RO121598B1 - Conjugati anticorp-colorant pentru structurile tinta ale angiogenezei la reprezentarea intraoperatorie a marginilor tumorale - Google Patents
Conjugati anticorp-colorant pentru structurile tinta ale angiogenezei la reprezentarea intraoperatorie a marginilor tumorale Download PDFInfo
- Publication number
- RO121598B1 RO121598B1 ROA200200323A RO200200323A RO121598B1 RO 121598 B1 RO121598 B1 RO 121598B1 RO A200200323 A ROA200200323 A RO A200200323A RO 200200323 A RO200200323 A RO 200200323A RO 121598 B1 RO121598 B1 RO 121598B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- antibody
- dye conjugates
- disease
- angiogenesis
- dye
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title description 33
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 title description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 40
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 40
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000034038 Pathologic Neovascularization Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 75
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- -1 4-sulfobutyl Chemical group 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 201000003511 ectopic pregnancy Diseases 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 3
- ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N isothiocyanate group Chemical group [N-]=C=S ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 229940122659 Angiogenesis stimulant Drugs 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000001022 rhodamine dye Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000007998 vessel formation Effects 0.000 description 2
- QBPPRVHXOZRESW-UHFFFAOYSA-N 1,4,7,10-tetraazacyclododecane Chemical compound C1CNCCNCCNCCN1 QBPPRVHXOZRESW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 10H-phenothiazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3SC2=C1 WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHIITNFQDPFSES-UHFFFAOYSA-N 25,26,27,28-tetrazahexacyclo[16.6.1.13,6.18,11.113,16.019,24]octacosa-1(25),2,4,6,8(27),9,11,13,15,17,19,21,23-tridecaene Chemical class N1C(C=C2C3=CC=CC=C3C(C=C3NC(=C4)C=C3)=N2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 MHIITNFQDPFSES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057765 Procedural complication Diseases 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- DBZJJPROPLPMSN-UHFFFAOYSA-N bromoeosin Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C(O)C(Br)=C1OC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 DBZJJPROPLPMSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical class C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 description 1
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 description 1
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M merocyanine Chemical compound [Na+].O=C1N(CCCC)C(=O)N(CCCC)C(=O)C1=C\C=C\C=C/1N(CCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C2O\1 DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 1
- 108010067933 oncofetal fibronectin Proteins 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229950000688 phenothiazine Drugs 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 208000001608 teratocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0058—Antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0039—Coumarin dyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
- A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Inventia se refera la conjugati coloranti-anticorpi, adecvati pentru a se prinde de structurile vaselor noi formate, si la utilizarea acestora pentrureprezentarea intraoperatorie a angiogenezei patologice.
Description
Invenția se referă la conjugați de anticorp-colorant, adecvați pentru a se prinde de structurile vaselor noi formate, și la utilizarea acestora pentru reprezentarea intraoperatorie a angiogenezei patologice.
în organismul matur nu are loc, cu mici excepții (de exemplu la ciclul femeii apte de naștere) nici o formare de vase. Totuși formarea unor noi vase se poate observa în cazul a numeroase boli. Procesul deformare a unor noi vase este denumit angiogeneză și ia naștere ca răspuns la anumite semnale.
Angiogeneză este un proces care are loc cu precădere în zona marginală a focarului bolii. Din centrul focarului bolii sunt eliberați factori care difuzează către zona marginală a focarului bolii. Acești factori sunt denumiți și stimulatori de angiogeneză. Atunci când acești stimulatori de angiogeneză ating țesuturile sănătoase din zona marginală a unui focar de boală, sunt stimulate vase neimplicate până în acel moment în focarul boli, pentru a forma noi muguri de vase (de angiogeneză). Vasele care se dezvoltă din acești muguri formează o nouă rețea de vase capilare, în zona marginală a focarului bolii. Prin acest proces se asigură în permanență furnizarea de hrană adecvată pentru focarul bolii. Deosebit de important este faptul dovedit că creșterea tumorilor și metastazelor acestora depinde de capacitatea de a induce angiogeneză.
Terapia chirurgicală constituie în prezent o măsură standard pentru tratarea focarelor localizate de boală. O semnificație deosebită s-a dovedit a avea în tratamentul tumoral. S-a constatat însă și faptul că, în pofida tehnicilor chirurgicale îmbunătățite, numărul recidivelor locale este semnificativ, deoarece condițiile anatomice din organismul uman permit rareori îndepărtarea extinsă a focarului de boală. în multe organe (de exemplu creier), trebuie să se renunțe la o îndepărtare extinsă, pentru a obține țesuturi sănătoase. Riscul de vătămare a organelor sănătoase crește cu radicalitatea intervenției chirurgicale.
Cercetări histologice ale zonei marginale a tumorii, după îndepărtarea pe cale chirurgicală a tumorii, au arătat totuși că multe tumori nu pot fi îndepărtate complet și resturi de tumori pot rămâne în corpul uman. Din aceste resturi tumorale, poate porni o nouă creștere tumorală și chiar metastazarea tumorii. Un procedeu care să redea cu exactitate marginile unui proces de îmbolnăvire în raport cu țesutul sănătos, în timpul tratamentului chirurgical, ar permite îndepărtarea completă a focarului bolii și protejarea țesutului sănătos.
Coloranți de punere în evidență a focarului bolii sunt cunoscuți (Poon WS și colab., J. Neurosurgery (1992) 76:679-686, Haglund MM și colab., Neurosurgery (1996) 38:308317). Aceștia sunt de preferință preluați direct de celulele tumorale sau se concentrează în mod nespecific în spațiul extracelularal tumorii. Deoarece mecanismul concentrării se poate pune în evidență și în țesutul sănătos, specificitatea și sensibilitatea substanțelor utilizate este mică.
Compuși care pot fi utilizați pentru delimitarea intraoperatorie a focarului bolii prin reprezentare selectivă a zonei marginale a unui focar de boală nu sunt cunoscuți până în prezent.
Angiogeneză are loc de preferință în zona marginală a focarelor bolii. Prin reprezentarea angiogenezei poate fi pusă în evidență marginea țesutului sănătos. Anticorpi pentru punerea în evidență a angiogenezei în focarul bolii sunt cunoscuți și sunt utilizați pentru reprezentarea vaselor nou formate în probe histologice de țesuturi, pentru punerea în evidență a diferitelor proteine din focarul bolii sau ca molecule suport pentru substanțe terapeutice.
Totuși nu sunt cunoscuți anticorpi în combinație cu coloranți, așa numiții conjugați anticorp-colorant, care să poată fi folosiți pentru delimitarea intraoperatorie a focarului bolii, prin reprezentarea selectivă a zonei marginale a unui focar de boală.
RO 121598 Β1
Obiectivul prezentei invenții constă în prepararea de conjugați anticorp-colorant, 1 pentru reprezentarea interoperativă a marginilortumorale. Anticorpii din conjugatul anticorpcolorant, conform invenției, sunt direcționați către structuri care sunt specifice pentru pro- 3 cesul angiogenezei. Conjugații anticorp-colorant, conform invenției, cuprind coloranți care, prin concentrare, permit o reprezentare optică. Deoarece angiogeneza este cel mai puternic 5 evidențiată în zona marginală a focarului bolii, în această zonă apare semnalul optic cel mai pronunțat. Conjugații anticorp-colorant, conform invenției, sunt adecvați să ilustreze marginile 7 unui focar de boală, așa numita zonă marginală, față de țesutul sănătos, prin diagnosticare optică, intraoperatorie. Prin aceasta devine posibilă îndepărtarea completă a focarului de 9 boală, cu protejarea eficientă a țesutului sănătos.
Suntcunoscuți anticorpi, orientați împotriva moleculelor, exprimați puternic în țesutu- 11 rile angiogenetic active și exprimați la nivel foarte redus în țesuturile limitrofe (WO 96/01653).
De interes deosebit, în conjugații anticorp-colorant, sunt anticorpii care sunt direcțio- 13 nați împotriva receptorilor pentru factori vasculari de creștere, receptori pentru celule endoteliale, de care se leagă mediatori inflamatori, receptori pentru celule endoteliale, care 15 se leagă de molecule matrice și proteine matrice, care sunt exprimate specific la formarea de noi vase (Brekken et al., Cancer Res. (1998) 58:1952-9 și Schold SC Jr. et al., Invest. 17 Radiol. (1993) 28:448-96).
Preferați sunt anticorpii sau fragmentele de anticorpi direcționate împotriva proteinei 19 matrice EDB-fibronectină. EDN-fibronectina (EDBFN), cunoscută și sub denumirea fibronectină oncofetală, este o variantă splice a fibronectinei care se formează specific în jurul 21 vaselor noi, în procesul angiogenezei. Avantajul dosebit al anticorpilor împotriva EDB-fibronectinei constă în aceea că, prin rănire intraoperatorie, la îndepărtarea focarului de boală, 23 nu se mai formează fibronectină EDB în țesutul sănătos. Astfel se menține specificitatea pe parcursul intervenției chirurgicale. Anticorpii împotriva factorilor receptori de creștere sau 25 mediatorilor inflamatori pe celula endotelială, care se exprimă de asemenea specific în zona marginală a tumorii, se pot forma în timpul intervenției chirurgicale și în țesutul sănătos în 27 apropierea focarului de boală.
în mod deosebit preferați, în cadrul conjugatului anticorpi-colorant, sunt anticorpii L19 29 și E8 contra EDB-fibronectinei (Viti R. et al, Cancer Res. (1999) 59: 347-352). Astfel de conjugați anticorp-colorant reprezintă de asemenea obiectul prezentei invenții. 31
Anticorpii cunoscuți sunt conjugați cu coloranți a căror concentrare poate fi detectată optic în țesuturi și care face posibilă limitarea intraoperatorie a zonei marginale a focarului 33 bolii.
Avantajul congugaților anticorp-colorant, conform invenției, constă deci, în aceea că 35 aceștia pot fi utilizați pentru o colorare selectivă fluorescentă a țesuturilor, în stadiul neoangiogenetic. Colorarea fluorescentă este specific tumorală și furnizează un semnal de 37 fluorescență care poate fi detectat într-un raport superior semnal: fond.
Sunt cunoscuți și conjugați anticorpi-colorant pentru redarea imaginilor de fluo- 39 rescență, în scopul reprezentării tumorale percutanate, ne-invazive (Neri D. et al, Nature Biotechnology (1997) 15:1271-1275). 41
Totuși, nu sunt cunoscuți conjugați de anticorpi-colorant care să se concentreze în mod preferențial în zona marginală a focarului de boală. 43
Sunt cunoscuți și conjugați de proteină-colorant pentru reprezentarea tumorală intraoperatorie. Dezavantajos în cazul acestor conjugați este și faptul că, în special celulele 45 tumorale hipoxice, cât și cele subalimentate metabolic preiau conjugații. Deoarece însă țesutul este bine vascularizat în zona marginală a tumorii și prin aceasta celulele sunt alimentate 47 suficient cu oxigen și substanțe nutritive, tocmai de aceea o concentrare suficientă a conjugaților cunoscuți proteină-colorant nu reușește. 49
RO 121598 Β1
Dimpotrivă, conjugații anticorp-colorant sunt practic complet independenți de starea metabolică a focarului de boală.
Deși reprezentarea optică a marginilor unui focar de boală poate decurge pe diferite căi, se preferă în general sesizarea radiației de fluorescență specifică în funcție de colorant, indusă prin lumina corespunzătoare de excitare. în funcție de lungimea de undă a emisiei, fluorescența poate fi sesizată vizual, direct macroscopic sau microscopic și, eventual, concomitent reprezentată digital, prin sisteme de detecție care redau imagini și sunt proiectate pe un ecran.
Sesizabilă vizual este radiația de fluorescență a intervalului spectral de 400 la 650 nm. în special preferată este o lungime de undă de 450 până la 600 nm. Avantajul preferat al utilizării domeniului vizibil al luminii constă în aceea că detectarea fluorescenței este posibilă prin costuri tehnice scăzute. Lumina de excitare, care se obține prin laser sau diode cu laser adecvate, se cuplează într-un fotoconductor și se transmite prin intermediul acestuia pe arealul de diagnosticat. Realizarea recunoașterii intraoperative a marginii tumorale are loc prin iradierea pe suprafață mare a arealului. Printr-un filtru (de exemplu ochelari filtranți, care sunt purtați de persoana care efectuează investigația), lumina de excitație reflectată este blocată și se observă numai fluorescența specifică colorantului (observația macroscopică). Alternativ, poate avea loc sesizarea fluorescenței printr-un microscop pentru operație (observația microscopică). Datorită adâncimii mici de penetrație a luminii VIS în țesut (câțiva milimetri), se pot sesiza formațiuni noi de țesuturi localizate superficial.
Un alt avantaj al domeniului spectral al luminii vizibile constă în adâncimea mică de pătrundere în țesut și emisia din țesut. Prin aceasta, semnalul detectabil nu este falsificat de semnale provenite din porțiuni mai adânci ale țesutului și poate fi raportat în mod exact la structurile vizibile superficial, ale țesutului.
Obiectul prezentei invenții îl constituie ca urmare și conjugații anticorpi-coloranți ai căror coloranți induc un semnal optic în domeniul spectral al luminii.
Utilizarea conjugaților anticorp-colorant cu coloranți care absorb în zona spectrală a luminii infraroșii cu lungime mică de undă (NIR 600...900 nm) face posibilă recunoașterea formațiunilor noi de vase în straturile mai adânci de țesuturi (până la 1 cm), deoarece lumina NIR este absorbită mai slab de țesuturi și prin aceasta posedă o adâncime mai mare de penetrație în acestea. Observarea fluorescenței nu este posibilă vizual și poate avea loc prin camere CCD (charge coupled device-Kamera), care sunt plasate deasupra arealului de țesuturi de interes. Este posibilă atât sesizarea macroscopică, cât și microscopică. Avantajul utilizării de coloranți în conjugații anticorp-colorant, care produc absorbție și fluorescență în domeniul spectral NIR este evident atunci când este necesară aprecierea arealelor acoperite (de exemplu, cu sânge).
Din punct de vedere al aspectului fotofizic, pentru conjugații anticorp-colorant, sunt adecvați acei coloranți care posedă un maximum de absorbție în intervalul domeniului spectral de la 400 până la 800 nm și minimum un maximum de fluorescență în interiorul domeniului de la 500 până la 900 nm.
De asemenea, obiect al prezentei invenții îl constituie conjugații anticorp-colorant, care sunt caracterizați prin aceea că colorantul induce un semnal de fluorescență doar prin utilizarea unui interval definit de lungime de undă a luminii vizibile sau infraroșii apropiate.
Conjugații anticorp-colorant care cuprind coloranți cu fluorescență sesizabilă vizual sunt de exemplu cei din următoarele clase: fluoresceina, fluorescein-izotiocianat, carboxifluoresceina sau calceina, tetrabromfluoresceina sau eosina, tetraiodfluoresceina sau eritrosina, difluorofluoresceina, ca de exemplu coloranți Oregon Green™ 488, Oregon Green™500, sau Oregon Green™514, Carboxirodol (Rhodol Green™) (US 5227487 și
RO 121598 Β1
5442045), coloranți carboxirodamin (de exemplu Rhodamine Green™ Dyes) (US 5366860), 1
4,4-difluoro-4-bora-3a,4a,-diaza-indacen, ca de exemplu Bodipy FL, Bodipy 493/503 sau Bodipy 530/550 și derivații acestora (US 4774339, 5187288, 5248782, 5433896 și 3 5451663), coloranți cianinici, în special carbocianină și merocianină, coloranți cumarinici, cum sunt de exemplu 7-amino-4-metilcumarină, complecși metalici de DTPA sau tetraaza- 5 macrociclen (ciclen, piclen) cu terbiu sau europiu sau coloranți tetrapirolici, în special porfirină. 7
Conjugați anticorp-colorant conținând coloranți în infraroșu apropiat sunt de exemplu cei din următoarele clase: coloranți polimetin, cum sunt cei de dicarbocianină, tricarbocia- 9 nină, merocianină și oxonol (WO 96/17628), coloranți de rodamină, coloranți fenoxazinici sau fenotiazinici, coloranți tetrapirolici, în special benzoporfirine, corine și ftalocianine. Coloranți 11 preferați în infraroșu apropiat, în cadrul conjugaților anticorp-colorant, sunt coloranții cianinici cu maximul de absorbție între 700 și 800 nm, în special indodi- și indotricarbocianinele. 13 în mod general, sunt preferați coloranții în care conjugații anticorp-colorant din clasele menționate mai sus, care posedă una sau mai multe grupări carboxil, sunt cuplate după acti- 15 vare chimică pe grupările amino ale anticorpilor sau fragmentelorde anticorpi. De asemenea, sunt preferați acei derivați care conțin resturi maleimido-sau bromalchil, astfel încât să aibă 17 loc o cuplare covalentă la grupările sulfhidril ale aminoacidului cisteină. în continuare, sunt preferați coloranți care posedă grupări izotiocianat, care reacționează de asemenea cu 19 grupări amino. în plus, coloranții din conjugații anticorp-colorant posedă o bună fotostabilitate și nu se decolorează sub influența luminii (Photobleaching), pentru a furniza un semnal 21 constantin intervalul de timp de investigare.
Problema pe care o rezolvă invenția constă în a prezenta conjugați anticorp-colorant 23 pentru reprezentarea interoperatorie a margini lor tumorale, utilizați în tratamentul chirurgical al bolilor dependente de angiogeneză. 25
Conjugatul anticorp-colorant, conform invenției, înlătură dezavantajele de mai sus, prin aceea că se concentrează în mod preferențial în zona marginală a țesutului celular al 27 unui focar de boală și în acest mod fac boala detectabilă optic, având formula generală I:
B-(F)n (I), în care:
B este un anticorp sau un fragment de anticorp cu afinitate puternică pentru ED-BFN; 33 F este un colorant de cianină cu formula II:
în care este un radical III sau IV:
IV
RO 121598 Β1 în care poziția marcată cu o steluță este punctul de legătură cu radicalul B și
B reprezintă o grupare V, VI, VII, VIII sau IX:
-k
VII
VIII IX
VI în care
R1 și R2 reprezintă C^C^sulfoalchil, o catenă alchil saturată sau nesaturată, ramificată sau liniară, care poate fi eventual substituită cu până la 15 atomi de oxigen și/sau cu până la 3 grupări carbonil și/sau cu până la 5 grupări hidroxi,
R3 este o catenă care reprezintă gruparea -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1,
-NE1E2, -OE1-OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1, sau -E1 în care
E1 și E2 independent unul de celălalt reprezintă hidrogen, sulfoalchil, sau o catenă C^C^alchil saturată sau nesaturată, ramificată sau liniară, care poate fi eventual substituită cu până la 15 atomi de oxigen, și/sau întreruptă cu până la 3 grupări carbonil și/sau substituită cu până la 5 grupări hidroxi,
R4 este un atom de hidrogen sau un atom de fluor, clor, brom sau iod, b este 2 sau 3,
X este oxigen, sulf sau o grupare =C(CH3)2 sau-(CH=CH)Și
L reprezintă o legătură directă sau un linker, care poate fi o catenă de hidrocarbură liniară sau ramificată cu până la 20 atomi de carbon, care poate fi substituită cu una sau mai multe grupări -OH, -COOH, SO3 și/sau eventual întreruptă o dată sau de mai multe ori printro grupare -O-, -S-, -CO-, -CS-, -CONH-, -NHCO-, -NHCSNH-, -SO2-, PO4- sau o grupare -NH sau un ciclu arii,
Și n este de la 1 la 5.
Conjugații anticorp-colorant, conform invenției, sunt utilizați pentru fabricarea unei compoziții farmaceutice, administrate în tratamentul chirurgical al bolilor dependente de angiogeneză, cum sunt tumorile maligne și metastazele acestora, tumorile benigne, modificări precanceroase ale țesuturilor, endometrioze, hemangioame și sarcini extrauterine.
Prin aplicarea invenției, se obțin următoarele avantaje:
- conjugații anticorp-colorant sunt complet independenți de starea metabolică a focarului de boală:
- coloranții din conjugații anticorp-colorant posedă o bună fotostabilitate și nu se decolorează sub influența luminii.
Conjugații anticorp-colorant, conform invenției, pot fi utilizați fie singuri, fie în formulare ca medicament.
Pentru utilizarea conjugaților anticorp-colorant, conform invenției, ca medicament, aceștia se aduc sub forma unui preparat farmaceutic, care conține pe lângă conjugatul anticorp-colorant, pentru aplicarea enterală sau parenterală, materiale suport organice sau anorganice, inerte, farmaceutic adecvate, ca de exemplu apă, gelatină, gumă arabică, lactoză, amidon, stearat de magneziu, talc, uleiuri vegetale, polialchilenglicoli ș.a.m.d. Preparatele farmaceutice se pot prezenta în formă solidă, de exemplu ca tablete, drajeuri, supozitoare,
RO 121598 Β1 capsule, sau în formă lichidă, ca de exemplu soluții, suspensii sau emulsii. Eventual, acestea 1 mai pot conține aditivi, cum ar fi agenți de conservare, stabilizatori, reticulanți sau emulgatori, săruri pentru modificarea presiunii osmotice sau substanțe tampon. 3
Pentru utilizarea parenterală, sunt adecvate soluțiile injectabile sau suspensiile, în special, soluțiile apoase ale conjugaților de anticorp-colorant. 5
Ca sisteme suport, pot fi utilizați și aditivi superficial activi, ca săruri ale acizilor galici sau fosfolipide animale sau vegetale, dar și amestecuri ale acestora, cum sunt lipozomii sau 7 componentele acestora. Pentru utilizarea orală, sunt adecvate în special tabletele, drajeurile sau capsulele cu talc și/sau suporturi sau lianți hidrocarbonați, ca de exemplu lactoză, 9 amidon de porumb sau cartof. Utilizarea poate avea loc și în formă lichidă, ca de exemplu sub formă de suc, în care se introduce, eventual, o substanță de îndulcire. Dozarea conju- 11 gaților anticorp-colorant poate varia în funcție de modul de administrare, vârsta și greutatea pacientului, natura și gravitatea bolii de tratat și alți factori asemănători. Doza utilizabilă a 13 conjugaților anticorp-colorant, pentru recunoașterea zonelor marginale, este de 0,5...1000 mg, de preferință de 50...200 mg, în care doza poate fi administrată o dată, ca doză unică, 15 sau împărțită în 2 sau mai multe doze zilnice.
Formulările descrise mai sus și formele de administrare fac de asemenea obiectul 17 invenției. Astfel, invenția se referă și la mijloace farmaceutice, care cuprind unul sau mai mulți conjugați anticorp-colorant, pentru reprezentarea intraoperatorie a zonelor marginale 19 ale unui focar de boală, în care mijloacele farmaceutice pot fi utilizate fie singure, fie în amestec cu solvenți, substanțe tampon și/sau substanțe tampon adecvate. 21
Conjugații anticorp-colorant, conform invenției, sunt utilizați în tratamentul chirurgical al bolilor dependente de angiogeneză, cum sunt tumorile maligne și metastazele acestora, 23 tumorile benigne, modificările precanceroase de țesuturi, endometrioze, hemangioame, sarcini extrauterine. 25
De asemenea, obiectul prezentei invenții îl constituie utilizarea conjugaților anticorpcolorant și a mijloacelor de reprezentare intraoperatorie a focarelor de boală, în special, în 27 reprezentarea micro- și macroscopică, intraoperatorie a zonelor marginale ale focarului de boală, precum și utilizarea conjugaților anticorp-colorant la prepararea unui mijloc pentru 29 tratamentul chirurgical al bolilor dependente de angiogeneză, cum sunt tumorile maligne și metastazele acestora, tumorile benigne, modificările precanceroase de țesuturi, 31 endometrioze, hemangioame, sarcini extrauterine.
Prepararea coloranților 33
Prepararea coloranților are loc prin procedee cunoscute în literatură. Coloranți adecvați pentru prepararea conjugaților anticorp-colorant sunt grupările de coloranți carboxilici 35 sau grupările izotiocianat pentru cuplarea covalentă a grupărilor amino ale anticorpilor, în special preferați în acest sens sunt coloranții cianilanici (Mujumdar Sr. et al. (1966) 7; 356- 37
362; Flanagan Jh. etal. (1997) 8:751-756 și Licha Ketal.(1966) Proc. Spie., voi. 2927,192198). 39
Coloranții cu grupările carboxil sunt întâi activați prin trecerea într-un ester reactiv (de exemplu N-hidroxisuccinimidester) printr-o metodă cunoscută. Coloranții cu grupări izotio- 41 cianat pot fi utilizați în mod direct. Derivații reactivi sunt aduși apoi într-o soluție tampon sau amestecuri de solvenți organici (de exemplu dimetilformamidă (DMF) sau dimetilsulfoxid 43 (DMSO)) și soluția tampon se aduce în reacție cu anticorpul. Pentru aceasta, se utilizează colorantul într-un exces molar de 3 la 100 ori. Cantitatea nereacționată se separă după termi- 45 narea reacției, prin ultrafiltrare și/sau cromatografie.
RO 121598 Β1 în continuare, se prezintă 2 exemple de realizare a invenției.
Exemplul 1 - de preparare
N-hidroxisuccinimidesterul acidului bis-1,1 '-(4-sulfobutil)indocarbocianin-5-carboxilic
Prepararea acidului bis-î ,T-(4-sulfobutil)indocarbocianin-5-carboxilic are loc pornind de la 1-(4-sulfobutil)-2,3,3-trimetil-3H-indolenină și 1 -(4-sulfobutil)-2,3,3-trimetil-5-carboxi-3Hindolenină (Cytometry 10,11-19, 1989, Talanta 39, 505-510, 1992), pe baza unor metode cunoscute din literatură. Pentru trecerea în N-hidroxisuccinimidester, se aduc în reacție 0,1 mmoli de colorant (67 mg în 10 ml DMF) cu câte 0,5 mmoli de N-hidroxisuccinimidă și diciclohexilcarbodiimidă (DCC) și se agită 24 h, la temperatura camerei. După adăugare de 50 ml de eter, substanța solidă precipitată este îndepărtată prin filtrare, se dizolvă din nou de câte două ori în puțin DDF și se precipită cu eter și, în final, se usucă în vid (randament 89%).
Prepararea conjugatului anticorp-colorant
Prepararea unui conjugat bis-1, T-(4-sulfobutil)indocarbocianină cu anticorp L19
Anticorpul L19 (1 mg în 1 ml de tampon de acetat de sodiu 50 mM, pH 8,2) se aduce în reacție cu N-hidroxisuccinimidester (75 pmoli dintr-o soluție de 4 mg/ml DMSO) și se agită 2 h, la temperatura camerei. Purificarea are loc prin filtrare pe gel pe cartușe PD10 (Pharmacia) și concentrare prin intermediul Centricon-IOtubes (Amicon), cu obținerea unei soluții de 1 mg/ml anticorpi. Maximul de absorbție: 555 nm; maximul de fluorescență: 582 nm.
Următorul exemplu ilustrează aplicabilitatea biologică a conjugaților anticorp-colorant, conform invenției, fără a-i limita însă la exemplele de utilizare.
Exemplul 2 - de utilizare
Reprezentarea în imagine fluorescentă in vivo pe șoareci purtători de tumoră și cercetarea microscopică a exemplului-v/Vo al țesutului tumoral.
Caracteristicile care redau imaginea, la compușii conform invenției, au fost cercetate in vivo, după injectarea șoarecilor purtători de tumoră. în acest scop, s-au aplicat intravenos 0,1 pmoli/kg până la 2 pmoli/kg de substanță și s-a observat concentrarea în regiunea tumorală, într-un interval de timp de 0 la 48 h. Fluorescență substanțelor s-a indus prin iradierea animalelor cu lumină cu lungime de undă corespunzătoare, obținută monocromatic cu un laser (laser cu diodă, laser de corp solid), sau prin filtrarea dintr-o emisie policromatică a unei lămpi cu Hg sau Xe. în cazul compusului descris în exemplul de preparare 1, dintr-un laser Nd: YAG, se utilizează lumină cu lungimea de undă 540 nm, pentru excitarea iluminării animalului de testare și iradierea de fluorescență la o lungime de undă >580 nm, se detectează printr-o cameră CCD, cu obținerea unor imagini fluorescente ale întregului corp. Paralel, fluorescenta este redată vizual și fotografic. Din materialul tumoral se prelevează bucăți care se cercetează microscopic (microscop Zeiss Axiovert cu filtru Cy3).
După injectarea de 1 pmol/kg de conjugat anticorp-colorant menționat în exemplul de preparare 1, în șoareci purtând teratocarcinom F9, după 4 h, s-a putut detecta un semnal înalt de fluorescență comparativ cu țesutul normal, pe baza imaginilor de fluorescență ale întregului corp.
După pregătirea pielii și a straturilor superioare de țesut ale tumorii, s-a putut determina fluorescență zonelor marginale ale tumorii. Evaluarea microscopică a bucăților tumorale a dus la obținerea unei fluorescențe înalte, care a putut fi corelată cu vasele de sânge ale zonei marginale a tumorii.
Claims (1)
- Revendicări1. Conjugați anticorp-colorant, caracterizați prin aceea că se concentrează în mod 3 preferențial în zona marginală a țesutului celular al unui focar de boală și în acest mod fac boala detectabilă optic, având formula generală I: 5 în care: 9B este un anticorp sau un fragment de anticorp cu afinitate puternică pentru ED-BFN;F este un colorant de cianină cu formula II: 11
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19947559A DE19947559A1 (de) | 1999-09-24 | 1999-09-24 | Antikörper-Farbstoffkonjugate gegen Zielstrukturen der Angiogenese zur intraoperativen Tumorranddarstellung |
| PCT/EP2000/008121 WO2001023005A1 (de) | 1999-09-24 | 2000-08-19 | Antikörper-farbstoffkonjugate gegen zielstrukturen der angiogenese zur intraoperativen tumorranddarstellung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO121598B1 true RO121598B1 (ro) | 2007-12-28 |
Family
ID=7924318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA200200323A RO121598B1 (ro) | 1999-09-24 | 2000-08-19 | Conjugati anticorp-colorant pentru structurile tinta ale angiogenezei la reprezentarea intraoperatorie a marginilor tumorale |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1532988A3 (ro) |
| JP (1) | JP2003510294A (ro) |
| KR (2) | KR20070087232A (ro) |
| CN (1) | CN1269530C (ro) |
| AU (1) | AU779026B2 (ro) |
| BG (1) | BG65682B1 (ro) |
| BR (1) | BR0014192A (ro) |
| CA (1) | CA2385593A1 (ro) |
| CZ (1) | CZ2002991A3 (ro) |
| DE (1) | DE19947559A1 (ro) |
| EE (1) | EE05176B1 (ro) |
| HK (1) | HK1050491A1 (ro) |
| HU (1) | HUP0202625A2 (ro) |
| IL (2) | IL148405A0 (ro) |
| MX (1) | MXPA02002639A (ro) |
| NO (1) | NO20021441L (ro) |
| NZ (1) | NZ517944A (ro) |
| RO (1) | RO121598B1 (ro) |
| RU (1) | RU2002109237A (ro) |
| SK (1) | SK3972002A3 (ro) |
| WO (1) | WO2001023005A1 (ro) |
| YU (1) | YU20702A (ro) |
| ZA (1) | ZA200203225B (ro) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU4243201A (en) | 2000-02-24 | 2001-09-03 | Eidgenoess Tech Hochschule | Antibody specific for the ed-b domain of fibronectin, conjugates comprising saidantibody, and their use for the detection and treatment of angiogenesis |
| US6440389B1 (en) * | 2000-07-19 | 2002-08-27 | The General Hospital Corporation | Fluorescent agents for real-time measurement of organ function |
| AT413487B (de) | 2002-08-12 | 2006-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Verwendung von antikörpern gegen ein tumor-assoziiertes antigen |
| NO20034351D0 (no) * | 2003-09-29 | 2003-09-29 | Amersham Health As | Optisk avbilding av endometrose |
| EP1816475A1 (en) * | 2004-07-22 | 2007-08-08 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Use of cyanine dyes for the diagnosis of disease associated with angiogenesis |
| EP1679082A1 (en) * | 2005-01-07 | 2006-07-12 | Schering AG | Use of cyanine dyes for the diagnosis of proliferative diseases |
| US20120041305A1 (en) * | 2009-04-21 | 2012-02-16 | The University Of Utah Research Foundation | Light-emitting dye for intraoperative imaging or sentinel lymph node biopsy |
| EP3493855A4 (en) * | 2016-08-02 | 2020-04-01 | ISI Life Sciences, Inc. | METHOD FOR DETECTION OF CANCER CELLS. |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4341223A (en) * | 1981-02-04 | 1982-07-27 | Lutz Lauralee A | Fluoresceable composition and method of determining fluid flow |
| CN1162184C (zh) * | 1994-07-11 | 2004-08-18 | 德克萨斯州立大学董事会 | 用于脉管系统特异性凝血的组合物及其应用 |
| TWI259837B (en) * | 1998-05-11 | 2006-08-11 | Eidgenossische Tech Hochscule | Specific binding molecules for scintigraphy, conjugates containing them and therapeutic method for treatment of angiogenesis |
-
1999
- 1999-09-24 DE DE19947559A patent/DE19947559A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-08-19 EP EP05075349A patent/EP1532988A3/de not_active Withdrawn
- 2000-08-19 HU HU0202625A patent/HUP0202625A2/hu unknown
- 2000-08-19 EP EP00954640A patent/EP1214099A1/de not_active Withdrawn
- 2000-08-19 JP JP2001526214A patent/JP2003510294A/ja active Pending
- 2000-08-19 AU AU67026/00A patent/AU779026B2/en not_active Ceased
- 2000-08-19 RU RU2002109237/14A patent/RU2002109237A/ru not_active Application Discontinuation
- 2000-08-19 CA CA002385593A patent/CA2385593A1/en not_active Abandoned
- 2000-08-19 WO PCT/EP2000/008121 patent/WO2001023005A1/de active IP Right Grant
- 2000-08-19 IL IL14840500A patent/IL148405A0/xx unknown
- 2000-08-19 BR BR0014192-5A patent/BR0014192A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-08-19 KR KR1020077017452A patent/KR20070087232A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-08-19 SK SK397-2002A patent/SK3972002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2000-08-19 YU YU20702A patent/YU20702A/sh unknown
- 2000-08-19 NZ NZ517944A patent/NZ517944A/en unknown
- 2000-08-19 RO ROA200200323A patent/RO121598B1/ro unknown
- 2000-08-19 CN CNB00813295XA patent/CN1269530C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-19 KR KR1020027003738A patent/KR100832937B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 EE EEP200200152A patent/EE05176B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 MX MXPA02002639A patent/MXPA02002639A/es not_active Application Discontinuation
- 2000-08-19 CZ CZ2002991A patent/CZ2002991A3/cs unknown
-
2002
- 2002-02-27 IL IL148405A patent/IL148405A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-03-19 BG BG106528A patent/BG65682B1/bg unknown
- 2002-03-22 NO NO20021441A patent/NO20021441L/no unknown
- 2002-04-23 ZA ZA200203225A patent/ZA200203225B/en unknown
-
2003
- 2003-04-15 HK HK03102709A patent/HK1050491A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20070087232A (ko) | 2007-08-27 |
| IL148405A0 (en) | 2002-09-12 |
| NO20021441L (no) | 2002-05-15 |
| DE19947559A1 (de) | 2001-04-19 |
| AU6702600A (en) | 2001-04-30 |
| HK1050491A1 (en) | 2003-06-27 |
| RU2002109237A (ru) | 2003-11-27 |
| CN1376074A (zh) | 2002-10-23 |
| KR20020039349A (ko) | 2002-05-25 |
| EP1532988A3 (de) | 2008-09-17 |
| SK3972002A3 (en) | 2002-09-10 |
| WO2001023005A1 (de) | 2001-04-05 |
| EE05176B1 (et) | 2009-06-15 |
| NZ517944A (en) | 2004-06-25 |
| BR0014192A (pt) | 2002-05-21 |
| BG65682B1 (bg) | 2009-06-30 |
| EP1214099A1 (de) | 2002-06-19 |
| BG106528A (bg) | 2002-12-29 |
| MXPA02002639A (es) | 2002-07-30 |
| EP1532988A2 (de) | 2005-05-25 |
| JP2003510294A (ja) | 2003-03-18 |
| YU20702A (sh) | 2005-06-10 |
| ZA200203225B (en) | 2003-07-23 |
| NO20021441D0 (no) | 2002-03-22 |
| CN1269530C (zh) | 2006-08-16 |
| CA2385593A1 (en) | 2001-04-05 |
| HUP0202625A2 (en) | 2002-12-28 |
| KR100832937B1 (ko) | 2008-05-27 |
| CZ2002991A3 (cs) | 2002-06-12 |
| IL148405A (en) | 2009-06-15 |
| PL354027A1 (en) | 2003-12-15 |
| AU779026B2 (en) | 2005-01-06 |
| EE200200152A (et) | 2003-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6761878B2 (en) | Pathological tissue detection and treatment employing targeted benzoindole optical agents | |
| DE60133626T2 (de) | Hydrophile zyaninfarbstoffe | |
| ES2324198T3 (es) | Metodo para medir una funcion fisiologica con un colorante como acido poliacrilico de fluoresceina. | |
| US7947256B2 (en) | Biocompatible fluorescent imaging agents | |
| CN109791107A (zh) | 靶向ca ix的nir染料及其用途 | |
| JP2011051900A (ja) | 組込み型光活性ペプチドおよびその使用 | |
| US20030105299A1 (en) | Carbocyanine dyes for tandem, photodiagnostic and therapeutic applications | |
| RO121598B1 (ro) | Conjugati anticorp-colorant pentru structurile tinta ale angiogenezei la reprezentarea intraoperatorie a marginilor tumorale | |
| US20030152577A1 (en) | Dye-bioconjugates for simultaneous optical diagnostic and therapeutic applications | |
| US20030105300A1 (en) | Tumor targeted photodiagnostic-phototherapeutic agents | |
| TW202330498A (zh) | 用於腫瘤偵測及手術指引之化合物及組合物 | |
| PL203535B1 (pl) | Koniugaty przeciwcia lo-barwnik, srodki farmaceutyczne je zawieraj ace i zastosowanie |