SU745942A1 - Способ выращивани - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ BACILLUS ТНИКШОШМЗТЗ Изобретение относитс  к области микробиологического синтеза с использованием продуцентов, обладающих способностью ко вторичному метаболизму, в результате которого получаютс  токсины, и может быть использовано в микробиологической промытленности . Известно, что вирулентность некоторых энтомопатогенных препаратов, в частности эитобзктерина, св зана с токсинообразованием продуцента 1. При выращивании микроорганизмов, синтезирующих инсектицидные токсины, большое значение имеет регулирование метаболических механизмов, которое дл  получени  максимальных выходов продуктов может быть св зано с нарушением роста клетки или ее метаболизма. При этом услови , важные дл  получени  максимальной массы клеток, обычно не совпадают с теми, которые обеспечивают максимальный выход продукта метаболизма-токсина . В частности известно, что состав питательной среды, а также соотношение различных компонентов питательной среды вли ет на выработку токсинов микроорганизмами 2 VAR. GALLERIAE Однако каких-либо конкретных соотнощений различных компонентов питательной среды, вли ющих на биосинтез токсинов, в известных выше источниках не приведено. Наиболее, распространенными компонентами , используемыми в промышленных производствах ,  вл йтс  кукурузный экстракт, кормовые дрожжи, рыбна  мука - как источник азотистых веществ, и глюкоза, крахмал ,кукурузна  мука - как источник и углеводов . Выбор количественных соотношений и концентраций этих компонентов направлен на получение максимального выхода продуктов вторичного метаболизма - токсинов . Известен промышленный способ выращивани  аэробных токсинообразующих энтомопатогенных микроорганизмов Вас. thurihgiensis var. galleriae на жидкой питательной среде, содержащей сахара (700900 мг°/о в пересчете на глюкозу) и аминокислоты (45-75 мг% аминного азота) на 1 л среды, причем питательна  среда такого состава стиммулирует усови  спорогенеза и кристаообразовани  в микроорганизмах за счет лимитизации процесса по caxapalM |3j.

В результате спорообразовани  и кристаллообразовани  формируетс  инсектицидность препарата. По окончании ферментации среда оказываетс  истощенной по сахарам (содержание Сахаров составл ет 50 мг% в пересчете на гл1бкозу), но она содержит 5 значительные количества аминокислот (содержание аминного азота составл ет 3060 мг%).;

Недостатком этого способа выращивани  микроорганизмов  вл етс  низка  токсичность получаемого препарата и нецелесообразный расход дорогосто щего сырь , содержащего аминокислоты.

Целью изобретени   вл етс  увеличение активности получаемого энтобактерина при «5 одновременном сокращении затрат на его получение: сокращаютс  затраты на сырье, содержащее аминокислоты при производстве инсектицидных препаратов с использованием Вас. thuringiensis var galleriae.

Указанна  цель достигаетс  тем, что выращивание этого микроорганизма провод т в услови х лимитизации среды по азоту, а также тем, что микроорганизмы выращивают на питательной среде, содержащей угле- js водов 700-1200 мг°/о (в пересчете на глюкозу ) и 15-30 мг°/о аминного азота на 1 л среды.

Лимитизацию среды по азоту можно достигнуть различными пут ми: уменьщением в исходной питательной среде содержани  в компонента,  вл ющегос  источником амино кислот при периодических пересевах; дробной подачей или поддержанием определенного лимитирующего уровн  азота в периодических лелевых процессах. При этом ,. механизм метаболизма, регулирующий синтез токсинов, переключаетс  на увеличение выхода вторичных метаболитов - токсинов.

В приведенную ниже таблицу сведены результаты лабораторной проверки предлагаемого способа в сопоставлении с прототипом, 40 показывающие увеличение степени токсичности (уменьщение летальной концентрации культуральной жидкости дл  биологического тест-объекта) при услови х лимитации процесса по аминному азоту.

Проверка проводилась на способе пери- Ьдического культивировани  продуцента Bacillus thuringiensis на питательных средах различного состава.

Токсичность оценивалась по тест-объекту гусениц Вас.galleriae mellanela.50

Как видно из приведенных в таблице Данных, культурна  жидкость, получаема  на средах, объединенных по аминному азоту , имеет токсичность в 3-5 раз выще, чем на средах, стимулирующих лимитацию процесса по сахарам. Причем по известному способу имеетс  избыток аминного азота в конце ферментации, а по предлагаемому способу к концу ферментации аминный азот исчерпан до нул .

Пример 1. Питательна  среда, содержаща  кукурузный экстракт (15 мг% аминного азота) и глюкозу (700 глюкозы), приготовленна  на водопроводной воде, имела рН среды 7,3 ед; была простерилизована при 0,7 ати 20 мин и разлита в колбы по 40 мл. Засев производили водной суспензией спор культуры Вас. thuringiensis van galleriae щтамм № 69/6. Колбы помещались на круговую качалку с числом оборотов 350 мин при 30°С.

Процесс выращивани  продолжалс  30 час. В конце ферментации при спорообразовании на 90% титр спор составл л около культуральной жидкости. Токсичность культуральной жидкости, выраженна  в Лк 50 , определ ема  по ТУ59-61-74 производства энтобактрина, составл ла 0,9%

Пример 2. Вьфащивание Вас. thuringiensis проводили в услови х, аналогичных приведенным в примере 1, на питательной среде , содержащей кормовые дрожжи (25 мг% аминного азота) и кукурузную муку (800 мг°/о глюкозы). Титр и токсичность культуральной жидкости составл ли соответственно l, и Лк5о -0,7%.

Осуществление предлагаемого способа позволит при меньщих затратах увеличить токсичность получаемой культуральной жидкости в 3-5 раз и токсичность получаемых на ее основе сухого или жидкого препаратов . При прин том в насто щее врем  эталоне токсичности, например в производстве энтобактерина, увеличение токсичности получаемой культуральной жидкости при сохранении того же уровн  производительности аппаратов (ферментаторов) позволит увеличить выход готового препарата за счет боьщего разбавлени  его наполнителем.

Одновременно при этом снижаетс  расход дорогосто щего сырь , содержащего аминокислоты, например кукурузного экстракта в 4,8 раза, а кормовых дрожжей в 3 раза, что означает снижение себестоимости готовой продукции только за счет этой статьи расходов (затраты на сырье) на 25%.

Результаты лабораторной проверки предлагаемого способа по сравнению со способом-прототипом

Claims (2)

1. Формула изобретения

   1. Способ выращивания Bacillus thuringiensis var. galleriae на жидкой питательной среде с лимитизацией одного из компонентов среды, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности получаемого при выращивании энтобактерина и сокраще- ⁵⁰ ния затрат на получение последнего, выращивание микроорганизма проводят в условиях лимитизации среды по азоту.
2. 2. Способ по π. 1, отличающийся тем, что микроорганизм выращивают на пита- _5S тельной среде, содержащее углеводов 700

   1200 мг% (в пересчете на глюкозу) и 15— 30 мг°/о аминного азота на 1 л среды.