RS58679B1 - Triazolopirimidin jednijenja i njihova upotreba - Google Patents

Description

OPIS

OBLAST PRONALASKA

[1] Predmetno obelodanjivanje odnosi se na triazolopirimidin jedinjenja, sastave koji sadrže takva jedinjenja i njihovu upotrebu pri tretiranju bolesti ili poremećaja posredovanih sa represivnim kompleksom polikomba 2 (PRC2).

POZADINA

[2] Proteini polikomb grupe (PcG) su enzimi koji modifikuju hromatin koji su disregulisani kod mnogo rakova kod ljudi. Represivni kompleks polikomba 2 (PRC2), koji obuhvata SUZ12 (supresor zeste 12), EED (razvoj ektoderma embriona) i katalitičku pod jedinicu, EZH2 (pojačivač zeste homologa 2), vrši represiju gena metilisanjem jezgra histon H3 lizina 27 (H3K27me3) na i oko regiona promotera ciljanih gena. PRC2 je ključna komponenta ćelijskog mehanizma uključenog u epigenetsku regulaciju transkripcije gena i ima ključnu funkciju pri razvoju i diferencijaciji i regeneraciji tkiva. Iako je EZH2 katalitička pod jedinica, PRC2 zahteva bar EED i SUZ12 za svoju aktivnost metiltransferaze. EED, SUZ12 i EZH2 su prekomerno ispoljeni kod mnogih rakova, uključujući ali bez ograničenja, rak dojke, rak prostate, hepatocelularni karcinom itd. Mutacije koje aktiviraju EZH2 su identifikovane kod pacijenata sa DLBCL (difuzni limfom velikih B ćelija) i pacijenata sa FL (folikularni limfom). Suzbijanje aktivnosti PRC2 metiltransferaze sa jedinjenjima koja su u konkurenciji sa kofaktor S-adenozil metioninom (SAM) u DLBCL vraća tok H3K27 metilacije, ponovo aktivira ispoljavanje ciljanih gena i suzbija rast/proliferaciju tumora. Stoga, PRC2 pruža farmakološki cilj za DLBCL i druge rakove. Naročito, postoji potreba za malim molekulima koji suzbijaju aktivnost PRC2. Predmetni pronalazak ispunjava ovu potrebu. WO 03/044021 obelodanjuje jedinjenja od koristi pri tretiranju raka kroz modulaciju interleukina-1 i faktora nekroze tumoraα. WO 2014/144747 obelodanjuje jedinjenja kao inhibitore aktivnost PCR2 kroz ciljanje pod jedinice EZH2.

REZIME

[3] Predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje Formule (I):

gde su R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, i n kao što su ovde definisani, uključujući stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, polimorfe ili solvate navedenog, koji su od koristi pri tretiranju bolesti ili poremećaja posredovanog sa PRC2.

[4] Predmetno obelodanjivanje takođe pruža procese i međujedinjenja za pravljenje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju.

[5] Predmetno obelodanjivanje takođe pruža farmaceutske sastave koje sadrže bar jedno jedinjenje predmetnog obelodanjivanja i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, rastvarač ili ekscipijens. Farmaceutski sastav može dalje sadržati bar jedno dodatno terapeutsko sredstvo. Od naročitog su interesa dodatna terapeutska sredstva izabrana iz: drugih sredstava protiv raka, imunomodulatora, sredstava protiv alergija, sredstava protiv mučnine (ili anti-emetici), sredstava za ublažavanje bola, citoprotektivnih sredstava i kombinacija navedenog.

[6] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti korišćenja pri tretiranju bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2.

[7] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti korišćena u terapiji.

[8] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti korišćena za proizvodnju medikamenta za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2.

[9] Predmetno obelodanjivanje pruža postupak za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, koji obuhvata davanje pacijentu koji ima potrebu za time terapeutski delotvorne količine prvog terapeutskog sredstva opciono sa drugim terapeutskim sredstvom, gde je prvo terapeutsko sredstvo jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju a drugo terapeutsko sredstvo je drugi tip terapeutskog sredstva.

[10] Primeri bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2 obuhvataju, ali nisu ograničeni na, difuzni limfom velikih B ćelija (DLBCL), folikularni limfom, druge limfome, leukemiju, multipli mijelom, mezoteliom, rak želuca, maligni rabdoidni tumor, hepatocelularni karcinom, rak prostate, karcinom dojke, rakove žučnih vodova i žučne kese, karcinom bešike, tumore mozga uključujući neuroblastom, švanom, gliom, glioblastom i astrocitom, rak grlića materice, rak debelog creva, melanom, endometrijalni rak, ezofagealni rak, rak glave i vrata, rak pluća, nazofaringealni karcinom, rak jajnika, rak pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, rak rektuma, rakovi štitne žlezde, tumore paraštitne žlezde, tumore materice i sarkome mekog tkiva kao što su rabdomiosarkom (RMS), Kaposijev sarkom, sinovijalni sarkom, osteosarkom i Juingov sarkom.

[11] Predmetno obelodanjivanje pruža metodu za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, koji obuhvata davanje pacijentu koji ima potrebu za time terapeutski delotvorne količine prvog terapeutskog sredstva opciono sa drugim terapeutskim sredstvom, gde je prvo terapeutsko sredstvo EED inhibitor a drugo terapeutsko sredstvo je drugi tip terapeutskog sredstva; gde su bolesti ili poremećaji izabrani iz difuznog limfoma velikih B ćelija (DLBCL) folikularnog limfoma, drugih limfoma, leukemije, multiplog mijeloma, raka želuca, malignog rabdoidnog tumora i hepatocelularnog karcinoma.

[12] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu se koristiti samostalno, u kombinaciji sa drugi jedinjenjima prema predmetnom obelodanjivanju ili u kombinaciji sa jednim ili više, poželjno dva ili više drugih sredstava, istovremeno ili uzastopno.

[13] Druga svojstva i prednosti predmetnog obelodanjivanja biće očigledna iz sledećeg detaljnog opisa i patentnih zahteva.

DETALJNI OPIS

I. JEDINJENJA

[14] U prvom aspektu, predmetno obelodanjivanje pruža, između ostalog, jedinjenje Formule (I):

ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog, gde:

---- predstavlja pojedinačnu vezu ili dvostruku vezu;

R<1>i R<2>predstavljaju nezavisno H ili halogen;

R<3>je nezavisno izabran iz: halogena, fenila i 5- do 6-članog heteroarila koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde su navedeni fenil i heteroaril zamenjeni sa 0-3 R<3A>;

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C6alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, R<3C>, -OR<3C>, -C(=O)R<3D>, NR<3E>R<3F>, -C(=O)NR<3E>R<3F>, -NHC(=O)R<3D>, -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NR<3E>R<3F>, -NHS(=O)2(C1-C4alkil), i -CR<3C>R<3E>R<3G>; R<3B>je nezavisno izabran iz: OH, NR<e>R<f>, C1-C4alkoksi, -C(=O)NR<e>R<f>, -S(=O)2(C1-C4alkil), -NHC(=O)(C1-C4alkil), i 5- do 6-članog heterocikloalkila koji sadrži atome ugljenika i 1-2 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je navedeni heterocikloalkil zamenjen sa 0-2 R<c>;

svaki R<3C>je nezavisno izabran iz: C3-C6cikloalkila, fenila, i 4- do 7-članog heterociklila koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je svaki deo zamenjen sa 0-2 R<c>;

svaki R<3D>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila i R<3C>;

R<3E>i R<3G>su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani iz: H i C1-C4alkila;

svaki R<3F>je nezavisno izabran iz: H i C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<d>;

R<4>je nezavisno izabran iz: H, halogena i C1-C4alkila;

R<5>je nezavisno izabran iz OH i C1-C4alkila;

svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, →O, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), C3-C6cikloalkila, i benzila;

R<b>je nezavisno izabran iz: halogena, OH i C1-C4alkoksi;

svaki R<c>je nezavisno izabran iz: =O, halogena, OH, C1-C4alkila, C1-C4haloalkila, C1-C4alkoksi, i C1-C4haloalkoksi;

R<d>je nezavisno izabran iz: OH i NR<e>R<f>;

R<e>i R<f>su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani iz: H i C1-C4alkila;

svako p je nezavisno izabrano iz 0, 1 i 2; i

m i n su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani od 0 i 1.

[15] U drugom aspektu, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje formule (IA):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru prvog aspekta; gde:

R<1>i R<2>predstavljaju nezavisno H ili halogen;

R<3>je nezavisno izabran iz: halogena, fenila, i 5- do 6-članog heteroarila koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde su navedeni fenil i heteroaril zamenjeni sa 0-3 R<3A>;

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C6alkila zamenjeno sa 0-1 R<3B>), C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, R<3C>, -OR<3C>, -C(=O)R<3D>, NR<3E>R<3F>, -C(=O)NR<3E>R<3F>, -NHC(=O)R<3D>, -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NR<3E>R<3F>, -NHS(=O)2(C1-C4alkila), i -CR<3C>R<3E>R<3G>;

R<3B>je nezavisno izabran iz: OH, NR<e>R<f>, C1-C4alkoksi, -C(=O)NR<e>R<f>, -S(=O)2(C1-C4alkil), -NHC(=O)(C1-C4alkil), i 5- do 6-članog heterocikloalkila koji sadrži atome ugljenika i 1-2 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je navedeni heterocikloalkil zamenjen sa 0-2 R<c>;

svaki R<3C>je nezavisno izabran iz: C3-C6cikloalkila, fenila i 4- do 7-članog heterociklila koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je svaki deo zamenjen sa 0-2 R<c>;

svaki R<3D>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila i R<3C>;

R<3E>i R<3G>su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani iz: H i C1-C4alkila; svaki R<3F>je nezavisno izabran iz: H i C1-C4alkila zamenjenog sa od 0-1 R<d>;

R<4>je nezavisno izabran iz: H, halogena i C1-C4alkila;

R<5>je nezavisno C1-C4alkil;

svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, →O, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), C3-C6cikloalkila, i benzila;

R<b>je nezavisno izabran iz: halogena, OH i C1-C4alkoksi;

svaki R<c>je nezavisno izabran iz: =O, halogena, OH, C1-C4alkila, C1-C4haloalkila, C1-C4alkoksi, i C1-C4haloalkoksi;

R<d>je nezavisno izabran iz: OH i NR<e>R<f>;

R<e>i R<f>su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani iz: H i C1-C4alkila;

svako p je nezavisno izabrano iz 0, 1 i 2; i

m i n su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani od 0 i 1.

[16] U drugom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru prvog aspekta; gde:

svako R<3A>nezavisno je izabrano iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, R<3C>, -C(=O)R<3D>, NR<3E>R<3F>, -C(=O)NR<3E>R<3F>, -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NHR<3F>, -NHS(=O)2(C1-C4alkil), -O-C3-C6cikloalkila, i

R<a>je nezavisno izabran iz: H, →O, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), i C3-C6cikloalkil;

R<4>predstavlja H;

m je nezavisno izabrano od 0 i 1; i

n je 0.

[17] U trećem aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru drugog aspekta; gde:

R<1>predstavlja nezavisno H ili F;

R<2>predstavlja H; i

R<3>je nezavisno izabran iz: fenila i 6-članog heteroarila koji sadrži atome ugljenika i 1-2 heteroatoma izabrana iz N i NR<a>; gde su navedeni fenil i heteroaril zamenjeni sa 0-3 R<3A>.

[18] U četvrtom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjene Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog, drugog i trećeg aspekta; gde:

R<3>je nezavisno izabran iz: fenila, piridila, pirimidila, piridazinila i pirazinila; gde je svaki deo zamenjen sa 0-3 R<3A>.

[19] U petom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog do četvrtog aspekta, gde:

R<3>je nezavisno izabran iz:

[20] U šestom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog do petog aspekta, gde:

R<3>je nezavisno izabran iz:

i

svaki R<3A>nezavisno je izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, -C(=O)NH2, -C(=O)NH(C1-C4alkil), -C(=O)N(C1-C4alkil)2, -C(=O)N(C1-C4alkyl)(CH2)2N(C1-C4alkil)2, -CH2NHC(=O)(C1-C4alkil), -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NH(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 OH), - NHS(=O)2(C1-C4alkil),

NH2, -NH(C1-C4alkil), -N(C1-C4alkil)2, C3-C6cikloalkila,

-C(=O)N(C1-C4alkil)2, -S(=O)2(C1-C4alkil), i i ;

R<3D>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila i 1H-piperidin-4-ila; i

svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), i -CO2(C1-C4alkil).

[21] U sedmom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog do šestog aspekta, gde:

R<3>nezavisno je izabran iz: ;

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, -C(=O)NH2, -C(=O)NH(C1-C4alkil), -C(=O)N(C1-C4alkil)2, -C(=O)N(C1-C4alkil)(CH2)2N(C1-C4alkil)2, -CH2NHC(=O)(C1-C4alkil), -S(=O)2(C1-C4alkil), NH2, NH(C1-C4alkyl), N(C1-C4alkyl)2, C3-C6cycloalkyl,

-S(=O)2(C1-C4alkil), i ; i

svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), i -CO2(C1-C4alkil).

[22] U osmom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog do sedmog aspekta, gde:

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: F, Cl, CH3, -CH2OH, CH2F, CHF2, CF3, CN, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -OCHF2, -C(=O)N(CH3)2, -CH2NHC(=O)CH3, -S(=O)2CH3, NH2, ciklopropila,

i .

[23] U devetom aspektu, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje Formule (IA-1):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od aspekata iznad; gde: R<1>predstavlja nezavisno H ili F; i

R<3A>je nezavisno izabran iz: F, CH3, -CH2OH, CH2F, CHF2, CF3, i -OCH3.

[24] U desetom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru prvog ili drugog aspekta; gde:

R<1>predstavlja nezavisno H ili F;

R<2>predstavlja H;

R<3>je nezavisno 5-člani heteroaril koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je navedeni heteroaril zamenjen sa 0-3 R<3A>; i

R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), C3-C6cikloalkila, i benzila.

[25] U jedanaestom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjene Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog, drugog i desetog aspekta; gde:

i .

[26] U drugom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjene Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog, drugog i desetog aspekta; gde:

R<3>je nezavisno izabran iz: .

[27] U dvanaestom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjenje Formule (I) (IA), ili (IA-1), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od aspekata iznad, gde:

R<1>predstavlja F.

[28] U trinaestom aspektu, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje izabrano iz datih primera ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, uključujući sva jedinjenja iz Primera 1 do 245.

[29] U četrnaestom aspektu, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje izabrano iz:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[30] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje 8-(1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[31] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 1, gde je jedinjenje 8-(1,3-dimetil-1H-pirazol-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[32] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 2 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[33] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 2, gde je jedinjenje N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[34] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 5 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(6-metoksi-4-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[35] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 5, gde je jedinjenje N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(6-metoksi-4-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[36] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje 8-(2-ciklopropil-4-metilpirimidin-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[37] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 8, gde je jedinjenje 8-(2-ciklopropil-4-metilpirimidin-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[38] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 207 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje N-((5-fluorobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[39] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 207, gde je jedinjenje N-((5-fluorobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[40] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 233 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je jedinjenje N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[41] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje iz Primera 233, gde je jedinjenje N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin.

[42] U drugom aspektu, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, izabrano iz bilo koje pod liste jedinjenja u okviru trinaestog aspekta.

[43] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvih sedam aspekata, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ; i

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi, -CON(C1-C4alkil)2, -S(=O)2(C1-C4alkil), i C3-C6cikloalkila.

[44] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvih sedam aspekta, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ; i

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: CH3, OCH3, -CON(CH3)2, -S(=O)2(CH3), i ciklopropila.

[45] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvih sedam aspekta, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ; i

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi, i -O-C3-C6cikloalkila.

[46] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvih sedam aspekta, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ; i

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: OCH3, OCH2CH3, -OCHF2, i -O-ciklopropila.

[47] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvih sedam aspekta, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ; i

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkoksi, i -O-C3-C6cikloalkila.

[48] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvog do šestog aspekta, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ; i

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: halogena, CN, C1-C4alkila, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, N(C1-C4alkil)2, i C3-C6cikloalkila.

[49] U drugom otelotvorenju, dato je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u okviru bilo kod od prvog do šestog aspekta, gde:

R<3>predstavlja nezavisno ;

svaki R<3A>nezavisno je izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, C(=O)NH2, -S(=O)2R<3c>, -S(=O)2NH(C1-C4alkila

zamenjenog sa 0-1 OH), -NHS(=O)2(C1-C4alkil), i

;

R<3B>je nezavisno izabran iz: OH, NH2, N(C1-C4alkil)2, i -S(=O)2(C1-C4alkil); i R<3c>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila i 1H-piperidin-4-ila.

[50] U drugom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjene Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog, drugog, desetog i jedanaestog aspekta; gde:

R<3>je nezavisno izabran iz: .

[51] U drugom aspektu, predmetno obelodanjivanje obuhvata jedinjene Formule (I) ili (IA), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u okviru bilo kod od prvog, drugog, desetog i jedanaestog aspekta; gde:

R<3>predstavlja nezavisno ;

svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila, C1-C4alkoksi, C1-C4haloalkila, i C1-C4haloalkoksi;

R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, i C3-C6cikloalkila; i R<b>je nezavisno izabran iz: OH i C1-C4alkoksi.

[52] U drugim otelotvorenjima, jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju imaju IC50vrednosti ≤ 5 µM, upotrebom EED Alphascreen vezivanja, LC-MS i/ili ELISA testova ovde obelodanjenih, poželjno, IC50vrednosti ≤ 1 µM, još poželjnije, IC50vrednosti ≤ 0.5 µM, čak još poželjnije, IC50vrednosti ≤ 0.1 µM.

II. DRUGA OTELOTVORENJA

[53] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža sastav koji sadrži bar jedno od jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog.

[54] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža farmaceutski sastav koji sadrži bar jedno od jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju ili farmaceutski prihvatljivu so navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razređivač ili ekscipijens.

[55] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža farmaceutski sastav koji sadrži terapeutski delotvornu količinu bar jednog od jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju ili farmaceutski prihvatljive soli navedenog i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razređivač ili ekscipijens.

[56] Farmaceutski sastav je od koristi pri tretiranju bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2.

[57] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža farmaceutski sastav kao što je definisano iznad koji dalje sadrži dodatna terapeutska sredstva.

[58] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža proces za pravljenje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju.

[59] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža međujedinjenje za pravljenje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju.

[60] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju, za upotrebu pri terapiji, samostalno, ili opciono u kombinaciji sa drugim jedinjenjem prema predmetnom obelodanjivanju i/ili bar jednim drugim tipom terapeutskog sredstva.

[61] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju za upotrebu pri terapiji, za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, samostalno, ili opciono u kombinaciji sa drugim jedinjenjem prema predmetnom obelodanjivanju i/ili bar jednim drugim tipom terapeutskog sredstva.

[62] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža metodu za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, koja obuhvata davanje pacijentu koji ima potrebu za takvim tretiranjem terapeutski delotvornu količinu bar jednog od jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju, samostalno, ili opciono u kombinaciji sa drugim jedinjenjem prema predmetnom obelodanjivanju i/ili bar jednim drugim tipom terapeutskog sredstva.

[63] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža metodu za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, koja obuhvata davanje pacijentu koji ima potrebu za time terapeutski delotvorne količine prvog i drugog terapeutskog sredstva, gde je prvo terapeutsko sredstvo jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju a drugo terapeutsko sredstvo je drugi tip terapeutskog sredstva.

[64] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje takođe pruža upotrebu jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju za proizvodnju medikamenta za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, samostalno, ili opciono u kombinaciji sa drugim jedinjenjem prema predmetnom obelodanjivanju i/ili bar jednim drugim tipom terapeutskog sredstva.

[65] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža kombinovano pripremanje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju i dodatnih terapeutskih sredstava za upotrebu pri terapiji.

[66] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža kombinaciju jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju i dodatnih terapeutskih sredstava za istovremenu ili odvojenu upotrebu pri terapiji.

[67] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža kombinovano pripremanje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju i dodatnih terapeutskih sredstava za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu pri tretiranju bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2. Jedinjenje može biti dato kao ovde opisan farmaceutski sastav.

[68] Primeri bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2 obuhvataju, ali nisu ograničeni na, difuzni limfom velikih B ćelija (DLBCL), folikularni limfom, druge limfome, leukemiju, multipli mijelom, mezoteliom, rak želuca, maligni rabdoidni tumor, hepatocelularni karcinom, rak prostate, karcinom dojke, rakove žučnih vodova i žučne kese, karcinom bešike, tumore mozga uključujući neuroblastom, švanom, gliom, glioblastom i astrocitom, rak grlića materice, rak debelog creva, melanom, endometrijalni rak, ezofagealni rak, rak glave i vrata, rak pluća, nazofaringealni karcinom, rak jajnika, rak pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, rak rektuma, rakovi štitne žlezde, tumore paraštitne žlezde, tumore materice i sarkome mekog tkiva kao što su rabdomiosarkom (RMS), Kaposijev sarkom, sinovijalni sarkom, osteosarkom i Juingov sarkom.

[69] U drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjivanje pruža metodu za tretiranje bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2, koja obuhvata davanje pacijentu koji ima potrebu za time terapeutski delotvorne količine prvog opciono sa drugim terapeutskim sredstvom, gde je prvo terapeutsko sredstvo EED inhibitor a drugo terapeutsko sredstvo je drugi tip terapeutskog sredstva; gde su bolesti ili poremećaji izabrani iz difuznog limfoma velikih B ćelija (DLBCL) folikularnog limfoma, drugih limfoma, leukemije, multiplog mijeloma, raka želuca, malignog rabdoidnog tumora i hepatocelularnog karcinoma.

[76] Kao što se ovde koristi, termin „heteroatomi“ odnose se na atome azota (N), kiseonika (O) ili sumpora (S), naročito azota ili kiseonika.

[77] Ukoliko nije drugačije navedeno, bilo koji heteroatom sa nezadovoljenim valencama pretpostavlja se da ima dovoljno atoma vodonika da zadovolji valence.

[78] Kao što se ovde koristi, termini „alkil“ odnosi se na radikal ugljovodonika opšte formule CnH2n+1. Alkan radikal može biti prav ili granat. Na primer, termin „C1-C10alkil“ ili „C1do C10alkil“ odnosi se na monovalentnu, pravu ili granatu alifatičnu grupu koja sadrži 1 do 10 atoma ugljenika (npr. metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, i-butil, s-butil, t-butil, n-pentil, 1-metilbutil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, neopentil, 3,3-dimetilpropil, heksil, 2-metilpentil, heptil, i slično).

[79] Termin „alkilen“ odnosi se na dvovalentnu alkil grupu. Na primer, termin „C1-C6alkilen“ ili „C1do C6alkilen“ donosi se na dvovalentnu, pravu ili granatu alifatičnu grupu koja sadrži 1 do 6 atoma ugljenika (npr. metilen (-CH2-), etilen (-CH2CH2-), n-propilen (-CH2CH2CH2-), izo-propilen (-CH(CH3)CH2-), n-butilen, sek-butilen, izo-butilen, terc-butilen, n-pentilen, izopentilen, neopentilen, n-heksilen i slično).

[80] Termin „alkoksi“ može se odnositi na alkil povezan sa kiseonikom, koji može takođe biti predstavljen kao -O-R ili -OR, gde R predstavlja alkil grupu. „C1-C6alkoksi“ ili „C1do C6alkoksi“ namenjen je da obuhvata C1, C2, C3, C4, C5, i C6alkoksi grupe. Primerne alkoksi grupe obuhvataju, ali nisu ograničene na, metoksi, etoksi, propoksi (npr.., n-propoksi i izopropoksi), i t-butoksi. Slično, „alkiltio“ ili „tioalkoksi“ predstavljaju alkil grupu kao što je definisano iznad sa navedenim brojem atoma ugljenika povezanih preko mosta sumpora; na primer metil-S- i etil-S-.

[81] „Halogen“ ili „halo“ mogu biti fluor, hlor, brom ili jod (poželjni halogeni kao supstituenti su fluor i hlor).

[82] „Haloalkil“ je namenjen da obuhvati i granate i pravolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje imaju naznačen broj atoma ugljenika, zamenjene sa jednim ili više halogena. Primeri haloalkila obuhvataju, ali nisu ograničeni na, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, pentahloroetil, 2,2,2-trifluoroetil, heptafluoropropil, i heptahloropropil. Primeri haloalkila takođe obuhvataju „fluoroalkil“ koji je namenjen da obuhvati obe i granate i pravolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje imaju naznačen broj atoma ugljenika, zamenjene sa jednim ili više atoma fluora.

[83] „Haloalkoksi“ predstavlja haloalkil grupu kao što je definisano iznad sa navedenim brojem atoma ugljenika povezanim preko mosta kiseonika. Na primer, ili „C1to C6haloalkoksi“ je namenjen da obuhvata C1, C2, C3, C4, C5, i C6haloalkoksi grupe. Primeri haloalkoksi obuhvataju, ali nisu ograničeni na, trifluorometoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi i pentafluorotoksi. Slično, „haloalkiltio“ ili „tiohaloalkoksi“ predstavljaju haloalkil grupu kao što je definisano iznad sa navedenim brojem atoma ugljenika povezanih preko mosta sumpora; na primer trifluorometil-S- i pentafluoroetil-S-.

[84] Termin „okso“ ili -C(O)- odnosi se na karbonil grupu. Na primer, keton, aldehid ili deo kisele, ester, amid, lakton ili laktam grupe.

[85] Termin „cikloalkil“ odnosi se na nearomatični karbociklični prsten, koji je u potpunosti hidrogenisani prsten, uključujući mono-, bi- ili poli-ciklične sisteme prstenova. „ C3-C8cikloalkil“ ili „ C3do C8cikloalkil „ je namenjen da obuhvata C3, C4, C5, C6, C7i C8cikloalkil grupe. Primer cikloalkil grupa obuhvata, ali nije ograničen na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i norbornil.

[86] Termin „aril“ odnosi se na 6- do 10-člane aromatične karbociklične grupe koje imaju jedan (npr. fenil) ili spojeni sistem prstena (npr. naftalen.). Tipična aril grupa je fenil grupa.

[87] Termin „benzil“, kao što se ovde koristi, odnosi se na metil grupu na kojoj je jedan od atoma vodonika zamenjen sa fenil grupom.

[88] „Heterocikloalkil“ označava cikloalkil, kao što je definisano u ovoj patentnoj prijavi, tako da je jedan ili više navedenih ugljenika prstena, zamenjeno sa grupom izabranom iz -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O) - i -S(O)2-, gde R je vodonik, C1-4alkil ili azotna zaštitna grupa (na primer, karbobenziloksi, p-metoksibenzil karbonil, t-butoksikarbonil, acetil, benzoil, benzil, p-metoksi-benzil, p-metoksi-fenil, 3,4-dimetoksibenzil, i slično). Na primer, 3 do 8 člani heterocikloalkil obuhvata epoksi, aziridinil, azetidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidrotienil 1,1-dioksid, oksazolidinil, tiazolidinil, pirolidinil, pirolidinil-2-on, morfolino, piperazinil, piperidinil, piperidinilon, pirazolidinil, heksahidropirimidinil, 1,4-dioksa-8-aza-spiro[4.5]dec-8-il, tiomorfolino, sulfanomorfolino, sulfonomorfolino, oktahidropirolo[3,2-b]pirolil, i slično.

