NO310305B1 - Matrise med adherent bundede celler, samt fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningo-encefalitis-(FSME)-virus-antigen - Google Patents
Matrise med adherent bundede celler, samt fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningo-encefalitis-(FSME)-virus-antigen Download PDFInfo
- Publication number
- NO310305B1 NO310305B1 NO19922422A NO922422A NO310305B1 NO 310305 B1 NO310305 B1 NO 310305B1 NO 19922422 A NO19922422 A NO 19922422A NO 922422 A NO922422 A NO 922422A NO 310305 B1 NO310305 B1 NO 310305B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- virus
- cells
- antigen
- matrix
- fsme
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 72
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 54
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 title claims abstract description 8
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 62
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 claims abstract description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 13
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 24
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 claims description 5
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 5
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 abstract 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000282342 Martes americana Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000012365 batch cultivation Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2531/00—Microcarriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelsen vedrører en serumfri cellekultur som er særpreget ved at den inneholder en matrise med adherent bundede humane eller animalske celler, for produksjon av Flavi-virus/virusantigen eller Arena-virus/virusantigen, hvilke celler er infisert med FSME-virus eller Arena-virus. Oppfinnelsen omfatter også en fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningoencefalitis-(FSME)-virus-antigen under anvendelse av den ovennevnte matrise slik som angitt i krav 6.
Infeksjoner med virus fra forsommer-meningoencefalitis (FSME) har vært iakttatt i Europa siden 2. verdenskrig. I Østerrike, Sydtyskland og i Tsjekoslovakia behandles stasjonært hvert år flere hundre pasienter for en FSME-infeksjon.
FSME-viruset tilhører familien Flavivirus, den tidligere serologiske gruppe B av Arbovirus, som er en slekt fra virusfamilien Togaviridae.
Mot en av de viktigste og hyppigste encefalitis-sykdoms-kilder hos mennesket, det japanske encefalitis-B-virus, har det i lengre tid vært tilgjengelig vaksiner. Disse vaksiner utvinnes fra hjernen av infiserte mus, renses, og de er anerkjent som sikre og virksomme (Hoke et al., N.Engl.J.-Med., 319, 608 (1988).
Siden 1976 er det tilgjengelig og godkjent fra helsemyn-dighetene en vaksine mot FSME. For fremstilling av denne vaksine dyrkes virus i hjernen av infiserte baby-mus, formeres i høneembryonalceller, inaktiveres med formalin og underkastes derefter en effektiv renseprosess (Heinz et al., J.Med.Virol., 6, 103 (1980)).
I litteraturen er det beskrevet en rekke muligheter for formering av arbovirus med hensyn til en mulig vaksinefrem-stilling. Den idag mest anvendte metode er podning av høneembryonalfibroblaster med en fra musenjerne frembragt FSME-modervirus, og kultivering av de podede celler. Denne metode krever en kostbar rensning av antigenet for å fjerne komplekst, heterologt biologisk materiale, og for å unngå ved gjentatt administrasjon av derav frembragte vaksine-doser en sensitiverende effekt hos de vaksinerte.
Ved fremstilling av høneembryonalceller må man gå ut fra SPF(= specific pathogen free)-egg. Disse SPF-egg må for opprettholdelse av deres SPF-status underkastes, før hvert bruk, et stort antall langvarige undersøkelser.
Dessuten viser høneembryonalcellekulturer bare små genera-sjonstall ved videredyrkning, hvorved det settes grenser for chargestørrelsen, en vanskelig sterilholdelse av primærkulturdyrkningen og ingen konstant kvalitet av primærcellene med hensyn til virusformering og antigenproduksjon.
Disse ulemper foreligger ikke bare ved fremgangsmåter ved produksjon av FSME-virusantigen, men helt generelt ved antigenfremstillingen.
Oppgaven for foreliggende oppfinnelse består i å fremskaffe en serumfri cellekultur for å forbedre produksjonen av FSME-virus/virusantigen, slik at de ovenfor nevnte ulemper fjernes og en fremgangsmåte ved dyrkning av virus/virus-antigen i cellekulturer tilveiebringes, som spesielt muliggjør produksjon i stor teknisk målestokk, hvorved kulturen på enkel måte samtidig kan holdes steril. Dessuten skal avgivelsen av uønkskede celleproteiner til kultur-resten minimeres.
