PT93798A - Processo para a preparacao de dipeptidos inibidores da renina e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

Descrição referente à patente de invenção de HOECHST AKTIENGESELLS CHAFT, alemã, industrial e comercial, com sede em D-6230 Frank-furt am Main 80, República Federal Alemã, (inventores: Dr. Adal-bert Wagner, Dr. Hansjorg Urbach, Dr. Dieter Ruppert, Dr. Wolfgang Linz e Prof. Dr. Bernward Schôl-kens, residentes na Alemanha Ocidental) , para "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DIPÉPTIDOS INIBIDO-RES DA RENINA E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM".

DESCRIÇÃO

Conhecem-se das EP-A-152 255, EP-A--155 809, EP-A-163 237, EP-A-172 346, EP-A-172 347, EP-A--179 352 e EP-A-255 082 derivados di- e tri-peptídicos, bem como a sua utilização como inibidores da renina.

Descobriram-se novos derivados peptídi-cos que inibem o enzima renina com alta eficácia in vitro e in vivo. A invenção refere-se a compostos de fõr

mula I 2 3

R OH R

R 1

-A-B-HN-CH-CH-CH-R 4 (I) na qual 1

R significa um grupo de fórmula II,

Ra-W- (II) na qual W representa -C0-, -0-C0-, -SOg- ou “NH-CO- e R significa hidrogénio, alquilo(C^-C^q), que pode ser, con forme o caso, mono- ou di-insaturado e que pode estar, conforme o caso, substituído por até 3 grupos iguais ou diferentes, seleccionado de entre hidroxilo, alcooxilo(C^-C^), alcanoiloxi(C^-C^), carboxilo, alcooxicarbonilo(C^-C7), ha-logénio, amino, alquilamino(C^-C^), dialquilamino(C^-C^), alcooxicarbonilamino (CL -C,.) , arilalcooxicarbonilamino (C_- i o / -Ci6) e 9-fluorenilmetiloxicarbonilamino; cicloalquilo(Cg--Cg), cicloalquil(Cg-Cg)-alquilo(C^-Cg), arilo (Cg-C.^) , que pode estar, conforme o caso, substituído por um ou dois gru pos iguais ou diferentes, seleccionados de entre P, Cl, Br, I, hidroxilo, alcooxilo(C1~C7), alquilo(C1-C7), alcooxicar-bonilo(Cg-C7), amino, anilino eventualmente substituído por até 2 halogénios e trifluorometilo; aril(Cg-C^^)-alquilo(C^--Cg), no qual a parte arilo pode estar, conforme o caso, substituída por um ou dois grupos iguais ou diferentes seleccionados de entre F, Cl, Br, I, hidroxilo, alcooxilo(C^--C7), alquilo(C^-C7), alcooxicarbonilo(Cg-C7), amino, alqui], amino(C1-C7), dialquilamino(C1~C7), carboxilo, carboximeto-xi, aminoalquilo(C^-C7), alquilamino(C^-C7)-alquilo(C^-C7), dialquilamino (C^-C7) -alquilo (C^-C7) , alcoxi (Cg-C7) -carboni]. metoxi, carbamoilo, sulfanoilo, alcooxisulfonilo(Cg-C7), sulfo ou guanidinometilo; ou é um anel heterocíclico monocí clico de 5 ou 6 membros ou bicíclico de 9 ou 10 membros, com pelo menos 1 átomo de carbono, 1 a 4 átomos de azoto e/ou 1 átomo de enxofre ou de oxigénio como heteroátomos do anel, que pode estar, conforme o caso, di- ou tri-substituo! do por um ou vários grupos seleccionados de entre F, Cl, Br, hidroxilo, alcooxilo (^-^) , alquilo(C^-C.^), alcooxicarbonji lo(C0-C0), amino ou trifluorometilo, 4 z o

R significa um grupo de formula III - X - (CEL·) - R7 (III) 2. n 2 1 A significa um aminoacido, ligado a R no terminal azotado e a B no terminal carbonado, aminoacido esse escolhido de entre a série fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, ácido aspártico, β-2-tienilalanina, (3-3-tienilalanina, (£-2-furanilalanina, (3-3-furanilalanina, lisina, ornitina, valina, alanina, ãci do 2,4-diaminobutírico, arginina., 4-clorofenilalanina, me-tioninosulfona, metioninosulfóxido, 2-piridilalanina, 3-pi-ridilalanina, 4-piridilalanina, ciclohexilalanina, ciclohe-xilglicina, im-metilhistidina, O-metiltirosina, O-benzilti-rosina, O-ter-butiltirosina, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina, ^3-2-benzo (b)tienilalanina, (S-3-benzo(b)tienilalanina, 2-fluorofenil-alanina, 3-fluorofenilalanina, 4-fluorofenilalanina, norleu cina, cisteina, 5-metilcisteína, ácido 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolina-3-carboxílico, homofenilalanina, DOPA, O-dime-tildopa, ãcido-2-amino-4-(2-tienil)butírico, ácido 2-amino--4-(3-tienil)butírico, 3-(2-tienil)serina, (Z)-deshidrofe-nilalanina e (E)-deshidrofenilalanina, B significa um aminoácido como definido em A, 2 R significa hidrogénio, alquilo(C^-C^q), cicloalquilo(C^-C^), cicloalquil(C^-Cy)-alquilo(C^-C^), arilo(Cg-C^4) ou aril- *C6~C14*-alqUÍl0*Cl-CV ' R"^ significa hidrogénio, alquilo (C^-C^q) , arilo(Cg-C^4) ou aril(Cg-C14)-alquilo(C1-C4), X pode não existir ou significar 0 ou S, conforme o caso, n = 2, 3 ou 4, e η R significa hidroxilo ou amino ou representa um anel heterocí clico de 5 membros com pelo menos 1 átomo de carbono, 1-4 átomos de azoto e/ou 1 átomo de enxofre ou de oxigénio, que pode estar eventualmente substituído por um ou mais grupos escolhidos de entre a série F, Cl, Br, hidroxilo, alcooxilo (C1~C7), alquilo(C1~C7), alcooxicarbonilo(C2~Cg), amino ou trifluorometilo, exceptuando-se a oxazolina, bem como aos respectivos sais fisiologicamente assimiláveis.

