CN111518100A - 环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物、其药学上可接受的盐及其溶剂化物。本发明也提供了该类化合物的制备方法、含有该类化合物的组合物以及该类化合物用于制备治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关疾病或障碍的药物用途。

Description

环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物及其应用
技术领域
本发明涉及新颖的环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物及它们的同位素标记物。本发明也提供了该类化合物的制备方法、含有该类化合物的组合物和作为治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关疾病的药物用途。
背景技术
PcG(Polycomb Group)蛋白是一类重要的染色质修饰酶。它通过对染色质的修饰达到调控基因的转录，从而对干细胞的生长、分化及长期的细胞记忆有重要作用。在哺乳动物细胞中，PcG蛋白主要分为两类转录抑制复合物，分别是PRC1(Polycomb RepressiveComplex 1)和PRC2(Polycomb Repressive Complex 2)。其中，PRC2是通过对染色质中组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)的甲基化修饰来抑制相关基因的表达。PRC2蛋白复合物主要由EZH2(Enhancer of Zeste Homolog 2)(或其非常类似的同源蛋白EZH1)，EED(Embryonicectoderm Development)以及SUZ12(Suppressor of Zeste 12)等核心蛋白组成。其中，EZH2具有酶催化活性，通过SET(Su(var),E(Z)，and Trithorax)蛋白结构域能够把底物SAM(S-adenosyl-L-methionine)的甲基转移到H3K27上，从而达到H3K27的一到三甲基化修饰。EZH2的酶催化活性也依赖于PRC2其他组成部分，比如属于WD40重复结构蛋白家族的EED蛋白。EED与三甲基化的H3K27Me3的结合作用一方面对EZH2的酶催化功能有很大的变构促进作用，另一方面也能把PCR2复合物定位在需要修饰的染色质上。PRC2的功能异常，比如EZH2的过表达或功能获得性突变，与临床上许多肿瘤疾病相关，包括肺癌，乳腺癌，直肠癌，前列腺癌，膀胱癌，胰腺癌，肉瘤以及淋巴癌等等。PRC2也与多种细胞免疫功能相关，比如EZH2参与调节淋巴细胞活化，也能与糖酵解共同促进T细胞对肿瘤细胞的应答。因此，研发PRC2小分子抑制剂有重要且广阔的药物开发价值。
围绕PRC2抑制剂的研发主要是开发EZH2抑制剂以及EED抑制剂两个策略。目前进入临床的EZH2抑制剂有EPZ-6438(Epizyme，临床二期)，GSK2816126(GSK，临床一期)，以及CPI-1205(Constellation,临床一期)等等。尽管EZH2抑制剂研发有多个进入临床研究阶段，但这些抑制剂都含有一个共同的2-吡啶酮的药效团。并且，在用已有EZH2抑制剂于临床治疗中，已经开始出现二次突变。EED抑制剂对EZH2酶功能有变构抑制的作用，可以达到与EZH2相同或类似的生物功能。而且一方面EED抑制剂很好的克服了EZH2的耐药性问题，另一方面EED抑制剂可以与EZH2抑制剂联用达到更好的协同作用效果，因此，开发新的EED抑制剂具有非常重要的意义。
发明内容
本发明提供的环丙烯并苯并呋喃取代的氮杂芳基化合物是一类全新的EED抑制剂，表现出对肿瘤细胞很好的抑制活性，具有广阔的药物开发前景。
第一方面，本发明提供式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物：
Figure BDA0002276228310000021
其中，
X独立地为C或N；
R2独立地为H或卤素(例如氟)；
R3独立地为H或卤素(例如氟)；
R4独立地为H或卤素(例如氟)；
n独立地为0或1；
当X＝C时，n为1，形成吡啶并嘧啶结构
Figure BDA0002276228310000022
当X＝N时，n为0，形成三唑并嘧啶结构
Figure BDA0002276228310000023
R1独立地为氢、卤素(例如氟、溴或碘)、氰基、R1a取代或未取代的C1-8烷基(所述C1-8烷基例如C1-4烷基，可以是甲基、乙基、正丙基或异丙基)、C1-8卤代烷基(例如C1-4卤代烷基)、R1a取代或未取代的C3-8环烷基(所述C3-8环烷基例如环己基)、R1b取代或未取代的C3-8环烷基(所述C3-8环烷基例如环己基)、R1b取代或未取代的C3-8杂烷基(所述的C3-8杂烷基优选为具有1至3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的C3-8杂烷基，例如
Figure BDA0002276228310000024
)、R1c取代或未取代的烯基(所述烯基例如C2-10烯基，优选C2-6烯基，更优选乙烯基)、R1b取代或未取代的C5-8环烯基(所述C5-8环烯基例如
Figure BDA0002276228310000025
)、R1b取代或未取代的C5-8杂环烯基(所述C5-8杂环烯基优选为具有1至3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的C5-8杂环烯基，例如
Figure BDA0002276228310000031
Figure BDA0002276228310000032
)、0-3个R1d取代的C6-10芳基(所述C6-10芳基例如苯基)或0-3个R1d取代的“具有C1-20碳原子及1-4个独立选自N、NR1d1、O或S(O)0-2的杂原子的杂芳基”(所述C1-20碳原子优选为C1-10碳原子，所述杂芳基优选为5-12元杂芳基，例如
Figure BDA0002276228310000033
Figure BDA0002276228310000034
)；
每个R1a和R1b各自独立地为C1-4烷氧基、-C(＝O)NR1de1R1de2、C1-4烷基(例如甲基)、C1-4卤代烷基(例如三氟甲基)、氨基、保护基团保护的氨基(所述的保护基团可以为
Figure BDA0002276228310000035
R5a为C1-4烷基或C1-4烷氧基；例如
Figure BDA0002276228310000036
可以为叔丁氧羰基)、氟；
每个R1c独立地为C1-4烷基或酯基(例如
Figure BDA0002276228310000037
其中R5b为C1-4烷基)；
每个R1d独立地为卤素(例如氟、氯、溴或碘)、R1a取代或未取代的C1-4烷氧基(例如甲氧基)、R1a取代或未取代的C1-4烷基(所述C1-4烷基例如甲基、乙基、正丙基或异丙基)、-C(＝O)NR1de1R1de2(所述-C(＝O)NR1de1R1de2例如-C(＝O)NH2)、-S(＝O)2R1de3(所述-S(＝O)2R1de3例如为-S(＝O)2Me)、NR1de1R1de2(所述NR1de1R1de2例如-NH2)、R5c取代或未取代的C3-10环烷基(例如C3-8环烷基)、R5c取代或未取代的“具有C1-20碳原子及1-4个独立选自NR1de1、N、O或S(O)0-2的杂原子的杂环基”(所述C1-20碳原子优选C1-10碳原子，所述杂环基优选5-12元杂环基，例如
Figure BDA0002276228310000038
)；
每个R5c独立地为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝O)NR1de1R1de2或C1-4卤代烷基；
每个R1de1独立地为氢或C1-4烷基；
每个R1de2独立地为氢或C1-4烷基；
每个R1de3为C1-4烷基。
在另一优选例中，其中R1为氢、卤素、氰基、C1-8烷基、C1-8卤代烷基或以下任一结构：
Figure BDA0002276228310000041
其中，
每个j独立地为0、1、2或3；k为0、1、2、3或4；每个V独立地为C、N或O，且在同一环中最多同时有两个N或O；环A为含有1-3个杂原子的取代或未取代的C5-10杂芳基；每个环B独立地为含有1-4个杂原子的取代或未取代的C5-10杂芳基，其中所述杂原子独立地为N、O或S。
在另一优选例中，R1为氟、溴、碘、
Figure BDA0002276228310000042
Figure BDA0002276228310000043
在另一优选例中，式(I)所示的化合物中的
Figure BDA0002276228310000044
为
Figure BDA0002276228310000045
Figure BDA0002276228310000051
在另一优选例中，式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，所述式(I)为如下式(Ia)，
Figure BDA0002276228310000052
其中：
R1、R2、R3和R4的定义如上所述。
进一步优选例中，所述式(Ia)选自：
Figure BDA0002276228310000053
Figure BDA0002276228310000061
Figure BDA0002276228310000071
Figure BDA0002276228310000081
Figure BDA0002276228310000091
在另一优选例中，式(I)为式(Ib)，
Figure BDA0002276228310000101
其中R1、R2、R3和R4的定义如上所述。
进一步优选例中，所述式(Ib)选自：
Figure BDA0002276228310000102
Figure BDA0002276228310000111
本发明还提供如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物的同位素标记化合物，所述同位素选自2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。式(I)化合物中能够被同位素标记的原子包括但不局限于氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘等，它们可分别被同位素2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I等代替。
本发明还提供式(I)化合物的制备方法，包含如下步骤：
Figure BDA0002276228310000112
其中，W代表卤素，优选Br；X、n、R1、R2、R3和R4的定义如上所述。
在选例中，化合物I-A的制备方法，包含如下步骤：
卤代中间体A与相应的硼酸、硼酸酯或硼酸盐在偶联的条件下，生成化合物I-A。
Figure BDA0002276228310000113
其中，R1A选自
Figure BDA0002276228310000121
W、X、n、j、k、R1b、R1c、R1d、R2、R3、R4、环A和环B的定义如上所述。
本发明还提供化合物A的制备方法，包含以下步骤：
氯代中间体B在碱性条件下被中间体胺C取代得到卤代A。
反应方程式如下：
Figure BDA0002276228310000122
其中，W、X、n、R2、R3和R4的定义如上所述。
本发明还提供化合物C1及其盐的制备方法，反应流程如下：
化合物C1-1与1,2二卤代乙烷(如1,2二溴乙烷)反应得到化合物C1-2，C1-2经过消除反应(如叔丁醇钾处理)后得到化合物C1-3，C1-3与对甲苯磺酰肼缩合得到磺酰腙C1-4，C1-4关呋喃并三元环反应得到化合物C1-5，C1-5的溴原子催化条件下被氰基取代得到化合物C1-6，氰基还原成胺基并原位Boc酸酐保护得到C1-7，C1-7脱去保护基得到C1。
Figure BDA0002276228310000131
其中，Z代表卤素(例如氯、溴或碘)。
本发明所涉及到的溶剂选自：二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、二氧六环、DMF、乙腈、DMSO、NMP、THF或其组合。
本发明所涉及到的碱包括有机碱和无机碱。
本发明所涉及到的有机碱选自：TEA、DIPEA或其组合。
本发明所涉及到的无机碱选自：氢化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、叔丁醇钾、叔丁醇钠、LiHMDS、LDA、丁基锂或其组合。
本发明所述的式(I)所示化合物的同位素标记化合物可通过与未标记化合物类似的合成方法来制备，所不同的是把未标记的起始原料和/或试剂换成同位素标记的起始原料和/或试剂。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物以及药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料可以为稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。
本发明还提供了如上所述的式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物在制备治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关的癌症药物方面的用途。
优选地，所述癌症包括但不局限于包括扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、宫颈癌、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等等。
优选地，所述化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物与其他药物联合使用；更优选地，所述其他药物选自抗癌药、肿瘤免疫药物、抗过敏药、止吐药、镇痛药或细胞保护药物。
本发明还提供了一种药物制剂，其包含如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物，可以合适的方式服用，比如作为片剂、胶囊(如持续释放或定时释放的胶囊)、药丸、粉末、颗粒(如小颗粒)、酏剂、酊剂、悬浮液(如纳米混悬液、微悬浮液)和喷雾干燥的分散体等形式的悬浮物、糖浆、乳液、溶液等形式，可用于口服、舌下含服、包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射、注入等形式的注射、鼻部服用(比如鼻膜吸入)、局部表面(如乳霜和药膏)、直肠给药(如栓剂)等等方式。本发明公开的化合物可以单独服用也可以与适当的药物载体一起服用。
本发明还提供了前述的药物制剂可配方成适当的药物剂量以方便并控制药物的服用量。本发明公开的化合物的剂量方案根据具体的因素有所不同，比如药效学及服用的方式、服用对象、性别、年龄、健康状况以及服药对象的体重、病情特征、其它同时服药状况、服药的频率、肝肾功能以及想达到的效果等等。本发明公开的化合物可以每天单剂量的服用，也可以总剂量分多次服用(比如每天两至四次)。
本发明还提供了一种治疗癌症的方法，其包括向需要此治疗的患者给予治疗有效量的如上所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物，或如上所述的药物组合物。所述的癌症包括但不局限于包括扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、宫颈癌、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等等。
本发明还提供了式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或前述同位素标记化合物与其他药物联合使用，所述其他药物选自：抗癌药、肿瘤免疫药物、抗过敏药、止吐药、镇痛药、细胞保护药物等等，一起联用具有更好的效果。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
术语说明
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。
基团定义
可在参考文献(包括Carey and Sundberg"ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4THED."Vols.A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/VIS光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-CH2O-等同于-OCH2-。
本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。
在本文中定义的某些化学基团前面通过简化符号来表示该基团中存在的碳原子总数。例如，C1-6烷基是指具有总共1至6个碳原子(如1,2,3,4,5,6个碳原子)的如下文所定义的烷基。简化符号中的碳原子总数不包括可能存在于所述基团的取代基中的碳。
除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
在本申请中，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
“羟基”是指-OH基团。
“羰基”是指-C(＝O)-基团。当
Figure BDA0002276228310000161
中的R为羰基时，
Figure BDA0002276228310000162
为
Figure BDA0002276228310000163
“氰基”是指-CN。
“氨基”是指-NH2。
“酯基”是指
Figure BDA0002276228310000164
R可以为烷基、烯基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、芳基烷基或杂芳基烷基等。
“酰胺”是指
Figure BDA0002276228310000165
每个R可以独立地为氢、烷基、烯基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、芳基烷基或杂芳基烷基等。
“取代的氨基”是指被一个或两个如下文所定义的烷基、烷基羰基、芳烷基、杂芳烷基取代的氨基，例如，单烷基氨基、二烷基氨基、烷基酰氨基、芳烷基氨基、杂芳烷基氨基。
“羧基”是指-COOH。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分(例如用在卤素取代的烷基等基团中)，术语“烷基”是指完全饱和的直链或支链的烃链基，仅由碳原子和氢原子组成、具有例如1至12个(优选为1至8个，更优选为1至6个，更优选为1至4个)碳原子，且通过单键与分子的其余部分连接，例如包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、辛基、壬基和癸基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“卤代烷基”是指烷基(如本发明中所定义)中的一个或多个氢原子被卤素(如本发明中所定义)所取代，卤素的个数可以为一个或多个；当卤素的个数为多个时，卤素相同或不同。例如，氟代烷基是指烷基被一个或多个氟取代。卤代烷基的例子包括但不限于三氟甲基和二氟甲基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“烯基”意指仅由碳原子和氢原子组成、含有至少一个双键、具有例如2至14个(优选为2至10个，更优选为2至6个，更优选为2至4个)碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团，例如但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烃基”意指仅由碳原子和氢原子组成的稳定的非芳香族单环或多环烃基，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系，具有3至15个碳原子，优选具有3至10个碳原子，更优选具有3至8个碳原子，且其为饱和或不饱和并可经由任何适宜的碳原子通过单键与分子的其余部分连接。除非本说明书中另外特别指明，环烃基中的碳原子可以任选地被氧化。环烃基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、1H-茚基、2,3-二氢化茚基、1,2,3,4-四氢-萘基、5,6,7,8-四氢-萘基、8,9-二氢-7H-苯并环庚烯-6-基、6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚烯基、5,6,7,8,9,10-六氢-苯并环辛烯基、芴基、二环[2.2.1]庚基、7,7-二甲基-二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.1.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛烯基、二环[3.2.1]辛烯基、金刚烷基、八氢-4,7-亚甲基-1H-茚基和八氢-2,5-亚甲基-并环戊二烯基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烷基”意指饱和的环烃基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烯基”意指具有至少一个双键(如碳碳双键)的环烃基。环烯基可以通过其中的双键的原子与分子的其余部分连接。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂环基”意指由2至14个碳原子以及1至6个选自氮、磷、氧和硫的杂原子组成的稳定的3元至20元非芳香族环状基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂环基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系；其杂环基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化；且杂环基可为部分或完全饱和。杂环基可以经由碳原子或者杂原子并通过单键与分子其余部分连接。在包含稠环的杂环基中，一个或多个环可以是下文所定义的芳基或杂芳基，条件是与分子其余部分的连接点为非芳香族环原子。就本发明的目的而言，杂环基优选为包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至11元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团，更优选为包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至8元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团。杂环基的实例包括但不限于：吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、硫代吗啉基、2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-7-基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-基、氮杂环丁烷基、吡喃基、四氢吡喃基、噻喃基、四氢呋喃基、噁嗪基、二氧环戊基、四氢异喹啉基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、喹嗪基、噻唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、二氢吲哚基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、吡咯烷基、吡唑烷基、邻苯二甲酰亚氨基等。
本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂烷基”意指具有1至3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的C3-8杂烷基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“芳基”意指具有6至18个碳原子(优选具有6至10个碳原子)的共轭烃环体系基团。就本发明的目的而言，芳基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、2,3-二氢-1H-异吲哚基、2-苯并噁唑啉酮、2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等。
在本申请中，术语“芳基烷基”是指被上文所定义的芳基所取代的上文所定义的烷基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂芳基”意指环内具有1至15个碳原子(优选具有1至10个碳原子)和1至6个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至16元共轭环系基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂芳基可为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是杂芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。杂芳基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化。就本发明的目的而言，杂芳基优选为包含1至5个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至12元芳香性基团，更优选为包含1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至10元芳香性基团或者包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至6元芳香性基团。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吲哚基、呋喃基、吡咯基、三唑基、四唑基、三嗪基、吲嗪基、异吲哚基、吲唑基、异吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氮萘基、萘啶基、喹噁啉基、蝶啶基、咔唑基、咔啉基、菲啶基、菲咯啉基、吖啶基、吩嗪基、异噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、噁三唑基、噌啉基、喹唑啉基、苯硫基、中氮茚基、邻二氮杂菲基、异噁唑基、吩噁嗪基、吩噻嗪基、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩基、萘并吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,2-a]吡嗪等。
在本申请中，术语“杂芳基烷基”是指被上文所定义的杂芳基所取代的上文所定义的烷基。
在本申请中，“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。本发明权利要求书和说明书部分所述的“任选地”的取代基选自烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烃基、任选取代的杂环烃基。
在本发明中，术语“取代”或“取代基”是指一个或多个氢原子被指定的基团所代替。当没有指明取代基的个数时，取代基可以为一个或多个；当没有指明取代位置时，取代可以在任何位置，但是只有形成一个稳定的或者是化学意义上可行的化学物才是被允许的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。例如，在
Figure BDA0002276228310000191
中，当n为2时，表示苯环被2个R取代，并且每个R都有独立的选项，即2个R可以相同，也可以不同。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
本文所用术语“部分”、“结构部分”、“化学部分”、“基团”、“化学基团”是指分子中的特定片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加到分子上的化学实体。
当本发明的化合物中含有烯双键时，除非另有说明，否则本发明的化合物旨在包含E-和Z-几何异构体。
“互变异构体”是指质子从分子的一个原子转移至相同分子的另一个原子而形成的异构体。本发明的化合物的所有互变异构形式也将包含在本发明的范围内。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可能含有一个或多个手性碳原子，且因此可产生对映异构体、非对映异构体及其它立体异构形式。每个手性碳原子可以基于立体化学而被定义为(R)-或(S)-。本发明旨在包括所有可能的异构体，以及其外消旋体和光学纯形式。本发明的化合物的制备可以选择外消旋体、非对映异构体或对映异构体作为原料或中间体。光学活性的异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术进行拆分，例如采用结晶以及手性色谱等方法。
制备/分离个别异构体的常规技术包括由合适的光学纯前体的手性合成，或者使用例如手性高效液相色谱法拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)，例如可参见GeraldGübitz and Martin G.Schmid(Eds.),Chiral Separations,Methods and Protocols,Methods in Molecular Biology,Vol.243,2004；A.M.Stalcup,Chiral Separations,Annu.Rev.Anal.Chem.3:341-63,2010；Fumiss et al.(eds.),VOGEL’S ENCYCLOPEDIA OFPRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5.sup.TH ED.,Longman Scientific and TechnicalLtd.,Essex,1991,809-816；Heller,Acc.Chem.Res.1990,23,128。