For å løse denne oppgave tilveiebringes en matrise, dvs. et bærermateriale med adherent bundede humane eller animalske celler, hvorved cellene er infisert med virus. Oppfinnelsen beror på den erkjennelse at overflateavhengige celler som er egnet til virusformering, selv i virusinfisert tilstand forblir adherent bundet til en matrise, produserer kontinuerlig over relativt lang tid virusantigen, og avgir dette til kulturmediet.
Det er mulig å oppbevare den med infiserte celler anrikede matrise ifølge oppfinnelsen i noen dager ved en temperatur på mellom 0°C og 8°C, altså under betingelser hvor celle-metabolismen og dermed virusproduksjonen er forhindret. En således oppbevart matrise kan i det følgende uten problemer anvendes til virusantigenproduksjon ved innføring i et kulturmedium og innstilling av de respektive kultiverings-betingelser. Den serumfri cellekultur med matrisen ifølge oppfinnelsen utgjør således en utgangskultur som kan produseres for lagring med konstant kvalitet og aktivitet, hvis tilstand lett kan testes med hensyn til sterilitet, og som til en hver tid kan trekkes frem til virusantigenpro-duks jon .
Bindingen av de antigenproduserende celler til bæreren muliggjør dessuten en meget enkel håndtering av de virusin-fiserte og produksjonsklare celler. Således er det f.eks. mulig å gjennomføre virus/virusantigenproduksjonen kontinuerlig i en perfusjonsreaktor. Separasjonen av cellene fra antigenholdig medium blir vesentlig lettere på grunn av bindingen til matrisen, idet matrisen forenkler produksjonen av virus/virusantigen i stor teknisk målestokk.
En foretrukken utførelsesform av den serumfri cellekultur med matrisen ifølge oppfinnelsen består i at det som adherent bundede celler anvendes Vero-celler ATCC CCL 81 som anvendes fortrinnsvis ved produksjon av forsommer-meningo-encafalitis-(FSME)-virus-antigen og således er infisert med FSME-virus.
De på matrisen adherent bundede celler kan imidlertid også være infisert med Flavivirus eller med Arenavirus.
Som materiale for matrisen har glass, fornettet dekstran, gelatin eller plast vist seg som godt egnet, hvorved matrisen best er utformet som mikrobærer hvis partikkel-diameter fortrinnsvis ligger mellom 100/im og 3000/xm. Disse mikrobærere kan ha en glatt overflate eller en porøs strukturering.
En ytterligere hensiktsmessig utførelsesform av matrisen er at det på dennes overflate er adherent bundet mellom lxl0<5 >og 4xl0<4> celler pr. cm<2.>
Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte ved produksjon av f orsommer-meningoencef alitis- (FSME) -virus-antigen under anvendelse av matrisen beskrevet ovenfor og som er karakterisert ved at overflateavhengige permanente celler, fortrinnsvis Vero-cellene ATTC CCL 81, podes med FSME-viruset, og at cellene i et serumfritt medium under opprettholdelse av sin levedyktighet holdes adherent bundet til en matrise for å opprettholde en antigendannelse og en antigenavgivelse til mediet, hvorefter det antigenholdige medium skilles fra cellene som er bundet til bæreren, og opparbeides på kjent måte til et galenisk aksepterbart preparat ved oppkonsentrering, inaktivering og rensning.
Vero-cellelinjen ATCC CCL 81 utvinnes fra nyrevev hos den grønne marekatt (Cercopithecus aethiops), og kan holdes metabolsk aktiv i serumfritt medium. For en slik permanent cellelinje anlegges det en moderstamcellebank og en arbeid-sstamcellebank, og alle undersøkelser gjennomføres på kontaminerende substanser. Denne permanente cellelinje er således nøyaktig karakteriserbar ikke bare med henblikk på frihet av kontaminerende mikroorganismer, men også på vekstforhold, kultivering, formeringsforhold og - når engang optimert - skal betraktes som konstant.
Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen anvendes det fortrinnsvis Vero-celler som er bundet på mikrobærere. Således kan det oppnås en høy celletetthet som ved de hittil brukte primære cellekulturer hverken kunne oppnås i Roux-flasker eller i suspensjon, og som muliggjør en betraktelig utbyt-teøkning av virus og virusantigen pr. fermentasjonsvolum.
En fordelaktig utførelsesform av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen består i at virusformeringen og antigendannelsen gjennomføres i en kontinuerlig dreven perfusjonsreaktor i løpet av minst 5 dager, ved en temperatur mellom 34 og 37°C, idet perfusjonen kan gjennomføres med en perfusjonsrate på 0,3 til 10 v/v/dag. I perfusjonsreaktoren kan man dessuten sørge for en celletetthet på 2 x IO<9> til 2 x 10<10 >celler pr. liter fermentasjonsvolum, sistnevnte ved en fluidisert bed-fermentator.
