BG106528A - Съединения на антитела и багрила спрямо структурните очертания на ангиогенезата при интраоперативноизобразяване на размерите на тумори - Google Patents

Съединения на антитела и багрила спрямо структурните очертания на ангиогенезата при интраоперативноизобразяване на размерите на тумори Download PDF

Info

Publication number
BG106528A
BG106528A BG106528A BG10652802A BG106528A BG 106528 A BG106528 A BG 106528A BG 106528 A BG106528 A BG 106528A BG 10652802 A BG10652802 A BG 10652802A BG 106528 A BG106528 A BG 106528A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
dye
antibody
dyes
compounds according
outbreak
Prior art date
Application number
BG106528A
Other languages
English (en)
Other versions
BG65682B1 (bg
Inventor
Michael Schirner
Kai Licha
Ludger Dinkelborg
Original Assignee
Schering Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=7924318&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BG106528(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Schering Aktiengesellschaft filed Critical Schering Aktiengesellschaft
Publication of BG106528A publication Critical patent/BG106528A/bg
Publication of BG65682B1 publication Critical patent/BG65682B1/bg

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0039—Coumarin dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до съединения на антителаи багрила, които са подходящи за свързване със структурите на новообразувани кръвоносни съдове, и до използването на тези съединения за интраоперативно изобразяване на патологична ангиогенеза.

Description

СЪЕДИНЕНИЯ НА АНТИТЕЛА И БАГРИЛА СПРЯМО СТРУКТУРНИТЕ ОЧЕРТАНИЯ НА АНГИОГЕНЕЗАТА ПРИ ИНТРАОПЕРАТИВНО ИЗОБРАЗЯВАНЕ НА РАЗМЕРИТЕ НА ТУМОРИ
Област на техниката
Настоящето изобретение се отнася до съединения на антитела и багрила, които са подходящи за свързване със структурата на новообразувани кръвоносни съдове и използването на тизи антитела при интраоперативно изобразяване на патологична ангиогенеза.
Предшестващо състояние на техниката
При възрастни организми с много малки изключения © (например цикъла на жени в детеродна възраст) не се образуват на нови кръвоносни съдове. Протичащият тук процес на образуване на нови кръвоносни съдове се охарактеризирва като ангиогенеза и се проявява като отговор на определени сигнали.
Ангиогенезата е процес, който протича в граничните области на огнищата на заболяване. От центъра на болестното огнище се освобождават фактори, които се определят като гранична област на огнището на заболяване.
• ·· · · ···· ·· ···· · · · · · ·· ··· ♦ · · · ·· • ····· · · · · ·· • · · · · · · ·♦ ··· ·· ·· ·· ·· ····
Тези фактори се определят също така като стимулатори на ангиогенезата.
Когато тези стимулатори на ангиогенезата достигнат до здрава тъкан в граничните области на огнището на болестта, тогава се стимулират невключените до момента в огнището на болестта кръвоносни съдове, за да се образуват съдови зародиши на нови кръвоносни съдове. Кръвоносните съдове оформените от тези съдови зародиши образуват една нова кръвоносна система в граничната област на огнището на заболяването. Чрез този процес се осигурява винаги едно адекватно снабдяване на огнището на заболяването с хранителни вещества. Като особено важно е установено, че растежа на туморите и техните метастази са зависими от способността им, да индуцират ангиогенезата.
Хирургичната терапия сега е една стандартна форма за третиране на локализирани огнища на болестта. Тя има голямо значение при успешното третиране на туморите. Беше установено обаче, че въпреки подобрените хирургически техники се срещат локални рецидиви, тъй като анатомичните дадености в човешкия организъм много рядко позволяват отстраняване на огнището на болестта в максимална степен. В много органи (например в мозъка) отстраняването трябва да бъде в максимална степен, за да се запази здравата тъкан. Рискът от увреждане на здравите органи се повишава с радикалността на хирургическата намеса.
Хистологичните изследвания на граничните области на тумора след последвало хирургическо отстраняване обаче
показват, че голяма част от туморите не могат да бъдат отстранени напълно и в тялото остават части от тумора. От тези туморни части произтича по - нататъшно развитие на тумора или неговите метастази. Един метод, за точно определяне на границата между огнището на заболяването и здравата тъкан по време на хирургическа интервенция, би позволил, пълното отстраняване на болестното огнище и понататъшно нормално развитие на здравата тъкан.
Познати са отдавна багрила за изобразяване на огнища на заболяване ( Poon WS et al., J Neurosurgery (1992) 76: 679 686, Haglund MM et al., Neurosurgery (1996) 38: 308 - 317). Te се абсорбират за предпочитане директно от туморните клетки или насищат неспецифично външноклетъчното пространство около тумора. Тъй като механизмът на насищане може да бъде доказан и в здравата тъкан, е ограничена специфичността и чувствителността на използваните субстанции.
Досега не са известни съединения, които могат да бъдат използвани за интраоперативно разграничаване на огнището на заболяване чрез селективно изобразяване на граничната област на болестното огнище.
Ангиогенезата протича за предпочитане в граничната област на огнището на заболяване. Чрез изобразяване на ангиогенезата може да бъде изобразена границата със здравата тъкан. Отдавна са познати антитела за доказване на ангиогенезата в огнището на заболяването и могат да бъдат използвани за изобразяване на новообразувани кръвоносни съдове в хистологични тъканни части, за доказване на №
• ·· ·· ···· ·· ·· ···· ·· · · · · · различни протеини в огнището на заболяването или като носещи молекули за терапевтични субстанции .
Не са известни обаче антитела в комбинация с багрила, така наречените съединения на антитела и багрила, които могат да се използват за интраоперативно разграничаване на огнището на заболяване чрез селективно изобразяване на граничните области на болестното огнище.
Задача на настоящето изобретение е да се предложат съединения на антитела и багрила за интраоперативно изобразяване на размерите на тумори. Антителата на съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението са предназначени за структури, които са специфични за процеса на ангиогенезата. Съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението обхващат багрила, които чрез тяхното поглъщане (в определена тъканна област) правят възможно оптическото им изобразяване.
Тъй като ангиогенезата е най-силно изразена в граничните области на огнището на заболяване, от тях се получава най - силен сигнал. Антителата свързани с багрила съгласно изобретението са подходящи за изобразяване на границата, очертанията на огнището на заболяването, на така наречената гранична област, със здравата тъкан чрез интаоперативна, оптическа диагностика. По този начин става възможно пълното отстраняване на огнището на заболяване от здравата тъкан и по-нататъшното й предпазване.
Известни са антитела, които са предназначени за молекули, които силно се експримират в ангиогенетично активна
тъкан и в ограничена тъкан се експримират до много ограничено ниво (WO 96/ 01653 ).
От особен интерес при съединенията на антитела и багрила са антитела, които са предназначини за рецепторите при вазкуларните фактори на растежа, рецепторите на ендотелните клетки, с които се свързват ностелите на възпалението и протеини, които специфично се експримират при образуването на нови кръвоносни съдове (Brekken et al., Cancer Res. (1998) 58: 1952 - 9 и Schold SC Jr et al., Invest. Radiol. (1993) 28: 488-96 ).
Предпочитани са антитела или части от антитела, които са предназначени за протеина EDB - фибронектин. EDB фибронекгина (EDBFN), познат още като онкофетален фибронектин, е един вариант на фибронекгина, който се образува специфично около новообразуваните кръвоносни съдове в процеса на ангиогенезата. Особеното предимство на антителата спрямо EDB - фибронекгина се състои в това, че интраоперативното нараняване при отстраняване на огнището на заболяване не води до никакво новообразуване на EDB фибропротектина в здравата тъкан. Така са запазва специфичността през време на хирургичната интервенция. Антитела спрямо рецепторите на растежните фактори или спрямо медиаторите (посредниците) на възпалението в ендотелните клетки, които също се експримират специфично в граничните области на тумора, могат да се образуват наново в здравата тъкан в непосредствена близост до огнището на заболяването през време на хирургичната интервенция.
Особено предпочитани съединения на антитела и багрила от изобретението са антитела L 19 и Е 8 спрямо EDB фибронектин (Viti etal., Cancer Res (1999) 59: 347-352).
Такива съединения на антитела и багрила са също така предмет на настоящето изобретение.
Известните антитела се свързват с багрила, чиято концентрация в тъканта може да се детектира оптически и прави възможно интаоперативното разграничаване на граничните области на огнището на заболяването.
Предимството на съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението се състои следователно в това, че те могат да бъдат използвани за селективно флуоресцентно оцветяване на тъкани в неоангиогенетичен стадий. Флуоресцентното оцветяване е специфично за тумора и произвежда един флуоресцентен сигнал, който може да бъде детекгиран във висок сигнал до фон - съотношение.
Познати са също така и съединения на антитела и багрила за получаване на флуоресцентно изображение за нуждите на перкутанно, не инвазивно изображение на тумора (Neri D et. Al., Nature Biotechnology (1997) 15: 1271 -1275).
He са познати обаче съединения на антитела и багрила, които се концентрират предимно в граничните области на огнището на заболяване.
Познати са също така съединения на протеини и багрила за интраоперативно изображение на тумора.
Недостатък на тези съединения е, че подсигурените по специално както хипоксидно така и метаболитно туморни клетки • · · ·· ···· · - ·· ···· ·· · ···· ··· ··· · · · • ····· · · · · · · • · · · · · · · · ··· · · · · · · · · ···· поглъщат съединенията. Тъй като тъканта в граничните области на тумора е добре вазкуларизирана и поради това клетките са наситени с кислород и подсигурени с хранителни вещества, става невъзможно насищането с познатите съединения на протини и багрила.
Техническа същност на изобретението
Съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението са независими от метаболитното състояние на огнището на заболяването.
Доколкото оптическото регистриране на границите на едно огнище на заболяване може да се осъществи по различни начини, се предпочита цялостно регистриране на индуцирането чрез съответната възбуждаща светлина, флуоресцентно лъчение при специфично баглиро. Обикновено според дължината на вълната на емисията е възможно флуоресценцията да бъде регистрирана визуално директно макроскопски или микроскопски и в даден случай да бъде изобразена дигитално чрез картинообразна детекторна система върху екран.
Визуално може да се регистрира флуоресцентно лъчение в спектралната област 400 до 650 пт. Особено предпочитана е една дължина на вълната от 450 до 600 пт. Предимството на използването на светлина във видимата област се състои в това, че детекцията на флуоресценцията е възможна с помощта на несложни технически средства. Възбуждащата светлина, която се получава с подходящ лазер или лезерни • 44 ·· ·4·49Γ 99
9 9 9 9 4 · · ·4
44444 4 444 ·· • 4 4444444 •4444 44 44 444444 диоди, се въвежда в светлопровод и през него в диагностицираната област. Провеждането на интраоперативно определяне на туморните размери се осъществява чрез облъчване на широка област от обекта. Чрез филтър (например филтърни очила, които използва изследващият човек) се блокира рефлектиралата възбуждаща светлина и се наблюдава само специфичната багрилна флуоресценция (макроскопско наблюдение). Алтернативно е възможно регистриране на флуоресценцията чрез оперативен микроскоп (микроскопско наблюдение). Чрез ограничено проникване на VIS - светлина в дълбочина на тъканта (няколко милиметра) могат да бъдат обхванати повърхностно локализираните новообразувания на кръвоносни съдове.
Друго предимство на спектралната област на видимата светлина се състои в ограниченото проникване в дълбочина в тъканта и емисията от тъканта. По този начин детектираният сигнал не се компрометира от сигнал получен от по дълбоките части на тъканта и веднага може да стане определяне на повърхностните видими структури на тъканта.
Предмет на настоящето изобретение са също така и съединения на антитела и багрила, чиито багрила индуцират един оптически сигнал във видимата област на светлината.
Използването на съединения на антитела и багрила, в които багрилата се абсорбират в спектралната област близка на инфрачервената светлина (NIR; 600 - 900 nm), прави възможно установяването на новообразувани кръвоносни съдове в по - дълбоките слоеве на тъканта (до 1 см), тъй • · t ······ · «· ···· ·· · ···· ··· ··· · · · • ··· · · · ···· · • · ···· · · · ··· ·· ·· ·· ·· ···· като NIR - светлината се абсорбира по - слабо от тъканта и по този начин притежава една по - голяма дълбочина на проникване в тъканта. Визуалното наблюдаване на флуоресценцията не е възможно и може да стане с помощта на CCD - камера (carge coupled device - Kamera), която се поставя на точно определено място от тъканта, обект на изследване. Възможен е както макроскопският така и микроскопският начин на работа. Предимството при използването на багрила в съединенията на антитела и багрила, които се абсорбират и флуоресцират в NIR спектралната област, е когато е необходимо да се прави изследване в закрити области ( например през кръв).
От фотофизична гледна точка за съединенията на антитела и багрила са подходящи такива багрила, които имат абсорбционен максимум в спектралната област от 400 до 800 nm и най - малко един флуоресцентен максимум в границите от 500 до 900 nm.
Предмет на настоящето изобретение са също така съединения на антитела и багрила, които се характеризират с това, че багрилото първо индуцира един флуоресцентен сигнал при използването на определена област на дължина на вълната във видимата област или в близка на инфрачервената светлина.
Съединенията на антитела и багрила включват багрила с визуално възприемаща се флуоресценция, които могат да бъдат например от следните класове:
• · · · · · • ·
Флуоресцеин, флуоресцеин изотиоцианат, ·· ·
карбоксифлуоресцеин или калцеин, тетрабромфлуоресцеини или еозини, тетрайодфлуоресцеини или еритрозини, дифлуорофлуоресцеин, като например Oregon Green ™ 488, Oregon Green™ 500 или Oregon Gree ™ 514, карбоксиродолови (Rhodol Green ™) - багрила ( US 5, 227, 487; US 5, 442, 045), карбоксиродаминови багрила (например Rhodamine Green ™ Dyes) (US 5, 366, 860), 4,4 - дифлуоро - 4-бора - За,4a- диаза индазени, като например Bodipy FL, Bodipy 493/ 503 или Bodipy 530/ 550 и производни от тях ( US 4,774, 339, US 5,187,288, US 5,248,782, US 5,433,896, US 5,451,663), цианинови багрила, като например 7-амино-4-метилкомарин, метални комплекси на DTPA или тетрааза-макроциклен (циклен, пиклен) с тербий или европий или тетрапиролни багрила, по - специално порфирини.
Съединенията на антитела и багрила включващи близки до инфрачервените багрила, са например такива от следващите класове:
полиметинови багрила, като дикарбоксицианинови, трикарбоксицианинови, мероцианинови и оксонолови багрила (WO 96/17628), родаминови багрила,
Феноксазинови багрила или фенотиазинови багрила, тетрапиролови багрила, по - специално бензопорфирини, хорини и фтолоцианини.
Предпочитани близки до инфрачервените багрила в съединенията на антитела и багрила са цианиновите багрила с абсорбционен максимум между 700 и 800 nm, по - специално индоди- и индотрикарбоцианини.
Основно предпочитани в съединенията на антитела и багрила са багрилата от горепосочените класове, които имат една или повече карбоксилни групи, които след химическо активиране се свързват с аминогрупите на антителата или с фрагментите от антитела. Предпочитани са също така такива производни, които съдържат малеимидо- или бромалкилови радикали, така че да последва ковалентно свързване със сулфидните групи на аминокиселината цистеин.
Предпочитани са също така и багрила, съдържащи
изотиоцианатни групи, които също реагират с аминогрупи.
Поради това багрилата от съединенията на антитела и багрила трябва да притежават висока фотостабилност и при облъчване със светлина да не се обецветяват (фотообезцветяване), за да се осигури един постоянен сигнал през цялото време на изследване.
Във връзка с това предмет на настоящето изобретение са съединения на антитела и багрила, които се концентрират предимно в граничната област на клетъчната тъкан на болестното огнище и правят възможно оптическото изобразяване на граничните му области т.е. на размерите му.
Предмет на настоящето изобретение са по - специално съединения на антитела и багрила с обща формула I
B-(F)n (I), в която мм
В означава едно антитяло или фрагмент от антитяло със здрава връзка към ED - BFN,
F означава едно багрило от класа на комарините, на или флуоресцеините, карбоксифлуоресцеините, или дифлуорофлуоресцеините, тетрабромфлуоресцеините, тетрайодфлуоресцеините, родамините, карбоксиродамините, карбоксиродолите,
4,4-дифлуоро-4-бора-За,4а-диаза
индазените, полиметиновите багрила или тетрапироловите багрила, или комплексите на тербий или европий с DTPA или циклен и техните производни и
η означава 1 до 5.
Особено предпочитани и поради това предмет на настоящето изобретение са също така и съединения на антитела и багрила, чието багрило е едно цианиново багрило, едно мероцианиново багрило, едно оксонолово багрило, едно стирилово багрило или едно скварилиево багрило.
Особено предпочитани и поради това предмет на настоящето изобретение са също така и съединения на антитела и багрила, в които багрилната част е едно цианиново багрило, по - специално едно карбоцианиново, дикарбоцианиново или трикарбоцианиново.
Изобретението се отнася по - специално до съединения на антитела с багрила, в които багрило - (F)n с обща формула (I) означава едно цианиново багрило с обща формула (II)
4· «item
ММ в която • · ·· • ·· • ·· • · · · · ·· • ·· · · •· ·· ·· • · • ·· •♦ • · * • ·
D означава един радикал с формули III или IV
като със звезда е означено мястото на свързване с радикала В, и
В означава групите V, VI, VII, VIII или IX
КОИТО в
R1 и R2 означават сулфоалкил с 1 до 4 въглеродни атоми, една наситена или ненаситена, разклонена или неразклонена алкилна верига с 1 до 50 въглеродни атоми, които в даден случай могат да бъдат заместени с един до 15 кислородни атоми, и/ или с до 3 карбонилни групи, и/ или с до хидроксигрупи, • · • · ··
R3 означава групата -COOE1, -CONE1 Е2, -NHCOE1, NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1 или
-Е1, като
Е1 и Е2 независимо един от друг означават водороден атом, сулфоалкил с 1 до 4 въглеродни атоми, наситен или ненаситен, разклонен или неразклонен алкил с 1 до 50 ваглеродни атоми, който в даден случай може да бъде заместен с до 15 кислородни атоми, и/ или да бъде прекъснат с до 3 карбонилни групи, и/ или да бъде заместен с до 5 хидроксилни групи,
R4 означава водороден атоми или флуорен, хлорен, бромен или йоден атом, b означава 2 или 3,
X означава кислороде атом, сяря или групата = С(СНз)г или -(СН = СН)-,
L означава една директна възка или линкер, който представлява една неразклонена или разклонена верига с до 20 въглеродни атоми, която може да бъде заместена с един или повече -ОН, -СООН, SO3 - групи, и/ или в даден случай може да бъде еднократно или многократно прекъсната от една -0-, -S-, -CO-, -CS-, -CONH-, -NHCO-, -NHCSNH-, -SO2, РО4 - или една -NH- групи или с един арилов пръстен.
Съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението могат да се използват както самостоятелно така и във вид на препарати като лекарствени средства.
При използване на съединенията на антитела и багрила като лекарствени средства те трябва да бъдат под формата на фармацефтични препарати, които наред със съединението на антитяло и багрило при ентерално или парентерално приемане съдържат и подходящи фармацефтични, органични или неорганични инертни материали, като например, вода, желатин, гуми арабика, млечна захар, нишесте, магнезиев стеарат, талк, растителни масла, полиалкиленгликоли и т. н. д Фармацефтичните препарати могат да бъдат в твърда форма, като например таблети, дражета, супозитории, капсули или в течне форма, като например разтвори, суспензии или емулсии. В даден случай съдържат също спомагателни средства като например консерванти, стабилизатори, мокрители или емулгатори, соли за променяне на осмотичното налягани или буфери.
За парентерално приложение са подходящи инжекционни разтвори или суспензии, по - специално водни разтвори на съединенията на антитела и багрила.
© Като носещи системи могат да се използват спомагателни средства активни в граничната повърхност като например соли на галенова киселина или живитински или растителни фосфолипиди, но също така и техни смеси както и липозоми или техни съставни части. За орално приложение са подходящи предимно таблети, дражета или капсули с талк и/ или въглеводородни носители или въглеводородни свързватели, като например лактоза, царевично или картофено нишесте. Могат да се използват и течни форми, като
например сиропи, които в даден случай могат да съдържат подсладител.
Дозирането на съединенията на антитела и багрила може да варира според предписанието, възрастта и теглото на пациента, вида и тежестта на заболяването подлежащо на лечение както и от други подобни фактори. Използваните дозировки от съединения на антитела с багрила за определяне на граничните области т.е. на размерите са 0,5 - 1000 mg, за предпочитани 50 - 200 mg, при което дозата може да се приеме един път като достатъчна еднократна доза или разпределена на 2 или повече дневни дози.
Описаните по-горе форми на приложение и форми за приемане са също така предмет на настоящето изобретение.
Поради това изобретението се отнася също така и до фармацефтични средства, които включват едно или повече съединения на антитела и багрила, предназначени за интраоперативно изобразяване на граничните области на едно огнище на заболяване, при което фармацефтичните средства могат да се използват самостоятелно или в смес с подходящи разтворители, буфери и/ или носители.
Съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението се прилагат при хирургическа интервенция на заболявания свързани с ангиогенезата, като малигнени тумори и техните метастази, първични тумори, преканцерозни тъканни изменения, ендометриози, хемангиоми, извънматочна бременност.
······ · ! · • ··· ·· · ··· ·· • · ···· ··· .,. ,* ·· ·· ·· ····
Предмет на настоящето изобретение е също така и използването на съединения на антитела и багрила и средства за интраоперативно изобразяване на болестни огнища, предимно за микро- и макроскопско, интраоператвно изобразяване на граничните области на едно огнище на заболяване, както и използване на съединения на антитела и багрила за получаване на средства за хирургическо третиране на заболявания свързани с ангиогенезата, като например 0 малигнени тумори и техните метастази, преканцерозни тъканни изменения, ендометриози, хемангиоми и извънматочна бременност.
Примери за изпълнение на изобретението
Получаване на багрилата
Получаването на багрилата се осъществява по методи познати от литературата. Подходящи багрила за получаване на съединения на антитела и багрила са такива, които съдържат карбоксилни групи или изотиоцианатни групи способни да се © свържат с аминогрупите на антитялото. За целта са предпочитани например цианиновите багрила (Mujumdar SR et al. (1996) 7: 356-362; Flanagan JH et al. (1997) 8: 751 -756 и Licha K et al. (1996) Proc SPIE Vol 2927, 192- 198).
Багрилата c карбоксилни групи се активират чрез превръщане в реактивоспособен естер (например Nхидроксисукцинимидестер) по познати методи. Багрила с изоцианатни групи могат директно да се използват. Реактивноспособните производни взаимодействат с антитела като се прибавят към буферен разтвор или смеси от органични разтворители ( например диметилформамид (DMF)) или диметилсулфоксид (DMSO) и буферен разтвор. В този случай се използва 3 до 100 кратен моларен излишък от багрилото. Нереагиралата част се отделя след завършване на реакцията чрез ултрафилтруване и/ или хроматография.
По аналогичен начин начин на работа се получават и следващите багрила:
Пример за получаване 1
Бис-1.Г-(4-сулФобутил)индокарбоиианин-5-каобонова киселина-М-хидроксисукиинимидестер
Получаването на бис-1,1'-(4сурфобутил)индокарбоцианин-5-карбонова киселина протича като се изхожда от 1 -(4-сулфобутил )-2,3,3-три мети л-ЗНиндоленин и 1 -(4-сулфобутил)-2,3,3-триметил-5-карбокси-3/-/-индоленин (Cytometry 10, 11-19, 1989, Taianta 39, 505 - 510, 1992) като се основава на познати от литературата методи. За превръщането в N-хидроксисукцинимидестер се смесват 0,1 mmol багрило ( 67 mg в 10ml DMF) обикновено с 0,5 mmol Nхидроксисукцинимид и дициклохексилкарбодиимид (DCC) и се разбърква в продължение на 24 часа при стайна температура. След добавяне на 50 ml етер утаеното вещество се отделя чрез филтруване, разтваря се двукратно с малко количество DDF и се утаява с етер, накрая се суши под вакуум (добив 89 %).
··· · · ····
Получаване на съединение на антитяло и багрило
Получаване______на______съединението______био-1.Г-(4сулфобутил)индокарбоиианин с И9-антитяло
Антитялото L19 ( 1 mg в 1 ml натриев ацетат - буфер 50 mM, pH 8,2) се смесва с N-хидроксисукцинимидестер (75 μιτιοΙ разтвор на 4 mg/ ml в DMSO) и се разбърква в продължение на 2 часа при стайна температура. Пречистването протича с помощта на гелно филтруване през PD 10-картуз (фармацефтичен) и концентриране с Centricon-10 tubes (Amicon) при поддължане на разтвора с около 1 mg/ ml антитяло.
Абсорбционен максимум : 555 nm
Флуоресцентен максимум: 582 nm.
Следващият пример пояснява биологичната приложимост на съединенията на антитела и багрила съгласно изобретението без това да ограничава примерите за използване.
Пример за приложение 1
Флуоресцентно изображение in vivo на носещи тумор голи мишки и микроскопско изследване ex-vivo на туморна тъкан
Картинно представените свойства на съединенията съгласно изобретението се изследват след инжектиране в носещи тумор голи мишки. Интравенозно се инжектира 0,1pmol/kg до 2pmol / kg от субстанцията и концентрирането й в областта на тумора се наблюдава за време от 0 до 48 часа. Флуоресценцията на субстанцията се индуцира чрез облъчване на животните със светлина имаща съответната дължина на
вълната, която се получава монохроматично с лазер (диоден лазер, лазер с твърдо активно вещество) или чрез филтър с полихроматична емисия от живачна или хелиева лампа. Когато се получават съединения по пример за получаване 1 се използва светлина от Nd:YAG лазер с дължина на вълната 540 nm за възбуждане на пълно и всестранно осветляване на опитните животни и се детектира флуоресцентното лъчение при дължина на вълната > 580 nm с помощта на една интензивна CCD - камера при заснемане на получената от всички части на тялото цялостна флуоресценция. Флуоресценцията се отчита паралелно визуално и фотографски. От туморния материал се приготвят препарати които се изследват микроскопски (Zeiss Axiovert Mikroskop mit СуЗ - Filtersatz).
След инжектиране на 1 pmol/ kg от посочените в пример за получаване 1 съединения на антитела и багрила в F9тератокарциномносещи голи мишки става възмжоно след 4 часа да бъде детектиран повишен флуоресцентен сигнал в сравнение с този на нормалната тъкан заснет от цялостното фосфоресциране на тялото.
След приготвяне на препарат от кожата и от повърхностните пластове на тумора се причислява флуоресценцията на граничните области на тумора. Микроскопското оценяване на туморните слоеве показва една повишена флуоресценция, която кореспондира на кръвоносните съдове в туморните гранични области.

Claims (13)

  1. ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ
    1.Съединения на антитела и багрила, които се концентрират предимно в граничните области на клетъчната тъкан на едно огнище на забаляване и така става възможно оптическото изобразяване на размерите на огнището на ф заболяване, характеризиращо се с това, че багрилото е съединение с обща формула (I)
    B-(F)n (I), в която
    В означава едно антитяло или фрагмент от антитяло с добра връзка към EDB - фибронектин,
    F означава багрило от класа на комарините, на флуоресцеините, на карбоксифлуоресцеините, на дифлуорофлуоресцеините, на тетрабромфлуоресцеините, на © тетрайодфлуоресцеините, на родамините, на карбоксиродамините, на карбоксиродолите, на 4,4-дифлуоро-4бора-3а,4а-диаза-индазените, на полиметиновите багрила или на тетрапироловите багрила, или на тербиумните или европиумните комплекси с DTPA или циклен и техните производни и
    η означава 1 до 5.
    ·· ··♦· ····
  2. 2.Съединения на антитела и багрила съгласно претенция 1, характеризиращи се с това, че багрилото е едно цианиново багрило, едно мероцианиново багрило, едно оксонолово багрило, едно стирилово багрило или едно скварилиево багрило.
  3. 3. Съединения на антитела и багрила съгласно претенция 1, характеризиращи се с това, че багрилото е едно цианиново багрило като карбоцианиново, дикарбоцианиново или трикарбоцианиново.
  4. 4. Съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 3, характеризиращи се с това, че багрило - (F)n с обща формула (I) представлява едно цианиново багрило с обща формула (II)
    D=B· в която
    D означава един радикал (III) или (IV) като позицията отбелязана със звездичка означава мястото на свързване с радикала В, и
    В означава V, VI, VII, VIII или IX
    IV
    V VI vil VUI в които
    R1 и R2 означава сулфоалкил с 1 до 4 въглеродни атоми, една наситена или ненаситена, разклонена или права алкилна верига с 1 до 50 въглеродни атоми, която в даден случай може да бъде заместена с до 15 кислородни атоми, и/ или с до 3 карбонилни групи, и/ или с до
  5. 5 хидроксилни групи,
    R3 означава -СООЕ1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -ОЕ1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1 или -Е1, като
    Е1 и Е2 независимо един от друг означават един водороден атом, сулфоалкил с 1 до 4 въглеродни атоми, наситен или ненаситен, разклонен или неразклонен алкил с 1 до 50 въглеродни атоми, който в даден случай е прекъснат с до 15 кислородни атоми, и/ или с до 3 карбонилни групи, и/ или може да бъде заместен с до 5 хидроксилни групи,
    R4 означава един водороден атом или един флуорен, хлорен, бромен или йоден атом, b означава 2 или 3,
    X и Y означават кислороден атом, сяра или групата =С (СН3)2 или -(CH = СН)- , №
    L означава една директна връзка или един линкер, който означава една права или разклонена въглеродна верига с до 20 въглеродни атоми, които могат да бъдат заместени с един или повече -ОН, -СООН, SO3 - групи, и/ или в даден случай може да бъде прекъснат еднократно или многократно чрез една -0-, -S-, -CO-, -CS-, -CONH-, -NHCO-, -NHCSNH-, -SO2-, РО4~ или -NH-групи или един арилов пръстен.
    б.Съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 4, характеризиращи се с това, че като антитела се използват антитела L19 и 1_8.
  6. 6. Съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 5, харлактеризиращи се с това, че багрилото индуцира оптически сигнал във видимата спектрална област на светлината.
  7. 7. Съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 5, характеризиращи се с това, че багрилото индуцира флуоресцентен сигнал при използване на дължина на вълната от определена област на видимата или близка до черваната светлина.
  8. 8. Фармацефтично средство, включващо едно или повече съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 7, за интраоперативно изобразяване на граничните области ( т.е. размерите) на огнището на заболяването.
  9. 9. Фармацефтично средство съгласно претенция 8, в смес с подходящи разтворители, буфери и/ или носители.
    MiaMttlti • · • · • · ··· ·· ·· ···· • ·· • · · • ·· • · ·· ·· ·· ·* ·· •· · · •· · •· · • ·· ·· ····
  10. 10. Използване на съединения на антитела и багрила и претенции 1 до 9 за интраоперативно средства съгласно изобразяване на огнището на заболяване.
  11. 11. Използване на съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 9 за интраоперативно изобразяване на граничните области на огнището на заболяване.
  12. 12. Използване на съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 9 за микро- и макроскопско, интраоперативно изобразяване на граничните области на огнището на заболяване.
  13. 13.Използване на съединения на антитела и багрила съгласно претенции 1 до 7 за получаване на средство за хирургическо третиране на заболявания свързани с ангиогенезата, като малигнени тумори и техните метастази, бенигнени тумори, преканцерозни промени на тъканта, ендометриози, хемангиоми и извънматочна бременност.
BG106528A 1999-09-24 2002-03-19 Конюгати на антитела и багрила за структурн0 очертаване на ангиогенезата при интраоперативно изобразяване на размерите на тумори BG65682B1 (bg)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19947559A DE19947559A1 (de) 1999-09-24 1999-09-24 Antikörper-Farbstoffkonjugate gegen Zielstrukturen der Angiogenese zur intraoperativen Tumorranddarstellung

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG106528A true BG106528A (bg) 2002-12-29
BG65682B1 BG65682B1 (bg) 2009-06-30

Family

ID=7924318

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG106528A BG65682B1 (bg) 1999-09-24 2002-03-19 Конюгати на антитела и багрила за структурн0 очертаване на ангиогенезата при интраоперативно изобразяване на размерите на тумори

Country Status (23)

Country Link
EP (2) EP1214099A1 (bg)
JP (1) JP2003510294A (bg)
KR (2) KR100832937B1 (bg)
CN (1) CN1269530C (bg)
AU (1) AU779026B2 (bg)
BG (1) BG65682B1 (bg)
BR (1) BR0014192A (bg)
CA (1) CA2385593A1 (bg)
CZ (1) CZ2002991A3 (bg)
DE (1) DE19947559A1 (bg)
EE (1) EE05176B1 (bg)
HK (1) HK1050491A1 (bg)
HU (1) HUP0202625A2 (bg)
IL (2) IL148405A0 (bg)
MX (1) MXPA02002639A (bg)
NO (1) NO20021441L (bg)
NZ (1) NZ517944A (bg)
RO (1) RO121598B1 (bg)
RU (1) RU2002109237A (bg)
SK (1) SK3972002A3 (bg)
WO (1) WO2001023005A1 (bg)
YU (1) YU20702A (bg)
ZA (1) ZA200203225B (bg)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003524018A (ja) 2000-02-24 2003-08-12 アイトゲネーシシェ テクニシェ ホッホシューレ チューリッヒ フィブロネクチンのｅｄ‐ｂドメインに特異的な抗体、前記抗体を含む複合体、および血管形成を検出および治療するためのその使用
US6440389B1 (en) * 2000-07-19 2002-08-27 The General Hospital Corporation Fluorescent agents for real-time measurement of organ function
AT413487B (de) * 2002-08-12 2006-03-15 Igeneon Krebs Immuntherapie Verwendung von antikörpern gegen ein tumor-assoziiertes antigen
NO20034351D0 (no) * 2003-09-29 2003-09-29 Amersham Health As Optisk avbilding av endometrose
ATE374367T1 (de) * 2004-07-22 2007-10-15 Bayer Schering Pharma Ag Verwendung von cyanin-farbstoffen zur diagnose von krankheiten, welche mit angiogenese assoziert sind
EP1679082A1 (en) * 2005-01-07 2006-07-12 Schering AG Use of cyanine dyes for the diagnosis of proliferative diseases
US20120041305A1 (en) * 2009-04-21 2012-02-16 The University Of Utah Research Foundation Light-emitting dye for intraoperative imaging or sentinel lymph node biopsy
WO2018026965A1 (en) * 2016-08-02 2018-02-08 Isi Life Sciences, Inc. Compositions and methods for detecting cancer cells in a tissue sample

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4341223A (en) * 1981-02-04 1982-07-27 Lutz Lauralee A Fluoresceable composition and method of determining fluid flow
WO1996001653A1 (en) * 1994-07-11 1996-01-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for the specific coagulation of vasculature
TWI259837B (en) * 1998-05-11 2006-08-11 Eidgenossische Tech Hochscule Specific binding molecules for scintigraphy, conjugates containing them and therapeutic method for treatment of angiogenesis

Also Published As

Publication number Publication date
KR20070087232A (ko) 2007-08-27
HK1050491A1 (en) 2003-06-27
NO20021441D0 (no) 2002-03-22
WO2001023005A1 (de) 2001-04-05
DE19947559A1 (de) 2001-04-19
CN1269530C (zh) 2006-08-16
CA2385593A1 (en) 2001-04-05
NO20021441L (no) 2002-05-15
PL354027A1 (en) 2003-12-15
EE05176B1 (et) 2009-06-15
HUP0202625A2 (en) 2002-12-28
EE200200152A (et) 2003-04-15
RU2002109237A (ru) 2003-11-27
KR100832937B1 (ko) 2008-05-27
EP1532988A3 (de) 2008-09-17
EP1532988A2 (de) 2005-05-25
BR0014192A (pt) 2002-05-21
BG65682B1 (bg) 2009-06-30
IL148405A (en) 2009-06-15
IL148405A0 (en) 2002-09-12
CN1376074A (zh) 2002-10-23
YU20702A (sh) 2005-06-10
MXPA02002639A (es) 2002-07-30
ZA200203225B (en) 2003-07-23
CZ2002991A3 (cs) 2002-06-12
AU779026B2 (en) 2005-01-06
JP2003510294A (ja) 2003-03-18
RO121598B1 (ro) 2007-12-28
SK3972002A3 (en) 2002-09-10
AU6702600A (en) 2001-04-30
NZ517944A (en) 2004-06-25
KR20020039349A (ko) 2002-05-25
EP1214099A1 (de) 2002-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Licha et al. Hydrophilic Cyanine Dyes as Contrast Agents for Near‐infrared Tumor Imaging: Synthesis, Photophysical Properties and Spectroscopic In vivo Characterization¶
DE60133626T2 (de) Hydrophile zyaninfarbstoffe
US6761878B2 (en) Pathological tissue detection and treatment employing targeted benzoindole optical agents
ES2324198T3 (es) Metodo para medir una funcion fisiologica con un colorante como acido poliacrilico de fluoresceina.
RU2350355C2 (ru) Флюоресцентный контрастирующий агент ближней инфракрасной области спектра и способ флуоресцентной томографии
CA2806659C (en) Fluorescent probe for imaging lymph nodes
EA005070B1 (ru) Флуоресцентный контрастный агент для ближней инфракрасной области спектра
EP1559374A1 (en) Cyanine dyes
US20030105299A1 (en) Carbocyanine dyes for tandem, photodiagnostic and therapeutic applications
EP1561425A1 (en) Indocyanine dyes
BG106528A (bg) Съединения на антитела и багрила спрямо структурните очертания на ангиогенезата при интраоперативноизобразяване на размерите на тумори
US6447749B1 (en) Perfluoro-alkyl containing dye molecules and galencial formulations
US20030152577A1 (en) Dye-bioconjugates for simultaneous optical diagnostic and therapeutic applications
US20030105300A1 (en) Tumor targeted photodiagnostic-phototherapeutic agents
PL203535B1 (pl) Koniugaty przeciwcia lo-barwnik, srodki farmaceutyczne je zawieraj ace i zastosowanie
Vervoorts et al. Specific labeling of microtumors in the hen's egg test system by dimethoxyhematoporphyrin
Vervoorts et al. The accumulation of fluorescent dyes and anticancer drugs in tumors is a fundamental requirement for tumor-diagnosis and-therapy. We tested various photosensitizers on
Liu et al. Tuning the photophysical properties of cyanine by barbiturate functionalization and nanoformulation for efficient optoacoustics-guided phototherapy