PT96135B

PT96135B - Processo para a preparacao de analogos peptido de somatostatina tendo treonina na sexta posicao

Info

Publication number: PT96135B
Application number: PT96135A
Authority: PT
Inventors: David Howard Coy; William A Murphy
Original assignee: Univ Tulane
Priority date: 1989-12-08
Filing date: 1990-12-07
Publication date: 1998-04-30
Also published as: EP0457888B1; US5506339A; PT96135A; KR920702854A; EP0457888A1; CA2046594A1; JPH04505456A; HUT59166A; ATE140237T1; DE69027767T2; ES2091907T3; ZA909896B; JP2925321B2; DE69027767D1; GR3020513T3; DK0457888T3; EP0457888A4; WO1991009056A1

Description

A presente invenção refere-s~e a ura processo para a preparação de ura composto da fórmula geral:

em que cada A^ e é, independentemente, H, alquilo 0y_^2⁵ f^enilal' quilo 6>7_20’ (onde R^ é alquilo ¢^-20⁵ alquenilo ¢3-2(3 alquinilo ¢3..20⁵ naf tilo ou fenilalquilo 0^_^θ) ^ou

2OCO (em que R^ é alquilo C^-IO ^ou enilalquilo Ογ_^θ) com a condição de quando um de ou A£ for R^CO ou R2OCO o outro deve ser H;

cada X_T e X₂ é, independentemente, H, F, Cl, Br, OH, CH^ ou CF^ com a condição de pelo menos um de e ^ser é Phe ou Tyr; e é OH, NH2 ou NH-R^ (em que R^ é um alquilo alifático satu rado C-^_g);

ou a um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico correspondente;

caracterizado por 0 primeiro passo para a obtenção de D-Phe-dys-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-^Nal-NH₉ consistir na prepara.

_ 1 o

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Ref: Biomeasure-Somatostatin THR-6 (00537/042001)

ção do intermediário de resina Terc-butiloxicarbonil-D-PheS-metilbenzil-Cys-Phe-D-Trp-NS-benziloxicarbonil-Lys-Thr-Smetilbenzil-Cys-p-Nal-NB^-benzidrilamina;

- se fazer reagir uma resina metil-benzidrilamina-polistireno na forma de ião cloreto para conduzir ao seguinte ciclo de reacção:

(a) cloreto de metileno; (b) 33% de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno; (c) cloreto de metileno; (d) etanol; (e) cloreto de metileno; Cf) 10% de trietilamina em clorofórmio

- a resina neutralizada ser agitada e a resina de ami no-ácido resultante ser' então repetida em ciclo dos passos (a) a (f).

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Ref: Biomeasure-Somatostatin T.HR-6 (00537/042001) -

Antecedentes

Esta invenção refere-se a péptidos terapêuticos. Tem sido descrito um número de análogos de somatostatina exibindo actividade de inibição de libertação de hormona de crescimento, incluindo análogos contendo menos de 14 aminoáci dos que ocorrem naturalmente. Por exemplo, Coy et al., Patente Americana N⁹ . 4 485 101, aqui incorporada como referência, descreve dodecapeptidos possuindo um grupo acetilo de terminal amino, um grupo aminode terminal carboxi, D Trp na posição 6 e p-Cl-Phe na posição 4. (0 nome de cada aminoácido é aqui designado pela sua abreviatura padrão de três letras; a designação estereoisoméric.a de cada aminoácido é L a menos que se especifique de outro modo.)

