RU1792615C - Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина - Google Patents
Способ культивировани продуцента бета-экзотоксинаInfo
- Publication number
- RU1792615C RU1792615C SU904780348A SU4780348A RU1792615C RU 1792615 C RU1792615 C RU 1792615C SU 904780348 A SU904780348 A SU 904780348A SU 4780348 A SU4780348 A SU 4780348A RU 1792615 C RU1792615 C RU 1792615C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- exotoxin
- cultivation
- beta
- producer
- hours
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: биотехнологи , производство инсектицидных препаратов. Сущность изобретени : продуцентбета- экзотоксина штамм бактерий Вас. thurlnglensls 98-1 с культивируют на среде, содержащей источники углерода и азота до стадии физиологической активности роста продуцента, в частности в течение 16 ч, затем ввод т хлористый барий в количестве 0,6-0,7 мг/л или хлористый кальций в количестве 1,0-1,1 мг на 1 л культуральной среды и продолжают культивирование до выхода культуры в стационарную фазу роста. 1 табл.
Description
Изобретение относитс к области биотехнологии , в частности к способам производства биологических инсектицидных препаратов и может быть использовано дл производства СЭР или защиты животных.
Р д штаммов энтомопатогенного мик- , роорганизма Bacillus тЬиг1пд1еп$15(далее ВТ) в процессе их культивировани выдел ют в культуральную жидкость водорастворимый экзотоксин. Выход экзотоксина зависит от состава питательных сред и может быть увеличен соответствующим его подбором.
Дл осаждени экзотоксина из культуральной жидкости ВТ после полного созре- вани спор предложен способ концентрирована экзотоксина. Дл этого в фильтрат (либо в фугат) культуральной жидкости (КЖ) внос т соли бари либо кальци , св зывающие экзотоксин.
Целью насто щего изобретени вл етс увеличение выхода бета-экзотоксина
сравнительно экономными средствами и уменьшение времени ферментации.
Наиболее близким к предлагаемому способу культивировани продуцента бета- экзотоксина вл етс способ получени би- токсибациллина, заключающийс в культивировании штамма-продуцента экзотоксина на среде, содержащей источник углерода , азота в присутствии соли, образующей нерастворимый комплекс с бета-экзотоксином . В качестве последней примен ют уксуснокислый кальций. Максимально достигнутый выход экзотоксина при реализации данного способа 1232-1480 мг/л при расходе уксуснокислого кальци до 65 г/л (6,5 вес.%).
Поставленна нами цель - увеличение выхода бета-экзотоксина при снижении расхода солей, св зывающих бета-экзотоксин в водонерастворимый комплекс, а также уменьшение продолжительности цикла ферментации достигаетс осаждением экзоток
ю го
сина, выдел емого в процессе культивировани ВТ путем внесени 0,6-0,7 мг BaCte на 1 л КЖ или 1,0-1,1 мг CaClz на 1 л КЖ в культуральную жидкость ВТ на стадии максимальной физиологической активности. Причем, если необходим препарат, содержащий только экзотоксин, процесс ферментации прекращаетс с выходом культуры в стационарное состо ние роста.
Указанные добавки образуют стойкие комплексы металл-экзотоксин и тем самым вывод т последний из реакции. При этом с одной стороны, снижаетс ингибирующее действие экзотоксина на рост микроорганизмов ВТ, с другой - св занный экзотоксин не может расходоватьс дл вторичного метаболизма бактерий.
Соли бари или кальци следует вносить на 10-16 ч культивировани , что соответствует зоне максимальной скорости роста микроорганизмов, поскольку в это врем максимальна и скорость накоплени экзотоксина в КЖ.
Наиболее предпочтительно использование солей бари , поскольку степень св зывани этого металла с экзотоксином наибольша .
Процесс накоплени экзотоксина заканчиваетс на стадии выхода культуры в стационарное состо ние кривой роста, поэтому при получении только экзотоксинсо- держащего препарата дальнейшее культивирование не требуетс .
При получении смешанного экзотоксин и экзотоксинсодержащего препарата культивирование провод т исход из степени и скорости накоплени эндотоксина.
Ниже приведены примеры конкретного исполнени .
П ри м е р 1-14. Культивирование штамма ВТ 98-1с проводили в ферментаторе АН- КУМ-2 на среде состава: белково-витаминный концентрат (БВК)3.6% кукурузна мука 2,8 % соева мука 0,5 % мел 0,3 % начальное значение рН среды составл ло 7,2 объем среды 1,0л скорость перемешивани 400 об/мин расход воздуха на аэрацию 1 л/сек температура 30°С Во всех вариантах условий эксперимента культивирование начинали с вывода аппарата АНКУМ-2 на режим. В качестве инокул та использовали смыв стерильным физраствором объемом 30 мл с кос ка культуры ВТ-98-1с, прогретый в термобане при температуре 80°С в течение 5 мин. Культивирование вели с контролем температуры, рН среды, р Оа времени культивировани .
Физиологическое состо ние клеток контролировали микроскопированием отобранных проб. Добавки водного раствора хлористого бари или водного раствора хлористого бари или водного раствора хлористого кальци , а также продолжительность эксперимента проводили согласно схемы условий эксперимента 1-14.
По завершении каждой ферментации проводили анализ КЖ на содержание экзо
токсина в осадке, в растворе и суммарное
содержание экзотоксина. Содержание экзотоксина определ ли с помощью тонкослойной хроматогрзфии и спектрофотометрии по методике (3). Погрешность измерений со- 0 держани экзотоксина составила ±0,05 г/л. Эксперименты проводили по следующей схеме:
1. Культивирование ВТ 98 при услови х, описанных выше,-врем культивировани 5 20 ч добавки не вносились (контроль).
2. Культивирование ВТ 98-1 с как в (1), но внесено 1,8 мл 30 %-ного водного раствора хлористого бари (0,5 мг) на 1 л КЖ через 16 ч культивировани .
0 з. То же, что и (1), но внесено 2,0 мл 30 %-ного водного раствора хлористого бари (0,6 мг) на 1 л КЖ через 16 ч культивировани .
4. То же, что и (1), но внесено 2,3 мл 30 5 %-ного водного раствора хлористого бари (0,7 мг) на 1 л КЖ через 16 ч культивировани .
5. То же, что и (1), но внесено 1.5 мл 60 %-ного водного раствора хлористого каль- 0 цц (0,9 мг) на 1 л КЖ через 16ч культивировани ,
6. То же, что и (1), но внесено 1,7 мл 60 %-ного водного раствора хлористого кальци (1,0 мг) на 1 л КЖ через 16 ч культивиро- 5 взни .
7. То же, что и (1), но внесено 1,9 мл 60 %-ного водного раствора хлористого кальци (1,1 мг) на 1 л КЖ через 16ч культивировани .
08. Культивирование ВТ 98-1с, что и (1), но врем культивировани 48 ч (контроль).
9. 9, 10, 11, 12, 13, 14-то же, что и 2, 3, 4, 5, 6, 7 соответственно, но врем культивировани 48 ч.
5 Результаты экспериментов представлены в таблице.
Из таблицы следует, что содержание экзотоксина в КЖ после 20 ч культивировани превышает содержание экзотоксина в КЖ после 48 ч культивировани на 45 %.
Внесение в КЖ на 16 ч (при 20-часовом культивировании) раствора хлористого бари увеличивает содержание экзотоксина на 65%, а раствора хлористого кальци - на 36 %. Внесение хлоридов бари или каль- ци на 16 ч (при 48-часовом культивировании ) также способствует увеличению выхода экзотоксина в сравнении с контролем соответственно от 72 % (BaCte) до 46 % (CaCte) однако, в количественном отноше- нии выход экзотоксина в этом случае ниже, чем содержание экзотоксина, зарегистрированное при 20-часовом культивировании с внесением тех же добавок хлоридов бари или кальци .
Таким образом, дл достижени максимальной концентрации экзотоксина в препарате необходимо ввести указанные добавки на 16 ч от начала культивировани и закончить процесс ферментации на 20 ч.
При 48-часовой ферментации число жизнеспособных спор не зависит от введени солей металлов, содержание экзотоксина при наличии последних увеличиваетс примерно в 1,5-2 раза.
Предлагаемый нами способ культивировани продуцента бета-экзотоксина был проверен и на среде другого состава, в частности , предложенного авторами за вки.
Основные компоненты среды: источни- ки углерода, азота, лизин сохран лись согласно предложенной рецептуре, а соли, образующие с бета-экзотоксином нерастворимый комплекс, вносили не вначале ферментации , как предлагают авторы изобретени , а на стадии роста, соответствующей максимальной физиологической активности (10-16 ч), причем вместо уксуснокислого кальци использовались соли либо кальци , либо бари в концентраци- х, предлагаемых нами в данной за вке (Примеры 15 и 16).
П р м м е р 15. Штамм ВТ98-1с выращивали на среде, объемом 1 л, содержащей белково-витаминный концентрат (БВК) - 3 %, гидролизат кормовых дрожжей с содержанием растворимого белка 50 мг/л, гидролизат рапсового шрота с содержанием растворимого белка 8 мг/л, лизин кристаллический (0,002 вес.%) при 30°С, аэрации 1 л/мин, скорости перемешивани 400 об/мин. На 10-16 ч культивировани , что соответствовало максимальной физиологической активности продуцента, внесли 2 мл 30 %-ного водного раствора хлористого бари . На 20 ч процесс культивировани остановили .