Os átomos de carbono substituídos por 2.3 R , hidroxilo ou R podem possuir a configuração R, S ou R,s. 3 ϊ

Os grupos alquilo podem ser de cadeia linear ou ramificados. 0 mesmo se aplica aos grupos deles derivados, como p. ex. alcooxilo, alquiltio, alquilamino, dialquil-amino, alcanoilo e arilalquilo.

Por cicloalquilo entendem-se também gru pos alquilsubstituídos, como p. ex. 4-metoxiciclohexilo ou 2,3--dimetilciclopentilo.

Arilo(Cg-C^^) é por exemplo fenilo, naf tilo, bifenilo ou fluorenilo; sendo de preferência fenilo. 0 mesmo se aplica aos grupos deles derivados, como p. ex. ariloxi, aroilo, arilalquilo e arilalquiloxi. Por arilalquilo entende-se um grupo arilo(Cg-C14) substituído ou não substituído ligado a um grupo alquilo(C^-Cg), como por ex. benzilo, ef- e ^-naftilme-tilo, halobenzilo e alcooxibenzilo, não se limitando contudo arilalquilo aos compostos mencionados.

Por um heterocilo definido para R mono cíclico de 5 ou 6 membros ou bicíclico de 9 ou 10 membros, com pelo menos 1 átomo de carbono, 1-4 átomos de azoto e/ou 1 átomo de oxigénio ou de enxofre como membros do anel, entendem-se os heterociclos definidos por exemplo em Katritzky, Lagowski, Che-mie der Heterocyclen, Berlin, Heidelberg 1968, pag. 3-5. Os heterociclos monocíclicos são p. ex. tiofeno, furano, pirrole, imidazole, pirazole, piridina, pirazina, tetrazole, isotiazole, oxazole e isoxazole, bem como os heterociclos deles derivados total ou parcialmente hidrogenados. Os heterociclos bicíclicos são p. ex. benzotiofeno, benzofurano, indole, isoindole, indazo le, benzimidazole, quinolina, isoquinolina, ftalazina, quinoxa-lina, quinazolina e cinolina, bem como os heterociclos deles de rivados total ou parcialmente hidrogenados. 7

Por um heterociclo definido para R , de 5 membros, com pelo menos 1 átomo de carbono, 1-4 átomos de azo to e/ou 1 átomo de enxofre ou de oxigénio, entendem-se em especial tiofeno, furano, pirrole, imidazole, pirazole, 1,2,4-tria-zole, tiazole, tetrazole, isotiazole, oxazole, isoxazole, bem como os ciclos deles derivados total ou parcialmente hidrogenados, exceptuando-se a oxazolina.

Os aminoácidos A e B na fórmula I estão ligados entre si através de uma ligação amida, tratando-se de 4

-aminoãcidos naturais ou não naturais com as configurações L, D ou D,L, de preferência com a configuração L.

Por sais dos compostos de fórmula I en-tendem-se em especial sais farmaceuticamente aceitáveis ou não tóxicos.

Tais sais formam-se por exemplo a partir de compostos de fórmula I, que contêm grupos ácidos/ p. ex. carboxilo, e de metais alcalinos ou alcalinoterrosos, como Na, K, Mg e Ca, bem como de aminas orgânicas fisiologicamente assimiláveis, como p. ex. trietilamina e tri-(2-hidroxietil)amina.

Os compostos de fórmula I que contêm grupos básicos, p. ex. um grupo amino ou um grupo guanidino, formam sais com ácidos inorgânicos, como p. ex. ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou ácido fosfórico e com ácidos orgânicos carboxílicos ou sulfónicos, como p. ex. ácido acético, ácido cí trico, ácido benzóico, ácido maleico, ácido fumãrico, ácido tar tãrico e ácido p-toluenosulfónico.

R ^ significa de preferência alcanoilo (C2-C.^) , como n-decanoi-lo, formilo, acetilo, pivaloilo, isovalerilo ou isobutirilo; alcanoilo(C2~C^^) substituído, como 2-hidroxipropionilo, 2--hidroxi-3-metilbutirilo ou aminoalcanoilo {C2-C^^) eventua_l mente protegido, como 4-aminobutirilo, 5-aminopentanoilo, 6-aminohexanoilo, 4-N-ter-butoxicarbonilaminobutirilo, 5-N--ter-butoxicarbonilaminopentanoilo ou 6-N-ter-butoxicarbo-nilaminohexanoilo, ou dialquilamino(C^-C^)-alcanoilo(C2~ci;[) como dimetilaminoacetilo; cicloalquil(C4~Cg)-carbonilo, como ciclopropilcarbonilo, ciclobutilcarbonilo, ciclopentil-carbonilo ou ciclohexilcarbonilo; aril(Cg—Q)-alcanoilo-(C2-C11), como fenilacetilo, fenilpropanoilo ou fenilbuta-noilo, 2-(2,β-dicloroanilino)fenilacetilo, 2-(N-benzil-2,6--dicloroanilino)fenilacetilo; benzoilo eventualmente substi tuído por halogénio, alquilo (C^-C^) , alcooxilo (C^-C^) ou ajL cooxicarbonilo(C^-C^), como 4-clorobenzilo, 4-metilbenzoilo, 2-metoxicarbonilbenzoilo ou 4-metoxibenzoilo, pirrolil-2--carbonilo, piridil-3-carbonilo, benzilsulfonilo; alcooxi-carbonilo(C2-C1;L) , como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou ter-butoxicarbonilo; alcooxicarbonilo(C2-Cll^ substituído por halogénio, como 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo ou 1,1-di- 5 c c

metil-2,2,2-tricloroetoxicarbonilo; aril(Cg-C14)-alcooxicarboni lo(C„-C7), como benziloxicarbonilo ou 9-fluorenilmetilcarbonilo. 2 z. _ R e de preferencia isobutilo, benzilo ou ciclohexilmetilo. 3 R é de preferência hidrogénio, isopropilo ou isobutilo.

Os aminoácidos A e B preferidos são, in dependentemente um do outro, fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, ácido aspártico, (3 -2-tienilalanina, (3-3-tienilalanina, ^-2-furilalani na, lisina, ornitina, ácido 2,4-diaminobutírico, arginina, nor-valina, 4-clorofenilalanina, metioninosulfona, metioninosulfóxi do, 2-piridilalanina, 3-piridilalanina, 4-piridilalanina, ciclo hexilalanina, ciclohexilglicina, im-metilhistidina, O-metiltiro sina, O-benziltirosina, O-ter-butiltirosina, fenilglicina, 1--naftilalanina, 2-naftilalanina, 4-nitrofenilalanina, norleucina, valina, alanina, ácido l,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-car boxílico, homofenilalanina, ácido 2-amino-4-(2-tienil)butírico, (Z)-desidrofenilalanina ou (E)-desidrofenilalanina. X está de preferência ausente. n significa de preferência 2 ou 3, de preferência 2. R é de preferência um grupo heterocíclico de 5 membros com um ou dois heteroátomos, conforme o caso substituído por alquilo (C7-C7). 1 ' 7 „ R e muito especial 2-imidazolilo, 2-N- -metilimidazolilo, 2-N-etilimidazolilo, 2-N-n-propilimidazolilo e 2-N-isopropilimidazolilo. A invenção refere-se ainda a um processo para a preparação de compostos de fórmula I, caracterizado por se acoplar um fragmento com um grupo carboxilo terminal ou um seu derivado reactivo com um fragmento adequado com um grupo amino livre, se cindir, conforme o caso, um ou mais grupos pro-tectores temporariamente introduzidos para proteger outros grupos funcionais, e se transformarem eventualmente os compostos assim obtidos nos seus sais fisiologicamente assimiláveis.

Os fragmentos de um composto de fórmula I, com um grupo carboxilo terminal, possuem as fórmulas IV a a IV c seguintes: R1-OH (IV a) 6 i R -Α-ΟΗ R -Α-Β-ΟΗ

(IV b) (IV c)

Os fragmentos de um composto de fórmula I, com um grupo amino terminal, possuem as fórmulas Va a Vc seguintes :

2 3 R OH R

h2n-a-b-nh-ch-ch-ch-r' 2 3 R OH R (V a)

h2n-b-nh-ch-ch-ch-r R0 OH R- I2 I I3 4 H2N-CH-CH-CH-R (V b) (V c)

Os métodos apropriados para a formação de uma ligação amida, encontram-se descritos p. ex. em Houben--Weyl, Methoden der organischen Chemie, Vol 15/2; Bodanszky et al., Peptide synthesis, 2nd ed. (Wiley & Sons, New York 1976) ou Gross, Meienhofer, The Peptides. Analysis, synthesis, biolo-gy (Academic Press, New York 1979). Aplicam-se de preferência os seguintes métodos: método do éster activo com N-hidroxisucci nimida como componente éster, acoplamento com uma carbodiimida como diciclohexilcarbodiimida ou com anidrido do ácido propano-fosfõrico e o método do anidrido misto com cloreto de pivaloilo A preparação das aminas opticamente ac-tivas, utilizadas como reagentes de partida, de fórmula V c

R R~

H-N-CH-CH-CH-R' 2 I OH (V c) 2 3 4. em que R , R e R se definem como anteriormente, efectua-se a partir -aminoãcidos opticamente activos, mantendo-se inalterados os respectivos centros de assimetria. Para tal, prepara-se por um processo conhecido um aldeído de aminoãcido N-protegido, o qual, após adição aldólica, se transforma no componente hete-roarilalquilo correspondente. Após remoção do grupo N-protector obtêm-se aminoalcoois de fórmula V c. Obtêm-se misturas de dias 7 tereómeros em relação ao centro que contém o grupo OH, que se podem separar por meio de métodos em si conhecidos, por exemplo por cristalização fraccionada ou por cromatografia. 0 teste da pureza dos diastereómeros faz-se por HPLC; a pureza dos enanteõ meros verifica-se, de modo conhecido, através da transformação em derivados de Mosher (H.S. Mosher et al., J. Org. Chem. 34, 2543 (1969)). A preparação de aldeídos de aminoácido N-protegidos efectua-se de acordo com B. Castro et al. (Synthe-sis 1983, 676). A adição do tipo aldólica a aldeído de aminoácido N-protegidos (de preferência com grupos protectores N-ter-butoxicarbonilo e N-benziloxicarbonilo) efectua-se num solvente inerte em presença de bases, como éter, THF, tolueno, DMF, DMSO ou dimetoxietano.

Como bases para a desprotonação da componente heteroarilalquilo podem utilizar-se alcoéxidos de metais alcalinos, como ter-butóxido de potássio, etôxido de sódio hidretos de metais alcalinos como hidreto de sódio ou de potássio, bases organometãlicas como n-butil-lítio, sec-butil-lítio, metil-lítio ou fenil-lítio, amideto de sódio, bem como sais de metais alcalinos de bases orgânicas azotadas, como diisopropil-amideto de lítio.

Os ácidos 4-amino-3-hidroxibutíricos substituídos são conhecidos da literatura e preparam-se de acor do com D.H. Richet al., J. Org. Chem. 4^3, 3624 (1978).

As operações preliminares ou posteriores necessárias para a preparação de compostos de fórmula I, co mo a introdução e a remoção de grupos protectores, são conhecidos da literatura e encontram-se descritas p. ex. em T.W. Gre-ene, "Protective Groups in Organic Synthesis". Os sais dos compostos de fórmula I com grupos apropriados para tal fim preparam-se por um processo em si conhecido, fazendo reagir p. ex. um composto de fórmula I contendo um grupo básico com uma quantidade estequeométrica de um ácido apropriado. As misturas de estereoisómeros, em especial as misturas de diastereómeros, que ocorrem quando se utilizam aminoácidos A ou B racêmicos, po 8

dem separar-se por um método em si conhecido como cristalização fraccionada ou cromatografia.

Os compostos de fórmula I de acordo com a invenção possuem propriedades inibidoras de enzimas, inibindo em particular o efeito do enzima natural renina. A renina é vim enzima proteolítico da classe das aspartil-proteases, o qual é segregado para a circulação sanguínea pelas células justaglome-rulares dos rins em consequência de vários estímulos (deplecção de volumes, deficiência em sódio, estimulação dos receptores ^3). Aí ele cinde o decapéptido angiotensina 1 a partir do angioten-sinogénio separado no fígado. A angiotensina 1 transforma-se na angiotensina 2 por meio do "angiotensin converting enzyme" (ACE) A angiotensina 2 desempenha um papel importante na regulação do sangue, uma vez que aumenta directamente a pressão sanguínea através da contracção dos vasos. Além disso estimula a secreção de aldosterona a partir das cápsulas suprarenais, aumentando deste modo o volume de líquidos extracelular através da inibição da eliminação de sódio, o que por seu lado contribui para um aumento da pressão sanguínea. Os inibidores da actividade en zimática da renina provocam uma redução da produção de angioten sina 1, o que tem como consequência uma menor produção de angio tensina 2. 0 abaixamento da concentração desta hormona peptídi-ca activa é a causa directa do efeito hipotensor dos inibidores da renina. A eficácia dos inibidores da renina pode testar-se por meio de testes in vitro. Neste caso mede-se a diminuição da produção de angiotensina 1 em vários sistemas (plasma humano, renina de porco). Para tal, incuba-se p. ex. plasma humano, contendo tanto renina como angiotensinogénio, com o composto a testar, a 37QC. Em seguida mede-se a concentra ção da angiotensina 1 formada durante a incubação, num ensaio radioimunolõgico. Os compostos descritos na presente invenção,

de fórmula geral I, mostram nos testes in vitro efectuados efejL ~ ~ -5 -10 tos de inibição a concentrações de cerca de 10 a 10 Mol/1.

Os inibidores da renina provocam uma dil minuição da pressão sanguínea em animais empobrecidos em sal. Uma vez que a renina humana se distingue da renina de outras ejs pécies, utilizam-se para os testes in vitro de inibidores da re^ 9

nina primatas (marmosetes, macacos Rhesus). A renina dos primatas e a renina humana são homólogas ao longo da sua sequência. Por meio de injecção i.v. de furosemida provoca-se uma produção endógena de renina. Em seguida administram-se os compostos a testar por meio de infusão contínua e mede-se o seu efeito sobre a pressão sanguínea e a frequência cardíaca. Os compostos da presente invenção são eficazes nestes testes numa gama de do ses de cerca de 0,1 a 5 mg/kg i.v.. Os compostos descritos na presente invenção, de fórmula geral I, podem utilizar-se como anti-hipertensores bem como para o tratamento da insuficiência cardíaca. A invenção refere-se por isso também â utilização de compostos de fórmula I como medicamentos e preparações farmacêuticas que contenham estes compostos. Prefere-se a aplicação a primatas, em especial a seres humanos.

As preparações farmacêuticas contêm uma quantidade efectiva do ingrediente activo de fórmula I juntamen te com um veículo inorgânico ou orgânico farmaceuticamente apro priado. A aplicação pode efectuar-se por via intranasal, intravenosa, subcutânea ou perorai. A dosagem do ingrediente activo depende da espécie do animal, do peso corporal, da idade e do tipo de aplicação.

As preparações farmacêuticas da presente invenção preparam por processos em si conhecidos como soluções, misturas, granulados ou drageias.

Para uma forma de aplicação oral misturam-se os compostos activos com os aditivos usuais para tal fim como veículos, estabilizadores ou diluentes inertes e transformam-se em formas de administração adequadas como comprimidos, drageias, cápsulas, suspensões aquosas., alcoólicas ou oleosas, ou soluções aquosas, alcoólicas ou oleosas. Como veículos inertes podem utilizar-se p. ex. goma arábica, magnésia, carbonato de magnésio, fosfato de potássio, lactose, glucose, fumarato de estearilmagnésio ou amido, em especial amido de milho. A preparação pode fazer-se nesse caso na forma de granulado seco ou hú mido. Como veículos oleosos ou solventes referem-se p. ex. óleos vegetais ou animais, como óleo de girassol e óleo de figado de bacalhau. 10

Para aplicação subcutânea ou intravenosa misturam-se os compostos activos ou os seus sais fisiológica mente assimiláveis com as substâncias usuais para tal fim, como solubilizantes, emulsionantes ou outros aditivos, de modo a obterem-se soluções, suspensões ou emulsões. Como solventes referem-se p. ex.: água, soro fisiológico ou álcoois, p. ex. etanol, propanodiol ou glicerina, e ainda soluções de açúcares como glu cose ou manite, ou ainda uma mistura dos vários solventes mencionados .

Lista das abreviaturas utilizadas:

Ac acetilo ACHPA ácido [3S,4S]-4-amino-3-hidn co BOC ter-butoxicarbonilo DC cromatografia em camada fina DCC diciclohexilcarbodiimida DNP 2,4-dinitrofenilo DMF dimeti1formamida DMSO sulfóxido dimetílico EE acetato de etilo EtOC etoxicarbonilo FAB "fast atom bombardment" H hexano HOBt 1-hidroxibenzotriazole Iva isovalerilo M pico molecular MeOH metanol MS espectro de massa MTB éter metil-ter-butílico R.T. temperatura ambiente Schmp. ponto de fusão Thi β -2-tienilalanina THF tetrahidrofurano Z benziloxicarbonilo

As restantes abreviaturas utilizadas pa 11

ra os aminoácidos correspondem ao código de tris letras usual na química dos péptidos, como descrito p. ex. em Europ. J. Bio-chem. 138, 9-37 (1984). Salvo indicação expressa em contrário, trata-se sempre de aminoácidos de configuração L.

Os exemplos que se seguem destinam-se a ilustrar a presente invenção sem contudo a limitarem. EXEMPLO 1

Iva-Phe-His-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-imidazolil)--pentilamida

Dissolvem-se 70 mg de Iva-Phe-His-1(S)--ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-benziloximetilimidazolil)--pentilamida em 15 ml de etanol. Após adição de 35 mg de carvão de paládio a 10% e 1,5 ml de ácido acético procede-se ã hidroge nação durante 20 h â temperatura ambiente e à pressão normal. Após filtração concentra-se o volume. Após adição de 20 ml de uma solução saturada de NaHCO^ extrai-se 3 vezes com EE. Após secagem da fase de EE com Na2S0^ concentra-se a solução, precipitando o composto do título como uma substância levemente amarelada.

Rf (EE/MeOH 2/1) = 0,1 MS(FAB) = 634 (M+l). a) Iva-Phe-His-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-benzi-loximetilimidazolil)-pentilamida.

Agitam-se 200 mg de Iva-Phe-His(DNP)--1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-benziloximetilimidazo lil)-pentilamida em 5 ml de acetonitrilo com 0,5 ml de tiofenol, durante 3 horas à temperatura ambiente. Concentra-se a mistura em vácuo e digere-se 3 vezes com éter diisopropílico. Após cro-matografia em sílica gel (eluente EE/metanol 10:1) e concentração das fracções que contêm o produto obtém-se um pó incolor.

Rf (EE/MeOH 10/1) = 0,2 MS(FAB) = 754 (M+l). . b) Iva-Phe-His (DNP) -1 (S) -ciclohexilmetil-2 (S) -hidroxi-5-.(2-N--benziloximetilimidazolil)-pentilamida 12 A 192 mg de Iva-Phe-His(DNP)-OH, 30 μΐ de piridina e 50 μΐ de N-etilpiperidina em 10 ml de adi- ciona-se, a -5QC, 44 μΐ de cloreto de pivaloilo. Agita-se a mijs tura durante 30 min. a + 5 até + 102C, arrefece-se a -10QC e adiciona-se gota a gota 1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2--N-benziloximetilimidazolil)-pentilamina em 5 ml de CH2C12· Agi ta-se durante 16 horas sem arrefecimento, concentra-se em vácuo e toma-se em 100 ml de EE. Extrai-se 3 vezes com uma solução aquosa de K2C°3' uma vez com H2°' seca-se sobre Na2SO^ e concen tra-se em vácuo. Apés cromatografia em sílica gel (eluente: EE/ /metanol 10:1) obtém-se o composto do título como um pó levemen te amarelado.

Rf (EE/metanol 10/1) =0,4 MS(FAB) = 920 (M+l) c) 1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-[2-N-benziloximetilimi-dazolil]-pentilamina

Dissolvem-se 500 mg de 3-Boc-4(S)-ciclo hexilmetil-2,2-dimetil-5-[3-(2-N-benziloximetilimidazolil)-pro-pil]-oxazolidina em 15 ml de dioxano. Adicionam-se, sob ligeiro arrefecimento (+10QC), 10 ml de HC1 a 12% em dioxano. Após 3 ho ras à temperatura ambiente concentra-se em vácuo, toma-se em H20, ajusta-se o pH a 9-10 com uma solução aquosa saturada de Na^O^ e extrai-se 3 vezes com EE. Após secagem com Na2SO^ e concentração em vácuo obtém-se o composto do título, que se pode utilizar nos passos de acoplamento seguintes sem posterior purificação. d) 3-BOC-4(S)-ciclohexilmetil-2,2-dimetil-5-[3-(2-N-benziloximetilimidazolil) -propil]-oxazolidina