在本申请中，术语“药学上可接受的盐”包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2,2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、萘二磺酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐及镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下的盐：伯胺类、仲胺类及叔胺类，被取代的胺类，包括天然的被取代胺类、环状胺类及碱性离子交换树脂，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。优选的有机碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
在本申请中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。
在本申请中，“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
本发明所述“肿瘤”包括但不限于脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、肉瘤、黑色素瘤、关节软骨瘤、胆管瘤、白血病、胃肠间质瘤、扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤等淋巴癌、组织细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌、鼻咽癌、脑癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌、口腔癌、多发性骨髓瘤、间皮瘤、恶性横纹肌样瘤、子宫内膜癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等疾病。
本文所用术语“预防的”、“预防”和“防止”包括使病患减少疾病或病症的发生或恶化的可能性。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
(i)预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为已患有该疾病或病症时；
(ii)抑制疾病或病症，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者
(iv)减轻该疾病或病症所造成的症状。
本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物系统的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。
本文所用术语“服用”、“施用”、“给药”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、局部给药和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在Goodman and Gilman,ThePharmacological Basis of Therapeutics,current ed.；Pergamon；and Remington’s,Pharmaceutical Sciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pa中讨论的那些。在优选的实施方案中，本文讨论的化合物和组合物通过口服施用。
本文所使用术语“药物组合”、“药物联用”、“联合用药”、“施用其它治疗”、“施用其它治疗剂”等是指通过混合或组合不止一种活性成分而获得的药物治疗，其包括活性成分的固定和不固定组合。术语“固定组合”是指以单个实体或单个剂型的形式向患者同时施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同药剂。术语“不固定组合”是指以单独实体的形式向患者同时施用、合用或以可变的间隔时间顺次施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同制剂。这些也应用到鸡尾酒疗法中，例如施用三种或更多种活性成分。
本领域技术人员还应当理解，在下文所述的方法中，中间体化合物官能团可能需要由适当的保护基保护。这样的官能团包括羟基、氨基、巯基及羧酸。合适的羟基保护基包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基等。合适的氨基、脒基及胍基的保护基包括叔丁氧羰基、苄氧羰基等。合适的巯基保护基包括-C(O)-R”(其中R”为烷基、芳基或芳烷基)、对甲氧基苄基、三苯甲基等。合适的羧基保护基包括烷基、芳基或芳烷基酯类。
保护基可根据本领域技术人员已知的和如本文所述的标准技术来引入和除去。保护基的使用详述于Greene,T.W.与P.G.M.Wuts,Protective Groups in OrganiSynthesis,(1999),4th Ed.,Wiley中。保护基还可为聚合物树脂。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中所用的起始物可由化学品销售商如Aldrich、TCI、Alfa Aesar、毕得、安耐吉等处购得，或者可通过已知的方法来合成。
下述实施例中，冰浴是指-5摄氏度至0摄氏度，室温是指10摄氏度至30摄氏度，回流温度一般是指溶剂常压下溶剂回流温度。反应过夜是指时间为8-15小时。下述实施例中，未限定具体操作温度的，均在室温下进行。
下述实施例中，中间体和最终产物的分离提纯是通过正相或反相色谱柱分离或者其它合适的方法。正相快速色谱柱是用乙酸乙酯和正己烷或甲醇和二氯甲烷等作为流动相。反相制备性高压液相色谱(HPLC)是用C18柱并用UV 214nm和254nm来检测，其流动相为A(水和0.1％甲酸)、B(乙腈)或者流动相A(水和0.1％碳酸氢铵)、B(乙腈)。
各实施例中：
LCMS仪器：Pump Agilent 1260 UV检测器：Agilent 1260 DAD
Mass Spectrometer API 3000
层析柱：Waters sunfire C18,4.6×50mm,5um
流动相：A-H2O(0.1％HCOOH)；B-乙腈
NMR仪器：Bruker Ascend 400M(1H NMR:400MHz；13C NMR:100MHz)。
实施例1：8-溴-5-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶(B1)
步骤一:5-溴-2-氯-4-肼基嘧啶(B1-b)的合成：
Figure BDA0002276228310000221
在50mL单口瓶中加入5-溴-2-氯-4-氯嘧啶(B1-a)(2g,8.78mmol)和乙醇(20mL)，冰浴中缓慢滴加水合肼(1.72g,53.65mmol)，悬浊液于60℃搅拌3小时。反应结束后，降至室温，析出淡黄色固体，过滤收集固体，滤饼用乙醇(5mL)洗，干燥得到淡黄色固体产物5-溴-2-氯-4-肼基嘧啶(B1-b)(1.8g，收率92％)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.06(s,1H),7.85(s,1H),4.34(s,2H)ppm。
步骤二:5-溴-8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪(B1)的合成：
Figure BDA0002276228310000231
在50mL单口瓶中加入B1-b(1.2g，5.37mmol)，原甲酸三甲酯(12mL)，三氟乙酸(1滴)，升温至100℃反应10h。反应结束后，降温至室温，旋蒸除去原甲酸三甲酯，浓缩物用硅胶柱(PE:EA＝20:1)纯化得到黄色固体产物8-溴-5-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶B1(960mg,收率77％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),8.05(s,1H)ppm；LCMS:m/z 232.9[M+H]+。
实施例2：中间体5-氯-8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶(B2)：
步骤一：吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮(B2-b)
Figure BDA0002276228310000232
在干燥的500mL单口瓶中依次加入200mL的乙醇和金属钠(2.48g,107.92mmol)，当金属钠完全反应后，依次加入1，3，5三嗪(B2-a)(35g,431.68mmol)和乙酰乙酸乙酯(51.68g,431.68mmol)。反应温度升到85℃并搅拌反应3小时。反应完毕后，把反应液旋干并倒入100mL冰水中，使用浓盐酸溶液调节反应液的pH到3-4。把析出的固体过滤并用少量冰丙酮洗涤得到黄色固体产物吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮(B2-b)(7.0g，产率:11.0％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.90(s,1H),9.42(s,1H),9.33(s,1H),7.72(d,J＝7.3Hz,1H),6.57(d,J＝7.3Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 148.1[M+H]+.
步骤二：8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮(B2-c)
Figure BDA0002276228310000233
在干燥的250mL单口瓶中依次加入150mL的0.4M的氢氧化钠水溶液，碘(12.56g,49.48mmol)和吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮(B2-b)(5.60g,38.06mmol)。反应温度升到80℃并搅拌反应18小时。反应完毕后，把析出的固体过滤并用少量水洗涤得到黄色固体产物8-碘代吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮(B2-c)(8.0g，77％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),9.43(s,1H),9.33(s,1H),8.14(s,1H)ppm；LCMS:m/z 274.1[M+H]+.
步骤三：5-氯-8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶(B2)
Figure BDA0002276228310000241
在干燥的250mL单口瓶中依次加入100mL的三氯氧磷和8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮(B2-c)(8.0g,29.30mmol)。反应温度升到110℃并搅拌反应24小时。反应完毕后，把反应液旋干并倒入100mL冰水中，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。有机相依次用水(20mL×1)，饱和食盐水(20mL×1)洗涤。收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。用柱层析法(乙酸乙酯:石油醚＝1:10)纯化得到黄色固体5-氯-8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶(B2)(4.5g，52.7％产率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.75(s,1H),9.64(s,1H),9.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z292.0[M+H]+.
实施例3：(5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C1)
步骤一：中间体2-溴-6-(2-溴乙氧基)-3-氟苯甲醛(C1-b)：
Figure BDA0002276228310000242
在250mL单口瓶中加入2-溴-3-氟-6-羟基苯甲醛(C1-a)(19g，86.7mmol)，加入无水DMF(90mL)搅拌溶解，依次加入碳酸钾(24g，173.5mmol)，1,2-二溴乙烷(24g,130.1mmol)，升温至64℃，搅拌18个小时。反应结束后，降至室温，加入乙酸乙酯(400mL)稀释，搅拌15分钟，过滤除去不溶性盐，滤饼用乙酸乙酯(100mL)洗涤一次，滤液用饱和氯化钠(100mL)洗涤两次，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压浓缩，粗品经短硅胶柱快速纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50：1)，得到中间体2-溴-6-(2-溴乙氧基)-3-氟苯甲醛(C1-b)(25g，88％产率),为黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.52-10.27(m,1H),7.40-7.09(m,1H),7.02-6.78(m,1H),4.53-4.05(m,2H),3.68(t,J＝6.0Hz,2H)ppm.
步骤二：中间体2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)苯甲醛(C1-c)：
Figure BDA0002276228310000251
在1L单口瓶中加入2-溴-6-(2-溴乙氧基)-3-氟苯甲醛(C1-b)(10g，30.7mmol)，加入无水四氢呋喃(400mL)搅拌溶解，降温至-20℃，分批次缓慢加入叔丁醇钠(4.4g，46.0mmol)。加入结束后，升温至室温搅拌过夜。反应结束后，降温至-10℃，缓慢滴加水(60mL)淬灭，加入乙酸乙酯(100mL)萃取，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝80:1至30:1)得到2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)苯甲醛(C1-c)(5g，66％产率),为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.32(d,J＝9.8Hz,1H),7.29(dt,J＝16.2,8.3Hz,1H),7.15-6.98(m,1H),6.68-6.46(m,1H),4.89-4.68(m,1H),4.68-4.42(m,1H)ppm.