[89] Termin „delimično zasićeni heterocikl“ odnosi se na nearomatični prsten koji je delimično hidrogenisan i može postojati kao pojedinačni prsten, biciklični prsten (uključujući spojene prstenove). Ukoliko nije drugačije naznačeno, navedeni heterociklični prsten uopšteno je 5- do 10-člani prsten koji sadrži 1 do 3 heteroatoma izabrana iz O-, -N=, -NR-, i -S-, (poželjno 1 ili 2 heteroatoma). Delimično zasićeni heterociklični prstenovi obuhvataju grupe kao što su dihidrofuranil, dihidrooksazolil, dihidropiridinil, imidazolinil, 1H-dihidroimidazolil, 2H-piranil, 4H-piranil, 2H-hromenil, oksazinil i slično. Delimično zasićeni heterociklični prsten takođe obuhvata grupe gde je heterociklični prsten spojen sa aril ili heteroaril prstenom (npr. 2,3-dihidrobenzofuranil, indolinil (ili 2,3-dihidroindolil), 2,3-dihidrobenzotiofenil, 2,3-dihidrobenzotiazolil, 1,2,3,4-tetrahidrokvinolinil, 1,2,3,4-tetrahidroizokvinolinil, 5,6,7,8-tetrahidropirido[3,4-b]pirazinil, i slično).

[90] Termin „delimično ili potpuno zasićeni heterocikl“ odnosi se na nearomatični prsten koji je ili delimično ili potpuno hidrogenisan i može postojati kao pojedinačni prsten, biciklični prsten (uključujući spojene prstenove) ili spiralni prsten. Ukoliko nije drugačije naznačeno, heterociklični prsten uopšteno je 3- do 12-člani prsten koji sadrži 1 do 3 heteroatoma (poželjno 1 ili 2 heteroatoma) nezavisno izabrana iz sumpora, kiseonika i/ili azota. Kada se koristi termin „delimično ili potpuno zasićeni heterocikl“, namenjeno je da se obuhvati „heterocikloalkil“, i „delimično zasićeni heterocikl“. Primeri spiralnih prstenova obuhvataju 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, 3-azaspiro[5.5]undekanil, 3,9-diazaspiro[5.5]undekanil, i slično.

[91] Termin „heteroaril“ odnosi se na aromatične delove koji sadrže bar jedan heteroatom (npr. kiseonik, sumpor, azot ili kombinacija navedenog) u 5- do 10-članom aromatičnom sistemu prstena (npr. pirolil, piridil, pirazolil, indolil, indazolil, tienil, furanil, benzofuranil, oksazolil, izoksazolil, imidazolil, triazolil, tetrazolil, triazinil, pirimidinil, pirazinil, tiazolil, purinil, benzimidazolil, kvinolinil, izokvinolinil, kvinoksalinil, benzopiranil, benzotiofenil, benzoimidazolil, benzoksazolil, 1H-benzo[d][1,2,3]triazolil, i slično.). Heteroaromatični deo može se sastojati od pojedinačnog ili spojenog sistema prstena. Tipični pojedinačni heteroaril prsten je 5- do 6-člani prsten koji sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabrana iz kiseonika, sumpora i azota i tipično spojeni heteroaril sistem prstena je 9- do 10-člani sistem prstena koji sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabran iz kiseonika, sumpora i azota. Spojeni heteroaril sistem prstena može se sastojati od dva heteroaril prstena međusobno spojena ili heteroarila spojenog sa arilom (npr. fenil).

[92] Kada se koristi termin „heterocikl“, namenjen je da obuhvati „heterocikloalkil“, „delimično ili potpuno zasićeni heterocikl“, „delimično zasićeni heterocikl“, „potpuno zasićeni heterocikl“ i „heteroaril“.

[93] Termin „suprotni jon“ koristi se da predstavi negativno naelektrisane vrste kao što su hlorid, bromid, hidroksid, acetat i sulfat ili pozitivno naelektrisane vrste kao što su natrijum (Na+), kalijum (K+), amonijum (RnNHm+, gde su n=0-4, m=0-4 i m+n =4) i slično.

[94] Kada je tačkasti prsten korišćen u strukturi prstena, to ukazuje da struktura prstena može biti zasićena, delimično zasićena ili nezasićena.

[95] Kao što se ovde navodi, termin „zamenjen“ označava da je bar jedan atom vodonika zamenjen sa grupom koja nije vodonična, uz to da su normalne valence održavane i da se supstitucija ispoljava u stabilnom jedinjenju. Kada je supstituent keto (tj., =O), onda su 2 vodonika na atomu zamenjena. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatičnim delovima. Kada se kaže da je sistem prstena (npr., karbociklični ili heterociklični) zamenjen sa karbonil grupom ili dvostrukom vezom, namenjeno je da karbonil grupa ili dvostruka veza budu deo (tj., unutar) prstena. Dvostruke veze prstena, kao što se ovde koristi, su dvostruke veze koje su formirane između dva susedna atoma prstena (npr. C=C, C=N, ili N=N).

[96] U slučajevima gde su atomi azota (npr., amini) na jedinjenjima prema predmetnom obelodanjivanju, oni mogu biti pretvoreni u N-okside tretiranjem sa oksidacionim sredstvom (npr., mCPBA i/ili vodonik peroksidi) kako bi se dobila druga jedinjenja ovog obelodanjivanja. Stoga se smatra da prikazani i zahtevani atomi azota pokrivaju i prikazani azot i njegove N-oksid (N→O) derivate.

[97] Kada se bilo koja promenljiva javlja više od jednom u bilo kom konstituentu ili formuli jedinjenja, njena definicija pri svakom pojavljivanju je nezavisna od definicije pri svakom drugom pojavljivanju. Stoga, na primer, ukoliko je prikazano da je grupa zamenjena sa 0-3 R grupama, onda navedena grupa ne mora ili može biti zamenjena sa do tri R grupe, i pri svakom pojavljivanju R je izabran nezavisno iz definicije R. Na primer, sa pozivanjem na prvi aspekt, ovo se može primeniti na 0-3 R<3A>u R<3>definiciji, tako da kada je R<3>fenil ili 5- do 6-člani heteroaril, ove grupe ili nisu zamenjene (nisu zamenjene sa R<3A>) ili su zamenjene sa jednom, dve ili tri R<3A>grupe koje su nezavisno izabrane pri svakom pojavljivanju iz datih definicija za R<3A>. Ovo se slično može primeniti na definicije za 0-2 R<c>u R<3B>i R<3c>definicijama, i na 0-1 R<d>u R<3F>definiciji.

[98] Kada je veza sa supstituentom prikazana da se ukršta sa vezom koja povezuje dva atoma u prstenu, onda takav supstituent može biti vezan za bilo koji atom na prstenu. Kada je supstituent izlistan bez ukazivanja na atom u kojem je supstituent veza za ostatak jedinjenja date formule, onda takav supstituent može biti vezan preko bilo kog atoma u takvom supstituentu.

[99] Kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ukoliko takve kombinacije za rezultat imaju stabilna jedinjenja.

[100] Kao što bi osoba sa određenim iskustvom bila u stanju da shvati, na primer, keton (-CH-C=O) grupa u molekulu može izvršiti tautomerizaciju do svog enol oblika (-C=C-OH). Stoga, ovo obelodanjivanje namenjeno je da pokrije sve moguće tautomere čak i kada struktura prikazuje samo jedan od njih.

[101] Fraza „farmaceutski prihvatljiv“ ukazuje da supstanca ili sastav mora biti kompatibilan hemijski i/ili tehnološki, sa drugim sastojcima koji čine formulaciju, i/ili sa sisarom koji se tretira sa time.

[102] Ukoliko nije drugačije naznačeno, termin „jedinjenja prema predmetnom pronalasku“ ili „sastavi prema predmetnom obelodanjivanju“ odnose se na jedinjenja Formule (I), (IA) ili (IA-1), kao i na stereoizomere (uključujući diastereomere, enantiomere i racemate), geometrijske izomere, konformacijske izomere (uključujući rotamere i astropizomere), tautomere, izotopski označena jedinjenja (uključujući deuterijum zamene) i nasledno formirane delove (npr. polimorfi, solvati i/ili hidrati). Kada je prisutna grupa koja je u stanju da formira soli, takođe su uključene soli, naročito farmaceutski prihvatljive soli.

[103] Biće prepoznato od strane stručnjaka u ovoj oblasti da jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu sadržati hiralne centre i kao takva mogu postojati u različitim izomernim oblicima. Kao što se ovde koristi, termin „izomeri“ odnosi se na različita jedinjenja koja imaju istu molekulsku formulu ali se razlikuju u postavci i konfiguraciji atoma.

[104] „Enantiomeri“ su par stereoizomera koji su predmet i lik u ogledalu koji se ne mogu međusobno preklapati. A 1:1 smeša enantiomera je „racemska“ smeša. Termin je korišćen da označi racemsku smešu gde je pogodno. Kada se imenuje stereohemija za jedinjenja prema predmetnom pronalasku, pojedinačni stereoizomer sa poznatom relativnom ili apsolutnom konfiguracijom dva hiralna centra imenuje se upotrebom konvencionalnog RS sistema (npr. (1S,2S)); pojedinačni stereoizomer sa poznatom relativnom konfiguracijom ali sa nepoznatom apsolutnom konfiguracijom označava se zvezdicama (npr. (1R*,2R*)); i racemat sa dva slova (npr. (1RS, 2RS) je racemska smeša (1R,2R) i (1S,2S); (1RS,2SR) je racemska smeša (1R,2S) i (1S,2R)). „Diastereoizomeri“ su stereoizomeri koji imaju bar dva asimetrična atoma, ali koji nisu predmet i lik u ogledalu koji se može međusobno preklapati. Apsolutna stereohemija naznačena je u skladu sa Cahn-Ingold-Prelog R-S sistemom. Kada je jedinjenje čisti enantiomer stereohemija na svakom hiralnom ugljeniku može biti naznačena ili sa R ili S. Rastvorena jedinjenja čija apsolutna konfiguracija nije poznata mogu biti označena (+) ili (-) u zavisnosti od smera (dekstro- ili levorotirajući) u kom rotiraju ravan polarizovane svetlosti pri talasnoj dužini natrijum D linije. Alternativno, rastvorena jedinjenja mogu biti definisana sa respektivnim vremenima zadržavanja za odgovarajuće enantiomere/diasteromere putem hiralne HPLC.

[105] Određena ovde opisana jedinjenja sadrže jedan ili više asimetričnih centara ili osa i stoga mogu da dovedu do nastanka enantiomera, diasteromera i drugi stereoizomernih oblika koji mogu biti definisani, u vidu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)-.

[106] Geometrijski izomeri mogu se pojaviti kada jedinjenje sadrži dvostruku vezu ili neko drugo svojstvo koje daje molekulu određenu količinu strukturne krutosti. Ukoliko jedinjenje sadrži dvostruku vezu, supstituent može biti E ili Z konfiguracija. Ukoliko jedinjenje sadrži dvostruko zamenjeni cikloalkil, cikloalkil supstituent može imati cis- ili trans-konfiguraciju.

[107] Konformacijski izomeri (ili konfomeri) su izomeri koji se mogu razlikovati prema rotaciji oko jedne ili više veza. Rotameri su konfomeri koji se razlikuju po rotaciji oko samo jedne veze.

[108] Termin „atropizomer“ odnosi se na strukturni izomer zasnovan na osnoj ili ravanskoj hiralnosti koja je rezultat ograničene rotacije u molekulu.

[109] Ukoliko nije drugačije naznačeno, jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju su namenjena da obuhvataju sve takve moguće izomere, uključujući racemske smeše, optički čiste oblike i smeše međujedinjenja. Optički aktivni (R)- i (S)- izomeri mogu biti pripremljeni upotrebom hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili rastvoreni upotrebom konvencionalnih tehnika (npr. odvojeni na kolonama hiralne SFC ili HPLC hromatografije, kao što su CHIRALPAK® i CHIRALCEL® dostupni od DAICEL Corp. upotrebom odgovarajućeg rastvarača ili smeše rastvarača kako bi se postigla dobra separacija).

[110] Predmetna jedinjenja mogu biti izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Optički aktivnim oblici mogu biti pripremljeni rastvaranjem racemskih oblika ili sa sintezom iz optički aktivnih početnih materijala. Svi procesi korišćeni za pripremanje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju i napravljenih međujedinjenja smatraju se delom predmetnog obelodanjivanja. Kada su enantiomerni i diasteromerni produkti pripremljeni, mogu biti odvojeni konvencionalnim postupcima, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom.

[111] U zavisnosti od uslova procesa krajnji proizvodi predmetnog obelodanjivanja dobijaju se ili u slobodnom (neutralnom) ili u obliku soli. Oba, slobodni oblik i soli ovih krajnjih proizvoda su u okviru obelodanjivanja. Ukoliko je poželjno, jedan oblik jedinjenja može biti pretvoren u drugi oblik. Slobodna baza ili kiselina mogu biti pretvoreni u so; so može biti pretvorena u slobodno jedinjenje ili drugu so; smeša izomernih jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju može biti odvojena na pojedinačne izomere.

[112] Farmaceutski prihvatljive soli su poželjne. Međutim, druge soli mogu biti od koristi, npr. pri koracima izolovanja ili prečišćavanja koji se mogu upotrebiti za vreme pripremanja, i stoga su razmatrani u okviru obelodanjivanja.

[113] Kao što se ovde koristi, „farmaceutski prihvatljive soli“ odnose se na derivate obelodanjenih jedinjenja gde je matično jedinjenje modifikovano pravljenjem njegovih kiselih ili baznih soli. Na primer, farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, ali nisu ograničene na, acetat, askorbat, adipat, aspartat, benzoat, besilat, bromide/hidrobromid, bikarbonat/karbonat, bisulfat/sulfat, kamforsulfonat, kaprat, hlorid/hidrohlorid, hlorteofilonat, citrat, etandisulfonat, fumarat, gluceptat, glukonat, glukuronat, glutamat, glutarat, glikolat, hipurat, hidrojodid/jodid, isetionat, laktat, laktobionat, laurilsulfat, malat, maleat, malonat/hidroksimalonat, mandelat, mesilat, metilsulfat, mukat, naftoat, napsilat, nikotinat, nitrat, oktadekanoat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, fenilacetat, fosfat/vodonik fosfat/divodonik fosfat, poligalakturonat, propionat, salicitati, stearat, sukcinat, sulfamat, sulfosalicilat, tartrat, tosilat, trifluoroacetat ili ksinafoat oblik soli.

[114] Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli mogu biti formirane sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama. Neorganske kiseline iz kojih se mogu izvesti soli obuhvataju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu i slično, poželjno hlorovodoničnu kiselinu. Organske kiseline iz kojih se mogu izvesti soli obuhvataju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarsku kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzoevu kiselinu, mandelinsku kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, sulfosalicilnu kiselinu, i slično.

[115] Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli mogu biti formirane sa neorganskim i organskim bazama. Neorganske baze iz kojih se mogu izvesti soli obuhvataju, na primer, amonijum soli i metale iz kolona I do XII periodnog sistema. U određenim otelotvorenjima, soli su izvedene iz natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, srebra, cinka i bakra; naročito pogodne soli obuhvataju, soli amonijuma, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma. Organske baze iz kojih se mogu izvesti soli obuhvataju, na primer, primarne, sekundarne i tercijarne amine, zamenjene amina uključujući zamenjene amine koji se pronalaze u prirodi, ciklične amine, bazne smole sa razmenom jona i slično. Određeni organski amini obuhvataju izopropilamin, benzatin, holinat, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.

[116] Farmaceutski prihvatljive soli prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti sintetisana iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazne ili kisele delove konvencionalnim hemijskim postupcima. Uopšteno, takve soli mogu biti pripremljene reagovanjem slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u njihovoj smeši; uopšteno, podloge koje nisu vodene kao što je etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril su poželjne. Spisak pogodnih soli može se pronaći u Allen, L.V., Jr., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22. izdanje, Pharmaceutical Press, London, UK (2012).

[117] Jedinjenja prema pronalasku koja sadrže grupe koje su u stanju da imaju ulogu davaoca ili primaoca za vodonične veze mogu biti u stanju da formiraju ko-kristale sa pogodnim činiocima ko-kristala. Ovi ko-kristali mogu biti pripremljeni iz jedinjenja prema predmetnom pronalasku sa poznatim postupcima formiranja ko-kristala. Takvi postupci obuhvataju mlevenje, zagrevanje, zajedničku sublimaciju, zajedničko topljenje, ili dovođenje u kontakt sa rastvorom jedinjenja prema predmetnom pronalasku sa činiocem ko-kristala pod uslovima kristalizacije i izolovanje ko-kristala koji su time formirani. Pogodni činioci ko-kristala obuhvataju one opisane u WO 2004/078163. Stoga, pronalazak dalje pruža ko-kristale koji sadrže jedinjenje prema predmetnom pronalasku.

[118] Bilo koja ovde data formula takođe je namenjena da predstavlja neoznačene oblike kao i izotopski označene oblike jedinjenja. Izotopski označena jedinjenja imaju strukture prikazane ovde datim formulama osim što je jedan ili više atoma zamenjeno sa atomom koji ima izabranu atomsku masu ili maseni broj. Primeri izotopa koji mogu biti uključeni u jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju obuhvataju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl,<125>I respektivno. Predmetno obelodanjivanje obuhvata različita izotopski označena jedinjenja kao što je ovde definisano, na primer ona u kojima su radioaktivni izotopi, kao što su<3>H,<13>C, i<14>C, prisutni. Takva izotopski označena jedinjenja su od koristi pri metaboličkim ispitivanjima (sa<14>C), reakcionim kinetičkim ispitivanjima (sa, na primer,<2>H ili<3>H), detekciji ili tehnikama obrade slike, kao što su tomografija sa pozitronskom emisijom (PET) ili kompjuterizovana tomografija jednofotonskom emisijom (SPECT) uključujući probe distribucije tkiva leka ili podloge, ili pri radioaktivnom tretiranju pacijenata. Naročito,<18>F ili označeno jedinjenje mogu biti naročito poželjni za PET ili SPECT ispitivanja. Izotopski označena jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju uopšteno mogu biti pripremljena izvršavanjem postupaka obelodanjenih u šemama ili u primerima i pripremanjima opisanim ispod zamenjivanjem lako dostupnog izotopski označenog reagensa sa ne-izotopski označenim reagensom.

[119] Dalje, zamenjivanje težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.,<2>H ili D) može dati određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer povećani in vivo polu-raspad ili smanjene potrebe za doziranjem ili poboljšani terapeutski indeks. Uvaženo je da se deuterijum u ovom kontekstu smatra supstituentom jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju. Koncentracija takvog težeg izotopa, naročito deuterijuma, može biti definisana sa faktorom obogaćenja izotopa. Termin „faktor obogaćenja izotopa“ kao što se ovde koristi označava odnos između količine izotopa i prirodne količine naznačenog izotopa. Ukoliko je supstituent u jedinjenju ovog pronalaska naznačeni deuterijum, takvo jedinjenje ima faktor obogaćenja izotopa za svaki naznačeni atom deuterijuma od bar 3500 (52,5% uključenje deuterijuma pri svakom naznačenom atomu deuterijuma), bar 4000 (60% uključenje deuterijuma), bar 4500 (67,5% uključenje deuterijuma), bar 5000 (75% uključenje deuterijuma), bar 5500 (82,5% uključenje deuterijuma), bar 6000 (90% uključenje deuterijuma), bar 6333,3 (95% uključenje deuterijuma), bar 6466,7 (97% uključenje deuterijuma), bar 6600 (99% uključenje deuterijuma), ili bar 6633,3 (99,5% uključenje deuterijuma).

[120] Izotopski označena jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju uopšteno mogu biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim stručnima u ovoj oblasti ili postupcima analognim sa ovima ovde opisanim, upotrebom odgovarajućeg izotopski označenog reagensa na mestu reagensa koji nije označen koji se inače koristi. Takva jedinjenja imaju različite potencijalne primene, npr. kao standardi i reagensi pri određivanju sposobnosti potencijalnih farmaceutskih jedinjenja da se vežu za ciljane proteine ili receptore, ili za obradu slika jedinjenja ovog obelodanjivanja vezanog za biološke receptore in vivo ili in vitro.

[121] „Stabilno jedinjenje“ i „stabilna struktura“ namenjeni su da ukažu na jedinjenje koje je dovoljno jako da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše, i da bude formulisano u delotvorno terapeutsko sredstvo. Poželjno je da jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju ne sadrže N-halo, S(O)2H, ili S(O)H grupu.

[122] Termin „solvat“ označava fizičko povezivanje jedinjenja ovog obelodanjivanja sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskim ili neorganskim. Fizičko povezivanje obuhvata vodonično vezivanje. U određenim slučajevima, solvat će biti u stanju da se izoluje, na primer, kada su jedan ili više molekula rastvarača uključeni u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Molekuli rastvarača u solvatu mogu biti prisutni u regularnoj postavci i/ili u neuređenoj postavci. Solvat može obuhvatati ili stehiohemijsku ili nestehiohemijsku količinu molekula rastvarača. „Solvat“ obuhvata oba, solvate faze rastvora i one koji se mogu izolovati. Primerni solvati obuhvataju, ali nisu ograničeni na, hidrate, etanolate, metanolate i izopropanolate. Postupci solvatisanja uopšteno su poznati u struci.

[123] Kao što se ovde koristi „polimorf(i)“ odnosi se na kristalni oblik koji ima istu hemijsku strukturu/sastav ali različitu prostornu postavku molekula i/ili jona koji formiraju kristale. Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti data kao amorfne čvrste supstance ili kao kristalne čvrste supstance. Liofilizacija može biti upotrebljena za pružanje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju kao čvrste supstance.

[124] „EED“ se odnosi na proteinski proizvod genskog razvoja ektoderma embriona.

[125] „PRC2“ se odnosi na represivni kompleks polikomba 2.

[126] Termin „PRC2-posredovana bolest ili poremećaj“ odnosi se na bilo koju bolest ili poremećaj koji je posredno ili neposredno regulisan sa PRC2. Ovo obuhvata, ali nije ograničeno na, bilo koju bolest ili poremećaj koji je posredno ili neposredno regulisan sa EED.

[127] Termin „bolesti ili poremećaji posredovani sa EED i/ili PRC2“ odnose se na bolesti ili poremećaje koji su posredno ili neposredno regulisani sa EED i/ili PRC2.

[128] Kao što se ovde koristi, termin „pacijent“ obuhvata sve pacijente koji su sisari.

[129] Kao što se ovde koristi, termin „ispitanik“ odnosi se na životinju. Obično, životinja je sisar. „Ispitanik“ se takođe odnosi na bilo koji čovečiji ili organizam koji nije čovečiji koji bi potencijalno mogao da ima korist od tretiranja sa EED inhibitorom. Ispitanik se takođe odnosi, na primer, na primate (npr. ljudi), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, zečeve, pacove, miševe, ribe, ptice i slično. U određenim otelotvorenjima, ispitanik je primat. U drugim otelotvorenjima, ispitanik je čovek. Primerni ispitanici obuhvataju ljudska bića bilo koje starosti sa faktorima rizika za bolest raka.

[130] Kao što se ovde koristi, ispitanik „ima potrebu za“ tretiranjem ukoliko bi takav ispitanik imao korist u biološkom smislu, medicinski ili u kvalitetu života od takvog tretiranja (poželjno čovek).

[131] Kao što se ovde koristi, termin „suzbiti“, „suzbijanje“ ili „suzbija“ odnosi se na smanjenje ili suzbijanje datog stanja, simptoma, ili poremećaja ili bolesti, ili značajne bolesti u osnovnoj aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa.

[132] Kao što se ovde koristi, termin „tretirati“, „tretira“ ili „tretiranje“ bilo koje bolesti/poremećaja odnosi se na tretiranje bolesti/poremećaja kod sisara, naročito kod ljudi, i obuhvata: (a) poboljšavanje bolesti/poremećaja (tj., usporavanje ili zaustavljanje ili smanjenje razvoja bolesti/poremećaja, ili bar jedan od kliničkih simptoma navedenog; (b) olakšavanje ili moduliranje bolesti/poremećaja (tj.., izazivanje regresije bolesti/poremećaja, ili fizički, (tj.., stabilizacijom prepoznatljivih simptoma), fiziološki, (tj.., stabilizacijom fizičkih parametara), ili oba); (c) ublažavanje ili poboljšavanje bar jednog fizičkog parametra uključujući one koji ne moraju biti prepoznatljivi od strane ispitanika; i/ili (d) sprečavanje ili odlaganje ispoljavanja razvoja ili napredovanja bolesti ili poremećaja koje se javlja kod sisara, naročito kada sisar ima predispoziciju za bolest ili poremećaj ali oni još uvek nisu dijagnostikovani.

[133] Kao što se ovde koristi „sprečavati“ ili „sprečavanje“ pokriva preventivno tretiranje (tj.., profilaksu i/ili smanjenje rizika) stanja subkliničke bolesti kod sisara, naročito kod čoveka, ciljano na smanjenje verovatnoće pojavljivanja stanja kliničke bolesti. Pacijenti su izabrani za preventivnu terapiju na osnovu faktora za koje je poznato povećavaju rizik od pojave stanja kliničke bolesti u poređenju sa opštom populacijom. Terapije „profilakse“ mogu biti podeljene na (a) primarno sprečavanje i (b) sekundarno sprečavanje. Primarno sprečavanje definisano je kao tretiranje kod ispitanika kod kojeg se još uvek nije ispoljilo stanje kliničke bolesti, dok je sekundarno sprečavanje definisano kao sprečavanje drugog pojavljivanja istog ili sličnog stanja kliničke bolesti.

[134] Kao što se ovde koristi, „smanjenje rizika“ ili „smanjeni rizik“ pokriva terapije koje smanjuju učestalost razvoja stanja kliničke bolesti. Kao takve, primarne i sekundarne preventivne terapije su primeri smanjenja rizika.

[135] „Terapeutski delotvorna količina“ je namenjena da obuhvati količinu jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor kod ispitanika, na primer, smanjenje ili suzbijanje EED i/ili PRC2 ili poboljšati simptome, olakšati stanja, usporiti ili odložiti napredovanje ili sprečiti bolest ili poremećaj posredovan sa PRC2. Kada se primeni na kombinaciju, termin se odnosi na kombinovane količine aktivnih sastojaka koje za rezultat imaju u preventivno ili terapeutsko dejstvo, bilo da se daju u kombinaciji, serijski ili istovremeno.