Содержание растворенного экзотоксина в КЖ составило: в осадке - 0,92 г/л, в растворе - 0,73 г/л, суммарно - 1,65 г/л.
П р и м е р 16. Штамм ВТ 98-1с культивировали на среде того же состава, что и в примере 15. По истечении 16 ч с начала культивировани внесли 1,7 мл 60 %-ного водного раствора хлористого кальци . На 20 ч культивировани содержание экзотоксина составило: в осадке - 0,9 г/л, в растворе - 0,6 г/л, суммарное количество - 1,5 г/л.
Использование предлагаемого способа получени экзотоксина в процессе культивировани ВТ обеспечивает следующие преимущества: если исчерпаны все возможности увеличени выхода экзотоксина оптимизацией состава сред на данном штамме, выход может быть увеличен еще до 70% введением раствора BaCla (или CaCte) ориентировочно на 16 ч роста и прекращением процесса культивировани на 20 ч.
Таким образом, использование предлагаемого способа получени экзотоксина обеспечивает следующие преимущества: увеличение выхода экзотоксина на 70%, уменьшение времени ферментации на 45%, а также существенное уменьшение расхода солей, св зывающий бета - экзотоксин в водонерастворимый комплекс.
Экономический эффект от внедрени предлагаемого изобретени будет обеспечиватьс увеличением выхода экзотоксина и снижением технологических затрат при ферментации, и в масштабах СССР составит не менее 700 тыс. руб. в год при уровне рентабельности 33%.
Claims (1)
- Формула изобретени Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина на питательной среде, содержащей источники углерода и азота, в присутствии соли, образующей нерастворимый комплекс с бета-экзотоксином, отличающийс тем, что, с целью повышени выхода целевого продукта при снижении расхода соли и времени культивировани , вкачестве соли используют хлористый барий в количестве 0,6-0,7 мг/л или хлористый кальций в количестве 1,0-1,1 мг на 1 л куль- туральной жидкости, причём соль ввод т в процессе культивировани на стадии максимальной физиологической активности роста продуцента, а процесс культивировани ведут до выхода культуры в стационарную фазу .СОДЕРЖАНИЕ ЭКЗОТОКСИНА В КЖ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВНЕСЕНИЯ СОЛЕИ МЕТАЛЛОВ
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904780348A RU1792615C (ru) | 1990-01-09 | 1990-01-09 | Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904780348A RU1792615C (ru) | 1990-01-09 | 1990-01-09 | Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1792615C true RU1792615C (ru) | 1993-02-07 |
Family
ID=21490533
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904780348A RU1792615C (ru) | 1990-01-09 | 1990-01-09 | Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1792615C (ru) |
-
1990
- 1990-01-09 RU SU904780348A patent/RU1792615C/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Патент US №3087865,кл. 195-96, 1961. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH03505396A (ja) | カルボン酸類のための改良発酵方法 | |
SU701545A3 (ru) | Способ получени биомассы | |
KR100463738B1 (ko) | 아카르보스제조를위한삼투조절된발효방법 | |
RU1792615C (ru) | Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина | |
SU974817A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
RU2174558C1 (ru) | Способ получения l-аспарагиновой кислоты | |
RU2053294C1 (ru) | Способ культивирования бифидобактерий | |
CN112662713B (zh) | 一种高密度发酵生产l-赖氨酸的培养基及其方法 | |
RU1549227C (ru) | Способ получения комплекса литических ферментов | |
JPS58201992A (ja) | 微生物によるβ−置換プロピオン酸またはそのアミドの製造法 | |
RU2707118C1 (ru) | Способ повышения продуктивности бактерий escherichia coli | |
CN114134184B (zh) | 一种添加维生素b6提高大肠杆菌工程菌合成5-氨基乙酰丙酸的方法 | |
SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
RU2158302C2 (ru) | Питательная среда для роста бифидо- и лактобактерий | |
JP2833037B2 (ja) | グルタチオン高含有酵母の製造方法 | |
US2667445A (en) | Production of riboflavin by ashbya gossyph with cobalt as additive | |
JPH05328983A (ja) | 光学異性体の異なる乳酸混合物の製造方法 | |
SU553283A1 (ru) | Способ получени алкогольдегидрогеназы | |
JPS6391076A (ja) | 3種菌の培養法 | |
Sack et al. | Factors affecting the production of staphylocoagulase in a chemically defined medium | |
CA1150654A (en) | Process for the production of citric acid | |
RU2230112C2 (ru) | Среда для выращивания стафилококков | |
SU745942A1 (ru) | Способ выращивани | |
JPH08163992A (ja) | εーポリーLーリジンの製造法 | |
SU734262A1 (ru) | Способ получени рнк-полимеразы |