步骤三：中间体(E)-N'-(2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)亚苄基)-4-甲基苯磺酰肼(C1-d)：
Figure BDA0002276228310000252
在250mL单口瓶中加入2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)苯甲醛(C1-c)(5g，20.4mmol)，加入无水甲醇(100mL)搅拌溶解，室温下缓慢加入对甲苯磺酰肼(4.2g，22.4mmol)，室温搅拌18个小时。反应结束后，析出大量白色固体，降温至0℃，过滤收集固体产物，母液浓缩，固体粗品用混合溶剂石油醚和乙酸乙酯(20:1)打浆，收集固体产物，减压干燥得到(E)-N'-(2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)亚苄基)-4-甲基苯磺酰肼(C1-d)(7.5g，89％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.81(s,1H),7.97(s,1H),7.76(d,J＝7.6Hz,2H),7.42(t,J＝9.0Hz,2H),7.16(dd,J＝9.1,4.3Hz,1H),6.67(dd,J＝13.6,6.2Hz,1H),4.49(dd,J＝21.4,9.8Hz,3H),2.35(s,3H)ppm；LCMS:m/z 414.1[M+H]+.
步骤四：中间体6-溴-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃(C1-e)：
Figure BDA0002276228310000253
在250mL单口瓶中加入(E)-N'-(2-溴-3-氟-6-(乙烯氧基)亚苄基)-4-甲基苯磺酰肼(C1-d)(3g，7.3mmol)，加入甲苯(100mL)搅拌溶解，室温下缓慢加入叔丁醇锂(639mg，7.9mmol)，锌铑酸二聚物(56mg，72.6μmmol)氮气保护，升温至100℃搅拌3个小时。反应结束后，降温至室温，过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤，滤液减压浓缩，得到6-溴-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃(C1-e)(1.67g，100％产率)，为淡黄色油状物，直接投入下一步反应，无需进一步纯化。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03-6.81(m,2H),4.97(t,J＝5.2Hz,1H),2.84(dt,J＝9.0,4.4Hz,1H),1.26(dt,J＝8.0,6.1Hz,1H),0.55-0.37(m,1H)ppm.
步骤五：中间体5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-甲腈(C1-f)：
Figure BDA0002276228310000261
在100mL单口瓶中加入6-溴-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃(C1-e)(1.9g，8.30mmol)，氰化锌(1.46g，12.4mmol)，四三苯基膦钯(1.44g,1.24mmol)，DMF(12mL)，氮气保护，升温至110℃搅拌18个小时。反应结束后，降温至室温，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，过滤，滤液用饱和食盐水(10mL)洗涤二次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经由硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1至20:1)得到5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-甲腈(C1-f)(1.35g，92％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03-6.84(m,2H),4.97(t,J＝5.2Hz,1H),2.84(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),1.33-1.20(m,1H),0.52-0.40(m,1H)ppm.
步骤六：中间体叔-丁基((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-g)：
Figure BDA0002276228310000262
在100mL单口瓶中加入5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-甲腈(C1-f)(1.2g,6.8mmol)，加入甲醇(30mL)溶解，室温加入二-叔-丁基二碳酸酯(2.2g，10.3mmol)，降温至-5℃，缓慢加入六水合氯化镍(1.95g，8.22mmol)，分批次加入硼氢化钠固体(778mg，20.5mmol)，自然升温至室温搅拌2个小时。反应结束后，用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(10mL)洗涤，滤液降温至0℃，用水(5mL)淬灭，减压浓缩，粗品加入乙酸乙酯(80mL),有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经由硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1至40:1)得到叔-丁基((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-g)(1.2g，63％产率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),4.90(s,1H),4.82(t,J＝5.3Hz,1H),4.48(d,J＝6.1Hz,1H),4.46-4.33(m,1H),2.85(d,J＝3.8Hz,1H),1.44(s,9H),1.05(dd,J＝14.6,6.0Hz,1H),0.32(s,1H)ppm；LCMS:m/z 224.1[M-55]+.
步骤七：中间体叔-丁基((5-氟-1aS,6bS-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-h)和((5-氟-1aR,6bR-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-i)：
Figure BDA0002276228310000271
将叔-丁基((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-g)(1.2g，4.3mmol)通过如下的手性SFC进一步纯化:柱:AD-H 20x250 mm，10um(Daicel),流速:80g/min,流动相:13％(0.2％氨气甲醇/甲醇)在CO2中，检测:214nM，得到叔-丁基((5-氟-1aS,6bS-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-h)(0.57g,47.5％产率)，Rt:0.71min；和((5-氟-1aR,6bR-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸酯(C1-i)(0.52g,43.3％产率)，Rt:0.99min.
C1-h:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.98-4.73(m,2H),4.45(ddd,J＝41.3,14.0,5.7Hz,2H),2.84(s,1H),1.45(d,J＝7.7Hz,9H),1.05(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),0.31(d,J＝4.6Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 224.1[M-55]+.
C1-i:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝9.3Hz,1H),6.64(dd,J＝8.6,3.9Hz,1H),4.98-4.73(m,2H),4.45(ddd,J＝41.3,14.0,5.7Hz,2H),2.84(s,1H),1.45(d,J＝7.7Hz,9H),1.05(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),0.31(d,J＝4.6Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 224.1[M-55]+.
步骤八：中间体(5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C)
Figure BDA0002276228310000272
在100mL单口瓶中加入化合物叔丁基((5-氟-1a，6b-二氢-1H-环丙[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(C1-g)(1.2g,4.30mmol)，加入二氯甲烷(20mL)溶解，室温下加入三氟乙酸(4mL，52mmol)，并搅拌2小时，反应结束后，减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸得到无色固体(5-氟-1a，6b-二氢-1H-环丙基[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C1)的三氟乙酸盐酸盐，1.26g，收率100％。产物可直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.84(dd,J＝8.8,4.0Hz,1H),4.97(t,J＝5.4Hz,1H),4.31(q,J＝13.7Hz,2H),2.92-2.77(m,1H),1.26-1.11(m,1H),0.38-0.21(m,1H)ppm；LCMS:m/z 180.1[M+H]+.
用步骤八的方法分别用中间体C1-h和C1-i为原料得到((1aS,6bS)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C2)和((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C3)
Figure BDA0002276228310000281
实施例4：8-溴-N-((5-氟-1a，6b二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-C]嘧啶-5-胺(A-1)
Figure BDA0002276228310000282
在100mL单口瓶中依次化合物(5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙基[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C1)的三氟乙酸盐(1.0g,3.41mmol),8-溴-5-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶(B1)(0.95g，4.09mmol)，三乙胺(0.69g，6.82mmol)，乙腈(20mL)，室温搅拌3小时，反应结束后，加入乙酸乙酯(80mL)稀释溶解，有机相用饱和食盐水(10mL*2)洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析纯化(流动相：PE:EA＝30:1至PE:EA＝10:1)得到化合物8-溴-N-((5-氟-1a,6b二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-C]嘧啶-5-胺(A-1)(1.2g,收率94％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.87(d,J＝4.5Hz,1H),7.85(s,1H),6.94(t,J＝9.5Hz,1H),6.77(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.92(t,J＝5.2Hz,1H),4.79(p,J＝9.7Hz,1H),2.88(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),0.97(dd,J＝14.4,5.7Hz,1H),0.10(s,1H)ppm；LCMS:m/z376.0[M+H]+.
使用实施例4的方法，用B1分别和C2和C3反应得到中间体A-2和A-3。
Figure BDA0002276228310000283
Figure BDA0002276228310000291
实施例5：
Figure BDA0002276228310000292
在100mL单口瓶中依次化合物((1aS,6bS)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲胺(C2)的三氟乙酸盐(1.0g,3.41mmol),5-氯-8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶(B2)(1.2g，4.09mmol)，三乙胺(0.87g，8.53mmol)，乙腈(20mL)，升温至75℃反应2-3h，反应结束后，降温至室温，加入乙酸乙酯(100mL)稀释溶解，有机相用饱和食盐水(20mL*2)洗，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱层析纯化得到产物N-((5-氟-1a，6b二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-碘吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺(A-4)(1.2g，收率81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.42(s,1H),9.20(s,1H),8.75(s,1H),6.81(t,J＝9.4Hz,1H),6.78-6.60(m,1H),6.12(s,1H),5.04(dd,J＝14.2,5.9Hz,1H),4.95-4.81(m,2H),2.97-2.84(m,1H),1.07(dt,J＝17.0,8.5Hz,1H),0.45-0.26(m,1H)ppm；LCMS:m/z 435.0[M+H]+.
实施例6：N-(((1aS,6bS)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000293
在25mL单口瓶中依次加入化合物8-溴-N-(((1aS,6bS)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺(A-2)(50mg,0.13mmol)，(2-甲基吡啶-3-基)硼酸盐酸盐35mg,0.20mmol)，碳酸钾(36mg,0.266mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(15mg,0.02mmol)，1,4-二氧六环(4mL)，H2O(1mL)，反应升温至80℃于氮气氛围下反应2h，反应结束后，降温至室温，加入乙酸乙酯(20mL)稀释溶解，有机相用水(5mL*2)洗，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱层析纯化(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到化合物8-溴-N-(((1aS,6bS)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺(25mg,收率48％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(s,1H),8.54(d,J＝4.8Hz,1H),7.72(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.22(dd,J＝7.6,5.0Hz,1H),6.80(t,J＝9.4Hz,1H),6.69(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),6.46(t,J＝5.3Hz,1H),5.01(dd,J＝14.2,5.8Hz,1H),4.97-4.82(m,2H),2.96(dt,J＝9.0,4.6Hz,1H),2.54(s,3H),1.08(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),0.34(s,1H)ppm；LCMS:m/z 389.1[M+H]+.
使用实施例6的方法，可以合成以下化合物：
实施例7：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000301
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(s,1H),8.54(d,J＝4.8Hz,1H),7.72(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.22(dd,J＝7.6,5.0Hz,1H),6.80(t,J＝9.4Hz,1H),6.69(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),6.46(t,J＝5.3Hz,1H),5.01(dd,J＝14.2,5.8Hz,1H),4.97-4.82(m,2H),2.96(dt,J＝9.0,4.6Hz,1H),2.54(s,3H),1.08(dd,J＝14.8,6.0Hz,1H),0.34(s,1H)ppm；LCMS:m/z 389.1[M+H]+.
