[C@@H](OC(=O)CCCCCC(C)C)CCC1 WZBZEINGTVLIIY-VGHZCNFRSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 2
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 2
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 2
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 2
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229960002017 echothiophate Drugs 0.000 description 2
- BJOLKYGKSZKIGU-UHFFFAOYSA-N ecothiopate Chemical compound CCOP(=O)(OCC)SCC[N+](C)(C)C BJOLKYGKSZKIGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPSJGADGUYYRKE-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran-2-one Chemical class O=C1C=CC=CO1 ZPSJGADGUYYRKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHYNEQNPKGIOQF-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-2h-phosphole Chemical compound C1CC=PC1 JHYNEQNPKGIOQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010006002 Bone pain Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 101710128746 Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710128742 Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- JZKXXXDKRQWDET-QMMMGPOBSA-N L-m-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC(O)=C1 JZKXXXDKRQWDET-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 108010050619 Monokines Proteins 0.000 description 1
- 102000013967 Monokines Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003710 calcium ionophore Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- LFMYQKSTJULFQX-UHFFFAOYSA-N diazanium nitric acid sulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].O[N+]([O-])=O.[O-]S([O-])(=O)=O LFMYQKSTJULFQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000004633 phorbol derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N talc Chemical compound [Mg+2].[O-][Si]([O-])=O FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
- C07F9/6552—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a six-membered ring
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/74—Synthetic polymeric materials
- A61K31/80—Polymers containing hetero atoms not provided for in groups A61K31/755 - A61K31/795
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
- Y10S435/903—Streptomyces platensis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
Abstract
Использование: для лечения и профилактики нежелательных реакций, возникающих в результате химиотерапии или радиотерапии рака, инфекций, рака, церебральных нарушений и грибковых инфекций. Сущность изобретения: предложены новые соединения, названные "лейстродуксинами", имеющие соответствующую структурную формулу. Лейстродуксины и их соли могут быть получены ферментацией с применением микроорганизмов рода Streptomyces, в особенности штамма Streptomyces platensis FEPM BP-3288. 5 с. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретением дается ряд новых соединений, названных нами "Лейстродуксином А", "Лейстродуксином B" и "Лейстродуксином C". Перечисленные соединения отвечают нижеприведенной формуле (I). Изобретением также даются способы получения этих соединений ферментацией с применением микроорганизма рода Streptomyces, в особенности штамма вида Stretomyces platensis, также являющегося новым и также составляющим часть изобретения. Соединения изобретения обладают различными лечебными свойствами, в результате чего изобретением, кроме того, даются композиции и способы лечения или профилактики с применением этих соединений.
Лейстродуксины изобретения являются новыми соединениями, стимулирующими продуцирование гемопоэтических факторов, таких как фактор стимуляции колонии гранулоцитов (далее сокращение ФСКГ), фактор стимуляции колонки гранулоцитов макрофагов (далее сокращено ФСКГМ); соединения также стимулируют продуцирование фактора роста нервной ткани (далее сокращено ФРН); кроме того, соединения проявляют противогрибковую активность, например, по отношению к Tricophytom mentegrophtes.
Цитокины различного типа обладают гемопоэтической активностью, например, в виде факторов стимуляции колоний (далее сокращено ФСК), а некоторые виды гликопротеинов (под общим названием "интерлейкинов") в настоящее время получены методами генной инженерии. Эти вещества использовались клинически различным образом для уменьшения нежелательного побочного действия, часто сопровождающего химиотерапию и лучевую терапию рака, и для блокирования инфекций. Эффективность таких веществ недавно стала очевидна (Br. J. Cancer 59, 2 5, 1989).
Найдено, что введение этих факторов человеку различными путями приводит к явным фармакологическим эффектам, что означает возможное применение их в медицине. Однако полагают, что указанные факторы по-существу продуцируются in vivo некоторыми видами клеток (например, лимфоцитами, монофитами, фибробастами, васкулярными эндотелиальными клетками и стромальными клетками) при участии сложной регулирующей системы и что эти факторы играют гомеостатическую роль в продуцировании кровяных клеток различного типа. Соответственно, при введении этих факторов без учета хрупкого равновесия такого регулирующего механизма могут наблюдаться некоторые побочные эффекты, вызванные нарушением равновесия в регулирующем механизме, примеры подобных побочных эффектов включают воспаление в месте инъекции, боли в костях, жар и озноб.
С другой стороны, вместо введения самих гемопоэтических факторов может оказаться возможным введение определенных веществ, для которых известна способность стимуляции продуцирования гемопоэтических факторов в организме. К примеру, известно, что интерлейкин 1 (далее сокращено ИЛ-1) и фактор некроза опухоли (далее ФНО) способны индуцировать продуцирование ФСК и т.д. клетками различного вида. Однако указанные факторы не всегда способны действовать в качестве специфических индукторов гемопоэтических факторов, поскольку обладают и различными другими проявлениями биологической активности.
Кроме того, известно, что низкомолекулярные иммуноактиваторы различного типа, такие как липополисахариды (далее сокращено ЛПС) и мурамилдипептиды (далее сокращено МДР) способны продуцировать ФСК различного типа путем активации моноцитов и макрофагов. Однако известно, что при этом одновременно возникают и другие физиологические эффекты, вызванные активацией макрофагов, например продуцирование монокинов, таких как ИЛ-1 и ФНО, что может привести к различным побочным эффектам, таким как появление жара (Nippon Acta Radiologica 48, (4), 514, 1988).
Известно, что эфиры форбола и ионофоры кальция синергически индуцируют продуцирование ФСК /Kohama и др. Experimental Hematology 16, 603 608 (1988)/, однако также известно, что они не только стимулируют продуцирование гемопоэтических факторов, но кроме того, стимулируют продуцирование и секрецию полного набора секретируемых белков, включая гормоны, такие как инсулин (Y. Nishizuka, Science 225, 1365, 1984).
Хотя точный механизм до сих пор не известен, тем не менее полагают, что в образовании кровяных клеток хрелые кровяные клетки различного типа могут быть образованы из обычных клеток предшественников, называемых гемопоэтическими стволовыми клетками, при воздействии разнообразных гемопоэтических факторов и путем межклеточного взаимодействия. Установлено, что место, в котором у нормального взрослого человека образуются кровяные клетки, ограничено только внутренностью костного мозга и что клетки, называемые стромальными клетками, существующие в костном мозге, играют важную роль в образовании кровяных клеток (Dexler и др. J Cell. Physiol, 91, 335, 1977) и что стромальные клетки в костном мозге продуцируют разнообразные гемопоэтические факторы (Harigaya и др. Proc. Natl. Acad. Sci. США. 82, 3477, 1985; Kohama и др. Experimental Hematology 16, 603 608, 1988).
Таким образом, если будет найдено вещество, стимулирующее продуцирование гемопоэтических факторов стромальными клетками, то такое вещество может сыграть не только очень важную роль в выявлении действия гемапоэтического механизма в физиологическом состоянии и патологии гематологических заболеваний, но сможет найти и значительно клиническое применение.
В Европейской патентной публикации N 329361 раскрыты определенные производные 2 пиранона, напоминающие соединения настоящего изобретения за исключением характера группы "R", определяемой ниже. Для соединений-прототипов указано также только то, что они являются сельскохозяйственными биоцидами, но в опубликованной ссылке не показано, что соединения обладают ценной и неожиданной лечебной и профилактической активностью соединений настоящего изобретения. Хотя соединения-прототипы, как и соединения настоящего изобретения, микроорганизмы вида Streptomyces platensis, штамм, описанный в прототипе, как полагают, явно отличен от описываемого здесь штамма.
Очень похожие соединения и микроорганизмы, для которых раскрыта та же область применения, приведены в заявке на патент Японии Kokai Hei 2-186, но они явно отличны от соединений и микроорганизмов, описываемых здесь.
В Journal of Antibiotics, т. XLII, N9, с. 1331 описано новое противоопухолевое соединение, названное авторами "Фосфолином", продуцируемое микроорганизмом рода Streptomyces, который затем был впервые выделен. Однако четко указано, что микроорганизм принадлежит к Streptomyces hydroscopicus, т.е. отличен от применяемого в изобретении Streptomyces platensis. Более того, хотя фосфолин прототипа, как и соединения настоящего изобретения, имеет как аминогруппу, так и группу фосфорной кислоты, тем не менее фосфолин имеет другую молекулярную формулу, т.е. отличен от соединений изобретения.
Цель изобретения заключается в создании ряда новых производных фосфорной кислоты, обладающих разнообразными проявлениями фармакологической активности.
В частности, полагают, что соединения изобретения характеризуются следующими проявлениями активности: соединения снижают неблагоприятные реакции, возникающие при химиотерапии или радиотерапии рака, соединения активируют макрофаги, в результате чего обладают противоопухолевым действием, соединения защищают от инфекций, соединения улучшают функционирование мозга и, кроме того, соединения являются противогрибковыми средствами.
Изобретением даются соединения формулы (I)
в которой R представляет 5-метилгексаноилоксигруппу, 6-метилоктаноилоксигруппу или 7-метилоктаноилоксигруппу и их соли. Эти соединения названы нами соответственно "Лейстродуксином A", "Лейстродуксином B" и "Лейстродуксином C".
в которой R представляет 5-метилгексаноилоксигруппу, 6-метилоктаноилоксигруппу или 7-метилоктаноилоксигруппу и их соли. Эти соединения названы нами соответственно "Лейстродуксином A", "Лейстродуксином B" и "Лейстродуксином C".
