PT93797A - Processo para a preparacao de derivados dipeptidicos com accao inibidora de enzimas e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

Descrição referente a patente de in*·» vençao de HOECHST A KTIENGESELLSCHAFT alemã, industrial e comercial, com sede em D-6230 Frankfurt am Main 80, Republica Rederal Alemã, (inventores Dr.. Wolf-Ulrich Nickel, Dr. Wolfgang Linz, Dr. Dieter Ruppert, Dr. Hans Jorg Urbach e Dr. Adalbert ¥agner, residentes na Alemanha Ocidental), para “PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DIPBPTÍDICOS COM ACCÃO INI-BIDORA DE ENZIMAS E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTEM11

DESCRIÇÃO A invenção refere-se a derivados dipe-ptídicos que inibem a aoção do enzima natural renina, bem como a processos para a sua preparação e utilização e ainda a eompo*« sições farmacêuticas que os contenham. Na EP-A 0255°82 encontram-se descritos derivados dipeptxdicos que têm substituintes cicloalquilcarbonilo e cicloalquilalquilearbonilo N«terminais. Na NO 88/0505O encontram-se descritos derivados aminodiol com acção inibitória da renina.

Descobriu-se então surpreendentemente que os derivados cicloalquilo e cicloalquilalquilo substituidosi contribuem significativamente para uma melhoria do efeito in vivo e para um aumento da ressorpção dos compostos. ‘t

A invenção refere—se a compostos de

fórmula X 2 3

R OH RJ (X) 3 ii.

R -¥«A-B-NH-CH«CH-GH-R na qua1

R significa cicloalquilo(G^-Cg), bicieloalquilo(C^«C^q) , tri-cicloalquilo(Cg-C^g), cicloalquil(C^-Cg)-alquilo(C^-Cg), bici-cloalquilo( C^-C^0)-alquilo( C^-Gg) e trieicloalquil( Gg-G^g) quilo ( G^-Cg) , em que os substituintes cicloalquilo, bicicloal-quilo e tricicloalquilo podem por sua vez estar substituídos por um ou dois grupos iguais ou diferentes» seleccionados de entre a serie F, Cl, Ir, I, hidroxilo, aleooxilo(C^-Gg), alqui-lo(C^-Cg), carbonilo, aIcooxicarbonilo(C^-Cg), carbamoilo, car-boximetoxi, amino, monoalquilamino(C^-Cg), diaIquilamino(C^--Cg), aminoalquilo(C^-Cg), alquilamino(C^-Cg)-alquilo-(C^-Cg), dialquilamino(C^-Cg)-alquilo(C^-Gg), amidino, hidroxamina, hi-droximino, hidrazono, imino, guariidino, alquiloxisulfonilo(C^--Cg), alquiloxisulfenilo(C^-Gg), trifluorometilo, alcooxicar-bonilamino(C^-C^), aril(Cg-G^^)-alcooxicarbonilamino(C^-0^):

¥ representa -GO-, -O-CO-, -SO^-J R2 significa hidrogénio, a lquilo ( C^-C^q) , cicloalquilo(C^-C^), cicloalquil(C^-C^) -alquilo( C^-C^) , arilo (¾-¾) °u aril(V -Gl4)-alquilo(Ci-C4); R'* significa hidrogénio, alquilo(C^-C^), arilo(Cg-C^), aril-(Gg-Ci^)-alquil0(G^-C^), hidroxilo ou amino; R^ significa um grupo de fórmula II, (CH_) - CHR5 - D (II) \ 2' m ' ' - 2 - em que ,5

Ec representa hidrogénio, alquilo(C^**C^)«aleooxilo( C^-G^), al quiltio(C^-C^), alquilamino(C^-C^) , hidroxilo, azido, fluor, cloro, bromo, iodo} D significa um grupo Het, em que

Het representa um anel heterocxclico com 5 a 7 membros, que pode estar fundido com um anel benzénico ou ser ar orna tico, par ciai ou totalmente hidrogenado, que contém como heteroatomos um ou dois grupos iguais ou diferentes escolhidos de entre N, 0, S, NO, S0, SOg, e que pode estar substituído por um ou dois: grupos iguais ou diferentes, escolhidos de entre alquilo (C^-*»C^), alcooxilo(C^-O^), hidroxilo, halogenio, amino, mono- ou di» alquilamino(, CF^, e m significa 0, 1, 2, 3 ou 4; A e B, independentemente um do outro, significam um aminoácidc 1 ligado no terminal azotado com R ou com A e no terminal ear-boxílico com B ou com NH-CHR^-CHOH~CHR^~r\ aminoacido esse escolhido de entre a série fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, acido aspartico,^3-2«tienolalanina , ~3**tienila lanina -*2«f urila*· lanina, β -3*-furilalanina, lisina, ornitina, valina, alanina, acido 2,4-diaminobutírico, arginina, 4-clorof enilalanina , me«* tioninosulfona, metioninosulféxido, 2-piridilalanina, 4«piri« dilalanina, 3-piridilalanina, ciclohexilalanina , ciclohexil·?· glicina, im-metilhistidina, O-metiltirosina, 0«benziltirosina, O-ter-butiltirosina. fenilglicina, 1-naftilalanina, 2-naftila-lanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina,fê -2-benzo/"b_7tieni-lalanina, (β -3-benzo/“b_7tienilalanina , 2-fluorofenilalanina , 3»fluorofenilalanina, 4-fluorofenilalanina, norleucina, cis-teína, S-metilcistexna, écido l,2,3,4«tetrahidroisoquinolina--carboxílico, homofenilalanina, DOPA, O^dimetil-DOPA, N-metil-histidina, écido-2-amino-4-(2»tienil)butxrico, acido 2»amino- •s# ^ ***

-U-(3-tienil)butírioo, 3-(2-tienil)serina, (z)-deshidrofenila· lanina, (l)-deshidrofenilalanina, 1,3-dioxolano-2-il-alanina, N-pirrolilalanina © X», 3~ ou 4-pirazolilalanina, bem como aos respectivos sais fisiologicamente assimiláveis.

Os centros de quiraXidade nos composto de férmula X podem apresentam a configuração R, S ou RS.

Os grupos aXquiio podem ser de cadeia Xinear ou ramificada. 0 mesmo se apXica aos grupos deies derivè dos, oomo p. ex. alcooxilo, aiquiXtio, aXquiXamino, dialquila-mino, aXeanoiXo e ariXaXquiXo. Por cicXoaXqu.iXo( C^-Cg) entende-se ciclopropilo, cicXobutiio, ciclopentilo, cicXohexiXo, οχ·|· cXoheptiXo e cicXooetiXo. Por bieicioaiquiXo(C^-G^Q) ou trici-cXoaXquiXo(Cg-C^g) entendem-se grupos xsoexciicos alifatieos ' não aromãticos que, conforme o caso, podem conter Xigações du-pXas assimetricamente distribuídas e estar também substituídos por cadeias laterais abertas aXifaticas. Os dois ou três aneis componentes de um grupo deste tipo são condensados ou estão espiro-Xigados e Xigam-se ao resto da estrutura através de um átomo de carbono do aneX ou de um átomo de carbono da cadeia XateraX. Exemplos para estes grupos são òs substituintes bormi lo, norbornilo, pinanilo, norpinanilo, oaranilo, norcaranilo, tujanilo, adamantilo, biciclo/’*3«3*0__70°'bil°» biciclo/“"l. 1.0_J·· butilo, espirο^/""3 ·3_7bep t ilo.

Caso os ciclos mencionados tenham mais dõ que um substituinte, estes podem estar ois ou trans entre; si ·

Arilo (C^-C^) ê por exemplo fenilo, naftilo, bifenilo ou fluoraniloj de preferência fenilo. 0 mesmo se aplica aos grupos deles derivados, como p. ex. ariloxi, aroilo, arilalquilo e arilalquiloxi, Por arilalquilo entende-se um grupo arilo(C^-C^) substituido ou não substituido ligadb a — JLj. «*· 1:

um grupo alquilo(C^-Qg), como p. ex. benzilo,(X- e Ç -naftilme·· tilo, halobenzilo e alcooxibenzilo, não estando contudo arilal·· quilo limitado aos grupos mencionados.

Um grupo Het, no sentido da definição precedente, 4 por exemplo pirrolilo, furilo, tienilo, imidazo-lilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, indolilo, quinolilo, isoquinolilo, quinoxalilo, β -carbolinilo ou um derivado destes grupos benzanelado, ci-_ clopenta-, oiclohexa- ou ciclohepta-anelado. Este heterociclo pode estar substituído num átomo de azoto por oxilo, alquilo(C^--Cg), p. ex. metilo ou etilo, fenilo ou fenil-alquilo(C^-C^), p. ex. benzilo, e/ou num ou mais átomos de carbono por alquilo·· (C^-C^), p. ex. metilo, fenilo, fenil-alquilo(C^~C^), p. ex. benzilo, haloglnio, p. ex. cloro, hidroxilo, alcooxilo(C^-C^), p. ex. metoxi, f enil-alcooxilo(C^-G^), p. ex., benziloxi, ou oxo, podendo ser pareialmente saturado, citando-se como exemplo 2-ou 3~pirrolilo, fenilpirrolilo, p. ex. 4~ ou 5-f‘enil-2-pirroli-· lo, 2-furilo, 2-tienilo, 4«imidazol±lo, metilimidazolilo, p. e3:. l-metil-2-, 4- ou 5-imidazolilo, 1,3-tiazolo-2-ilo, 2«, 3* ou 4-piridilo, l-oxido-2-, 3** ou 4-piridino, 2-pirazinilo, 2-, 4-ou 5~pi^i“iidinilo, 2-, 3« ou 5-indolilo, 2-indolilo substitui-do, p. ex. 1-metil-, 5-metil-·, 5-metoxi-, 3-benziloxi, 5-cloro-ou 4,5*dimetil-2-indolilo, l-benzil-2- ou 3-indolilo, 4,5»6,7-* -tetrahidro-2-indolilo, ciclõhepta/"’b_75~pi*'x°lilo> 2-, 3** ou 4-quinolilo, 4~hidroxi -2-quinolilo, 1-, 3- ou 4-isoquinolilo, 1-oxol,2-dihidro-3-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 2-benzofura-nilo, 2»benzoxazolilo, 2-benzotiazolilo, benzo/”e—7indolo-2-ilC' ou β -carbonilo-3**ilo·

Aneis heterocíelieos parcial ou totalmente hidrogenados são por exemplo dihidropiridinilo, pirrolid^·· nilo, p. ex. 2-, 3- ou 4-ET-metilpirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolino, tiomorfolino, tetrahidrotiofenilo. “ 5 “

Por sais dos compostos de fórmula I entendem-se especialmente os sais farmacêuticamente aceitáveis ou não tóxicos.

Tais sais formara-se por exemplo a partir de compostos de fórmula I que contêm grupos ácidos como p. ex, carboxilo e de metais alcalinos ou alcalinoterrosos, como Na, K, Mg, e Ca, bem como de aminas orgânicas fisiologicamente assimiláveis, como p. ex. trietilamina e tri-(2-hidroxietil)'-amina.

Compostos de fórmula I que contêm grupos básicos, p. ex. um grupo amino ou um grupo guanidino, formam sais com ácidos inorgânicos, oomo p# ex. aoido clorídrico, acido sulfórieo ou acido fosfórico e com ácidos orgânicos car-boxxlicos ou sulfónieos, como p. ex. acido acítico, acido cxtr:.~ oo, acido benzóico, acido maleico, acido fumárieo, ácido tartá·· rico ou ácido p-toluenosulfónioo.

Preferem-se os compostos de fórmula X, na qua 1

Q R e W se definem como anteriormente; p . R significa isobutilo, benzilo ou cxclohexilmetilo; R·^ significa hidrogénio, alquilo (C^-C,*) , arilo(C^-C^q), aril-(cg“cio)-alquilo(ci”cíj.) ou hidroxilo; R^ significa um grupo de fórmula II, na qual R? representa hidrogénio, alquilo(C^-C^), aleooxilo(C^-C^), alquiltioíCj-C^), alquilamino( , hidroxilo, azido, fluor, cloro, bromo ou iodo, 6

D se define como indicado acima para o grupo Het, e m significa 0, 1 ou 2| e A e B, independentemente um do outro, significam um grupo biva-lente escolhido de entre a série: fenilalanina, histidina, ti·* rosina, triptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, acido aspar tico, p -2-tienilalanina , p- 3-tienilalanina, /2-2--f urilalanina , -3-f urilalanina , lisina , ornitina, valina, aljt_ nina, acido 2,^-diaminobutírico, arginina, 4-elorofenilalanina , metioninosulfona, metioninosulfóxido, 2-piridilalanina, ^-piri-dilalanina, 3-piridilalanina, ciclohexilalanina, ciclohexilgli·· cina, im-metilhistidijpa, O-metiltirosina, 0-nenziltirosina, O-ter-butiltirosina. fenilglicina, 1-naftilalanina, 2-naftila-lanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina, norceulina, cisterna, 5-metilcisteína, N-metilhistidina, acido 1,2,3,4-tetrahidroiso-quinolina-3-carboxxlxco, homofenilalanina, acido 2-amino~4-(2--txenil)butxrico, acido 2-amino-4-(3-tienxl)butxrico, 3·*{2-ϊ±β·-nil)serina, (z)-deshidrofenilalanina, (e)-deshidrofenilalanina , l,3-dioxolano-2-xl~alanina, N-pirrolilalanina e 1-, 3- ou 4-pi-razolilalanina, bem como os respectivos sais fisiologicamente assimiláveis.

Preferem-se em especial os compostos de fórmula I, na qual

Ra significa cieloalquilo(C^-Og) e cicloalquil(C^-Cg)-alquilo-(C^-C2), em que o substituinte cicloalquilo pode estar substituído por um ou dois grupos iguais ou diferentes escolhidos de entre hidroxilo, alcooxilo(C^-C^), alquilo(C^-C^), carboxilo, alcooxxcarbonilo(C^-G2), carbamoilo, carboximétoxi, amino, mo-noalquilaminoíC^-Cg) , dialquilamino(C^-C^, aminoalquiloíC^--C2) , alquilamino( C^-Cg)-alquilo( C^-Cg) , dialquilamino( C^-C^)--alquilo(G^-Cg), amidino, trifluorometilo, alcooxicarbonilami-ηο(σ^-α^), como ter-butoxicarbonilamino. aril(Cg-C^2)-aleooxi- 7

carbonilamino ( C^-Cg) , como benziloxicarbonilamino, e metanosul·· fonilamido, trifluorometanosulfonilamido$ ¥ é -GO-} 2 R significa isobutilo, benzilo ou ciclohexilmetilo} 3 , R significa hidrogénio ou hidroxilo} 4 ' . R significa um grupo de formula II, na qual

K R é hidrogénio ou fluor, D é um grupo 2-, 3«· ou 4-piridino, um grupo 2-, 4- ou 5-imida-zolo ou um grupo 2-oxazolino, em que os heterociclos citados podem estar substituídos por um ou dois grupos de entre metilo, etilo, propilo, alilo, fluorj cloro, bromo, CF^ e metoxi, e m significa 0, 1 ou 2} e A e B, independentemente um do outro, significam um grupo bi-valente escolhido de entre a séries fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, leucina isoleucina, asparagi-na, acido aspartieo, β -2«tienilalanina, J3 -3“tienilalanina, β -2-furilalanina, lisina, ornitina, valina, alanina, acido 2,4-diaminobutírico, arginina, 4«clorofenilalanina, metionino-sulfona, metioninosulfóxido, 2-piridilalanina, 3-pinidilalani-na, 4-piridilalanina, ciclohexilalanina, eielohexilglicina, im-metilhistidina , O-metiltirosina, O-benziltirosina, Q-ter-bu·· tiltirosina, fenilglicina, 1-nafttilalanina, 2-naftilalanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina, norleueina, acido 1,2,3,4-te-trahidroisoquinolina-3"earboxxlico, homofenilalanina, acido 2-amino-4-(2-tienil)butírico e 1-, 3- e 4~pirazolilalanina, bem como os respectivos sais fisiologicamente assimiláveis. 8

A invenção refere-se ainda a um proces-so para a preparação de compostos de f ármula I, caracterizado por se acoplar um fragmento eom um grupo earboxilo terminal ou um seu derivado reactivo, com um fragmento adequado com um grupo amino livre, se remover conforme o caso, um ou mais gru pos protectores temporariamente introduzidos para proteger ou tros grupos funcionais, e se transformar o composto assim obtido, conforme o caso, num seu sal fisiologicamente assimilável.

Fragmentos de um composto de fármula I, que possuem um grupo earboxilo terminal, têm as fármulas 111a Illb e IIIc, seguintesí

Ra-W-OH Ra-W~A~OH Ra«W~A-B-OH

Illa Illb IIIc

Fragmentos de um composto de formula I, que possuem um grupo amino terminal, têm as fármulas TVa, IVb e IVc, seguintes:

2 3 R OH RJ * * * b HgN**A -B-NH-CH- CH- CH-R 2 3 R^ OH RJ IVa IVb

Η N-B-NH-CH»GH-CH-R R2 OH R*5 v-

CH-CH-CH-R IVc

Os mátodos apropriados para a preparação de uma ligação amida, encontram-se descritos por exemplo em Houben«Weyl, Methoden der organichen Ghemie, Vol. 15/2 } Bodanszky et al., Peptide synthesis, 2&ed. (Wiiey & Sons, New York 1976) ou Gross, Meienhofer, The Peptides. Analysis, synthesis, biology (Academic Press, New York 1979) · XJtilizam-se de preferencia os seguintes mátodos: 9

método do éster activo com N-hidroxisuccinimida ou l«hidroxi« benzotriazole com componente éster, acoplamento com uma carbo« diimida como diciclohexilcarbodiimida ou com anidrido do ácido propanofosfénico e método do anidrido misto com cloreto de pi·* valoilo. A preparação das aminas optioamente acti^ vas utilizadas como reagentes de partida, de formula IVc 2 3

R OH RJ * t t Η N«CH-CH-GH-R^ 2 e m que 2 3 4 R , R e R se definem como anteriormente, efeetua-se a partir deOJ*-aminoa eidos optioamente activos, man-tendo-se inalterado o respectivo centro de quiralidade* Para tal prepara-se, de um modo conhecido um aldeido de aminoécido N-protegido, o qual se acopla a um composto heteroarilalquili-co adequado, numa reacção de adição de tipo aldéliea, obtendo-«se apés remoção do grupo N-protector, aminoalcoois de férmula XVc. Obtêm-se misturas de diastereémeros em relação ao centro que contém o grupo OH, que se podem reparar por meio de um processo em si conhecido, por exemplo por cristalização fracci? nada ou por cromatografia. A verificação da pureza dos diaste-reémeros faz-se por meio de HPLC; a dos enanteémeros pode testar-se de um modo conhecido através da transformação em derivados de Mosher (H.S. Mosher et al·, J.Org·Chem* J3ít» 25^-3(1969)) A preparação de aldeídos de aminoécidos N«protegidos efeetua-se de acordo com B, Castro et al* (Syn-thesis 1983, 676). A adição do tipo aldéliea a aldeídos de aminoacidos N—protegidos (de preferência grupos proteetores N»ter-butoxicarbonilo e benziloxicarbonilo) efeetua-se num solvente inerte em meio básico, como éter, THP, tolueno, DMF, DMSO ou dimetoxietato* - 10 t:

Como bases para a desprotonação dos componentes heteroarilalquílicos podem utilizar-se alcóxidos de metais alcalinos, como ter-butóxido de potássio, e etóxido de sódio, hidretos de metais alcalinos, como hidreto de sódio ou de potássio, bases organòmetálicas, como n-butillítio, seo--butillítio, metillítio ou fenillítio, sodamida, bem como sais de metais alcalinos de bases orgânicas azotadas, como di±soprc> pilamideto de sódio.

As operaçSes preliminares e posteriores necessárias para a preparação de compostos de fórmula I* como introdução e remoção de grupos proteotores, são conhecidas da literatura e encontram-se p. ex. descritas em T.W. Greene. "Protective Groups in Organic Synthesis”· Os sais de compostos de fórmula I com grupos que formam sais preparam-se por um processo em si conhecido, p.ex. fazendo reagir um composto de fórmula I que tenha um grupo básico com uma quantidade es-tequeometrica de um ácido adequado.

As misturas de estereoisómeros, em especial as misturas de diastereómeros, que se obtêm quando se utilizam aminoaeidos A ou B racómicos, podem separar«se por um proeesso em si conhecido, como cristalização fraccionada ou cromatografia.

Os compostos de fórmula I, de acordo com a invenção, apresentam propriedades inibitórias de enzimas, inibindo em especial a acção do enzima natural renina» A re-nina e um enzima proteolítico da elasse das aspartil-protea-ses, que ó segredo pelas células juntaglomerulares dos rins para a circulação sanguínea em consequência de vários estímulos (deplecção de volume, deficiência em sódio, estimulação dos receptoresfí ). No sangue provoca a eisão do decapÓptido angiotensina I a partir do angiotensinogenio libertado no fígado. A angiotensina I, pór acção do "angiotensin converting enzyme" (ACE), transforma-se na angiotensina II· A angioten- - 11 sina II desempenha um papel activo na regulação da pressão sanguínea, uma vez que a faz subir directamente por eontratição dos vasos sanguíneos. Alem disso, estimula a secreção de aldosterona a partir das capsulas supra-renais e aumenta desta forma, através da inibição da eliminação do sódio, o volume de líquidos extra celular, o que por seu lado contribui para um aumento da pressão sanguínea. Os inibidores da acti-vidade enzimática da renina provocam uma menor formação de angiotensina I, o que tem como consequência uma menor formação de angiotensina II. 0 abaixamento da concentração desta hormona peptídica aetiva ê a causa direeta do efeito hipoten-sor dos inibidores da renina. A eficácia dos inibidores da renina pode comprovar-se por meio de testes in vitro. Para tal mede-se a diminuição da formação de angiotensina I em vários sistemas (pla sma humano, renina humana purificada). 1. Princípio do teste

Incuba-se p.ex. plasma humano, que contem tanto renina como angiotensinogenio, a 37°C, com o compo_s to a testar. Neste processo, liberta-se angiotensina I a par tir do angiotensinogenio sob a acção da renina, medindo-se em seguida a angiotensina I libertada num teste radiomunolégieo corrente no mercado* Esta libertação de angiotensina e inibida pelos inibidores da renina. 2. Obtenção do plasma

Recolhe-se sangue fornecido por dadores voluntários (cerca de 0,5 1 por pessoa; aparelho de recolha de sangue da firma ASID Bonz und Sohn, UnterscheiBheim) e guarda-se em garrafas parcialmente evacuadas, sob arrefecimen to em gelo. Impede-se a coagulação por meio da adição de EDTA (concentração final 10 mM)» Após centrifugação (Rotor HS h (Sorvall), 3500 Upm, 0-4°C, 15 min., repetindo“se se necessá rio), pipeta-se para retirar cuidadosamente o plasma e conge- - 12

t ο la-se em porçães adequadas, a -30 C. Para o teste utilizam-se apenas plasmas com uma actividade de renina suficientemente elevada. Os plasmas com actividade de renina mais baixa aoti-vam-se (pré-renina-renina) por meio de um tratamento a frio (-40, 3 dias) · 3. Execuçto do teste

Determina-se a angiotensina I com o Kit Renin-Maia's/ (Serono Diagnostics S.A., Coinsins, Suíça). Efe-ctua-se a incubação do plasma de acordo com as instruçSes nele: indicadas:

Mistura de incubação: 1000 p.1 de plasma (descongelado a 0~4°c) 100 u.1 de tampão de fosfato (pH 7,4) (adição dei Ramiprilat 10**^M)

10 jul de solução PMSE 10 ju.1 de Genapol PFIC a 0,1$ 12 jil de DMSO ou de preparado para tes-te

Os preparados para teste dissolvem-se a «•2 10 M em DMSO a 100$ (dimetilsulféxido) e diluem-se a concentração desejada cora DMSO; a mistura de incubação contém no máximo 1$ de DMSO.

Preparam-se as misturas em gelo e colocam-se durante 1 hora para incubação num banho maria (37°O) . A partir de uma outra mistura sem inibidor retira-se um total de 6 amostras (lOO jul cada), sem posterior incubação, para a determinação do teor inicial em angiotensina I do plasma utilizado.

As concentraçães dos preparados para tesi. te escolhem-se de modo que a gama de 10 a 90$ de inibição do enzima esteja coberta (pelo menos cinco coneentraçães). No fim do tempo de incubação retiram-se de cada mistura três amostra si de 100 p.1 para recipientes de Eppendorf Pré-arrefeeidos em ge-· ] lo seco e guardam-se a cerca de ~25°G, para a determinação da - 13 - 'b

angiotensina I ( valor médio de irrês amostras individuais).

Teste radioimulógico da angiotensina I (RIA)

Seguem-se exaotamente as instruçães de utilização do ICit RIA (Renin Maia®-Kit, Serono Diagnostics S.A Coinsins, Suíça). A curva de calibração abange a gama de 0,2 a 25,0 ng de angiotensina I por ml. O teor básico em angio-|-

tensina I do plasma desconta-se a todos os valores medidos. A actividade da renina do plasma (PRA) exprime-se em ng Ang i/ml x hora. Os valores de PRA na presença das substancias a testar em relaçêío a uma mistura sem inibidor (=100$) exprimem-se como $ gem de actividade residual. A partir da representação da $ gem de actividade residual em função da concentração (m) do

preparado em teste (escala logarítmica) calcula-se o valorlC 50

Os compostos descritos na presente inven ção, de fórmula geral I, mostram efeitos inibitórios a eoncen- m κ «xo traçães de cerca de 10 D a 10 Mol/l, no teste in vitro.

Os inibidores da renina provocam nos uni·* mais pobres em sal uma diminuição da pressão sanguínea. Uma ve2i a renina humana se distingue da renina de nutras espécies, utilizam-se primatas (Marmosets, Macacos Rhesus) para o teste in vivo dos inibidores da renina. A renina dos primatas e a renina humana são homélogas ao longo das respectivas sequências. Por meio de injecção i.v. de furosemida provoca-se uma descarga endógena de renina. Em seguida administram-se os compostos a testar e mede-se o seu efeito sobre a pressão sanguínea e a frequência cardíaca. Os compostos da presente invenção são efecti-vos nestes testes numa gama de dores de cerca de 0,1 a 5 mg/kg i.v. e, por aplicação intraduodenal, numa gama de dores de cerca de 1 a 50 mg/kg. Os compostos descritos na presente invenção, de fórmula geral I, podem utilizam-se como anti-hipertensores, bem como para o tratamento da insuficiência cardíaca. - lk -

A HIV«protease libertasse autocatalitica mente a partir do polipeptido GAG-POL e cinde em seguida o pe~ ptido precursos p55 nos core - antigenes pl7, p24 e pl4. Ê assim um enzima essencial cuja inibição interrompe o ciclo de vi da do virus e impede a sua reprodução.

Verificou-se em testes biológicos que os compostos de acordo com a invenção tem uma acção inibitória de enzimas, inibindo também enzimas virais como a HlV-protease. A acção inibitória da HXV-protease tem um significado especial que qualifica os compostos de acordo com a invenção em especial para a terapia e profilaxia de doenças causadas por infee-çSes com HXV. Os compostos de acordo com a invenção, de fórmula geral I, apresentam nos testes in vitro realizados efeitos «>8 inibitórios a concentrações de cerca de 10-4 a 10~°Mol/l. á ainda um objectivo da invenção a utili zação de compostos de fórmula I para a preparação de composições : medicamentosas para o tratamento da hipertensão arterial e da insuficiência cardíaca congestiva, bem como para a terapia e profilaxia de doenças virais, em especial de doenças cau sadas pelo HIV, sendo tambóm os próprios medicamentos um objectivo da invençã§.

As composições farmacêuticas contêm uma quantidade efectiva de ingrediente activo, de fórmula geral I, conjuntamente com um veiculo inorgânico ou orgânico farmacêuti camente assimilável. A aplicação pode efeetuar-se por via in-tranasal, intravenosa, subcutânea ou perorai. A dosagem do ingrediente activo depende da especie animal de sangue quente, do peso corporal, da idade e do tipo de aplicação.

As eomposições farmacêuticas da presente invençãb preparam-se de acordo com processos por si conhecidos, como dissolução, mistura, granulação ou formação de drageias. 15 -

Para ama forma de administração oral mis turam-se os ingredientes activos com os aditivos usuais para tal fim, como veículos, estabilizadores ou diluentes inertes e transformam-se, por meio de métodos usuais, nas formas de admi nistração adequadas, como comprimidos, drageias, capsulas, sus pensSes aquosas, alcoólicas ou oleosas ou soluçSes aquosas, al coólicas ou oleosas. Como veículos inertes podem utilizar-se p. ex. goma arábica, magnésia, carbonato de magnásio, fosfato de potássio, lactose, glucose, estearilfumarato de magnésio ou amido, em especial amido de milho. Neste caso a preparação pode efectuar-se na forma de granulado seco ou hómido#

Como veículos oleosos ou solventes ole*· osos referem-se p. ex. óleos vegetais ou animais, oomo óleo de girassol e óleo de fígado de bacalhau.

Para aplicação subcutânea ou intravenosa dissolvem-se, suspendem-se ou emulsionam-se os ingredientes a-otivos ou os seus rais fisiologicaraente assimiláveis, nas subjs tâncias usuais para tal fim, oomo solubilizantes, emulsionan-tes ou outros aditivos. Como solventes referem-se p. ex. água, soro fisiológico ou álcoois, p. ex. etanol, propanodiol ou gli cerina, e ainda soluções de açócares como glucose ou manite, ou ainda uma mistura dos vários solventes mencionados. índice das abreviaturas utilizadas: ACC 4-aminociclohexilcarbonilo BGG ter-butoxicarbonilo

Buli n-butil-lítio DCC diciclohexilcarbodiimida DCI "Desorption Chemical Ionisation" (ionização química por dessorpção DNP 2,4-dinitrofenilo DME dimetoxietano 16

DMF dimetilformamida EE acetato de etilo EI Melectron impact" (impacto electrónico) FAB "fast a tom bombardment h hora HOBT 1-hidroxibenzotriazole M pico molecular MS espectro de massa MTBE éter metil-ter-butilico NEM N-etilraorfolina n-Prop PA anidrido do acido n-propilfosfónico THF tetrahidrofurano

As restantes abreviaturas utilizadas para os aminoacidos correspondem ao código de três letras usual na química dos péptidos, como descrito p. ex. em Eur. J. Bioch 138» 9**37(l984). Salvo indicação em contrario trata-se sempre de aminoacidos de eonfiguração-L.

Os eluentes utilizados abreviam-se do seguinte modo: LM1 CH2Cl2/CH3OH 20Íl LM2 GHgOLg/CH OH 9*. 1 LM3 CH2ca2/ce30H 12 si lm4 CH2 Cl2/CH3OH/NH3 con c. 10:1:0,1 LM5 ciclohexano/a cetato de etilo 9:1 LM6 n~hexano/acetato de etilo 2:1

Os exemplos seguintes destinam-se a ilus, trar a presente invenção sem a limitarem. - 17

Exemplo 1 N-ÍN-ter.-butoxicarbonil-eis-^-amino ciclo hexicarbonil)-L-fenilalanina «L«norvalina*(l-S«ciclohexilmetil-~2-S-liidroxi-5-(2«piridil) )»pentilamida

Misturaram-se 235 mg de N~(N«*ter**bu1feáxi~ ca rbonil-cis-4-aminocicloh.exil carbonil)-L-f enila lanina, dissol vida em 3 ml de DMF, com 98 mg de HOBT, 130 mg de DCC e 0,08 mL de NEM. A esta solução adicionaram«se 230 mg de L-norvalina«(1--S-cicloliexilmetil-^-S-liidroxi-S-í 2-piridil) ) -pentllamida , dis» solvida em 3 ml de BMP, e agitou-se durante a noite a temperatura ambiente. Destilou—se a DMF em alto vãcuo; tomou—se a solução restante em acetato de etilo, removeu-se por filtração a ureia formada e lavou-se duas vezes com soluções saturadas de NaHCO^ e Na CL, secou-se a fase orgânica sobre MgSO^ e concen-trou-se em vácuo. Apâs cromatografia em coluna (silica gel, ÉMl) isolaram-se 315 mg.

Ponto de fusão: 100-103°C MS(FAB) 748'(M+l) a) N-(N-ter_-butoxicarbonil-cis-4-aminociclohexilcarbonil)-L--f enila lanina

Hidrogenaram-se 5>5 g de ester benzílico de N-(N»ter-butoxicarbonil-cis-4-aminocicloh.exilearbonil) -L-—f enila lanina em 23O ml. de etanol, sobre 1 g de carvão de pa — ladio a pressão normal. Terminada a reacção removeu-se o catalisador por filtração e destilou—se o solvente. Apos recrista-lização de n«heptano/acetato de etilo obtiveram—se 4,1 g de um produto incolor.

Ponto de fusão. 160—162°C (decomposição) MS (DCl) 392 (M+l) b) Éster benzilico da N-(N—ter—butoxicarbonil—cis-4—aminociclo -hexilcarboni1)-L-fenilalanina 18 —

Dissolveram-se 6,0 g de acido N-ter-buto-xicarbonil-cis-1,4-aminociclohexanocarboxilico e 6,3 g de estei benzilico de L-fenilalanina em 75 ml de DMF e misturaram-se com 24 ml de n-PropilPA e 15»7 ml de NEM a 0°C, e deixou-se reagir durante a noite a temperatura ambiente. Diluiu-se a solução com CH0C1 e lavou-se com uma solução semi-saturada de NaHCO , c.an uma solução de acido cítrico a 10$> e com água, secou-se sobre MgSO^ e concentrou-se em vácuo. Por cromatografia flash obtiveram-se 5» 7 g de prodjato puro. Dí -14,6° ( c=l, 1 êm CE^OH).

Exemplo 2 N-( cis-4-aminociclohexilcarbonil) -L-fenil lalanina-L-norvalina»(l-S-ciclohexilmetil-2-S-hidroxi«5-(2-pi-ridil))-pentilamida

Dissolveram-se crito no exemplo 1 em 2 ml de 77»7 mg do composto des-e fizeram-se reagir a 0°C, sob azoto, com 2 ml de CE^COOH. Apos 30 minutos concentrou-se ε solução, tomou-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se duasi vezes com soluçSes saturadas de NaHCO e NaCL. mg

Por cromatografia em coluna (silica gel, LM1) obtiveram-se 24,7 de produto. MS (FAB) 648 (M+l)

Exemplo 3 N-(N-ter-but oxi ca rb onil-tr ans-4«amino ei-clohexilca rb onil)-L-fenilalan ina-L-norva1ina-(1-S-ci elohexil-metil-2-S-hidroxi-5-(2-piridil))-pentilamida

De modo análogo ao processo descrito no exemplo 1 preparou-se o composto do título, a partir de N-(N--ter»butoxÍGarbtmil-trans-4-aminocieloh.exilca rb onil) -L-f enila 1él nina e de L»norvalina-(l-S-ciclohexilmetil-2-S-hidroxi-5-(2-pi«· ridil))-pentilamida. 0 rendimento foi de 2?0 mg. 19 -

Ponto de fusão: 219-220°C MSC(FAB) 748 (M+l). a ) N-(N-ter-butoxioarbonil-trans-4-aminooicloh.exiloarbortil) -L--fenilalanina

Hidrogenaram-se 4,45 g de éster benzí-lieo de N-(N-tejr«*butoxicarbonil-trans«4»aminociclohexilcarbo-nxl)-L-fenilalanina em 200 ml de etanol, ã temperatura ambiente, I pressão normal, sobre 9°0 mg de carvão de paládio como catalizador. Terminada a reacção removeu-se o catalizador por filtração e destilou-se o solvente em vácuo. Após recristali-zação ^obtiveram-se 2,67 g do produto puro.

Ponto de fusão: decomposição a partir de 160°C MS(DCI) 391 (M*) b) Uster benzílico da N-(N~ter-butoxicarbonil-trans-4-aminoci-cl ohexil ca rb onil) -L-f enila lanina

Dissolveram-se 3 g de ácido N-ter-buto xicarbonil-trans-4-aminociclohexilcarboxílico e 3,2 g de éster benzilico de L-fenilalanina em 40 ml de DMF e misturaram-se, a 0°C, com 7>85 ml de NEM e em seguida com 12 ml de n-PropPA. Deixou-se reagir a mistura durante a noite a temperatura ambiente. Após diluição'com 200 ml de acetato de etilo lavou-se duas vezes a solução com HO, ácido cítrico a 10$, NaHCO satu A 3 rada e Na Cl saturada. A fase organica resultante secou-se com MgSO^ e evaporou-se o solvente em vácuo. Agitou-se o produto bruto com éter dietílico. Filtraram-se os cristais precipitados e lavaram-se. Obtiveram-se 4,45 S de cristais incolores. Ponto de fusão: 176-177°C MS(DCI) 481 (M+l) — 20 *>

Exemplo 4 N-(trans-4«aminociclohexilearbonil)-L-fenilalanina-L-norvali~ na-(l,5“GÍclohexilmetil-2-5-hidroxi-5-(2-piridil))-pentilami- da

Preparou-se o composto do título, de acordo com o processo descrito no exemplo 2, a partir do composto descrito no exemplo 3·

Rendimento após cromatografia (sílica gel, 012): 27 mg. MS (FAB) 648 (M+l); R,£ 0,17 (cloreto de metileno/metanol 8:2)

Exemplo 5 N-(N-ter.«butoxicarbonil-trans-4-aminociclohexilcarbonil)-L~fe-nilalanina -N(im) -tritil-L-histidina-(l~S-ciclohexilmetil-2-S--hidroxi-5-(2-piridil))-pentilamida

Preparou-se o composto do título, de acordo com o processo descrito no exemplo 1, a partir do derivado de fãnilalanina descrito no exemplo 3a) e de FMOC-His(Trt - (l-S-oiclohexilmetil-2-S~hidroxi-5-(2-piridil) ) -pentilemida . Rendimento após cromatografia (sílica gel, LMl) : 0,4 g. MS(PAB) 1028 (M+l), 1034 (M+7). Rf : 0,5 (tolueno/etanol 8:2)

Exemplo 6 N-(N -ter-butoxi ca rb onil-trans-4-aminociololxexilcarbonil) -L--fenilalanina-L-histidina-(l-S-ciclohexilmetil-2~S-hidroxi-5“ -(2-piridil))-pentilamida

Dissolveram-se 40 mg da substância obtida no exemplo 5 em 5 ml de acido acético a $?0$ e aqueceu--se durante 2 horas a 60°C. Levou-se o pH da solução a 8 com Na^CO extraiu-se três vezes com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica duas vezes com uma solução saturada de NaHCO^ e « 21

com uma solução saturada de Na Cl, secou-se em seguida sobre MgSOji^ e concentrou-se em vacuo. Por cromatografia (silica gel, LMl) obtiveram-se 16 mg de produto puro. MS(FAB) 786 (M+l), Decomposição a partir de 155°C.

Exemplo 7 N-(trans-4-amino ciclohexilcarbonil)-L-fenilalanina-L-histidina -(l-S-ciclohexilmetil-2-S-hidroxi-5“(2-piridil))-pentilamida

Agitaram-se 300 mg da substância des·? crita no exemplo 5 com 5 ml de CF COOH e 0,25 ml de HO duran- o ^ te 15 minutos a 0 C e 2 horas a temperatura ambiente. Concen-trou-se a solução em vãcuo, alcalinizou-se com uma solução de NaHCO^ e extraiu-se com acetato de etilo. Concentrou-se a fase orgânica em vácuo e cromatografou-se o resíduo (silica gel, KM2) . MS(FAB) 686 (M+l). Ponto de fusão: 114-116°C.

Exemplo 8 N-^í-ter.-butoxicarbonil-cis-4-aminociclohexilcarbonil-L-f enila lanina-N(im)-tritil-L-histidina-(l-S-ciclohexilmetil-2-S-hidro xi-5-(2-piridi))-pentilamida 0

Preparou-se o composto do título à partir do derivado de fenilalanina descrito no exemplo la) e de FM0C-His(Trt)-(l-S-ciclohexilmetil“2-S-hidroxi-5"(2“piri-dil)) -pentilamida, de acordo com o processo descrito no exempl 1. Rendimento após cromatografia (silica gel, LMl): 0,5 g. MS((FAB) 1028 (M+l), 1034 (M+7); R * 0,26 (LMl) .

Exemplo 9 N-(N-ter-butoxicarbonil-els-4-aminociclohexiloarbonil)-L-feni-lalanina-L-histidina—(l-S-ciclohexil-metil-2-S-hidroxi-5~(2-• -piridil))-pentilamida 22 -

Preparou-se o composto do título., de acordo com o processo descrito no exemplo 6, a partir do com·* posto descrito no exemplo 8. 0 rendimento foi de 61 mg.

Ponto de fusãoí 127-130°C. MS (FAB) 786'(M+l); Rf : 0,21 (LM2)

Exemplo 10 N - ( cis-4-amino cicloh.exilcarbonil) -L-f enilalanina-L-h.istidina~ - (1-S- cicloh.exil-2-S-hidroxi-5"-( 2-piridil) ) -pentilamida

Preparou-se o composto do título, de acordo com o processo descrito no exemplo 7s o partir do composto descrito no exemplo"8.. Rendimento 180 mg.

Ponto de fusãoí 177° C com decomposição MS (FAB) 686 (M+l)

Exemplo 11 N-(N-ter.-butoxicarbonil-trans-4—aminociclohexilcarbonil) -L--tirosina-(0-metil)-N(im)-tritil-L«bistidina-(l-S-cicloliexil-metil~2-S-hidroxi-5-(2-piridil))-pentilamida

Preparou-se o composto do título a partir de N-(N-ter-butoxicarbonil-trans-4—aminociclohexiloar-bonil)-L-metiltirosina e de L-His(Tritil)-(l-S-ciclohexilmetil-~2-S-hidroxi~5-(2-piridil)-pentilamida, de acordo com o processo descrito no exemplo 1. Rf: 0,54 (tolueno/etanol: 8j2)' MS (FAB) 1058 (M+l)

Exemplo 12 N*(N-ter-butoxicarbonil~trans-aminoeiclohexilcarbonil)-L-tiro-sina-(O-metil)-L-histidina-(l-S-ciclohexilmetil-2-S-bidroxi--5-(2»piridil))-pentilamida 23

Mm

Preparou-se o composto do título, de acordo com o processo descrito no exemplo 6, a partir do composto descrito no exemplo 11, Rf:0,2 (tolueno/etanol 8:2) MS (FAB) 816 (M+l), Decomposição a partir de 180°C,

Exemplo 13 N-( t rans-4-amin o ci cl ohexil carb onil) -L-tiro sina -(θ-metil) -L-his·· tidina-(l-S-cielohexilmetil-2-S-hidroxi~5-(2~piridil) )-pentila-· mida

Preparou-se o composto do título, de a cov_ do com o processo descrito no exemplo 7> a partir do composto descrito no exemplo 11. MS (FAB) 716 (M+l).

Exemplo Xk N-(N-ter-but oxioarb onil-cis-4-aminociclohexilcarbonil)-L—tiro·· £ina-(O-metil)-N(im)-tritil-L-histidina-(l-S-ciclohexilmetil--2-S-hidroxi-5-(2-piridil)-pentilamida.

Preparou-se o composto do título a partir de N-(N-ter-butoxicarbonil-cis-Λ-aminociclohexilcarbonil) -L-ti· rosina (O-metil) e de L-His(tritil)-(l-S-cieloh.exilmetil-2-S-hi-droxi-5~(2«piridil))-pentilamida, de acordo com o processo descrito no exemplo 1.

Rf: 0,75 (LM2) MS (FAB) 1058 (M+l).

Exemplo 15 N-(N-ter-butoxicarb onil-eis-4-aminocicloh.exiloa rb onil) -L-tiro-sina-(O-metil) -L-histidina-(l-S-cielohexilmetil-2-S-hidroxi-5“ - (2-piridil) ) -pentilamida .

Preparou-se o composto do título, de aco:? do com o processo descrito no exemplo 6, a partir do composto descrito no exemplo 14.

Rf! 0,80 (LM4) MS (FAB) 816 (M+l)

Exemplo 16 N-( cis-4-a mino ciclohexilcarbonil)-L-tiro sina - (θ-me til) -L-his ti·· dina-(l-S-oicloliexilmetil-2-S-liidroxi»5*"(2-piridil) )-pentilami-da

Preparou-se o composto do título, de aco^ do com o processo descrito no exemplo 7» a partir do composto descrito no exemplo 14.

Rf: 0,50 (LM4) MS (FAB) 716 (M+l)

Exemplo 17 N-(N -cis-4-ter-butoxiearbonilamino-ciclohexilcarbonilfenilala-ninil)-histidinil)-2-(5~S-amino-6-ciclohexil-35j 4-R-dihidroxi--n-hexil)-piridina

Agitaram-se 60 mg do composto do exemplo 17a) com 40 mg de tiofenol em 2 ml de acetonitrilo, durante 2 horas.

Após concentração procede-se a uma croma·* tografia (silica gel, LM4) e obtiveram-se 45 mg de um pó amorfo. MS (FAB) 802 (M+l) a) Boc-cis-ACG-Phe-His(BNP)-2-(5-amino-6-ciclohexil-35»4 R-di-hidroxi-n-hexil)-piridina

Agitam-se 40 mg de Boc-His(DNP)-(3S,4R,-. 5R)“2-(5*"amino“6-ciclohexil-3}4-dihidroxihexil)-piridina em 5 - 25

ml de DME/HC1, durante 2 horas. Após concentração dissolve-se o produto bruto, conjuntamente com 50 mg de N-fN-ter-butoxicar bonil-cis-4-aminociclohexilcarbonil)-L~fenilalanina, 120 mg de DCC e 80 mg de HOBt, em 3 ml de DMF. Ajusta-se o pH da solução a 9 com NEM e agita-se durante 16 horas. Filtra-se a solução, dilui-se com acetato de etilo e lava-se uma vez com uma solução de NalICO^ a 3Í°i com agua e com uma solução saturada de NaCl, seca-se com MgSO^, concentra-se e cromatografa-se em sílica gel (LM3). Obtêm-se 60 mg do composto do título na forma de uma espuma amarela. MS (FAB) 968 (M+l). b) Boc-His (DNP) - (33,4R, 5S)-2-(5-amino-5-ciclohexil-3,4«dihidro** xihexil)-piridina

Agitam-se 0,5 mmol do isómero (3S,4R,5S) do composto do exemplo 17C) com 5 ml de HC1 em DME (saturado), durante 2 horas. Após concentração em vacuo dissolve-se o resí· duo em 3 ml de DMF absoluta. Adicionam-se 0,5 mmol de BOC-His-(DNP)-OH, de d iciclohexilearbodiimida e de HOBt. Ajusta-se o pH da solução a 9 com NEM e agita-se durante 2k horas. Após filtração dilui-se com EE e lava-se com uma solução de NaHÇO^ a 3$, seca-se com MgSO^ e concentra-se. Por cromatografia em solica gel (LMl) obtém-se o composto de título na forma de uma resina amarela. MS (FAB) 696 (M+l) c) 2-((3S,4R,5S)-5-ter-butoxicarbonilamino-3,4-dihidroxi-6-ci-clohexil-n-hexil)-piridina

Fazem-se reagir 93 mg (l mmol) de 2-pico lina em 10 ml de THF, a -78°0, eom 1,4 ml (l mmol) de n-Buli. Após aquecimento ate a temperatura ambiente, agita-se durante 30 minutos e depois arrefece-se a -40°C. Adiciona-se 1 mmol de

X (2RS, 3R,4s) -3-ter-butildimetil-sililoxi-4á?J:|re'butoxicarbonila« mxno-5~ciclohexil91>2-oxopentano (conhecido da BP-A 189 203, - 26 - exemplo 6), dissolvido em 5 rol de THF, Após 10 horas I tempera·· tura ambiente dilui-se eom água e extrai-se com HTBE. Dissolve·· -se o produto bruto (0,4 g) em THF e agita-se com 5 ml de uma solução 1M de fluoreto de tetrabutilamónio em THF, durante 1 h a 0 C. Apos dilúiçao com água e extracção com EE obtêm-se 0,15 g do isómero (3S,4R,5S) (MS (FAB)í 391 (M+l) e 0,1£ g do isóme-ro (3S,4S,5S) (MS (FAB): 391 (M+l)).

Exemplo 18

Tris-trifluoroacetato de cis-4-aminociclohexilcarbonil-L-Phe--L-His-(l-S-ciolohexilmetil-2R-3S-dihidroxi-5-(2-piridil))-n--pentilamida.

Agitam-se 25 mg do composto descrito no exemplo 17 em 1 ml de TFA/l ml de CH^Clg, durante 2 horas. Após concentração toma-se o resíduo em H^O e liofiliza-se. Obtêm—se 20 mg de produto na forma de um pó incolor. MS (FAB): 702 (M+l).

Exemplo 19

Boc-trans-A00-L-Phe-L-His«(l-S-ciclohexilmetil-2Rí3S-dihidroxi--5-(2-piridil))-n-pentilamida

Preparou-se o composto do título, de a cor do com o processo descrito no exemplo 17, a partir do composto descrito no exemplo 9a. Rf: 0,19 (LM2). Rendimento: 79,5 mg. MS (FAB): 802 (M+l). a) BOC-trans-ACC-L-Phe-L-His-(DNP)-(lS-oiclohexilmetil-2R,3S--dihidroxi-5-(2-piridil))-n«pentilamida

Preparou-se o composto do título, de acor do com 0 processo descrito no exemplo 17a), a partir dos compos tos descritos nos exemplo 3a ) © 19b). — 27 **

Rf: 0,40 (LM2). MS (FAB): 968 (M+l) b) Cloridrato de H-His(DNP)-(3S,4R,5S)-2*(5-amino-6-ciclohexil· •*3» ^-dihidroxi-n-toexil) «piridina

Agitam-se 400 mg do composto do exemplo l^b) em 100 ml de DME/HC1 (Sat.) durante 2 to.· Api5s concentração toma-se duas vezes em tolueno e concentra-se novamente. Obtém--se o composto do título na forma de uma espuma amarela. MS (FAB): 596 (M+l)

Exemplo 20 trans-ACG~L-jBhe-L.»His-(lS-ciclohexilmetil-2R, 3S-dihidroxi-5«(2--piridil))-n-pentilamida

Preparou-se o composto do título de acordo com o processo descrito no exemplo 18, a partir do composto descrito no exemplo 19· 0 retodimento foi de 49 mg. MS (FAB)s 702 (M+l).

Exemplo 21

Bo c-trans-A CC-L-Tyr(O-metil)-L-His-(lS-ciclohexilmetil-2R,3S--dihidroxi-5~(2-piridil))-n-pentilamida

Preparou-se o composto do título de acor-t do com o processo descrito no exemplo 17» a partir do composto descrito no exemplo 21a). MS (FAB): 832 (M+l) a) Boc-trans-ACG-L-Tyr(0-metil)-L-B‘is(DNP)-(lS- ci c1ohexilme t i14 -2R~3S-dihidroxi-5“(2-piridil))-n-pentilamida

Obteveese o composto do título de acordo com o processo descrito no exemplo 17a)» a partir dos compostos 28 -

descritos nos exemplos 21b) e 19b). MS (FAB): 998 (M+l).

b) Boc-trans-ACC-Tyr(OCH^)-OH

Dissolvem-se 0,05 mol de BOS-trans«ACC--Tyr^OCH^)-OGH^ em 250 ml de DME, e agita-se com uma quantidade equimolar de uma solução IN de NaOH, durante 5 h. Em seguida concentra-se a solução, toma-se o resíduo em agua, acidifica-se a pH 4 com KHSO^ e extrai-se com EE. Recristaliza-se o produto bruto de n-heptano/EE e obtém-se o composto do título na forma de um pó branco.

Ponto de fusão! 181°C com decomposição. Rfs 0,20 (tolueno/eta- nol 8:2). MS (DCl)s 421 (M+l). c) Boc-trans-ACC-Tyr(QCH^)-OCH^

Dissolvem-se 0,1 mol de Boc-trans-ACC-OH e 0,1 ml de éster metílico de L-tirosina(OCH^) em 500 ml de DMF e fazem-se reagir, a 0°C sob N , com 100 ml de n-PropPa( a 50^ em CH^Cl^) e 0,5 mol de trietilamina. Deixa-se reagir a solução durante a noite. Terminada a reacção (controle por DG) destila-se 0 solvente em alto vácuo e toma-se 0 resíduo em EE„ Extrai-se a fase orgânica por duas vezes com uma solução de áci do cítrico a 10$, água, uma solução semi-saturada de NaHCO^ e uma solução saturada de NaCl, seca-se sobre MgSO^, concentra-se em vácuo e cromatografa-se (sílica gel, LM5).

Ponto de fusão! 150-155°C. MS (DCl): 435 (M+l).

Exemplo 22 trans-A GC-L-Tyr(0-metil)-L-His-(1S-ci clohexilmetil-2R,3 S-dihi- droxi-5~(2-piridil))-n-pentilamida

Preparou-se o composto do título de acordo com o processo descrito no exemplo 18, a partir do composto - 29 -

descrito no exemplo 21. MS (FAB)í 732 (M+l).

Exemplo 23 BOC- dis-ACC-L-Tyr(O-metil)«L«His«(lS-eiclohexilmetil-2R, 3S-di-hidroxi-5~(2-piridil))-n-pentilamida.

Preparou-se o composto do titulo de acor*< do com o processo descrito no exemplo 17» a partir do composto descrito no exemplo 23a)·

Rfl 0,21 (LM2). MS (FAB): 832 (M+l). a ) B 0 C- ci s - A CC-L-Ty r(O-metil) -L-Hi s ( DNP ) - (1S- c i cl ohexi lme t i1« «2R,3S-dihidroxi-5-(2-piridil))«n-pentilamida

Preparou-se o composto do titulo de acordo com o processo descrito no exemplo l?a), a partir dos .compostos descritos nos exemplo 23b) e 19b). MS (FAB): 998 (M+l).

b) BOC-cis-A CG-Tyr(OCH^)«OH

Obtém—se o composto do título de modo Λ g analogo ao do processo 21b). 01 ^ = + 18,6 (c=l, metanol). · MS (DCI): 421 (M+l). c) B0C-cis«ACC«Tyr(OCH^) (éster metílico)

Preparou-se o composto do título de modo analogo ao do exemplo 21c). MS (DCl)í 435 (M+l). - 30 ϊ

Exemplo Zh

Cis-A CC-L-Tyr (O-metil) -L-His- (lS-ciclohexilmetil-2R, 3S-dihidro -xi-5~(2-piridil))-n-pentilamida

Preparou-se o composto do título de acordo com o processo descrito no exemplo 18, a partir do composto descrito no exemplo 23.

Rf: 0,56 (LM4). MS (FAB): 732 (M+l).

Exemplo 25 B0C-cis-ASS-Phe-His-(lS-ciclohexilmetil-2S-hidroxi-5-(N-propil·--2-imidazolil))-pentilamida

Preparou-se o composto do título de acordo com o processo descrito no exemplo 17> a partir do composto descrito no exemplo 25· MS (FAB): 817 (M+l). a) BOC-cis-ACC-Plie~His(DNP)~(lS-ciolohexilmetil-2S-hidroxi-5--(N-propil-2-imidazolil))-pentilamida

Agitam-se 80 mg do composto do exemplo b) com 4 ml de HCl em DME (sat.), durante 2 h. Após concentração em v^guo dissolve-se o resíduo em 3 ml de DMF absoluta. Adicionam-se bb mg de BOC-cis-ACC-Phe-OH-e 0,11 mmol de DCC e 0,11 mmol de HOBt. Ajusta-se 0 pH da solução a 9 com NEM e agiota-se durante Zb horas. Após filtração dilui-se com EE eleva--se duas vezes com uma solução a 3$ de NagCO^, com agua e com uma solução saturada de NaCl, seca-se com MgSO^ e concentra-se, Por cromatografia em sílica gel obtém-se o composto do título na forma de uma resina amarela. MS (FAB): 983 (M+l). - 31 -

b) BOC-His(DNp)-(lS-ciclohexiltnetil-2S-hidroxi-5-(N-propil-2--imidazolil))-pentilamida

Agitam-se 100 mg do composto do exemplo c) com 5 ml de HC1 em DME (sat.), durante 2 h* Após concentração em vácuo dissolve-se o resíduo em 3 ml de BMP absoluta. Adicionam-se 105 mg de BOC-His(DNP)-OH e 0,3 mmol de DCC e 0,3 mmol de HOBt. Ajusta-se o pH da solução a 9 com NEM e agita-se durante 2h h. Após filtração dilui-se com EE e lava-se duas vezes com uma solução a 3$ de Na^CO^, com água e com uma solução saturada de Na Cl, seca-se com MgSO^ e concentra-se. Por croma-tografia em sílica gel obtém-se o composto do título na forma de uma resina amarela. MS (FAB)s 711 (M+l) c) 3-B0C-4S-ciclohexilmetil-2,2-dimetil-5-(3~(2-N-propilimida-zolil)-propil)-oxazolidina

Dissolvem-se 500 mg do composto do exem pio d) em 5 ml de THF absoluto. Sob atmosfera de argon, a —60°<J adicionam-se 1,9 ml de uma solução 1,5 molar de n-butil-litio em n-hexano. Após 15 minutos adicionam-se 500 mg do composto do exemplo e) dissolvido em 5 ml de THF absoluto. Após 1 h a -60°C adicionam-se 10 ml de uma solução saturada de NaHCO^.

Após aquecimento até â temperatura ambiente extrai-se três vezes com EE, seca-se com Na^SO^ e concentra-se. Obtem—se o composto do título por meio de cromatografia em sílica gel (LMEE). Rf: 0,3 (EE). MS (FAB)í J+08 (M+l). d) 2-metil-N-n-propilimidazole

Aquecem-se à ebulição 10 g de 2-metilimi-dazole em hO ml de brometo de n-propilo, durante 2 h. Em seguida deita-se a mistura sobre 150 ml de uma solução a 5Í° de NaHSO^, extrai-se três vezes com EE, seca-se com Na^SO^ e concentra-se. Toma-se o residuo em éter e separam-se por filtraçãe 32

Ί> os reagentes de partida insolúveis. Deste modo precipita-o composto do título na forma de um óleo incolor.

Rf: 0,2 (BE/CH^OH 10:l). e ) 3-B0C-cicloliexilmetil-2,2-dimetil-5-(2-bromoetil) -oxazoli-dina A 69O mg de 3-B0C-15-ciclohexilmetil-2,2 -dimetil-5^(2-'hidroxietil)-*oxazolidina , 2,6 g de trifenilf osfi na e 1,6 g de brometo de piridínio em 15·."· mil de CH^Cl^, adieio·· nam-se gota a gota, sob argon, 1,6 ml de ester dietílico do acido azodicarboxílico, a 20°C. Após 16 h à temperatura ambienw te adiciona-se agua e dilui-se com 100 ml de CH Cl . Lava-se a

Λ tC fase orgânica duas vezes com uma solução saturada de NaHCO^ e uma vez eom uma solução de NsCl. Conoentra-se a fase orgânica depois de seca eom Na^SO^, toma-se o resíduo num pouco de EE e remove-se a PPft^ por filtração. Após purificação em sílica gel obtem-se o composto do título (LM6).

Rf: 0,3 (LM6)5 MS: kOk (M+l). f) 3-BOC-4S-ciclohexilmetil-2,2-dimetil-5~(2-hidroxietil)-oxa-zolidina

Aquecem-se a 80°C 10 g de BOC-ACHPA--OCgHg, (preparação de acordo com J. Med. Chem. 28, 1779 (1985) 500 mg de acido p-toluenossulfónico e 7,2 ml de dimetoxipropa-no, em 160 ml de tolueno, sob argon, durante 2 h. Concentra-se em seguida. 0 residuo adieiona-se gota a gota a uma suspensão de 2 g de LiAlH^ em 200 ml de THF, a 0°0. Após 2,5 h a 0°C adicionam-se 100 ml de uma solução de NaHSO^ a 5e extrai-se três vezes com EE. Lavam-se as fases orgânicas reunidas com uma solução saturada de NaHGO^. Após secagem com Na^SO^, concentra-se e cromatografa-se em sílica gel (LM6).

Rf: 0,1 (LM6). MS (DCl): 3^2 (M+l). - 33 -

Claims (3)

1. Exemplo 26 Cis~ACC-Phe-His-(IS-oiclohexilmetil-SS-hidroxi-5-(N-propil-2--imidazolil))-pentilamida Preparou-se. o composto do txtulo de acor do eom o processo descrito no exemplo 18, a partir do composto descrito no exemplo 25· MS (FAB): 717 (M+l). RBIVINDI-CACOES - 1» - Processo para a preparação de um compos to de fórmula I R2 OH R3 a I I- I * Ra _w_A-B-NH-CH-GE-CH-R (I) na qual R3 significa eieloalquilo(C^-Gg), bicieloalquilo (ve10)> tri-cicloalquilo( Cg-G^g) , cicloalquil( C^-Cg)-alquilo( C^-Og) , bi·· cicloalquil( G^-Cj^g)-alquilo-( C^Cg) e tricicloalquil( Cg-C.^ I -alquilo(C^-Cg) , em que os substituintes eieloalquilo, bici cloalquilo e trxeieloalquilo podem por sua vez estar substituídos por um ou dois grupos iguais ou diferentes, seleccio·* nados de entre a série F, Cl, Br, I, hidroxilo, alcooxilo-(C^Cg), alquilo^-Cg), carboxilo, alcooxicarbonilo (G^Cg) carbamoilo, carboximetoxi, amino, monoalquilamino ( C^-Cg),, dialquilamino^-Cg) , aminoa lquilo ( C^Cg) , alquilamino(C^--Gg)j alquilo(C^Cg), dialquilamino(Cg)-alquilo(C^Cg), - 3h -

   ¥ amidino, hidroxamino, hidroximino, hidrazono, imino, gua« nidino, alquiloxisulfonilo(C^-C^), alquiloxisulfenilo(C^-wCg), trifluorometilo, alcooxicarbonilamino( G^-C^), aril-( C6~C12)-aXcooxicarboniXa,nino( C^~C^) j representa • CO-, -O-CO-, -SO R R" R significa hidrogénio, alquilo(, cieloalquilo(C^"C^) •çicloalquil( C^-C^)-aXquilo( C^~C^), arii(Gg-C^) ou aril(Cg -C-jL^) -alquilo( $ significa hidrogénio, aXquilo(C^-C^q), ariXo (c6-ol4), ariX(Cg«C^)“aXquiXo(c^-C^), hidroxiXo ou amino} significa um grupo de férmuia XI, (CH2)m*CHR5«.D em que representa hidrogénio, alquilo(C^-C^), alcooxilo(G^-C^), alqui!tio( C^-C,.) , aXquiXamino( O^C^) , hidroxiXo, azido, fláor, cXoro, bromo, iodo} D (II) significa um grupo Het, em que CF3 e Het representa um anel heteroeíclico com 5 a 7 membros, que pode estar fundido com um aneX benzénico ou ser aromatieo, parcial ou totaXmente hidrogenado, que con tém como hetero átomos um ou dois grupos iguais ou diferentes escolhidos de entre N, 0, S, NO, SO, SO^, e que pode estar substituído por um ou dois grupos iguais ou diferentes, escolhidos de entre alquilo (C^C^), alcooxilo(, hidroxilo, halogéneo, amino mono- ou di-alquilamino(C^-C^), m A e B, independentemente um do outro, significam um aminoacido 1 ligado no terminal azotado com R ou com A e no terminal carboxílico com B ou com NH-GHR2-CHOH-CHR3«RZ<', aminoacido esse escolhido de entre a série fenilalanina histidina, tirosina, triptofano, metionina, leuoina, significa 0, 1, 2, 3 ou k\ - 35 -

   μ ι'· nr.rrrT.BiiSrfr&SS xsoleuoina, asparagina, áoido aspártico, /3 -2-tienilalanina, *-2-f urilalanina -3-f urilalanina , lisina, ornitina, va·* lina, alanina, ácido.
2. 2,4-diaminobutxrico, arginina, 4·» -clorofenilalanina, metioninosulfona, metioninosulfóxido, 2-piridilalanina, 4*piridilalanina, 3-l?ívi<ixlalan±n.a, ciclohexilalanina , exelohexxlglxcina, xm-metxllixstidina, 5 O-metiX tiro sina, O-benziltirosina, O«tor-t>atiitirosina, feniXgXicina, 1-naftiialanina, 2~naftilalanina, 4-nitro~ fenilalanina, norvalina,^ -g-benzo/b^tienilalanina , β -3--/b7~tienilalanina , 2-fluorofenilalanina , S^fluorofenila** Xanina, 4-fluorofenilalanina, norleucina, cistèína, S--metiXcisteína , acido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3** -carboxílico, homogenilalanina, DOPA, O-dimetil-DOPA, N-metilhistidina, ácido 2-amino-4-(2-tienil)butxrico, ácido 2-amino-4-(3"*tienil)butxrioo, 3-(2-tienil)«serina, (z)-deshidrofenilalanina, (e)-deshidrofenilalanina, 1,3--dioxolano~2-il-alanina, N-pirròlilalanina e 1«, 3- ou 4-pxrazolilalanina, bem como dos respectivos sais fisiologicamente assimiláveis, caracterizado por se efectuar o acoplamento de um fragmento cout um grupo carboxilo terminal ou de um seu derivado reaotivo com um fragmento adequado com um grupo amino, livre, se remover evm tualmente um ou mais grupns proteotores temporariamente introduzidos para proteger outros grupos funcionais, © se transformar o composto assim obtido, conforme o caso, num seu sal fisí. ologieamente assimilável* - 2‘- ca 3 /v R e ¥ se definem como na reivindicação 1, Processo de acordo com a reivindicação 1 racterizado por se preparar um composto de fórmula I, em que p R significa hidrogénio, alquilo(G^-G^q), cicloalquilo(C^-G^), cicloalquil(C^-C^)-alquilo(C^-C^), arilo(Cg-C.^) ouaril(Cg -Cl4)-alquilo(0;l-C4), 36

   significa hidrogénio, alquilo(C^-C^q) , arilo(Cg-C ^) , aril-( Cg-C^) -alquilo( C^-C^) , hidroxilo oa amino, Í4. , R significa um grupo de formula II, em que R^ representa hidrogénio, alquilo^^-C^), alcooxilo(C^-C^), al·· quiltio( C^-C^) , alquilamá.no( C^-C^) , hidroxilo, azido, flúor, cloro, bromo ou iodo, D define-se como o grupo Het na reivindicação 1, e significa fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, leu cina, isoleueina, asparagina, acido aspártico,/5 -2-tienila-lanina, β -3-tienilalanina, -2-furilalanina, /2 -3-furilala - nina, lisina, ornitina, valina, alanina, acido 2,4-diamino-butírico, arginina, ^-clorofenilalanina, metioninosulfona, metionina sulfóxido, 2-piridilalanina, 4-piridilalanina, 3--piridilalanina, ciclohexilalanina, ciclohexilglicina, im--metilhistidina , O-metiltirosinaO-benziltxrosina , O-ter-bu·· tiltirosina, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina, β -2-benzo/"“b_7tienilalanina , β -3-benzoi/'"b_7tienila lanina , 2-f luorofenila lanina , 3~fluo-rofenilalanina, 4-fluorofenilalanina, norleucina, cistexna, cisterna, S-metilcisteína, acido 1,2,3>4-tetrahidroisoquino-lina-3-carboxílico, homofenilalanina, DOPA, O-dimetil-DOPA, N-metilhistidina, acido 2-amino-4-(2-tienil)butxrico, ácido 2-amino-4-(3“tienil)butxrieo, 3-(2-tienil)serina, (z)-deshi-drofenilalanina, (e)-deshidrofenilalanina, l,3-dioxolano-2--il-alanina, N-pirrolilalanina e 1-, 3~ ou 4-pxrazolalanina. - 3S - Processo de acordo com as reivindicações 1 e/ou 2, caracterizado por se preparar um composto de fórmula I, em que ,a cicloalquil(C^-cicloalquilo po-iguais ou dife- Ra representa um grupo cicloalquilo(C^-Cg) ou -Cg)-alquilo(C^-C^) , em que o substituinte de estar substituído por um ou dois grupos, - 37

   rentes, de entre a série hidroxilo, alcooxilo(C^-C^), alqui-loÍG^-C^), carboxilo, alcooxicarbonxlo(C^-C^), oarbamoilo, carboximetoxi, amino, monoalquilamino( C^-Gg), dialquilami-no(c^-Cg), aminoalquilo(C^-Cg), alquilamino(C^-C^)-alquilo-(C_-C0), dia lquilamino G_-C„) alquilo ( C.-0o) , amidino, fluo- X ei Xá Xá rometilo, alcooxicarbonilamino(C^-C^), como ter-butoxicarbo -nilamino, aril(C^-C^g)-alcooxicarbonilamino(C^-C„), como benziloxicarboniiamino e metanosulfonilamido, trifluorome-tanosulf onilatnido; ¥ representa -CO-, 2 R significa isobutilo, benzilo ou ciclohexilmetilo$
3. 3 R significa hidrogénio ou hidroxilo; k R significa um grupo de fórmula XI, no qual 5 fr R representa hidrogénio ou flúor, D representa um grupo 2-, 3- ou 4-piridinilo, um grupo 2-, k-ou 5"iB1idazolilo ou um grupo 2-oxazolinilo, podendo os hete-rociclos mencionados estar substituídos por um ou dois grupos de entre metilo, metoxi, flúor, cloro, bromo e CF^, e m significa 0, l,ou 2$ e A e B, independentemente um do outro, significam um grupo biva·· lente, escolhido de entre a série fenilalanina, histidina, tirosina, triptofano, metionina, histidina, tirosina, tri-ptofano, metionina, leucina, isoleucina, asparagina, ácido aspártico, -2-tienilalanina, ./5,-3-tienila lanina , /3 -2--furilalanina , lisina, ornitina, valina, alanina, ácido 2, if-diaminobutxrico , arginina, 4-clorof enilalanina , metio-ninosulfona, metioninosulfóxido, 2-piridilalanina, 3-piri-dilalanina, 4-piridilalanina , ciclohexilalanina , ciclohexij.. glicina, im-metilhistidina, O-metiltirosina, O-benziltiro-sina, O-ter-butiltirosina, fenilglicina, 1-naftilalanina, 2- naftilalanina, 4-nitrofenilalanina, norvalina, norleuei-na, ácido l,2,3,^--tetrahidroisoquinolina-3-carboxxlico, ho·· mefenilalanina, ácido 2-amino-4-(2-tienil)-butxrico e 1-, 3- e 4-pirazolilalanina. - 38 » _ Zj.a „ \ Processo para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento da hipertensão arterial, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um composto de fórmula I, quando preparado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, com veículos fisiologicamente adequados e eventualmente com outros aditivos e adjuvantes farmacêuticos, de modo a obter-se uma forma de administração apropriada . A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 22 de Abril de 1989, sob o n?. P 39 13 272.2. Lisboa, 19 de Abril de 199° 0 AGEM OFICIAI, Μ PEOPEIEMDE IIBUSTfiSAI,

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