Dissolvem-se 550 mg de 2-metil-N-benzi-loximetilimidazole em 5 ml de THF seco. Adicionam-se, sob atmo£ fera de argon, a -60QC, 1,9 ml de n-butillítio 1,5M em hexano. Após 15 minutos adicionam-se 500 mg de 3-Boc-4(S)-ciclohexilmetil-2 , 2-dimetil-5- (2-bromoetil) -oxazolidina em 5 ml de THF. Após 1 hora a -60°C adicionam-se 10 ml de uma solução saturada de NaHCOg. Após aquecimento até à temperatura ambiente extrai-se 3 13

vezes com EE, seca-se com Na2S0^ e concentra-se. Obtém-se o com posto do título por meio de cromatografia em sílica gel (eluen-te: EE).

Rf (EE) = 0,3 MS(FAB) = 526 (M+l) e) 2-metil-N-benziloximetilimidazole

Adicionam-se a pouco e pouco 5 g de 2--metilimidazole a 16,8 g de hidróxido de potássio em 200 ml de acetona seca. Após cinco minutos adiciona-se gota a gota, à tem peratura ambiente, 8,5 ml de cloreto de benziloximetilo. Após 15 minutos concentra-se a solução e ajusta-se o pH a 1 com HC1 2N. Extrai-se então 3 vezes com EE e rejeita-se a fase orgânica. Ajusta-se o pH da fase aquosa a ~ 9-10 com KOH e extrai-se 3 ve zes com EE. As fases de EE reunidas secam-se com Na2SO^ e con-centram-se. Após cromatografia em sílica gel (eluente: EE/MeOH 10/1) obtém-se o composto do título.

Rf (EE/MeOH 10/1) =0,4 f) 3-Boc-4(S)-ciclohexilmetil-2,2-dimetil-5-(2-bromoetil)-oxa-zolidina A 690 mg de 3-Boc-4(S)-ciclohexilmetil--2,2-dimetil-5-(2-hidroxietil)-oxazolidina, 2,6 g de trifenil-fosfina e 1,6 g de bromidrato de piridínio em 15 ml de Cí^C^/ adicionam-se gota a gota, sob atmosfera de argon, 1,6 ml de éster dietílico do ácido azodicarboxílico, a 20°C. Após 16 horas â R.T. adiciona-se í^O e dilui-se com 100 ml de C^C^. Lava-se a fase orgânica 2 vezes com uma solução saturada de NaHCO^ e uma vez com uma solução saturada de NaCl. Concentra-se a fase orgânica seca com Na2S0^, toma-se o resíduo num pouco de EE e filtra-se para remover a PPh3. Após purificação em sílica gel (eluente: H/EE 15:1) obtém-se o composto do título.

Rf (H/EE 15/1) = 0,3; MS 404 (M) g) 3-Boc-4(S)-ciclohexilmetil-2,2-dimetil-5-(2-hidroxietil)--oxazolidina

Aqueceu-se 10 g de Boc-ACHPA-OEt (prepa ração de acordo com J. Med. Chem. 28_ [1985] , 1779) , 500 mg de 14 de ácido p-toluenosulfónico e 7,2 ml de dimetoxipropano, em 160 ml de tolueno, sob atmosfera de argon, durante 2 horas, a 80QC. Concentra-se em seguida. Adiciona-se o resíduo gota a gota, a OQC, a uma suspensão de 2 g de LiAlH4 em 200 ml de THF. Apõs 2,5 horas a O^C adicionam-se 100 ml de uma solução de NaHSO^ a 5% e extrai-se 3 vezes com EE. As fases orgânicas reunidas la-vam-se uma vez com uma solução saturada de NaHCO^. Após secagem com Na2S04 concentra-se e purifica-se por cromatografia (eluen-te: H/EE 2:1) .

Rf (H/EE 4:1) = 0,1; MS = 342 (M+l)

Os exemplos 2 a 10 preparam-se de modo análogo ao do Exemplo 1. EXEMPLO 2

Iva-Phe-His-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-metilimida zolil)-pentilamida

Rf (EE(MeOH 3/1) =0,1 MS(FAB) = 648 (M+l) EXEMPLO 3

Iva-Phe-His-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-etilmidazo lil)-pentilamida

Rf (CH2Cl2/NH4OH/MeOH 10/0,1/1) = 0,35 MS(FAB) = 662 (M+l) EXEMPLO 4

Iva-Phe-His-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-n-propili-midazolil)-pentilamida

Rf (EE/MeOH 3/1) =0,1 MS(FAB) = 676 (M+l) EXEMPLO 5

Iva-Phe-His-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-isopropil- 15

imidazolil)-pentilamida

Rf (EE/MeOH 3/1) =0,1 MS(FAB) = 676 (M+l) A preparação dos 2-metil-N-alquilimida-zoles encontra-se a seguir descrita no Exemplo do 2-metil-N-n--propilimidazole: 2-metil-N-n-propilimidazole

Aquecem-se 10 g de 2-metilimidazole em 40 ml de brometo de n-propilo, durante 2 horas, à ebulição. Em seguida despeja-se sobre 150 ml de uma solução de NaHS04 a 5%, extrai-se 3 vezes com EE, seca-se com Na2S04 e concentra-se. To ma-se o resíduo em éter e separa-se do material de partida inso lúvel por meio de filtração. Deste modo precipita o composto do título na forma de um óleo incolor.