实施例8：N-(((1a,6b)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000302
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),8.54(d,J＝4.5Hz,1H),7.72(d,J＝7.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.19-7.14(m,1H),6.79(t,J＝9.3Hz,2H),6.68(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),5.08-4.97(m,1H),4.97-4.75(m,2H),3.00-2.93(m,1H),2.54(s,3H),0.92-0.42(m,1H),0.33(s,1H)ppm；LCMS:m/z 389.1[M+H]+.
实施例9：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-(三氟甲基)苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000311
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.87(t,J＝4.9Hz,1H),8.27(d,J＝8.2Hz,2H),8.09(s,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,2H),6.84(dd,J＝22.7,13.4Hz,1H),6.65(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.89-4.69(m,3H),2.80(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),0.86(dt,J＝8.8,5.8Hz,1H),0.01(s,1H)ppm；LCMS:m/z 442.0[M+H]+.
实施例10：8-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000312
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),8.75(t,J＝4.9Hz,1H),7.67(s,1H),7.35(s,1H),6.93(t,J＝9.5Hz,1H),6.76(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.91(dd,J＝14.4,9.3Hz,1H),4.89-4.77(m,2H),4.29(s,2H),3.85(t,J＝5.4Hz,2H),2.89(dt,J＝8.9,4.5Hz,1H),2.51(s,2H),0.95(dd,J＝14.5,5.9Hz,1H),0.08(s,1H)ppm；LCMS:m/z 380.1[M+H]+.
实施例11:N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000313
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.37(s,1H),8.78(d,J＝4.5Hz,1H),7.72(dd,J＝17.7,9.7Hz,2H),7.32(dd,J＝13.4,6.7Hz,1H),7.20(dd,J＝15.7,8.3Hz,2H),6.82(t,J＝9.5Hz,1H),6.65(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),4.81(t,J＝4.8Hz,1H),4.73(p,J＝9.9Hz,2H),2.85-2.75(m,1H),0.91-0.83(m,1H),0.01(s,1H)ppm；LCMS:m/z 392.0[M+H]+.
实施例12:N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(嘧啶-5-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000321
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(d,J＝5.7Hz,3H),9.15(s,1H),9.10(s,1H),8.31(s,1H),6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.94(s,1H),4.89(s,2H),2.96-2.90(m,1H),0.99(dd,J＝14.6,5.8Hz,1H),0.13(s,1H)ppm；LCMS:m/z 375.8[M+H]+.
实施例13:4-(5-(((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-8-基)苯酰胺
Figure BDA0002276228310000322
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.95(s,1H),8.24(d,J＝8.2Hz,2H),8.18(s,1H),8.02(s,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(s,1H),6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.78(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),5.03-4.78(m,3H),2.94(dt,J＝8.9,4.4Hz,1H),0.98(dd,J＝14.5,5.8Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z 416.9[M+H]+.
实施例14:N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000323
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(s,1H),8.55(s,1H),8.51(d,J＝4.8Hz,1H),7.66(s,1H),7.36(d,J＝5.0Hz,1H),6.82(t,J＝9.5Hz,1H),6.71(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),6.36(s,1H),5.04(d,J＝13.9Hz,1H),4.96-4.83(m,2H),2.96(d,J＝4.2Hz,1H),2.32(s,3H),1.10(dd,J＝14.4,6.2Hz,1H),0.36(s,1H)ppm；LCMS:m/z 388.9[M+H]+.
实施例15：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000331
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,1H),7.83(t,J＝8.0Hz,1H),7.62(s,1H),6.83(dd,J＝17.2,8.0Hz,2H),6.71(dd,J＝8.6,3.5Hz,1H),6.24(s,1H),5.03(d,J＝10.1Hz,1H),4.89(d,J＝22.4Hz,2H),2.97(s,1H),2.48(s,3H),0.86(d,J＝6.9Hz,1H),0.36(s,1H)ppm；LCMS:m/z407.1[M+H]+.
实施例16：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000332
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(s,1H),8.01-7.95(m,2H),7.87(s,1H),7.17(t,J＝8.4Hz,2H),6.80(d,J＝9.6Hz,1H),6.71(d,J＝3.8Hz,1H),5.79(s,1H),5.03(s,1H),4.86(s,2H),2.99-2.91(m,1H),1.10(dd,J＝14.6,6.2Hz,1H),0.36(s,1H)ppm；LCMS:m/z392.12[M+H]+.
实施例17：4-(5-(((5-氟-1a，6b-二氢-1H-环丙基[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基)-[1,2,4]三唑并[4,3]叔丁基-c]嘧啶-8-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002276228310000333
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.76(t,J＝4.8Hz,1H),7.68(s,1H),7.25(s,1H),6.93(t,J＝9.5Hz,1H),6.76(dd,J＝8.6,3.6Hz,1H),4.92(t,J＝5.1Hz,1H),4.87-4.76(m,2H),4.07(s,2H),3.56(s,2H),2.89(dt,J＝8.8,4.4Hz,1H),2.54(s,2H),1.43(s,9H),0.96-0.91(m,1H),0.08(s,1H)ppm；LCMS:m/z 478.9[M+H]+.
实施例18：8-(3,5-二甲基异噻唑-4-基)-N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000341
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.87(t,J＝4.7Hz,1H),7.67(s,1H),6.99-6.92(m,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),4.94(t,J＝5.1Hz,1H),4.89-4.79(m,2H),2.94(dt,J＝8.9,4.4Hz,1H),2.37(s,3H),2.19(s,3H),0.98(dd,J＝14.6,5.9Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z392.8[M+H]+.
实施例19：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-氟吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000342
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(d,J＝1.2Hz,1H),9.23(s,1H),8.51(d,J＝1.2Hz,1H),8.29(d,J＝5.4Hz,1H),8.26-8.19(m,1H),8.10(s,1H),6.96(t,J＝9.5Hz,1H),6.79(dd,J＝8.8,3.9Hz,1H),5.06-4.80(m,3H),2.92(dt,J＝9.2,4.6Hz,1H),0.98(dd,J＝9.2,5.4Hz,1H),0.12(ddd,J＝5.9,3.9,1.8Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 393.1[M+H]+.
实施例20：8-(2,4-二氟苯基)-N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000343
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.92(s,1H),7.91(q,J＝8.3Hz,1H),7.80(s,1H),7.49-7.33(m,1H),7.30-7.14(m,1H),6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.9Hz,1H),5.05-4.75(m,3H),2.93(dt,J＝9.2,4.6Hz,1H),1.09-0.86(m,1H),0.13(t,J＝5.0Hz,1H)ppm；LCMS 410.1[M+H]+.
实施例21：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-(甲磺酰)苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000351
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.06(s,1H),8.45(d,J＝8.2Hz,2H),8.26(s,1H),8.00(d,J＝8.2Hz,2H),6.96(t,J＝9.5Hz,1H),6.79(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),5.06-4.80(m,3H),3.26(s,3H),2.94(dt,J＝9.1,4.6Hz,1H),0.99(dd,J＝9.7,5.1Hz,1H),0.13(t,J＝5.1Hz,1H)ppm；LCMS 452.1[M+H]+.
实施例22：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-甲氧苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000352
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),8.63(s,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,2H),7.85(s,1H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),6.83(t,J＝9.5Hz,1H),6.66(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),4.81(t,J＝5.0Hz,1H),4.74(d,J＝3.8Hz,2H),2.81(dt,J＝9.1,4.4Hz,1H),1.89(q,J＝7.8Hz,1H),0.86(dd,J＝9.3,5.3Hz,1H),0.11(s,1H)ppm；LCMS:m/z 404.1[M+H]+.
实施例23：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-吗啉代嘧啶-5-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000353
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),9.09(d,J＝3.9Hz,2H),8.83(t,J＝4.9Hz,1H),8.03(s,1H),6.94(t,J＝9.5Hz,1H),6.77(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),4.93(t,J＝4.9Hz,1H),4.85(t,J＝4.1Hz,2H),3.76(d,J＝4.4Hz,4H),3.69(d,J＝4.0Hz,4H),2.91(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),0.98(dd,J＝14.6,5.8Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z 461.18[M+H]+.
实施例24：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000361
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.06(s,1H),8.83(d,J＝4.3Hz,1H),8.09(d,J＝7.7Hz,1H),7.84(dd,J＝7.8,4.7Hz,1H),7.62(d,J＝10.9Hz,1H),7.01-6.83(m,1H),6.77(dt,J＝11.1,5.6Hz,1H),5.01-4.75(m,3H),3.02-2.92(m,1H),1.03-0.81(m,1H),0.14-0.03(m,1H)ppm；LCMS:m/z 442.8[M+H]+.
实施例25：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲氧基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000362
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.86(s,1H),8.30-8.13(m,2H),7.95(s,1H),7.14(d,J＝5.0Hz,1H),7.00-6.90(m,1H),6.79(s,1H),5.05-4.76(m,3H),3.87(s,3H),3.00-2.87(m,1H),2.07-1.94(m,1H),1.04-0.94(m,1H),0.23-0.10(m,1H)ppm；LCMS:m/z 404.8[M+H]+.
实施例26：8-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000363
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H),8.20(s,1H),7.63(s,1H),6.55(t,J＝9.3Hz,1H),6.48(dd,J＝8.5,3.7Hz,1H),6.19(s,1H),4.78(d,J＝4.9Hz,1H),4.70(dd,J＝12.4,5.4Hz,2H),3.72(s,3H),2.91-2.78(m,1H),2.16(s,3H),0.91(d,J＝8.2Hz,1H),0.17(s,1H)ppm；LCMS:m/z 319.8[M+H]+.实施例27：8-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000364
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),8.64(t,J＝4.8Hz,1H),8.28(s,1H),7.73(s,1H),6.94(t,J＝9.5Hz,1H),6.77(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),4.93(t,J＝4.9Hz,1H),4.88-4.78(m,2H),3.83(s,3H),2.95-2.88(m,1H),2.33(s,3H),0.96(dd,J＝14.6,5.8Hz,1H),0.13-0.08(m,1H)ppm；LCMS:m/z 391.9[M+H]+.
实施例28：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000371
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.08(t,J＝5.2Hz,1H),8.48(d,J＝5.3Hz,1H),8.33(s,1H),8.11(s,1H),8.00(d,J＝5.3Hz,1H),7.00-6.91(m,1H),6.78(dd,J＝8.8,3.9Hz,1H),4.91(dt,J＝16.1,3.8Hz,3H),2.96-2.89(m,1H),2.53(s,3H),1.02-0.94(m,1H),0.14-0.09(m,1H)ppm；LCMS:m/z 388.9[M+H]+.
实施例29：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(嘧啶-5-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000372
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(d,J＝6.4Hz,3H),9.15(s,1H),9.10(s,1H),8.31(s,1H),6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.93(dd,J＝14.2,9.3Hz,3H),2.92(dt,J＝9.1,4.6Hz,1H),0.99(dd,J＝14.6,5.8Hz,1H),0.13(s,1H)ppm；LCMS:m/z376.13[M+H]+.
实施例30：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000373
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.89(t,J＝4.7Hz,1H),7.96(t,J＝8.2Hz,1H),7.66(s,1H),7.15-7.08(m,1H),6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.78(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),4.94(t,J＝4.9Hz,1H),4.86(t,J＝5.0Hz,2H),2.94(dt,J＝8.9,4.4Hz,1H),2.35(s,3H),0.98(dd,J＝14.3,5.7Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z 407.1[M+H]+.实施例31：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(6-甲氧基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000381
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.88(s,1H),8.84(s,1H),8.41(d,J＝8.5Hz,1H),8.04(s,1H),6.95(t,J＝8.2Hz,2H),6.78(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),4.93(t,J＝4.9Hz,1H),4.84(d,J＝14.8Hz,2H),3.90(s,3H),2.96-2.88(m,1H),0.98(dd,J＝14.5,5.9Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z 405.14[M+H]+.
实施例32：4-(5-((((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-8-基)苯酰胺
Figure BDA0002276228310000382
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.81(s,1H),8.22-7.99(m,3H),7.96-7.74(m,3H),7.27(s,1H),6.83(t,J＝9.4Hz,1H),6.70-6.61(m,1H),4.87-4.61(m,3H),2.88-2.74(m,1H),0.93-0.81(m,1H),0.06--0.06(m,1H)ppm；LCMS:m/z 416.8[M+H]+.
实施例33：8-(6-氯吡啶-3-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000383
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),9.06(s,1H),8.98(s,1H),8.52(d,J＝8.8Hz,1H),8.12(s,1H),7.52(d,J＝8.6Hz,1H),6.83(t,J＝9.2Hz,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),4.87-4.71(m,3H),2.86-2.81(m,1H),0.90-0.83(m,1H),0.03--0.03(m,1H)ppm；LCMS:m/z408.7[M+H]+.
实施例34：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000391
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),9.06(s,1H),8.98(s,1H),8.52(d,J＝8.8Hz,1H),8.12(s,1H),7.52(d,J＝8.6Hz,1H),6.83(t,J＝9.2Hz,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),4.87-4.71(m,3H),2.86-2.81(m,1H),0.90-0.83(m,1H),0.03--0.03(m,1H)ppm；LCMS:m/z408.7[M+H]+.
实施例35：8-(2-氯吡啶-3-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000392
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),9.00(s,1H),8.48(d,J＝4.5Hz,1H),8.05(d,J＝7.5Hz,1H),7.76(s,1H),7.61-7.52(m,1H),6.99-6.92(m,1H),6.78(dd,J＝8.4,4.0Hz,1H),4.99-4.78(m,3H),2.96-2.88(m,1H),0.99(t,J＝7.4Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z408.08[M+H]+.
实施例36：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-氟吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000393
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),9.02(s,1H),8.53(t,J＝8.7Hz,1H),8.26(d,J＝4.3Hz,1H),7.96(s,1H),7.59-7.45(m,1H),6.95(t,J＝9.5Hz,1H),6.79(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),5.16-4.69(m,3H),2.94(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),1.00(dd,J＝14.6,5.8Hz,1H),0.13(s,1H)ppm；LCMS:m/z 392.8[M+H]+.
实施例37：8-(2-氨基吡啶-3-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000401
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.76(s,1H),8.00(d,J＝4.9Hz,1H),7.60(s,1H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.04-6.91(m,1H),6.78(dd,J＝8.5,3.6Hz,1H),6.72-6.60(m,1H),5.72(s,2H),4.95(t,J＝5.1Hz,1H),4.84(s,2H),3.01-2.90(m,1H),1.03(dd,J＝14.7,6.0Hz,1H),0.17(s,1H)ppm；LCMS:m/z 389.8[M+H]+.
实施例38：(3-(5-((((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-8-基)吡啶-2-基)甲醇
Figure BDA0002276228310000402
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.89(s,1H),8.61(d,J＝4.8Hz,1H),7.89(d,J＝7.6Hz,1H),7.75(s,1H),7.44(dd,J＝7.7,4.8Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.79(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),5.13(t,J＝5.7Hz,1H),4.97-4.83(m,3H),4.50(d,J＝5.7Hz,2H),2.95(dt,J＝9.2,4.7Hz,1H),0.99(dd,J＝14.5,5.9Hz,1H),0.17-0.11(m,1H)ppm；LCMS:m/z404.8[M+H]+.
实施例39：8-(2,3-二氯吡啶-4-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000403
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),9.16(s,1H),8.48(d,J＝5.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.71(d,J＝4.6Hz,1H),6.99-6.92(m,1H),6.79(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),4.97-4.92(m,1H),4.88(d,J＝9.1Hz,2H),2.97-2.91(m,1H),0.99(dd,J＝14.7,6.0Hz,1H),0.13(s,1H)ppm；LCMS:m/z 443.26[M+H]+.
实施例40：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000411
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.87(t,J＝4.7Hz,1H),8.46(s,1H),7.65(s,1H),6.95(t,J＝9.4Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.6Hz,1H),4.93(t,J＝5.2Hz,1H),4.84(qd,J＝14.7,5.0Hz,2H),4.01(s,3H),2.91(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),0.99-0.92(m,1H),0.09(s,1H)ppm；LCMS:m/z 446.13[M+H]+.
实施例41：8-(3,5-二甲基异噻唑-4-基)-N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000412
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.87(t,J＝4.7Hz,1H),7.67(s,1H),6.99-6.92(m,1H),6.78(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),4.94(t,J＝5.1Hz,1H),4.89-4.79(m,2H),2.94(dt,J＝8.9,4.4Hz,1H),2.37(s,3H),2.19(s,3H),0.98(dd,J＝14.6,5.9Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z392.8[M+H]+.
实施例:42：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-吗啉代嘧啶-5-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000413
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),9.09(d,J＝3.9Hz,2H),8.83(t,J＝4.9Hz,1H),8.03(s,1H),6.94(t,J＝9.5Hz,1H),6.77(dd,J＝8.6,3.7Hz,1H),4.93(t,J＝4.9Hz,1H),4.85(t,J＝4.1Hz,2H),3.76(d,J＝4.4Hz,4H),3.69(d,J＝4.0Hz,4H),2.91(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),0.98(dd,J＝14.6,5.8Hz,1H),0.12(s,1H)ppm；LCMS:m/z 461.18[M+H]+.
实施例43：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-(甲磺酰)苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000421
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.06(s,1H),8.45(d,J＝8.2Hz,2H),8.26(s,1H),8.00(d,J＝8.2Hz,2H),6.96(t,J＝9.5Hz,1H),6.79(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),5.06-4.80(m,3H),3.26(s,3H),2.94(dt,J＝9.1,4.6Hz,1H),0.99(dd,J＝9.7,5.1Hz,1H),0.13(t,J＝5.1Hz,1H)ppm；LCMS 452.1[M+H]+.
实施例44：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000422
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(s,1H),8.83(t,J＝4.7Hz,1H),8.78(s,1H),7.69(s,1H),7.28(s,1H),6.87(t,J＝9.5Hz,1H),6.70(dd,J＝8.7,3.5Hz,1H),4.85(t,J＝5.1Hz,1H),4.76(s,2H),3.78(s,2H),3.30(s,2H),2.83(dt,J＝8.9,4.5Hz,1H),2.69(s,2H),0.86(dd,J＝14.5,5.8Hz,1H),0.01(s,1H)ppm；LCMS:m/z 378.9[M+H]+.
实施例45：N-(((1aS,6bS)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000423
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.38(s,1H),9.32(s,1H),8.58(d,J＝4.6Hz,1H),8.31(s,1H),7.57(d,J＝7.4Hz,1H),7.25-7.21(m,1H),6.90-6.82(m,1H),6.72(dd,J＝8.8,4.1Hz,1H),6.09(s,1H),5.12(dd,J＝14.1,5.7Hz,1H),4.94(dd,J＝14.1,4.9Hz,1H),4.87(t,J＝5.5Hz,1H),3.03-2.94(m,1H),2.38(s,3H),1.10(dd,J＝14.7,5.9Hz,1H),0.39(s,1H)ppm；LCMS:m/z400.1[M+H]+.
实施例46：N-(((1aR,6bR)-5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000431
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.38(s,1H),9.32(s,1H),8.58(d,J＝4.6Hz,1H),8.31(s,1H),7.57(d,J＝7.4Hz,1H),7.25-7.21(m,1H),6.90-6.82(m,1H),6.72(dd,J＝8.8,4.1Hz,1H),6.09(s,1H),5.12(dd,J＝14.1,5.7Hz,1H),4.94(dd,J＝14.1,4.9Hz,1H),4.87(t,J＝5.5Hz,1H),3.03-2.94(m,1H),2.38(s,3H),1.10(dd,J＝14.7,5.9Hz,1H),0.39(s,1H)ppm；LCMS:m/z400.1[M+H]+.
实施例47：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(嘧啶-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000432
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.83(s,1H),9.24(s,1H),9.04(s,1H),9.01(s,2H),8.88(t,J＝4.9Hz,1H),8.48(d,J＝14.5Hz,1H),6.81(t,J＝9.5Hz,1H),6.63(dd,J＝8.7,3.7Hz,1H),4.79(d,J＝4.8Hz,3H),2.83(dt,J＝8.9,4.5Hz,1H),0.85(dd,J＝14.4,5.8Hz,1H),0.01(s,1H)ppm；LCMS:m/z 386.9[M+H]+.