[136] Skraćenice koje se ovde koriste, definisane su kao što sledi: „1x“ za jednom, „2x“ za dva put, „3x“ za tri put, „°C“ za stepene Celzijusa, „akv“ za vodeni“, „Kol“ za kolonu, „ekv“ za ekvivalent ili ekvivalente, „g“ za gram ili grame, „mg“ za miligram ili miligrame, „L“ za litar ili litre, „mL“ za mililitar ili mililitre, „µL“ za mikrolitar ili mikrolitre, „N“ za normalno, „M“ za molarno, „nM“ za nanomolarno, „mol“ za mol ili mole, „mmol“ za milimol ili milimole, „min“ za minut ili minute, „h“ za sat ili sate, „rt“ za sobnu temperaturu, „RT“ za vreme zadržavanja, „ON“ za preko noći, „atm“ za atmosferu, „psi“ za funti po kvadratnom inču, „konc.“ za koncentrat, „ak“ za vodeni, „zas“ ili „zasić“ za zasićeno, „MW“ za molekulsku masu, „mw“ ili „µwave“ za mikrotalase, „mp“ za tačku topljenja, „Wt“ za težinu, „MS“ ili „Masena spek“ za masenu spektrometriju, „ESI“ za masenu spektrometriju sa elektrosprej jonizacijom, „HR“ za visoku rezoluciju, „HRMS“ za masenu spektrometriju visoke rezolucije, „LC-MS“ za masenu spektrometriju sa tečnom hromatografijom, „HPLC“ za tečnu hromatografiju sa visokim pritiskom, „RP HPC“ za HPLC sa reverznom fazom, „TLC“ ili „tlc“ za tankoslojnu hromatografiju, „NMR“ za spektroskopiju sa nuklearnom magnetnom rezonancom, „nOe“ naspektroskopiju sa nuklearnim Overhauser efektom, „<1>H“ za proton, „δ“ za delta, „s“ za signal, „d“ za duplet, „t“ za triplet“, „q“ za kvartet, „m“ za multiplet, „br“ za široko, „Hz“ za herc, „ee“ za enantiomerski višak“ i „α“, „β“, „R“, „S“, „E“, i „Z“ su stereohemijske oznake poznate stručnjacima u ovoj oblasti.

[137] Sledeće skraćenice ovde korišćene imaju odgovarajuće značenje:

Bn benzil

Boc terc-butoksi karbonil

Boc2O di-terc-butil dikarbonat

Bu butil

Cs2CO3cezijum karbonat bezvodni

CHCl3hloroform

DAST dietilaminosumportrifluorid

DBU 2,3,4,6,7,8,9,10-oktahidropirimido[1,2-a]azepin DCM dihlorometan

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DMF dimetilformamid

DMSO dimetilsulfoksid

DPPA difenilfosforil azid

EA etil acetat

Et etil

EtOH etanol

EtOAc etil acetat

HATU 2-(7-Aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

HCl hlorovodonična kiselina

i-Bu izobutil

i-Pr izopropil

KOAc kalijum acetat

LiAlH4litijum aluminijum hidrid

LiCl litijum hlorid

LiHMDS litijum bis(trimetilsilil)amid

mCPBA 3-Hloroperoksibenzoeva kiselina

Me metil

Me4-t-BuXPhos di-terc-butil(2',4',6'-triizopropil-3,4,5,6-tetrametil-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfan

MeCN acetonitril

MnO2mangan dioksid

N2azot

NaBH4natrijum borohidrid

NaHCO3natrijum bikarbonat

Na2SO4natrijum sulfat

Ph fenil

PPh3trifenilfosfin

Pd(dppf)Cl2[1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) Pd(PPh3)4paladijum(0)tetrakis(trifenilfosfin)

Ph3P=O trifenilfosfin oksid

t-Bu ili Bu<t>terc-butil

TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

Zn(CN)2cink cijanid

IV. SINTEZA

[138] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti pripremljena na više načina poznatih stručnjaku u oblasti organske sinteze u pogledu postupaka, reakcionih šema i ovde datih primera. Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu biti sintetisana upotrebom postupaka opisanih ispod, zajedno sa postupcima za sintezu poznatim u struci organske hemije sinteze, ili sa varijacijama navedenog kao što je uvaženo od strane stručnjaka u ovoj oblasti. Poželjni postupci obuhvataju, ali nisu ograničeni na, one opisane ispod. Reakcije se vrše u rastvaraču ili smeši rastvarača koja odgovara reagensima i materijalima koji se koriste i koji su pogodni za transformacije koje su izvršene. Biće prihvaćeno od strane stručnjaka u oblasti organske sinteze da bi funkcionalnost prisutna u molekulu trebalo da bude dosledna sa predloženim transformacijama. Ovo će nekada zahtevati procenu za modifikovanje redosleda koraka sinteze ili odabir naročite šeme procesa u odnosu na drugu kako bi se dobilo željeno jedinjenje obelodanjivanja

[139] Početni materijali uopšteno su dostupni iz komercijalnih izvora kao što su Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wis.) ili se lako pripremaju upotrebom postupaka dobro poznatih stručnima u ovoj oblasti (npr. pripremaju se sa postupcima uopšteno opisanim u Louis F. Fieser i Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 izd.), Larock, R.C., Comprehensive Organic Transformations, 2. izd., Wiley-VCH Weinheim, Germany (1999), ili Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, uključujući dodatke (takođe dostupno preko Beilstein baza podataka na mreži)).

[140] Za prikazne svrhe, reakcione šeme prikazane ispod pružaju potencijalne načine sintetisanja jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju kao i ključnih međujedinjenja. Za detaljniji opis pojedinačnih reakcionih koraka videti deo sa Primerima ispod. Stručni u ovoj oblasti će uvažiti da se drugi načini sinteze mogu upotrebiti za sintetisanje inventivnih jedinjenja. Iako su specifični početni materijali i reagensi prikazani na šemama kao što je razmatrano u nastavku, drugi početni materijali i reagensi mogu biti lako zamenjeni kako bi se dobili različiti derivati i/ili reakcioni uslovi. Dodatno, mnoga jedinjenja pripremljena postupcima opisanim ispod mogu biti dalje modifikovana u svetlu ovog obelodanjivanja upotrebom konvencionalne hemije dobro poznate stručnima u ovoj oblasti.

[141] Kod pripremanja jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju, zaštita udaljene funkcionalnosti međujedinjenja može biti neophodna. Potreba za takvom zaštitom će varirati u zavisnosti od prirode udaljene funkcionalnosti i uslova postupaka pripremanja. Potreba za takvom zaštitom lako se može odrediti od strane stručnjaka u ovoj oblasti. Za opšti opis zaštitnih grupa i njihove upotrebe, videti Greene, T.W. i dr., Protecting Groups in Organic Synthesis, 4. izd., Wiley (2007). Zaštitne grupe uključene u pravljenje jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju, kao što su tritil zaštitna grupa, mogu biti prikazane kao jedan regioizomer ali mogu takođe postojati kao smeša regioizomera.

[142] Šema 1 (ispod) opisuje potencijalne načine za proizvodnju jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju koji obuhvataju jedinjenja Formule (IA). Jedinjenja Formule (IA) mogu biti napravljena da budu suštinski optički čista ili upotrebom suštinski optički čistog početnog materijala ili separacionom hromatografijom, rekristalizacijom ili drugim tehnikama separacije koje su dobro poznate u struci. Za detaljniji opis, videti deo sa Primerima ispod.

Šema 1

[143] Pod Šemom 1, 5-hloro- ili 5-bromo-zamenjeni 4-hloro-2-(metiltio)pirimidin 1 je tretiran sa hidrazinom kako bi se formirao 5-hloro- ili 5-bromo-zamenjeni 4-hidrazinil-2-(metiltio)pirimidin 2, koji je transformisan u ciklizovani proizvod 3 nakon tretiranja sa trimetil ortoformatom ili trietil ortoformatom. Posle toga, 3 je tretiran sa odgovarajućim aminom kako bi se stvorio 4, što je praćeno reakcijom unakrsnog spajanja sa odgovarajućim R<3>reagensom (npr. različite borne kiseline ili ekvivalenti sa odgovarajućom R<3>grupom) kako bi se dobio proizvod 5.

[144] Alternativno, u nekim slučajevima, jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu biti pripremljena u skladu sa reakcionom sekvencom u Šemi 2. Jedinjenje 4 je prvo zaštićeno kao 4' i zatim je sledila reakcija za spajanje kako bi se dodala R<3>grupa kako bi se dobilo jedinjenje 5'. Krajnje jedinjenje 5 dobijeno je nakon odgovarajuće deprotekcije jedinjenja 5'. Za opšti opis zaštitnih grupa i njihove upotrebe, videti Greene, T.W. i dr., Protecting Groups in Organic Synthesis, 4. izd., Wiley (2007).

Šema 2

OPŠTI POSTUPCI

[145] Sledeći postupci su korišćeni u datim Primerima, osim kada je naznačeno drugačije.

[146] Prečišćavanje međujedinjenja i krajnji proizvodi su izvršeni ili sa hromatografijom sa normalnom ili reverznom fazom. Hromatografija sa normalnom fazom izvršena je upotrebom prethodno napunjenih SiO2kertridža eluiranih ili sa gradijentima heksana i etil acetata ili DCM i MeOH ukoliko nije drugačije navedeno. Za visoko polarne amine, gradijenti DCM i 1M NH3u MeOH su korišćeni. Preparativna HPLC sa reverznom fazom izvršena je upotrebom C18 kolona sa UV 214 nm i 254 nm ili prep LC-MS detekcijom eluiranjem sa gradijentima Rastvarača A (voda sa 0,1% TFA) i Rastvarača B (acetonitril sa 0,1% TFA) ili sa gradijentima Rastvarača A (voda sa 0,05% TFA) i Rastvarača B (acetonitril sa 0,05% TFA) ili sa gradijentima Rastvarača A (voda sa 0,05% amonijakom) i Rastvarača B (acetonitril sa 0,05% amonijakom).

LC/MS Postupci iskorišćeni u karakterizaciji Primera

[147] Analitička HPLC/MS sa reverznom fazom je izvršena na Agilent LC1200 sistemima spojenim sa 6110 (Postupci A-D), ili 6120 (Postupak E i F), ili 6130 (Postupak G) masenim spektrometrom.

Postupak A: Linearni gradijent od 5% do 95% B u trajanju od 1,2 min, sa 1 min zadržavanjem pri 95% B;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm

Kolona: SunFire® C18 4,6 x 50 mm 3,5 µm

Protok: 2 mL/min

Rastvarač A: 0,1% trifluorosirćetna kiselina, 99,9% voda

Rastvarač B: 0,1% trifluorosirćetna kiselina, 99,9% acetonitril.

Postupak B: Linearni gradijent od 5% do 95% B u trajanju od 1,5 min, sa 1 min zadržavanjem pri 95% B;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm

Kolona: XBridge ® C184,6 x 50 mm 3,5 µm

Protok: 2 mL/min

Rastvarač A: voda sa 10mM Amonijum vodonik karbonatom

Rastvarač B: acetonitril.

Postupak C: Linearni gradijent od 5% do 95% B u trajanju od 1,2 min, sa 1,3 min zadržavanjem pri 95% B, 95% do 5% B u trajanju od 0,01 min;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm

Kolona: SunFire® C18 4,6 x 50 mm 3,5 µm

Protok: 2 mL/min

Rastvarač A: 0,1% trifluorosirćetna kiselina, 99,9% voda

Rastvarač B: 0,1% trifluorosirćetna kiselina, 99,9% acetonitril.

Postupak D: Linearni gradijent od 5% do 95% B u trajanju od 1,4 min, sa 1,6 min zadržavanjem pri 95% B, 95% do 5% B u trajanju od 0,01 min;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm

Kolona: XBridge ® C184,6 x 50 mm 3,5 µm

Protok: 1,8 mL/min

Rastvarač A: voda sa 10mM Amonijum vodonik karbonatom

Rastvarač B: acetonitril.

Postupak E: Linearni gradijent od 5% do 95% B u trajanju od 1,5 min, sa 1 min zadržavanjem pri 95% B;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm

Kolona: XBridge ® C184,6 x 50 mm 3,5 µm

Protok: 2 mL/min

Rastvarač A: voda sa 10mM Amonijum vodonik karbonatom

Rastvarač B: acetonitril.

Postupak F: Linearni gradijent od 5% do 95% B u trajanju od 1,5 min, sa 1 min zadržavanjem pri 95% B;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm i 300 nm

Kolona: XBridge ® C184,6 x 30 mm 2,5 µm

Protok: 1,8 mL/min

Rastvarač A: voda sa 0,1% amonijakom

Rastvarač B: acetonitril.

Postupak G: Linearni gradijent od 10% do 95% B u trajanju od 2 min, sa 1 min zadržavanjem pri 95% B;

UV prikazivanje pri 214 nm i 254 nm i 300 nm

Kolona: Sunfire ® C184,6 x 30 mm 2,5 µm

Protok: 1,8 mL/min

Rastvarač A: voda

Rastvarač B: MeOH sa 0,1% mravljom kiselinom.

NMR iskorišćen u karakterizaciji Primera

[148]<1>H NMR spektri su dobijeni sa spektrometrima Bruker Furijeove transformacije radom pri frekvencijama kao što sledi:<1>H NMR: 400 MHz (Bruker).<13>C NMR: 100 MHz (Bruker). Podaci spektra su zabeleženi u formatu: hemijsko pomeranje (multiplicitet, broj vodonika). Hemijska pomeranja su naznačena u ppm bliže tetrametilsilan internog standarda (δ jedinice, tetrametil silan = 0 ppm) i/ili referencirana do maksimuma rastvarača, gde se<1>H NMR spektar javlja pri 2,49 ppm za CD2HSOCD3, 3,30 ppm za CD2HOD, 1,94 za CD3CN, i 7,24 ppm za CDCl3, i gde se<13>C NMR spektar javlja pri 39.7 ppm za CD3SOCD3, 49.0 ppm za CD3OD, i 77.0 ppm za CDCl3. Svi<13>C NMR spektri bili su sa prekinutim spojem protona.

V. PRIMERI

[149] Sledeći Primeri su bili pripremljeni, izolovani i naznačeni koristeći postupke obelodanjene ovde. Sledeći primeri pokazuju parcijalni okvir obelodanjivanja i nisu namenjeni da ograniče okvir obelodanjivanja.

[150] Osim ako nije drugačije naznačeno, polazni materijali su obično dostupni iz komercijalnih izvora koji ne isključuju, kao što su TCI Fine Chemicals (Japan), Shanghai Chemhere Co., Ltd. (Shanghai, China), Aurora Fine Chemicals LLC (San Diego, CA), FCH Group (Ukrajina), Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, Wis.), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, N.H.), Acros Organics (Fairlawn, N.J.), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, England), Tyger Scientific ( Princeton, NJ), AstraZeneca Pharmaceuticals (London, England), Chembridge Corporation (USA), Matrix Scientific (USA), Conier Chem & Pharm Co., Ltd (China), Enamine Ltd (Ukraine), Combi-Blocks, Inc. (San Diego, USA), Oakwood Products, Inc. (USA), Apollo Scientific Ltd. (UK), Allichem LLC. (USA) i Ukrorgsyntez Ltd (Latvia). PharmaBlock R&D Co. Ltd (Nanjing, China), Accela ChemBio Co. Ltd (Shanghai, China), Alputon Inc. (Shanghai, China), J&K Scientific Ltd. (Beijing, China).

MEĐUJEDINJENJA

Među jedinjenje 3: 8-bromo-5-(metiltio)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin

[151] 5-Bromo-4-hidrazinil-2-(metiltio)pirimidin (2): Rastvoru 5-bromo-4-hloro-2-(metiltio)pirimidin (1, 49,0 g, 0,205 mol) u etanolu (1000 mL) dodat je hidrazin (21,5 g, 0,430 mol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Dobijena suspenzija je filtrirana, isprana heksanom i osušena u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (44,1 g, 92%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.42 (s, 3H), 8.08 (s, 1H). LC-MS:

[M+H]<+>= 234.9; 236.9.

[152] Međujedinjenje 3: 5-bromo-4-hidrazinil-2-(metiltio)pirimidin (2) (40,0 g, 0,17 mol) je rastvoren u 200 mL trietoksimetana. Smeša je zagrevana pod refluksom i mešana 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (EA: PE=1:15∼1:1) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (38,3 g, 92%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ ppm 2.82 (s, 3H), 8.03 (s, 1H), 8.87 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 245.0; 247.0.

Međujedinjenje A1: 8-bromo-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[153] 2-Bromo-4-(2,2-diethoksietoksi)-1-fluorobenzen (A1.1): U rastvor 3-bromo-4-fluorofenola (500 g, 2,62 mol) i 2-bromo-1,1-dietoksietana (670 g, 3,4 mol) u 2,0 L DMF dodato je K2CO3(1085 g, 7,86 mol) u jednom delu. Suspenzija je zagrevana na 110 °C i mešana preko noći pod N2. Nakon hlađenja na sobnoj temperaturi, reakcija je razblažena sa 10,0 L H2O i izvađena sa EtOAc (2,0 L × 3). Kombinovana organska faza je dva puta isprana sa slanim rastvorom, osušena preko bezvodnog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen na silika gelu (EtOAc / heksan = 0:100 do 5:100) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (810 g, 80%) kao žuto ulje.<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ ppm 1.27 (t, 6 H), 3.65 (q, 2 H), 3.78 (q, 2 H), 3.97 (d, 2 H), 4.82 (t, 1 H), 3.97 (d, 2 H), 6.84 (dd, 1 H), 7.04 (dd, 1 H), 7.13 (d, 1 H).

[154] 4-Bromo-5-fluorobenzofuran (A1.2a zajedno sa regioizomerima A1.2b): U rastvor PPA (1324 g, 3,93 mol) u toluenu (2,0 L) se dodaje A1.1 (810 g, 2,62 mol) tokom 30 minuta na 95 °C. Reakciona smeša je mešana na 95 °C tokom 2 h. Posle hlađenja do sobne temperature, polako je dodato 4,0 L ledene vode. Smeša je izvađena sa PE (2,0 L x 2), kombinovana organska faza je isprana sa slanim rastvorom (2,0 L × 2), osušena je preko bezvodnog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen na silika gelu (EtOAc / PE = 0:100 do 5:100) da bi se dobila smeša A1.2a i A1.2b (A1-2a: A1-2b = 1:0,7, 310 g, 55% prinos) kao žuto ulje.

[155] 5-Fluorobenzofuran-4-karbonitril (A1.3): Smeši A1.2a i A1.2b (310 g, 1,44 mol) i Zn(CN)2(253 g, 2,16 mol) u 1,0 L DMF je dodat Pd(PPh3)4(162 g, 0,14 mol) pod N2.

Reakciona smeša je zagrevana na 100 °C i mešana 18 sati. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa 5,0 L vode i izvađena sa EtOAc (1,0 L × 2). Kombinovana organska faza je isprana sa slanim rastvorom (1 L), sušena preko Na2SO4(bezvodna), filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću fleš kolone (mobilna faza: EtOAc/PE = 1:70 u 30 minuta, Ret. Vreme=11min, protok:120 mL/min) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (92 g, 40%) kao bela čvrsta supstanca..<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ ppm 7.07 (d, 1H), 7.30 (dd, 1H), 7.89 (dd, 1H), 8.10 (dd, 1H).

[156] terc-Butil ((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)karbamat(A1.4): Rastvoru A1.3 (44,5 g, 276,4 mmol) i Boc2O (90,0 g, 414,6 mmol) u 1.0 L MeOH je dodato Pd/C (5 g, 10% wt). Reakciona smeša je degasirana sa H2i mešana pod H2preko noći. Smeša je filtrirana kroz celit, isprana sa MeOH (300 mL × 2), filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rekristalisan iz PE da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (61,0 g, 93%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.38 (s, 9H), 3.21 (t, 2H), 4.12 (d, 2H), 4.53 (t, 2H), 6.63 (dd, 1H), 6.86 (dd, 1H), 7.25 (br s, 1H). LC-MS: [M-<t>Bu H]<+>= 212.1.

[157] (5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamin (A1.5): Rastvor A1.4 (18,3 g, 68,5 mmol) u 50 mL HCl/Dioksan (4 mol/L) je mešan na sobnoj temperaturi 4 sata. Smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je razblažen sa smešom rastvarača (MeOH: MeCN = 1:10, 500 mL), zatim K2CO3(18,0 g, 342,5 mmol) je dodat. Smeša je zagrevana na 60 °C i mešana 3 sata, ohlađena do sobne temperature, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gelu (MeOH: EtOAc = 0:100 to 1:4) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9,2 g, 80%) kao žuto ulje.<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ ppm 3.27 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 4.56 (t, 2H), 6.59 (dd, 1H), 6.81 (dd, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 168.1.

[158] Međujedinjenje A1: Smeša A1.5 (1,41 g, 8,2 mmol) i 8-bromo-5-(metiltio)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin (3) (1,0 g, 4,1 mmol) se zagreva na 40 °C i meša 16 sati. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa EtOAc (35 mL). Talog je filtriran i ispran sa EtOAc (3 mL × 3), osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,0 g, 67%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm 3.27 (t, 2H), 4.53 (t, 2H), 4.66 (d, 2H), 6.71 (dd, 1H), 6.95 (t, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.75 (t, 1H), 9.48 (s, 1H). LC-MS:

[M+H]<+>= 363.7; 365.7.

Međujedinjenje A2: 8-bromo-N-((2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

(2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamin A2.3:

[159] (E)-Benzofuran-4-karbaldehid oksim (A2.1): Smeša benzofuran-4-karbaldehida (5 g, 34,2 mmol), NH2OH.HCl (4,72 g, 68,4 mmol) i NaOH (5,47 g, 136,8 mmol) u CH3OH (75 mL), i vodi (75 mL) je zagrevana do 25 °C i mešana 3 sata. Smeša je koncentrovana, ostatak je razblažen sa EA (150 ml), organski sloj je ispran sukcesivno sa 1N HCl (100 mL × 2), zas. NaHCO3(100 mL × 2) i slanim rastvorom (100mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 g, 90%) kao bela čvrsta supstanca.. LC-MS: [M+H]<+>= 162.0.

[160] Benzofuran-4-ilmetanamin (A2.2): Smeša A2.1 (5 g, 31 mmol), NH4.OH (43 mL) i Raney Ni (2,66 g, 31mmol) u CH3OH (585 mL) je mešana na 20 °C 16 sati pod H2atmosferom. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,2 g, 92%) kao ulje. LC-MS: [M+H]<+>= 148.1.

[161] (2,3-Dihidrobenzofuran-4-il)metanamin (A2.3): Smeša A2.2 (2,2 g, 15 mmol), Pd /C (2 g, wt. %:10%) i CH3OH(40 mL) je zagrevana do 48 °C i mešana 16 sati pod N2atmosferom. Smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2 g, 90%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.20 (t, 2H), 3.84 (s, 2H), 4.60 (t, 2H), 6.72 (d, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.13 (t, 1H).

[162] Međujedinjenje A2: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za A1 zamenjivanjem (5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamina (A1.5) sa A2.3.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 3.19 (t, 2H), 4.50 (t, 2H), 4.64 (s, 2H), 6.68 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 7.05 (t, 1H), 7.81 (s, 1H), 9.48 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 346.0.

Međujedinjenje A3: 8-bromo-N-((2-metil-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[163] Metil 2-(prop-2-in-1-iloksi)benzoat (A3.1): U rastvor metil 2-hidroksibenzoata (3,0 g, 19,72 mmol) u DMF (20 mL) dodaje se 3-bromoprop-l-in (6 mL, 19,72 mmol) i K2CO3(8,18 g, 59,2 mmol). Smeša je ostavljena na 20 °C preko noći, razblažena sa DCM i isprana sa vodom (80 mL × 3). Organski sloj je osušen sa Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom, trituiran sa EA / heksan = 10% da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3,0 g, 90%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.53 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 4.10 (s, 2H), 7.06 (t, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.48 (t, 1H), 7.82 (d, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 190.9.

[164] Metil 2-metilbenzofuran-7-karboksilat (A3.2): Smeša A3.1 (1,0 g, 5,26 mmol) i cezijum fluorid (1,038 g, 6,84 mmol) u N,N-dietilanilinu (5 mL, 5,26 mmol) iritiran mikrotalasnom 200 °C na 30 minuta. Nakon razblaživanja sa etrom, nerastvorljivi materijali su uklonjeni dekantacijom. Sirovi proizvodi su razdvojeni na hromatografiji na koloni korišćenjem mešanog rastvarača heksana i etil acetata (10:1, v / v) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, 50%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.55 (s, 3H), 4.01 (s, 3H), 6.44 (s, 1H), 7.22-7.27 (m, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.86 (d, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 191.0.

[165] (2-Metilbenzofuran-7-il)metanol (A3.3): Rastvor A3.2 (1,0 g, 5,26 mmol) u THF (3 mL) je dodat LiAlH4(10,52 mL, 10,52 mmol). Smeša je mešana tokom 1 sata na 0 °C i zagrevana do sobne temperature tokom 2 sata, ugašena sa 1M rastvorom HCI i filtrirana, koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao sirovi proizvod, koji će se koristiti u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[166] 4-(Azidometil)-2-metilbenzofuran (A3.4): Mešanom rastvoru A3.3 (350 mg, 2,158 mmol) u toluenu (10 mL) je dodat DPPA (683 mg, 2,482 mmol). Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i u vidu kapi je dodat DBU (0,390 mL, 2,59 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, i mešana je pod N2preko noći. Smeša je prilagođena do pH=5∼6 pomoću 1N HCl, zatim izvađena sa EtOAc. Vodena faza je neutralizovana pomoću zas. NaHCO3, zatim izvađena sa EtOAc. Kombinovana organska faza se sukcesivno ispere sa NaHCO3i rastvorom soli, osuši i koncentruje, ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (5% EtOAc u heksanu kao eluent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 50%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.49 (s, 3H), 4.64 (s, 2H), 7.15-7.17 (m, 2H), 7.45-7.48 (m, 1H).

[167] (2-metilbenzofuran-4-il)metanamin (A3.5): Rastvoru A3.4 (50 mg, 0,267 mmol) u THF (5 mL) i Vodi (0,2 mL) dodat je PPh3(140 mg, 0,534 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata, koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 70%) kao bezbojno ulje. (Ph3P=O i PPh3je izašao u 50% PE/EA i amin je izašao u 20% DCM/MeOH). LC-MS: [M+H]<+>= 162.1.

[168] (2-Metil-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamin (A3.6): Rastvoru A3.5 (100 mg, 0,372 mmol) u Metanolu (10 mL) dodata je hlorovodonična kiselina (0,1mL, 3,29mmol) i Pd/C (10%) (39,6 mg). Reakcija je mešana na 50 °C tokom 12 sati pod atmosferom vodonika, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (DCM: MeOH = 10:1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (60 mg, 50%).<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 1.41-1.47 (m, 3H), 2.76-2.91 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 4.93-5.00 (m, 2H), 6.74-6.79 (m, 1H), 6.88(d, 2H), 7.16-7.18 (m, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 164.1.

[169] Međujedinjenje A3: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje A1 zamenom (5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamina (A1.5) sa A3.6.<1>H NMR (Metanol-d4) δ: 1.40 - 1.47 (m, 3H), 2.75 - 2.90 (m, 1H), 3.35 - 3.44 (m, 1H), 4.71 (d, 2H), 4.93 - 4.98 (m, 1H), 6.63 - 6.79 (m,1H), 6.87 - 6.90 (m, 1H), 7.04 - 7.16 (m, 1H), 7.86 (d, 1H), 9.30 (d, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 359.7.