Rf (EE/MeOH 10/1) =0,2 EXEMPLO 6

Iva-Phe-Nva-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-imidazolil)--pentilamida

Rf (EE/MeOH 5/1) =0,1 MS(FAB) = 596 (M+l) EXEMPLO 7

Iva-Phe-Nva-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-metilimida zolil)-pentilamida

Rf (CH2Cl2/MeOH/NH4OH 20/1/0,1) =0,15 MS(FAB) = 610 (M+l) EXEMPLO 8

Iva-Phe-Nva-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-etilimida-zolil)-pentilamida | Rf (CH2Cl2/MeOH/NH4OH 20/1/0,1) =0,15 MS(FAB) = 624 (M+l) 16

EXEMPLO 9

Iva-Phe-Nva-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-n-propil-imidazolil)-pentilamida

Rf (EE/MeOH 10/1) =0,3 MS(FAB) = 638 (M+l) EXEMPLO 10

Iva-Phe-Nva-1(S)-ciclohexilmetil-2(S)-hidroxi-5-(2-N-isopropil--imidazolil)-pentilamida

Rf (EE/MeOH 10/1) = 0,3 MS(FAB) = 638 (M+l) 17

Claims (3)

1. REIVINDICAÇÕES -li- Processo para a preparação de um compôs^ to de fórmula I 2 3 R OH R 1 I I I 4 R -A-B-HN-CH-CH-CH-R (I) na qual 1 R significa um grupo de formula II, Ra-W- (II) na qual W representa -C0-, -0-C0-, -S02- ou -NH-CO- e Ra si gnifica hidrogénio, alquilo(C1-C1Q), que pode ser, conforme o caso, mono- ou di-insaturado e que pode estar, conforme o caso, substituído por até 3 grupos iguais ou diferentes, se leccionados de entre hidroxilo, alcooxilo(C^-C^), alcanoilo xi(C^-C^), carboxilo, alcooxicarbonilo(C^-C^), halogéneo, amino, alquilamino(C1“C7), dialquilamino(C1-C7), alcooxicar bonilamino(C^-Cg), arilalcooxicarbonilamino(C7~C^^) e 9-fluo renilmetiloxicarbonilamino; cicloalquilo(C^-Cg), cicloal-quil(Cg-Cg)-alquilo(C^-Cg), arilo(Cg-C.^) , que pode estar, conforme o caso, substituído por um ou dois grupos iguais ou diferentes, seleccionados de entre F, Cl, Br, I, hidrox_i lo, alcooxilo(C^-C7>, alquilo(C^-C7), alcooxicarbonilo(C^--C7), amino, anilino eventualmente substituído por até 2 ha logéneos e trifluorometilo; aril(Cg-C14)-alquilo(C^-C-^-Cg) , no qual a parte arilo pode estar, conforme o caso, substituída por um ou dois grupos iguais ou diferentes selecciona dos de entre F, Cl, Br, I, hidroxilo, alcooxilo, alquilo (C^-C7), alcooxicarbonilo(C^-C7), amino, alquilamino-(Ci-C?), dialquilamino(C^-C7), carboxilo, carboximetoxi, aminoalquilo(C^-C7), alquilamino(Cg-C7)-alquilo(C^-C7), dialquilamino (C1“C7)-alquilo(C1“C7), alcooxi(C1-C7)-carbonil-metoxi, carbamoilo, sulfamoilo, alcooxisulfonilo(Cg-C7), 18 sulfo ou guanidinometilo; ou é um anel heterocíclico monocí clico de 5 ou 6 membros ou bicíclico de 9 ou 10 membros, com pelo menos um átomo de carbono, 1 a 4 átomos de azoto e/ou 1 átomo de enxofre ou de oxigénio como heteroátomos do anel, que pode estar conforme o caso, di- ou tri-substituí- do por um ou vários grupos seleccionados de entre F, Cl, Br, hidroxilo, alcooxilo(C^-C^), alquilo(C^-C^), alcooxicarboni lo(C0-C0), amino ou trifluorometilo, 4 z a R significa um grupo de fórmula III, -X-(CH2)n-R7 (III) . . . . - . . 1 A significa um aminoacido, ligado a R no terminal azotado e a B no terminal carbonado, aminoácido esse escolhido de entre a série fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, ácido asparagí-nico, ^-2-tienilalanina, (3-3-tienilalanina, ^-2-furanilala-nina, (3-3-furanilalanina, lisina, ornitina, valina, alanina, ácido 2,4-diaminobutírico, arginina, 4-clorofenilalanina, metioninosulfona, metioninosulfõxido, 2-piridilalanina, 3--piridilalanina, 4-piridilalanina, ciclohexilalanina, ciclo hexilglicina, im-metilhistidina, O-metiltirosina, 0-benzil-tirosina, O-ter-butiltirosina, fenilglicina, 1-naftilalani-na, 2-naftilalanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina,^ -2--benzo(b)tienilalanina, (3-3-benzo (b) tienilalanina, 2-fluoro fenilalanina, 3-fluorofenilalanina, 4-fluorofenilalanina, norleucina, cisteína, 5-metilcisteína, ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-3-carboxílico, homo fenilalanina, DOPA, O-dimetildopa, ácido 2-amino-4-(2-tienil)butírico, ácido 2--amino-4-(3-tienil)butírico, 3-(2-tienil)serina, (2)-deshi-drofenilalanina e (E)-deshidrofenilalanina, B significa um aminoácido como definido em A
2. 2 R significa hidrogénio, alquilo(C^-C^q), cicloalquilo(C4-C7), cicloalquil (¢4-0^)-alquilo (0^-04) , arilo (Cg-C^) ou aril(Cg- “C14*“alquilo*Cl”C4*7 R^ significa hidrogénio, alquilo(C^-C^q), arilo(C^-C^) ou aril(C6-C14)-alquilo(C1“C4), X pode não existir ou significar O ou S, conforme o caso, 19 η = 2, 3 ou 4, e 7 R significa hidroxilo ou amino ou representa um anel heterocí clico de 5 membros com pelo menos 1 átomo de carbono, 1-4 átomos de azoto e/ou 1 átomo de enxofre ou de oxigénio, que pode estar eventualmente substituído por um ou mais grupos escolhidos de entre a série F, Cl, Br, hidroxilo, alcooxilo (C^-C^), alquilo(C^-Cy), alcooxilo(C2“Cg), amino ou trifluo rometilo, exceptuando-se a oxazolina, bem como dos seus sais fisiologicamente assimiláveis, caracterj. zado por se proceder ao acoplamento de um fragmento com um grupo carboxilo terminal ou de um seu derivado reactivo com um fraç; mento com um grupo amino livre, se removerem, eventualmente um ou mais grupos protectores temporariamente introduzidos para a protecção de outros grupos funcionais, e se transformar, confor me o caso, o composto assim obtido num seu sal fisiologicamente assimilável. - 29 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto de fórmula I, na qual R1 significa alcanoilo(C^-C^), como n-decanoilo, formilo, ace tilo, pivaloilo, isovalerilo ou isobutirilo? alcanoilo(C2-—Cll) substituído, como 2-hidroxipropionilo, 2-hidroxi-3-me tilbutirilo ou amino-alcanoilo(C2-C.|^) eventualmente protegido, como 4-aminobutirilo, 5-amino-pentanoilo, 6-aminohexa noilo, 4-N-ter-butoxicarbonil-aminobutirilo, 5-N-ter-butoxjL carbonilaminopentanoilo ou 6-N-ter-butoxicarbonilaminohexa-noilo ou dialquilamino(C^-C^)-alcanoilo(C2-C^^), como dime-tilaminoacetilo; cicloalquil(C^-Cg)-carbonilo, como ciclo-propilcarbonilo, ciclobutilcarbonilo, ciclopentilcarbonilo ou ciclohexilcarbonilo; aril(Cg-C^g)-alcanoilo(C2“C^^), como fenilacetilo, fenilpropanoilo ou fenilbutanoilo, 2-(2,6--dicloroanilino)-fenilacetilo, 2-(N-benzil-2,6-dicloroanili no)- fenilacetilo; benzoilo eventualmente substituído por 20 I ( i

   halogéneo, alquilo(C^-C^), alcooxilo(C^-C^) ou alcooxicarbo nilo(C-^-C^) , como 4-clorobenzoilo, 4-metilbenzoilo, 2-meto-xicarbonilbenzoilo ou 4-metoxibenzoilo, pirrolil-2-carboni-lo, piridil-3-carbonilo, benzilsulfonilo; alcooxicarbonilo-(C2-Cn), como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou ter-buto-xicarbonilo; alcooxicarbonilosubstituído por halo-géneo, como 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo ou l,l-dimetil-2, 2,2-tricloroetoxicarbonilo; aril(Cr-Cn .)-alcooxicarbonilo-(C2-C7), como benziloxicarbonilo ou 9-fluorenilmetilcarboni lo. - 3S - Processo de acordo com as reivindicações 1 e/ou 2, caracterizado por se preparar um composto de fõr mula I, na qual 2 ... R significa isobutilo, benzilo ou ciclohexilmetilo. - 4a - Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, de fórmula I, na qual isobutilo. caracterizado por se preparar um composto
3. 3 R significa hidrogénio, isopropilo ou - 5a - Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 4, caracterizado por se preparar um composto de fórmula I, na qual A e B, independentemente um do outro, sicj; nificam fenilalanina, histidina, tirosina, trptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, ácido asparagínico, ^-2-tienil^ 21 alanina, |3-3-tienilalanina, ^-2-furilalanina, lisina, ornitina, ácido 2,4-diaminobutírico, arginina, norvalina, 4-clorofenilala nina, metioninosulfona, metioninosulfóxido, 2-piridilalanina, 3-piridilalanina, 4-piridilalanina, ciclohexilalanina, ciclohe-xilglicina, im-metilhistidina, O-metiltirosina, O-benziltirosi-na, O-ter-butiltirosina, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2-naf-tilalanina, 4-nitrofenilalanina, norleucina, valina, alanina, ácido l,2,3,4-tetrahidroisoquinolina~3-carboxílico, homofenil-alanina, ácido 2-amino-4-(2-tienil)butírico, (Z)-deshidrofenil-alanina ou. (E)-deshidrofenilalanina. - 6s - Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 5, caracterizado por se preparar um composto 7 de fórmula I, na qual R representa um anel heterocíclico de 5 membros com um ou dois heteroãtomos, eventualmente substituído por alquilo(C1~C7). 7ft Processo para a preparação de uma compo sição farmacêutica para o tratamento da hipertensão arterial, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um composto de fórmula I, quando preparado de acordo com qualquer das reivindicações ι a 6, com um veículo farmacêutico fisiologica-mente adequado e, conforme o caso, outros aditivos e adjuvantes, de modo a obter-se uma forma de administração apropriada. A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 22 de Abril de 1989, sob o n9, P 39 13 290.0. 22 1 ί Lisboa, 19 de Abril de 1990. 1 Δ03ΓΠΠ3