Sumário da Invenção

Em geral, a invenção descreve um composto da fórmula: Λ'

A-,

em que cada A^ e A2 independentemente é H, alquilo Cj_q2^J fenil alquilo R-j-CO (em que R^ é alquilo alquenilo alquinilo ^c3„20

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Ref: Biomeasure-Somatostatin THR-6 (00537/042001)

J

.GEZ,1990

Mod. 71 - 20.000 ex. - SO/08 fenilo, naftilo on fenilalquilo ou RgOCO (em que R2 é alquilo Cq_40 ^ou fenilalquilo com ^a condição de quan;

do um Ag ou A2 é RgCO ou RgOCO ° outro deve ser H;

cada Xg e X^’ independentemente, é H, F, Cl, Br, 0H, CHg ou CFg, com a condição de, pelo menos, um de Xg e Xg ser H;

Ag é Phe ou Tyr; e

A^ é 0H, NHg ou NH-Rg (em que Rg é um grupo:'., alquilo Cg_g ali fático saturado);

ou.um seu sal correspondente'aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico_s Os aminoácidos que ocorrem naturalmente são indicados pelos símbolos de três letras normalmente aceites; a menos que seja especificado o estereoisómero D de um aminoácido (outro que não P-Nal), considera-se a forma L. β-Nal indica D- ou L-Ç-naftilaianina, a menos que se especifique o estereoisómero D- ou L-.

. Nas forma de realização preferidas, cada Ag e Ag independentemente,, é H ou um grupo alquilo Cg_g alifático saturado;

cada Xg e Xg, independentemente, é H, F, Cl, ou 0H, com a condição de que pelo menos um de Xg e Xg ser H; e Rg é um grupo alquilo Cg_g alifático saturado; de preferência, o com posto tem a fórmula:·

Γ---1 -

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- /3-Nal-NHg ou

1--1

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-£~Nal-NHg

Num outro aspecto a invenção descreve compostos da fórmula:

J--1

D-PNal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHg e

5-^!-í

D-BNal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHg ou um ·· ¹ sal correspondente aceitável sob o ponto de vista

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Ref: Biomeasure-Sonatostain THR-6 (00537/042001)

farmacêutico.

Também se descreve uma combinação de um dos compostos anteteriores e um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico numa composição terapêutica capaz de inibir a libertação do factor de crescimento de epiderme da hanrana de crescimento (GH) _r insulina, glucagon, secreções de exocrina pencreática, ou substância P, e de preferência

GH.

Em formas de realização preferidas, a composição encontra-se sob a forma de uma pílula, comprimido, capsula ou líquido para adminis- / ·; tração oral; de um creme, gel. loção, pulverizador, ou unguento para a aplicação na pele de um doente; um líquido capaz de ser administrado sob a forma nasal como gotas ou pulverização; ou de um líquido capaz de administração intravenosa, subcutânea, parenteral ou intraperitonal. A com posição terapêutica pode também estar na forma de una emulsão ou dispersão oleosa em conjunção com um sal liofílico tal cerra ãcido pamoico ou sob a forma de uma fonnuí^ão de libertação controlada biodegradável para administração subcutânea ou intramuscular. Para eficácia mãxima, é desejável uma libertação de ordem zero. A libertação de ordem zero pode ser conseguida utilizando .uma bomba externa ou implantável para administrar acomposição terâpeutica.

Os compostos da invenção exibem uma gama larga de actividades biológicas relacionadas com as suas propriedades’ anti-secretórias e anti-proliferativas.

»

Os ccmpostos reprimem a secreção de várias harmonas endccrinas, incluindo a.insulina, glucagon e, em particular a hormona de crescimento (GH). Os compostos da invenção também reprimem secreções exocrinas pancreáticas e gástricas e reprimem ou modulam a libertação de al guns neurotransmissores, incluindo a substância P e acetilcolina.

Os análogos de somatostatina podem efectar a multiplicação das células tumorais evitando a libertação de factores mitóticos (ta 5 e como factores.de crescimento1 como a insulina (IGF-1), pêptidos libertando gastrina, etc.) e podem = 3 =

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Ref: Bio?easure-Somatostatin THR-6 (00537/042001)

dem interferir com o mecanismo de transdução intracelular, como, por exemplo, no caso da proliferação das células induzidas por factor de crescimento da epiderme (EGF):

A extremidade N-terminal lipofílica aromática pode proporcionar actividade in vivo de longa duração.

Outros aspectos e vantagens da invenção aparecem na descrição a seguir das formas de realização preferidas e nas reivindicações.

Descrição das Formas de Realização- Preferidas

Estrutura

Os compostos da invenção que são análogos de péptidos de somatostatina têm a fórmula geral descrita no Resumo da Invenção.

Os compostos podem ser proporcionados sob a for ma de sais ou complexos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Como se utiliza aqui o termo sais ou complexos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico refere-se a sais ou complexos que retêm a actividade biológica desejada do composto inicial e não provocam quaisquer efeitos toxicológicos não desejados. Exemplos desses sais são (a) sais de adição de ácido formadosios por ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, ácido brimídrico, ácido sulfúrico, áci do fosfórico, ácido nítrico e análogos) e sais formados por ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, -ácido succínico, ácido itálico, ácido ascórbico, ácido benzóico , ácido tânico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácidos naftalenossulfonico, ácidos nafta lenodissulfónicos ,e ácido poligalacturónico; (b) sais de adição de base formados por catiões de metal polivalente, tal cc mo, zinco, cálcio^ bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio e análogos ou por um catião orgânico formado a partir de Ν,Ν-dibenziletileno-diamina ou etilnodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b): por exemplo, um sal de

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Ref: Biomeasure-Somatostatin THR-6 (00537/042001) tanato de zinco ou análogos.

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Síntese

Segue-se a síntese de um octapeptido. Podem-se pre parar outros compostos da invenção fazendo modificações apropriadas dentro da capacidade de um perito da especialidade neste campo, do método sintético seguinte.

primeiro passo na preparação de- D-Pne-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-pNal-NE^ foi a preparação da resina intermediária terc-butiloxicarbonil-D-Phe-S-metilbenzil-Cys-Phe-D-Trp-N^-benziloxicarbonil-Lys-Thr-S-metilbenzil-Cys&Nal-NH^-benzidrilamina como se segue.

A resina de metil-benzidrilamina-polistireno (Advanced Chem-Tech, Inc.) na forma de ião cloreto foi colocada no vaso de reacção de um sintetizador de péptidos Beckman 99OB programado para realizar seguinte ciclo de reacção: (a) cloreto de metileno; (b) 33% de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno (2 vezes durante 1 e 25 minutos cada); (c) cloreto de metileno; (d) etanol; (e) cloreto de metileno; (f) 10% de trietilamina em clorofórmio.

A resina neutralizada foi agitada com Boc-pNal e diisopropilcarbodiimida (1,5 mmole cada) em cloreto de metile no durante 1 hora e a resina de aminoácido resultante foi de. pois ciclizada através dos passos (a) a (f) no programa de lavagem anterior. Os seguintes aminoácidos (1,5 mmole) foram depois ligados sucessivamente pelo mesmo processo;

Boc-S-metilbenzil-Cys, Boc-Thr, Boc-N^-benziloxicarbonil-Lisi na, Boc-D-Trp, Boc-Phe-Bqç-Pbév :Ecc-S_Tme^B^nzil-C^s',;;hoc-D-Phe.

A resina foi lavada e seca e depois misturada com anisol (4 ml) e hidrogeno anidro (36 ml) a 0°C e agitada durante 45 minutos (podendo-se utilizar tioanisol, ácido trifluoroacético e ácido trifluorometano sulfónico numa proporção de 1:90:9 durante 6 horas). Evaporou-se o excesso de hidrogeno fluoreto , rapidamente, sob uma corrente de nitrogénio seeo e péptido livre precipitado e.lavou-se com éter. 0 péptido bruto foi depois dissolvido em 800 ml de 90% dé áci35

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do acético, ao qual se adicionou I₂ em metanol até uma cor castanha permanente aparecer. A solução foi depois agitada durante 1 hora antes da remoção do solvente in vacuo. 0 óleo resultante foi dissolvido num volume mínimo de 50% de ácido acético e elutriado numa coluna (2,5 x 100 nm) de Sephadex G-25. As fracções contendo um componente principal por absorção UV etcromatografia de camada fina foram depois reunidas evaporada até um volume pequeno e aplicadas--a uma coluna (2,5 x 50 cm) de Vydac octadecilsilano (10 - 15 μΜ).

A coluna foi elutriada com um gradiente linear de 10. - 50% de acetonitrilo em 0,1% de ácido t cifluoroacét ico em água. As fracções foram examinadas através de cromatografia de camada fina e cromatografia líquida de alta resolu ção analítica, reunidas para proporcionar a pureza máxima, e se se desejar, preparou-se um sal diferente, por exemplo, acetato ou fosfato. A liofilização repetida da solução a par. tir da água proporcionou 120 mg do produto sob a forma de um pó branco com penugem.

Verificou-se que o produto era homogéneo atrja vés de cromatografia líquida de alta resolução e cromatografia de camada fina. A análise de aminoácidos de um hidrolisa. do ácido confirmou a -composição do octapeptido.

Os compostos da invenção possuindo as formulas · »-1

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-LysçThr-Cys-pNal-NB^ j r . —j

D-f»Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂ e

t--,

D-PNal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂ foram preparados de acordo com métodos análogos aos descritos atrás.

;Utilização

Quando administrados a mamíferos, particular62.972

Ref: Biõmeasure-Somatostatin THR-6 (00537/042001)

Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08 mente a seres humanos _(por exemplo, oralmente\ topicamente; intravenosamente; parenteralmente sob a forma biodegradável de libertação controlada; por via nasal ou sob a forma de supositório), os compostos podem ser eficazes para inibir a secreção de várias hormonas e factores tróficos. Podem ser utilizados para reprimir certas secreções endócrinas, tais como

GH, insulina, glucagon e prolactina no tratamento de, por %

exemplo, acromegalia; tumores endócrinos tais como carcinoides, vipomas, insulinoma e glucagonomas; ou diabetes e patologias relacionadas com diabetes, incluindo retinopatia, nefropatia, sindroma do amanhecer e diabetes do tipo 2. Os com postos podem também ser utilizados para reprimir as secreções exócrinas no pâncreas, estômago e intestinos-, para tratamento de, por exemplo, pancreatites, fístulas, úlceras com sangria e diarreia associada a doenças como SIDA ou cólera. As doenças envolvendo secreção autocrinas ou paracrinas de factc. res tróficos tais como IGH-1 (bem como alguns factores endócrinos) que podem ser tratados por administração destes compostos incluem cancros no seio, próstata, e pulmão, (células pequenas e não pequenas epidermoides), bem como hepatomas, neuroblastomas, cólon e adenocarcinomas pancreáticos (tipo actual), condrossarcomas e melanomas e também aterosclerose . associada com enxertos vasculares e restenosis seguindo-a angioplastia.

Os compostos da invenção também são eficazes para reprimir os mediadores da inflamação neurogénica (por exemplo, substância P ou taquiquininas) e deste modo podem ser utilizados no tratamento de patologias como artrite reu matoide; psoriase; inflamação tópica associadas a queimaduras solares, eczemas ou outros tipos de pruridos e alergias incluindo asma. Os compostos também podem funcionar como neu romoduladores no sistema nervoso central com aplicações úteis no tratamento da doença de Alzheiner e outras formas de deI meneia, dores (como um analgésico espinal) e dores de cabeça*.

Além do mais, nas doenças envolvendo o fluxo sanguíneo esplâncnico, incluindo cirrose, varizes esofágicas e certos • 35

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Ref: Biomeasure-Somatostatin THR-6 (00537/042001)

casos de intoxicação de cogumelos, os compostos da invenção podem proporcionar citoprotecção.

Os compostos podem ser administrados a um mamífero, por exemplo, um ser humano, numa dosagem compreendida entre 0,01 e 50 mg/Kg/dia, de preferência 0,1 e 5 mg/Kg/ dia.

Outras formas de realização estão compreendidas nas seguintes reivindicações.

Claims

-REIVINDICAÇOES1-. - Processo para a preparação de um' composto de fórmula geral

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A, em que cada A^ e A^, independentemente, é H, alquilo fenilalquilo Ογ_^θ, R^CO (em qúe R^ é alquilo Cq_2(p alquenilo ^C3_20’ alquinilo ^^-20’ > naftilo, ou fenilalquilo

Ογ_^θ), ou R2OCO (em que R£ é alquilo C^-jqOu fenilalquilo ^7-10^ ^{com a COnc}^Ção de quando um de A-^ ou é R^CO ou R2OCO 0 outro deve ser H;

cada X^ e .independentemente, é H, F, Cl, Br, 0H, CHg ou CF^ com a condição de pelo menos, um de X^ e X2 ser H;

A3 é Phe ou Tyr; e

A^ é 0H, NH2 ou NH-R^ (em que Rg é um alquilo C^g .alifático

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Ref: BiomeasTj.re-Somatost.atin THR-6 (00537/042001) saturado);

ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico; caracterizado por^- o primeiro passo para a obtenção de D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Val-C^s-PNal-NH^' consistir na prepação do intermediário de resina Terc-butiloxicarbonil-D-Phe-S-metilbenzil-Cys-Phe-D-Trp-N£-benziloxicárbonil-Lys-Thr-S-me tilbenzil-Cys^Nal-NH₂~benzidrilamina;

- se fazer reagir uma resina metil-benzidrilàmlna-polistireno na forma de ião cloreto para conduzir ao seguinte ciclo de reacção:

(a) cloreto de metileno; (b). 33% de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno; (c) cloreto de metilano; (d) etanol; (e) cloreto de metileno; (f) 10% de trietilamina em clorofórmio

- resina neutralizada ser agitada e a resina de amino-ácido ersultante ser então repetida em ciclos dos passos (a) a (f).
2-. - Processo de acordo com a reivindicação

1, caracterizado por no composto cada e independentemente, .ser H ou um alquilo alifático saturado;

cada X^ e Xg, independentemente, ser H, F, Cl ou OH com a cor. dição de pelo menos um de e X₂ ser H; e

Rg ser um alquilo 3 alifático saturado; ou um seu sal aceú tável sob o ponto de vista farmacêutico.
3-. - Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por .0 composto possuir a fórmula:

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Tb.r-Cys~GNal-Nff₂, ou ser um seu sal- aceitável sob o ponto de vista farmacêutico .
4^ã. - Processo de acordo com a reivindicação , caracterizado por o composto possuir a fórmula:

B-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-»Nal-NH₂,

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Ref: Biomeasure-Somatostatin THR-6 (00537/042001) ou ser um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico ,
5- . - Processo para a preparação de um compos to da fórmula:

I-^;-1

D-VNal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-N^ ou

5---j

D-^Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-fffi^ de acordo com· as reivindicações anteriores..
6- . - Processo para a preparação de uma-composição terapêutica capaz de inibir a libertação de GH; o fac tor de crescimento da epiderme; a insulina; o glucagon; a pre lactina; secreções de exoerina a partir do pâncreas, estômago ou intestinos podendo a referida composição encontrar-se sob a forma de um líquido, pílula, comprimido ou cápsula pare administração oral; a um doente humano;

sob a forma de um creme, gel, loção, uma forma pulverizada ou uma pomada para aplicação na pele de um doente humano; ou na forma de um líquido capaz de ser administrado por via na sal como gotas ou pulverização a um doente humano; na forma _z subcutânea de um liquido para administração intravenosa, parenteral ou intraperitoneal a um doente humano; na forma de uma composição ' biodegradável de libertação controlada para administração intramuscular a um doente humano; caracterizado por compreender uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do composto de acordo com a reivindicação 1 ou 5 em. conjunto com uma'substância veículo aceitável sob o ponto de vis ta farmacêutico.
7- . - Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por a composição se capaz de inibir a líber, tação de GH.
8^ã. - Processo de acordo com a reivindicação

6, caracterizado por a composição incluir um sal lipofílico e ser apropriada para administração sob a forma de uma emulsão oleosa ou dispersão a um doente humano.

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