Međujedinjenje B (borna kiselina ili estar koji nisu komercijalno nedostupni za sintezu jedinjenja u tabeli 2)

2,4-Dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin B1)

[170] 5-Bromo-2,6-dimetilpirimidin-4-ol (B1.1): Brom (153,4 g, 0,96 mol, 1,2 ekv) je dodat u vidu kapi u rastvor 2,6-dimetilpirimidin-4-ola (100 g, 0,8 mol, 1,0 ekv) u 1,0 L hloroforma. Zatim je smeša mešana na 50 °C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, višak rastvarača je uparen i dodato je 500 mL etil acetata, koji je ponovo uklonjen pod sniženim pritiskom. Ovaj proces je ponovljen tri puta. Žuta čvrsta supstanca je mešana u 100 mL etil acetata 30 minuta na sobnoj temperaturi. Posle filtracije, ostatak je ispran etil acetatom (100 mL × 2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (135 g, 82%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS:

[M+H]<+>= 205.2.

[171] 5-Bromo-4-hloro-2,6-dimetilpirimidin (B1.2): Smeša B1.1 (134 g, 0,66 mol) u 500 mL POCl3je mešana na 110 °C tokom 18 sati. Višak POCl3je uklonjen pod vakuumom, ostatak je sipan u 1000 g smrvljenog leda. Zatim je čvrsta supstanca NaHCO3dodata pažljivo kako bi se prilagodila pH do 8-9. Vodeni sloj je izvađen etil acetatom (1,5 L × 3), a kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (1,0 L × 2), osušeni preko Na2SO4,koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (71 g, 48%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 223.0.

[172] 5-Bromo-4-hidrazinil-2,6-dimetilpirimidin (B1.3): U smešu hidrazin hidrata (NH2NH2•H2O, 32 g, 0.64 mol, 98%) u 350 mL etanola dodat je rastvor B1.2 (70 g, 0,32 mol) u 350 mL metanola u vidu kapi na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, ostatak je razblažen sa 500 mL vode, izvađen sa CHCl3(500 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 500 mL slanog rastvora, sušeni preko Na2SO4i koncentrovani da se dobije jedinjenje iz naslova (63 g, 91%) kao žuta čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 219.0.

[173] 5-Bromo-2,4-dimetilpirimidin (B1.4): Suspenziji MnO2(96 g, 1,1 mol) u 1.0 L CHCl3dodat je rastvor B1.3 (47 g, 0,22 mol) u 1.0 L CHCl3u vidu kapi na 0 °C. Smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen na koloni silika gela 100-200 mreža (PE: EA = 100:0 do 50:50) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 g, 73%) kao žuta čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 189.1.

[174] Međujedinjenje B1: Smeša B1.4 (12 g, 64 mmol), bis(pinakolato)diboron (22,8 g, 89,6 mmol, 1,4 ekv), KOAc (18,8 g, 192 mmol, 3,0 ekv), i Pd(dppf)Cl2(2,34 g, 3,2 mmol) u 200 mL anhidrovanog dioksana se zagreva na 90 °C i meša 4 sata pod N2. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, ostatak je razblažen sa 300 mL mešanog rastvarača (PE:EA = 4:1), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (PE:EA = 2:1 do 1:1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (10 g, 66%) kao žuto ulje. LC-MS: [M+H]<+>= 235.1.

Međujedinjenje B2: (1-Izopropil-3-metil-1H-pirazol-4-il)borna kiselina

[175] 4-Bromo-1-izopropil-3-metil-1H-pirazol (B2.1): Smeša 4-bromo-3-metil-1H-pirazol (2 g, 12,5 mmol), 2-jodopropan (6,37 g, 37,5 mmol), Cs2CO3(6,25 g, 50 mmol) i acetonitril (30 mL) je mešana na 90 ° C tokom 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana sa MeOH (15 ml) i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (UV214, PE:DMC = 100:1 do 50:50) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (700 mg, 56%) kao bistro ulje. LC-MS:

[M+H]<+>= 203.1.

[176] Međujedinjenje B2: Rastvoru B2.1 (202 mg, 1,0 mmol) u THF (5 mL) je dodat n-BuLi (0,5 mL, 1,2 mmol, 2,4 M in THF) pod N2na -78° C. Reakcija je mešana na -78 ° C u trajanju od 30 minuta, a zatim je u vidu kapi uz mešanje na -78 °C dodat triizopropil borat (564 mg, 3,0 mmol) u THF (2 mL). Smeša je mešana na -78 °C. tokom 2 sata. Smeša je ugašena vodom (3 mL), vodeni sloj je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, UV214, NH4HCO3\voda\MeOH=0.5\100\1) da se dobije jedinjenje iz naslova (100 mg, 60%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 169.1.

Međujedinjenje B3: 2-metoksi-4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[177] 5-Bromo-2-metoksi-4-metilpiridin (B3.1): Natrijum (4,8 g, 0,2 mol) je dodat u mešani rastvor od 80 mL CH3OH deo po deo. Posle dodavanja, 5-bromo-2-fluoro-4-metilpiridin (7,6 g, 40 mmol) se naknadno uredno dodaje. Zatim je bistri rastvor mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je ugašena vodom (400 mL), izvađena sa dihlorometanom (300 mL × 3). Kombinovana organska faza je isprana sa slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6,95 g, 86%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.31 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 6.61 (s, 1H), 8.15 (s, 1H).

[178] Međujedinjenje B3: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B3.1. LC-MS: [M+H]<+>= 250.1.

Međujedinjenje B4: 6-ciklopropil-2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[179] 3-Bromo-6-ciklopropil-2-metilpiridin (B4.1): Smeša 3,6-dibromo-2-metilpiridina (250 mg, 1 mmol), ciklopropilborne kiseline (86 mg, 1 mmol), Cs2CO3(975 mg, 3 mmol), Pd(PPh3)4(160 mg, 0,2 mmol) i dioksan (5 mL) je mešana na 120 °C pod N2sa mikrotalasnom u trajanju od 30 minuta. Smeša je filtrirana sa MeOH (15 mL), filtrat je prečišćen Prep-TLC (silika gel, UV254, PE) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 47%) kao bistro ulje.<1>H NMR(400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.95 - 0.98 (m, 4H), 1.36 -1.99 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 6.76 (d, 1H), 7.59 (d, 1H).

[180] Međujedinjenje B4: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B4.1. LC-MS: [M+H]<+>= 260.3.

Međujedinjenje B5: 2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[181] 3-Bromopikolinaldehid (B5.1): Smeša 3-bromo-2-metilpiridina (5 g, 29 mmol), SeO2(17,5 mg, 116 mmol) u dioksanu (70 mL) je zagrevana do 120 °C i mešana 18 h. Smeša je koncentrovana i prečišćena silika gelom (PE:EA = 4:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3 g, 55%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 188.1.

[182] (3-Bromopiridin-2-il)metanol (B5.2): Rastvoru B5.1 (1 g, 5,4 mmol) u MeOH (20 mL) i THF (10 mL) koji je ohlađen do 0 °C, NaBH4(0,82 g, 21,6 mmol) je dodat u delovima. Smeša je mešana 4 sata na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana, razblažena vodom (40 mL), izvađena sa DCM (40 mL × 3), organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtrira se i koncentruje, dajući jedinjenje iz naslova (1 g, 99%) kao belu čvrstu supstancu. LC-MS: [M+H]<+>= 190.0.

[183] 3-Bromo-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)piridin (B5.3): Smeša B5.2 (1 g, 5,4 mmol), DMAP (0,33 g, 1.08 mmol), TBSCl (0,97 g, 6,48 mmol) i imidazol (0,48 g, 7 mmol) u DCM (30 mL) je mešana 18 sati na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa DCM (50 mL), isprana vodom (30 mL) i slanim rastvorom (30 mL), osušena preko Na2SO4, filtrira se i koncentruje, ostatak se prečisti na silika gelu (PE:EE = 100:0 do 50:50), dajući jedinjenje iz naslova (1,1 g, 68%) kao bezbojno ulje. LC-MS: [M+H]<+>= 304.0.

[184] Međujedinjenje B5: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B5.3. LC-MS: [M+H]<+>= 350.1.

Međujedinjenje B6: 1,3,5-Trimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[185] Smeša 3,5-dimetil-4- 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) -1H-pirazol (10 g, 45 mmol), jodometan (9,6 g, 67,5 mmol), K2CO3(15,5 g, 112,5 mmol) u acetonu (50 mL) je mešano na 60 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je filtrirana, isprana sa MeOH (35 ml), filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 g, 75%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 237.2.

Međujedinjenje B7: 2-(difluorometil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[186] 3-Bromo-2-(difluorometil)piridin (B7.1): Rastvoru 3-bromopikolinaldehida (B5.1) (3,0 g, 16,1 mmol) u DCM (20 mL) dodat je DAST (5,2 g, 32,2 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C u toku 2 sata N2, a zatim je dodat rastvor NaHCO3u ledenoj kupki.

Smeša je izvađena sa DCM (60 mL), organski sloj je osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,5 g, 75%) kao siva čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[187] Međujedinjenje B7: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B7.1. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Međujedinjenje B8: 2-ciklopropil-4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin

[188] 2-Ciklopropil-6-metilpirimidin-4-ol (B8.1): Smeša ciklopropan-karboksimidamid hidrohlorida (2,0 g, 16,7 mmol), metil 3-oksobutanoata (1,9 g, 16,7 mmol) i CH3ONa (1,8 g, 33,4 mmol) u MeOH (200 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Zatim je smeša razblažena sa zas. Na2SO3(50 mL), zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom Ostatak je rastvoren u 50 mL vode, podešen je pH na 4. Posle hlađenja do 5 °C, čvrsta supstanca je sakupljena i osušena u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,0 g, 98%) kao žuta čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 151.2.

[189] 5-Bromo-2-ciklopropil-6-metilpirimidin-4-ol (B8.2): Smeša B8.1 (2,0 g, 13,3 mmol) i KOH (744 mg, 13,3 mmol) u H2O (15 mL) dodat je Br2(0,7 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,5 g, 57%) kao bela čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 231.0.

[190] 5-Bromo-4-hloro-2-ciklopropil-6-metilpirimidin (B8.3): Smeša B8.2 (1,5 g, 6,55 mmol) i DMF (1,26 mL, 16,38 mmol) u toluenu (20 mL) dodat je kap po kap rastvor POCl3(0.72 mL) u Toluenu (5 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata, a zatim je sipana u Na2CO3(1M, 30 mL), izvađena sa EA (20 mL× 3). Kombinovana organska faza je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,0 g, 62%) kao žuto ulje. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 248.9.

[191] N'-(5-Bromo-2-ciklopropil-6-metilpirimidin-4-il)-4-metilbenzenesulfonohidrazid (B8.4): Smeša B8.3 (1,0 g, 4,06 mmol), 4-metilbenzensulfonohidrazid (2,6 g, 13,8 mmol) u CHCl3(50 mL) je mašana na 90 °C u trajanju od 16 h. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa DCM (5 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,60 g, 37,5%) kao bela čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 397.0.

[192] 5-Bromo-2-ciklopropil-4-metilpirimidin (B8.5): Smeša B8.4 (600 mg, 1,51 mmol) u Na2CO3(8 mL, 4,53 mmol) je mešana na 90 °C 1 sat. Smeša je razblažena sa EA (20 mL). Organska faza je odvojena i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 62%) kao smeđe ulje. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 213.0.

[193] Međujedinjenje B8: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B8.5. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 261.2.

Međujedinjenje B9: (3-(difluorometil)-1-metil-1H-pirazol-4-il)borna kiselina

[194] 4-Bromo-3-(difluorometil)-1-metil-1H-pirazol (B9.1): Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za B7.1 zamenom 3-bromopikolinaldehida (B5.1) sa 4-bromo-1-metil-1H-pirazol-3-karbaldehid.<1>H NMR(400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.91 (s, 3H), 6.66 (t, 1H), 7.43 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 213.1.

[195] Međujedinjenje B9: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B2 zamenom 4-bromo-1-izopropil-3-metil-1H-pirazol (B2.1) sa B9.1. LC-MS:

[M+H]<+>= 177.2.

Međujedinjenje B10: 2-izopropoksi-4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin

[196] 5-Bromo-2-izopropoksi-4-metilpirimidin (B10.1): U rastvor 5-brom-2-hloro-4-metilpirimidina (3,0 g, 14,5 mmol) u THF (30 mL) dodat je NaH (1,74 g, 44 mmol), pa je mešan na rt 0,5 h. Zatim je dodat propan-2-ol (2,6 g, 44 mmol), smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Smeša je koncentrovana, ostatak je razblažen sa vodom (20 mL), izvađen sa EA (20 × 3 mL). Organski sloj je osušen i koncentrovan, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel; EA:PE=1:4) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,8 g, 83%)) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 231.0; 232.9.

[197] Međujedinjenje B10: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B10.1. LC-MS: [M+H]<+>= 279.3.

Međujedinjenje B11: 2-(Difluorometoksi)-4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[198] 5-Bromo-2-(difluorometoksi)-4-metilpiridin (B11.1): U rastvor 5-bromo-4-metilpiridin-2-ol (8 g, 42,55 mmol) i 2,2-difluoro-2- (fluorosulfonil) sirćetne kiseline (9,1 g, 51,06 mmol) u 40 mL CH3CN je dodat Na2SO4(606 mg, 4,255 mmol) iz jednog dela. Suspenzija je mešana na rt preko noći, zatim koncentrovana pod vakuumom, ostatak je prečišćen na silika gelu (PE / EtOAc = 0-9%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, 37%) kao žuto ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.39 (s, 3H), 7.19 (s, 1H), 7.51-7.80 (m, 1H), 8.39 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 239.9.

[199] Međujedinjenje B11: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B11.1. LC-MS: [M+H]<+>= 286.2.

Međujedinjenje B12: 1-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)pirolidin-2-on

[200] 1-(5-Bromopiridin-3-il)pirolidin-2-on (B12.1): Smeša 3,5-dibromopiridina (500 mg, 2,1 mmol), pirolidin-2-ona (170 mg, 2,0 mmol), K2CO3(1,04 g, 7,56 mmol), CuI (4 mg, 0,021 mmol), N1,N1,N2,N2-tetrametilethan-1,2-diamina (3 mg, 0,021 mmol) i dioksana (10 mL) je mešana na 110 °C u trajanju od 12 sati.30 mL H2O dodaje se smeši i ekstrahuje etil acetatom (20 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), sušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, UV254, PE\EA = 100\1 do 2\1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (240 mg, 47%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 243.1.

[201] Međujedinjenje B12: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B12.1. LC-MS: [M+H]+ = 206.2.

Međujedinjenje B13: 3-(3-(metilsulfonil)propoksi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[202] 3-Bromo-5-(3-bromopropoksi)piridin (B13.1): Smeša 5-bromopiridin-3-ola (500 mg, 2,87 mmol), 1,3-dibromopropana (870 mg, 4,31 mmol), NaH (230 mg, 5,74 mmol) i DMF (10 mL) je mešana na 0 °C. C tokom 12 sati. U smešu je dodata voda (10 mL), izvađena sa EA (10 mL × 3), ekstrakti su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, PE / EA = 100/1 do 2/1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (300 mg, 36%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 296.0.

[203] 3-Bromo-5-(3-(metilsulfonil)propoksi)piridin (B13.2): Smeša B13.1 (300 mg, 1,02 mmol), NaOSOCH3(156 mg, 1.53 mmol), i DMSO (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U smešu je dodato 10 mL vode, izvađena je sa etil acetatom (10 mL × 3), organski slojevi su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, UV 254, PE\EA = 100\1 do 2\1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 40%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS:

[M+H]<+>= 294.0.

[204] Međujedinjenje B13: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za Međujedinjenje B1 zamenom B1.4 saB13.2. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 260.1.

Međujedinjenje B14: 3-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)oksazolidin-2-on

[205] 3-(5-Bromopiridin-2-il)oksazolidin-2-on (B14.1): Smeša 2,5-dibromopiridina (1,0 g, 4,21 mmol), pirolidin-2-ona (1,1 g, 12,7 mmol), K2CO3(1.16 g, 8.42 mmol), CuI (40 mg, 0,21 mmol), N1,N1,N2,N2-tetrametiletan-1,2-diamina (50 mg, 0,42 mmol) i dioksana (10 ml) je mešana na 110 °C 12 sati. U smešu je dodata voda (30 mL), izvađena je sa EA (20 mL × 3), ekstrakti su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, UV 254, PE\EA = 100\1 do 2\1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (380 mg, 37%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 244.9.

[206] Međujedinjenje B14: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B14.1. LC-MS: [M+H]<+>= 291.0.

Međujedinjenje B15: 3-(2-(metilsulfonil)etoksi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[207] 3-Bromo-5-(2-bromoetoksi)piridin (B15.1): Smeša 5-bromopiridin-3-ola (500 mg, 2,87 mmol), 1,2-dibromoetana (810 mg, 4,31 mmol), K2CO3(792 mg, 5,74 mmol) i DMF (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 sati. Smeša je razblažena sa 10 mL vode, izvađena sa EA (10 mL × 3), organski slojevi su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, PE/EA = 100/1 do 2/1) da se dobije jedinjenje iz naslova (200 mg, 20%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 279.9.

[208] 3-Bromo-5-(2-(metilsulfon)etoksi)piridin (B15.2): Smeša B15.1 (200 mg, 0,71 mmol), NaOSOCH3(126 mg, 1,07 mmol), i DMSO (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U smešu je dodata voda (10 mL), izvađena sa EA (10 mL × 3), ekstrakti su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, PE / EA = 100/1 do 2/1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (150 mg, 61%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 280.0.

[209] Međujedinjenje B15: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B15.2. LC-MS: [M+H]<+>= 328.2.

Međujedinjenje B16: 6-(2-oksopiperazin-1-il)piridin-3-ilborna kiselina

[210] terc-Butil 4-(5-bromopiridin-2-il)-3-oksopiperazin-1-karboksilat(B16.1): Smeša 2,5-dibromopiridina (1,0 g, 4,21 mmol), pirolidin-2-on (2,54 g, 12,7 mmol), K2CO3(1,16 g, 8,42 mmol), CuI (40 mg, 0,21 mmol), N1,N1,N2,N2-tetrametiletan-1,2-diamin (92 mg, 0,63 mmol) i dioksan (10 mL) je mešana na 110 °C 12 sati. U smešu je dodata voda (30 mL), ekstrahovana je sa EA (20 mL × 3), organski slojevi su isprani sa vodom (25 mL × 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, PE / EA = 100/1 do 2/1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (750 mg, 50%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 356.1.

[211] terc-Butil 3-okso-4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazin-1-karboksilat (B16.2): Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B16.1. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 404.0.

[212] Međujedinjenje B16: Smeša B16.2 (100 mg, 0,31 mmol) u HCl/dioksanu (0,6 mL) se meša na sobnoj temperaturi 2 sata. U smešu je dodata voda (30 mL), izvađena sa EA (20 mL × 3), ekstrakti su isprani sa vodom (25 mL× 3) i slanim rastvorom (20 mL × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovana i prečišćena pomoću Prep-HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 40%) kao siva čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 222.2.

Međujedinjenje B17: N-(2-hidroksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzenesulfonamid

[213] 4-Bromo-N-(2-hidroksietil)benzenesulfonamid (B17.1): U rastvor 4-bromobenzen-1-sulfonil hlorida (2,0 g, 7,9 mmol) u DCM (30 mL) je dodat 2-aminoetanol (4,8 g, 79 mmol) i DIPEA (2,0 g, 15,8 mmol) na 0 °C Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Talog je sakupljen filtracijom, ispran sa EtOH (10 mL × 2), osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,8 g, prinos 90%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 281.9.

[214] Međujedinjenje B17: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B17.1. LC-MS: [M+H]<+>= 328.0.

Međujedinjenje B18: 6-(2-metilpirolidin-1-il)piridin-3-ilborna kiselina

[215] 5-Bromo-2-(2-metilpirolidin-1-il)piridin (B18.1): U rastvor 5-bromo-2-fluoropiridina (5,71 mmol, 1 g) u H2O (3 mL) je dodat 2-metilpirolidin hidrohlorid (8,57 mmol, 0,73 g) i K2CO3(11,43 mmol, 1,58 g)i smeša je mešana na 115 °C tokom 3 sata. Smeša je koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (reverzna faza, C-18, 10 mmol NH4HCO3:CH3OH=0-80%, UV254&UV214) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (900mg, 65%) kao žuto ulje. LC-MS:

[M+H]<+>= 241.1.

[216] Međujedinjenje B18: Rastvoru B18.1 (0,622 mmol, 150 mg), bis(pinakolato)diboron (158 mg, 0,622 mmol) i KOAc (1,24 mmol, 121 mg) u dioksanu (6 mL) je dodato Pd(dppf)Cl2(0,062 mmol, 45,5 mg). Reakciona smeša je zagrevana na 90 °C 2 sata pod N2. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je filtrirana i filtrat je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 207.2.

Međujedinjenje B19: (4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)(pirolidin-1-il)metanon

[217] 5-Bromo-4-metilpikolinoil hlorid (B19.1): Smeša 5-brom-4-metilpikolinske kiseline (5,6 mmol, 1,2 g) i 10 ml tionil hlorida je mešana na 90 °C tokom 2 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 77%) kao žuta čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 236.1.

[218] (5-Bromo-4-metilpiridin-2-il)(pirolidin-1-il)metanon (B19.2): U rastvor pirolidina (3,21 mmol, 228 mg) u 10 mL DCM na 0 °C dodaje se DIPEA (6,42 mmol, 829 mg). Posle mešanja na 0 °C u trajanju od 10 minuta, u smešu se dodaje B19.1 (2,14 mmol, 500 mg) u delovima, zatim je smeša mešana a 0 °C tokom 20 minuta, ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana još 2 sata, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, PE:EA = 0-40%, UV254 i UV280 nm) da se dobije jedinjenje iz naslova (560 mg, 97%) kao žuta čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 269.1.

[219] Međujedinjenje B19: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B19.2. LC-MS: [M+H]<+>= 317.3.

Međujedinjenje B20:,4-trimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinamid

[220] 5-Bromo-N,N,4-trimetilpikolinamid (B20.1): U rastvor dimetilamin hidrohlorida (3,21 mmol, 262 mg) u 10 mL DCM na 0 °C dodaje se DIPEA (6,424 mmol, 829 mg). Smeša je mešana na 0 °C 10 minuta, B19.1 (2,141 mmol, 500 mg) je dodat u delovima. Smeša je mešana na 0 °C tokom 20 minuta, zatim zagrevana do sobne temperature tokom 2 h, koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, PE:EA = 0-50%, UV254 i UV280 nm) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (560 mg, 97%) kao žuta čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 243.1.

[221] Međujedinjenje B20: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B20.1. LC-MS: [M+H]<+>= 291.2.

Međujedinjenje B21: 2-(3,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)etanol

[222] 1-(2-((terc-Butildimetilsilil)oksi)etil)-3,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (B21.1): Rastvoru 3,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (300 mg, 1,35 mmol) u CH3CN (5 mL) je dodat Cs2CO3(800mg, 2,702 mmol) i (2-bromoetoksi)(terc-butil)dimetilsilan (50 mg, 1,892 mmol). Smeša je mešana na 90 °C preko noći koncentrovani i prečišćeni fleš hromatografijom (silika gel, PE:EA = 0-15%, UV254 i UV280) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg, 77%) kao žuto ulje. LC-MS: [M+H]<+>= 381.7.

[223] Međujedinjenje B21: Rastvoru B21.1 (300 mg, 0,79 mmol) u THF (6 mL) je dodat TBAF (412 mg, 1,58 mmol). Smeša je mešana na 30 °C tokom 3 sata, koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 48%) kao žuto ulje. LC-MS:

[M+H]+ = 267.

Međujedinjenje B22: 1-(2-metoksietil)-3,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[224] U rastvor 3,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0,68 mmol, 150 mg) u CH3CN(5mL) je dodat 1-bromo-2-metoksietan (0.95 mmol, 130,5 mg). Smeša je mešana na 90 °C tokom 6 sati, koncentrovana pod sniženim pritiskom, prečišćena fleš hromatografijom (silika gel, PE:EA = 0-20%, UV254 i UV280 nm) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 52%) kao žuta čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 281.5.

Međujedinjenje B23: 3-metil-2-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-iyl)piridin

[225] 5-Bromo-3-metil-2-(metiltio)piridin (B23.1): Smeša 5-bromo-2-fluoro-3-metilpiridina (1 g, 5,26 mmol), CH3SNa (479 mg, 6.84 mmol) u DMF (10 mL) je mešana 3,5 sati na 0 °C pod N2. Smeša je razblažena sa 50 mL vode, izvađena sa etil acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su sukcesivno isprani sa 50 mL vode i 50 mL slanog rastvora, sušeni preko Na2SO4, koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,1 g, 95%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 218.

[226] 5-Bromo-3-metil-2-(metilsulfonil)piridin (B23.2): Smeši B23.1 (1,1 g, 5 mmol) u DCM (11 mL) dodat je m-CPBA (2,58 g, 15 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, zatim je ugašena sa 2 mol/L vod. NaOH rastvora (50 mL), izvađena sa etil acetatom (50 mL × 2). Kombinovani organski slojevi su redom isprani sa 50 mL H2O i 50 mL slane vode, osušeni Na2SO4, koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,2 g, 96%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 249.9.

[227] Međujedinjenje B23: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B23.2. LC-MS: [M+H]<+>= 216.1 (ms<+>odgovarajuće borne kiseline)

Međujedinjenje B24: (5-metil-6-morfolinopiridin-3-il)borna kiselina

[228] 4-(5-bromo-3-metilpiridin-2-il)morfolin (B24.1): Smeša 5-bromo-2-fluoro-3-metilpiridina (2,5 g, 13,2 mmol), morfolina (3,4 g, 39,6 mmol), K2CO3(5,5 g, 39,6 mmol) u 40 mL DMSO se zagreva do 120 °C i meša 16 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature. Dodato je 200 mL vode, izvađena je sa etil acetatom (150 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 150 mL vode i 150 mL slanog rastvora, sušeni preko Na2SO4, koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,8 g, 53%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 257.0.

[229] Međujedinjenje B24: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B18 zamenom B18.1 sa B24.1. LC-MS: [M+H]<+>= 223.3.

Međujedinjenje B25: 2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)propan-2-ol

[230] 2-(5-Bromopiridin-2-il)propan-2-ol (B25.1): U smešu 1-(5-bromopiridin-2-il)etanona (400 mg, 2 mmol) u 8 mL THF je dodato 6 mL CH3MgBr (1 mol/L) na -15 °C pod N2atmosferom. Smeša je mešana 5 h na 25 °C, ugašena sa zas. NH4Cl (30 mL) i mešana 1 sat, izvađena sa etil acetatom (50 mL × 2). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 50 mL vode i 50 mL slanog rastvora, osušeni preko Na2SO4, koncentrovani. Ostatak je prečišćen na silika gelu (PE / EA = 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 mg, 42%) kao bezbojno ulje.

<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.54 (s, 6H), 7.31 (dd, 1H), 7.82 (dd, 1H), 8.58 (d, 1H).

[231] Međujedinjenje B25: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B25.1. LC-MS: [M+H]<+>= 264.2.

Međujedinjenje B26: 4-metil-2-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-iyl)piridin

[232] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B23 zamenom 5-bromo-2-fluoro-3-metilpiridina sa 5-bromo-2-fluoro-4-metilpiridinom. LC-MS:

[M+H]<+>= 298.1.

Međujedinjenje B27: 2-metil-6-(metilsulfonil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[233] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B23 zamenom 5-bromo-2-fluoro-3-metilpiridina sa 3-bromo-6-fluoro-2-metilpiridinom. LC-MS:

[M+H]<+>= 298.1.

Međujedinjenje B28: 4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazin-2-on

[234] 4-(5-Bromopiridin-2-il)piperazin-2-on (B28.1): Smeša 5-bromo-2-fluoropiridina (1 g, 5.68 mmol), piperazin-2-ona (1,7 g, 17 mmol), K2CO3(2,35 g, 17 mmol) u 20 mL DMSO se zagreva na 120 °C i meša 16 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, dodato je 80 mL vode, izvađena je sa etil acetatom (60 mL × 3), kombinovani organski sloj je ispran sa 100 mL vode, i 100 mL slanog rastvora, osušen preko Na2SO4, koncentrovano, ostatak je prečišćen na silika gelu (DCM / MeOH = 10:1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (250 mg, 17%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 255.9.

[235] Međujedinjenje B28: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B28.1. LC-MS: [M+H]<+>= 304.3.

Međujedinjenje B29: 4,4,5,5-Tetrametil-2-(2-metil-4-(metilsulfonil)fenil)-1,3,2-dioksaborolan

[236] Metil(m-tolil)sulfan (B29.1): U smešu 3-metilbenzentiola (2 g, 16 mmol) u 20 mL DMF dodat je NaH (0,96 g, 24 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana 30 minuta na 25 °C. Nakon hlađenja do 0 °C,CH3I (22,7 g, 160 mmol) je dodat u vidu kapi. Smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi, razblažena sa 100 mL vode, izvađena sa etil acetatom (60 mL × 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (50 mL × 1), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani. Ostatak je prečišćen silika gelom (eluiran sa PE / EA = 100:0) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (1,3 g, 59%) kao bezbojno ulje. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[237] (4-Bromo-3-metilfenil)(metil)sulfan (B29.2): Smeša B29.1 (1,3 g, 9,4 mmol) u 30 mL AcOH je ohlađena do 0 °C, Br2(1,5 g, 9,42 mmol) dodaje se u vidu kapi i smeša se meša 3 sata na 25 °C. Smeša je koncentrovana i prečišćena na silika gelu (eluirana sa PE) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,7 g, 85%) kao bezbojno ulje. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[238] 1-Bromo-2-metil-4-(metilsulfonil)benzen (B29.3): Smeši B29.2 (1,7 g, 7,83 mmol) u 20 mL DCM dodat je m-CPBA (4,04 g, 23,5 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana 16 sati na 25 °C, ugašena sa 40 mL vode, zatim izvađena sa DCM (50 mL × 2), kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani. Ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiran sa PE / EA = 7:3) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (1,3 g, 66%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.50 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 7.62 (dd, 2.3 Hz, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.80 (d, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 249.1.

[239] Međujedinjenje B29: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B29.3. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 314.0.

Međujedinjenje B30: (6-(3-(dimetilamino)-3-oksopropiil)piridin-3-il)borna kiselina

[240] (E)-Etil 3-(5-bromopiridin-2-il)akrilat (B30.1): Smeša 5-bromopikolinaldehida (0,93 g, 5 mmol), etil 2-bromoacetata (1,25 g, 7,5 mmol), NaHCO3(1,26 g, 15 mmol), PPh3(1,83 g, 7 mmol), vode (10 mL) u 5 mL etil acetata se meša 16 sati na 25 °C pod N2atmosferom . Smeša je razblažena vodom (30 mL), izvađena etil acetatom (40 mL × 2), kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (40 mL) i slanim rastvorom (40 mL), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani. Ostatak je prečišćen na silika gelu (PE / EA = 6:1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (1,1 g, 85%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 256.0.

[241] Etil 3-(5-bromopiridin-2-il)propanoat (B30.2): Smeša B30.1 (1 g, 3,9 mmol), CuCl (406 mg, 4,1 mmol) u 20 mL MeOH je ohlađeno do 0 °C, NaBH4(1,18 g, 31,2 mmol) dodaje se u delovima, smeša se meša 5 sati na 0 °C pod N2atmosferom. Smeša je filtrirana, koncentrovana do suvoće. Ostatak je prečišćen na silika gelu (PE / EA = 0 do 20%) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (600 mg, 60%) kao bezbojno ulje. LC-MS: [M+H]<+>= 260.0.

[242] 3-(5-Bromopiridin-2-il)propionska kiselina (B30.3): Smeša etila B30.2 (600 mg, 2,32 mmol), NaOH (928 mg, 23,2 mmol) u mešanom rastvoru THF (14 mL), vode (7 mL) i MeOH (7 mL) je mešana 2 h na 40 °C. Smeša je podešena na pH=2-3 pomoću 1N HCl, zatim koncentrovana. Ostatak je razblažen sa vodom (30 mL), izvađen sa DCM / MeOH (10/1) (40 mL × 4), osušen preko Na2SO4, koncentrovano da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (375 mg, 70%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 232.0.

[243] 3-(5-Bromopiridin-2-il)-N,N-dimetilpropanamid (B30.4): Smeša B30.3 (400 mg, 1,74 mmol), dimetilamin hidrohlorida (570 mg, 6,96 mmol), HATU(992 mg, 2,61 mmol), DIEA(1,79 g, 13,92 mmol) i DCM(20 mL) je mešana 5 sati na 25 °C pod N2atmosferom. Smeša je razblažena vodom (30 mL), izvađena sa EA (30 mL × 3), kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (40 mL) i slanim rastvorom (40 mL), osušeni preko Na2SO4,koncentrovani. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (260 mg, 58%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 259.0.

[244] Međujedinjenje B30: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB18 zamenom B18.1 sa B30.4. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 305.3 za bornu kiselinu pinakol ester; 223,1 za bornu kiselinu.

Međujedinjenje B31: 2,6-dimetil-4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)morfolin

[245] 4-(5-Bromopiridin-2-il)-2,6-dimetilmorfolin (B31.1): 5-bromo-2-fluoropiridin (3,0 g, 20 mmol) je dodat u rastvor 2,6-dimetilmorfolina (6,9 g, 60 mmol) i K2CO3(8,3 g, 60 mmol) u 10 mL DMSO. Reakciona smeša je zagrevana na 130 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je ohlađena do rt i dodato je 100 mL H2O, nakon čega sledi ekstrakcija sa EtOAc (2 × 100mL).

Organski slojevi se redom isperu sa slanim rastvorom (100 mL), osuše preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom dajući jedinjenje iz naslova (4,38 g, 81%) kao žutu čvrstu supstancu. LC-MS: [M+H]<+>= 273.0.

[246] Međujedinjenje B31: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B31.1. LC-MS: [M+H]<+>= 319.0.

Međujedinjenje B32: 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-(2-(metilsulfonil)etoksi)fenil)-1,3,2-dioksaborolan

[247] 1-Bromo-4-(2-bromoetoksi)benzen (B32.1): Smeša 4-bromofenola (4,3 g, 25 mmol), 4-bromofenolala (12,7 g, 67,5 mmol), NaOH (1,6 g, 40 mmol) u H2O (20 mL) se zagreva do refluksa tokom 11 sati. Dodaje se DCM (50 mL). Organska faza je odvojena i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,2 g, 60%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[248] (2-(4-Bromofenoksi)etil)(metil)sulfan (B32.2): Smeša B32.1 (4,3 g, 25mmol), CH3SNa (6,12 g, 45mmol) u DMF (50 mL) je zagrevana na t 90 °C 18 sati. DCM (50 mL) i voda (100 mL) su dodati. Organska faza je odvojena i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,9 g, 80%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[249] 1-Bromo-4-(2-(metilsulfon)etoksi)benzen (B32.3): Smeša B32.2 (2,9 g, 12mmol), m-CPBA (7,28 g, 36 mmol) u DCM (50 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. DCM (50 mL) i voda (100 mL) su dodati. Organska faza je razdvojena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa PE / EtOAc = 1/1 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,7 g, 80%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[250] Međujedinjenje B32: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B32.3. LC-MS: [M+H]<+>= 327.2.

Međujedinjenje B33: 2-(2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[251] 5-Bromo-2-vinilpiridin (B33.1): Pd(PPh3)4(500 mg, 0,4 mmol) dodat je mešanoj suspenziji 2,5-dibromopiridina (5 g, 21 mmol) i 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolan (3,6 g, 23 mmol) u smešu 1,4-dioksana (40 mL) i zasićenog rastvora natrijum karbonata (12 mL). Smeša je mešana na 100 °C tokom 16 sati u zatvorenoj epruveti pod azotom. Smeša je razblažena dihlorometanom (200 mL) i isprana vodom (100 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona silika gela, dihlorometan u heptanu 20/80 do 80/20) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,9 g, 77%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 186.0.

[252] 5-Bromo-2-(2-(3,3-difluoropirolidin-1-il)etil)piridin (B33.2): B33.1 (500 mg, 2,72 mmol) doda se u rastvor 3,3-difluoropirolidina (930 mg, 8,16 mmol) u sirćetnoj kiselini (3 ml) i smeša se meša na 100 °C tokom 18 sati. Dodaje se zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (50 ml). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, koncentrovan, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (heksan : etil acetat = 10 : 1, hloroform: metanol = 10: 1) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, 68%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 293.0.

[253] Međujedinjenje B33: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB1 zamenom B1.4 sa B33.2. LC-MS: [MH]<+>= 257.2 (borne kiseline MH<+>).

Međujedinjenje B34: (6-(2-(dimetilamino)etil)piridin-3-il)borna kiselina

[254] 2-(5-Bromopiridin-2-il)-N,N-dimetiletanamin (B34.1): Rastvor 2.0 M dimetilamina (27 mL, 54 mmol) u THF je dodat u rastvor 5-brom-2-vinilpiridina (1,0 g, 5,4 mmol) u sirćetnoj kiselini (7 mL). Smeša je mešana na 80 °C preko noći i na 90 °C dva dana, zatim je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, izvađena etil acetatom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. koncentrovana i ostatak je zatim prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (heksan: etil acetat = 10 : 1, hloroform: metanol = 10: 1) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (900 mg, 60%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 231.1.

[255] Međujedinjenje B34: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B18 zamenom B18.1 sa B34.1. LC-MS: [M+H]<+>= 195.2.

Međujedinjenje B35: 2-(metoksimetil)-3-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[256] Metil 5-bromo-3-metilpikolinat (B35.1): U rastvor 5-brom-3-metilpikolinske kiseline (500 mg, 2,31 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je SOCl2(275 mg, 23,1 mmol) na sobnoj temperaturi. Zatim se reakciona smeša 4 sata meša na 90 °C. Rastvarač je uklonjen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, 94%) kao beličasta čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 232.0.

[257] (5-Bromo-3-metilpiridin-2-il)metanol (B35.2): Rastvoru B35.1 (500 mg, 2,17 mmol) u MeOH (15 mL) dodat je NaBH4(826 mg, 21,7 mmol) na sobnoj temperaturi. Zatim se reakciona smeša 2 sata meša na 90 °C. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je rastvoren u EtOAc (20 mL) i ispran sa vodom (15 mL). Organska faza je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg, 68%) kao bledo žuto ulje. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 204.2.

[258] 5-Bromo-2-(metoksimetil)-3-metilpiridin (B35.3): Metil jodid (254 mg, 1.79 mmol) dodaje se u mešanu suspenziju B35.2(300 mg, 1,49 mmol) i NaH (89 mg, 2,23 mmol) u THF (8 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Dodati su DCM (20 mL) i voda (15 mL). Organska faza je razdvojena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen Prep-TLC (PE / EtOAc = 2/1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (310 mg, 96%) kao čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 218.1.

[259] Međujedinjenje B35: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B1 zamenom B1.4 sa B35.3. LC-MS: [M+H]<+>= 264.0.

Međujedinjenje B36: 4-(2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)etil)piperazin-2-on

[260] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B33 zamenom 3,3-difluoropirolidina sa piperazin-2-onom. LC-MS: [M+H]<+>= 332.0.

Međujedinjenje B37: 4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)-1,4-diazepane-1 -karbaldehid

[261] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B31 zamenom 2,6-dimetilmorfolina sa 1-formil-1,4-diazepan-6-ilijumom. LC-MS: [M+H]<+>= 332.3.

Međujedinjenje B38: 4-(2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)etil)piperazin-1-karbaldehid

[262] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B33 zamenom 3,3-difluoropirolidina sa piperazine-1-karbaldehidom. LC-MS: [M+H]<+>= 346.3.

Međujedinjenje B39: 2-(4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazin-1-il)etanol

[263] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B31 zamenom 2,6-dimetilmorfolina sa 2-(piperazine-1-il)etanolom. LC-MS: [M+H]<+>= 334.2.

Međujedinjenje B40: (6-(Dimetilkarbamoil)piridin-3-il)borna kiselina

[264] 5-Bromo-N,N-dimetilpikolinamid (B40.1): U rastvor 5-bromopikolinske kiseline (1,5 g, 7,42 mmol) u DCM (15 mL) je dodat Oksalil hlorid (5 mL) na 0 °C. Reakcija smeše je mešana na 40 °C tokom 1 h, koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je razblažen sa DCM (20 ml), i sukcesivno su dodavani DIPEA (1,5 g) i dimetilamin (600 mg). Smeša je mešana 1 sat, koncentrovana, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom pomoću PE / EA 5:1 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (700 mg, 49%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 231.1.

[265] Međujedinjenje B40: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB18 zamenom B18.1 sa B40.1. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 195.4.

Međujedinjenje B41: Pirolidin-1-il(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)metanon

[266] (5-Bromopiridin-2-il)(pirolidin-1-il)metanon (B41.1): Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B40.1 zamenom dimetilamina sa pirolidinom.

[267] Međujedinjenje B41: Rastvoru B41.1 (70 mg), bis(pinakolato)diboron (77 mg, 0,305 mmol) i KOAc (1,24 mmol, 121 mg) u dioksanu (2 mL) je dodato Pd(dppf)Cl2(0,062 mmol, 20 mg). Reakciona smeša je zagrevana na 110 °C 2 sata pod N2. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je filtrirana i filtrat je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 303.2 (za bornu kiselinu , LC-MS: [M+H]<+>= 221.2.

Međujedinjenje B42: N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinamid

[268] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B41 zamenom dimetilamina sa metanaminom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]+ = 181.1.

Međujedinjenje B43: N-Etil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinamid

[269] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B41 zamenom dimetilamina sa etanaminom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Međujedinjenje B44: N-(2-(Dimetilamino)etil)-N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinamid

[270] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B41zamenom dimetilamina sa N1,N1,N2-trimetletan-1,2-diaminom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 252.2.

Međujedinjenje B45: (5-(4,4-Dimetil-4,5-dihidrooksazol-2-il)piridin-3-il)borna kiselina

[271] 2-(5-Bromopiridin-3-il)-4,4-dimetil-4,5-dihidrooksazol (B45.1): Cink hlorid (73,7 mg, 0,55 mmol) je stavljen u flašicu sa okruglim dnom od 100 mL, istopljen tri puta pod visokim pritiskom i ostavljen da se ohladi do sobne temperature pod N2pre dodavanja rastvora 5-bromonotinonitrila (1 g, 5,5 mmol) i 2-amino-2-metilpropan-1-ola (513 mg, 5,8 mmol) u suvom hlorobenzenu (15 mL). Dobijena smeša je refluksovana 48 sati pod N2. Isparljive materije su uklonjene in vacuo i dodata je voda (20 mL). Vodeni sloj je izvađen sa DCM (3×10 mL) i kombinovani organski ekstrakt je ispran vodom, slanim rastvorom, sušen preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (PE\EA: 100\1 do 3\1) i daje jedinjenje iz naslova (1 g, 71%) kao belu čvrstu supstancu. LC-MS: [M+H]+ = 257.1.

[272] Međujedinjenje B45: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B18 zamenom B18.1 sa B45.1. LC-MS: [M+H]+ = 221.2.

Međujedinjenje B46: (6-(4,4-dimetil-4,5-dihidrooksazol-2-il)piridin-3-il)borna kiselina

[273] 5-Bromo-N-(1-hidroksi-2-metilpropan-2-il)pikolinamid (B46.1): Tionil hlorid (10 mL, 150 mmol) je dodat u čvrstu 5-bromopikolinsku kiselinu (1,2 g, 6 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Dobijena smeša je refluksovana 2 sata i isparljive materije su uklonjene in vacuo. Sirovi kiselinski hlorid je rastvoren u suvom DCM (20 mL) i rastvor je polako dodavan na 0 °C u rastvor 2-amino-2-metilpropan-1-ola (1,6 g, 18 mmol) u DCM (5 mL). Posle 48 sati mešanja na sobnoj temperaturi, rastvarači su uklonjeni in vacuo i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (PE / EA = 100/1 do 5/1) do naslovnog jedinjenja (1,5 g, 93%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 273.1.

[274] 2-(5-Bromopiridin-2-il)-4,4-dimetil-4,5-dihidrooksazol (B46.2): Rastvoru B46.1 (1 g, 3,7 mmol) u tionil hloridu (967 mmol, 5 mL) je mešano 12 sati na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen in vacuo i dodat je suvi DCM (20 mL). Odvojeni organski sloj je ispran sa vodenim 2N NaOH (2 × 25 mL), sušen preko MgSO4, i koncentrovan in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (PE / EA = 100/1 do 1/1) pri čemu se dobija jedinjenje iz naslova (850 mg, 91%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 257.0.

[275] Međujedinjenje B46: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onim za međujedinjenjeB18 zamenom B18.1 sa B46.2. LC-MS: [M+H]<+>= 221.1.

Međujedinjenje B47: (5-(Metoksimetil)-6-metilpiridin-3-il)borna kiselina

[276] (5-Bromo-2-metilpiridin-3-il)metanol (B47.1): U rastvor etil 5-brom-2-metilnikotinata (1,0 g, 4.1 mmoL) u MeOH (15mL) dodat je natrijum borohidrid (500 mg, 12,5 mmol) na 0 °C. Posle 1 sat, reakcija je ugašena dodavanjem vode (10 mL). Reakcija je zatim izvađena sa DCM (3 ×10 mL). Ekstrakti su kombinovani, sušeni preko Na2SO4, koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (PE / EA = 100/1 do 5/1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (650 mg, 79%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>= 201.9.

[277] 5-Bromo-3-(metoksimetil)-2-metilpiridin (B47.2): Smeši B47.1 (200 mg, 1,0 mmol) u THF (10 ml) dodat je NaH (60% wt, 48 mg, 1,2 mmol) polako na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C 30 minuta, zatim je dodat CH3I (213 mg, 1,5 mmol) u vidu kapi. Reakciona smeša je mešana na 0 °C još 2 sata, ugašena vodom (5 ml), izvađena sa EA (10 ml × 3), kombinovani ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom (10 ml × 3), osušeni preko Na2SO4, koncentrovani i prečišćeni Prep-TLC (silika gel, UV254, PE / EA = 5/1) pri čemu se dobija traženo jedinjenje (100 mg, 70%) kao bistro ulje. LC-MS: [M+H]+ = 217.9.

[278] Međujedinjenje B47: Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom za međujedinjenje B18 zamenom B18.1 sa B47.2. LC-MS: [M+H]<+>= 182.2.

Međujedinjenje C1: 8-bromo-N-((5-fluorobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[279] (5-Fluorobenzofuran-4-il)metanamin (C1.1): U rastvor 5-fluorobenzofuran-4-karbonitrila (A1.3) (1 g, 6,2 mmol) u MeOH (15 mL) i NH4OH (2 mL) dodat je Raney Ni (500 mg) pod N2. Dobijena suspenzija je degasirana pod vakuumom i ispunjena sa H2sa balonom. Reakcija je zatim mešana na sobnoj temperaturi pod balonom H2preko noći, filtrira se kroz sloj Celita. Filtrat je koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom (DCM-DCM\MeOH=10\1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (900 mg, 88%) kao žuto ulje. LC-MS: [M+H]<+>= 166.

[280] 8-Bromo-N-((5-fluorobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin (C1): Smeša (5-fluorobenzofuran-4-il) metanamina (C1.1) (203 mg, 1,23 mmol) i 8-bromo-5-(metiltio)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidina (3) (200 mg, 0,82 mmol) je mešano na 40 °C 12 sati. Nakon završetka reakcije, EA (15 mL) je dodat. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa EA (3 mL×3). Čvrsta supstanca je sakupljena kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. (50 mg, 17%). LC-MS: [M+H]<+>= 362.

Međujedinjenje C2: (4-((8-bromo-[1,2,4]triazolo[4,3-f]pirimidin-5-ilamino)metil)-5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-3-ol

[281] 2-Bromo-3,6-difluorobenzaldehid (C2.1): U rastvor 2-bromo-l, 4-difluorobenzena (16 g, 83 mol) u 200 mL THF pod N2atmosferom na -78°C je dodato LDA (54 mL, 108 mmol) u vidu kapi. Nakon mešanja na -78 °C 45 minuta, DMF (18,2 g, 249 mmol) je dodat. Smeša je mešana još 2 sata na -78 °C. Reakciona smeša je zagrejana do 0 °C, dodata je 200 mL i zasićena. NH4Cl je dodat. Dobijena smeša je izvađena sa EtOAc (200 mL×2). Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (400 mL × 1), osušen preko bezvodnog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod vakuumom, dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (silika, EtOAc / PE = 1/30) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11 g, 60%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7.57 - 7.34 (m, 2H), 10.20 (dd, 1H).

[282] 2-Bromo-3-fluoro-6-metoksibenzaldehid(C2.2): U rastvor 2-brom-3,6-difluorobenzaldehida (C2.1)(8,4 g, 38,0 mmol) u suvom THF (40 mL) i MeOH (80 mL) dodan je rastvor MeONa (2,26 g, 41,8 mmol) u MeOH (40 mL) na 60 °C u periodu od 30 minuta, i dobijena smeša je mešana na 60 °C 16 sati. Rastvarač je uklonjen i dodata je voda (100 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i zatim triturirana sa PE / EA 10:1 da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (7,04 g, 80%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.92 (s, 3H), 6.94 (dd, 1H), 7.31 -7.24 (m, 1H), 10.38 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>=233.1.

[283] 2-Bromo-3-fluoro-6-hidroksibenzaldehid (C2.3): U rastvor 2-bromo-3-fluoro-6-metoksibenzaldehida (C2.2) (5 g, 21,4 mol) u 100 mL DCM pod N2na -78°C dodat je BBr3(26 mL, 26 mmol, 1,0 mol/L u DCM) u vidu kapi. TRastvor je mešan na -78°C 30 minuta i na sobnoj temperaturi preko noći. 100 mL zas. NH4Cl dodaje se na 0 °C i meša 20 minuta. Dobijena smeša je izvađena sa DCM (150 mL×2). Kombinovani organski sloj je ispran sa 400 mL slanog rastvora, osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan in vacuo. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijent eluiranja sa 0-50% EA u PE) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4g, 85%) kao žuta čvrsta supstanca:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.94 (dd, 1H), 7.29 (dt, 1H), 10.33 (s, 1H), 11.78 (s, 1H).

[284] 5-fluoro-3-hidroski-2,3-dihidrobenzofuran-4-karbonitril (C2.5): Rastvor 2-bromo-3-fluoro-6-hidroksibenzaldehida (C2.4) (2,7 g, 11,6 mol), Zn(CN)2(2 g, 17,4 mmol) i Pd(PPh3)4(1,4 g, 1,2 mmol) u 50 mL DMF je mešana ispod N2na 120°C 16 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i dodato je 150 mL vode. Smeša je izvađena sa EtOAc (200 mL×2). Kombinovani organski sloj je ispran sa 200 mL slanog rastvora, osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan in vacuo. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (gradijentna eluacija: 0-50% EA u PE) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 60%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 2.91 (d, 1H), 4.55 (dd, 1H), 4.69 (dd, 1H), 5.63 (s, 1H), 7.17 - 7.01 (m,2H).

[285] 4-(Aminometil)-5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-3-ol (C2.6): U rastvor 5-fluoro-3-hidroksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-karbonitrila (C2.5) (1 g, 5,6 mol) u 20 mL THF dodat je BH3-THF (22,4 mL, 22,4 mmol) u vidu kapi. Rastvor je mešan na 60 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, pa je pažljivo dodat MeOH. Dobijena smeša je mešana 30 minuta. Proces je ponovljen tri puta. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, 60%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.71 (d, 1H), 3.89 (d, 1H), 4.28 (dd, 1H), 4.52 (dd, 1H), 5.47 (dd, 1H), ), 6.70 (dd, 1H), 7.00 (dd, 1H).

[286] (4-((8-bromo-[1,2,4]triazolo[4,3-f]pirimidin-5-ilamino)metil)-5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-3-ol (C2): U rastvor 4-(aminometil)-5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-3-ola (3) (400 mg, 1,6 mmol) u 2 mL dihlorometan je dodat 4-(aminometil)-5-fluoro-2,3dihidrobenzofuran-3-ol (C2.6) (586 mg, 3,2 mmol) i dobijena suspenzija je mešana na 100 °C tokom 3 sata. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni (eluirana sa 10% MeOH u DCM) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (105 mg, 17%) kao bela čvrsta supstanca. LC-MS: [M+H]<+>=382.0.

Međujedinjenje C3: 8-bromo-N-((5-fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4 ]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[287] 2-Bromo-1-fluoro-4-metoksi-3-(2-metoksivinil)benzen (C3.1): U suspenziju (metoksimetil)trifenilfosfonijuma (57,41 g, 0,167 mol) u suvom THF (250 mL) doda se LHMDS (1 M u THF, 178,5 mL, 178,5 mmol) na 0 °C tokom perioda od 30 minuta. Dobijena smeša je mešana na 0 °C 45 minuta, a zatim je dodat rastvor 2-bromo-3-fluoro-6-metoksibenzaldehida. (C2.2) (26,0 g, 0.11 mol)u suvom THF (100 mL) preko 30 minuta. Dobijena smeša je mešana na 25 ° C u toku 2,5 h i ugašena sa NH4Cl (200 mL), i izvađena sa Et2O (150 mL×2). Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (150 mL×1), osuši (Na2SO4), filtrira i koncentruje in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, eluent: EtOAc u PE: 3%) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (25,68 g, 88,2%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.53 (d, 1H), 6.92 - 6.82 (m, 1H), 6.77 (dd, 1H), 5.99 (d, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.75 (s, 3H).

[288] 2-(2-Bromo-3-fluoro-6-metoksifenil)acetaldehid (C3.2): U rastvor 2-bromo-1-fluoro-4-metoksi-3-(2-metoksivinil)benzena (C3.1) (25,68 g, 98,4 mmol) u THF (200 mL) dodat je 3 N HCl (100 mL, 300 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 60 °C tokom 10 sati, ohlađena do sobne temperature i izvađena sa DCM (130 mL×3). Kombinovani organski sloj je ispran sa NaHCO3rastvorom (150 mL×1), slanim rastvorom (150 mL×1), osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, eluiran sa EtOAc u PE: 2%~4%). Sirovi proizvod je triturat sa PE / EtOAc (10:1, 30 mL) tokom 1 sat. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa PE, i osušena in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (13,5 g, 55,5%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.80 (s, 3H), 3.96 (d, 2H), 6.82 (dd, 1H), 7.07 (dd, 1H), 9.67 (t, 1H).

[289] 4-Bromo-5-fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran (C3.3): U rastvor 2-(2-bromo-3-fluoro-6-metoksifenil)acetaldehida (C3.2) (11,5 g, 46,56 mmol) u DCM (100 mL) na -78 °C dodat je BBr3(1M in DCM, 140 mL, 140 mmol) u vidu kapi u 30 minuta. Dobijena smeša se zagreje do sobne temperature i meša 4 h. Smeša je ohlađena na 0 °C, pažljivo je ugašena sa MeOH (30 mL) i mešana na 0 °C 2 sata. Dobijena smeša se ekstrahuje sa DCM (100 mL×3), a kombinovani organski sloj se ispere sa zas. NaHCO3(150 mL×1), slanim rastvorom (150 mL×1), osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, eluiran sa EtOAc u PE 1,0% do 4,0%) pri čemu se dobija traženo jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (8,6 g, 75%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.06 (dd, 1H), 3.33 (dd, 1H), 3.52 (s, 3H), 5.67 (dd, 1H), 6.70 (dd, 1H), 6.90 (t, 1H).

[290] 5-Fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-karbonitril (C3.4): Smeša 4-bromo-5-fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofurana (C3.3) (4,0 g, 16,19 mmol), Zn(CN)2(3,8 g, 32,39 mmol), Pd(PPh3)4(936 mg, 0,81 mmol) u DMF (35 mL) je zagrevana do 120 °C 16 sati. Reakciona smeša je izvađena sa EtOAc (50 mL×4). Kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% vod.30 mL×2), slanim rastvorom (15 mL×1), osušen

(Na2SO4), filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silika, eluiran sa EtOAc in PE 2%∼4%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (2,0 g, 64%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.21 (dd, 1H), 3.48 (dd, 1H), 3.53 (s, 3H), 5.73 (dd, 1H), 7.04 - 6.92 (m, 2H).

[291] (5-Fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamin (C3.5): Smeša 5-fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-karbonitrila (C3.4) (2,0 g, 8,1 mmol), Raney Ni (0,2 g), u 7 N NH3u MeOH (60 mL) i MeOH (30 mL) i prečišćen sa H2i mešana na sobnoj temperaturi pod H230 minuta. Reakciona smeša je filtrirana sa Celitom i isprana sa MeOH (100 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, eluiran sa EtOAc in PE 10%∼40%; zatim 1 N NH3u MeOH / DCM 10%∼15%) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuto ulje (1,85 g, 90%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.07 (d, 1H), 3.36 (dd, 1H), 3.55 - 3.48 (m, 3H), 3.81 (d, 2H), 5.65 (dd, 1H), 6.67 (dd, 1H), 6.84 (t, 1H).LC-MS: [M+H]<+>=198.2.

[292] 8-Bromo-N-((5-fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin (C3): Smeša (5-fluoro-2-metoksi-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamina (C3.5) (500 mg, 2,54 mmol), 8-bromo-5-(metiltio)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidina (3) (320 mg, 1,30 mmol) u DCM (2 mL) se zagreva na 50 °C u otvorenoj posudi preko noći. Reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na koloni (silicijum dioksid, eluiran sa EtOAc u PE 10%∼50%; zatim MeOH u DCM 1%∼3,5%) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (230 mg, 46%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.20 (d, 1H), 3.44 (dd, 1H), 3.48 (s, 3H), 4.79 - 4.69 (m, 2H), 5.63 (dd, 1H), 6.65 (dd, 1H), 6.79 (t, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.79 (s, 1H), 9.10 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>=394.0.

Primer 1

8-(1,3-Dimetil-1H-pirazol-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[293] Smeša A1 (70 mg, 0,19 mmol) u dioksanu (3 mL) i H2O (1 mL) dodata je 1,3-dimetillH-pirazol-5-ilbornoj kiselini (43,2 mg, 0.31mmol), NaHCO3(49 mg, 0.58 mmol) i Pd(dppf)Cl2(14,1 mg, 0,019 mmol). Smeša je zagrevana na 95 °C i mešana 40 minuta, zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.19 (s, 3H), 3.18 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 4.55 (t, 2H), 4.72 (s, 2H), 6.29 (s, 1H), 6.72 (dd, 1H), 6.95 (dd, 1H),7.74 (s, 1H), 8.84 (br s, 1H), 9.47 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 380.2.

Primer 2

N-((5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[294] Smeša A1 (40 mg, 0,110 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL), MeCN (0,30 mL) i vodi (0,30 mL) je dodata (2-metilpiridin-3-il) borna kiselina (30,1 mg, 0,220 mmol), kalijum karbonat (45,5 mg, 0,330 mmol) i Pd(Ph3P)4(12,69 mg, 10,98 µmol). Dobijena smeša je mešana pod N2na 110 °C 3 sata, ohlađena do sobne temperature i evaporisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (DCM: MeOH =10:1) kako bi se dobio Primer 2 kao bela čvrsta supstanca (20 mg, 46,0%).

[295] Alternativno, Primer 2 je pripremljen kao što sledi. Suspenziji A1 (25,5 g, 70 mmol), 2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (30,6 g, 140 mmol) i NaHCO3(35,3 g, 420 mmol) u smeši rastvora 1,4-dioksana (300 mL) i H2O (100 mL) dodat je PdCl2(dppf) (5,94 g, 612 mmol). Smeša je degasirana sa N2, zagrevan na 110 °C tokom 1 sata. Dobijena smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (EtOAc: MeOH = 20:1) da se dobije 14 g željenog proizvoda. U proizvod se doda 200 mL acetona i dobijena suspenzija se zagreva na 50 °C 2 sata. Bela čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod vakuumom da se dobije Primer 2(13,6 g, 52%)<1>H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.40 (s, 3H), 3.33 (t, 2H), 4.56 (t, 2H), 4.72 (s, 2H), 6.72 (dd, 1H), 6.96 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.72 (t, 1H), 9.49 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 376.9.

[296] Suspenziji Primer 2 (6,0 g, 15,94 mmol) u 100 mL IPA, rastvor 0,5 N HCl u IPA (33,0 mL, 16,50 mmol) dodat je u vidu kapi na sobnoj temperaturi. Suspenzija je mešana na 50 °C tokom 12 sati, zatim ohlađena do sobne temperature i mešana 5 sati. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i sušena na 40 ° C pod vakuumom tokom 2 dana da bi se dobila hidrohloridna so Primer 2 kao bela čvrsta supstanca (6,5 g, 98 %)<1>H NMR (DMSO-d6) δ ppm 2.65 (s, 3H), 3.35 (t, 2H), 4.57 (t, 2H), 4.74 (d, 2H), 6.73 (dd, 1H), 6.97 (dd, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.85 - 7.94 (m, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.80 (dd, 1H), 9.07 (t, 1H), 9.58 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 376.9.

Primer 3

8-(2,4-Dimetilpirimidin-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[297] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno postupkom sličnim onom iz Primera 1 zamenom 1,3-dimetil-lH-pirazol-5-ilborone kiseline sa B1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.39 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 3.33 (t, 2H), 4.56 (t, 2H), 4.73 (d, 2H), 6.73 (dd, 1H), 6.97 (dd, 1H), 7.72 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.83 (br s, 1H), 9.50 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 392.1.

Primer 4

N-((5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(1-izopropil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[298] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-ilborne kiseline sa B2.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.43 (d, 6H), 2.35 (s, 3H), 3.30 (t, 2H), 4.48 - 4.56 (m, 3H), 4.69 (d, 2H), 6.70 (dd, 1H), 6.95 (dd, 1H), 7.73 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.50 (br s, 1H), 9.45 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 408.2.

Primer 5

N-((5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(6-metoksi-4-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[299] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-ilborne kiseline sa B3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.18 (s, 3H), 3.35 (t, 2H), 3.88 (s, 3H), 4.56 (t, 2H), 4.71 (d, 2H), 6.73 (dd, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.96 (dd, 1H), 7.59 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.68 (br s, 1H), 9.46 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 407.1.

Primer 6

8-(6-Ciklopropil-2-metilpiridin-3-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[300] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-ilborne kiseline sa B4.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.90 - 0.97 (m, 4H), 2.09 - 2.13 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 3.30 (t, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.71 (s, 2H), 6.71 (dd, 1H), 6.96 (dd, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.56 -7.60 (m, 2H), 8.68 (br s, 1H), 9.46 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 417.2.

Primer 7

(3-(5-(((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)amino)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-8-il)piridin-2-il)metanol

rmer

[301] 8-(2-(((terc-Butildimetilsilil)oksi)metil)piridin-3-yl)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin (7.1): Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-iilborne kiseline sa B5. LC-MS: [M+H]<+>= 507.1.

[302] Primer 7: Smeši 7.1 (30 mg, 0,08 mmol) u THF (3mL) dodat je TBAF (0,6 mL, 0,6 mmol) i mešan 4 sata. Smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 87%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.34 (t, 2H), 4.51 (d, 2H), 4.57 (t, 2H), 4.73 (d, 2H), 5.11 (t, 1H), 6.72 (dd, 1H), 6.74 (dd, 1H), 7.44 (dd, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.89 (dd, 1H), 8.61 (dd, 1H), 8.74 (br s, 1H), 9.48 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 393.1.

Primer 8

8-(2-Cikloproopil-4-metilpirimidin-5-il)-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[303] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-ilborne kiseline sa B8.<1>H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.04 - 1.08 (m, 4H), 2.21 - 2.24 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 3.33 (t, 2H), 4.56 (t, 2H), 4.72 (d, 2H), 6.72 (dd, 1H), 6.96 (dd, 1H), 7.71 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.80 (br s, 1H), 9.48 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 418.1.

Primer 9

N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-izopropoksi-4-metilpirimidin-5-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[304] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-ilborne kiseline sa B10.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.35 (d, 6H), 2.34 (s, 3H), 3.36 (t, 2H), 4.57 (t, 2H), 4.72 (s, 2H), 5.28 (t, 1H), 6.72 (dd, 1H), 6.97 (dd, 1H), 7.68 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.76 (br s, 1H), 9.48 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 436.1.

Primer 10

3-(5-(((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)amino)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-8-il)piridin 1-oksid

[305] N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin (10.1): Jedinjenje iz naslova je pripremljeno korišćenjem procedure slične onoj za Primer 1 zamenom 1,3-dimetil-1H-pirazol-5-ilborne kiseline sa 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridinom. Primer 10: Smeši 10.1(110mg, 0,3mmol) u CHCl3(5mL) dodat je mCPBA (163mg, 0,6mmol). Reakciona smeša je mešana 16 sata na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7 mg, 6%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.30 (s, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.74 (s, 2H), 6.72 (dd, 1H), 6.95 (dd, 1H), 7.51 (dd, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.98 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 9.52 (s, 1H).LC-MS: [M+H]<+>= 379.2.

Primer 207

N-((5-Fluorobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[306] U rastvor 8-bromo-N-((5-fluorobenzofuran-4-il) metil)-[1,2,4] triazolo[4,3-c] pirimidin-5-amina (C1) (50 mg, 0,14 mmol) u dioksanu (2 ml) dodat je 2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (45 mg, 0,21 mmol), Pd(dppf)Cl2(23 mg, 0,028 mmol), NaHCO3(35 mg, 0,42 mmol) i voda (1 mL). Reakciona smeša je prečišćena N23 puta, i zatim mešana na 90 °C 1 sat. Smeša je filtrirana, čvrsta supstanca je isprana sa DMSO (2 mL). Filtrat je koncentrovan i prečišćen preparativnom HPLC (NH4HCO3) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (13 mg, 48%) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.40 (s, 3H), 5.01 (s, 2H), 7.21 - 7.25 (m, 2H), 7.31 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 8.08 (d, 1H), 8.50 (t, 1H), 8.86 (s, 1H), 9.46 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 375.1.

Primer 233

N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin

[307] tert-Butil (5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil(8-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-il)karbamat(C4.2): Suspenzija Pd2(dba)3(18 mg, 0,02 mmol) i Me4-t-BuXPhos (19,2 mg, 0,04 mmol) u 1.0 mL bezvodnog dioksana se zagreva na 100 °C tokom 10 minuta pod N2. Dobijena smeša se prenese u mešanu suspenziju C4.1 (90 mg, 0,2 mmol), 4-metil-1H-imidazola (72 mg, 0,88 mmol) i K3PO4(110 mg, 0,52 mmol) u 2,0 mL bezvodnom dioksanu. Reakciona smeša je mešana na 120 °C preko noći, zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana, čvrsti ostatak je ispran sa EtOAc nekoliko puta.

Filtrat i EtOAc ispirci su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod C4.2, koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 466.2.

[308] N-((5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amin (233): Rastvor C4.2 (93 mg, 0,2 mmol) u 6 mL 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-ola je zagrevan u Biotage mikrotalasnom reaktoru na 100 °C 1 sat. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobilo žuto ulje, koje je prečišćeno preparativnom HPLC da bi se dobilo naslovno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (19% prinos 8 mg).<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm 2.19 (s, 3H), .31 (t, 2H), 4.55 (t, 2H), 4.70 (s, 2H), 6.71 (dd, 1H), 6.93 - 6.98 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.78 (s, 1H), 9.52 (s, 1H). LC-MS: [M+H]<+>= 366.1.

[309] Sledeća jedinjenja, identifikovana u Tabeli 2, su pripremljena korišćenjem opštih procedura kao i postupaka iz iznad opisanih primera sa odgovarajućim početnim materijalima i reagensima.

Tabela 2

VI. FARMAKOLOGIJA I UPOTREBA

[310] Kao ključna komponenta PRC2 kompleksa EED nema unutrašnju enzimsku aktivnost. Međutim, od kritične važnosti je za ispravno PRC2 funkciju. EED se direktno vezuje za H3K27me3 i ovaj događaj vezivanje lokalizuje PRC2 kompleks do hromatin podloge i alosterno aktivira aktivnost metiltransferaze. Ciljanje alosternog mesta u regulatornoj EED pod jedinice PRC2 može ponuditi nov i jedinstven ugao koji će biti pogodan za, ili komplementaran sa, direktnim ciljanjem SAM mehanizma konkurencije za EZH2 ili PRC2. Stoga, ciljanje EED predstavlja visoko privlačnu strategiju za razvoj nove terapije za tretiranje mnogo oblika rakova. Naročito, postoji potreba za malim molekulima koji suzbijaju aktivnost PRC2 kroz ciljanje EED. Sada je otkriveno da su triazolopirimidin derivati kao što je prethodno obelodanjeno od koristi za ciljanje EED za tretiranje EED ili PRC2-posredovanih bolesti ili poremećaja, naročito rakova.

[311] Upotreba jedinjenja prema predmetnom pronalasku može biti pokazana upotrebom bilo kod od sledećih test postupaka. Jedinjenja prema predmetnom pronalasku procenjena su za svoju sposobnost za suzbiju aktivnost PRC2 u pentamernom kompleksu EZH2, SUZ12, EED, Rbap48 i AEBP u biohemijskim probama. Sposobnost jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju da suzbiju ćelijsku aktivnost PRC2 procenjena je analiziranjem histon H3 lizin 27 metilacije u ljudskim ćelijskim linijama. Sposobnost jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju da suzbiju rakove izvedena je iz njihove sposobnosti da moduliraju aktivnost kod ljudski ćelijskih linija raka koje nose specifičnu zavisnost od PRC2 aktivnosti kako bi se održavao rast raka.

Proba vezivanja EED-H3K27Me3 peptida od AlphaScreen (α-screen)

[312] Za procenjivanje potentnosti jedinjenja u EED-H3K27Me3 probi konkurentnog vezivanja, jedinjenja su serijski razblažena 3 puta u DMSO kako bi se dobilo ukupno dvanaest koncentracija. Zatim su jedinjenja pri svakoj koncentraciji (75 nL svakog) preneta sa Mosquito u ploče sa 384 udubljenja Perkin Elmer ProxiPlate 384 plus.8 uL rastvora koji sadrže 30 nM EED (1-441)-His protein i 15 nM biotin-H3K27Me3 (19-33) peptid u puferu (25 mM HEPES, pH 8, 0,02% Tween-20, 0,5% BSA) je dodato u udubljenja i zatim su inkubirana sa jedinjenjem u trajanju od 20 min. AlphaScreen mešavina detekcionih zrna pripremljena je neposredno pre upotrebe mešanjem nikl helat zrna davaoca sa streptavidin zrnima primaoca u 1:1 odnosu (Perkin Elmer, proizvod br.6760619C/M/R) u iznad opisanom puferu. Zatim je 4 µL mešavine detekcionih zrna dodato u ploču i inkubirano u mraku na rt u trajanju od 1 h. Krajnja koncentracija zrna davaoca i primaoca bila je 10 µg/mL za svaku. Ploče su očitane na EnVision (PerkinElmer) upotrebom AlphaScreen podešavanja adaptiranog za optimalnu detekciju signala sa 615 nm filterom, nakon ekstrakcije uzorka pri 680 nm. Emisioni signal pri 615 nm je korišćen za kvantifikovanje suzbijanja jedinjenja. AlphaScreen signali su normalizovani na osnovu očitavanja koje dolazi iz pozitivnih (kontrola maksimalnog signala) i negativnih kontrola (kontrola minimalnog signala) kako bi se dobio preostali procenat aktivnosti. Podaci su zatim uklopljeni do jednačine odgovora na dozu upotrebom programa Helios (Novartis) kako bi se dobile IC50 vrednosti. Helios je interni Novartis softver za analizu podataka upotrebom postupaka opisanih od strane Normolle, D. P., Statistics in Medicine, 12:2025-2042 (1993); Formenko, I. i dr, Computer Methods and Programs in Biomedicine, 82, 31-37 (2006); Sebaugh, J. L., Pharmaceutical Statistics, 10:128-134 (2011);Kelly, C. i dr., Biometrics, 46(4):1071-1085 (1990); i Kahm, M. i dr., Journal of Statistical Software, 33(7): (2010) (grofit: Fitting Biological Growth Curves with R, strane 1-21, dostupno na http://www.jstatsoft.org/).

[313] Svako jedinjenje je suprotno provereno radi određivanja da li je reagovalo sa AlphaScreen zrnima. Jedinjenja su razblažena kao što je opisano u prethodnom delu i proba je izvršena dodavanjem 12 µL 10 nM biotin-miniPEG-His6 peptida u gorenavedeni pufer i inkubiranjem u trajanju od 20 min na rt pre dodavanja zrna do 10 µg/mL pojedinačno. Ploče su zatim inkubirane u trajanju od 1 h na rt u mraku pre nego što su očitane na EnVision.

EED LC-MS Test

Reprezentativna jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju su serijski i odvojeno razblažena 3 puta u DMSO kako bi se dobilo ukupno osam ili dvanaest koncentracija. Zatim su test jedinjenja pri svakoj koncentraciji (120 nL svakog) preneta sa Mosquito u ploče sa 384 udubljenja Perkin Elmer ProxiPlate 384 plus. Rastvori (6 µL) 24 nM divljeg tipa PRC2 (wtPRC2) kompleksa i 2 µM SAM u reakcionom puferu (20 mM Tris, pH 8,0, 0,1% BSA, 0,01% Triton, 0,5 mM DTT) su dodati u udubljenja koja su zatim inkubirana sa test jedinjenjem u trajanju od 20 min. 6 µL rastvor 3 µM peptid podloge H3K27Me0 (histon H3[21-44]-biotin) u reakcionom puferu je dodato kako bi se započela svaka reakcija. Krajnje komponente u reakcionom rastvoru obuhvataju 12 nM wtPRC2 kompleks, 1 µM SAM, i 1,5 µM H3K27me0 peptid sa različitim koncentracijama jedinjenja. Pozitivna kontrola sastojala se od enzima, 1 µM SAM i 1.5 µM podloge u odsustvu test jedinjenja, a negativna kontrola sastojala se samo od 1 µM SAM i 1,5 µM podloge. Svaka reakcija je inkubirana na rt u trajanju od 120 min, zatim je zaustavljena dodavanjem 3 µL rastvora za gašenje (2,5% TFA sa 320 nM d4-SAH). Reakciona smeša je centrifugirana (Eppendorf centrifuga 5810, Rotor A-4-62) u trajanju od 2 min pri 2000 rpm i očitana je na API 4000 ttrostrukoj kvadrupol masenoj spek sa Turbulon Spray (Applied Biosystem) spojenim sa Prominence UFLC (Shimadzu). Nivoi SAH proizvodnju zatim su normalizovani na osnovu vrednosti koje se javljaju iz pozitivnih i negativnih kontrola kako bi se dobio procenat aktivnosti enzima. Podaci su zatim uklopljeni do jednačine odgovora na dozu upotrebom programa Helios kako bi se dobile IC50vrednosti test jedinjenja.

ELISA (H3K27 metilacija) test

[314] Reprezentativna jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju su serijski i odvojeno razblažena 3 puta u DMSO kako bi se dobilo ukupno osam ili dvanaest koncentracija. Zatim su jedinjenja dodata u G401 ćelije kultivisane u ploči sa 384 udubljenja pri razblaženju 1:500 kako bi se dobila najveća koncentracija od 20 µM. Ćelije su dalje kultivisane u trajanju od 48 h pre ELISA procedure.

[315] Histonska ekstrakcija: Ćelije, u ploči sa 384 udubljenja, isprane su sa PBS (10 x PBS pufer (80 g NaCl (Sigma, S3014), 2 g KCl (Sigma, 60128), 14,4 g Na2HPO4(Sigma, S5136), 2,4 g KH2PO4(Sigma, P9791) do 1 L vode, pH do 7,4) i lizirane sa dodatnim puferom za lizu (0,4N HCl; 45 µL po udubljenju). Ploča je blago mešana na 4°C u trajanju od 30 min. Ćelijski lizat je neutralisan sa puferom za neutralizaciju (0,5 M natrijum fosfat dvobazni, pH 12,5, 1 mM DTT; 36 µL po otvoru). Ploče su mešane kako bi se omogućilo da lizati budu dobro pomešani pre ELISA protokola.

[316] ELISA protokol: Ćelijski lizati su preneti do udubljenja ploče sa 384 udubljenja i krajnja zapremina je podešena do 50 µL po udubljenju sa PBS. Ploče su zatvorene, centrifugirane pri 2.000 rpm u trajanju od 2 min i inkubirane pri 4°C u trajanju od oko 16 h. Ploča je isprana sa TBST puferom (1 x TBS (10x TBS: 24,2 g Tris (Sigma, T6066), 80 g NaCl (Sigma, S3014) do 1 L vode i podešena je pH do 7,6 sa HCl) sa 0,1% Tween-20). Pufer za blokiranje (TBST, 5% BSA; 50 µL po udubljenju) je dodat i ploča je inkubirana u trajanju od 1 h na rt. Pufer za blokiranje je uklonjen i primarno antitelo je dodato (30 µL po udubljenju). Sledeća razblaženja su izvršena sa puferom za blokiranje: za anti-H3K27me3 antitelo (Cell Signaling Technology, #9733), razblaženje je bilo 1:1000; za anti-H3K27me2 antitelo (Cell Signaling Technology, #9288), razblaženje je bilo 1:100; za anti-H3 antitelo (Abcam, Cat#24834), razblaženje je bilo 1:1000. Primarno antitelo je inkubirano u ploči na rt u trajanju od 1 h. Udubljenja su isprana sa TBST i inkubirana sa sekundarnim antitelom u trajanju od 1 h na rt. Za sekundarna antitela, sledeća razblaženja su izvršena sa puferom za blokiranje: antizečije antitelo (Jackson ImmunoResearch, #111-035-003), razblaženje je bilo 1:2000; i antimišije antitelo (Cell signaling technology, #7076), razblaženje je bilo 1:1000. Nakon 1 h inkubiranja na rt, udubljenja su isprana sa TBST. ECL podloga (Pierce, #34080) je dodata pri 30 µL po udubljenju i ploče su centrifugirane pri 2.000 rpm u trajanju od 2 min. Signal je očitan upotrebom PerkinElmer Envision čitača. Očitavanja H3K27 metilacije su normalizovana upotrebom H3 signala i zatim je procenat suzbijanja izračunat u odnosu na uzorke tretirane sa DMSO. Podaci su zatim uklopljeni u krivu odgovora na dozu upotrebom programa Helios kako bi se dobile IC50vrednosti test jedinjenja.

Western Blot analiza

[317] Reprezentativna jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju analizirana su za svoju sposobnost da selektivno suzbiju PRC2. Western blot je izvršen upotrebom standardnih tehnika molekularne biologije. Ćelije su lizirane u SDS puferu za lizu (Millipore, Cat#20-163) i koncentracije proteina su merene sa BCA proteinskim testom (Pierce, Cat# PI-23221). Antitela za western blot: anti-EZH2 (#3147), anti- H3 (#9715), anti-H3K4me1 (#9723), anti-H3K4me2 (#9725), anti-H3K4me3 (#9727), anti-H3K9me2 (#9753), anti-H3K36me2 (#9758), anti-H3K27me2 (#9755), i anti-H3K27me3 (#9756) su kupljena od Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Anti-H3K9me1 (#07-395), anti-H3K27me1 (#07-448), i anti-H3K36me1 (#07-548) su kupljena od Millipore (Billerica, MA, USA). Anti-H3K36me3 (ab9050-100) je kupljeno od Abcam (Cambridge, UK). Anti-H3K9me3 (#39161) je kupljeno od Active Motif (Carlsbad, CA, USA).

[318] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju specifično suzbijaju metilaciju PRC2 podloge H3K27. Ovo može biti pokazano sa njihovom aktivnošću da suzbijaju H3K27me2 i H3K27me3 kod više ljudskih ćelijskih linija raka, primeri obuhvataju rabdiodne ćelije (G401) i ćelije limfoma (WSU-DLCL2, KARPAS422, SU-DHL4). Selektivnost je profilisana u poređenju sa više drugih oznaka za metilaciju, na primer: H3K4me2; H3K9me2; H3K36me3; i H3K79me3.

Analiza ćelijske proliferacije

[319] B ćelija ćelijskom limfoma KARPAS422 je kultivisana upotrebom standardnih uslova kultivisanja ćelija RPMI-1640 (Invitrogen, cat #11875) dopunjena sa 15% FBS (Invitrogen, cat #10099-141) u inkubatoru sa povećanom vlažnosti vazduha na 37°C, 5% CO2. Za procenjivanja uticaja PRC2 suzbijanja ćelijske proliferacije, ćelije koje rastu eksponencijalno su posejane pri gustini od 1 × 10<5>ćelija/mL u ploči sa 12 udubljenja (Corning, cat #CLS3513). Nakon ćelijskog prosejavanja, jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju je dodato u ćelijsku podlogu (u koncentracijama u rasponu od 0 do 100100 µM, 3x ćelijsko razblaženje). Brojevi održivih ćelija su određeni svaka 3-4 dana do 14 dana upotrebom Vi-CELL (Beckman Coulter). Na dane brojenja ćelija, sveža podloga za gajenje ćelija i jedinjenje su napunjeni i ćelije su podeljene do gustine od 1 × 10<5>ćelija/mL. Ukupan broj je izražen kao podeljenepodešene održive ćelije po mL. Krive odgovora na dozu i IC50vrednosti su napravljene upotrebom Prism.

Analiza farmakokinetičkih svojstava

[320] Farmakokinetička svojstva jedinjenja kao što je trenutno obelodanjeno mogu biti određena upotrebom protokola opisanog u nastavku.

[321] Reprezentativno jedinjenje predmetnog obelodanjivanja je rastvoreno u 10% PEG300, 10% Solutol HS 15 i 80% pH 4,65 acetat pufer kako bi se dobila krajnja koncentracija od 0,2 mg/mL za intravensko (IV) i oralno davanje (PO).

[322] Za PK ispitivanja kod pacova, ukupno tri mužjaka Sprague Dawley je korišćeno za IV i PO PK ispitivanje kod pacova, respektivno. Formulisani rastvor je dat preko jednog bolusa IV pri 1 mg/kg i jednog oralnog davanja (PO) pri 2 mg/kg, respektivno. Uzorci krvi (približno 150 µL) su sakupljeni iz jugularne kanile pri odgovarajućim vremenskim tačkama.

[323] Za PK ispitivanja kod miševa, ukupno dvanaest mužjaka ICR miševa je korišćeno za IV i PK ispitivanje, respektivno. Formulisani rastvor je dat preko jednog bolusa IV pri 1 mg/kg i jednog oralnog davanja (PO) pri 2 mg/kg, respektivno. Uzorci krvi (približno 150 µL) su sakupljeni iz retro-orbitalne punkcije (∼150 µL/mišu) nakon anesteziranja sa izofluranom ili putem srčane punkcije (terminalno sakupljanje) pri odgovarajućim vremenskim tačkama (n=3).

[324] Uzorci su sakupljeni u epruvetama koje su sadržale K3-EDTA i skladišteni na ledu dok nisu centrifugirani. Uzorci krvi su centrifugirani pri približno 8000 rpm u trajanju od 6 min pri 2-8°C i dobijena plazma je odvojena i skladištena zamrznuta pri približno - 80°C. Nakon dodavanja internog standarda, uzorci plazme su kvantifikovani sa LC-MS/MS upotrebom kalibracione krive. PK parametri uključujući površinu ispod krive koncentracije (AUC), srednje vreme zadržavanja (MRT), klirens plazme (Cl), zapreminu distribucije u mirnom stanju (Vdss), polu život eliminacije (t1/2), maksimalnu koncentraciju (Cmax), vreme maksimalne koncentracije (Tmax) i oralnu bioraspoloživost (F %) su izračunati upotrebom sledećih jednačina:

t je vreme a C je koncentracija plazma u vremenu (t);

Dozaivje doza za intravensko davanje; i dozaoralnoje doza za oralno davanje.

Cl =dozaiv/AUC

t1/2= 0,693 x MRT

Vdss = Cl * MRT

F %= (dozaivx AUCoralno) / Dozaoralnox AUCiv) x 100%

Protokol za test rastvorljivosti ravnoteže visoke propusne moći

[325] Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju prvo su rastvorena pri 10 mM u čistom DMSO. 20 µL svakog od DMSO štok rastvora je zatim preneto u 6 udubljenja na ploči sa 96 udubljenja. DMSO rastvarač je osušen sa GeneVac evaporatorom rastvarača pri 30 °C, 1 mbar vakuum u trajanju od 1 h. Nakon dodavanja 200 µL puferski rastvora (pH 6,8, ili FaSSIF), ploča je zatvorena i trešena pri 160 rpm u trajanju od 24 h na rt. Ploča je centrifugirana pri 3750 rpm u trajanju od 20 min, 5 µL supernatanta je pomešano sa 495 µL MeOH/H2O (1:1).0,01 µM, 0.1 µM, 1 µM, 10 µM štok rastvora je pripremljeno serijskim razblaženjem za kalibracione krive. Supernatant je kvantifikovan sa HPLC ili LC/MS upotrebom kalibracione krive. Rastvorljivosti ravnoteže visoke propusne moći određena je na osnovu koncentracije supernatanta.

Ispitivanja efikasnosti kod ksenograft modela miševa

[326] Svi sprovedeni eksperimenti su izvršeni na ženkama atimičkih golih-nu miševa u AAALAC sertifikovanoj postavci. Životinje su držane pod SPF uslovima u pojedinačnim kavezima sa ventilacijom pri konstantnoj temperaturi i vlažnosti (tj., 20-26 °C; 40-70%) sa 5 ili manje životinja u svakom kavezu. Životinje su imale slobodan pristup suvoj hrani u granulama sterilisanoj radijacijom i sterilisanoj vodi za piće. Sve procedure i protokoli su odobreni od strane Institucijskog komiteta za brigu i upotrebu životinja.

[327] Ćelije Karpas 422 ljudskog B ćelijskog limfoma su kultivisane u RPMI-1640 podlozi (Gibco; 11875-093) dopunjenoj sa 15% FBS (Gibco; 10099-141) i 1% Pen Strep (Gibco; 15140-122) pri 37°C u okruženju od 5% CO2 u vazduhu. Ćelije su održavane u kulturama za suspenziju pri koncentracijama između 0,5 - 2 x 10<6>ćelija/ml. Ćelije su deljene u odnosu 1:3 svaka 2-4 dana. Za uspostavljanje ksenograft modela tumora ćelije su sakupljene, suspendovane u PBS, pomešane sa Matrigel (BD Bioscience) pri zapreminskom odnosu 1:1 pri koncentraciji od 1x10<8>ćelija/mL i zatim su ubrizgane potkožno u desni bok balb/c golih miševa (Vital River) pri koncentraciji od 5x10<6>ćelija po životinji.

[328] Jedinjenje je formulisano kao suspenzija u 0,5% metil celulozi (MC) i 0,5% Tween 80 u 50 mM pH6.8 puferu (pripremljeno u kućištu u skladu sa USP) i dato je oralno pri specifičnim dozama.

[329] Tretiranje je započeto kada je prosečna zapremina tumora dostigla 100-300 mm<3>. Rast tumora i telesna masa su praćeni u pravilnim intervalima. Dva najveća prečnika, širina (W) i dužina (L) ksenograft tumora su izmereni ručno sa kaliperima i zapremina tumora je procenjena upotrebom formule: 0,5 x L x W<2>.

[330] Gde je pogodno, rezultati su prikazani kao srednja vrednost ± SEM. Pravljenje dijagrama i statistička analiza izvršeni su upotrebom GraphPad Prism 5.00 (GraphPad softver). Podaci o promeni tumora i telesne mase su analizirani statistički. Ukoliko su varijanse u podacima normalno distribuirane (Bartletov test za jednake varijanse), podaci su analizirani upotrebom jednostranog ANOVA sa post hoc Dunnetovim testom za poređenje tretiranja u odnosu na kontrolnu grupu. Post hoc Tukey test je korišćen poređene unutar grupe. Inače je korišćen Kruskal-Wallis rangirani test post hoc Dunn.

[331] Kao mera efikasnosti %T/C vrednost je izračunata na kraju eksperimenta na osnovu:

(Δzapremina tumora<tretirano>/Δzapremina tumora<kontrola>)*100

Regresija tumora je izračunata na osnovu:

-(Δzapremina tumora<tretirano>/zapremina tumora<tretirano na početku>)*100

[332] Gde Δzapremine tumora predstavljaju srednje zapremine tumora na dan procenjivanja minus srednja zapremina tumora na početku eksperimenta.

[333] Dati primeri obelodanjeni ispod testirani su u EED Alphascreen vezivanju, LC-MS i/ili ELISA testa opisanim ispod i otkriveno je da imaju aktivnost suzbijanja EED. Uočen je opseg IC50vrednosti od ≤ 5 µM (5000 nM).

[334] Tabela 3 ispod daje spisak IC50vrednosti kod EED (a) Alphascreen vezivanja kvantifikovanih, (b) LC-MS kvantifikovanih i/ili (c) ELISA kvantifikovanih testova merenih za sledeće primere: „N/A“ označava „nije procenjeno“.

Tabela 3

[335] Tabela 4 ispod daje spisak antiproliferativnih aktivnosti (IC50vrednosti) kod ćelija B ćelijskog limfoma KARPAS42214 dana nakon tretiranja za sledeće primere

Tabela 4

[336] U skladu sa time, utvrđeno je da jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju suzbijaju EED i stoga su od koristi pri tretiranju bolesti ili poremećaja posredovanih sa EED i/ili PRC2 koje obuhvataju, ali nisu ograničena na, difuzni limfom velikih B ćelija (DLBCL), folikularni limfom, druge limfome, leukemiju, multipli mijelom, mezoteliom, rak želuca, maligni rabdoidni tumor, hepatocelularni karcinom, rak prostate, karcinom dojke, rakove žučnih vodova i žučne kese, karcinom bešike, tumore mozga uključujući neuroblastom, švanom, gliom, glioblastom i astrocitom, rak grlića materice, rak debelog creva, melanom, endometrijalni rak, ezofagealni rak, rak glave i vrata, rak pluća, nazofaringealni karcinom, rak jajnika, rak pankreasa, karcinom bubrežnih ćelija, rak rektuma, rakovi štitne žlezde, tumore paraštitne žlezde, tumore materice i sarkome mekog tkiva kao što su rabdomiosarkom (RMS), Kaposijev sarkom, sinovijalni sarkom, osteosarkom i Juingov sarkom.

V. FARMACEUTSKI SASTAVI I KOMBINACIJE

[337] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku obično se koriste kao farmaceutski sastavi (npr. jedinjenja prema predmetnom pronalasku i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač). „Farmaceutski prihvatljiv nosač (diluent ili ekscipijens)“ odnosi se na podlogu uopšteno prihvaćeno u struci za isporuku biološki aktivnih sredstava životinjama, naročito, sisarima, uključujući, uopšteno prepoznate kao bezbedne (GRAS) rastvarače, disperziona okruženja, obloge, surfaktante, antioksidanse, konzervanse (npr. antibakterijska sredstva, antifugalna sredstva), izotonična sredstva, sredstva za odlaganje apsorbovanja, soli, konzervanse, stabilizatore lekova, sredstva za vezivanje, sredstva za puferisanje (npr. maleinska kiselina, vinska kiselina, mlečna kiselina, limunska kiselina, sirćetna kiselina, natrijum bikarbonat, natrijum fosfat i slično), sredstva za razlaganje, maziva, sredstva za zaslađivanje, sredstva za poboljšanje ukusa, boje i slično i kombinacije navedenog, kao što bi bilo poznato stručnjacima u ovoj oblasti (videti, na primer, Allen, L.V., Jr. i dr., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 toma), 22. izdanje, Pharmaceutical Press (2012). Za svrhe ovog pronalaska, solvati i hidrati se smatraju farmaceutskim sastavima koji sadrže jedinjenje prema predmetnom pronalasku i rastvarač (tj., solvat) ili vodu (tj., hidrat).

[338] Formulacije mogu biti pripremljene upotrebom konvencionalnih postupaka rastvaranja i mešanja. Na primer, sirovina supstance leka (tj., jedinjenje prema predmetnom pronalasku ili stabilizovani oblik jedinjenja (npr. kompleks sa ciklodekstrin derivatom ili drugim poznatim sredstvom za stvaranje kompleksa)) je rastvorena u pogodnom rastvaraču u prisustvu jednog ili više iznad opisanih ekscipijenasa.

[339] Jedinjenja ovog obelodanjivanja mogu biti data za bilo koju od ovde opisanih upotreba sa bilo kojim pogodnim sredstvima, na primer, oralno, kao što su tablete, kapsule (gde svaka obuhvata formulacije za zadržano oslobađanje ili vremensko oslobađanje), pilule, praškovi, granule, eliksiri, tinkture, suspenzije (uključujući nanosuspenzije, mikrosuspenzije, disperzije sušene sprejom), sirupe i emulzije; sublingvalno; bukalno; parenteralno, kao što je subkutano, intravenski, intramuskularno ili u grudnu kost, ili tehnikama infuzije (npr. kao što su sterilni vodeni ili ne-vodeni rastvori ili suspenzije za ubrizgavanje); nazalno, uključujući davanje u nazalne membrane, kao što je inhalacioni sprej; topikalno, kao što je u obliku kreme ili masti; ili rektalno kao što je u obliku supozitorija. Mogu biti data samostalno, ali će uopšteno biti data sa farmaceutskim nosačem izabranim na osnovu izabranog načina davanja i standardne farmaceutske prakse.

[340] Jedinjenje prema predmetnom pronalasku obično je formulisano u farmaceutske oblike doziranja kako bi se pružila doza leka koja se može lako kontrolisati, , te da bi se pacijentu dao elegantan lek kojim se može lako rukovati. Režim doziranja za jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju će, naravno, zavisiti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamička svojstva određenog sredstva i njegovog režima i načina davanja; vrste, starosti, pola, zdravlja, medicinskog stanja i mase recipijenta; prirode i obima simptoma; vrste konkurentnog tretiranja; učestalosti tretiranja; načina davanja, renalne i hepatske funkcije pacijenta i željenog efekta. Jedinjenja ovog obelodanjivanja mogu biti data kao pojedinačna dnevna doza ili ukupna dnevna doza može biti data u podeljenim dozama dva, tri ili četiri puta dnevno.

[341] U određenim slučajevima, može biti pogodno dati jedinjenje prema predmetnom pronalasku u kombinaciji sa bar jednim dodatnim farmaceutskim (ili terapeutskim) sredstvom, kao što su druga sredstva protiv raka, imunomodulatori, sredstva protiv alergija, sredstva protiv mučnine (ili anti-emetici), sredstva za ublažavanje bola, citoprotektivna sredstva i kombinacije navedenog.

[342] Termin „kombinovana terapija“ odnosi se na davanje dva ili više terapeutska sredstva za tretiranje terapeutske bolesti, poremećaja ili stanja opisanog u predmetnom obelodanjivanju. Takvo davanje obuhvata zajedničko davanje ovih terapeutskih sredstava na suštinski istovremen način, kao što je u jednoj kapsuli koja ima fiksirani odnos aktivnih sastojaka. Alternativno, takvo davanje obuhvata zajedničko davanje u više, ili u odvojenim ambalažama (npr. kapsule, praškovi i tečnosti) za svaki aktivni sastojak. Jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju i dodatna terapeutska sredstva mogu biti dati istim načinom davanja ili različitim načinima davanja. Praškovi i/ili tečnosti mogu biti rekonstituisani ili razblaženi do željene doze pre davanja. Dodatno, takvo davanje takođe obuhvata upotrebu svakog tipa terapeutskog sredstva na uzastopni način, ili u približno isto vreme ili u različita vremena. U bilo kom slučaju, režim tretiranja će pružiti korisna dejstva kombinacije leka pri tretiranju ovde opisanih stanja ili poremećaja.

[343] Opšta hemoterapeutska sredstva koja se razmatraju za upotrebu u kombinovanim terapijama obuhvataju anastrozol (Arimidex®), bikalutamid (Casodex®), bleomicin sulfat (Blenoxane®), busulfan (Myleran®), busulfan injekciju (Busulfex®), kapecitabin (Xeloda®), N4-pentoksikarbonil-5-dezoksi-5-fluorocitidin, karboplatin (Paraplatin®), karmustin (BiCNU®), hlorambucil (Leukeran®), cisplatin (Platinol®), kladribin (Leustatin®), ciklofosfamid (Cytoxan® ili Neosar®), citarabin, citozin arabinozid (Cytosar-U®), citarabin lipozom injekciju (DepoCyt®), dakarbazin (DTIC-Dome®), dactinomicin (Aktinomicin D, Kosmegan), daunorubicin hidrohlorid (Cerubidine®), daunorubicin citrat lipozom injekcija (DaunoXome®), deksametazon, doketaksel (Taxotere®), doksorubicin hidrohlorid (Adriamycin®, Rubex®), etopozid (Vepesid®), fludarabin fosfat (Fludara®), 5-fluorouracil (Adrucil®, Efudex®), flutamid (Eulexin®), tezacitibin, Gemcitabin (difluorodezoksicitidin), hidroksiurea (Hydrea®), Idarubicin (Idamycin®), ifosfamid (IFEX®), irinotekan (Camptosar®), L-asparaginaza (ELSPAR®), leukovorin kalcijum, melfalan (Alkeran®), 6-merkaptopurin (Purinethol®), metotreksat (Folex®), mitoksantron (Novantrone®), milotarg, paklitaksel (Taxol®), nab-paklitaksel (Abraxane®), fenks (Yttrium90/MX-DTPA), pentostatin, polifeprosan 20 sa karmustin implantom (Gliadel®), tamoksifen citrat (Nolvadex®), tenipozid (Vumon®), 6-tioguanin, tiotepa, tirapazamin (Tirazone®), topotekan hidrohlorid za injekciju (Hycamptin®), vinblastin (Velban®), vinkristin (Oncovin®), i vinorelbin (Navelbine®).

[344] Sredstva protiv raka od naročitog interesa za kombinacije sa jedinjenjima prema predmetnom obelodanjivanju obuhvataju:

[345] Inhibitore:ciklin zavisne kinaze (CDK) (Chen, S. i dr., Nat Cell Biol., 12(11):1108-14 (2010); Zeng, X. i dr., Cell Cycle, 10(4):579-83 (2011)) Aloisine A; Alvokidib (takođe poznat kao flavopiridol ili HMR-1275, 2-(2-hlorofenil)-5,7-dihidroksi-8-[(3S,4R)-3-hidroksi-1-metil-4-piperidinil]-4-hromenon, i opisan je u patentu SAD br.5,621,002); Krizotinib (PF-02341066, CAS 877399-52-5); 2-(2-Chlorofenil)-5,7-dihidroksi-8-[(2R,3S)-2-(hidroksimetil)-1-metil-3-pirolidinil]- 4H-1-benzopiran-4-on, hidrohlorid (P276-00, CAS 920113-03-7); 1-Metil-5-[[2-[5-(trifluorometil)-1H-imidazol-2-il]-4-piridinil]oksi]-N-[4-(trifluorometil)fenil]-1H-benzimidazol-2-amin (RAF265, CAS 927880-90-8); Indisulam (E7070); Roskovitin (CYC202); 6-Acetil-8-ciklopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-on, hidrohlorid (PD0332991); Dinakiklib (SCH727965); N-[5-[[(5-terc-Butiloksazol-2-il)metil]tio]tiazol-2-il]piperidin-4-karboksamid (BMS 387032, CAS 345627-80-7); 4-[[9-Hloro-7-(2,6-difluorofenil)-5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-il]amino]-benzoevu kiselinu (MLN8054, CAS 869363-13-3); 5-[3-(4,6-Difluoro-1H-benzimidazol-2-il)-1H-indazol-5-il]-N-etil-4-metil-3-piridinmetanamin (AG-024322, CAS 837364-57-5); 4-(2,6-Dihlorobenzoilamino)-1H-pirazol-3-karboksilna kiselina N-(piperidin-4-il)amid (AT7519, CAS 844442-38-2); 4-[2-Metil-1-(1-metiletil)-1H-imidazol-5-il]-N-[4-(metilsulfonil)fenil]- 2-pirimidinamin (AZD5438,CAS 602306-29-6); Palbociklib (PD-0332991); i (2R,3R)-3-[[2-[[3-[[S(R)]-S-ciklopropilsulfonimidoil]-fenil]amino]-5-(trifluorometil)-4-pirimidinil]oksi]-2-butanol (BAY 10000394).

[346] Inhibitore kinaze kontrolne tačke (CHK): (Wu, Z. i dr., Cell Death Differ., 18(11):1771-9 (2011)) 7-Hidroksistaurosporin (UCN-01); 6-Bromo-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-5-(3R)-3-piperidinil-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-amin (SCH900776, CAS 891494-63-6); 5-(3-Fluorofenil)-3-ureidotiofen-2-karboksilna kiselina N-[(S)-piperidin-3-il]amid (AZD7762, CAS 860352-01-8); 4-[((3S)-1-Azabiciklo[2.2.2]oct-3-il)amino]-3-(1H-benzimidazol-2-il)-6-hlorokvinolin-2(1H)-on (CHIR 124, CAS 405168-58-3); 7-Aminodaktinomicin (7-AAD), Izogranulatimid, debromohimenialdizin; N-[5-Bromo-4-metil-2-[(2S)-2-morfolinilmetoksi]-fenil]-N'-(5-metil-2-pirazinil)urea (LY2603618, CAS 911222-45-2); Sulforafan (CAS 4478-93-7, 4-Metilsulfinilbutil izotiocianat); 9,10,11,12-Tetrahidro- 9,12-epoksi-1H-diindolo[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]pirolo[3,4-i][1,6]benzodiazocin-1,3(2H)-dion (SB-218078, CAS 135897-06-2); i TAT-S216A (YGRKKRRQRRRLYRSPAMPENL), i CBP501 ((d-Bpa)sws(d-Phe-F5)(d-Cha)rrrqrr); i (αR)-α-amino-N-[5,6-dihidro-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-6-okso-1H-pirolo[4,3,2-ef][2,3]benzodiazepin-8-il]-Cikloheksanacetamid (PF-0477736).

[347] Inhibitori proteinske kinaze B (PKB) ili AKT: (Rojanasakul, Y., Cell Cycle, 12(2):202-3 (2013); Chen B. i dr., Cell Cycle, 12(1):112-21 (2013)) 8-[4-(1-Aminociklobutil)fenil]-9-fenil-1,2,4-triazolo[3,4-f][1,6]naftiridin-3(2H)-on (MK-2206, CAS 1032349-93-1); Perifozin (KRX0401); 4-Dodecil-N-1,3,4-tiadiazol-2-il-benzensulfonamid (PHT-427, CAS 1191951-57-1); 4-[2-(4-Amino-1,2,5-oksadiazol-3-il)-1-etil-7-[(3S)-3-piperidinilmetoksi]-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il]-2-metil-3-butin-2-ol (GSK690693, CAS 937174-76-0); 8-(1-Hidroksietil)-2-metoksi-3-[(4-metoksifenil)metoksi]- 6H-dibenzo[b,d]piran-6-on (palomid 529, P529, ili SG-00529); Tricirbin (6-Amino-4-metil-8-(β-D-ribofuranosil)-4H,8H-pirolo[4,3,2-de]pirimido[4,5-c]piridazin); (αS)-α-[[[5-(3-Metil-1H-indazol-5-il)-3-piridinil]oksi]metil]-benzenetanamin (A674563, CAS 552325-73-2); 4-[(4-Hlorofenil)metil]-1-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-4-piperidinamin (CCT128930, CAS 885499-61-6); 4-(4-Hlorofenil)-4-[4-(1H pirazol-4-il)fenil]-piperidin (AT7867, CAS 857531-00-1); i Arheksin (RX-0201, CAS 663232-27-7).

[348] C-RAF inhibitore: (Chang, C. i dr., Cancer Cell, 19(1):86-100 (2011)) Sorafenib (Nexavar®); 3-(Dimetilamino)-N-[3-[(4-hidroksibenzoil)amino]-4-metilfenil]-benzamid (ZM336372, CAS 208260-29-1); i 3-(1-cijano-1-metiletil)-N-[3-[(3,4-dihidro-3-metil-4-okso-6-kvinazolinil)amino]-4-metilfenil]-benzamid (AZ628, CAS 1007871-84-2).

[349] inhibitorefosfoinositid 3-kinaze (PI3K): (Gonzalez, M. i dr., Cancer Res., 71(6): 2360-2370 (2011)) 4-[2-(1H-Indazol-4-il)-6-[[4-(metilsulfonil)piperazin-1-il]metil]tieno[3,2-d]pirimidin-4-il]morfolin (takođe poznat kao GDC 0941 i opisan je u PCT objavama br. WO 09/036082 i WO 09/055730); 2-Metil-2-[4-[3-metil-2-okso-8-(kvinolin-3-il)-2,3-dihidroimidazo[4,5-c]kvinolin-1-il]fenil]propionitril (takođe poznat kao BEZ235 ili NVP-BEZ 235, i opisan je u PCT objavi br. WO 06/122806); 4-(trifluorometil)-5-(2,6-dimorfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amin (takođe poznat kao BKM120 ili NVP-BKM120, i opisan je u PCT objavi br. WO2007/084786); Tozasertib (VX680 ili MK-0457, CAS 639089-54-6); (5Z)-5-[[4-(4-Piridinil)-6-kvinolinil]metilen]-2,4-tiazolidinedion (GSK1059615, CAS 958852-01-2); (1E,4S,4aR,5R,6aS,9aR)-5-(Acetiloksi)-1-[(di-2-propenilamino)metilen]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-oktahidro-11-hidroksi-4-(metoksimetil)-4a,6a-dimetilciklopenta[5,6]nafto[1,2-c]piran-2,7,10(1H)-trion (PX866, CAS 502632-66-8); 8-Fenil-2-(morfolin-4-il)-hromen-4-on (LY294002, CAS 154447-36-6); 2-Amino-8-etil-4-metil-6-(1H-pirazol-5-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (SAR 245409 ili XL 765); 1,3-Dihidro-8-(6-metoksi-3-piridinil)-3-metil-1-[4-(1-piperazinil)-3-(trifluorometil)fenil]-2H-imidazo[4,5-c]kvinolin-2-on, (2Z)-2-butenedioat (1:1) (BGT 226); 5-Fluoro-3-fenil-2-[(1S)-1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-4(3H)-kvinazolinon (CAL101); 2-Amino-N-[3-[N-[3-[(2-hloro-5-metoksifenil)amino]kvinoksalin-2-il]sulfamoil]fenil]-2-metilpropanamid (SAR 245408 ili XL 147); i (S)-Pirolidin-1,2-dikarboksilna kiselina 2-amid 1-({4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il}-amid) (BYL719).

[350] BCL-2 inhibitore: (Béguelin, W. i dr., Cancer Cell, 23(5):677-92(2013)) 4-[4-[[2-(4-Hlorofenil)-5,5-dimetil-1-cikloheksen-1-il]metil]-1-piperazinil]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-morfolinil)-1-[(feniltio)metil]propil]amino]-3-[(trifluorometil)sulfonil]fenil]sulfonil]benzamid (takođe poznat kao ABT-263 i opisan je u PCT objavi br. WO 09/155386); Tetrokarcin A; Antimicin; Gosipol ((-)BL-193); Obatoklaks; Etil-2-amino-6-ciklopentil-4-(1-cijano-2-etoksi-2-oksoetil)-4Hhromon-3-karboksilat (HA14 – 1); Oblimersen (G3139, Genasense®); Bak BH3 peptid; (-)-Gosipol sirćetna kiselina (AT-101); 4-[4-[(4'-Hloro[1,1'-bifenil]-2-il)metil]-1-piperazinil]-N-[[4-[[(1R)-3-(dimetilamino)-1-[(feniltio)metil]propil]amino]-3-nitrofenil]sulfonil]-benzamid (ABT-737, CAS 852808-04-9); i Navitoklaks (ABT-263, CAS 923564-51-6).

[351] Inhibitore mitogen-aktivirane proteinske kinaze (MEK): (Chang, C. J. i dr., Cancer Cell, 19(1):86-100 (2011)) XL-518 (takođe poznat kao GDC-0973, Cas No. 1029872-29-4, dostupno od ACC Corp.); Selumetinib (5-[(4-bromo-2-hlorofenil)amino]-4-fluoro-N-(2-hidroksietoksi)-1-metil-1H-benzimidazol-6-karboksamid, takođe poznat kao AZD6244 or ARRY 142886, opisano u PCT objavi br. WO2003077914); Benimetinib (6-(4-bromo-2-fluorofenilamino)-7-fluoro-3-metil-3H-benzoimidazol-5-karboksilna kiselina (2-hidroksietioksi)-amid, takođe poznat kao MEK162, CAS 1073666-70-2, opisano u PCT objavi br. WO2003077914); 2-[(2-Hloro-4-jodofenil)amino]-N-(ciklopropilmetoksi)-3,4-difluorobenzamid (takođe poznat kao CI-1040 ili PD184352 i opisan u PCT objavi br. WO2000035436); N-[(2R)-2,3-Dihidroksipropoksi]-3,4-difluoro-2-[(2-fluoro-4-jodofenil)amino]- benzamid (takođe poznat kao PD0325901 i opisan u PCT objavi br. WO2002006213); 2,3-Bis[amino[(2-aminofenil)tio]metilen]-butanedinitril (takođe poznat kao U0126 i opisan u patentu SAD br. 2,779,780); N-[3,4-Difluoro-2-[(2-fluoro-4-jodofenil)amino]-6-metoksifenil]-1-[(2R)-2,3-dihidroksipropil]- ciklopropansulfonamid (takođe poznat kao RDEA119 ili BAY869766 i opisan u PCT objavi br. WO2007014011); (3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(Etilamino)-8,9,16-trihidroksi-3,4-dimetil-3,4,9, 19-tetrahidro-1H-2-benzoksaciklotetradecin-1,7(8H)-dion] (takođe poznat kao E6201 i opisano u PCT objavi br. WO2003076424); 2'-Amino-3'-metoksiflavon (takođe poznat kao PD98059 dostupan od Biaffin GmbH & Co., KG, Germany); Vemurafenib (PLX-4032, CAS 918504-65-1); (R)-3-(2,3-Dihidroksipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-jodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidin-4,7(3H,8H)-dion (TAK-733, CAS 1035555-63-5); Pimasertib (AS-703026, CAS 1204531-26-9); Trametinib dimetil sulfoksid (GSK-1120212, CAS 1204531-25-80); 2-(2-Fluoro-4-jodofenilamino)-N-(2-hidroksietoksi)-1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karboksamid (AZD 8330); i 3,4-Difluoro-2-[(2-fluoro-4-jodofenil)amino]-N-(2-hidroksietoksi)-5-[(3-okso-[1,2]oksazinan-2-il)metil]benzamid (CH 4987655 ili Ro 4987655).

[352] Inhibitore aromataze: (Pathiraja, T. i dr., Sci. Transl. Med., 6(229):229 ra41 (2014)) Egzemestan (Aromasin®); Letrozol (Femara®); i Anastrozol (Arimidex®).

[353] Inhibitore: topoizomerazeII: </37828></37824 (Bai, J. i dr., Cell Prolif., 47(3):211-8 (2014)) Etopozid (VP-16 i Etopozid fosfat, Toposar®, VePesid® i Etopophos®); Tenipozide(VM-26, Vumon®); i Taflupozid.

[354] SRC inhibitore: (Hebbard, L., Oncogene, 30(3):301-12 (2011)) Dasatinib (Sprycel®); Sarakatinib (AZD0530, CAS 379231-04-6); Bosutinib (SKI-606, CAS 380843-75-4); 5-[4-[2-(4-Morfolinil)etoksi]fenil]-N-(fenilmetil)-2-piridineacetamid (KX2-391, CAS 897016-82-9); i 4-(2-Chloro-5-metoksianilino)-6-metoksi-7-(1-metilpiperidin-4-ilmetoksi)kvinazolin (AZM475271, CAS 476159-98-5).

[355] Inhibitore histon deacetilaze (HDAC): (Yamaguchi, J. i dr., Cancer Sci., 101(2):355-62 (2010)) Voninostat (Zolinza®); Romidepzin (Istodax®); Treihostatin A (TSA); Oksamflatin; Vorinostat (Zolinza®, Suberoilanilid hidroksamska kiselina); Piroksamid (siberoil-3-aminopiridineamid hidroksamska kiselina); Trapoksin A (RF-1023A); Trapoksin B (RF-10238); Ciklo[(αS,2S)-α-amino-η-okso-2-oksiraneoktanoil-O-metil-D-tirosil-L-izoleucil-L-prolil] (Cyl-1); Ciklo[(αS,2S)-α-amino-η-okso-2-oksiraneoktanoil-O-metil-D-tirosil-L-izoleucil-(2S)-2-piperidinekarbonil] (Cyl-2); Ciklični[L-alanil-D-alanil-(2S)-η-okso-L-αaminooksiraneoktanoil-D-prolil] (HC-toksin); Ciclo[(αS,2S)-α-amino-η-okso-2-oksiraneoktanoil-D-fenilalanil-L-leucil-(2S)-2-piperidinekarbonil] (WF-3161); Hlamidocin ((S)-Ciclic(2-metilalanil-L-fenilalanil-D-prolil-η-okso-L-α-aminooksiraneoktanoil); Apicidin (Ciklo(8-okso-L-2-aminodekanoil-1-metoksi-L-triptofil-L-izoleucil-D-2-piperidinekarbonil); Romidepzin (Istodax®, FR-901228); 4-Fenilbutirat; Spiruhostatin A; Milproin (valproična kiselina); Entinostat (MS-275, N-(2-Aminofenil)-4-[N-(piridin-3-il-metoksikarbonil)-aminometil]-benzamid); i Depudecin (4,5:8,9-dianhidro-1,2,6,7,11-pentadeoksi- D-treo-D-ido-Undeka-1,6-dienitol).

[356] Antibiotike protiv tumora: (Bai, J. i dr., Cell Prolif., 47(3):211-8 (2014)) DoKSorubicin (Adriamycin® I Rubex®); BleomIcin (lenoxane®); Daunorubicin (dauorubicin hidrohlorid, daunomicin, i rubidomicin hidrohlorid, Cerubidine®); Daunorubicin lipozomni(daunorubicin citrat lipozom, DaunoXome®); Mitoksantron (DHAD, Novantrone®); Epirubicin (Ellence™); Idarubicin (Idamycin®, Idamycin PFS®); Mitomicin C (Mutamycin®); Geldanamicin; Herbimicin; Ravidomicin; i Desacetilravidomicin.

[357] Sredstva za demetilaciju: (Musch, T. i dr., PLoS On, (5):e10726 (2010)) 5-Azacitidin (Vidaza®); i Decitabin (Dacogen®).

[358] Anti-estrogene: (Bhan, A. i dr., J Mol Biol., S0022-2836(14)00373-8 (2014)) Tamoksifen (Novaldex®); Toremifen (Fareston®); i Fulvestrant (Faslodex®).

[359] Neki pacijenti mogu iskusiti alergijske reakcije na jedinjenja prema predmetnom pronalasku i/ili druga sredstva protiv raka za vreme ili nakon davanja; prema tome, sredstva protiv alergije se često daju kako bi se minimizirao rizik od alergijske reakcije. Pogodna sredstva protiv alergije obuhvataju kortikosteroide (Knutson, S., i dr., PLoS One, DOI:10.1371/journal.pone.0111840 (2014)), kao što su deksametazon (npr. Decadron®), beklometazon (npr. Beclovent®), hidrocortizon (takođe poznat kao kortizon, hidrokortizon natrijum sukcinat, hidrokortizon natrijum fosfat, i prodaje se pod trgovinskim imenima Ala-Cort®, hidrokortizon fosfat, Solu-Cortef®, Hydrocort Acetate® i Lanacort®), prednizolon (prodaje se pod trgovinskim imenima Delta-Cortel®, Orapred®, Pediapred® i Prelone®), prednizon (prodaje se pod trgovinskim imenima Deltasone®, Liquid Red®, Meticorten® i Orasone®), metilprednizolon (takođe poznat kao 6-metilprednizolon, metilprednizolon acetat, metilprednizolon natrijum sukcinat, prodaje se pod trgovinskim imenima Duralone®, Medralone®, Medrol®, M-Prednisol® i Solu-Medrol®); antihistamine, kao što su difenhidramin (npr. Benadryl®), hidroksizin i ciproheptadin; i bronhodilatatori, kao što su agonisti beta-adrenergičkog receptora, albuterol, (npr. Proventil®), i terbutalin (Brethine®).

[360] Imunomodulatori od naročitog interesa za kombinacije sa jedinjenjima prema predmetnom obelodanjivanju obuhvataju jedno ili više od: aktivatora kostimulatornog molekula ili inhibitora molekula imunske kontrolne tačke (npr.., jednog ili više inhibitora PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 ili CTLA4) ili bilo koju kombinaciju navedenog.

[361] U određenim otelotvorenjima, imunomodulator je aktivator kostimulatornog molekula. U jednom otelotvorenju, agonist kostimulatornog molekula je izabran iz agonista (npr. agonističkog antitela ili njegovog fragmenta koji se vezuje na antitelo ili antigen ili rastvorljiva fuzija) OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 ili CD83 liganda.

[362] U određenim otelotvorenjima, imunomodulator je inhibitor molekula imunske kontrolne tačke. U jednom otelotvorenju, imunomodulator je inhibitor PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 i/ili TGFR beta. U jednom otelotvorenju, inhibitor molekula imunske kontrolne tačke suzbija PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 ili CTLA4, ili bilo konju kombinaciju navedenog. Termin „suzbijanje“ ili „inhibitor“ obuhvata smanjenje određenog parametra, npr. aktivnosti, datog molekula, npr. inhibitor imunske kontrolne tačke. Na primer, suzbijanje aktivnosti npr., PD-1 ili PD-L1 aktivnosti, od bar 5%, 10%, 20%, 30%, 40% ili više je obuhvaćeno sa ovim terminom. Stoga, suzbijanje ne mora da bude 100%.

[363] Neki pacijenti mogu iskusiti mučninu za vreme i nakon trajanja davanja jedinjenja prema predmetnom pronalasku i/ili drugih sredstava protiv raka; stoga, anti-emetici se koristi pri sprečavanju mučnine (gornji stomak) i povraćanja. Pogodni anti-emetici obuhvataju aprepitant (Emend®), ondansetron (Zofran®), granisetron HCl (Kytril®), lorazepam (Ativan®. deksametazon (Decadron®), prohlorperazin (Compazine®), casopitant (Rezonic® i Zunrisa®), i kombinacije navedenog.

[364] Lekovi za ublažavanje bola koji se javlja za vreme perioda tretiranja često se propisuju kako bi se pacijent osećao komfornije. Uobičajeni analgetici koji se izdaju bez recepta kao što je Tylenol®, često se koriste. Međutim, opioidni analgetici kao što su hidrokodon/paracetamol ili hidrokodon/acetaminofen (npr. Vicodin®), morfin (npr. Astramorph® ili Avinza®), oksikodon (npr. OxyContin® ili Percocet®), oksimorfon hidrohlorid (Opana®), i fentanil (npr. Duragesic®) su takođe veoma korisni za umereni ili jak bol.

[365] U cilju zaštite normalnih ćelija od toksičnosti tretiranja i za ograničavanje toksičnosti organa, citoprotektivna sredstva (kao što su neuroprotekanti, čistači slobodni od radikala, kardioprotektori, antraciklin ekstravazacijski neutralizatori, nutrijenti i slično) mogu biti korišćena kao dodatna terapija. Pogodna citoprotektivna sredstva obuhvataju Amifostin (Ethyol®), glutamin, dimesna (Tavocept®), mesna (Mesnex®), deksrazoksan (Zinecard® ili Totect®), ksaliproden (Xaprila®), i leukovorin (takođe poznat kao kalcijum leukovorin, citovorum faktor i folinska kiselina).

[366] Struktura aktivnih jedinjenja identifikovana sa kodnim brojevima, generičkim ili trgovinskim imenima može biti uzeta iz stvarnog izdanja standardnog kompendijuma „The Merck Index“ ili iz baza podataka, npr. Patents International (npr. IMS World Publication).

[367] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak pruža farmaceutske sastave koji sadrže bar jedno jedinjenje prema predmetnom pronalasku (npr. jedinjenja prema predmetnom pronalasku) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem pogodnim za davanje ispitaniku koji je čovek ili životinja, ili samostalno ili zajedno sa drugim sredstvima protiv raka.

[368] Takođe su obelodanjeni postupci za tretiranje ispitanika ljudi ili životinja koji boluju od ćelijske proliferativne bolesti, kao što je rak. Takođe su obelodanjeni postupci za tretiranje ispitanika ljudi ili životinja koji imaju potrebu za takvim tretiranjem, a koji obuhvataju davanje ispitaniku terapeutski delotvornu količinu jedinjenja prema predmetnom pronalasku (npr. jedinjenja prema predmetnom pronalasku) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, samostalno ili u kombinaciji sa drugim sredstvima protiv raka.

[369] Naročito, sastavi će ili biti formulisani zajedno kao kombinovano terapeutsko sredstvo ili će biti dati odvojeno.

[370] U kombinovanoj terapiji za tretiranje maligniteta, jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju i druga sredstva protiv raka mogu biti data istovremeno, konkurentno ili uzastopno bez naročitih vremenskih ograničenja, gde takvo davanje pruža terapeutski delotvorne nivoe dva jedinjenja u telu ispitanika.

[371] U poželjnom otelotvorenju, jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju i druga sredstva protiv raka uopšteno se daju uzastopno bilo kojim redom putem infuzije ili oralno. Režim doziranja može varirati u zavisnosti od stadijuma bolesti, fizičke spremnosti pacijenta, profila bezbednosti za pojedinačne lekove i tolerancije pojedinačnih lekova, kao i drugih kriterijuma dobro poznatih lekaru koji vrši lečenje i medicinskim praktikantima koji vrše davanje kombinacije. Jedinjenje prema predmetnom pronalasku i druga sredstva protiv raka mogu biti data uzastopno u periodu od nekoliko minuta, sati, dana ili čak nedelja u zavisnosti od naročitog ciklusa koji se koristi za tretiranje. Dodatno, ciklus bi mogao da obuhvata davanje jednog leka češće od drugih za vreme trajanja ciklusa tretiranja i pri različitim dozama po davanju leka.

[372] U drugom aspektu predmetnog pronalaska, dati su kompleti koji obuhvataju jedno ili više jedinjenja prema predmetnom pronalasku i partner u kombinaciji kao što je ovde obelodanjeno. Reprezentativni kompleti obuhvataju (a) jedinjenje prema predmetnom pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, (b) bar jedan partner u kombinaciji, npr. kao što je navedeno iznad, gde takav komplet može sadržati uputstvo ili drugu oznaku koja sadrži smernice za davanje.

[373] Jedinjenje prema predmetnom pronalasku može biti korišćeno za poboljšanje u kombinaciji sa poznatim terapeutskim procesima, na primer, davanje hormona ili naročito radijacija. Jedinjenje prema predmetnom pronalasku može naročito biti korišćeno kao radiosenzitizator, posebno za tretiranje tumora koji ispoljavaju nisku osetljivost na radioterapiju.

[374] U drugom aspektu predmetnog pronalaska, dati su kompleti koji obuhvataju jedno ili više jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju i partner u kombinaciji kao što je ovde obelodanjeno. Reprezentativni kompleti obuhvataju (a) jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, (b) bar jedan partner u kombinaciji, npr. kao što je navedeno iznad, gde takav komplet može sadržati uputstvo ili drugu oznaku koja sadrži smernice za davanje.

[375] U kombinovanim terapijama prema pronalasku, jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju i druga terapeutska sredstva mogu biti proizvedena i/ili formulisana od strane istog ili različitih proizvođača. Pored toga, jedinjenja prema predmetnom pronalasku i druga terapeutska sredstva (ili farmaceutska sredstva) mogu biti objedinjena u kombinovanu terapiju: (i) pre dostavljanja kombinovanog proizvoda lekarima (npr. u slučaju da komplet sadrži jedinjenje prema pronalasku i drugo terapeutsko sredstvo); (ii) od strane lekara (ili u skladu sa smernicama lekara) ubrzo nakon davanja; (iii) kod samih pacijenata, npr. za vreme uzastopnog davanja jedinjenja prema pronalasku i drugog terapeutskog sredstva.

[376] Jedinjenja prema pronalasku takođe su od koristi kao standardi ili referentna jedinjenja, na primer kao standard za kvalitet ili kontrolu, u testovima ili probama koje obuhvataju EED i/ili PRC2. Takva jedinjenja mogu biti data kao komercijalni komplet, na primer, za upotrebu u farmaceutskom istraživanju koje obuhvata aktivnost mijeloperoksidaze. Na primer, jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju može se koristiti kao referentno u testu za poređenje njegove poznate aktivnosti sa jedinjenjem nepoznate aktivnosti. Ovo će omogućiti onima koji vrše eksperiment da test bude izvršen na ispravan način i pružiti osnovu za poređenje, naročito ukoliko je test jedinjenje bio derivat referentnog jedinjenja. Kada se razvijaju novi testovi ili protokoli, jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju bi se mogla koristiti za testiranje njihove delotvornosti. Jedinjenja prema predmetnom obelodanjivanju mogu takođe biti korišćena u dijagnostičkim testovima koje uključuju EED i/ili PRC2.

[377] Farmaceutski sastav (ili formulacija) za primenu može biti zapakovan na različite načine u zavisnosti od postupka korišćenog za davanje leka. Uopšteno, artikal za distribuciju obuhvata ambalažu koja ima u sebi postavljenu farmaceutsku formulaciju u odgovarajućem obliku. Pogodne ambalaže su dobro poznate stručnima u ovoj oblasti i obuhvataju materijale kao što su bočice (plastične ili staklene), kesice, ampule, plastične kese, metalni cilindri i slično. Ambalaža može takođe obuhvatati sklop za zaštitu od otvaranja kako bi se sprečio indiskretan pristup sadržaju pakovanja. Dodatno, ambalaža ima na sebi postavljenu oznaku koja opisuje sadržaj ambalaže. Oznaka može takođe obuhvatati odgovarajuća upozorenja.

Claims (27)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule (I):

   ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde: predstavlja pojedinačnu vezu ili dvostruku vezu; R<1>i R<2>predstavljaju nezavisno H ili halogen; R<3>je nezavisno izabran iz: halogena, fenila i 5- do 6-članog heteroarila koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O i S(O)p; gde su navedeni fenil i heteroaril zamenjeni sa 0-3 R<3A>; svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C6alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, R<3C>, -OR<3C>, -C(=O)R<3D>, NR<3E>R<3F>, -C(=O)NR<3E>R<3F>, -NHC(=O)R<3D>, -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NR<3E>R<3F>, -NHS(=O)2(C1-C4alkil) i -CR<3C>R<3E>R<3G>; R<3B>je nezavisno izabran iz: OH, NR<e>R<f>, C1-C4alkoksi, -C(=O)NR<e>R<f>, -S(=O)2(C1-C4alkil), -NHC(=O)(C1-C4alkil), i 5- do 6-članog heterocikloalkila koji sadrži atome ugljenika i 1-2 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je navedeni heterocikloalkil zamenjen sa 0-2 R<c>; svaki R<3C>je nezavisno izabran iz: C3-C6cikloalkila, fenila, i 4- do 7-članog heterocikla koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je svaki deo zamenjen sa 0-2 R<c>; svaki R<3D>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila i R<3C>; R<3E>i R<3G>su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani iz: H i C1-C4alkila; svaki R<3F>je nezavisno izabran iz: H i C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<d>; R<4>je nezavisno izabran iz: H, halogena i C1-C4alkila; R<5>je nezavisno izabran iz OH i C1-C4alkila; svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, →O, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), C3-C6cikloalkila, i benzila; R<b>je nezavisno izabran iz: halogena, OH i C1-C4alkoksi; svaki R<c>je nezavisno izabran iz: =O, halogena, OH, C1-C4alkila, C1-C4haloalkila, C1-C4alkoksi, i C1-C4haloalkoksi; R<d>je nezavisno izabran iz: OH i NR<e>R<f>; R<e>i R<f>su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani iz: H i C1-C4alkila; svako p je nezavisno izabrano iz 0, 1 i 2; i m i n su, pri svakom pojavljivanju, nezavisno izabrani od 0 i 1.
2. 2. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema patentnom zahtevu 1, gde: svaki R<3A>nezavisno je izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, R<3C>, -C(=O)R<3D>, NR<3E>R<3F>, -C(=O)NR<3E>R<3F>, -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NHR<3F>, -NHS(=O)2(C1-C4alkil), -O-C3-C6

   cikloalkila, i ; R<a>je nezavisno izabran iz: H, →O, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), i C3-C6cikloalkila; R<4>predstavlja H; m je nezavisno izabrano od 0 i 1; i n je 0.
3. 3. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde: R<1>predstavlja nezavisno H ili F; R<2>predstavlja H; i R<3>je nezavisno izabran iz: fenila, i 6-članog heteroarila koji sadrži atome ugljenika i 1-2 heteroatoma izabrana iz N i NR<a>; gde su navedeni fenil i heteroaril zamenjeni sa 0-3 R<3A>.
4. 4. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, gde: R<3>je nezavisno izabran iz: fenila, piridila, pirimidila, piridazinila i pirazinila; gde je svaki deo zamenjen sa 0-3 R<3A>.
5. 5. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde: R<3>je nezavisno izabran iz: .
6. 6. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde: R<3>je nezavisno izabran iz:

   svaki R<3A>je nezavisno izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, -C(=O)NH2, -C(=O)NH(C1-C4alkil), -C(=O)N(C1-C4alkil)2, -C(=O)N(C1-C4alkil)(CH2)2N(C1-C4alkil)2, -CH2NHC(=O)(C1-C4alkil), -S(=O)2R<3D>, -S(=O)2NH(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 OH), -NHS(=O)2(C1-C4alkil), NH2, -NH(C1-C4alkil), -N(C1-C4alkil)2, C3-C6cikloalkila,

   R<3B>nezavisno je izabran iz: OH, NH2, NH(C1-C4alkil), N(C1-C4alkil)2, C1-C4alkoksi,

   -C(=O)N(C1-C4alkil)2, -S(=O)2(C1-C4alkil), i

   ; R<3D>je nezavisno izabran iz: C1-C4alkila i 1H-piperidin-4-ila; i svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), i - CO2(C1-C4alkil).
7. 7. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, gde: R<3>je nezavisno izabran iz: ; svaki R<3A>nezavisno je izabran iz: halogena, CN, -(O)m-(C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<3B>), C1-C4haloalkila, C1-C4haloalkoksi, -C(=O)NH2, -C(=O)NH(C1-C4alkil), -C(=O)N(C1-C4alkila)2, -C(=O)N(C1-C4alkila)(CH2)2N(C1-C4alkil)2, -CH2NHC(=O)(C1-C4alkil), -S(=O)2(C1-C4alkil), NH2, NH(C1-C4alkil), N(C1-C4alkil)2, C3-C6cikloalkila,

   i ; R<3B>je nezavisno izabran iz: OH, N(C1-C4alkil)2, C1-C4alkoksi,

   -C(=O)N(C1-C4alkil)2, -S(=O)2(C1-C4alkil), i

   ; i svaki R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), i -CO2(C1-C4alkil).
8. 8. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, gde: svaki R<3A>je nezavisno izabran izabran iz: F, Cl, CH3, -CH2OH, CH2F, CHF2, CF3, CN, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -OCHF2, -C(=O)N(CH3)2, -CH2NHC(=O)CH3, -S(=O)2CH3, NH2, ciklopropila, .
9. 9. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, gde navedeno jedinjenje ima Formulu (IA-1):

   ili farmaceutski prihvatljiva so navedenog, gde: R<1>predstavlja nezavisno H ili F; i R<3A>je nezavisno izabran iz: F, CH3, -CH2OH, CH2F, CHF2, CF3, i -OCH3.
10. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde: R<1>predstavlja nezavisno H ili F; R<2>predstavlja H; R<3>predstavlja nezavisno 5-člani heteroaril koji sadrži atome ugljenika i 1-4 heteroatoma izabrana iz N, NR<a>, O, i S(O)p; gde je navedeni heteroaril zamenjen sa 0-3 R<3A>; i R<a>je nezavisno izabran iz: H, C1-C4alkila zamenjenog sa 0-1 R<b>, -C(=O)H, -C(=O)(C1-C4alkil), -CO2(C1-C4alkil), C3-C6cikloalkila i benzila.
11. 11. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1, 2 ili 10, gde: R<3>je nezavisno izabran iz: ,

    i .
12. 12. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, gde: R<1>predstavlja F.
13. 13. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje izabrano iz:
14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje:

    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje:

    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
16. 16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje:

    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
17. 17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje:

    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
18. 18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje:

    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
19. 19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je navedeno jedinjenje:

    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
20. 20. Farmaceutski sastav, koji sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 19.
21. 21. Farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 20, koji dalje sadrži bar jedno dodatno terapeutsko sredstvo.
22. 22. Farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 21, gde je navedeno terapeutsko sredstvo izabrano iz drugih sredstava protiv raka, imunomodulatora, sredstava protiv alergija, anti-emetika, sredstava protiv bolova, citoprotektivnih sredstava i kombinacija navedenog.
23. 23. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 19, za upotrebu pri terapiji.
24. 24. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 19, za upotrebu kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 23, gde navedena terapija tretira bolest ili poremećaj posredovan sa EED i/ili PRC2.
25. 25. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 19 za upotrebu kao što je zahtevano u patentnom zahtevu 24, gde su navedena bolest ili poremećaj izabrani iz difuznog limfoma velikih B ćelija (DLBCL), folikularnog limfoma, drugih limfoma, leukemije, multiplog mijeloma, mezotelioma, raka želuca, malignog rabdoidnog tumora, hepatocelularnog karcinoma, raka prostate, karcinoma dojke, rakova žučnih vodova i žučne kese, karcinoma bešike, tumora mozga uključujući neuroblastom, švanom, gliom, glioblastom i astrocitom, raka grlića materice, raka debelog creva, melanoma, endometrijalnog raka, ezofagealnog raka, raka glave i vrata, raka pluća, nazofaringealnog karcinoma, raka jajnika, raka pankreasa, karcinoma bubrežnih ćelija, raka rektuma, rakova štitne žlezde, tumora paraštitne žlezde, tumora materice i sarkoma mekog tkiva.
26. 26. Kombinacija jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 19, i bar jedno dodatno terapeutsko sredstvo.
27. 27. Kombinacija prema patentnom zahtevu 26, gde je dodatno terapeutsko sredstvo izabrano iz drugih sredstava protiv raka, imunomodulatora, sredstava protiv alergija, anti-emetika, sredstava protiv bolova, citoprotektivnih sredstava i kombinacija navedenog. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5