HUT59166A

HUT59166A - Process for producing octqpeptide somatostatine analogues with treonine at the 6 position and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: HUT59166A
Application number: HU912648A
Authority: HU
Inventors: David H Coy; William A Murphy
Original assignee: Univ Tulane
Priority date: 1989-12-08
Filing date: 1990-12-04
Publication date: 1992-04-28
Also published as: ATE140237T1; ES2091907T3; EP0457888B1; JPH04505456A; KR920702854A; PT96135A; DE69027767D1; PT96135B; ZA909896B; CA2046594A1; US5506339A; DE69027767T2; EP0457888A1; EP0457888A4; DK0457888T3; JP2925321B2; GR3020513T3; WO1991009056A1

Description

KIVONAT

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek - a képletben

Αχ és A2 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, fenil-(l-4 szénatomos)alkil-csoport, Rj-CO- általános képletű csoport, ahol

Rx jelentése 1-20 szénatomos alkilcsoport, 3-20 szénatomos alkenilcsoport, 3-20 szénatomos alkinilcsoport, fenilcsoport, naftilcsoport vagy fenil-(l-4 szénatomos)alkil-csoport, vagy R2-OCO- általános képletű csoport, ahol

R₂ jelentése 1-10 szénatomos alkilcsoport vagy fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, azzal a megkötéssel, hogy ha Αχ és A₂ közül az egyik Rx~CO- vagy R₂-0C0- cső• · ·· « ···· · ······« ·· • ·· Μ ♦ · · · • · · · · · ···· · · ······ ··· ' -2I portot jelent, akkor a másik jelentése hidrogénatom;

Xf és X₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, fluor-, klór- vagy brómatom, hidroxilcsoport, metilcsoport vagy trifluor-metil-csoport, azzal a megkötéssel hogy és X2 közül legalább az egyik jelentése hidrogénatom,

A3 jelentése Phe vagy Tyr, és

A4 jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport vagy

-NH-R3 általános képletű csoport, ahol

R₃ jelentése 1-8 szénatomos telített alifás alkilcsoport és gyógyászatilag elfogadható sóik gyógyászati készítmények hatóanyagaként emlős állatok különféle betegségei kezelésére alkalmazhatók, amelyekben a növekedési hormon, a felhám-növekedési faktor, az inzulin, a glukagon, a prolaktin, a pankreász, gyomor és bélrendszer exokrin szekréciói, a tachykinin és a P-anyag koncentrációjának csökkentésére van szükség.

73025-2444-SI

59166

KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY -r

Képviselő:

DANUBIA SZABADALMI ÉS VÉDJEGY IRODA KFT.

9-/0=/

6-OS HELYZETBEN TREONINT TARTALMAZÓ OKTAPEPTID SZOMATOSZTATIN-ANALÓGOK, EZEKET TARTALMAZÓ GYÓGYÁSZATI KÉSZÍTMÉNYEK,

ÉS ELJÁRÁS EZEK ' ELŐÁLLÍTÁSÁRA cÉS ALKALMAZÁSÁRA

THE ADMINISTRATION OF THE TULANE EDUCATIONAL FUND

New Orleans, Louisiana, Amerikai Egyesült Államok

Feltalálók:

COY Dávid Η.,

MURPHY William A.,

New Orleans, Louisiana, Covington, Louisiana, Amerikai Egyesült Államok

876)

Bejelentés napja: 1990.

Elsőbbsége: 1989.

Amerikai Egyesült Államok

Nemzetközi bejelentés száma: PCT/US90/07074

Nemzetközi közzététel száma: WO 91/09056

73025—2444—SI

-2• ·· ···· · • · · · * · • · · ·· ······ ♦··

A találmány gyógyászatilag hatásos peptidekre vonatkozik.

A szakirodalomban számos növekedési hormon felszabadulást gátló hatású szomatotropin-analógot ismertettek, többek között olyan analógokat is, amelyek a természetben előforduló 14 aminosavat tartalmazó peptidnél kevesebb aminosavat tartalmaznak. így például Coy és munkatársai a 4 485 101 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban amino-terminális acetilcsoportot, karboxi-terminális aminocsoportot, 6-os helyzetben D-Trp-t és 4-es helyzetben pCl-Phe-t tartalmazó dodekapeptideket ismertettek. (A leírásban az egyes aminosavak nevét a szokásos hárombetűs rövidítéssel jelöljük; az aminosavak L-sztereoizomer formában vannak, hacsak azt ettől eltérően nem jelezzük).

A találmány közelebbről az (I) általános képletű yegyületekre - a képletben Aj és A2 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, R^-CO- általános képletű csoport, ahol

R1 jelentése 1-20 szénatomos alkilcsoport, 3-20 szénatomos alkenilcsoport, 3-20 szénatomos alkinilcsoport, fenilcsoport, naftilcsoport vagy fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, vagy R₂-OCO- általános képletű csoport, ahol R2 jelentése 1-10 szénatomos alkilcsoport vagy fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, azzal a megkötéssel, hogy

-3ha Ai és A₂ közül az egyik R^-CO- vagy R₂-OCO- csoportot jelent, akkor a másik jelentése hidrogénatom;

X1 és X₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, fluor-, klór- vagy brómatom, hidroxilcsoport, metilcsoport vagy trifluor-metil-csoport, azzal a megkötéssel hogy X^ és X₂ közül legalább az egyik jelentése hidrogénatom,

A3 jelentése Phe vagy Tyr, és

A4 jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport vagy

-NH-R3 általános képletű csoport, ahol

R3 jelentése 1-8 szénatomos telített alifás alkilcsoport és gyógyászatilag elfogadható sóikra vonatkozik.

A természetes aminosavalat a szokásos hárombetűs szimbólummal jelöljük; abban az esetben, ha nem adjuk meg, hogy a (BNal-tól eltérő) aminosav D-sztereoizomer formában van, az aminosav L-formában van. A BNal D- vagy L-B-naftilalanint jelent, hacsak a D- vagy L-sztereoizomer formát külön nem adjuk meg.

Előnyösek azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyek képletében Αχ és A₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy telített alifás 1-3 szénatomos alkilcsoport; Xi és X₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, fluor- vagy klóratom vagy hidroxilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy Xj és X₂ közül legalább az egyik hidrogénatomot jelent; és R3 jelentése telített alifás 1-3 szénatomos alkilcsoport; még előnyösebbek az (1) és (2) képletű vegyüle• · ·«** ······· ·· β ·« · · ·* · · · · · · ···· · · ··· ··· · ·· -4tek és gyógyászatilag elfogadható sóik.

A találmány szerinti vegyületek közé tartoznak a (3) és (4) képletű vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik is.

A találmány továbbá gyógyászati készítményekre is vonatkozik, amelyek egy fenti (I) általános képletű vegyületet vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját és egy gyógyászatilag elfogatható hordozóanyagot tartalmaznak, a fenti gyógyászati készítmények gátolják a növekedési hormon (GH), felhám-növekedési hormon, inzulin, glukagon, pankreász exokrin szekréciók, vagy a P-anyag, előnyösen a GH felszabadulását.

A gyógyászati készítmények formája előnyösen orális adagolás céljára pirula, tabletta, kapszula vagy folyadék; a beteg bőrére adagolható króm, gél, lemosó, spray vagy kenőcs; orron áti adagolásra alkalmas folyadék, például spray vagy csepp; vagy intravénásán vagy szubkután módon, parenterálisan vagy intraperitoneálisan adagolható folyadék lehet. A gyógyászati készítmény olajos emulzió vagy diszperzió formájában is lehet valamely lipofil sóval, például pamoesawal, illetve szubkután vagy intramuszkuláris módon adagolható, biológiailag lebontható, nyújtott hatású készítmény formájában. Maximális hatékonyság biztosítására O-rendű felszabadulás a kívánatos. O-rendű felszabadulást implantált vagy külső szivattyú alkalmazásával érhetünk el, amely a gyógyászati készítményt adagolja.

A találmány szerinti vegyületek széles spektrumú biológiai aktivitással rendlekeznek, antiszekréciós és anti-5• · · · · · ···· · · ······ ··· proliferatív tulajdonságaik következtében. A vegyületek gátolják számos endokrin hormon kiválasztását, beleértve az inzulint, glukagont, és különösen a növekedési hormont (GH) . A találmány szerinti vegyületek gátolják a pankreász és gyomor exokrin szekréciót is, és gátolják vagy szabályozzák bizonyos neurotranszmitterek, például a P-anyag és az acetil-kolin felszabadulását is.

A szomatotropin-analógok befolyásolhatják a rákos sejtek szaporodását is a mitózis-faktorok - például inzulinszerű 1-es növekedési faktor (IGF-1), gasztrin-felszabadító peptidek, stb. - felszabadulásának gátlása révén, és zavarhatják az intracelluláris transzdukció mechanizmusát, például a felhám növekedési faktor (EGF) által indukált sejt-proliferáció esetében.

Az aromás lipofil N-terminális vég hosszantartó in vivő aktivitást biztosíthat.

A találmány további jellemzői és előnyei az előnyös kivitelezési módok alábbi ismertetéséből és az igénypontokból szakember számára nyilvánvalók lesznek.

A találmány szerinti vegyületek a szomatosztatin peptid-analógjai, és szerkezetük a fenti (I) általános képlettel jellemezhető.

A találmány szerinti vegyületek gyógyászatilag elfogadható sóik vagy komplexeik formájában is lehetnek. A leírásban gyógyászatilag elfogadható sók és komplexek alatt olyan sókat és komplexeket értünk, amelyek megtartják az alapvegyület kívánt biológiai aktivitását, és nem rendelkeznek semmiféle nemkívánatos toxikus hatással. A fenti sók

-6•· ·« · ···· · ······· ·· • ·· ···· · • · · · · · ···· ·· ··· ··· ··· például (a) szervetlen savakkal (így sósavval, hidrogén-bromiddal, kénsavval, foszforsavval, salétromsavval, stb.) vagy szerves savakkal (például ecetsavval, oxálsawal, borkősavval, borostyánkősavval, almasavval, aszkorbinsawal, benzoesavval, csersavval, pamoesawal, alginsawal, poliglutaminsavval, naftalinszulfonsavakkal, naftalin-diszulfonsavakkal, poligalakturonsawal, stb.) alkotott savaddíciós sók;

(b) többértékű fém kationokkal (például cinkkel, kalciummal, bizmuttal, báriummal, magnéziummal, alumíniummal, rézzel, kobalttal, nikkellel, kadmiummal, stb.) vagy Ν,Ν-dibenzil-etilén-diaminból vagy etilén-diaminból képzett szerves kationnal alkotott bázisaddíciós sók; vagy (c) az (a) és (b) kombinációi, például cink-tannát-só vagy hasonló sók lehetnek.

A találmány szerinti vegyületek előállítását egy bizonyos oktapeptid szintézisének leírásával ismertetjük. A többi találmány szerinti vegyületet is hasonló módon állíthatjuk elő, az alábbi szintetikus eljárás szakember számára kézenfekvő módosításaival.

Az (1) képletű oktapeptid előállításának első lépéseként előállítjuk a (terc-butoxi-karbonil)-D-Phe-S-(metil-benzil)-Cys-Phe-D-Trp-N^e-(benzil-oxi-karbonil)-Lys-Thr-S-(metil-benzil)-Cys-eNal-NH2~benzhidril-amin gyantát az alábbiak szerint.

Beckman 990B peptid-szintetizátor reakcióedényébe • · • · • · · metil-(benzhidril-amin)-polisztirol-gyantát (Advanced ChemTech, Inc.) helyezünk, a szintetizátor az alábbi mosási reakcióciklus kivitelezésére van beprogrammozva:

(a) metilén-klorid;

(b) 33 % trifluor-ecetsav metilén-kloridban (kétszer 1 és kétszer 25 perc);

(c) metilén-klorid;

(d) etanol;

(e) metilén-klorid;

(f) 10 % trietil-amin kloroformban.

A semlegesített gyantát 1,5 mól Boc-BNal-nal és 1,5 mól diizoproipil-karbodiimiddel metilén-kloridban 1 órán keresztül keverjük, és a kapott aminosav-gyantát a fenti (a) - (f) lépésekből álló mosási programmal kezeljük. Ezután ugyanilyen módon egymás után kapcsoljuk a következő aminosavakat (1,5 mólt mindegyikből): Boc-S-(metil-benzil)-Cys, Boc-Thr, Boc-N^c-(benzil-oxi-karbonil)-Lys, Boc-D-Trp, Boc-Phe, Boc-S-(metil-benzil)-Cys, Boc-D-Phe.

A gyantát mossuk és szárítjuk, majd 4 ml anizollal és 36 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal elegyítjük 0 ’C-on, és 45 percen keresztül keverjük. (Tioanizolt, trifluorecetsavat és trifluor-metánszulfonsavat is használhatunk 1:90:9 arányban, 6 órán keresztül.) A hidrogén-fluorid feleslegét száraz nitrogénárammal gyorsan elpárologtatjuk és a szabad peptidet kicsapjuk és dietil-éterrel mossuk. A nyers peptidet ezután 800 ml 90 %-os ecetsavban oldjuk, és annyi jódot adunk hozzá metanolban, hogy állandó barna színt biztosítsunk. Az oldatot 1 órán keresztül keverjük,

-8·· ·· · ···· · ······* ·· • · · · · ·· · • · · · · · ···· ·· ··· ··· ··· majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A kapott olajat minimális mennyiségű 50 %-os ecetsavoldatban oldjuk és 2,5 x 10 mm-es Sephadex G-25 oszlopról eluáljuk. Az UV-abszorpció és vékonyréteg-kromatográfiás elemzés szerint fő terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és kis térfogatra bepároljuk, majd 2,5 x 50 cm-es Vydac oktadecil-szilán oszlopra visszük (10-15 Mmól).

Az oszlopot 10-50 % acetonitril/0,1 %-os vizes trifluor-ecetsav lineáris gradienssel eluáljuk. A frakciókat vékonyréteg-kromatográfiás eljárással és analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással vizsgáljuk, és maximális tisztaság biztosítása mellett összegyűjtjük, majd kívánt esetben más sóvá - például acetáttá vagy foszfáttá alakítjuk. Az oldat vízből való ismételt liofilizálásával 120 mg terméket kapunk, fehér, vattaszerű por formájában.

A termék nagynyomású folyadékkromatográfiás és vékonyréteg-kromatográfiás meghatározás szerint homogén. A savas hidrolizátum aminosav-analízisének eredményei megerősítették az oktapeptid összetételét.

A fentiekkel analóg módon eljárva állítjuk elő a (2), (3) és (4) képletű találmány szerinti vegyületeket is.

A találmány szerinti vegyületek emlősöknek, különösen embernek például orálisan; helyileg; intravénásán; nyújtott hatású, biológiailag lebontható formában parenterálisan; nazálisán; vagy kúp formájában adagolva különféle hormonok és trófiás faktorok kiválasztását gátolhatják. A találmány szerinti vegyületeket alkalmazhatjuk bizonyos endokrin szekréciók, például GH, inzulin, glukagon és pro ··« «

-9laktin gátlására; acromegália kezelésére; endokrin tumorok, például karcinoidok, vipomák, inzulinomák és glukagonomák kezelésére; vagy cukorbaj, vagy azzal kapcsolatos betegségek, mint például retinopátia, nefropátia, Dawn-szindróma, és 2. típusú cukorbaj kezelésére. A találmány szerinti vegyületek a pankreász, gyomor és bél exokrin szekréciói gátlására is használhatók, például pankreatitisz, fisztulák, vérző fekélyek és például AIDS-szel vagy kolerával összefüggő hasmenés kezelésére. A trófiás faktorok, például IGF-1 (valamint egyéb endokrin faktorok) autokrin vagy parakrin szekréciójával kapcsolatos betegségek közül például az alábbiak kezelhetők a találmány szerinti vegyületekkel: mellrák, prosztatarák, tüdőrák (mind a kis sejtes, mind a nem kis sejtes epidermoidokat beleértve), valamint hepatomák, neuroblasztornák, vastagbél- és pankreász-c.denükarcinomák (vezeték-típusúak), kondroszarkomák és melanomák, valamint érplasztikát követően az érátültetéssel és restenosissal járó atherosclerosis.

A találmány szerinti vegyületek neurogén gyulladások mediátorai (például P-anyag vagy tachkininek) gátlására is alkalmazhatók, fenti tulajdonságuk következtében például reumás arthritisz, psoriasis, nap-leégéssel, ekcémával vagy egyéb viszketéses bőrbántalommal kapcsolatos helyi gyulladások; és allergiák, például asztma kezelésére alkalmazhatók. A találmány szerinti vegyületek a központi idegrendszer neuromodulátoraként is működhetnek, amelynek következtében Alzheimer-kór és egyéb elmebetegségek kezelésére, fájdalomcsillapításra (gerinc-analgetikumként) és fejfájás ellen is ·· 44 « ·♦··· • ·· 4 · · 94 4 • ·· 4····

4 4 4 44

4444 44 4·· 44444·

-10alkalmazhatók. A találmány szerinti vegyületek citoprotektív hatást fejthetnek ki a zsigeri vérátáramlás rendelleneségei, például cirrhosis, nyelőcső-ércsomók, és a gombamérgezések bizonyos fajtái esetében is.

A találmány szerinti vegyületeket emlősöknek, például embernek 0,01-50 mg/kg/nap, előnyösen 0,1-5 mg/kg/nap dózisban adagolhatjuk.

A3

A₄ ·· ·♦ · ···· · • ·· ·«·· ·· • · · «··· « • · · · · · • · · · ·* ······ ···

Claims

-11Szabadalmi igénypontok

1. Az (I) általános képletű vegyületek - a képletben Ai és A₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-12 szénatomos alkilcsoport, fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, R^-CO- általános képletű csoport, ahol

R1 jelentése 1-20 szénatomos alkilcsoport, 3-20 szénatomos alkenilcsoport, 3-20 szénatomos alkinilcsoport, fenilcsoport, naftilcsoport vagy fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, vagy R2-OCO- általános képletű csoport, ahol R₂ jelentése 1-10 szénatomos alkilcsoport vagy fenil-(1-4 szénatomos)alkil-csoport, azzal a megkötéssel, hogy ha Aj és A2 közül az egyik R^-CO- vagy R2-OCO- csoportot jelent, akkor a másik jelentése hidrogénatom ;

Xj és X₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, fluor-, klór- vagy brómatom, hidroxilcsoport, metilcsoport vagy trifluor-metil-csoport, azzal a megkötéssel hogy Xj és X₂ közül legalább az egyik jelentése hidrogénatom, jelentése Phe vagy Tyr, és jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport vagy -NH-R3 általános képletű csoport, ahol R3 jelentése 1-8 szénatomos telített alifás alkilcsoport •4 · ··<« · • · * «·4· ·· • · · ·«·· · • · · · · · ···· ·· ··· ··· ···

-12és gyógyászatilag elfogadható sóik.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, amelyek képletében

Αχ és A₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy telített alifás 1-3 szénatomos alkilcsoport,

X^ és X₂ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, fluor-, klór- vagy brómatom, vagy hidroxilcsoport, azzal a megkötéssel hogy és X₂ közül legalább az egyik jelentése hidrogénatom, és

R₃ jelentése telített alifás 1-3 szénatomos alkilcsoport, és gyógyászatilag elfogadható sóik.
3. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül az (1) képletű vegyület, és gyógyászatilag elfogadható sói.
4. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül a (2) képletű vegyület, és gyógyászatilag elfogadható sói.
5. A 2. igénypont szerinti vegyületek közül a (3) vagy (4) képletű vegyület, és gyógyászatilag elfogadható sóik.
6. Gyógyászati készítmények a növekedési hormon, a felhám-növekedási faktor, az inzulin, a glukagon, a prolaktin, a pankreász, gyomor és bélrendszer exokrin szekréciói, a tachykinin és a P-anyag felszabadulásának gátlására, azzal jellemezve, hogy az 1. vagy 5. igénypont szerinti vegyületek hatásos mennyiségét tartalmazzák valamely gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal együtt.
7. A 6. igénypont szerinti gyógyászati készítmények, azzal jellemezve, hogy azok a növekedési ··· 1 hormon felszabadulását gátolják.
8. A 6. igénypont szerinti készítmények, azzal jellemezve, hogy formájuk orálisan adagolható folyadék, pirula, tabletta vagy kapszula, humán gyógyászati alkalmazásra.
9. A 6. igénypont szerinti készítmények, azzal jellemezve, hogy formájuk bőrre adagolható krém, gél, lemosó, spray vagy kenőcs, humán gyógyászati alkalmazásra.
10. A 6. igénypont szerinti készítmények, azzal jellemezve, hogy formájuk nazálisán adagolható, csepp vagy spray formájú folyadék, humán gyógyászati alkalmazásra.
11. A 6. igénypont szerinti készítmények, azzal jellemezve, hogy formájuk intravénásán, szubkután módon, parenterálisan vagy intraperitoneálisan adagolható folyadék, humán gyógyászati alkalmazásra.
12. A 6. igénypont szerinti készítmények, azzal jellemezve, hogy formájuk biológiailag lebontható, nyújtott hatású, intramuszkulárisan adagolható készítmény, humán gyógyászati alkalmazásra.
13. A 6. igénypont szerinti készítmények, azzal jellemezve, hogy valamely lipofil sót is tartalmaznak és olajos emulzió vagy diszperzió formájában adagolhatok, humán gyógyászati alkalmazásra.
14. Eljárás emlősök kezelésére, a növekedési hormon, a felhám-növekedési faktor, az inzulin, a glukagon, a prolaktin, a pankreász, gyomor és bélrendszer exokrin szekré«ν * 9999 ' • · · ···* · • · · · « · • · · * «» ·····« 9 99

14ciói, a tachykinin és a P-anyag koncentrációjának csökkentésével, azzal jellemezve, hogy a kezelendő emlősnek az 1. vagy 5. igénypont szerinti vegyületek hatásos mennyiségét adagoljuk.

A meghatalmazott: