RU2082757C1 - Субстрат для культивирования флавивирусов или ареновирусов на основе культуры клеток и способ получения антигена флавивируса или ареновируса - Google Patents
Субстрат для культивирования флавивирусов или ареновирусов на основе культуры клеток и способ получения антигена флавивируса или ареновируса Download PDFInfo
- Publication number
- RU2082757C1 RU2082757C1 SU905052769A SU5052769A RU2082757C1 RU 2082757 C1 RU2082757 C1 RU 2082757C1 SU 905052769 A SU905052769 A SU 905052769A SU 5052769 A SU5052769 A SU 5052769A RU 2082757 C1 RU2082757 C1 RU 2082757C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- cells
- antigen
- fsme
- cell
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract description 4
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 title claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 44
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 18
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 claims description 12
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 38
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 14
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 abstract description 6
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 61
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 13
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2531/00—Microcarriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: вирусология. Сущность изобретения: для продуцирования вирусного антигена весенне-летнего менингоэнцефалита (FSME) путем выращивания вируса FSME в культурах клеток, зависящих от поверхности перманентной клеточной линии, предпочтительно веро-клеточной линии АТСС CCL 81, проводят инфицирование вирусом FSME, и клетки при сохранении роста клеток поддерживают в нелитической бессывороточной системе связанными с носителями, чтобы обеспечивать образование антигена. После чего содержащую антиген среду отделяют от связанных носителем клеток и известным методом, концетрированием, инактивированием и очисткой, обрабатывают до приемлемого галенова препарата. 2 с. и 4 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к матрице со связанными с нею путем адгезии клетками человека или животных и к способу продуцирования вируса/вирусного антигена, особенно вирусного антигена таежного весенне-летнего менингоэнцефалита (FSME)
Инцифирования вирусом таежного весенне-летнего менингоэнцефалита (FSME) наблюдали в Европе со времен Второй мировой войны. В Австрии, в Южной Германии и в Чехословакии по причине инцифирования вирусом FSME ежегодно проходят лечение в стационаре несколько сотен пациентов.
Инцифирования вирусом таежного весенне-летнего менингоэнцефалита (FSME) наблюдали в Европе со времен Второй мировой войны. В Австрии, в Южной Германии и в Чехословакии по причине инцифирования вирусом FSME ежегодно проходят лечение в стационаре несколько сотен пациентов.
FSME вирус принадлежит к семейству флавивирусов, к более ранней серологической группе В арбовирусов, которая представляет род семейства вирусов Togavirid ae.
Против наиболее значительного и наиболее распространенного возбудителя энцефалита у человека, вируса группы B японского энцефалита, уже долгие годы существуют вакцины. Эти вакцины получают из головного мозга инфицированных мышей, подвергают очистке и считают их надежными и эффективными (Hoke et al, N. Engl. I. Med, 319 608 (1988).
С 1976 г располагают вакциной против FSME, которая допущена органами здравоохранения к применению. Для производства этой вакцины культивируют вирус в головном мозгу инфицированных детенышей мышей, размножают в клетках куриного эмбриона, инактивируют формалином и затем подвергают эффективному способу очистки (Heinz et al. I. Med. Virol, 6 103 (1980).
В литературе описан целый ряд возможностей для размножения арбовирусов, принимая во внимание возможное получение вакцины. Наиболее широко применяемым в настоящее время методом является вакцинация фибробластов куриного эмбриона, полученным из головного мозга мыши FSME посевным вирусом и культивирование вакцинированных клеток. Этот метод требует связанной с затратами очистки антигена, чтобы удалять комплексный гетерологический биологический материал и избегать при повторном назначении полученных из него доз вакцины раздражающего эффекта у подвергшихся вакцинации.
Для подготовки клеток куриного эмбриона следует исходить из SPF (= специальных непатогенных) яиц. Эти SPF-яйца для поддержания их SPF-состояния перед каждым применением должны подвергаться многочисленным длительным исследованиям.
Далее культуры клеток куриного эмбриона показывают лишь небольшие числа поколений при дальнейшем культивировании, благодаря чему установлены граница размера загрузок, трудности сохранения стерильности при выращивании первичной культуры и отсутствие постоянства качества первичных клеток относительно размножения вируса и производства антигена.
Эти недостатки существуют не только при способах для продуцирования FSME-вирусных антигенов, но и при получении антигена вообще.
Изобретение ставит своей задачей улучшить продуцирование вируса/вирусного антигена, особенно FSME-вируса/вирусного антигена, таким образом, чтобы устранить вышеназванные недостатки и предоставить способ для выращивания вирусов/вирусных антигенов в культурах клеток, который позволяет, в частности, производство в крупном промышленном масштабе, причем одновременно культура может сохранять стерильность простым методом. Передача нежелательных клеточных протеинов в надосадочную жидкость культуры должна быть минимальной.
Для решения описанной задачи в распоряжение предоставляют матрицу, т.е. материал-носитель, со связанными с ним путем адгезии клетками человека или животных, причем клетки инфицированы вирусом. Изобретение основано на открытии, что зависящие от поверхности клетки, которые служат для размножения вируса, даже в вирусинфицированном состоянии остаются связанными с матрицей путем адгезии, непрерывно продуцируют в течение относительно длительного времени вирусный антиген и переходят в питательную среду.
Можно хранить загруженную инфицированными клетками матрицу по изобретению в течение нескольких дней при температуре 0 8oC, следовательно, в условиях, при которых подавлены клеточный метаболизм и тем самым продуцирование вируса. Сохраняемую подобным путем матрицу можно в дальнейшем применять без проблем введением в питательную среду и установлением соответствующих условий культивирования для продуцирования вирусного антигена. Таким образом, матрица по изобретению представляет исходную культуру, которую можно получать с постоянным качеством и с постоянной активностью в запас, состояние которой относительно стерильности можно легко проверять и которая в любое время может быть использована для получения вирусного антигена.
Далее, связывание продуцирующих антиген клеток с носителем допускает крайне простое манипуливание с вирусинфицированными и готовыми к производству клетками. Так, например, можно непрерывно осуществлять производство вируса/вирусного антигена в перфузионном реакторе. Отделение клеток от содержащей антиген среды существенно облегчается благодаря их связыванию с матрицей, вследствие чего матрица по изобретению упрощает производство вируса/вирусного антигена в крупном промышленном масштабе.
Предпочтительный вариант осуществления матрицы по изобретению состоит в том, что в качестве связанных путем адгезии клеток предусмотрены веро-клетки АТТС CCL 81, которые используются преимущественно для производства вирусного антигена весенне-летнего менингоэнцефалита (FSME) и поэтому инфицированы вирусом FSME.
Но связанные путем адгезии с матрицей клетки могут быть инифицированы также флавивирусом или аренавирусом.
В качестве особенно пригодного для матрицы материала оказались стекло, декстран с полимерной сеткой, желатина или синтетический материал, причем наилучшей формой матрицы является микроноситель, у которого диаметр частиц лежит преимущественно в области 100 3000 мкм. Эти микроносители могут иметь гладкую поверхность или пористое структурирование.
Другой целесообразный вариант осуществления матрицы по изобретению отличается тем, что на ее поверхности связаны путем адгезии на 1 см2 1 • 105 -4 • 105 клеток.
Изобретение относится так же к способу для продуцирования вирусного антигена весенне-летнего менингоэнцефалита (FSME) с применением матрицы по изобретению, который отличается тем, что зависящие от поверхности перманентные клетки, предпочтительно веро-клетки АТТС CCL 81, инфицируются вирусом FSME, клетки сохраняются в бессывороточной среде при поддерживании их жизнеспособности связанными путем адгезии с матрицей, чтобы обеспечивать образование антигена и передачу антигена в питательную среду, после чего содержащую антиген среду отделяют от связанных носителем клеток и перерабатывают известным образом, концентрированием, инактивированием и очисткой, в приемлемый галеновый препарат.
Веро-клеточную линию АТТС CCL 81 получают из почечной ткани зеленой мартышки (Cercopithecs aethiops), содержат в бессывороточной среде в состоянии активного метаболизма. Для такой перманентной клеточной линии заводят один раз основной и рабочий банк посева клеток и проводят все исследования для загрязняющих веществ. Следовательно, эту перманентную клеточную линию можно точно характеризовать не только относительно отсутствия загрязняющих микроорганизмов, но и относительно поведения при росте, культивирования, поведения при размножении и если прибегнуть к оптимальной оценке считать постоянной.
При способе по изобретению применяют преимущественно веро-клетки, которые связаны с микроносителями. В результате этого можно достигать высокой плотности клеток, которую при использованных до сих пор первичных культурах клеток нельзя было достигнуть ни в колбах Рукса, ни в суспензии и которая позволяет значительно повышать выход вируса и вирусного антигена на единицу ферментационного объема.
Выгодный вариант осуществления способа по изобретению состоит в том, что размножение вируса и образование антигена осуществляют в непрерывно работающем перфузионном реакторе в течение по меньшей мере 5 дн при 34 37oC, причем перфузию можно проводить с нормой от 0,3 до 10 объем/ объем/день. Далее, в перфузионном реакторе можно предусматривать плотность клеток в пределах от 2 • 109 до 2 • 1010 клеток на 1 л ферментационного объема, последнее при использовании установки для ферментации с псевдоожиженным слоем.
Размножение вируса по изобретению в перфузионной культуре позволяет, по сравнению с культивированием частями, существенно сокращать заданное нормой перфузии время пребывания вируса и вирусного антигена в среде. Благодаря более короткому времени пребывания достигают значительно меньшего термического инактивирования и тем самым более высокой продуктивности способа по изобретению. Таким образом можно достигать в перфузионной среде концентрации антигена от 1 до 10 мг/мл и поддерживать этот уровень.
При способе по изобретению можно простым путем установить оптимальные для культивирования условия. Кроме того, для осуществления требуется значительно меньшее количество манипуляций, чем при всех известных способах, что означает большую безопасность в обращении с инфекционным материалом и обеспечивает непрерывную быструю обработку вируса и вирусных антигенов из питательной среды.
Получение вирусного посевного материала, выращивание клеток для продуцирования вируса или вирусного антигена и непосредственное производство вируса или вирусного антигена описаны ниже подробнее.
1. Вирусный посевной материал.
Клетки (напр. Веро АТТС CCL 81) выращивают во вращающихся колбах при 37oC до слияния и инфицируют 1 мл суспензии посевного вируса. Начиная со второго дня после инфицирования, ежедневно проводят замену половины объема среды бессывороточной средой. Надосадочные жидкости среды с 4-го по 8-й день содержат 2-5 • 107 перфузированных (p.f.u.) клеток на 1 мл и их хранят до их применения в качестве вирусного посевного материала при -20oC.
2. Выращивание клеток для производства вируса/вирусного антигена.
Исходя из хранящихся в жидком азоте АТТС CCL 81 рабочих посевных клеток, осуществляют размножение этих клеток в колбах с тканевой культурой, пока не достигают такого количества клеток, которое позволяет инокулировать ферментер. Дальнейшее культивирование клеток происходит в ферментационных камерах при 37oC, причем выращиваемым при адгезии рабочим посевным клеткам должна быть предоставлена по возможности большая поверхность для сцепления. Такие большие поверхности предоставляются в применении вращающихся колб из стекла или полистирола или в применении микроносителей (МС). Наилучшими оказываются МС из декстрана с полимерной сеткой размером 170 250 мкм.
Загруженные посевными клетками МС культивируют при 37oC, пока не достигают плотности клеток 1 • 105 4 • 105 клеток на 1 см2. Этой плотности клеток достигают, в общем, через 6 дн. Во время культивирования происходит полное зарастание микроносителей клетками, причем отдельные микроносители могут зарастать прилипающими к их поверхности клетками, образуя целый клеточный покров.
3. Продуцирование вируса/вирусного антигена.
После достижения указанной плотности клеток для получения матрицы по изобретению проводят инфицирование связанных на МС клеток вирусным посевным материалом (1 0,01 p.f.u./клетка, предпочтительно 0,1 p.f.u. клетка/клетка). Матрицу по изобретению можно хранить несколько дней при 0 8oC или сразу применять для производства вирусного антигена.
Для производства антигена загруженные инфицированными клетками МС помещают в перфузионный реактор. Начиная с этого момента инфицирования вирусом в культуре, применяют только бессывороточную среду, которую непрерывно накачивают в перфузионный реактор, в то время как культивированные на микроносителях клетки задерживаются в реакторе при помощи стопорного устройства. Начиная со 2 дня после инфицирования вирусный антиген находится в вытекающей питательной среде в высокой концентрации и его можно непрерывно получать из этой среды по меньшей мере в течение 10 дн.
В нижеследующих примерах поясняют способ по изобретению еще подробнее. Определение вирусного антигена проводили во всех примерах с антигеном ELISA.
Пример 1. Веро-клетки АТСС CCL 81 культивировали в ферментере объемом 6 л на микроносителе (Цитодекс 3 фирмы Фармация) при 37oC до количества клеток 2 • 106 на 1 мл питательной среды (DMEM Dulbecco's Eagle Medium) и
а) инфицировали FSME-вирусом (0,1 p.f.u. клетка/клетка) и осуществляли частями размножение вируса.
а) инфицировали FSME-вирусом (0,1 p.f.u. клетка/клетка) и осуществляли частями размножение вируса.
Дни после инфицирования Вирус/вирусный антиген, мг/мл
2 0,20
3 0,70
4 1,60
5 2,70
6 4,00
7 3,80
8 2,90
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 4 мг вируса/вирусного антигена.
2 0,20
3 0,70
4 1,60
5 2,70
6 4,00
7 3,80
8 2,90
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 4 мг вируса/вирусного антигена.
б) инфицировали FSME-вирусом (0,1 p.f.u клетка/клетка) и производили перфузию при помощи 0,5 объем/ферментационный объем/день.
Дни после инфицирования Вирус/вирусный антиген, мг/мл
2 0,30
3 1,60
4 4,50
5 4,50
6 2,50
7 3,20
8 2,90
9 2,50
10 2,30
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 13,7 мг вирус/вирусный антиген.
2 0,30
3 1,60
4 4,50
5 4,50
6 2,50
7 3,20
8 2,90
9 2,50
10 2,30
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 13,7 мг вирус/вирусный антиген.
в) инфицировали FSME-вирусом (0,1 p.f.u. клетка/клетка) и производили перфузию непрерывно питательной среды (DMEM) при помощи 1 объем/объем ферментера/день.
Дни после инфицирования Вирус/вирусный антиген, мг/мл
2 0,45
3 1,40
4 2,00
5 2,00
6 1,70
7 1,60
8 1,10
9 1,10
10 0,90
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 12,4 мг вируса/вирусного антигена.
2 0,45
3 1,40
4 2,00
5 2,00
6 1,70
7 1,60
8 1,10
9 1,10
10 0,90
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 12,4 мг вируса/вирусного антигена.
Пример 2. Веро-клетки (АТСС CCL 81) культивировали в ферментере объемом 40 л на микроносителе (Цитодекс 3 фирмы Фармация) при 37oC до количества клеток 2 • 106 клеток/мл и после инфицирования FSME-вирусом (0,1 p.f.u. клетка/клетка) непрерывно производили перфузию средой (DMEM) (0,33 объем/объем ферментера/день).
Дни после инфицирования Вирус/вирусный антиген, мг/мл
2 1,60
3 3,50
4 5,00
5 4,30
6 4,00
7 2,90
8 2,70
9 2,10
10 2,00
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 10,7 мг вируса/вирусного антигена.
2 1,60
3 3,50
4 5,00
5 4,30
6 4,00
7 2,90
8 2,70
9 2,10
10 2,00
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 10,7 мг вируса/вирусного антигена.
Пример 3. Веро-клетка (АТСС CCL 81) культивировали в ферментере объемом 40 л на микроносителе (Цитодекс 3 фирмы Фармация) при 37oC до количества клеток 3 • 106 клеток/мл и после инфицирования FSME-вирусом (0,1 p.f.u. /клетка) непрерывно производили перфузию средой (DMEM) (1 объем/объем ферментера/день).
Дни после инфицирования Вирус/вирусный антиген, мг/мл
2 1,10
3 3,80
4 3,90
5 3,00
6 2,30
7 2,20
8 2,00
9 3,15**)
10 2,30
**) норма перфузии была снижена на 0,5 объем/ферментационный объем/день.
2 1,10
3 3,80
4 3,90
5 3,00
6 2,30
7 2,20
8 2,00
9 3,15**)
10 2,30
**) норма перфузии была снижена на 0,5 объем/ферментационный объем/день.
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 21,7 мг вируса/вирусного антигена.
Пример 4. Веро-клетки (АТСС CCL 81) культивировали в ферментере объемом 150 л на микроносителе (Цитодекс 3 фирмы Фармация) при 37oC до количества клеток 2 • 106 /мл и после инфицирования FSME-вирусом (0,1 p.f.u./клетка) непрерывно производили перфузию средой (DMEM) (0,33 объем/ферментационный объем/день).
Дни после инфицирования Вирус/вирусный антиген, мг/мл
2 0,20
3 1,90
4 2,40
5 4,80
6 5,40
7 4,10
8 4,40
9 3,20
10 4,50
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 14,7 мг вируса/вирусного антигена.
2 0,20
3 1,90
4 2,40
5 4,80
6 5,40
7 4,10
8 4,40
9 3,20
10 4,50
Производительность составляла на 1 л ферментационного объема 14,7 мг вируса/вирусного антигена.
Claims (6)
1. Субстрат для культивирования флавивирусов или ареновирусов на основе культуры клеток, отличающийся тем, что он представляет собой поверхностно-зависимые перманентные клетки, связанные путем адгезии с матрицей.
2. Способ получения антигена флавивируса или ареновируса путем культивирования вируса на культуре ткани с последующей концентрацией и очисткой, отличающийся тем, что из культуры клеток используют поверхностно-активные перманентные клетки, связанные путем адгезии с матрицей.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что культивирование вируса осуществляют в непрерывно работающем перфузионном реакторе в течение 5 дней при 34 37oС.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что перфузию осуществляют при норме 0,3 10 об/день.
5. Способ по пп.2 5, отличающийся тем, что концентрацию вируса в среде поддерживают в пределах 1 10 мг/мл.
6. Способ по пп.2 5, отличающийся тем, что из вирусов используют вирус FSME, а из поверхностно-зависимых перманентных клеток используют клетки Vero ATCC CCL 81.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT2928/89A AT393356B (de) | 1989-12-22 | 1989-12-22 | Verfahren zur herstellung von fsme-virus-antigen |
| ATA2928/89 | 1989-12-22 | ||
| PCT/AT1990/000128 WO1991009935A1 (de) | 1989-12-22 | 1990-12-21 | Matrix mit daran adhärent gebundenen zellen, sowie verfahren zur produktion von virus/virusantigen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2082757C1 true RU2082757C1 (ru) | 1997-06-27 |
Family
ID=3542524
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU905052769A RU2082757C1 (ru) | 1989-12-22 | 1990-12-21 | Субстрат для культивирования флавивирусов или ареновирусов на основе культуры клеток и способ получения антигена флавивируса или ареновируса |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0506714B1 (ru) |
| JP (1) | JP2633391B2 (ru) |
| AT (2) | AT393356B (ru) |
| CA (1) | CA2071954C (ru) |
| CZ (1) | CZ281804B6 (ru) |
| DE (1) | DE59007659D1 (ru) |
| DK (1) | DK0506714T3 (ru) |
| ES (1) | ES2067916T3 (ru) |
| FI (1) | FI98377C (ru) |
| HR (1) | HRP921354A2 (ru) |
| HU (1) | HU213886B (ru) |
| NO (1) | NO310305B1 (ru) |
| RU (1) | RU2082757C1 (ru) |
| SK (1) | SK659090A3 (ru) |
| WO (1) | WO1991009935A1 (ru) |
| YU (1) | YU242390A (ru) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0791055T3 (da) * | 1994-11-10 | 2012-04-16 | Baxter Healthcare Sa | Fremgangsmåde til fremstilling af biologiske produkter i proteinfri kultur |
| US6149917A (en) * | 1995-08-01 | 2000-11-21 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Industrial production process for a vaccine against Japanese encephalitis virus and vaccine produced |
| FR2737412B1 (fr) * | 1995-08-01 | 1997-10-24 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de production d'un vaccin contre le virus de l'encephalite japonaise et vaccin obtenu par ce procede |
| TWI227274B (en) | 1998-10-05 | 2005-02-01 | Univ Osaka Res Found | Enhanced immunogen for inactivated vaccine for infection with Japanese encephalitis viruses and process for producing the same |
| AT409379B (de) | 1999-06-02 | 2002-07-25 | Baxter Ag | Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen |
| US6855535B2 (en) * | 2001-12-10 | 2005-02-15 | Baxter Healthcare S.A. | Method of large scale production of Hepatitis A virus |
| US6951752B2 (en) * | 2001-12-10 | 2005-10-04 | Bexter Healthcare S.A. | Method for large scale production of virus antigen |
| JP2007068401A (ja) * | 2003-08-07 | 2007-03-22 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 西ナイルウイルスワクチン |
| JP5727790B2 (ja) * | 2007-12-27 | 2015-06-03 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 細胞培養プロセス |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT358167B (de) * | 1978-12-22 | 1980-08-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- -meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)- -vakzinen |
| SE445116B (sv) * | 1979-09-12 | 1986-06-02 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Sett att odla celler pa mikroberare med fibronektinytskikt |
| NO161446C (no) * | 1981-03-13 | 1989-08-16 | Damon Biotech Inc | Fremgangsmaate for dyrking av celler som er avhengige av forankring. |
| SE8103138L (sv) * | 1981-05-19 | 1982-11-20 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Mikroberare for odling av forankringsberoende celler |
| CA1206900A (en) * | 1981-12-21 | 1986-07-02 | Raymond L. Downs | Hollow glass shell microcarrier for growth of cell cultures, and method of shell manufacture |
| AT385203B (de) * | 1985-04-26 | 1988-03-10 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer fruehsommermeningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-vakzine |
| DD274336A3 (de) * | 1985-10-03 | 1989-12-20 | Npo Biolar | Verfahren zur Gewinnung einer Mikroträgersubstanz für die Zellkultivierung |
-
1989
- 1989-12-22 AT AT2928/89A patent/AT393356B/de not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-12-21 EP EP19910900666 patent/EP0506714B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 CA CA 2071954 patent/CA2071954C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 ES ES91900666T patent/ES2067916T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 DK DK91900666T patent/DK0506714T3/da not_active Application Discontinuation
- 1990-12-21 SK SK6590-90A patent/SK659090A3/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 RU SU905052769A patent/RU2082757C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 CZ CS906590A patent/CZ281804B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 DE DE59007659T patent/DE59007659D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-21 AT AT91900666T patent/ATE113652T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 JP JP50113291A patent/JP2633391B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-21 YU YU242390A patent/YU242390A/sh unknown
- 1990-12-21 WO PCT/AT1990/000128 patent/WO1991009935A1/de active IP Right Grant
- 1990-12-21 HU HU9202009A patent/HU213886B/hu unknown
-
1992
- 1992-06-18 FI FI922851A patent/FI98377C/fi active
- 1992-06-19 NO NO19922422A patent/NO310305B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-11-25 HR HRP921354 patent/HRP921354A2/xx not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Hoke et al. J. Med. 1988, 608, 319. 2. Heinz et al. J. Med. Virol. 1980, 103,6. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU213886B (en) | 1997-11-28 |
| CA2071954C (en) | 1996-06-18 |
| AT393356B (de) | 1991-10-10 |
| ATA292889A (de) | 1991-03-15 |
| WO1991009935A1 (de) | 1991-07-11 |
| CZ281804B6 (cs) | 1997-02-12 |
| ES2067916T3 (es) | 1995-04-01 |
| CA2071954A1 (en) | 1991-06-23 |
| EP0506714B1 (de) | 1994-11-02 |
| FI922851A0 (fi) | 1992-06-18 |
| NO310305B1 (no) | 2001-06-18 |
| JP2633391B2 (ja) | 1997-07-23 |
| DK0506714T3 (da) | 1995-04-18 |
| JPH05502581A (ja) | 1993-05-13 |
| DE59007659D1 (de) | 1994-12-08 |
| NO922422D0 (no) | 1992-06-19 |
| SK279236B6 (sk) | 1998-08-05 |
| CZ659090A3 (en) | 1996-11-13 |
| FI922851A (fi) | 1992-06-18 |
| YU242390A (sh) | 1993-05-28 |
| ATE113652T1 (de) | 1994-11-15 |
| FI98377B (fi) | 1997-02-28 |
| EP0506714A1 (de) | 1992-10-07 |
| NO922422L (no) | 1992-08-17 |
| HU9202009D0 (en) | 1992-10-28 |
| HUT65410A (en) | 1994-06-28 |
| SK659090A3 (en) | 1998-08-05 |
| HRP921354A2 (en) | 1996-02-29 |
| FI98377C (fi) | 1997-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hanafusa et al. | A cell-associated factor essential for formation of an infectious form of Rous sarcoma virus | |
| US9022240B2 (en) | Production of poliovirus at high titers for vaccine production | |
| US3699222A (en) | Production of viral interfering substances | |
| RU2082757C1 (ru) | Субстрат для культивирования флавивирусов или ареновирусов на основе культуры клеток и способ получения антигена флавивируса или ареновируса | |
| RU2099419C1 (ru) | Способ выращивания вирусов | |
| CA2664799C (en) | Ipv-dpt vaccine | |
| US5719051A (en) | Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen | |
| Matsumoto et al. | Further studies on the replication of rabies and rabies-like viruses in organized cultures of mammalian neural tissues | |
| US3935066A (en) | Cell lines | |
| RU2287343C1 (ru) | Способ получения антирабической вакцины | |
| Nicholson | Growth of fish cell lines on microcarriers | |
| JPH0998778A (ja) | マレク病ワクチン | |
| RU2142816C1 (ru) | Способ получения антигерпетической вакцины и лекарственная форма на ее основе | |
| US3228840A (en) | Virus culture | |
| Hanafusa et al. | Transformation phenomena in the pox group viruses. I | |
| Mifune et al. | Susceptibility of various cell lines to rabies virus | |
| RU2816765C1 (ru) | Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства | |
| SU1317021A1 (ru) | Штамм диплоидных клеток кожи и мышц эмбриона человека,используемый дл культивировани вирусов | |
| CN1513553B (zh) | Vero细胞森林脑炎灭活疫苗 | |
| RU2014084C1 (ru) | Способ получения вирионной герпетической вакцины | |
| RU2076905C1 (ru) | Способ суспензионного культивирования филовирусов в клеточных культурах на микроносителях | |
| RU2129876C1 (ru) | Живая вакцина для профилактики кори | |
| SU1360193A1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки эмбриона человека дл накоплени и титровани вируса клещевого энцефалита | |
| SU691135A1 (ru) | Способ получени антигена | |
| RU2129607C1 (ru) | Способ получения вируса кори и поддерживающая питательная среда для его культивирования (варианты) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20091222 |