实施例48：4-(5-(((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-8-基)苯酰胺
Figure BDA0002276228310000433
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.32(s,1H),8.92(s,1H),8.45(s,1H),8.02(s,1H),7.93(d,J＝7.9Hz,2H),7.73(d,J＝7.9Hz,2H),7.37(s,1H),6.95-6.88(m,1H),6.74(dd,J＝8.5,3.6Hz,1H),4.90(t,J＝5.4Hz,3H),2.97(dt,J＝10.8,5.5Hz,1H),0.94(dd,J＝14.3,5.7Hz,1H),0.09(s,1H)ppm；LCMS:m/z 427.8[M+H]+.
实施例49：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-甲基吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000441
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.23(d,J＝5.6Hz,1H),8.94(s,1H),8.49(s,1H),8.43(d,J＝4.9Hz,1H),8.24(s,1H),7.25(d,J＝4.9Hz,1H),6.92(t,J＝9.6Hz,1H),6.74(dd,J＝8.7,3.8Hz,1H),4.93-4.86(m,3H),2.97(dt,J＝8.6,4.4Hz,1H),2.05(s,3H),0.91(dd,J＝14.5,5.8Hz,1H),0.07(s,1H)ppm；LCMS:m/z 399.9[M+H]+.
实施例50：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000442
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(s,1H),9.25(s,1H),8.85(s,1H),8.27(s,1H),7.81(t,J＝8.2Hz,1H),7.06(d,J＝7.9Hz,1H),6.96-6.89(m,1H),6.78-6.72(m,1H),4.96-4.84(m,3H),2.99-2.92(m,1H),2.18(s,3H),0.93(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),0.12-0.06(m,1H)ppm；LCMS:m/z417.8[M+H]+.
实施例51：8-(3,5-二甲基异噻唑-4-基)-N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000443
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),9.28(s,1H),8.85(d,J＝4.9Hz,1H),8.29(s,1H),6.96-6.90(m,1H),6.74(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),4.95-4.83(m,3H),2.94(dt,J＝9.2,4.6Hz,1H),2.26(s,3H),2.06(s,3H),0.93(dd,J＝14.5,5.8Hz,1H),0.11-0.05(m,1H)ppm；LCMS:m/z403.8[M+H]+.
实施例52：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(2-氟吡啶-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000451
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.37(s,1H),9.09(d,J＝4.8Hz,1H),8.63(s,1H),8.27(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(d,J＝5.0Hz,1H),7.59(s,1H),6.92(t,J＝9.6Hz,1H),6.74(dd,J＝8.8,3.6Hz,1H),4.91(d,J＝4.4Hz,3H),2.94(dt,J＝8.8,4.4Hz,1H),0.95(dd,J＝14.5,5.8Hz,1H),0.11(t,J＝6.8Hz,1H)ppm；LCMS:m/z 403.8[M+H]+.
实施例53：N-((5-氟-1a,6b-二氢-1H-环丙烯并[b]苯并呋喃-6-基)甲基)-8-(4-(甲磺酰)苯基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002276228310000452
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.39(d,J＝12.6Hz,2H),8.50(s,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,2H),7.89(d,J＝8.1Hz,2H),6.84(t,J＝9.4Hz,1H),6.70(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H),6.25(s,1H),5.14(dd,J＝14.2,5.8Hz,1H),4.98-4.84(m,2H),2.98(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),1.10(dd,J＝14.5,6.1Hz,1H),0.38(s,1H)ppm；LCMS:m/z 463.1[M+H]+.
药理学及应用
EED作为PRC2蛋白复合物的主要组成部分之一，虽然并不具有酶催化的活性，但是它对PRC2的整体功能具有重要的作用。EED对PRC2的作用具体表现为两个方面：1)EED直接与三甲基化的H3K27Me3结合，这样能够把PCR2复合物定位在需要修饰的染色质上；2)EED对EZH2的酶催化功能有很大的变构促进作用。因此，开发作为变构蛋白EED的靶点化合物为提供抑制EZH2酶活性提供了新策略。而且这样的抑制剂具有比EZH2酶催化位点抑制剂具有更好或互补的优势，比如当病人对于EZH2酶抑制剂产生耐药性时，EED抑制剂同样可以起到抑制EZH2酶活性的作用。本发明公开了化合物可以作为EED靶点抑制剂，并对与EED和/或PRC2作用机理相关的疾病有治疗作用。
本发明公开化合物的生物学功能在生化以及细胞水平的测试中得到了证明。比如在生化测试中，本发明公开的化合物能够与和EED蛋白结合的H3K27Me3多肽有很强的竞争结合作用(IC50可达<10nM)。在细胞水平上，本发明公开化合物不仅可以抑制组蛋白H3K27的甲基化水平而且也可以通过这一作用抑制癌细胞的增殖。
实施例54：通过AlphaScreen(a-筛选)方法评价化合物在阻断EED与H3K27me3结合的效果
首先配置不同浓度梯度的化合物溶液。化合物粉末用DMSO溶解成母液。取1.5μl化合物母液至198.5μl反应缓冲液(25mM HEPES(pH 8.0)，50mM NaCl，0.015％Tween 20，0.5％BSA)中混匀，再用含有0.75％DMSO的上述缓冲液进行3-倍梯度稀释，同一化合物设置9个不同的测试浓度。取5μL不同浓度梯度的化合物至ProxiPlate-384 Plus,White检测板(PerkinElmer，6008280)中,每个浓度梯度设置2个平行重复。
其次进行结合阻断反应。用上述缓冲液稀释带有His6标签的全长EED蛋白(441个氨基酸)至60nM,以及生物素标记的多肽片段H3K27me3(第19-33位氨基酸)(Biotinylated-H3K27me3)至75nM。分别转移5μl浓度为75nM多肽片段以及5μl的60nM蛋白至含有化合物的检测孔内，薄膜封住检测板，室温孵育30分钟。
最后AlphaScreen方法检测。临用前，镍螯合受体珠与链霉抗生物素供体珠以1:1的比例(Perkin Elmer，产品号6760619M)混入上述反应缓冲液中，再向各检测孔中加入5μl上述预混的检测液，供体珠和受体珠终浓度均为5μg/mL。锡箔遮封住检测板，室温避光放置1小时。使用Spectra max i3上的AlphaScreen检测器读取信号。根据阳性对照(最大信号对照)和阴性对照(最小信号对照)获得的读数对AlphaScreen信号进行标准化，以给出不同浓度化合物的抑制率,之后用GraphPad Prism 5进行非线性回归分析，通过Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))剂量响应方程做出抑制曲线，得到各化合物的IC50值。
为了排除由于化合物干扰AlphaScreen检测系统而产生的假阳性，以同样的方法稀释化合物，用生物素标记的多肽Biotinylated-(His)6代替检测体系中的EED和多肽H3K27me3,孵育同等时间后，在Spectra max i3上读取信号值。以同样的方法处理数据。
结果
下表显示了本发明部分化合物的IC50值。
字母A代表IC50小于20nM；
字母B代表IC50为20nM至100nM；
Figure BDA0002276228310000461
Figure BDA0002276228310000471
Figure BDA0002276228310000481
Figure BDA0002276228310000491
Figure BDA0002276228310000501
实施例55：ELISA(H3K27三甲基化)分析
将代表性的本公开内容的化合物用DMSO中进行3-倍梯度稀释，每化合物检测10个浓度梯度，最高测定浓度为10μM。化合物200-倍稀释到在96-孔板中培养的G401细胞中(DMSO终浓度为0.5％)。给药细胞培养72小时后，ELISA方法检测组蛋白H3K27三甲基化水平。
组蛋白提取:96-孔板中化合物处理的细胞用1x PBS(10x PBS缓冲液(80g NaCl(Sigma,产品号S3014),2g KCl(Sigma,产品号60128),14.4g Na2HP04(Sigma,产品号S5136),2.4g KH2P04(Sigma,产品号P9791)至1L水中，pH至7.4)洗涤三次，每孔加入100μL0.4N HCl，置于4℃，温和振摇2小时裂解细胞。细胞裂解液再用80μL中和缓冲液(0.5M磷酸氢二钠，pH 12.5,2.5mM DTT；1％cocktail(Sigma，产品号P8340)中和(充分混匀细胞裂解液与中和缓冲液)。
ELISA检测方法:将细胞裂解液平行转移至2个384-孔检测板(PerkinElmer，OptiPlate-384HB,产品号6007290)中，一块板用于检测H3K27三甲基化水平，另一块板用于测定H3的水平，PBS调至终体积为50μL/孔，4℃包被过夜。次日，弃去孔内溶液，用TBST缓冲液(l xTBS(10x TBS:24.2g Tris(Sigma,产品号T6066),80g NaCl(Sigma，产品号S3014)至1L水中，HCl调pH至7.6),0.1％Tween-20)洗涤5次，于吸水纸上扣干水分。将70μL封闭缓冲液(TBST,5％BSA)加入已包被之反应孔中，于室温孵育1小时。弃去封闭缓冲液，加入一级抗体(30μL/孔)。所需一级抗体均用封闭缓冲液稀释，稀释倍数如下：抗H3K27me3抗体(CellSignaling Technology,产品号9733)，1:2000稀释；抗H3抗体(Cell SignalingTechnology,产品号4499),1：10000稀释。加入一抗后，置室温孵育1小时。TBST洗涤5次后，扣干水分，各反应孔加入二级抗体(30μL/孔)，室温孵育1小时。二级抗体(抗兔抗体(Jackson ImmunoResearch,产品号111-035-003))用封闭缓冲液稀释2000倍后使用。1小时后，TBST洗涤，扣干水分。于各孔中加入30μL的ECL底物(Pierce，产品号34080)，2000rpm离心30秒。利用Molecular Devices，SpectraMax检测各样品信号。数据处理：H3K27甲基化读数先用H3信号进行标准化，0.5％DMSO处理的样品作为对照，计算出化合物的抑制百分率。采用GraphPad prisim5程序将数据拟合为剂量响应曲线，得到测试化合物的IC50值。
结果
下表显示了本发明部分化合物的IC50值。
字母A代表IC50小于20nM；
字母B代表IC50为20nM至100nM；
字母C代表IC50为100nM以上
Figure BDA0002276228310000511
Figure BDA0002276228310000521
Figure BDA0002276228310000531
Figure BDA0002276228310000541
实施例56：细胞增殖分析
采用标准细胞培养条件，人类B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞KARPAS-422S培养在培养瓶中。培养基为含15％胎牛血清(FBS，Invitrogen，产品号10099-141)，1％青霉素/链霉素溶液(P/S)RPMI-1640(Invitrogen，产品号11875)，培养瓶置于温度37℃，相对湿度95％，5％CO2的无菌培养箱中培养。为了检测PRC2抑制剂对细胞增殖的影响，取指数生长期的细胞，以1x104细胞/孔的密度接种到96孔板(Corning，产品号3904)中，每孔加入100μL培养基。随后，将本文公开内容的、不同浓度的化合物加入到已接种细胞的孔中(每个化合物设置9个浓度梯度，最高检测浓度为10μM,3-倍梯度稀释)，每个处理浓度设置2个平行重复，DMSO终浓度为0.5％。之后每隔3～4天用Vi-CELL(Beckman Coulter)测定存活细胞数。每次计过数的细胞以同等密度(1X 104个细胞/孔)接种到新的96-孔板中，补充新鲜培养基至100μL，同时加入不同浓度的化合物。培养至第13天，每孔加入100μL的CellTiter-Glo(CTG)(Promega,产品号G7573),室温避光放置10～20分钟，利用Molecular Devices,SpectraMaxi3X读取发光信号。采用GraphPad prisim5将数据拟合为剂量响应曲线，从而得到测试化合物的IC50值。
结果
下表显示了本发明部分化合物的IC50值。
字母A代表IC50小于20nM；
字母B代表IC50为20nM至100nM；
字母C代表IC50为100nM以上
Figure BDA0002276228310000542
Figure BDA0002276228310000551
Figure BDA0002276228310000561
Figure BDA0002276228310000571
本发明公开的化合物可用于治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关的癌症，包括但不局限于包括扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤等等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、宫颈癌、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤等等。

Claims (17)

1.一种如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，
Figure FDA0002276228300000011
其中，
X独立地为C或N；
R2独立地为H或卤素(例如氟)；
R3独立地为H或卤素(例如氟)；
R4独立地为H或卤素(例如氟)；
n独立地为0或1；
当X＝C时，n为1，形成吡啶并嘧啶结构
Figure FDA0002276228300000012
当X＝N时，n为0，形成三唑并嘧啶结构
Figure FDA0002276228300000013
R1独立地为氢、卤素(例如氟、溴或碘)、氰基、R1a取代或未取代的C1-8烷基(所述C1-8烷基例如C1-4烷基，可以是甲基、乙基、正丙基或异丙基)、C1-8卤代烷基(例如C1-4卤代烷基)、R1a取代或未取代的C3-8环烷基(所述C3-8环烷基例如环己基)、R1b取代或未取代的C3-8环烷基(所述C3-8环烷基例如环己基)、R1b取代或未取代的C3-8杂烷基(所述的C3-8杂烷基优选为具有1至3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的C3-8杂烷基，例如
Figure FDA0002276228300000014
)、R1c取代或未取代的烯基(所述烯基例如C2-10烯基，优选C2-6烯基，更优选乙烯基)、R1b取代或未取代的C5-8环烯基(所述C5-8环烯基例如
Figure FDA0002276228300000015
)、R1b取代或未取代的C5-8杂环烯基(所述C5-8杂环烯基优选为具有1至3个独立选自氮、氧或硫的杂原子的C5-8杂环烯基，例如
Figure FDA0002276228300000016
Figure FDA0002276228300000017
)、0-3个R1d取代的C6-10芳基(所述C6-10芳基例如苯基)或0-3个R1d取代的“具有C1-20碳原子及1-4个独立选自N、NR1d1、O或S(O)0-2的杂原子的杂芳基”(所述C1-20碳原子优选为C1-10碳原子，所述杂芳基优选为5-12元杂芳基，例如
Figure FDA0002276228300000021
Figure FDA0002276228300000022
)；
每个R1a和R1b各自独立地为C1-4烷氧基、-C(＝O)NR1d1R1d2、C1-4烷基(例如甲基)、C1-4卤代烷基(例如三氟甲基)、氨基、保护基团保护的氨基(所述的保护基团可以为
Figure FDA0002276228300000023
R5a为C1-4烷基或C1-4烷氧基；例如
Figure FDA0002276228300000024
可以为叔丁氧羰基)、氟；
每个R1c独立地为C1-4烷基或酯基(例如
Figure FDA0002276228300000025
其中R5b为C1-4烷基)；
R1d独立地为卤素(例如氟、氯、溴或碘)、R1a取代或未取代的C1-4烷氧基(例如甲氧基)、R1a取代或未取代的C1-4烷基(所述C1-4烷基例如甲基、乙基、正丙基或异丙基)、-C(＝O)NR1d1R1d2(所述-C(＝O)NR1d1R1d2例如-C(＝O)NH2)、-S(＝O)2R1d3(所述-S(＝O)2R1d3例如为-S(＝O)2Me)、NR1d1R1d2(所述NR1d1R1d2例如-NH2)、R5c取代或未取代的C3-10环烷基(例如C3-8环烷基)、R5c取代或未取代的“具有C1-20碳原子及1-4个独立选自NR1d1、N、O或S(O)0-2的杂原子的杂环基”(所述C1-20碳原子优选C1-10碳原子，所述杂环基优选5-12元杂环基，例如
Figure FDA0002276228300000026
)；
每个R5c独立地为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝O)NR1d1R1d2或C1-4卤代烷基；
每个R1d1独立地为氢或C1-4烷基；
每个R1d2独立地为氢或C1-4烷基；
每个R1d3为C1-4烷基。
2.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，其中R1为氢、卤素、氰基、C1-8烷基、C1-8卤代烷基或以下任一结构：
Figure FDA0002276228300000031
其中，
每个j独立地为0、1、2或3；k为0、1、2、3或4；每个V独立地为C、N或O，且在同一环中最多同时有两个N或O；环A为含有1-3个杂原子的取代或未取代的C5-10杂芳基；每个环B独立地为含有1-4个杂原子的取代或未取代的C5-10杂芳基，其中所述杂原子独立地为N、O或S。
3.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，其中，R1为氟、溴、碘、
Figure FDA0002276228300000032
Figure FDA0002276228300000033
4.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，其中，
式(I)所示的化合物中的
Figure FDA0002276228300000041
为
Figure FDA0002276228300000042
Figure FDA0002276228300000043
5.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，所述式(I)为如下式(Ia)，
Figure FDA0002276228300000044
其中：
R1、R2、R3和R4的定义如权利要求1所述。
6.如权利要求5所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，所述化合物选自：
Figure FDA0002276228300000045
Figure FDA0002276228300000051
Figure FDA0002276228300000061
7.如权利要求1所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，所述式(I)为如下式(Ib)，
Figure FDA0002276228300000062
其中R1、R2、R3和R4的定义如权利要求1所述。
8.如权利要求7所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物，所述化合物选自：
Figure FDA0002276228300000063
Figure FDA0002276228300000071
9.一种如权利要求1-8任一项所述的式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物的同位素标记化合物，所述同位素选自2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。
10.一种如式(I)所示的化合物的制备方法，包括如下步骤：
卤代中间体化合物A进行偶联反应后得到式(I)，反应方程式如下：
Figure FDA0002276228300000072
其中，W代表卤素，优选Br；X、n、R1、R2、R3和R4的定义如权利要求1所述。
11.一种中间体化合物A的制备方法，包括以下步骤：
氯代吡啶、嘧啶或吡嗪中间体B在碱性条件下被中间体C取代得到中间体A，反应方程式如下：
Figure FDA0002276228300000073
其中，W、X、n、R2、R3和R4的定义如权利要求10所述。
12.一种中间体化合物C1的制备方法，包括以下步骤：
化合物C1-1与1,2二卤代乙烷(例如1,2二溴乙烷)反应得到化合物C1-2，C1-2经过消除反应后得到化合物C1-3，C1-3与对甲苯磺酰肼缩合得到磺酰腙C1-4，C1-4关呋喃并三元环反应得到化合物C1-5，C1-5的溴原子催化条件下被氰基取代得到化合物C1-6，氰基还原成胺基并原位Boc酸酐保护得到C1-7，C1-7脱去保护基得到C1，
Figure FDA0002276228300000081
其中，Z代表卤素(例如氯、溴或碘)。
13.中间体化合物，
Figure FDA0002276228300000082
其中W、X、n、R2、R3和R4的定义如权利要求10所述。
14.如权利要求1-10中任一项所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或权利要求9所述的同位素标记化合物在制备用于治疗与EED蛋白和/或PRC2蛋白复合物作用机理相关的癌症的药物中的应用。
15.如权利要求14所述的应用，所述癌症选自扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤、胃癌、恶性横纹肌样瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、脑瘤包括神经母细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤和星形细胞瘤、宫颈癌、结肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、子宫肿瘤和软组织肉瘤；优选扩散大B细胞淋巴癌、滤泡性淋巴瘤等淋巴癌；
优选地，所述化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或权利要求9所述的同位素标记化合物与其他药物联合使用；优选地，所述其他药物选自抗癌药、肿瘤免疫药物、抗过敏药、止吐药、镇痛药或细胞保护药物。
16.一种药物组合物，包含如权利要求1-8中任一项所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或权利要求9所述的同位素标记化合物，以及药学上可接受的辅料。
17.一种药物制剂，包含如权利要求1-8中任一项所述的如式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体或其溶剂化物或权利要求9所述的同位素标记化合物，所述药物制剂选自片剂、胶囊、药丸、粉末、颗粒、酏剂、酊剂、悬浮物、糖浆、乳液和溶液；
优选地，
所述药物制剂的给予方式选自口服、舌下含服、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、胸骨内注射、鼻部服用、局部表面给药和直肠给药；
和/或，所述药物制剂每天单次服用或多次服用。
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