Изобретением также дается способ получения лейстродуксинов, заключающийся в культивировании продуцирующего лейстродуксин микроорганизма рода Streptomyces и выделении из культуры по меньшей мере одного из лейстродуксинов.
Изобретением, кроме того, дается фармацевтическая композиция, включающая по меньшей мере один из лейстродуксинов или его соль в смеси с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.
Изобретением также дается способ лечения или профилактики нежелательных реакций, возникающих при химиотерапии или радиотерапии рака, инфекций, рака, церебральных нарушений и грибковых инфекций, заключающийся во введении эффективного количества по меньшей мере одного лейстродуксина или его соли млекопитающему, которым может быть и человек, страдающему или склонному к указанным реакциям, инфекциям, раку или нарушениям.
Три лейстродуксина настоящего изобретения отвечают следующим формулам:
Из вышеприведенных формул видно, что лейстродуксины изобретения обладают рядом асимметричных атомов углерода и несколькими двойными связями. В силу этого соединения могут образовывать различные оптические и геометрические изомеры. Хотя все они здесь представлены единственной молекулярной формулой, тем не менее настоящее изобретение включает индивидуальные, выделенные изомеры и смеси, включая их рацематы. При использовании методов стереоспецифического синтеза или при использовании в качестве исходных продуктов оптически активных соединений могут быть получены непосредственно индивидуальные изомеры, а с другой стороны, при получении смеси изомеров индивидуальные изомеры могут быть получены обычными методами разделения.
Из вышеприведенных формул видно, что лейстродуксины изобретения обладают рядом асимметричных атомов углерода и несколькими двойными связями. В силу этого соединения могут образовывать различные оптические и геометрические изомеры. Хотя все они здесь представлены единственной молекулярной формулой, тем не менее настоящее изобретение включает индивидуальные, выделенные изомеры и смеси, включая их рацематы. При использовании методов стереоспецифического синтеза или при использовании в качестве исходных продуктов оптически активных соединений могут быть получены непосредственно индивидуальные изомеры, а с другой стороны, при получении смеси изомеров индивидуальные изомеры могут быть получены обычными методами разделения.
Лейстродуксины изобретения могут быть получены культивированием продуцирующего лейстродуксин микроорганизма рода Streptomyces с последующим выделением из культурной среды одного или нескольких лейстродуксинов.
В частности, мы особенно рекомендуем применять в качестве микроорганизма впервые выделенный штамм рода Streptomyces, принадлежащий, как нами установлено, к виду Streptomyces platensis, которому нами присвоено обозначение SANK 60191 (FERM BP-3288).
Микроорганизм депонирован на условиях Будапештского соглашения в Исследовательском Институте Ферментации, Агентство промышленных наук и технологий 20.02.91 под регистрационным N FERM BP-3288.
Подробности микробиологических свойств Streptomyces Platensis SANK 60191 (FERM BP-3288) приводятся ниже.
1. Морфологические характеристики.
Streptomyces platensis SANK 60191 культивируют 14 дн при 28oC на каждой из сред агара, определяемых ISP (Международный проект по Streptomyces). Исследования под микроскопом после 14 дн культивирования показали, что субстратный мицелий хорошо удлинен и разветвлен и окрашен в желтовато-серый и или бледно-желтовато-оранжевый цвет. Однако ни фрагментации, ни зигзагообразного удлинения наблюдаемого в случае Нокардиоформ актиномицетов в данном случае на обнаруживается. Разветвления аэрального мицелия простоты. Споровые цепи свободно-спиральны по форме, и цепь образуют 10 50 или более спор. Исследования с помощью сканирующего микроскопа показали гладкое строение поверхности спор. Споры яицеобразны и овальны, размером 0,5 0,6 х 0,6 1,3 мкм. Закруглений воздушного мицелия, склероций, фрагментации гифов и специфичных органов, таких как спорангий, не удалось обнаружить.
2. Свойства культурных сред различного типа
В таблице приведены свойства микроорганизма после культивирования в течение 14 дн при 28oC в культурных средах различного типа. Цвета указаны в виде номера образца, приведенного в Руководстве к цветовым стандартам издания Nippon Shikisai Kenkyusho. Данный штамм увлажняется и его цвет изменяется в черный с течением времени.
В таблице приведены свойства микроорганизма после культивирования в течение 14 дн при 28oC в культурных средах различного типа. Цвета указаны в виде номера образца, приведенного в Руководстве к цветовым стандартам издания Nippon Shikisai Kenkyusho. Данный штамм увлажняется и его цвет изменяется в черный с течением времени.
В таблице использованы следующие аббревиатуры: P рост ВМ воздушный мицелий, О обратимость, РП растворимый пигмент, ОС особые свойства.
3. Физиологические свойства
Физиологические свойства штамма SANK 60191, наблюдаемые в период с 2-го по 21-й день после начала культивации при 28oC, приведены ниже.
Физиологические свойства штамма SANK 60191, наблюдаемые в период с 2-го по 21-й день после начала культивации при 28oC, приведены ниже.
Гидролиз крахмала Положительно
Ожижение желатина Отрицательно
Восстановление нитратов Отрицательно
Коагуляция молока Отрицательно
Пептонизация молока Отрицательно
Образование меланоидного пигмента
(Среда 1) Отрицательно
(Среда 2) Отрицательно
(Среда 3) Отрицательно
Разложение субстрата
Казеин Отрицательно
Тирозин Положительно
Ксантин Положительно
Температурный интервал для роста (среда 4) 9-35oC
Оптимальная температура для роста (среда 4) 20-26oC
Телерантность к хлориду натрия 10%
Среда 1 бульон на триптоне-дрожжевом экстракте (ISP 1).
Ожижение желатина Отрицательно
Восстановление нитратов Отрицательно
Коагуляция молока Отрицательно
Пептонизация молока Отрицательно
Образование меланоидного пигмента
(Среда 1) Отрицательно
(Среда 2) Отрицательно
(Среда 3) Отрицательно
Разложение субстрата
Казеин Отрицательно
Тирозин Положительно
Ксантин Положительно
Температурный интервал для роста (среда 4) 9-35oC
Оптимальная температура для роста (среда 4) 20-26oC
Телерантность к хлориду натрия 10%
Среда 1 бульон на триптоне-дрожжевом экстракте (ISP 1).
Среда 2 агар на пептоне-дрожжевом экстракте с железом (ISP 6).
Среда 3 тирозиновый агар (ISP 7).
Среда 4 агар на дрожжевом экстракте-солодовом экстракте (ISP 2).
Штамм SANK 60191, кроме того, культивировался при 28oC на агаре Придхэма-Готтлиба (ISP 9) в качестве культурной среды. Характер усвоения источников углерода в течение 14 дн после культивирования приведен ниже.
D Глюкоза D Фруктоза +
L Арабиноза L Рамноза -
D Ксилоза Сахароза +
Инозит + Раффиноза +
D Маннит + Контроль -
где + усвоение положительное;
усвоение отрицательное.
L Арабиноза L Рамноза -
D Ксилоза Сахароза +
Инозит + Раффиноза +
D Маннит + Контроль -
где + усвоение положительное;
усвоение отрицательное.
4. Клеточные компоненты
Стенки клеток штамма SANK 60191 анализируют по методу B. Becke и др. (Applied Microbiology, 12, 421-423, 1984).
Стенки клеток штамма SANK 60191 анализируют по методу B. Becke и др. (Applied Microbiology, 12, 421-423, 1984).
Поскольку обнаружена LL диаминопимелиновая кислота, подтверждена тем самым принадлежность стенок клеток к типу 1. Кроме того, по методике M.P. Lechevalier (Journai of laboratory ano Cli- nical Medicine, 71, 934 1968) осуществлен анализ полного набора сахарных компонентов клеток штамма SANK 60191.
Никаких характерных особенностей не наблюдается.
На основании приведенных микробиологических свойств подтверждена принадлежность штамма роду Streptomyces из Актиномицетов. При сравнении со штаммами, описанными в ISP E.B Shirling и D.Gottlieb (Internеtional Journal of Systematic Bacteriology, 18, 68-189 (1968); 18, 279-392 (1968); 19, 391-512 (1969), 22, 265-394 (1972)), и со штаммами, описанными в других литературных источниках, таких как Актиномицеты, т. 2, S.A. Waksman, Руководство Бергея по определенной бактериологии, 8-е издание (1974). /Под ред. R.E.Buchanan и N.E.Gibbons, Руководство Бергея по определенной бактериологии, т. 4, 1989, и других недавних литературных источниках, относящихся к Антиномицетам, был сделан вывод о большой схожести этого штамма с Streptomyces plantensis.
Кроме того, после жидкой культуры с использованием декстрозо-дрожжевой среды штамм SANK 60191 образует растворимый пигмент, имеющий свежую красновато-коричневую окраску. При добавлении 0,05 г водной соляной кислоты окраска пигмента превращается в желтую, а при добавлении 0,05 н. водной гидроокиси натрия никаких изменений не наблюдается.
Streptomyces platensis образует красноватый или желтоватый пигмент после культивирования на агаре на основе дрожжевого экстракта солодового экстракта, агара на овсяной муке, агара на неорганических солях-крахмале и глицерин-аспарагиновом агаре. С другой стороны, штамм SANK 60191 вряд ли образует какой-либо из этих пигментов, что указывает на отличие этого штамма от других известных штаммов Streptomyces platensis. Однако поскольку новый штамм и известные штаммы могут быть отличены только по образованию растворимых пигментов, штамм SANK 60191 идентифицирован как новый штамм Streptomyces platensis.
Установлено, что штамм SANK 60191 продуцирует лейстродуксины. Однако хорошо известно, что свойства грибков, в целом, и активномицетовых микроорганизмов, в частности, могут значительно отличаться и эти грибки легко претерпевают мутацию как в результате естественных причин, так и в результате воздействия искусственных средств (например, ультрафиолетовое облучение, химическое воздействие и т.д.). Соответственно, изобретение охватывает применение любого микроорганизма, который можно классифицировать в пределах рода Streptomyces и который разделяет со штаммом SANK 60191 характерную особенность образовывать лейкодукстрины. Не ожидается, что новый микроорганизм (штамм SANK 60191) будет чем-то исключительным, и термин "SANK 60191", таким образом, применяют с включением всех мутантов этого штамма, разделяющих со штаммом SANK 60191 характерную особенность в продуцировании лейкодуксинов. Кроме того, такие мутанты включают и мутанты, полученные биотехнологией, например рекомбинацией, трансдукцией, трансформацией и т.п. Можно простым экспериментированием определить на основе информации, приведенной здесь относительно свойств лейстродуксинов, будет ли данный штамм продуцировать эти соединения и будет ли их продуцировать в количествах, достаточных для того, чтобы сделать этот штамм представляющим интерес с промышленной точки зрения.
Нами также обнаружено, что помимо вышеохарактеризованного нового штамма Streptomyces platensis известный штамм, а именно Streptomyces platensis SAM-0654 (депонирован в Исследовательском институте ферментации, Япония, под регистрационным номером FERM BP-1668 22.01.88), также продуцирует лейстродуксины изобретения. Этот известный штамм в полной мере охарактеризован в Европейском патенте N 329361, описание которого приводится здесь в качестве ссылки.
Лейстродуксины изобретения могут быть получены культивированием указанных штаммов грибков в культурной среде, обычно применяемой для продуцирования других продуктов ферментации из аналогичных микроорганизмов. Такие среды обязательно содержат микробиологически усвояемые источники углерода и азота, а также неорганические соли, что хорошо известно специалистам в данной области.
Рекомендуемые примеры источников углерода включают глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу, маннит, глицерин, декстрин, овсы, рожь, зерновой крахмал, картофельный крахмал, зерновую муку, соевую муку, жмых хлопковых семян, хлопковое масло, мелассу, лимонную кислоту, винную кислоту и т.п. Указанные соединения могут быть использованы по отдельности или в приемлемом сочетании. Как правило, их количество может меняться в интервале 1-10 мас. на культурную среду.
К рекомендуемым источникам азота относятся обычные белковые продукты, обычно применяемые в процессах ферментации. Примеры подобных источников азота включают соевую муку; пшеничные отруби, арахисовый шрот, жмых хлопковых семян, хлопковое масло, муку из жмыха семян хлопчатника, гидролизаты казеина, фермамин, рыбную муку, жидкость от замачивания зерна, пептон, мясной экстракт, дрожжи, дрожжевой экстракт, солодовый экстракт, нитрат натрия, нитрат аммония, сульфат аммония и т.п. Перечисленные источники азота могут быть использованы по отдельности или в любом приемлемом сочетании. Как правило, мы предпочитаем их использовать в концентрации 0,2-6 мас. на культурную среду.
Питательные неорганические соли, которые могут быть введены в культурную среду, включают обычные соли, способные давать различные ионы, необходимые для роста микроорганизмов, такие как ионы натрия, аммония, кальция, фосфат-, сульфат-, хлорид- и карбонат-ион. Кроме того, среда должна содержать небольшие количества необходимых микроэлементов, таких как натрий, кальций, кобальт, марганец, железо и магний.
При осуществлении способа изобретения методом культивирования в жидкой среде рекомендуется использовать в культурной среде противопенное средство, такое как силиконовое масло, растительное масло или поверхностно-активное вещество.
Значение pH культурной среды для продуцирования лейстродуксинов культивированием микроорганизмов рода Streptomyces, в особенности штамма SANK 60191, предпочтительно меняется в интервале 5-8, более предпочтительно 5-7.
Культивирование может быть осуществлено при любой температуре в интервале 9-27oC. Однако рост протекает хорошо в интервале 20-35oC и именно эта температура рекомендуется. Для оптимизации продуцирования лейстродуксинов рекомендуется температура 22-30oC.
Указанные соединения получают в условиях аэробного культивирования с возможным применением обычных способов аэробного культивирования, таких как культивирование в твердой среде, культивирование со встряхиванием и культивирование с аэрацией-перемешиванием (культивирование во взвешенном состоянии). В случае маломасштабного культивирования обычно применяют встряхивание культуры несколько дней при 28oC. В таком маломасштабном способе культивирования культура может быть инициирована проведением 1 или 2 стадий пролифарации с получением затравочных культур, например, в колбах Эрленмейера, снабженных дефлекторами для регулирования потока жидкости. Рекомендуется, чтобы среда для получения затравочных культур содержала источники как углерода, так и азота. В рекомендуемой последовательности операций такого маломасштабного культивирования колбы для затравочных культур встряхивают в инкубаторе с постоянной температурой 28oC в течение 3 дн или до момента достижения достаточного роста. Выращенную затравочную культуру затем переносят во вторую затравочную среду или в продуцирующую среду. При использовании промежуточной ростовой фазы для ее выращивания применяют по-существу тот же способ и аликвотой полученного промежуточного продукта инокулируют продуцирующую среду. Инокулированная колба может быть инкубирована несколько дней со встряхиванием и по окончании инкубирования содержимое колбы может быть центрифугировано или отфильтровано.
В случае широкомасштабного продуцирования рекомендуется применение соответствующего ферментатора с мешалкой и устройством для аэрации. В этом случае питательная среда может быть приготовлена внутри ферментатора. Среду рекомендуется стерилизовать повышением температуры до приемлемого уровня, например до 120-125oC, и после охлаждения стерилизованная среда может быть инокулирована предварительно приготовленной затравочной культурой. После этого культуру выдерживают при перемешивании и аэрации и приемлемой температуре, например при 28oC. Такой способ пригоден для получения в больших количествах соединений изобретения.
Изменения в количестве образованных лейстродуксинов с течением времени культивирования может контролироваться с помощью соответственных средств, широко применяемых в области ферментации, например с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. В большинстве случаев количество образующихся лейстродуксинов достигает максимума после культивирования в течение 48-96 ч.
По окончании культивирования лейстродуксины, остающиеся в жидкой части среды и в бактериальных клетках, могут быть извлечены использованием физико-химических свойств лейстродуксинов. К примеру, лейстродуксины, присутствующие в фильтрате или надосадочной жидкости, могут быть экстрагированы несмешивающимся с водой органическим растворителем, таким как этилацетат, хлороформ, хлористый этилен, хлористый метилен или бутанол (или смесью любых двух или более из указанных растворителей), после чего они могут быть очищены обычными способами. Можно также удалять возможные примеси экстрагированием одним или несколькими из указанных растворителей в щелочных условиях с последующей очисткой обычными средствами. Или же примеси могут быть удалены адсорбцией при пропускании содержащей лейстродуксины жидкости через слой соответствующего адсорбента, или лейстродуксины могут быть адсорбированы на соответствующем адсорбенте и затем элюированы с помощью приемлемого элюента, такого как водный метанол, водный ацетон или водный бутанол. Примеры приемлемых адсорбентов, которые могут быть использованы в таких методиках, включают активированный уголь и адсорбирующие смолы, такие как Амберлит XAD-4 (фирменное название продукта фирмы Роом энд Хаас) или Диаион HP-10, HP-20 CHP-20 HР-50 (фирменные названия продуктов фирмы Митсубиси Кемикал Индастриз Ко). Присутствующие в клетках лейстродуксины могут быть получены экстрагированием приемлемым растворителем, таким как: 50-90%-ный по объему водный ацетон или водный метанол с последующим удалением органического растворителя, после чего полученный продукт может быть подвергнут экстрагированию и очистке по методикам, аналогичным приведенным выше для фильтрата.
Полученные в результате лейстродуксины могут быть подвергнуты дальнейшей очистке по хорошо известным методикам, например адсорбционной колоночной хроматографией с применением такого носителя, как силикагель или магний-силикагель, продаваемый, например, под фирменным названием "Флорисил" распределительной колоночной хроматографией с применением такого адсорбента, как Сефадекс IH-20 (фирменное название продукта фирмы Фармации) или высокоэффективной жидкостной хроматографией с применением колонки с обычной фазой или обращенной фазой. Как хорошо известно специалистам, методики выделения и очистки могут быть осуществлены по отдельности или в любом приемлемом сочетании, при желании неоднократно с выделением и очисткой целевых лейстродуксинов.
Лейстродуксины изобретения являются новыми соединениями, ранее неописанными в литературе. Соединения стимулируют продуцирование гемопоэтических факторов, таких как ФСКГ и ФСКГМ у животных (например, человека, собак, кошек и кроликов), вследствие чего применимы в качестве лечебных средств для снижения побочных эффектов, вызванных химиотерапией или радиотерапией рака, соединения также предотвращают инфекции и проявляют противораковое действие путем активации макрофагов. Кроме того, ожидается, что лейстродуксины найдут применение для улучшения церебрального метаболизма путем стимулирования ФНО. Кроме того, эти соединения применимы в качестве противогрибковых средств, что показано их противогрибковым действием по отношению к Tricophyton metagrophytes.
Способность лейстродуксинов в соответствии с настоящим изобретением стимулировать предуцирование гемопоэтических факторов может быть выявлено по методике Kohama и др. (Experimental Hematology 16, 603-608, 1988).
В этой методике сочетают систему продуцирования для различных гемопоэтических факторов с системой анализа различных гемопоэтических факторов. К примеру, клетки КМ-102, происходящие из стромальных клеток костного мозга человека, могут быть использованы для продуцирования различных гемопоэтических факторов. Однако вместо этих клеток могут быть использованы любые клетки, способные продуцировать различные гемопоэтические факторы, например первичные культивируемые стромальные клетки костного мозга, васкулярные эндотелиальные клетки, лимфоциты или макрофаги, существующие в костном мозге. Испытуемый образец соединения, чью активность желают испытать, разбавляют до необходимой концентрации и добавляют к культурной системе, содержащей клетки, продуцирующие различные гемопоэтические факторы ("ГФ продуцирующие клетки"). После должного периода (обычно 24 ч) часть надосадочной жидкости отбирают из культурной среды и добавляют к системе культивируемых клеток, зависимых от различных гемопоэтических факторов, например TF-1 клеток и NES-60 клеток ("ГФ-зависимые клетки") в необходимой концентрации.
После определенного периода количество гемопоэтических факторов может быть определено путем определения роста ГФ-зависимых клеток, в результате чего может быть выявлена способность соединения стимулировать продуцирование различных гемопоэтических факторов. Рост ГФ-зависимых клеток может быть определен любым удобным способом, например введением в клетки тритий-тимидина или использованием МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид) в качестве аналитического метода (Хемикон Интернэшнл Инк, США). Анализ различных гемопоэтических факторов может быть осуществлен любым удобным способом, таким как метод образования колоний или ELISA-метод.
Лейстродуксины изобретения имеют как кислотную группу (группа фосфорной кислоты), так и основную группу (аминогруппа), в силу чего могут образовывать соли. Нет каких-либо особых ограничений относительно природы таких солей при условии, что, если они предназначены для лечебных целей, эти соли должны быть фармацевтически приемлемыми.
В тех случаях, когда соли предназначены для нелечебных целей, например при их использовании в качестве промежуточных соединений для приготовления других, возможно более активных соединений, даже это ограничение роли не играет. Соединения изобретения могут образовывать соли с основаниями, которые включают соли с щелочным металлом, таким как натрий, калий или литий, соли с щелочно-земельным металлом, таким как барий или кальций, соли с иным металлом, таким как магний или алюминий, соли с органическим основанием, такие как соль с дициклогексиламином, и соли с аминокислотами основного характера, такими как лизин или аргинин. Соединения изобретения могут, кроме того, образовывать соли с добавлением кислот, которые включают соли с минеральными кислотами, особенно с гидрогалоидными кислотами (такими как фтористоводородная кислота, бромистоводородная кислота или хлористоводородная кислота), азотной кислотой, перхлористой кислотой, угольной кислотой, серной кислотой или фосфорной кислотой, соли с низшими алкилсульфоновыми кислотами, такими как метансульфоновая кислота, трифторметансульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, соли с арилсульфоновыми кислотами, такими как бензолсульфокислота или n-толуолсульфокислота, соли с органическими карбоновыми кислотами, такими как уксусная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, янтарная кислота или лимонная кислота, и соли с аминокислотами, такими как глутаминовая кислота или аспаратиновая кислота.
Если эти соединения предназначены для лечебных целей, тогда они могут быть введены в чистом виде или в виде приемлемого фармацевтического состава, содержащего помимо активного соединения один или несколько обычных разбавителей, носителей, наполнителей или адъювантов. Природа состава, разумеется, будет зависеть от намечаемого пути введения. Однако предназначенные для перрорального введения составы рекомендуют приготовлять в виде порошков, гранул, таблеток, капсул или сиропов. Для парентерального введения составы рекомендуют приготовлять в виде инъекций (которые могут быть внутривенными, внутримышечными или подкожными) или в виде капель или свеч. Такие препараты могут быть приготовлены известными способами добавлением таких добавок, как носители, связующие вещества, размельчители, смазки, стабилизаторы, корригенты, солюбилизирующие средства, суспендирующие средства или кроющие средства. Хотя дозировка может меняться в зависимости от симптомов и возраста пациента, природы и тяжести заболевания или нарушения, а также пути и характера введения, в случае перорального введения взрослому больному человеку соединения изобретения обычно могут составлять в ежедневной дозировке 1-1000 мг. Соединения могут быть введены разовой дозой или раздельными дозами, например два или три раза в день.
Пример 1. Культивирование и выделение лейстродуксинов.
1 (А) Культивирование
Одной платиновой петелькой спор Streptomyces platensis SANK 60191 инокулируют 100 мл предварительно стерилизованной культурой среды (нижеприведенного состава) в колбе Эрленмейера на 500 мл, снабженной дефлекторами, и микроорганизм культивируют 3 дн при 28oC и 200 об/мин (радиус вращения 7 см) с применением роторной качалки.
Одной платиновой петелькой спор Streptomyces platensis SANK 60191 инокулируют 100 мл предварительно стерилизованной культурой среды (нижеприведенного состава) в колбе Эрленмейера на 500 мл, снабженной дефлекторами, и микроорганизм культивируют 3 дн при 28oC и 200 об/мин (радиус вращения 7 см) с применением роторной качалки.
Культурная среда, г:
Растворимый крахмал 30
Сырые дрожжи 10
Соевый порошок 7
Рыбная мука 5
Жидкость от вымачивания зерен 2
Мясной экстракт 1
Карбонат кальция 1
Вода до 1000 мл
pH 7 (до стерилизации)
В каждый из четырех ферментаторов из нержавеющей стали на 30 л загружают 15 л той же культурной среды, что была использована для затравочной культуры, и стерилизуют нагреванием 30 мин при 120oC. Затем добавляют 150 мл жидкой затравочной культуры, приготовленной вышеприведенным способом. Смесь культивируют 3 дн при 28oC с аэрацией при скорости потока воздуха 15 л/мин и с перемешиванием. С целью установления концентрации кислорода в жидкости в 5 ч/млн скорость перемешивания автоматически регулируют в интервале 100-300 об/мин.
Растворимый крахмал 30
Сырые дрожжи 10
Соевый порошок 7
Рыбная мука 5
Жидкость от вымачивания зерен 2
Мясной экстракт 1
Карбонат кальция 1
Вода до 1000 мл
pH 7 (до стерилизации)
В каждый из четырех ферментаторов из нержавеющей стали на 30 л загружают 15 л той же культурной среды, что была использована для затравочной культуры, и стерилизуют нагреванием 30 мин при 120oC. Затем добавляют 150 мл жидкой затравочной культуры, приготовленной вышеприведенным способом. Смесь культивируют 3 дн при 28oC с аэрацией при скорости потока воздуха 15 л/мин и с перемешиванием. С целью установления концентрации кислорода в жидкости в 5 ч/млн скорость перемешивания автоматически регулируют в интервале 100-300 об/мин.
1(B) Выделение
К 60 л жидкой культуры, полученной на стадии 1(А), добавляют 2,4 кг Целита 545 (фирменное наименование продукта фирмы Джонс энд Манвилл Прожект Корпорейшн) и полученную смесь фильтруют. После фильтрования жидкой культуры получено 7,2 кг бактериальных клеток. Клетки экстрагируют один раз 30 л водного ацетона (50% об/об) и дважды каждый раз по 20 л водным ацетоном (80% об/об). Полученные экстракты объединяют и органический растворитель отгоняют в роторном испарителе. К остатку добавляют водную соляную кислоту в количестве, достаточном для установления значения pH 2, после чего смесь дважды экстрагируют этилацетатом каждый раз по 10 л. Экстракты объединяют и к ним добавляют 10 л водного раствора гидрокарбоната натрия (1% мас./об). Активные фракции переносятся в водный слой, а слой этилацетата удаляют. Этот слой этилацетата вновь экстрагируют 5 л водного раствора гидрокарбоната натрия (1% мас./об). Растворы гидрокарбоната натрия объединяют и добавлением водной соляной кислоты устанавливают значение pH 2. Раствор дважды экстрагирую этилацетатом каждый раз по 10 л. Органические экстракты объединяют, промывают водой, затем насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. При непрерывном добавлении метанола раствор затем конденсируют испарением при пониженном давлении в роторном испарителе с получением 10 мл маслянистого вещества. Полученное вещество растворяют в 100 мл водного метанола (60% об/об) и полученный раствор адсорбируют на C18 патронах в 20 см3 Сеп-Пак Вак (фирменное название продукта фирмы Уотерс Ко. США). Примеси элюируют водным метанолом (30 мл, 60% об/об). Лейстродуксины затем элюируют 100%-ным метанолом и концентрированием элюата получают 800 мг маслянистого вещества, которое растворяют в 10 мл метанола и подвергают высокоэффективной жидкостной хроматографии. Фракции с пиками примерно 13 мин и 24 мин отбирают и обозначают как "Сырая фракция А" и "Сырая фракция B" соответственно. Условия хроматографии приведены ниже.
К 60 л жидкой культуры, полученной на стадии 1(А), добавляют 2,4 кг Целита 545 (фирменное наименование продукта фирмы Джонс энд Манвилл Прожект Корпорейшн) и полученную смесь фильтруют. После фильтрования жидкой культуры получено 7,2 кг бактериальных клеток. Клетки экстрагируют один раз 30 л водного ацетона (50% об/об) и дважды каждый раз по 20 л водным ацетоном (80% об/об). Полученные экстракты объединяют и органический растворитель отгоняют в роторном испарителе. К остатку добавляют водную соляную кислоту в количестве, достаточном для установления значения pH 2, после чего смесь дважды экстрагируют этилацетатом каждый раз по 10 л. Экстракты объединяют и к ним добавляют 10 л водного раствора гидрокарбоната натрия (1% мас./об). Активные фракции переносятся в водный слой, а слой этилацетата удаляют. Этот слой этилацетата вновь экстрагируют 5 л водного раствора гидрокарбоната натрия (1% мас./об). Растворы гидрокарбоната натрия объединяют и добавлением водной соляной кислоты устанавливают значение pH 2. Раствор дважды экстрагирую этилацетатом каждый раз по 10 л. Органические экстракты объединяют, промывают водой, затем насыщенным водным раствором хлорида натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. При непрерывном добавлении метанола раствор затем конденсируют испарением при пониженном давлении в роторном испарителе с получением 10 мл маслянистого вещества. Полученное вещество растворяют в 100 мл водного метанола (60% об/об) и полученный раствор адсорбируют на C18 патронах в 20 см3 Сеп-Пак Вак (фирменное название продукта фирмы Уотерс Ко. США). Примеси элюируют водным метанолом (30 мл, 60% об/об). Лейстродуксины затем элюируют 100%-ным метанолом и концентрированием элюата получают 800 мг маслянистого вещества, которое растворяют в 10 мл метанола и подвергают высокоэффективной жидкостной хроматографии. Фракции с пиками примерно 13 мин и 24 мин отбирают и обозначают как "Сырая фракция А" и "Сырая фракция B" соответственно. Условия хроматографии приведены ниже.
Препаративная жидкостная хроматография
Колонка Радикал-Пак 25х10 (Уотерс, США)
Элюирующий растворитель 50-ный (об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера, pH 3
Скорость потока 9 мл/мин
Длина волны 230 нм
После концентрирования всех указанных пиков полученные фракции подвергают препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Сырую фракцию А подвергают препаративной хроматографии с отбором пика около 56 мин в следующих условиях; затем их обессоливают и конденсируют с применением Сеп-Пак и получением 11,66 мг дейстродуксина А.
Колонка Радикал-Пак 25х10 (Уотерс, США)
Элюирующий растворитель 50-ный (об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера, pH 3
Скорость потока 9 мл/мин
Длина волны 230 нм
После концентрирования всех указанных пиков полученные фракции подвергают препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Сырую фракцию А подвергают препаративной хроматографии с отбором пика около 56 мин в следующих условиях; затем их обессоливают и конденсируют с применением Сеп-Пак и получением 11,66 мг дейстродуксина А.
Условия препаративной хроматографии для сырой фракции А
Колонка Космосил 5С 18-AR 20 x 250 мм (Накараитеск Инк.)
(Элюирующий растворитель 42%-ный (об/об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера, pH 3
Скорость потока 9 мл/мин
Длина волны 230 нм
Сырую фракцию B подвергают препаративной хроматографии с отбором пиков около 47 и 51 мин в нижеприведенных условиях, затем обессоливают и конденсируют с применением Сеп-Пак и получением 9,83 мг лейстродуксина B и 5,22 мг лейстродуксина C. Условия препаративной хроматографии для сырой фракции B.
Колонка Космосил 5С 18-AR 20 x 250 мм (Накараитеск Инк.)
(Элюирующий растворитель 42%-ный (об/об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера, pH 3
Скорость потока 9 мл/мин
Длина волны 230 нм
Сырую фракцию B подвергают препаративной хроматографии с отбором пиков около 47 и 51 мин в нижеприведенных условиях, затем обессоливают и конденсируют с применением Сеп-Пак и получением 9,83 мг лейстродуксина B и 5,22 мг лейстродуксина C. Условия препаративной хроматографии для сырой фракции B.
Колонка Космосил 5C 18-AR 20 x 250 мм (Накараитеск Инк.)
Элюирующий растворитель 47%-ный водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера, pH 3.
Элюирующий растворитель 47%-ный водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера, pH 3.
Скорость потока 9 мл/мин
Длина волны 230 нм
Полученные в результате лейстродуксины обладают следующими свойствами:
Лейстродуксин А
1) Химическое строение: формула (1а), приведенная выше.
Длина волны 230 нм
Полученные в результате лейстродуксины обладают следующими свойствами:
Лейстродуксин А
1) Химическое строение: формула (1а), приведенная выше.
2) Характер: кислотный и жирорастворимый.
3) Цвет: бледно-желтое масло.
4) Молекулярная формула: C32H52O10NP
5) Молекулярная масса: 641, определена методом ББА-МС ("ББА-МС" - Бомбардировка Быстрыми Атомами Масс-Спектрометрия)
6) Ультрафиолетовый спектр поглощения: 234 нм (максимальное поглощение в метаноле)
7) Инфракрасный спектр поглощения: инфракрасный спектр показал следующие максимумы поглощения (пленка жидкости γmax см-1): 2933, 2867, 1728, 1464, 1383, 1248, 1176, 1056, 969.
5) Молекулярная масса: 641, определена методом ББА-МС ("ББА-МС" - Бомбардировка Быстрыми Атомами Масс-Спектрометрия)
6) Ультрафиолетовый спектр поглощения: 234 нм (максимальное поглощение в метаноле)
7) Инфракрасный спектр поглощения: инфракрасный спектр показал следующие максимумы поглощения (пленка жидкости γmax см-1): 2933, 2867, 1728, 1464, 1383, 1248, 1176, 1056, 969.
8) Спектр 1H-ядерного магнитного резонанса: спектр ядерного магнитного резонанса (270 МГц) в тяжелом метаноле с применением в качестве внутреннего стандарта триметилсилана приведен ниже: 7,08 (1H, дублет дублетом, J 9,8 и 4,9 Гц); 6,21-6,35 (2H, мультиплет); 6,06 (1H, дублет дублетов, J 15,6 и 6,1 Гц); 6,02 (1H, дублет дублетов, J 9,8 и 1,4 Гц); 5,94 (1H, дублет, J 15,6 Гц); 5,46 (1H, мультиплет); 5,31(1H, мультиплет); 5,1 (1H, дублет, дублетов, J 6,1 и 4,4 Гц); 4,94 (1H мультиплет); 4,7 (1H, мультиплет); 4,29(1H, триплет дублетов, J 10,1 10,1 и 2,4 Гц); 2,93-3,15 (2H, мультиплет), 2,5-2,71 (2H, мультиплет), 2,25 (2H, триплет, J 7,6 Гц); 2,16 (1H, мультиплет), 0,99-2,01 (18H, мультиплет), 0,95 (3H, триплет, J 7,6 Гц), 0,89 (6H, дублет, J 6,8 Гц).
9) Спектр 13C-ядерного магнитного резонанса: ( δ млн-1), спектр ядерного магнитного резонанса (270 МГц) в тяжелом метаноле с применением в качестве внутреннего стандарта триметилсилана приведен ниже: 11,4 (квартет); 22,7 (триплет); 22,9 (квартет); 22,9 (квартет); 24 (триплет); 24,7 (триплет); 28,9 (дублет); 32,4 (триплет); 33,1 (триплет); 34,3(триплет); 35,7 (триплет); 36,1 (дублет); 37,1 (триплет); 39,4 (триплет); 39,5 (триплет); 40,6 (дублет); 40,6 (триплет); 64,7 (дублет); 73,9 (дублет); 77,8 (синглет); 78,5 (дублет); 82,3 (дублет); 121,1 (дублет); 123,7 (дублет); 124,3 (дублет); 127,7 (дублет); 135,3 (дублет); 137,3 (дублет); 137,3 (дублет); 138,2 (дублет); 152,7 (дублет); 166,3 (синглет); 175 (синглет).
10) Растворимость: растворим в спиртах, таких как метанол, этанол или бутанол и растворим в ацетоне, хлороформе, этил ацетате и диметилсульфоксиде, ограниченно растворим в воде, не растворим в гексане.
11) Цветные реакции: положительная реакция с серной кислотой, йодом, ингидрином и молибдатом аммония-перхорной кислотой.
12) Высокоэффективная жидкостная хроматография:
Разделительная колонка Космосил 5C18-AR (размер колонки 4,6х250 мм, производство фирмы Накараитеск Инк.)
Растворитель 45% -ный (об.об), содержащий 0,5% триэтиламина-фосфатного буфера (pH 3)
Скорость потока 1 мл/мин
Длина волны 230 нм
Время удерживания 9,06 и 9,16 мин
Лейкостродуксин B
1) Химическое строение: вышеприведенная формула (1в)
2) Характер: кислотный и жирорастворимый.
Разделительная колонка Космосил 5C18-AR (размер колонки 4,6х250 мм, производство фирмы Накараитеск Инк.)
Растворитель 45% -ный (об.об), содержащий 0,5% триэтиламина-фосфатного буфера (pH 3)
Скорость потока 1 мл/мин
Длина волны 230 нм
Время удерживания 9,06 и 9,16 мин
Лейкостродуксин B
1) Химическое строение: вышеприведенная формула (1в)
2) Характер: кислотный и жирорастворимый.
3) Цвет: бледно-желтое масло.
4) Молекулярная формула C34H56O10NP.
5) Молекулярная масса: 669, определена методом ББА-МС.
6) Ультрафиолетовый спектр поглощения: 234 ем (максимальное поглощение в метаноле).
7) Инфракрасный спектр поглощения: инфракрасный спектр показал следующие максимумы поглощения (пленка жидкости, gmax см-1): 2927, 2855, 1729, 1463, 1380, 1250, 1172, 1056, 968.
8) Спектр 1H-ядерного резонанса: спектр ядерного магнитного резонанса (270 МГц) в тяжелом метаноле с применением в качестве внутреннего стандарта триметилсислана приведен ниже: 7,09 (1H, дублет дублетов, J 9,8 и 4,9 Гц); 6,21-6,35 (2H, мультиплет), 6,07 (1H, дублет дублетов, J=15,6 и 6,1 Гц); 6,02 (1H, дублет дублетов, J=9,8 и 1,5 Гц); 5,94 (1H, дублет, J=15,6 Гц); 5,46 (1H, мультиплет); 5,31 (1H, мультиплет); 5,1 (1H, дублет дублетов, J= 6,1 и 4,4 Гц); 4,94 (1H мультиплет); 4,72 (1H, мультиплет); 4,72 (1H, мультиплет); 4,29 (1H, триплет дублетов, J 9,9, 9,9 и 2,6 Гц); 2,93-3,15 (2H, мультиплет); 2,5-2,71 (2H, мультиплет); 2,27 (2H, триплет, J=7,3 Гц); 2,17 (1H, мультиплет); 1-2,01 (22H, мультиплет); 0,95 (3H, триплет, J=7,5 Гц); 0,87 (3H, триплет, 1=6,8 Гц); 0,86 (3H, дублет, J=6,6 Гц).
9)Спектр 13С-ядерного магнитного резонанса: (δ млн-1), спектр ядерного магнитного резонанса (270 МГц) в тяжелом метаноле с применением в качестве внутреннего стандарта триметилсилана приведен ниже; 11,4(квартет); 11,7 (квартет); 19,6 (квартет); 22,7 (триплет); 24,7 (триплет); 26,4 (триплет); 27,6 (триплет); 30,6 (триплет); 32,4 (триплет); 33,1 (триплет); 34,1 (триплет); 35,5 (триплет); 35,5 (дублет); 36,1 (дублет); 37,1 (триплет); 37,3 (триплет); 39,4 (триплет); 40,6 (дублет); 40,6 (триплет); 64,7 (дублет); 73,9 (дублет); 77,8 (синглет); 78,5 (дублет); 82,3 (дублет); 121 (дублет); 123,7 (дублет); 124,3 (дублет); 127,7 (дублет); 135,2 (дублет); 137,4 (дублет); 138,2 (дублет); 152,7 (дублет); 166,4 (синглет); 175,1 (синглет).
10) Растворимость: растворим в спиртах, таких как метанол, этанол и бутанол, и растворим в ацетоне, хлороформе, этилацетате и диметилсульфоксиде, ограничено растворим в воде, не растворим в гексане.
11) Цветные реакции: положительные реакции с серной кислотой, йодом, ингидрином и молибдатом аммония перхлорной кислотой.
12) Высокоэффективная жидкостная хроматография:
Разделительная колонка Космосил 5 C18-AR (размер колонки 46х250 мм, производство фирмы Накараитеск Инк).
Разделительная колонка Космосил 5 C18-AR (размер колонки 46х250 мм, производство фирмы Накараитеск Инк).
Растворитель: 45%-ный (об/об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера (pH 3).
Скорость потока 1 мл/мин
Длина волны 230 нм
Время удерживания 20,62 и 20,87 мин
Лейстродуксин C
1) Химическое строение: вышеприведенная формула (1c).
Длина волны 230 нм
Время удерживания 20,62 и 20,87 мин
Лейстродуксин C
1) Химическое строение: вышеприведенная формула (1c).
2) Характер: кислотный и жирорастворимый.
3) Цвет: бледно-желтое масло.
4) Молекулярная формула: C34H56O10NP
5) Молекулярная масса: 669, определена методом ББА-МС.
5) Молекулярная масса: 669, определена методом ББА-МС.
6) Ультрафиолетовый спектр поглощения: 234 нм (максимальное поглощение в метаноле).
7) Инфракрасный спектр поглощения: инфракрасный спектр показал следующие максимумы поглощения (пленка жидкости, gmax/ см-1):
2930, 2856, 1728, 1464, 1252, 1172, 1056, 968.
2930, 2856, 1728, 1464, 1252, 1172, 1056, 968.
8)Cпектр 1Н-ядерного магнитного резонанса: спектр ядерного магнитного резонанса (270 МГц) в тяжелом метаноле с применением в качестве внутреннего стандарта триметилсилана приведен ниже: 7,08 (1H, дублет дублетов, J=9,8 и 4,9 Гц); 6,21-6,35 (2H, мультиплет); 6,07 (1H дублет дублетов, J=15,6 и 6,1 Гц); 6,02 (1H, дублет дублетов, J=9,8 и 1,5 Гц); 5,94 (1H, дублет, J=15,6 Гц); 5,46 (1H, мультиплет); 5,31 (1H, мультиплет); 5,1 (1H, дублет дублетов, J= 6,1 и 4,9 Гц); 4,94 (1H, мультиплет); 4,72 (1H, мультиплет); 4,28 (1H, триплет дублетов, J=10,1, 10,1 и 2,4 Гц); 2,93-3,15 (2H, мультиплет); 2,5-2,71 (2H, мультиплет); 2,27 (2H, триплет, J=7,3 Гц); 2,16 (1H, мультиплет); 1-2,01 (22 H, мультиплет); 0,95 (3H, триплет, J=7,3 Гц); 0,88 (6H, дублет, J=6,3 Гц).
9) Спектр 13С-ядерного магнитного резонанса (δ млн-1): спектр ядерного магнитного резонанса (270 Гц) в тяжелом метаноле с применением в качестве внутреннего стандарта триметилсилана приведен ниже 11,4 (квартет); 22,7 (триплет); 23,1 (квартет); 24,7 (триплет); 26,2 (триплет); 28,2 (триплет); 29,1 (дублет); 30,4 (триплет); 32,4 (триплет); 33,1 (триплет); 34,2 (триплет), 36,1 (дублет); 37,1 (триплет); 39,4 (триплет); 40 (триплет); 40,6 (дублет); 40,6 (триплет); 64,6 (дублет); 73,9 (дублет); 77,8 (синглет); 78,4 (дублет); 82,3 (дублет); 121,1 (дублет); 123,7 (дублет); 124,3 (дублет); 127,7 (дублет); 135,2 (дублет); 137,3 (дублет); 138,2 (дублет); 152,7 (дублет); 166,4 (синглет); 175 (синглет).
10) Растворимость: растворим в спиртах, таких как метанол, этанол или бутанол, и растворим в ацетоне, хлороформе, этилацетате и диметилсульфоксиде, ограничено растворим в воде, не растворим в гексане.
11) Цветные реакции: положительные реакции с серной кислотой, йодом, нингидрином и молибдатом аммония, перхлорной кислотой.
12) Высокоэффективная жидкостная хроматография:
Разделительная колонка Космосил 5 C 18-AR (размер колонки 4,6х250 мм, производство фирмы Накараитеск Инк.)
Растворитель 45% -ный (об/об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера (pH 3)
Скорость потока 1 мл/мин
Длина волны 230 нм
Время удерживания 21,9 и 22,19 мин
Биологическая активность
Нижеследующие примеры испытаний более подробно разъясняют действие соединений изобретения.
Разделительная колонка Космосил 5 C 18-AR (размер колонки 4,6х250 мм, производство фирмы Накараитеск Инк.)
Растворитель 45% -ный (об/об) водный ацетонитрил, содержащий 0,5% триэтиламин-фосфатного буфера (pH 3)
Скорость потока 1 мл/мин
Длина волны 230 нм
Время удерживания 21,9 и 22,19 мин
Биологическая активность
Нижеследующие примеры испытаний более подробно разъясняют действие соединений изобретения.
Пример испытания 1.
Стимулирование продуцирования ФСКГМ
Определение стимулирования продуцирования ФСКГМ соединениями изобретения, в принципе, осуществлено сочетанием методики Kohama и др. (Experimental Hematology 16, 603 608, 1988) и методики Kitamura и др. (Journal of Cellular Physiology 140, 323 334, 1989). Далее следует подробное изложение методики. Клетки КМ-102, происходящие из костного мозга человека и служащие для продуцирования ФСКГМ, смешивают с раствором испытуемого образца, разбавленного до необходимой концентрации ("система продуцирования ФСКГМ"). После инкубирования в течение 24 ч часть надосадочной жидкости культуры отбирают и добавляют к системе культивирования ФСКГМ-зависимых TF-1 клеток человека.
Определение стимулирования продуцирования ФСКГМ соединениями изобретения, в принципе, осуществлено сочетанием методики Kohama и др. (Experimental Hematology 16, 603 608, 1988) и методики Kitamura и др. (Journal of Cellular Physiology 140, 323 334, 1989). Далее следует подробное изложение методики. Клетки КМ-102, происходящие из костного мозга человека и служащие для продуцирования ФСКГМ, смешивают с раствором испытуемого образца, разбавленного до необходимой концентрации ("система продуцирования ФСКГМ"). После инкубирования в течение 24 ч часть надосадочной жидкости культуры отбирают и добавляют к системе культивирования ФСКГМ-зависимых TF-1 клеток человека.
В промежутке между 48 и 72 ч по росту TF-1 клеток определяют количество ФСКГМ ("система анализа ФСКГМ") с получением меры стимулирования продуцирования ФСКГМ. Рост TF-1 клеток определяют в течение 4 ч по пульсирующей третий-тимидиновой метке. Аналогичные результаты получены и с помощью ТММ-набора (Хемикон Интернэшнл Инк. США) с анализом роста TF-1 клеток и с помощью ELISA-набора (Гензим Инк, США) с анализом ФСКГМ. Функционирует или не функционирует нормально система инициирования продуцирования ФСКГМ, определяют с помощью рекомбинантного интерлейкина 1β (ИЛ 1β, Гензим Инк. США). ИЛ- 1β в интервале 1 100 ед/мл индуцирует с зависящей от дозы интенсивностью продуцирование ФСКГМ и максимум индуцированного продуцирования ФСКГМ в 10 20 раз превосходит его продуцирование без ИЛ- 1β, что указывает на нормальное функционирование экспериментальной системы.
После добавления к КМ-102 клеткам каждого из лейстродуксина A, B и C в определенной концентрации найдено, что продуцирование ФСКГМ индуцируется в зависимой от дозы степени. Максимально количество продуцированного ФСКГМ в 10 20 раз превышает количество, продуцируемое без добавления лейстродуксина. Найденные значения ЭД50 составляют 180 + 50, 50 + 15 и 50 + 15 нг/мл соответственно для лейстродуксинов A, B и C.
Пример испытаний 2. Стимулирование продуцирования ФСКГ.
Стимулирование продуцирования ФСКГ анализируют в системе, в которой система анализа ФСКГМ, примененная в примере испытаний 1, заменена системой анализа ФСКГ, описанной Shirafuji и др. (Experimental Hematology 17, 116 - 119, 1989). Более подробное изложение следует далее. Клетки КМ-102, происходящие из стромальных клеток костного мозга человека и служащие для продуцирования ФСКГ, добавляют к раствору лейстродуксина, разбавленному до необходимой концентрации ("система продуцирования ФСКГ"). После инкубирования в течение 24 ч часть надосадочной жидкости культуры отбирают и добавляют к культурной системе ФСКГ-зависимых NFS-60 клеток. В промежутке между 24 и 48 ч по росту NFS-60 клеток определяют количество ФСКГ ("система анализа ФСКГ") с получением меры стимулирования продуцирования ФСКГ. Рост NFS-60 клеток определяют с помощью пульсирующей метки тритий-тимидина в течение 4 ч. Аналогичные результаты, кроме того, получены с помощью МТТ-набора с анализом роста NFS-60 клеток и с помощью ELISA-набора с анализом ФСКГ (Motojima и др. Journal of Immunological Methods 118, 187 192, 1989). Функционирует или не функционирует нормально система инициирования продуцирования ФСКГ определяют с помощью рекомбинантного интерлейкина 1β(ИЛ-1β, Гендзим Инк. США).
ИЛ- 1β индуцирует продуцирование ФСКГ с зависящей от дозы интенсивностью в интервале 1 100 ед./мл, и максимум индуцированного продуцирования ФСКГ в 10 20 раз превышает продуцирование ФСКГ без ИЛ-1β, что указывает на нормальное функционирование экспериментальной системы.
После добавления к клеткам NFS-60 в определенной концентрации каждого из лейстродуксинов A, B и C найдено, что продуцирование ФСКГ индуцируется в зависимой от дозы степени. Максимально количество продуцируемого ФСКГ в 10 - 20 раз превышает количество, продуцируемое без добавления лейстродуксинов. Найденное значение ЭД50 составляет 200 + 50, 50 + 15 и 50 + 15 нг/мл соответственно, для лейстродуксина A, B и C.
Пример испытаний 3.
Стимулирование продуцирования ФНО
В работе Furukawa и др. (J. Biol. Chem, 261, 6039 6047, 1986) сообщается, что фибробластообразующие L-M клетки, происходящие из соединительной ткани мышей, продуцируют и секретируют сравнительно большие количества ФНО и что катеколамины стимулируют такое продуцирование и секретирование. Нами исследовано, стимулируют ли лейстродуксины продуцирование и секретирование ФНО.
В работе Furukawa и др. (J. Biol. Chem, 261, 6039 6047, 1986) сообщается, что фибробластообразующие L-M клетки, происходящие из соединительной ткани мышей, продуцируют и секретируют сравнительно большие количества ФНО и что катеколамины стимулируют такое продуцирование и секретирование. Нами исследовано, стимулируют ли лейстродуксины продуцирование и секретирование ФНО.
L-M клетки культивируют в среде 199, содержащей 0,5% пептона. В каждую ячейку 24-х ячеистого планшета для культивирования вносят 5•104 и культивируют в CO2-инкубаторе (37oC, 5% CO2) до момента достижения конфлуэнтности. Жидкость культуры удаляют и клетки один раз промывают средой 199, содержащей 0,5% альбумина бычьей сыворотки (Сигма). К среде 199, содержащей 0,5% альбумина бычьей сыворотки, в определенной концентрации добавляют один из лейстродуксинов и полученной смесью обрабатывают L-M клетки. После этого L-M клетки культивируют 24 ч в CO2-инкубаторе. После отделения от культуры жидкости в ней определяют ФНО.
Определение ФНО проводят с помощью ферментного иммуноанализа (Proc. Natl. Acad. Sci. США 80, 3513 3516 1983).
В каждую ячейку полистирольтного 96-ти ячеистого планшета вносят 75 мкл раствора антимышиных- b ФНО антител /Боэрингер (0,3 мкг/мл pH 9,6)/ и оставляют на 1 ч при комнатной температуре.
После удаления антител все ячейки промывают трижды промывным раствором. В каждую ячейку вносят 50 мкл стандартного b ФНО (Уоко Пьюэ Кем. Инд.) или стандартного раствора и смесь оставляют на 6 8 ч при комнатной температуре. По окончании указанного периода стандартный b ФНО или стандартный раствор удаляют и все ячейки промывают три раза. В каждую ячейку вносят 50 мкл раствора меченных анти- b ФНО моноклональных антител /Боэрингер (100 мЕ/мл, pH 7)/ и раствор оставляют на 15 18 ч при 4oC. По окончании указанного периода меченные ферментом антитела удаляют и все ячейки трижды промывают. Затем в каждую ячейку вносят 100 мкл раствора хлорфенол- b -D-галактозида /Боэрингер, (1 мг/мл, pH 7,3)/. После появления необходимого окрашивания (2
3 ч при комнатной температуре) определяют поглощение при 570 нм. Количество ФНО рассчитывают на основании стандартной кривой и выражают в виде процента к количеству ФНО, продуцированного и секретированного клетками без обработки лейстродуксином.
3 ч при комнатной температуре) определяют поглощение при 570 нм. Количество ФНО рассчитывают на основании стандартной кривой и выражают в виде процента к количеству ФНО, продуцированного и секретированного клетками без обработки лейстродуксином.
Найдено, что все лейстродуксины стимулируют продуцирование ФНО в зависящей от дозы степени. При концентрации каждого лейстродуксина 5 мк/мл продуцирование ФНО повышается в 2 или более раз по сравнению с клетками без обработки лейстродуксином.
Пример испытаний 4.
Противогрибковая активность.
С целью рассмотрения противогрибковой активности лейстродуксинов по отношению к патогенным для животных грибков испытана активность этих соединений против Tricophyton mentagrophytes. Для каждого лейстродуксина наблюдался ингибирующий круг при концентрации 1 мкг/диск.
Пример испытаний 5.
Острая токсичность
По обычной методике на пяти мышах линии ddY (самцы) проведены испытания на острую токсичность. После внутрибрюшинного введения дозы в 0,2 мг/кг лейстродуксина A никакой токсичности в течение 5 дн не наблюдалось. Аналогично, никакой токсичности не наблюдалось после введения лейстродуксина B, лейстродуксина C и родственных им производных.
По обычной методике на пяти мышах линии ddY (самцы) проведены испытания на острую токсичность. После внутрибрюшинного введения дозы в 0,2 мг/кг лейстродуксина A никакой токсичности в течение 5 дн не наблюдалось. Аналогично, никакой токсичности не наблюдалось после введения лейстродуксина B, лейстродуксина C и родственных им производных.
Из вышеприведенных результатов очевидно, что лейстродуксины A, B и C стимулируют продуцирование гемопоэтических факторов, таких как фактор стимуляции колонии гранулоцитов и фактор стимуляции колонии гранулоцитов-макрофагов. Соответственно, лейстродуксины применимы в качестве лечебных средств для снижения побочных эффектов, вызванных химиотерапией и радиотерапией рака. Соединения также защищают от инфекций и за счет активации макрофагов обладают противораковым действием. Кроме того, лейкостродуксины применимы для улучшения церебрального метаболизма путем стимулирования продуцирования ФНО. Помимо этого лейстродуксины применимы в качестве противогрибковых средств, что показано их противогрибковой активностью по отношению к Tricophyton mentagrohytes.
Claims (8)
1. Лейстродуксин формулы I
где R 5-метилгексаноилоксигруппа, 6-метилоктаноилоксигруппа или 7-метилоктаноилоксигруппа,
и его соли.
где R 5-метилгексаноилоксигруппа, 6-метилоктаноилоксигруппа или 7-метилоктаноилоксигруппа,
и его соли.
2. Лейстродуксин по п. 1, отличающийся тем, что отвечает формуле Ia
и его соли.
и его соли.
3. Лейстродуксин по п.1, отличающийся тем, что отвечает формуле Ib
и его соли.
и его соли.
4. Лейстродуксин по п. 1, отличающийся тем, что отвечает формуле Ic
и его соли.
и его соли.
5. Способ получения по меньшей мере одного лейстродуксина формулы I, или Ia, или Ib, или Ic, или его соли, включающий культивирование штамма Streptomyces platensis FEPM BP-3288 или штамма Streptomyces platensis FEPM BP 1668.
6. Штамм Streptomyces platensis FEPM BP 3288 продуцент лейстродуксина формулы I или его соли.
7. Фармацевтическая композиция, обладающая кроветворной и противогрибковой активностью, включающая активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента используют лейстродуксин формулы I, или Ia, или Ib, или Ic по пп. 1 4, при суточной дозе 1 1000 мг.
8. Лечебно-профилактическое средство для устранения и предупреждения побочных последствий, возникающих в результате химиотерапии или радиотерапии рака, инфекций, рака, церебральных нарушений и грибковых инфекций, отличающееся тем, что оно представляет собой соединение формулы I, или Ia, или Ib, или Ic, или его соли.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6308791 | 1991-03-27 | ||
| JP3-63087 | 1991-03-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2082760C1 true RU2082760C1 (ru) | 1997-06-27 |
Family
ID=13219198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU925011385A RU2082760C1 (ru) | 1991-03-27 | 1992-03-26 | Лейстродуксин, способ получения лейстродуксина штамм streptomyces platensis - продуцент лейстродуксина, фармацевтическая композиция, обладающая кроветворной и противогрибковой активностью, лечебно-профилактическое средство |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5334587A (ru) |
| EP (1) | EP0506463B1 (ru) |
| JP (1) | JPH05123179A (ru) |
| KR (1) | KR0145680B1 (ru) |
| CN (1) | CN1058294C (ru) |
| AT (1) | ATE134640T1 (ru) |
| AU (1) | AU649116B2 (ru) |
| CA (1) | CA2064126A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ279299B6 (ru) |
| DE (1) | DE69208494T2 (ru) |
| DK (1) | DK0506463T3 (ru) |
| ES (1) | ES2086651T3 (ru) |
| FI (1) | FI101978B (ru) |
| GR (1) | GR3019996T3 (ru) |
| HK (1) | HK117696A (ru) |
| HU (1) | HU216875B (ru) |
| IE (1) | IE74389B1 (ru) |
| IL (1) | IL101394A (ru) |
| IS (1) | IS1604B (ru) |
| NO (1) | NO304600B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ242155A (ru) |
| RU (1) | RU2082760C1 (ru) |
| TW (1) | TW212182B (ru) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU649116B2 (en) * | 1991-03-27 | 1994-05-12 | Sankyo Company Limited | New compounds, named the "Leustroducins", their preparation and their therapeutic uses |
| ATE166058T1 (de) * | 1993-04-23 | 1998-05-15 | Sankyo Co | Neue verbindung, leustroducsin h, ihre herstellung und therapeutische verwendung |
| WO1997014704A1 (fr) * | 1995-10-17 | 1997-04-24 | Suntory Limited | Medicament contre la thrombopenie |
| US9861346B2 (en) | 2003-07-14 | 2018-01-09 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Patent foramen ovale (PFO) closure device with linearly elongating petals |
| JP2007519609A (ja) * | 2003-09-17 | 2007-07-19 | アイコス コーポレイション | 細胞増殖を制御するためのｃｈｋ１インヒビターの使用 |
| WO2008124603A1 (en) | 2007-04-05 | 2008-10-16 | Nmt Medical, Inc. | Septal closure device with centering mechanism |
| US20130165967A1 (en) | 2008-03-07 | 2013-06-27 | W.L. Gore & Associates, Inc. | Heart occlusion devices |
| US20120029556A1 (en) | 2009-06-22 | 2012-02-02 | Masters Steven J | Sealing device and delivery system |
| US8956389B2 (en) | 2009-06-22 | 2015-02-17 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Sealing device and delivery system |
| US10828019B2 (en) | 2013-01-18 | 2020-11-10 | W.L. Gore & Associates, Inc. | Sealing device and delivery system |
| US9808230B2 (en) | 2014-06-06 | 2017-11-07 | W. L. Gore & Associates, Inc. | Sealing device and delivery system |
| CN116396359A (zh) * | 2020-02-17 | 2023-07-07 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一组具有抗病毒活性的肽类化合物奥米克欣a族化合物及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3592925A (en) * | 1969-04-21 | 1971-07-13 | American Cyanamid Co | Antibiotics ah272alpha2 and ah272beta2 and process for producing same |
| US3907779A (en) * | 1974-05-20 | 1975-09-23 | Upjohn Co | 5,6 Dihydro-5-azathymidine and derivatives |
| AU574713B2 (en) * | 1983-09-12 | 1988-07-14 | Warner-Lambert Company | Cl-1957a antibiotic compound and its production |
| US4575500A (en) * | 1984-03-26 | 1986-03-11 | Merck & Co., Inc. | Antifungal substances and process for their production |
| JPH02186A (ja) * | 1987-05-07 | 1990-01-05 | Sumitomo Chem Co Ltd | 新規化合物およびそれを有効成分とする農工業用殺菌剤 |
| JP2865302B2 (ja) * | 1988-02-13 | 1999-03-08 | サントリー株式会社 | ２―ピラノン誘導体及びその製造法並びにそれを含む抗菌剤 |
| CA1335365C (en) * | 1988-02-13 | 1995-04-25 | Hidekazu Hosono | 2-pyranone derivative and process for production thereof |
| AU649116B2 (en) * | 1991-03-27 | 1994-05-12 | Sankyo Company Limited | New compounds, named the "Leustroducins", their preparation and their therapeutic uses |
-
1992
- 1992-03-24 AU AU13123/92A patent/AU649116B2/en not_active Ceased
- 1992-03-25 HU HU9201005A patent/HU216875B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-03-25 NO NO921158A patent/NO304600B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-03-25 JP JP4066630A patent/JPH05123179A/ja active Pending
- 1992-03-25 US US07/857,162 patent/US5334587A/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-03-26 FI FI921339A patent/FI101978B/fi active
- 1992-03-26 IE IE920965A patent/IE74389B1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-26 CA CA002064126A patent/CA2064126A1/en not_active Abandoned
- 1992-03-26 RU SU925011385A patent/RU2082760C1/ru active
- 1992-03-26 CZ CS92915A patent/CZ279299B6/cs unknown
- 1992-03-26 IS IS3829A patent/IS1604B/is unknown
- 1992-03-27 DE DE69208494T patent/DE69208494T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-03-27 AT AT92302718T patent/ATE134640T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-03-27 DK DK92302718.9T patent/DK0506463T3/da active
- 1992-03-27 TW TW081102373A patent/TW212182B/zh active
- 1992-03-27 CN CN92103126A patent/CN1058294C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-27 KR KR1019920005088A patent/KR0145680B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-03-27 NZ NZ242155A patent/NZ242155A/xx unknown
- 1992-03-27 ES ES92302718T patent/ES2086651T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-27 EP EP92302718A patent/EP0506463B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-27 IL IL10139492A patent/IL101394A/en not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-05-06 US US08/239,284 patent/US5443972A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-05-20 GR GR960401371T patent/GR3019996T3/el unknown
- 1996-07-04 HK HK117696A patent/HK117696A/xx not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J. of Antibiotics, v. XLII, N 9, р.1331. Br. J. Cancer, 1989, v. 59, р. 25. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2082760C1 (ru) | Лейстродуксин, способ получения лейстродуксина штамм streptomyces platensis - продуцент лейстродуксина, фармацевтическая композиция, обладающая кроветворной и противогрибковой активностью, лечебно-профилактическое средство | |
| US4994270A (en) | A54145 antibiotics and process for their production | |
| US5286631A (en) | Process for producing the A10255 complex and corresponding microorganism | |
| JPH06506202A (ja) | 医薬用キサントン誘導体 | |
| US4792522A (en) | Rigolettone antitumor complex | |
| RU2266911C2 (ru) | Циклипостины, способ их получения, фармацевтическая композиция на их основе, способ ее получения и штамм streptjmyces, являющийся продуцентом циклипостинов | |
| US5147860A (en) | Tan-1120, its derivatives, production and use thereof | |
| US6756402B2 (en) | Cyclipostins, process for their preparation and use thereof | |
| JP3830964B2 (ja) | 海洋放線菌から単離した新規なチオデプシペプチド | |
| JPH06256391A (ja) | 薬理作用を有するアピオクレアクリソスペルマからの活性ペプチドであるクリソスペルミン類、その生産方法およびその使用 | |
| EP0808843B1 (en) | Novel macrolide compound 0406 | |
| JPH01149791A (ja) | 化合物ｔａｎ−９９９、その製造法および用途 | |
| JPH01131177A (ja) | Ｎｆ−１６１６−９０４物質 | |
| CA2214871C (en) | Process for preparing spirolaxine and spirolaxine methyl ether | |
| US5409912A (en) | Leustroducsin H, its preparation and its therapeutic use | |
| US6245734B1 (en) | Physiologically active polyoxypeptin and deoxypolyoxypeptin and anticancer drugs containing the same | |
| JP3034646B2 (ja) | Ｇ−ｃｓｆおよびｇｍ−ｃｓｆ誘導剤 | |
| JPH01240196A (ja) | 新規グリコペプチド系抗生物質ｐａ−４５０５２ | |
| JPH0429356B2 (ru) | ||
| EP0385594B1 (en) | Acidic polycyclic ether antibiotic | |
| JPH05221867A (ja) | Ｉｌ−６誘導剤 | |
| JPS6236355A (ja) | 新規ピロリン化合物 | |
| JPH09241257A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ−４１９５６類及びその製造法 | |
| JPS60192593A (ja) | Ｆｒ−９００４６２物質 | |
| JPS63280073A (ja) | 新規抗生物質ｙｐ−０２９７８ｌ−ｃ及びその製造方法 |