Virusformeringen ifølge oppfinnelsen i en perfusjonskultur muliggjør en, i sammenligning med en satsvis kultivering, vesentlig forkortelse av den av perfusjonsraten forutbe-stemte oppholdstid av viruset og virusantigenet i mediet. På grunn av den kortere oppholdstid oppnår man en vesentlig mindre termisk inaktivering og således en høyere produk-tivitet av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen. Således kan det i perfusjonsmediet oppnås og opprettholdes en antigen-konsentrasjon på 1 til 10 /xg/ml.
Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan man på enkel måte innstille de for kultiveringen optimale betingelser. Dessuten er det for gjennomføringen vesentlig mindre manipulasjoner nødvendige enn ved alle de kjente fremgangsmåter, noe som betyr en større sikkerhet i omgang med det infektiøse materiale og muliggjør en kontinuerlig rask opparbeidelse av virus og virusantigen fra kulturmediet.
Fremstillingen av virusinokulumet, dyrkningen av cellene for virus- hhv. virusantigenproduksjon, og den egentlige virus- hhv. virusantigenproduksjon skal beskrives nærmere i det følgende.
1. Virusinokulum
Celler (f.eks. Vero ATCC CCL 81) dyrkes i rulleflasker ved 37°C inntil konfluens og infiseres med 1 ml av en moder-virussuspensjon. Fra 2. dag efter infeksjon, gjennomføres daglig en halv medieveksel med serumfritt medium. Medie-restene fra 4. til 8. dag inneholder 2-5 x IO<7> p.f.u. pr. ml og lagres ved -20°C til de skal brukes som virusinokulum.
2. Dyrkning av celler for virus/virusantigenproduksjon
Ut fra ATCC CCL 81 arbeidsmodercellene som er lagret i flytende nitrogen, gjennomføres en formering av disse celler i vevskulturflasker inntil man oppnår en cellemengde som tillater å inokulere en fermentator. Den videre kultivering av cellene skjer i fermentasjonskar ved 37°C, hvorved de adherent voksende arbeidsmodercellene skal ha mest mulig overflate til disposisjon for adhesjon. Slike store overflater er disponible ved bruk av rulleflasker av glass eller polystyrol eller ved bruk av mikrobærere (MC). Best egnet er MC av fornettet dekstran med en størrelse mellom 170 fim og 250^m.
De med moderceller anrikede MC kultiveres ved 37°C til det oppnås en celletetthet på 1.10<5> - 4.IO<5> celler pr. cm<2>. Denne celletetthet oppnås generelt efter seks dager. Under kultiveringen kommer det til en fullstendig overvoksing av mikrobærerne med celler, idet til slutt noen mikrobærere kan voske sammen til grupper over cellene som sitter fast på deres overflate.
3. Virus/virusantigenproduksjon
Efter at den angitte celletetthet er oppnådd, infiseres de celler med virusinokulumet som er bundet til MC (1-0,01 pfu/celle, fortrinnsvis 0,1 pfu/celle) for å danne den aktuelle matrise. Matrisen ifølge oppfinnelsen kan lagres ved en temperatur mellom 0°C og 8°C eller kan anvendes straks i virusantigenproduksjonen.
For antigenproduksjon innføres de med infiserte celler anrikede MC i en perfusjonsreaktor. Fra dette tidspunkt av virusinfeksjonen anvendes i kulturen bare serumfritt medium som pumpes kontinuerlig gjennom perfusjonsreaktoren, mens cellene som kultiveres på mikrobærerne holdes tilbake i reaktoren ved hjelp av en tilbakeholdelsesanordning. I det utløpende kulturmediet foreligger fra 2. dag efter infeksjon virusantigen i høy konsentrasjon og kan utvinnes derfra kontinuerlig i minst 10 dager.
Med de efterfølgende eksempler skal fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen forklares ytterligere. Bestemmelsen av virusantigenet skjer i alle eksempler med et antigen-ELISA.
Eksempel 1
Vero-celler ATCC CCL 81 ble kultivert i en 6-1-fermentator på mikrobærer (Cytodex 3 fra firma Pharmacia) ved 37°C til et celleantall på 2xl0<6> pr. ml kulturmedium (DMEM = Dulg-becco's Eagle Medium) og
a) infisert med FSME-virus (0,1 pfu/celle), og vi-rusf ormeringen ble gjennomført satsvis
Produktiviteten pr. 1 fermentasjonsvolum var 4 mg virus/virusantigen.
b) infisert med FSME-virus (0,1 pfu/celle) og kulturmedium (DMEM) ble perfundert kontinuerlig med 0,5
volum/fermentatorvolum/dag
Produktiviteten pr. 1 fermentasjonsvolum var 13,7 mg virus/virusantigen.
c) infisert med FSME-virus (0,1 pfu/celle), og kultur medium (DMEM) ble perfundert kontinuerlig med 1
volum/fermentatorvolum/dag
Produktiviteten pr. 1 fermentasjonsvolum var 12,4 mg virus/virusantigen.
Eksempel 2
Vero-celler (ATCC CCL 81) ble i en 40-1-fermentator kultivert på mirkobærer (Cytodex 3 fra firma Phamracia) ved 37°C til et celleantall på 2 x IO<6> celler/ml, og ble efter infeksjon med FSME-virus (0,1 pfu/celle) perfundert kontinuerlig med medium (DMEM) (0,33 vol/fermentatorvolum/dag).
Produktiviteten pr. 1 fermentasjonsvolum var 10,7 mg virus/virusantigen.
Eksempel 3
Vero-celler (ATCC CCL 82) ble i en 40-1-fermentator kultivert på mirkobærer (Cytodex 3 fra firma Pharmacia) ved 37°C til et celleantall på 3 x 10<6> celler/ml, og ble efter infeksjon med FSME-virus (0,1 pfu/celle) perfundert kontinuerlig med medium (DMEM) (1 vol/fermentatorvolum/dag). Produktiviteten pr. 1 fermentasjonsvolum var 21,7 mg virus/virusantigen.
Eksempel 4
Vero-celler (ATCC CCL 81) ble i 150-1-fermentator på mikrobærer (Cytodex 3 fra firma Pharmacia) kultivert ved 37°C til 2 x 10<6>/ml, og ble efter infeksjon med FSME-virus (0,1 pfu/celle) perfundert kontinuerlig med medium (DMEM) (0,33 vol/fermentatorvolum/dag).
Produktiviteten pr. 1 fermentasjonsvolum var 14,7 mg virus/virusantigen.
Claims (10)
1. Serumfri cellekultur,
karakterisert ved at den inneholder en matrise med adherent bundede humane eller animalske celler for produksjon av Flavi-virus/virusantigen eller Arena-virus/virusantigen, hvilke celler er infisert med FSME-virus eller Arena-virus.
2. Cellekultur som angitt i krav 1, karakterisert ved at det som adherent bundede celler anvendes Vero-celler ATCC CCL 81.
3. Cellekultur som angitt i krav 1 eller 2, karakterisert ved at matrisen består av glass, fornettet dekstran, gelatin eller plast.
4. Cellekultur som angitt i krav 3, karakterisert ved at matrisen er utformet som mikrobærer.
5. Cellekultur som angitt i ett eller flere av kravene 1 til 4,
karakterisert ved at det på matrisens overflate er adherent bunded mellom 1 x IO<5> og 4 x IO<5 >celler pr. cm<2>.
6. Fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningoencefalitis-(FSME)-virus-antigen under anvendelse av den i kravene 1 til 5 angitte matrise, karakterisert ved at overflateavhengige permanente celler, fortrinnsvis Vero-cellene ATCC CCL 81, podes med FSME-virus, og at cellene i et serumfritt medium under opprettholdelse av deres levedykdighet holdes adherent bundet til en matrise for å opprettholde en antigendannelse i cellene og en antigenavgivelse til mediet, idet det antigenholdige medium skilles fra de bærerbundede
celler og opparbeides på kjent måte ved hjelp av oppkonsentrering, inaktivering og rensning til et galenisk aksepterbart preparat.
7. Fremgangsmåte som angitt i krav 6, karakterisert ved at virusformeringen og antigendannelsen gjennomføres i en kontinuerlig dreven perfusjonsreaksjon i løpet av minst 5 dager ved en temperatur mellom 34 og 37°C.
8. Fremgangsmåte som angitt i krav 6, karakterisert ved at perf us j onen gjennomføres med en perfusjonsrate på 0,3 til 10 v/v/dag.
9. Fremgangsmåte som angitt i krav 6, karakterisert ved at det i perfusjons-reaksjonen anordnes en celletetthet på 2 x 10<9> til 2 x 10<10 >celler pr. liter fermentasjonsvolum, sistnevnte ved en fluidisert bed-fermentator.
10. Fremgangsmåte som angitt i ett eller flere av kravene 6 til 9,
karakterisert ved at det i mediet opprettholdes en virus/virusantigenkonsentrasjon på 1 til 10 fig.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT2928/89A AT393356B (de) | 1989-12-22 | 1989-12-22 | Verfahren zur herstellung von fsme-virus-antigen |
| PCT/AT1990/000128 WO1991009935A1 (de) | 1989-12-22 | 1990-12-21 | Matrix mit daran adhärent gebundenen zellen, sowie verfahren zur produktion von virus/virusantigen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO922422D0 NO922422D0 (no) | 1992-06-19 |
| NO922422L NO922422L (no) | 1992-08-17 |
| NO310305B1 true NO310305B1 (no) | 2001-06-18 |
Family
ID=3542524
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19922422A NO310305B1 (no) | 1989-12-22 | 1992-06-19 | Matrise med adherent bundede celler, samt fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningo-encefalitis-(FSME)-virus-antigen |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0506714B1 (no) |
| JP (1) | JP2633391B2 (no) |
| AT (2) | AT393356B (no) |
| CA (1) | CA2071954C (no) |
| CZ (1) | CZ281804B6 (no) |
| DE (1) | DE59007659D1 (no) |
| DK (1) | DK0506714T3 (no) |
| ES (1) | ES2067916T3 (no) |
| FI (1) | FI98377C (no) |
| HR (1) | HRP921354A2 (no) |
| HU (1) | HU213886B (no) |
| NO (1) | NO310305B1 (no) |
| RU (1) | RU2082757C1 (no) |
| SK (1) | SK659090A3 (no) |
| WO (1) | WO1991009935A1 (no) |
| YU (1) | YU242390A (no) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996015231A2 (en) * | 1994-11-10 | 1996-05-23 | Immuno Aktiengesellschaft | Method for producing biologicals in protein-free culture |
| FR2737412B1 (fr) * | 1995-08-01 | 1997-10-24 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de production d'un vaccin contre le virus de l'encephalite japonaise et vaccin obtenu par ce procede |
| EP0841942B2 (fr) * | 1995-08-01 | 2007-12-12 | Sanofi Pasteur | Procede de production industrielle d'un vaccin contre l'encephalite japonaise et vaccin obtenu |
| AU743546B2 (en) * | 1998-10-05 | 2002-01-31 | Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University, The | Enhanced immunogen for inactivated vaccine for infection with Japanese encephalitis viruses and process for producing the same |
| AT409379B (de) | 1999-06-02 | 2002-07-25 | Baxter Ag | Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen |
| US6951752B2 (en) | 2001-12-10 | 2005-10-04 | Bexter Healthcare S.A. | Method for large scale production of virus antigen |
| US6855535B2 (en) * | 2001-12-10 | 2005-02-15 | Baxter Healthcare S.A. | Method of large scale production of Hepatitis A virus |
| JP2007068401A (ja) * | 2003-08-07 | 2007-03-22 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 西ナイルウイルスワクチン |
| DK2235197T3 (en) * | 2007-12-27 | 2017-10-09 | Baxalta GmbH | Methods of cell culture |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT358167B (de) * | 1978-12-22 | 1980-08-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- -meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)- -vakzinen |
| SE445116B (sv) * | 1979-09-12 | 1986-06-02 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Sett att odla celler pa mikroberare med fibronektinytskikt |
| NO161446C (no) * | 1981-03-13 | 1989-08-16 | Damon Biotech Inc | Fremgangsmaate for dyrking av celler som er avhengige av forankring. |
| SE8103138L (sv) * | 1981-05-19 | 1982-11-20 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Mikroberare for odling av forankringsberoende celler |
| CA1206900A (en) * | 1981-12-21 | 1986-07-02 | Raymond L. Downs | Hollow glass shell microcarrier for growth of cell cultures, and method of shell manufacture |
| AT385203B (de) * | 1985-04-26 | 1988-03-10 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer fruehsommermeningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-vakzine |
| DD274336A3 (de) * | 1985-10-03 | 1989-12-20 | Npo Biolar | Verfahren zur Gewinnung einer Mikroträgersubstanz für die Zellkultivierung |
-
1989
- 1989-12-22 AT AT2928/89A patent/AT393356B/de not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-12-21 DE DE59007659T patent/DE59007659D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-21 JP JP50113291A patent/JP2633391B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-21 CZ CS906590A patent/CZ281804B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 ES ES91900666T patent/ES2067916T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 YU YU242390A patent/YU242390A/sh unknown
- 1990-12-21 CA CA 2071954 patent/CA2071954C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 RU SU905052769A patent/RU2082757C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 EP EP19910900666 patent/EP0506714B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 AT AT91900666T patent/ATE113652T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 SK SK6590-90A patent/SK659090A3/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-12-21 WO PCT/AT1990/000128 patent/WO1991009935A1/de active IP Right Grant
- 1990-12-21 DK DK91900666T patent/DK0506714T3/da not_active Application Discontinuation
- 1990-12-21 HU HU9202009A patent/HU213886B/hu unknown
-
1992
- 1992-06-18 FI FI922851A patent/FI98377C/fi active
- 1992-06-19 NO NO19922422A patent/NO310305B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-11-25 HR HRP921354 patent/HRP921354A2/xx not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59007659D1 (de) | 1994-12-08 |
| EP0506714A1 (de) | 1992-10-07 |
| AT393356B (de) | 1991-10-10 |
| HU9202009D0 (en) | 1992-10-28 |
| SK279236B6 (sk) | 1998-08-05 |
| WO1991009935A1 (de) | 1991-07-11 |
| HUT65410A (en) | 1994-06-28 |
| CZ281804B6 (cs) | 1997-02-12 |
| EP0506714B1 (de) | 1994-11-02 |
| FI98377C (fi) | 1997-06-10 |
| RU2082757C1 (ru) | 1997-06-27 |
| ATA292889A (de) | 1991-03-15 |
| NO922422D0 (no) | 1992-06-19 |
| FI922851A0 (fi) | 1992-06-18 |
| HRP921354A2 (en) | 1996-02-29 |
| SK659090A3 (en) | 1998-08-05 |
| CA2071954C (en) | 1996-06-18 |
| NO922422L (no) | 1992-08-17 |
| FI98377B (fi) | 1997-02-28 |
| JPH05502581A (ja) | 1993-05-13 |
| ATE113652T1 (de) | 1994-11-15 |
| CZ659090A3 (en) | 1996-11-13 |
| CA2071954A1 (en) | 1991-06-23 |
| HU213886B (en) | 1997-11-28 |
| FI922851A (fi) | 1992-06-18 |
| JP2633391B2 (ja) | 1997-07-23 |
| ES2067916T3 (es) | 1995-04-01 |
| YU242390A (sh) | 1993-05-28 |
| DK0506714T3 (da) | 1995-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2002338666B2 (en) | Multiplication of viruses in a cell culture | |
| Van Hemert et al. | Homogeneous cultivation of animal cells for the production of virus and virus products | |
| US3520972A (en) | Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains | |
| NO310305B1 (no) | Matrise med adherent bundede celler, samt fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningo-encefalitis-(FSME)-virus-antigen | |
| AU2007305595C1 (en) | IPV-DPT vaccine | |
| US3935066A (en) | Cell lines | |
| US5719051A (en) | Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| Elliott | Nonperfused attachment systems for cell cultivation | |
| IE47060B1 (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| JPH0998778A (ja) | マレク病ワクチン | |
| US4021302A (en) | Cell cultures | |
| Moran | A microcarrier-based cell culture process for the production of a bovine respiratory syncytial virus vaccine | |
| US3228840A (en) | Virus culture | |
| Dunham et al. | Propagation of poliovirus in chick embryo cell cultures. I. Cultivation of 3 virus types | |
| Nicholson | Growth of fish cell lines on microcarriers | |
| NO860180L (no) | ||
| Choi et al. | Production of a chimeric porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)-2 vaccine using a lab-scale packed-bed bioreactor CelCradle | |
| US20110020909A1 (en) | Methods Of Culturing Lawsonia Intracellularis | |
| Mifune et al. | Susceptibility of various cell lines to rabies virus | |
| RU2816765C1 (ru) | Способ получения культуральной инактивированной вакцины против вируса бешенства | |
| Hayle | Culture of respiratory syncytial virus infected diploid bovine nasal mucosa cells on cytodex 3 microcarriers | |
| CN101525597A (zh) | 新的甲型肝炎灭活疫苗病毒毒株及其培养方法 | |
| SU1317021A1 (ru) | Штамм диплоидных клеток кожи и мышц эмбриона человека,используемый дл культивировани вирусов | |
| RU2140451C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки suis domestica l. для культивирования вирусов животных |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |