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TECHNISCHES
GEBIET
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Die Erfindung betrifft bestimmte
Amin-Derivate und deren Verwendung zur Hemmung der Human-Immunschwächevirus
(HIV)-Proteasen und damit zur Behandlung viraler HIV-Infektionen,
wie beispielsweise das "erworbene
Immunschwächesyndrom" (AIDS).
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EINSCHLÄGIGER STAND
DER TECHNIK
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Human-Immunschwächevirus (HIV) ist ein pathogener
Retrovirus, der AIDS und Erkrankungen im Zusammenhang damit hervorruft.
Die Entwicklung einer antiviralen Chemotherapie gegen AIDS ist seit
der Entdeckung des HIV das Thema intensiver Forschungsarbeiten gewesen.
(Zu einer neueren Übersichtsarbeit über Molekulartargets
für die
AIDS-Therapie siehe Mitsua et al., Science, 1990, S. 1533– 1544).
Die HIV-Proteasen (HIV PR) und Aspartylproteasen wurden zuerst als
ein potentielles Target für
die AIDS-Therapie von Kramer et al. (Science, 231, 1580, 1986) vorgeschlagen.
Seit dieser Zeit ist der potentielle Nutzen von HIV PR-Inhibitoren
als wirksame Mittel zur Behandlung von AIDS weithin anerkannt (zu
einer Übersicht
der HIV PR als ein therapeutisches Target siehe Tomaselli et al.
Chimica Oggy, Mai 1991, S. 6–27
und Huff J. R., J. Med. Chem., 1991, 34, 2314–2327). Von den klassischen Übergangszustands-Minetika
für Aspartylproteasen
scheinen das Hydroxyethylen, Dihydroxyethylen, Hydroxyethylamin
und Phosphinsäure-Isostere
die größte Affinität zur HIV
PR zu liefern. Zahlreiche Inhibitoren der HIV PR haben gezeigt,
dass sie über
eine antivirale Wirksamkeit bei Konzentrationen im nanomolaren Bereich
in den verschiedenen Zellsystemen verfügen und sind als solche in
der Patentliteratur beschrieben worden.
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Huff J. R., J. Med. Chem. (1991)
34, 2314–2327
beschreibt bestimmte Proteaseinhibitoren auf der Grundlage von Dipeptid-Isosteraustausch
für die
schneidbare Bindung in Asparatylprotease-Substraten.
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Andere Dokumente, in denen HIV-Proteaseinhibitoren
offenbart werden, schließen
die Australische Patentanmeldung 63221/90 und 55711/90 und die EP-A-521
827 ein. Die Australische Patentanmeldung 63221/90 offenbart eine
Reihe von 1,6-disubstituierten Hexan-3,4-diol-Derivaten, und die
Australische Patentanmeldung 55711/90 offenbart eine Reihe von substituierten
Aminosäure-Derivaten
mit retroviraler Protease-hemmender Aktivität. Die EP-A-521 827 offenbart
ebenfalls Verbindungen, die über
eine antivirale Wirksamkeit verfügen.
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Die US-P-3 330 857 offenbart bestimmte
Hydrazid-Derivate, die als Derivate einer Aminosäure angesehen werden können, in
der die α-Methylidin-Gruppe
durch ein Stickstoffatom ersetzt ist. Allerdings offenbart die US-P-3
330 857 keine Verbindungen, die über
eine HIV-Protease-hemmende Aktivität verfügen.
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ZUSAMMENFASSUNG
DER ERFINDUNG
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Die Erfindung gewährt eine neue Klasse von Verbindungen,
die als Inhibitoren für
retrovirale Proteasen und speziell Aspartylproteasen und noch spezieller
HIV-Proteasen verwendbar sind und die bei der Behandlung von Erkrankungen
wirksam sind, die gekennzeichnet sind durch unerwünschte Aktivität dieser
Enzyme und speziell dem erworbenen Immunschwächesyndrom.
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Eine erste Ausführungsform der Erfindung richtet
sich auf eine Verbindung, die ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend
aus:
tert-Butyl-3-isopropyl-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-valyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
1-(2-Pyridyl)methoxycarbonylanthranilyl-2-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2-oxo-3(S)-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropen-3-yl)-3-[(2R
und S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropyl)-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-valyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-(2-pyridyl)-methoxy-carbonyl-L-valyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-glutaminyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-threonyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo-[2.2.1]hept-5-en,
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo-[2.2.1]heptan,
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl))-methoxy-carbonyl-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo-[2.2.1]heptan,
2-[N-(1S)(2-Methyl-1-methoxycarbonylpropyl)carbamoyl]-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl)methoxy-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo[2.2.1]heptan
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-chinaldyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]-1,2,3,4-tetrahydrophthalazin,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan,
1-Trimethylacetyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin,
1-Trimethylacetyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin,
1-(tert-Butylamino)carbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-picolinoyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-(2-pyridyl)methoxycarbonylanthranilyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-benzyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-benzyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-cyclohexyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-cyclohexyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-(1-carbamoylmethyl)acrylyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-2-(RS)-3-tert-butylthio-2-carbamoylmethylpropionyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-benzoyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat,
1-(tert-Butyloxycarbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]hexahydropyridazin,
1-(tert-Butyloxycarbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]hexahydropyridazin,
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-3-cyano-L-alanyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan.
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Die Verbindungen lassen sich nach
bekannten Verfahren für
die Synthese substituierter Amine herstellen.
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Eine zweite Ausführungsform der Erfindung richtet
sich auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine Verbindung,
wie sie vorstehend festgelegt wurde, gemeinsam mit einem oder mehreren
pharmazeutisch zulässigen
Trägern,
Streckmitteln, Adjuvantien und/oder Arzneimittelträgern aufweisen.
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In einer dritten Ausführungsform
der Erfindung wird die Verwendung der Verbindungen für die Herstellung
eines Medikaments zum Hemmen einer retroviralen Protease in einem
Säuger
mit Bedarf für
eine derartige retrovirale Proteasehemmung gewährt. In einer der Formen der
dritten Ausführungsform
wird eine Verwendung gewährt,
wo es sich bei der retroviralen Protease um HIV handelt.
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Für
die Hemmung retroviraler Proteasen oder die Behandlung von viralen
HIV-Infektionen kann eine Zusammensetzung der zweiten Ausführungsform
oral verabreicht werden, topisch, parenteral, z. B. durch Injektion,
und durch intraarterielle Infusion, rektal oder durch Inhalationsspray.
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Bei der oralen Verabreichung kann
die pharmazeutische Zusammensetzung in Form von Tabletten vorliegen,
Lutschpastillen, Pillen, Pastillen, Kapseln, Elixieren, Pulver,
Granalien, Suspensionen, Emulsionen, Sirupen und Tinkturen. Formen
mit langsamer Freisetzung oder verzögerter Freisetzung lassen sich
auch beispielsweise in Form von beschichteten Partikeln herstellen,
mehrlagigen Tabletten oder Mikrogranalien.
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Feste Formen zur oralen Verabreichung
können
pharmazeutisch zulässige
Bindemittel enthalten, Süßungsmittel,
Zerfallmittel, Streckmittel, Geschmacksverbesserer, Überzugsmittel,
Konservierungsmittel, Gleitmittel und/oder Verzögerungsmittel. Geeignete Bindemittel
schließen
ein, Gummi arabicum, Gelatine, Maisstärke, Tragant, Natriumalginat,
Carboxymethylcellulose oder Polyethylenglykol. Geeignete Süßungsmittel schließen Saccharose
ein, Lactose, Glucose, Aspartam oder Saccharin. Geeignete Zerfallmittel
schließen
ein: Maisstärke,
Methylcellulose, Polyvinylpyrrolidon, Xanthan, Bentonit, Alginsäure oder
Agar. Geeignete Streckmittel schließen ein: Lactose, Sorbit, Mannit,
Dextrose, Kaolin, Cellulose, Calciumcarbonat, Calciumsilicat oder Dicalciumphosphat.
Geeignete Geschmacksverbesserer schließen ein: Pfefferminzöl, Gaultheriaöl, Kirsch-, Orangen-
oder Erdbeeraroma. Geeignete Überzugsmittel
schließen
ein: Polymere oder Copolymere von Acrylsäure und/oder Methacrylsäure und/oder
deren Ester, Wachse, Fettalkohole, Zein, Shellac oder Gluten. Geeignete
Konservierungsmittel schließen
ein: Natriumbenzoat, Vitamin E, alpha-Tocopherol, Ascorbinsäure, Methylparaben,
Propylparaben oder Natriumhydrogensulfit. Geeignete Gleitmittel
schließen
ein: Magnesiumstearat, Stearinsäure,
Natriumoleat, Natriumchlorid oder Talkum. Geeignete Zeitverzögerer schließen Glycerylmonostearat
oder Glyceryldistearat ein.
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Flüssige Formen zur oralen Verabreichung
können
zusätzlich
zu den vorgenannten Mitteln einen flüssigen Träger enthaltenn. Geeignete flüssige Träger schließen ein:
Wasser, Öle,
wie beispielsweise Olivenöl, Erdnussöl, Sesamöl, Sonnenblumenöl, Safranöl, Arachisöl, Kokosöl, flüssiges Paraffin,
Ethylenglykol, Propylenglykol, Polyethylenglykol, Ethanol, Propanol,
Isopropanol, Glycerin, Fettalkohole, Triglyceride oder Mischungen
davon.
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Suspensionen zur oralen Verabreichung
können
ferner Dispergiermittel und/oder Suspendiermittel aufweisen. Geeignete
Suspendiermittel schließen
Natriumcarboxymethylcellulose ein, Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose,
Polyvinylpyrrolidon, Natriumalginat oder Cetylalkohol. Geeignete
Dispergiermittel schließen
Lecithin ein, Polyoxyethylenester von Fettsäuren, wie beispielsweise Stearinsäure, Polyoxyethylensorbitmono-
oder -dioleat, -stearat oder -laurat, Polyoxyethylensorbitanmono-
oder -dioleat, -stearat oder -laurat und dergleichen.
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Die Emulsionen zur oralen Verabreichung
können
ferner ein oder mehrere Emulgiermittel aufweisen. Geeignete Emulgiermittel
schließen
Dispergiermittel ein, wie sie vorstehend exemplifiziert wurden,
oder natürliche
Gummen, wie beispielsweise Gummi arabicum oder Tragant.
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Zur topischen Verabreichung kann
die pharmazeutische Zusammensetzung in Form einer Creme vorliegen,
einer Salbe, eines Gels, eines Geles, einer Tinktur, einer Suspension
oder einer Emulsion. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann pharmazeutisch
zulässige
Bindemittel, Streckmittel, Zerfallmittel, Konservierungsmittel,
Gleitmittel, Dispergiermittel, Suspendiermittel und/oder Emulgiermittel
enthalten, wie sie vorstehend exemplifiziert wurden.
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Zur parenteralen Verabreichung kann
die Verbindung der ersten Ausführungsform
oder ihr Salz in steriler wässriger
oder ölhaltiger
Lösung
oder Suspension hergestellt werden. Geeignete monotoxische parenteral
zulässige
Streckmittel oder Lösemittel
schließen
Wasser ein, Ringer's
Lösung,
isotonische Salzlösung, 1,3-Butandiol,
Ethanol, Propylenglykol oder Polyethylenglykole in Mischungen mit
Wasser. Wässrige
Lösungen
oder Suspensionen können
ferner ein oder mehrere Puffermittel aufweisen. Geeignete Puffermittel
schließen
Natriumacetat ein, Natriumcitrat, Natriumborat oder Natriumtartrat,
z. B.
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Zur rektalen Verabreichung wird die
Verbindung der ersten Ausführungsform
in geeigneter Weise in Form eines Einlaufs oder eines Suppositoriums
verabreicht. Ein geeignetes Suppositorium kann hergestellt werden,
indem der Wirkstoff mit einem nichtreizenden Arzneimittelträger gemischt
wird, der bei normalen Temperaturen fest ist, der jedoch im Rektum
schmilzt. Geeignete Materialien dafür sind Kakaobutter und Polyethylenglykole.
Geeignete Einläufe
können
Mittel aufweisen, wie sie vorstehend im Zusammenhang mit Formen zur
topischen Verabreichung exemplifiziert wurden.
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Ein Inhalationsspray wird in geeigneter
Weise eine Verbindung der ersten Ausführungsform aufweisen und in
Form einer Lösung
vorliegen, einer Suspension oder einer Emulsion, wie sie vorstehend
exemplifiziert wurden. Die Zusammensetzung für den Inhalationsspray kann
ferner ein inhalierbares Treibmittel geringer Toxizität aufweisen.
Geeignete Treibmittel schließen
Kohlendioxid und Stickstoff(I)-oxid
ein.
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Die Darreichungsform der Verbindung
der ersten Ausführungsform
wird 0,01% bis 99 Gew.-% Wirkstoff aufweisen. Normalerweise werden
Darreichungsformen gemäß der vorliegenden
Erfindung 0,1% bis etwa 10 Gew.-% des Wirkstoffes aufweisen.
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Die Verbindung der ersten Ausführungsform
kann gemeinsam oder nacheinander mit 1 oder mehreren anderen Wirkstoffen
verabreicht werden, von denen bekannt ist oder angenommen wird,
dass sie bei der Behandlung viraler HIV-Infektionen wirksam sind.
Beispiele für
derartige andere Wirkstoffe schließen AZT und Aciclovir ein.
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Zusammensetzungen der zweiten Ausführungsform
lassen sich nach auf dem Gebiet für die Herstellung pharmazeutischer
Zusammensetzungen bekannten Methoden herstellen, einschließlich Mischen,
Vermengen, Homogenisieren, Suspendieren, Auflösen, Emulgieren, Dispergieren
und Mahlen der Verbindung der Formel (I) mit zusammen mit dem/den
ausgewählten
Vehikel(n), Träger(n),
Adjuvans/Adjuvantien und/oder Streckmittel(n).
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In der Methode der Behandlung von
viralen HIV-Infektionen nach der dritten Ausführungsform der Erfindung wird
gewöhnlich
eine Verbindung der ersten Ausführungsform
oral oder durch Injektion verabreicht. In der Regel wird die Behandlung
aus der Verabreichung einer oder bis zu 5 täglichen Gaben der Verbindung
der Formel (I) für
eine Dauer von einem Tag bis zu mehreren Jahren und bis zur Lebensdauer
des Patienten bestehen. Am ehesten wird die Behandlung aus der Verabreichung
der Verbindung der Formel (I) für
eine Dauer von einem Tag bis zu einem Jahr bestehen.
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Die verabreichte Gabe der Verbindung
der ersten Ausführungsform
kann in Abhängigkeit
von mehreren Faktoren variieren, wie beispielsweise dem Zustand
des Patienten. Die Mengen werden im Bereich von 0,01 mg bis 200
mg/kg liegen. In der Regel wird die Menge des Wirkstoffes 0,01 mg
bis 10 mg/kg Körpergewicht
betragen.
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Beispiele für Darreichungsformen nach der
Erfindung sind folgende:
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BEISPIELE
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Beispiele für Verbindungen der Erfindung
sind solche Verbindungen der Formel (IV), wie sie in Tabelle 1 präsentiert
werden:
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In der vorstehenden Tabelle bezeichnet
CBZ Benzyloxycarbonyl(phenylmethoxycarbonyl); QC bezeichnet Chinolin-2-carbonyl;
PC bezeichnet 2-Pyridinmethoxycarbonyl; Asn bezeichnet Asparagin;
Val bezeichnet Valin; Gln bezeichnet Glutamin und Thr bezeichnet
Threonin, BZ bezeichnet Benzoyl, PIC bezeichnet Picolinyl und CNAIa
bezeichnet 3-Cyano-L-alanin.
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Diese Verbindungen verfügen über die
Fähigkeit
zur Hemmung von HIV-1- und HIV-2-Proteasen und haben antivirale
Anti-HIV-Eigenschaften bei der Konzentration von 10 nM bis 100 μM bei akut
infizierter MT 2 und peripheren Blutlymphozyten. Verbindungen Nr.
2, 7B, 8 und 17 haben eine ähnliche
oder erhöhte
Fähigkeit zur
Hemmung von HIV im Bezug auf AZT (Azidothymidin) mit geringerer
Toxizität
für die
Zellen gezeigt.
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Die HIV-Protease-hemmende Wirksamkeit
der repräsentativen
Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind mit Hilfe bekannter
Methoden getestet worden (Brinkworth, R. I., et al., Biochem. Biophys.
Res. Commun. 176, 241, (1991); McLeod, D. A., et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry
Letters (1991) 653–658). In
diesem Test hat sich gezeigt, dass eine Reihe der in den nachfolgenden
Beispielen beschriebenen Verbindungen HIV-1-Protease hemmt, wobei
der Halbwert der maximalen Hemmung bei Inhibitorkonzentrationen (IC50) vom subnanomolaren Bereich bis zum mikromolaren
Bereich und im typischen Fall 3 nM bis 30 μM auftritt.
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Die Ergebnisse der vorgenannten Testverbindungen
sind in Tabelle 2 dargestellt:
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TABELLE
2:
HIV-Protease-hemmende Wirksamkeit von Verbindungen der Formel
(IV)
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Die antivirale Wirksamkeit repräsentativer
Verbindungen der vorliegenden Erfindung ist im "Antivirals Laboratory", Fairfield Hospital,
Fairfield, Victoria, Australia ermittelt worden. In diesem Test
wurde eine Stammlösung
jeder Verbindung in DMSO angesetzt und anschließend in Kulturmedium (RF 10)
auf das 2-fache der für
den Test erforderlichen Endkonzentration verdünnt. Die Endkonzentration von
DMSO betrug 1% oder darunter. Es wurden näherungsweise 250.000 zusammenhängende Lymphozyten
menschlicher Herkunft (MT2-Zellen) oder 750.000 periphere Human-Blutlymphozyten
(PBL) an Verdünnungen
der jeweiligen Testverbindung exponiert und anschließend sofort
mit dem Human-Immunodeficiency-Virus-Typ
1 (HIV) Stamm #237228 (ein aus menschlicher Herkunft erhaltenes
klinisches Isolat) infiziert. Die Infektionstiter wurden als mittlere
Gewebekultur-Infektionsdosis (TCID50 pro
ml) ausgedrückt,
wobei 1 TCID50 einer Menge eines Überstandes
entspricht, die zum Infizieren von 50% der replizierten Zellkulturen
benötigt
wird. Die 250 bzw. 200 TCID50 wurden für MT2- bzw.
PBL-Zellen verwendet. Die Zell/Medikament/Virus-Mischung wurde sodann
bei 37°C/CO2 in einer 24-Mulden-Mikrotiterplatte inkubiert. Es
wurden frische Mengen der entsprechenden Verdünnung jedes Medikaments sowohl
zu MT2- als auch PBL-Kulturen am Tag 3 zugesetzt. Am Tag 6 wurde nach
dem folgenden Bewertungsmaßstab
der Umfang der HIV-spezifischen cytopathischen Effekte (CPE) im Zusammenhang
mit der jeweiligen Konzentration der Testverbindung in jeder der
Kulturen bewertet:
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Die Aktivität der Verbindungen bei der
jeweiligen Konzentration wurde ebenfalls anhand ihrer Fähigkeit bewertet,
von Viren begleitete reverse Transkriptase (RT)-Aktivität in den
Kulturüberständen zu
hemmen. Zum Zeitpunkt der Bewertung des CPE wurden Überstandflüssigkeiten
aus jeder Mulde entnommen und die RT-Aktivität unter Anwendung eines Standardassays
gemessen. Die CPE-Bewertungen "negativ,
+/–" (in MT2-Zellen)
oder Spuren (in PBL) mit mehr als 95% Hemmung der RT-Aktivität wurden
so angesetzt, dass sie ein IC100 repräsentieren
(die Konzentration der Verbindung, bei der die Virus-Replikation gehemmt
wird). Die in dem jeweiligen Test einbezogenen Kontrollkulturen
waren:
- (a) HIV-infizierte Zellen in Abwesenheit
einer Testverbindung.
- (b) Nicht infizierte Zellen in Abwesenheit einer Testverbindung.
- (c) Kontrolle der Zelltoxizität, bestehend aus nichtinfizierten
Zellen, die mit Verdünnungen
der Testverbindung behandelt wurden.
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Zur Schlussfolgerung aus jedem Versuch
wurden lebensfähige
Zellen in diesen Kulturen, die mit Hilfe des Tryptanblau-Ausschlusses
ermittelt wurden, mit den unter (b) vorstehend erhaltenen Zählungen
verglichen. Es wurden lediglich Konzentrationen, die nicht toxisch
waren (nicht dazu führten,
dass die Zählungen lebensfähiger Zellen
gegenüber
denen unter (b) gefundenen wesentlich verringert waren) verwendet,
um die antivirale Kennzahl (AI) jeder Testverbindung zu ermitteln.
Die Fähigkeit
der Verbindungen 1 bis 20, die Ausbreitung einer akuten HIV-Infektion
in Iymphozytischen Zell-Linien zu blockieren, ist in Tabelle 3 gezeigt.
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TABELLE
3:
Anti-HIV-1 antivirale Eigenschaften der Verbindungen 1 bis
20
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- (a)
- IC50
- (b)
- IC80
- nd
- nicht ausgeführt
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Um die vorliegende Erfindung weiter
zu veranschaulichen, sind die folgenden speziellen Beispiele gegeben,
wobei als selbstverständlich
gilt, dass diese lediglich zur Veranschaulichung vorgesehen sind
und die Erfindung in keiner Weise beschränken.
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In diesen Beispielen wurden die Schmelzpunkte
auf einem Heiztischapparat aufgenommen und blieben unkorrigiert.
Die Protonen NMR-Spektren wurden bei 100 MHz oder 300 MHz auf Perkin
Elmer R32- oder Bruker EM 300-Spektrometern aufgenommen. Die chemischen
Verschiebungen sind feldabwärts
in ppm von Tetramethylsilan gegeben. Die Molekulargewichte der in
den Beispielen 1 bis 23 angegebenen Verbindungen wurden mit Hilfe
der Elektrospray-massenspektrometrischen Analyse ermittelt, die
im Department of Chemistry an der La Trobe University, Melbourne,
ausgeführt
wurde. Die Dünnschichtchromatographie
(TLC) wurde auf Silicagel-60-F254-Platten (Merck) ausgeführt. Die
Verbindungen wurden durch UV und/oder eine 2%ige wässrige Kaliumpermanganatlösung sichtbar
gemacht. Das TLC-Lösemittelsystem
hatte die folgenden Zusammensetzungen (bezogen auf Volumen): (A)
Hexan/Ethylacetat 4 : 1; (B) Hexan/Ethylacetat 3 : 2; (C) Ethylacetat;
(D) Chloroform/Methanol 23 : 2.
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BEISPIEL 1
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tert-Butyl-3-isopropyl-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
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Schritt A: tert-Butyl-3-isopropylcarbazat:
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Die Titelverbindung kann nach der
Methode von Dutta et al., J. C. S. Perkin I 1975, 1712–1720 oder mit
Hilfe der folgenden Prozedur hergestellt werden: es wurde eine Mischung
von 13,2 g (0,1 Mol) tert-Butylcarbazat
und 6 g (0,103 Mol) Aceton und 12,5 g (0,1 Mol) wasserfreiem Magnesiumsulfat
in 100 ml Dichlormethan für
12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Entfernung des Trocknungsmittels
durch Filtration wurde das Filtrat bis zur Trockene unter vermindertem
Druck eingedampft, um 16,9 g (98% Ausbeute) entsprechend bei 104° bis 105°C schmelzendem
Hydrazon nach Kristallisation aus Cyclohexan zu ergeben. Zu einer Suspension
von 2,04 g (0,094 Mol) Lithiumborhydrid in 100 ml wasserfreiem THF
wurden 12 ml (0,094 Mol) Chlortrimethylsilan unter Stickstoff bei
Raumtemperatur zugesetzt. Nach 30 min Rühren wurden bei Raumtemperatur
langsam 13,45 g (0,078 Mol) Hydrazon zugesetzt und das Rühren für 2 Stunden
fortgesetzt. Sodann wurden 50 ml Methanol behutsam zugegeben und
die Mischung bis zur Trockene unter vermindertem Druck eingedampft.
Der Rückstand
wurde zwischen Ether (150 ml) und Wasser (50 ml) aufgeteilt. Die
organische Phase wurde über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und abfiltriert. Es wurde
wasserfreier Chlorwasserstoff durch das Filtrat durchgeleitet und
der sich bildende weiße
Feststoff durch Filtration entfernt, mit einer frischen Portion
von Ether gewaschen und getrocknet, um 10,5 g Hydrochloridsalz der
Titelverbindung zu ergeben. Dieses wurde in eine freie Base durch
Ausschütteln
zwischen Hexan (150 ml) und 20%igem wässrigen Kaliumhydroxid umgewandelt.
Ausbeute: 8,3 g (61%).
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Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxy-carbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat:
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Es wurde eine Mischung von 0,15 g
(0,45 Mol) N-CBZ-L-Phenylalaninchlormethylketon (1(S)-(Phenylmethoxycarbonylamino)-2-phenyl-ethylchlormethylketon)
und 1 ml einer gesättigten
Lösung
Natriumiodid in wasserfreiem DMF für 15 min bei Raumtemperatur
gerührt.
Zu diesem wurden 0,074 g (0,47 mM) tert-Butyl-3-isopropylcarbazat
zugesetzt, gefolgt von 0,095 g (1,13 mM) Natriumhydrogencarbonat
zugegeben. Nach 6 Stunden rühren
bei Raumtemperatur wurden 0,051 g (1,3 mM) Natriumborhydrid zugegeben
und das Rühren für weitere
30 min fortgesetzt. Die Lösung
wurde auf 30 ml Ethylacetat verdünnt
und mit 2%iger wässriger
Kaliumhydrogensulfatlösung,
Wasser und gesättigter wässriger
Natriumchloridlösung
gewaschen und anschließend über wasserfreiem
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Abdampfen des Lösemittels unter vermindertem Druck
und die Reinigung des Rückstands
mit Hilfe der Flash-Chromatographie (Silicagel; Hexan/Ethylacetat 20
: 5) ergab die Titelverbindung, Schmelzpunkt bei 118° bis 119,5°C mit 49%
Ausbeute; R(A) = 0,11; R(B) = 0,47; NMR (CDCl3)
1,0 (m, 6H, Isopropyl CH3); 1,44 (s, 9H,
t-butyl CH3); 2,62 (m, 2H, Butyl CH2-1); 2,75–3,2 (m, 3H, Butyl CH-3, CH2-4; 3,47 (m, 1H, Isopropyl CH); 3,89 (m,
1H, Butyl CH-2); 4,44 (breit s, 1H, OH); 4,6 (breit m, 1H, NH);
5,03 (s, 2H, Methoxy CH2); 5,3 (breit s,
1H, Carbazat-NH); 7,23 (m, 10H, aromatisch).
-
BEISPIEL 2
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-valyl)amino-4-phenyl-butyl]carbazat
-
Schritt A: N-Chinaldyl-L-Valin:
-
Es wurde eine Mischung von 0,62 g
(3,6 mM) Chinaldinsäure
und 0,61 g (3,76 mM) 1,1'-Carbonyldiimidazol
in 1 ml wasserfreiem 1,4-Dioxan für 30 min bei Raumtemperatur
gerührt.
Dazu wurde eine Lösung
von 0,43 g (3,7 mM) L-Valin und 0,155 g (3,7 mM) Lithiumhydroxid
in 1 ml Wasser zugegeben und die resultierende Mischung bei Raumtemperatur
für etwa
4 Stunden heftig gerührt.
Die Mischung wurde auf 10 ml mit Wasser verdünnt, gekühlt (Eis-Wasserbad, sodann
mit 1 N Salzsäure
auf einen pH-Wert von etwa 3 angesäuert und für 2 Stunden bei 4°C stehen
gelassen. Die Kristalle, die sich bildeten, wurden durch Filtration
abgetrenn, 3 Mal mit 5 ml kaltem Wasser gewaschen und unter hohem
Vakuum über
Phosphorpentoxid getrocknet, um 0,75 g des Produkts zu ergeben.
Ausbeute: 76%, Schmelzpunkt 134–136°C, NMR (DMSO-d6) 1,03 (d, 6H, val CH3); 2,3
(m, 1H, val CH-β);
3,35 (breit s, 1H, OH); 4,49 (q, 1H, val CH-α); 7,5–8,3 (m, 5H, aromatisch); 8,5–8,76 (m, 2H,
aromatisch, NH).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutyl]-carbazat:
-
Zu einer gekühlten Lösung von 0,113 g (0,24 mM)
des Produktes von Beispiel 1 in 2 ml Methanol wurden 0,1 g von 10%
Palladium-auf-Aktivkohle unter Stickstoff gefolgt von 0,1 g Natriumborhydrid
gegeben. Die Reaktion ließ man
bis auf Raumtemperatur warm werden und rührte für 1 Stunde, wonach Katalysator
durch Filtration entfernt wurde und mit einer frischen Portion Methanol
gewaschen wurde. Die vereinten Filtrate wurden mit 1 ml 0,1 N wässriger
Salzsäurelösung behandelt
und bis zur Trockene unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand
wurde mit 5 ml 0,1 N Kaliumhydroxid behandelt und das Produkt mit
30 ml Diethylether aufgenommen. Die organische Phase wurde mit einer
gesättigten
wässrigen
Natriumchloridlösung
gewaschen, über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck
eingedampft, um 0,0797 g (99% Ausbeute) des Produktes von Schritt
B zu ergeben, das in dem nächsten
Schritt ohne weitere Reinigung verwendet wurde.
-
Schritt C: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-valyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Zu einer Mischung von 0,0643 g (0,24
mM) der Säure
aus Schritt A, 0,0797 g (0,236 mM) des Amins von Schritt B, 0,032
g (0,24 mM) von 1-Hydroxybenzotriazol in 0,5 ml wasserfreiem DMF
wurden 0,071 g (0,24 mM) 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidmethyliodid
zugegeben. Nach dem Rühren über Nacht
bei Raumtemperatur wurde die Mischung bis 30 ml mit Ethylacetat
verdünnt
und nacheinander mit Wasser, 5%iger wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung, 2%iger
wässriger
Kaliumhydrogensulfatlösung
und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen
und über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Abdampfen des Lösemittels
unter vermindertem Druck und die Reinigung des Rückstandes mit Hilfe der Säulenchromatographie
(Silicagel, Hexan/Ethylacetat 3 : 2) ergaben 0,091 g (65% Ausbeute)
der Titelverbindung, Schmelzen bei 186° bis 189°C: Rf(B)
= 0,19; Rf(C) = 0,83; NMR (CDCl3)
1,0 (m, 12H, val und Isopropyl CH3); 1,71
(s, 9H, t-butyl CH3); 2,3 (m, 1H, val CH-β); 2,5–3,27 (m, 3H, Butyl CH-3, CH2); 3,5 (m, 1H, Isopropyl CH); 4,31 (m, 2H,
val CH-α,
OH); 5,43 (breit s, 1H, Carbazat-NH); 6,22 (breit d, 1H, Butyl NH);
6,7–8,73
(m, 12H, aromatisch, NH).
-
BEISPIEL 3
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: N-Chinaldyl-L-asparagin:
-
Sofern L-Asparagin für L-Valin
in Schritt A von Beispiel 2 ersetzt wurde, lieferte der identische
Prozess die Titelverbindung, Schmelzen bei 200–203°C, 85% Ausbeute, NMR (DMSO-d6) 3,0 (m, 2H, asn CH2);
5,0 (m, 1H, asn CH-α);
6,3 (breit s, 1H, OH); 6,55 (breit s, 1H, NH2);
7,3 (breit s, 1H, NH2); 7,55– 8,6 (m,
6H, aromatisch); 9,22 (d, 1H, NH).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Zu einer gerührten Lösung des Produktes von Schritt
A (0,111 g; 0,386 mM), des Produktes von Beispiel 2, Schritt B (0,13022
g; 0,386 mM), Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorphosphat
(0,205 g; 0,46 mM) und 1-Hydroxybenzotriazol (0,052 g; 0,384 mM)
in 1 ml wasserfreiem DMF wurde N,N-Diisopropylethylamin (0,24 ml;
1,38 mM) zugesetzt. Nach dem Rühren
für 12
Stunden bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch bis 30 ml
mit Ethylacetat verdünnt
und mit Wasser, 2% Kaliumhydrogensulfat, 5% Natriumhydrogencarbonat
und gesättigter
wässriger
Natriumchloridlösung
gewaschen und über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Abdampfen des Lösemittels
unter vermindertem Druck und die Reinigung des Rückstandes mit Hilfe der Säulenchromatographie
(Silicagel, Ethylacetat) ergab 0,152 g (65% Ausbeute) der Titelverbindung,
Schmelzen bei 109° bis
114°C; Rf(C) = 0,36; Rf(D)
= 0,37; NMR (CDCl3) 1,0 (m, 6H, val, Isopropyl
CH3); 1,42 (s, 9H, t-Butyl CH3);
2,5–3,1
(m, 7H, asn CH2, Butyl CH2-1,-4,
CH-3); 3,44 (m, 1H, Isopropyl CH); 4,21 (m, 1H, Butyl CH-2); 4,55
(s, 1H, OH); 4,94 (m, 1H, asn CH-α);
5,4–6,2
(m, 3H, Amid); 6,7– 8,4
(m, 11H, aromatisch); 9,25 (m, 1H, NH).
-
BEISPIEL 4
-
1-(2-Pyridyl)methoxycarbonylanthranilyl-2-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin
-
Schritt A: (2-Pyridyl)methoxycarbonylanthranilsäure:
-
Es wurde Phosgen durch eine Lösung von
10 g (66 mM) Methylanthranilat in 15 ml wasserfreiem Toluol für 2 Stunden
am Rückfluss
durchgeperlt. Anschließend
wurde das Lösemittel
unter vermindertem Druck abdestilliert, um 11,7 g (100%) 2-Methoxycarbonylphenylisocyanat
zu ergeben; NMR (CDCl3) 3,89 (s, 3H, CH3); 7,0–7,63
(m, 3H, Phenyl H-3,-4,-5); 8,0 (dd, 1H, Phenyl H-6). Dieses wurde
in die Titelverbindung mit einer Gesamtausbeute von 34% durch Kondensation
mit einer äquimolaren
Menge von 2-Pyridylcarbinol, gefolgt von einer Verseifung des resultierenden
Esters mit 1 N Natriumhydroxid und Ansäuern des Reaktionsgemisches
auf pH 4 umgewandelt. Das Rohprodukt wurde durch Kristallisation
aus Ethylacetat gereinigt; Schmelztemperatur: 172°–175°C; NMR (DMSO-d6) 5,2 (s, 2H, Methoxy CH2);
6,8– 8,8
(m, 9H, aromatisch, NH); 10,8 (breit s, 1H, OH).
-
Schritt B: 2-[(2R,3S)-2-Hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin:
-
Es wurde Chlorwasserstoffgas durch
die Lösung
von 0,1 g (0,165 mM) von Produkt aus Beispiel 3 in 10 ml 1%ige Lösung von
Methanol in Dichlormethan für
30 min bei Raumtemperatur durchgeperlt. Nach dem Waschen des überschüssigen HCl
mit Stickstoff wurde das Lösemittel
unter vermindertem Druck entfernt, um 0,089 g (100%) der Titelverbindung
als einen weißen
Feststoff zu ergeben.
-
Schritt C: 1-(2-Pyridyl)methoxycarbonylanthranilyl-2-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin:
-
Das Koppeln der Produkte von Schritt
A und B unter Anwendung der in Beispiel 3, Schritt B ausgeführten allgemeinen
Prozedur ergab die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 24% nach
Reinigung durch Säulenchromatographie
(Silicagel, Ethylacetat); Schmelztemperatur: 96°–112°C; Rf(C)
= 0,13; Rf (D) = 0,36; NMR (CDCl3) 1,18 (m, 6H, Isopropyl CH3);
1,8–3,4
(m, 8H, asn CH2, Butyl CH2-1,-4,
CH-3, OH); 3,6 (m, 1H, Isopropyl CH); 4,2 (m, 1H, Butyl CH-3); 4,5–5,18 (m,
2H, asn CH-α,
Hydrazid-NH); 5,35 (s, 2H, Methoxy CH2);
5,3–6,5 (breit
m, 2H, asn NH2); 6,8–8,8 (m, 20H, aromatisch, Butyl-NH);
9,14 (m, 1H, asn NH); 10,36 (s, 1H, Anthracen-NH).
-
BEISPIEL 5
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2-oxo-3(S)-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Zu einer Mischung von 0,0533 g (0,088
mM) des Produktes von Beispiel 3 und 0,049 g (0,31 mM) Schwefeltrioxid-Pyridin-Komplex
in 1 ml wasserfreiem DMSO wurden 0,043 ml (0,31 mM) Triethylamin
zugesetzt. Nach dem Rühren
für 45
min bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch auf Eis gegossen
und bis Raumtemperatur warm werden gelassen. Der Niederschlag, der
sich bildete, wurde durch Filtration abgetrennt, mit Wasser gewaschen
und über
Nacht im Vakuum getrocknet, um 0,044 g (Ausbeute 83%) der Titelverbindung
zu ergeben, die durch Kristallisation aus wässrigem Methanol weiter gereinigt
wurde; Schmelztemperatur: 146°–150°C; Rf(D) = 0,32; NMR (CDCl3)
1,0 (d, 6H, Isopropyl CH3); 1,38 (s, 9H,
t-Butyl CH3); 2,5–3,3 (m,
5H, asn CH2, Butyl CH2,
Isopropyl CH); 3,7 (s, 2H, Butyl CH2); 4,6–5,3 (m,
2H, asn CH, Butyl CH-3); 5,6 (breit s, 1H, NH); 6,09 (breit m, 2H,
2 × NH);
6,9–8,4
(m, 12H, aromatisch, NH); 9,2 (breit d, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 6
-
tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropen-3-yl)-3-[(2R
und S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: 2(R,S)-3(S)-1,2-Epoxy-3-phenylmethoxycarbonylamino-4-phenyl-butan:
-
Zu der Lösung von 6 g (18 mM) N-CBZ-L-Phenylalaninchlormethylketon
(1(S)-(Phenylmethoxycarbonylamino)-2-phenylethylchlormethylketon)
in 30 ml 50%igem methanolischen Tetrahydrofuran wurden 0,68 g Natriumborhydrid
zugegeben. Nach dem Rühren
für 30
min bei Raumtemperatur wurde die Mischung vorsichtig mit 1 N Salzsäure angesäuert und
bis zur Trockene unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde
bis 50 ml mit Dichlormethan verdünnt,
mit Wasser und gesättigtem
wässrigen
Natriumchlorid gewaschen und über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Eindampfen ergab 6,02
g (100%) 2(R,S)-3(S)-1-Chlor-2-hydroxy-3-phenylmethoxycarbonylamino-4-phenylbutan
als einen weißen
Feststoff. Dieser wurde in 50 ml Isopropanol aufgelöst und bei
Raumtemperatur 9 ml 2N methanolisches Kaliumhydroxid zugesetzt.
Nach dem Rühren
für 1 Stunde
bei Raumtemperatur wurde das Lösemittel
unter vermindertem Druck abgetrieben und der Rückstand zwischen 50 ml Ethylacetat
und 20 ml Wasser aufgeteilt. Die organische Phase wurde mit gesättigtem
wässrigen
Natriumchlorid gewaschen, über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und bis zur Trockene eingedampft,
um 5,3 g (Ausbeute 99%) der Titelverbindung als ein überwiegend 2(S)-Stereoisomer zu ergeben,
was anhand der relativen Integration von Erythro-NCH (3,74 ppm;
72%) und Threo-NCH (4,2; 28%) ermittelt wurde; NMR (CDCl3) 2,42–3,17
(m, 5H, Butan CH2-1,-4, CH-2); 3,74 (m,
0,72H, Buran CH-3); 4,2 (m, 0,28H, Butan CH-3); 4,73 (breit m, 1H,
NH); 5,08 (s, 2H, Methoxy CH2); 7,3 (m,
10H, aromatisch).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropen-2-yl)carbazat:
-
Diese Verbindung wurde mit Hilfe
der Methode von Ghali et al. (J. Org. Chem., 1981, 46, 5413– 5414) in
etwa 65% Gesamtausbeute aus trans-4-Phenyl-3-buten-2-on und tert-Butylcarbazat
nach Kristallisation des Rohproduktes aus Hexan hergestellt; Schmelztemperatur:
76°–79°C; NMR (CDCl3) 1,24 (d, 3H, CH3);
1,45 (s, 9H, t-Butyl CH3); 3,78 (m, 2H,
Propenyl CH-1, Carbazat-NH-3); 5,8–6,29 (m, 2H, Carbazat-NH-2,
Propenyl CH-2); 6,53 (d, 1H, Propenyl CH-3); 7,3 (m, 5H, aromatisch).
-
Schritt C: tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropen-3-yl)-3-[(2R
und S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazate:
-
Es wurden 0,57 g Epoxid aus Schritt
A in etwa 15 ml wasserfreiem Ether bei Raumtemperatur zu einer stark
gerührten
Suspension von 8 g Aluminiumoxid (E. Merck I) imprägniert mit
1 g (3,81 mM) des Produkts von Schritt B zugesetzt. Das Rühren wurde
für 16
Stunden fortgesetzt und der Katalysator durch Filtration entfernt
und mit Ethylacetat (3 × 25
ml) gewaschen. Die vereinten Filtrate wurden bis zur Trockene unter
vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand mit Hilfe der Säulenchromatographie
abgetrennt und gereinigt (Silicagel, Hexan/Ethylacetat 4 : 1). Die
Produktfraktionen wurden unter Vakuum eingedampft, um das 2R,3S-Isomer
(0,298 g; 28%) und das 2S,3S-Isomer (0,1 g; 9%) der Titelverbindung
als einen weißen
Feststoff zu ergeben. Isomer 2R,3S: Schmelztemperatur: 101°–104°C; Rf (A)
= 0,19; NMR (CDCl3) 1,27 (dd, 3H, CH3); 1,42 (s, 9H, t-Butyl CH3);
2,67 (m, 2H, Butyl CH2-1); 3,0 (m, 2H, Butyl
CH2-4); 3,5 (m, 2H, Propenyl CH-1, Butyl CH-3);
3,91 (m, 1H, Butyl CH-2); 4,4, 4,82, 5,38 (breite Multipletts, 3 × H, Amid
NH, OH); 5,0 (s, 2H, Methoxy CH2) 6,09 (dd,
1H, Propenyl CH-2); 6,5 (d, 1H, Propenyl CH-3); 7,22 (m, 15H, aromatisch).
-
Isomer 2S,3S: Schmelztemperatur:
128°–130°C; Rf (A)
= 0,26; NMR (CDCl3) 1,22 (m, 3H, CH3); 1,4 (s, 9H, t-Butyl CH3);
2,55 (breit m, 2H, Butyl CH2-1); 2,95 (d,
2H, Butyl CH2-4); 3,5 (m, 3H, Propenyl CH-2,
Butyl CH-2,-3); 4,44 (m, 1H, OH); 5,05 (m, 2H, Methoxy CH2); 5,34
(m, 2H, NH); 6,08 (dd, 1H, Propenyl CH-2); 6,5 (d, 1H, Propenyl
CH-3); 7,3 (m, 15H, aromatisch).
-
BEISPIEL 7
-
tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropyl)-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropyl)-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Dieses wurde mit 98% Ausbeute durch
Hydrogenolyse des Isomers 2R,3S des Produktes von Beispiel 6, Schritt
C, als ein weißer
Feststoff hergestellt, ausgeführt
entsprechend der Beschreibung in Beispiel 2, Schritt B.
-
Schritt B: tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropyl)-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-carbazat:
-
Die Kondensation des Amins von Schritt
A (0,0835 g; 0,195 mM) mit N-Chinaldyl-L-asparagin (Beispiel 3,
Schritt A) (0,0563 g; 0,196 mM) unter den in Schritt B von Beispiel
3 vorgegebenen Bedingungen ergab 0,11 g (Ausbeute 81%) der Titelverbindung
nach Reinigung durch Säulenchromatographie
(Silicagel, Chloroform/Methanol 23 : 2); Schmelztemperatur: 141°–143°C; Rf(C) = 0,53, Rf(D)
= 0,38; NMR (CDCl3) 0,7–2,1 (m, 15H, CH3,
t-Butyl CH3, Propyl CH2-2,
OH); 2,4–3,26
(m, 8H, Butyl CH2-1,-4, asn CH2,
Propyl CH2-3); 3,5 (m, 1H, Propyl CH-1);
4,22 (m, 1H, Butyl CH-3); 4,7 (m, 1H, Carbazat-NH); 4,95 (m, 1H,
asn CH-α);
5,24–6,4
(m, 3H, NH2, NH); 6,5–8,5 (m, 16H, aromatisch);
9,14 (d, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 8
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan
-
Schritt A: cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]-decan:
-
cis-1,2-Cyclohexandimethanol wurde
quantitativ in cis-1,2-Cyclohexandimethyliodid mit Hilfe der allgemeinen
Methode (Vogel's
Textbook of Practical Organic Chemistry, 4. Ausg., S. 393, Longman
Group Limited, London, 1978) umgewandelt. Eine Alkylierung von 1-Phenylmethoxycarbonyl-2-tert-butoxycarbonylhydrazin
(Dutta et al., J. C. S. Perkin I, 1975, 1712–1720) mit cis-1,2-Cyclohexandimethyliodid
in Gegenwart von 2 val Natriumhydrid nach der Methode von Dutta
et al. (J. C. S. Perkin I, 1975, 1712–1720) ergab cis-1,6-4-Phenylmethoxycarbonyl-3-tert-Butoxycarbonyl-3,4-diazabicyclo[4.4.0]decan
mit einer Ausbeute von 24% nach Reinigung mit Hilfe der Säulenchromatographie
(Silicagel, Hexan); Schmelztemperatur: 68°–69,5°C; NMR (CDCl3)
1,0–2,2
(m, 19H, CH2-7,8,9,10, CH-1,6); 3,15 (m, 2H,
CH2-5); 3,82 (m, 2H, CH2-2); 5,11
(m, 2H, Benzyl CH2); 7,3 (s, 5H, aromatisch).
Dieses wurde in die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 95% mit
Hilfe der Hydrogenolyse umgewandelt, die entsprechend der Beschreibung
in Beispiel 2, Schritt B ausgeführt
wurde; Schmelztemperatur: 55°–63°C; NMR (CDCl3) 1,0–2,05
(m, 19H, CH2-7,8,9,10, CH-1,6); 2,82 (m,
2H, CH2-5); 3,33 (m, 2H, CH2-2),
4,0 (breit s, 1H, NH).
-
Schritt B: cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo-[4.4.0]decan:
-
Sofern das Produkt von Schritt A
ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-(1-methyl-3-phenylpropen-2-yl)carbazat in Beispiel 6, Schritt C,
ergab der identische Prozess die Titelverbindung, Schmelzen bei
98°-103°C mit einer
Ausbeute von 42% nach Reinigung mit Hilfe der Säulenchromatographie (Silicagel,
Hexan/Ethylacetat 4 : 1); Rf(A) = 0,2, 0,3;
Rf(B) = 0,55, 0,63; NMR (CDCl3)
1,0–2,18
(m, 19H, Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, t-Butoxy CH3); 2,42 (m, 2H, Decan CH2-5);
2,78–4,5
(m, 9H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3, Decan CH2-2, OH); 4,8 (breit m, 1H, NH); 5,0 (s,
2H, Methoxy CH2); 7,22 (m, 10H, aromatisch).
-
BEISPIEL 9
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-valyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Wenn das Produkt von Beispiel 8 ersetzt
wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
in Beispiel 2, ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 52% nach Reinigung mit Hilfe der Säulenchromatographie
(Silicagel, Hexan/Ethylacetat 3 : 2); Schmelztemperatur: 95°–101°C; Rf(B) = 0,32; Rf(C)
= 0,85; NMR (CDCl3) 0,64–1,93 (m, 25H, val CH3, Decan CH2-7,8,9,10,
CH-1,6, t-Butoxy CH3); 2,38 (m, 3H, Decan
CH2-5, val CH-β); 2,73–3,82 (m, 7H, Decan CH2-2, Butyl CH2-1,4,
CH-3); 3,82– 5,35
(m, 3H, val CH-α,
Butyl CH-2, OH); 6,0–9,0
(m, 13H, aromatisch, NH).
-
BEISPIEL 10
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Entsprechend Beispiel 2, Schritt
B, wurde das Produkt von Beispiel 8 quantitativ umgewandelt zu cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-amino-4-phenyl-butyl]-3,4-diazabicyclo[4.4.0]decan. Dieses
Material wurde gekoppelt mit N-Chinaldyl-L-asparagin (Beispiel 3,
Schritt A) mit Hilfe des identischen Prozesses wie in Beispiel 3,
Schritt B, um die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 52% zu
ergeben; Schmelztemperatur: 111°–114°C; Rf(C) = 0,44; Rf(D)
= 0,46; NMR (CDCl3) 1,0– 2,2 (m, 19H, Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, t-Butoxy CH3);
2,2–3,83
(m, 11H, Decan CH2-2,5, Butyl CH2 -1,4, CH-3); 4,13 (m, 2H, Butyl CH-2, OH);
4,95 (m, 1H, asn CH); 5,73, 6,24 (s, s, 2H, NH2);
6,7–7,33
(m, 6H, aromatisch, NH); 7,4–8,42 (m,
6H, aromatisch); 9,2 (breit m, 1H, NH).
-
BEISPIEL 11
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl)-methoxycarbonyl-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Schritt A: N-(2-Pyridyl)methoxycarbonyl-L-valin:
-
Es wurde eine äquimolare Menge von (2-Pyridyl)carbinol
(3 g) und Methyl-L-2-isocyanato-3-methylbutanoat (4,32 g) (Frankhauser
P. et al., Helv. Chim. Acta, 1970, 2298–2313) für 12 Stunden bei 80° bis 90°C unter Stickstoff
gerührt,
um 7,32 g (100%) N-(2-Pyridyl)methoxycarbonyl-L-valin-Methylester
als einen farblosen Sirup zu ergeben; NMR (CDCl3)
0,94 (m, 3H, val CH3); 2,17 (m, 1H, val
CH-β); 3,71
(s, 3H, OCH3); 4,27 (m, 1H, val CH-α); 5,18 (s,
2H, CH2); 5,43 (m, 1H, NH); 6,85–7,82 (m,
3H, aromatisch); 8,45 (m, 1H, aromatisch). Dieses wurde bis 25 ml
mit Methanol verdünnt
und 6,04 ml 5 M wässriges
Kaliumhydroxid zugesetzt. Die resultierende Mischung wurde für 1 Stunde
am Rückfluss
gerührt,
anschließend
bis Raumtemperatur gekühlt
und bis zur Trockene im Vakuum eingedampft. Der Rückstand
wurde bis 25 ml mit Wasser verdünnt
und mit Ether gewaschen. Die wässrige
Phase wurde in einem Eisbad gekühlt
und auf pH 5 angesäuert
und über Nacht
bei 4°C
stehen gelassen. Der resultierende Niederschlag wurde abfiltriert,
mit kleinen Portionen kaltem Wasser (3 × 15 ml) gewaschen und in einem
Vakuum über
Phosphorpentoxid getrocknet, um 4,32 g (Ausbeute 71%) der Titelverbindung
zu ergeben; Schmelzen: 116°–118°C; NMR (DMSO-d6) 0,93 (d, 6H, val CH3);
2,1 (m, 1H, val CH-β);
3,4 (breit s, 1H, OH); 3,93 (m, 1H, val CH-α); 5,13 (s, 2H, CH2);
7,17–8,0
(m, 4H, aromatisch, NH); 8,5 (m, 1H, aromatisch).
-
Schritt B: cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl)-methoxycarbonyl-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 10, so ergab der identische
ausgekühlte
Prozess die Titelverbindung, Schmelzen bei: 82°–87°C, Ausbeute 38%, nach Reinigung
unter den in Beispiel 9 vorgegebenen Bedingungen; Rf(B)
= 0,08; Rf(C) = 0,64; Rf(D)
= 0,66; NMR (CDCl3) 0,82 (m, 6H, val CH3); 1,05–2,73
(m, 22H, Decane CH2-5, 7,8,9,10, CH-1,6,
t-Butoxy CH3, val CH-β);
2,73–4,6 (m,
9H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3, Decan CH2-2, val CH-α); 5,05–5,5 (m, 3H, CH2,
OH); 5,5–6,78
(m, 2H, NH); 7,0–7,9
(m, 8H, aromatisch); 8,57 (m, 1H, aromatisch).
-
BEISPIEL 12
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-glutaminyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Schritt A: N-Chinaldyl-L-glutamin:
-
Wenn L-Glutamin für L-Valin in Schritt A von
Beispiel 2 ersetzt wurde, so ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung, Schmelzen bei 188°–190°C, Ausbeute 72%; NMR (CDCl3/DMSO-d6 1 : 1) 2,34
(m, 4H, gln CH2); 4,7 (m, 1H, gln CH-α); 6,3, 7,15
(breit ss, 2H, NH2); 7,4– 8,51 (m, 7H, aromatisch OH); 8,82
(d, 1H, NH).
-
Schritt B: cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-chinaldyl-L-glutaminyl]amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 10, so ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung, Schmelzen bei 106°–115°C, Ausbeute 18%; Rf (C)
= 0,27; Rf(D) = 0,30; NMR (CDCl3)
0,8–2,7
(m, 26H, Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, gln
CH2, t-Butoxy
CH3, Butyl CH-3); 2,7–3,8 (m, 6H, Decane CH2-2,5, Butyl CH2-4);
4,36 (m, 1H, Butyl CH-2); 4,6 (m, 1H, gln CH); 5,1 (breit s, 1H, OH);
5,4 (m, 1H, NH); 6,07, 6,6 (d,d, 2H, NH2);
6,8–8,5
(m, 11H, aromatisch); 8,8 (m, 1H, gln NH).
-
BEISPIEL 13
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-threonyl)-amino-4-phenylbutyl[-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Schritt A: N-Chinaldyl-L-threonin:
-
Wenn L-Threonin ersetzt wurde für L-Valin
in Schritt A von Beispiel 2, so ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung, Schmelzen 184°–185°C, Ausbeute 74%; NMR (CDCl3/DMSO-d6 1 : 1)
1,29 (m, 3H, CH3); 4,5 (m, 1H, thr CHβ); 4,68 (dd,
1H, thr CH-α);
7,4–9,27
(m, 9H, aromatisch, Säure
OH, 2-OH, NH).
-
Schritt B: cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-threonyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicycle[4.4.0]decan:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 10, so ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung, Schmelzen 102°–112°C, Ausbeute 36%, Rf(C)
= 0,72; Rf(D) = 0,61, 0,7; NMR (CDCl3) 1,0–2,75
(m, 25H, t-Butoxy CH3, Decan CH2-7,8,9,10,
CH-1,6, Butyl CH2-4, OH); 2,75–4,0 (m,
8H, Decane CH2-2,5, Butyl CH2-4,
OH); 4,0–4,7
(m, 3H, thr CH-α,
Butyl CH-3); 6,5–7,4
(m, 6H, aromatisch, NH); 7,4–8,5
(m, 6H, aromatisch); 8,8 (m, 1H, thr NH).
-
BEISPIEL 14
-
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo[2.2.1]hept-5-en
-
Schritt A: 2-tert-Butoxycarbonyl-3-phenylmethoxycarbonyl-2,3-diaza-bicyclo-[2.2.1]hept-5-en:
-
Zu einer gerührten Mischung von 1 g (4,34
mM) 1-Phenylmethoxycarobnyl-2-tert-butoxycarbonylhydrazin (Dutta et al.,
J. C. S. Perkin I, 1975, 1712–1720)
in 30 ml wasserfreiem Dichlormethan wurden 1,55 g (8,7 mM) N-Bromsuccinimid
bei 0°C
zugesetzt und das Rühren
für 1 Stunde
mit äußerem Kühlen in
einem Eisbad fortgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 10% wässriger
Natriumthiosulfatlösung
und gesättigter
wässriger
Natriumchloridlösung
gewaschen, über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum bis zur Trockene
eingedampft. Der Rückstand
wurde erneut in 15 ml wasserfreiem Ether aufgelöst, 0,57 g (8,7 mM) frisch
destilliertes Cyclopentadien zugesetzt und die Mischung für 1 Stunde
bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Eindampfen bis zur Trockene
unter vermindertem Druck ergab 0,77 g (Ausbeute 54%) der Titelverbindung
als einen farblosen Sirup; NMR (CDCl3) 1,44
(s, 9H, t-Butoxy CH3); 1,7 (m, 2H, CH2-7); 5,06 (m, 2H, CH-1,4); 5,15 (s, 2H,
Methoxy CH2); 6,4 (m, 2H, CH-5,6); 7,24
(m, 5H, aromatisch).
-
Schritt B: 2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo[2.2.1]-hept-5-en:
-
Es wurde eine Mischung von 0,2 g
(0,6 mM) des Produktes von Schritt A und 0,8 ml 1 N Lösung von Kaliumhydroxid
in 5 ml Methanol unter Stickstoff für 4 Stunden refluxiert. Die
resultierende Mischung wurde teilweise eingedampft, mit 10 ml Wasser
verdünnt
und mit Diethylether (3 × 10
ml) extrahiert. Die vereinte organische Phase wurde mit gesättigter
wässriger
Natriumchloridlösung
gewaschen, über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und bis zur Trockene eingedampft.
Der Rückstand
wurde mit Hilfe der Säulenchromatographie
greinigt (Silciagel; Hexan/Ethylacetat 3 : 2), um 0,05 g (Ausbeute
42%) 2- tert-Butoxycarbonyl-2,3-diazabicyclo[2.2.1]-hept-5-en
zu ergeben. Dieses Material (0,049 g, 0,25 mM) wurde in 2 ml Isopropanol
mit einem Gehalt vo 0,0744 g (0,25 mM) von 2(R,S)-3(S)-1,2-Epoxy-3phenylmethoxycarbonylamino-4-phenylbutan (Schritt
A von Beispiel 6) aufgelöst
und die resultierende Mischung für
15 Stunden bei 80° ± 5°C unter Stickstoff gerührt. Die
Mischung wurde bis Raumtemperatur gekühlt, im Vakuum bis zur Trockene
eingedampft und mit Hilfe der Säulenchromatographie
gereinigt (Silicagel, Hexan/Ethylacetat 4 : 1), um 0,054 g (Ausbeute
44%) des Titelproduktes zu ergeben; Schmelztemperatur: 111°–113°C; Rf(A) = 0,07; Rf(B)
= 0,31; NMR (CDCl3) 1,43 (s, 9H, t-Butoxy
CH3); 1,8 (m, 2H, CH2-7);
2,4–3,15
(m, 4H, Butyl CH2-1,4); 3,2–4,2 (m,
3H, Butyl, CH-2,3, OH); 4,5–5,33
(m, 5H, CH-1,4, Methoxy CH2, NH); 6,2–6,6 (m,
2H, CH-5,6); 7,2 (m, 10H, aromatisch).
-
BEISPIEL 15
-
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo[2.2.1]heptan
-
Wenn das Produkt von Schritt A von
Beispiel 14 ersetzt wurde für
cis-1,6-4-Phenylmethoxycarbonyl-3-tert-Butoxycarbonyl-3,4-diazabicyclo[4.4.0]decan
in Beispiel 8, so ergab ein ähnlich
ausgeführter
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 31%; Schmelztemperatur:
119°– 126°C; Rf(A) = 0,12; Rf(B)
= 0,34, 0,39; NMR (CDCl3) 1,2–2,1 (m,
15H, t-Butoxy CH3, CH2-5,
6, 7); 2,5 –3,2
(m, 4H, Butyl CH2-1,4); 3,2–4,4 (m,
4H, Butyl CH-2,3, CH-1,6); 4,7–5,5
(m, 4H, Methoxy CH2, NH, OH); 7,26 (m, 10H,
aromatisch).
-
BEISPIEL 16
-
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl)-methoxycarbonyl-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-bicyclo[2.2.1]-heptan
-
Nach Beispiel 2, Schritt B wurde
das Produkt von Beispiel 15 quantitativ umgewandelt zu 2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutyl]-2,3-diaza-
bicyclo[2.2.1]heptan. Dieses Material wurde gekoppelt an N-(2-Pyridyl)methoxycarbonyl-L-valin
(Beispiel 11, Schritt A) mit Hilfe eines zu Beispiel 3, Schritt
B, identischen Prozesses, um die Titelverbindung mit einer Ausbeute
von 51% zu ergeben; Schmelztemperatur: 73°–77°C; Rf(C)
= 0,45; Rf(D) = 0,49; NMR (CDCl3)
0,7–1,0
(m, 6H, val CH3); 1,25–2,15 (m, 16H, t-Butoxy CH3, val CH-β,
CH2-5, 6, 7); 2,55–3,1 (m, 4H, Butyl CH2-1,4); 3,3– 3,7 (Butyl CH-2,3); 3,91
(m, 1H, val CH-α);
4,1–4,4
(m, 2H, CH-1,4); 4,9–5,4
[m, 4H, Methoxy CH2 (s, 5,26), OH, NH];
6,6 (m, 1H, NH); 7,26, 7,7, 8,57 (m, 7H, 1H, 1H, aromatisch).
-
BEISPIEL 17
-
2-[N-(1 S)(2-Methyl-1-methoxycarbonylpropyl)carbamoyl]-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl)methoxy-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-2,3-diazabicyclo[2.2.1]-heptan
-
Nach Beispiel 4, Schritt B, wurde
das Produkt von Beispiel 16 quantitativ umgewandelt in das Hydrochloridsalz
von 3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-[N-(2-pyridyl)-methoxy-L-valyl]amino-4-phenylbutyl]-2,3-diazabicyclo[2.2.1]heptan.
Dieses Material (0,06 g; 0,113 mM) und eine äquimolare Menge von Methyl-L-2-isocyanato-3-methylbutanoat
wurden in 0,4 ml Ethanol-freiem Chloroform aufgelöst und dazu
0,031 ml Diisopropylethylamin zugegeben. Die resultierende Mischung
ließ man
für 12
Stunden bei Raumtemperatur unter Stickstoff stehen, verdünnte sodann
bis 15 ml mit Ethylacetat und wusch mit Wasser und trocknete über Magnesiumsulfat.
Das Eindampfen im Vakuum und die Reinigung mit Hilfe der Säulenchromatographie
(Silicagel, Ethylacetat) ergaben 0,051 g (66%) der Titelverbindung;
Schmelztemperatur: 79°–84°C, Rf(C) = 0,2; Rf (D)
= 0,46; NMR (CDCl3); 0,5–1,0 (m, 12H, val CH3); 1,0 –2,5
(m, 10H, val CH-β,
Butyl CH2-1, CH2-5,
6, 7); 2,5–3,33
(m, 3H, Butyl CH2-4, CH-3); 3,33–4,05 (m,
6H, val CH-α,
CH-4, OCH3); 4,05–5,5 (m, 6H, Butyl CH-3, OH,
CH-1, NH, Methoxy CH2); 5,82– 6,7 (m,
2H, val NH); 6,9–7,9,
8,6 (m, m, 8H, 1H, aromatisch).
-
BEISPIEL 18
-
2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-1,2,3,4-tetrahydrophthalazin
-
Schritt A: 2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]-1,2,3,4-tetrahydrophthalazin:
-
Zu einer Mischung von 0,19 g (1,11
mM) des Hydrochloridsalzes von 1,2,3,4-Tetrahydrophthalazin (Groszkowski und
Wesolowska, Arch. Pharm. (Weinheim) 314, 880 (1981)) und 0,23 g
(1,05 mM) Di-tert-butyldicarbonat in 5 ml Chloroform wurden 0,147
ml (1,05 mM) Triethylamin unter Stickstoff gegeben. Nach dem Rühren für 5 Stunden
bei Raumtemperatur wurde die Mischung bis 30 ml mit Ethylacetat
verdünnt,
mit Wasser und gesättigter
wässriger
Natriumchloridlösung
gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Das Abdampfen des Lösemittels im Vakuum und die
Reinigung des Rückstandes
mit Hilfe der Chromatographie auf Silicagel (Hexan/Ethylacetat 4
: 1) ergaben 0,0921 g (37%) 2-tert-Butoxycarbonyl-1,2,3,4-tetrahydrophthalazin;
NMR (CDCl3) 1,5 (s, 9H, t-Butoxy CH3); 4,0 (s, 2H, CH2-4);
4,47 (breit s, 1H, NH); 4,64 (s, 2H, CH2-1);
6,95 (m, 4H, aromatisch). Wenn dieses Material ersetzt wurde für 2-tert-Butoxycarbonyl-2,3-diazabicyclo[2.2.1]hept-5-en
in Schritt B von Beispiel 14 ergab ein ähnlich ausgeführter Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 24% nach Reinigung mit
Hilfe der Säulenchromatographie
(Aluminiumoxid, Chloroform/Ethylacetat 95 : 5); Schmelztemperatur:
68°–71°C; NMR (CDCl3) 1,5 (s, 9H, t-Butoxy CH3);
2,18–3,15
(m, 4H, Butyl CH2-1,4); 3,3–5,5 (m,
10H, Butyl CH-2,3, CH2-1,4, Methoxy CH2, OH, NH); 7,22 (m, 14H, aromatisch).
-
Schritt B: 2-tert-Butoxycarbonyl-3-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]-1,2,3,4-tetrahydrophthalazin:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
in Beispiel 10 ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
in einer Ausbeute von 70%; Schmelztemperatur: 108°–112°C; Rf(C) = 0,44; Rf(D)
= 0,39; NMR (CDCl3) 1,47 (m, 9H, t-Butyl
CH3); 2,3–3,11 (m, 6H, asn CH2, Butyl CH2-1,4);
3,2–5,14
(m, 8H, Butyl CH-2,3, asn CH-α,
CH2-1,4, OH); 5,14–6,1 (m, 2H, NH); 6,6–7,4 (m, 10H,
aromatisch, NH); 7,62, 7,77, 7,87 (3 × m, 1H, 1H, 1H, aromatisch);
8,1–8,4
(m, 3H, aromatisch); 9,11 (m, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 19
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: 2(R)-3(S)-1,2-Epoxy-3-phenylmethoxycarbonylamino-4-phenylbutan:
-
Zu einer gerührten Lösung von 6,02 g (40 mM) Natriumiodid
in 50 ml wasserfreiem Acetonitril wurden 2,6 ml (22 mM) Chlortrimethylsilan
unter Stickstoff zugesetzt. Nach 10 min Rühren wurden 6 g (20,1 mM) des überwiegend
Erythro-Isomers von 2(R,S)-3(S)-1,2-Epoxy-3-phenylmethoxycarbonylamino-4-phenylbutan (Beispiel
6, Schritt A) zugesetzt und das Rühren für eine weitere Stunde fortgesetzt.
Zu dieser Mischung wurden 4 g (61,2 mM) Zinkstaub gegeben, gefolgt
von 6 ml Essigsäure.
Die resultierende Mischung wurde heftig für etwa 5 Stunden bei Raumtemperatur
gerührt
und das feste Material durch Filtration entfernt. Das Filtrat wurde
bis zur Trockene im Vakuum eingedampft und der Rückstand mit Ether bis 75 ml
verdünnt,
mit Wasser und 5 N wässrigerm
Natriumthiosulfat gewaschen und über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Eindampfen im Vakuum
und die Reinigung mit Hilfe der Chromatographie auf Silicagel (Hexan/Ethylacetat
4 : 1) ergaben 5,1 g (90%) von (S)-2-(Phenylmethoxycarbonyl)amino-1-phenylbut-3-en;
Rf (A) = 0,5; Schmelztemperatur = 87°–88°C (Hexan);
NMR (CDCl3) 2,87 (d, 2H, Buten CH2-1); 4,77 (m, 2H, Butene CH2-4);
5,0 (m, 1H, NCH); 5,06 (s, 2H, Methoxy CH2);
5,18 (breit d, 1H, NH); 5,55–6
(m, 1H, Buten CH-3); 7,19, 7,27 (m, s, 5H, 5H, aromatisch). Dieses
Material (2,23 g; 7,93 mM) wurde in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan
aufgelöst
und 4,5 g (22,1 mM) 85%ige 3-Chlorperoxybenzoesäure bei +4°C zugesetzt. Die resultierende
Mischung wurde für
2 Tage bei der vorgenannten Temperatur gerührt, anschließend mit
Ether bis 50 ml verdünnt,
nacheinander mit 10%iger wässriger
Natriumsulfitlösung
bei 0°C,
gesättigter
wässriger
Natriumhydrogencarbonat- und gesättigter
wässriger
Natriumchloridlösung
gewaschen und über
Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Abdampfen des Lösemittels
wurde das Rohprodukt durch Kristallisation aus einer Mischung von
Hexan/Dichlormethan auskristallisiert, um 2,1 g (Ausbeute 89%) des
Titelepoxids mit einer überwiegenden
Threo-Stereochemie zu ergeben; Schmelztemperatur: 83°–84°C; NMR (CDCl3) 2,47 (m, 5H, Butan CH2-1,4, CH-2); 3,74
(m, 0,15H, NCH); 4,2 (m, 0,85H, NCH); 4,53 (breit d, 1H, NH); 5,03
(m, 2H, Methoxy CH2); 7,3 (m, 10H, aromatisch).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Es wurde eine Mischung von 2,03 g
(6,83 mM) des Produktes von Schritt A und 1,2 g (7,6 mM) tert-Butyl-3-isopropylcarbazat
in 8 ml Isopropanol für
12 Stunden bei 70° ± 5°c unter Stickstoff
gerührt.
Nach dem Abtreiben des Lösemittels
im Vakuum wurde der feste Rückstand
aus Hexan umkristallisiert, um 2,6 g (Ausbeute 80%) der Titelverbindung
zu ergeben, Schmelzen bei 114°–115°C; Rf(A) = 0,2; Rf(B)
= 0,61; NMR (CDCl3) 0,95 (m, 6H, Isopropyl
CH3); 1,42 (s, 9H, t-Butyl CH3);
2,44 (m, 2H, Butyl CH2-1); 2,94 (m, 3H,
Butyl CH2-4, CH-3); 3,33–3,93 (m, 2H, Isopropyl CH,
Butyl CH-2); 4,4 (breit m, 1H, OH); 5,05 (s, 2H, Methoxy CH2); 5,33 (breit m, 2H, NH); 7,18, 7,27 (m,
s, 5H, 5H, aromatisch).
-
BEISPIEL 20
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Wenn das Produkt von Beispiel 19
ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
in Beispiel 3, so ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 66%; Schmelztemperatur: 203°–204°C (Chloroform);
Rf (C) = 0,36; Rf (D)
= 0,37; NMR (5% CD3 OD in CDCl3);
1,0 (m, 6H, Isopropyl CH3); 1,4 (s, 9H,
t-Butyl CH3); 2,53 (d, 2H, Butyl CH2-1); 2,87 (m, 4H, asn CH2,
Butyl CH2-4); 3,13 (s, 6H, CD3 OH);
3,42 (m, 2H, Isopropyl CH, Butyl CH-3); 4,0 (m, 1H, Butyl CH-2);
4,89 (m, 1H, asn CH-α);
7,11 (m, 5H, Phenyl); 7,41 –8,47
(m, 6H, Chinaldyl).
-
BEISPIEL 21
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Wenn das Produkt von Schritt A, Beispiel
8, ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-carbazat in Beispiel 19, Schritt B, ergab
der identisch ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit 78%; Schmelztemperatur: 110°–111°C (Hexan);
Rf (A) = 0,28; Rf (B)
= 0,63; NMR (CDCl3) 1,0–2,18 (m, 19H, Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, t-Butoxy CH3);
2,4 (m, 2H, Decan CH2-5); 2,75–4,1 (m,
8H, Decan CH2-2, Butyl CH2-1,4, CH-2,3); 4,93 (breit s,
1H, OH); 5,07 (s, 2H, Methoxy CH2); 5,31
(breit m, 1H, NH); 7,22, 7,32 (m, s, 5H, 5H, aromatisch).
-
BEISPIEL 22
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Entsprechend der Methode von Beispiel
2, Schritt B, wurde das Produkt von Beispiel 21 (2 g; 0,037 Mol)
quantitativ umgewandelt in die Titelverbindung (1,5 g eines schweren
Sirups); NMR (CDCl3): 1,0–2,32 (m, 19H,
Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, t-Butoxy CH3); 2,32–4,54
(m, 13H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3, Decan CH2-2,5, NH2, OH);
7,28 (m, 5H, aromatisch).
-
Eine fraktionierte Kristallisation
des vorgenannten Produktes aus Hexan ergab 0,74 g eines Isomers A
als einen farblosen Feststoff, der bei 123°–124°C schmolz; NMR (CDCl3) 1,0–2,25
(m, 21H, Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, t-Butoxy
CH3, NH2); 2,35–3,0 (m,
5H, Butyl CH2 , CH-3); 3,05–3,4 (m,
3H, Butyl CH-2, Decan CH2-5); 3,5 (m, 2H,
Decan CH2-2); 3,82 (d, 1H, OH); 7,27 (m,
5H, aromatisch).
-
Die Hexan-Fraktion ergab 0,76 g Isomer
B nach Abtreiben des Lösemittels.
Diese wurde mit Hilfe der Säulenchromatographie
(Silicagel, 8% Methanol in Dichlormethan; Rf = 0,16) gereinigt,
um 0,72 g reines Isomer B als einen farblosen Sirup zu ergeben:
NMR (CDCl3) 1,0–2,4 (m, 21H, Decane CH2-7,8,9,10,
CH-1,6, t-Butoxy CH3, NH2);
2,4–3,1
(m, 6H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3); 3,22–3,4 (m,
2H, Decan CH2-5); 3,52 (m, 2H, Decan CH2-2); 3,76 (d, 1H, OH); 7,27 (m, 5H, aromatisch).
-
BEISPIEL 23
-
cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
-
Wenn das Produkt von Beispiel 22
(Mischung von Isomeren A und B) ersetzt wurde für cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2RS,3S)-2-hydroxy-3-amino-4-phenylbutyl]-3,4-diazabicyclo[4.4.0]decan
in Beispiel 10, so ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 72%; Schmelztemperatur: 108°–110°C; Rf(C)
= 0,44; Rf(D) = 0,46; NMR (CDCl3) 0,71–2,18 (m,
19H, Decan CH2-7,8,9,10, CH-1,6, t-Butoxy
CH3); 2,18–4,48 (m, 12H, asn CH2, Decan CH2-2,5,
Butyl CH2-1,4, CH-2,3); 4,95 (m, 2H, asn
CH, OH); 5,55, 6,13 (breit m, m, 2H, NH); 6,84–7,4 (m, 6H, aromatisch, NH);
7,4–8,39
(m, 6H, aromatisch); 9,22 (m, 1H, NH).
-
Eine Probe dieses Produktes wurde
in zwei Isomere mit Hilfe der Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigchromatographie (Whatman
C8-halbpräparative Säule) unter Verwendung von 37%
einer 0,1%igen wässrigen
Lösung
von Trifluoressigsäure
in Acetonitril mit einem Gehalt von 0,07% Trifluoressigsäure und
10% Wasser aufgetrennt, für
die Elution: Isomer A, Rf = 16,8 min; Isomer B, Rf = 18,3 min.
-
Wenn die Isomere A und B des Produktes
von Beispiel 22 anstelle einer Mischung verwendet wurden, so wurden
die entsprechenden Isomere der Titelverbindung erhalten.
-
Isomer A: Ausbeute 69%; Schmelztemperatur:
110°–116°C; NMR (CDCl3): 1,0–1,8
(m, 19H, t-Butyl CH3, Decan CH2-7,8,9,10,
CH-1,6); 2,2–2,6
(m, 2H, Butyl CH2-1); 2,7–3,3 (m,
7H, asn CH2, Butyl CH2-4,
CH-3, Decan CH2-5); 3,56 (m, 2H, Decan CH2-2); 4,07 (m, 1H, Butyl CH-2); 5,0 (m, 1H,
asn CH); 5,4–5,75
(m, 2H, NH, OH); 6,1 (m, 1H, NH); 7,14 (m, 6H, aromatisch, NH);
7,63, 7,8, 8,22 (m, m, m, 1H, 2H, 3H, aromatisch); 9,21 (m, 1H,
asn NH).
-
Isomer B: Ausbeute 78%; Schmelztemperatur:
122°–126°C; NMR (CDCl3): 1,1–1,71
(m, 19H, t-Butyl CH3, Decan CH2-7,8,9,10,
CH-1,6); 2,2–2,6
(m, 2H, Butyl CH2-1); 2,7–3,15 (m,
6H, asn CH2, Butyl CH2-4
Decan CH2-5); 3,43 (m, 3H, Butyl CH-3, Decan
CH2-2); 4,1 (m, 1H, Butyl CH-2); 4,94 (m,
1H, OH); 5,0 (m, 1H, asn CH); 5,55, 6,2 (m, m, 1H, 1H, NH2); 7,14 (m, 6H, aromatisch, NH); 7,63, 7,8,
8,22 (m, m, m, 1H, 2H, 3H, aromatisch); 9,27 (m, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 24
-
1-Trimethylacetyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin
-
Schritt A: 1-Trimethylacetyl-2-isopropylhydrazin:
-
Eine Mischung von 10 g (0,086 Mol)
von Methyltrimethylacetat und 3,2 g (0,1 Mol) wasserfreiem Hydrazin
wurde für
12 Stunden refluxiert und anschließend unter vermindertem Druck
bis zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Kristallisation
aus einer Ether/Hexan-Mischung gereinigt, um 9 g (Ausbeute 90%)
Trimethylacetylhydrazid zu ergeben, Schmelzen bei 190°–191°C. Wenn dieses
Produkt ersetzt wurde für
tert-Butylcarbazat in Schritt A von Beispiel 1, ergab der identisch
ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 67% als farblose
Kristalle; NMR (CDCl3) 1,03 (d, 6H, Isopropyl
CH3); 1,18 (s, 9H, Trimethyl CH3);
3,07 (m, 1H, Isopropyl CH); 4,62 (breit s, 1H, NH); 7,4 (breit s,
1H, NH Amid).
-
Schritt B: 1-Trimethylacetyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxy-carbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropyl-hydrazin:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
tert-Butyl-3-isopropylcarbazat in Schritt B von Beispiel 19, so
ergab der identisch ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 69%; Schmelztemperatur:
132°–134°C; Rf(A)
= 0,07; Rf(B) = 0,33; NMR (CDCl3) 0,72–1,3 (m,
15H, Isopropyl CH3, t-Butyl CH3);
2,1–3,16
(m, 5H, Butyl CH2-1,4, CH-3); 3,16–4,0 (m,
2H, Butyl CH-2, Isopropyl CH); 4,86 (s, 1H, OH); 5,08 (s, 2H, Methoxy
CH2); 5,4 (d, 1H, NH); 6,1 (s, 1H, NH);
7,2, 7,31 (m, s, 5H, 5H aromatisch).
-
BEISPIEL 25
-
1-Trimethylacetyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin
-
Wenn das Produkt von Beispiel 24
ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
in Beispiel 3, so ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 95%; Schmelztemperatur: 222°–223,5°C; Rf(C)
= 0,1; Rf(D) = 0,49; NMR (10% CD3OD in CDCl3): 0,7–1,31
(m, 15H, Trimethyl CH3, Isopropyl CH3); 2,0–3,6
(m, 9H, asn CH2, Butyl CH2-1,4,
CH-2,3, Isopropyl CH); 4,05 (s, CD3OH),
5,0 (m, H, asn CH); 6,64–8,5
(m, 11H, aromatisch).
-
BEISPIEL 26
-
1-(tert-Butylamino)carbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin
-
Zu einer heftig gerührten Mischung
von 0,33 g (0,0103 Mol) wasserfreiem Hydrazin in 50 ml wasserfreiem
Ether wurde 1 g (0,01 Mol) tert-Butylisocyanat zugegeben. Die resultierende
Mischung wurde für
2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt
und danach über
Nacht bei 4°C
gehalten. Die sich bildenden Kristalle wurden abfiltriert, mit einer
kleinen Portion Ether gewaschen und getrocknet, um 0,94 g (Ausbeute
72%) (tert-Butylamino)carbonylhydrazin zu ergeben, Schmelzen bei
192°–193°C. Wenn diese
ersetzt wurde für
tert-Butylcarbazat in Schritt A von Beispiel 1, ergab der identisch
ausgeführte
Prozess 1-(tert-Butylamino)carbonyl-2-isopropylhydrazin
mit einer Ausbeute von 58% als einen weißen Feststoff; NMR (CDCl3): 1,03 (d, 6H, Isopropyl CH3); 1,33
(s, 9H, t-Butyl CH3); 3,9 (breit s. 1H,
NH); 6,02 (breit s, 2H, NH Amid). Wenn dieses ersetzt wurde für tert-Butyl-3-isopropylcarbazat
in Schritt B von Beispiel 19, ergab der identisch ausgeführte Prozess
1-(tert-Butylamino)carbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-2-isopropylhydrazin
mit einer Ausbeute von 68% als einen weißen Feststoff; NMR (CDCl3): 1,0 (m, 6H, Isopropyl CH3);
1,3 (s, 9H, t-Butyl CH3); 2,33–4,22 (m,
8H; Butyl CH2-1,4, CH-2,3, OH, Isopropyl
CH); 5,05 (s, 2H, Methoxy CH2); 5,3 (m,
2H, NH); 5,91(m 1H, NH); 7,2, 7,35 (m, s, 5H, 5H, aromatisch). Wenn
dieses ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-[(2R,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]-carbazat
in Beispiel 3, so ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 67%; Schmelztemperatur: 119°–125°C; Rf (C) = 0,06; Rf(D)
= 0,43; NMR (CDCl3): 1,0 (m, 6H, Isopropyl
CH3); 1,32 (s, 9H, t-Butyl CH3); 2,24–3,38 (m,
7H, Butyl CH2-1,4, CH-3, asn CH2);
3,38–4,63
(m, 3H, Butyl CH-2, OH, Isopropyl CH); 5,09 (m, 1H, asn CH); 5,63–8,4 (m,
16H, aromatisch, NH); 9,0 (d, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 27
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-picolinoyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: N-Picolinoyl-L-asparagin:
-
Wenn Picolinsäure ersetzt wurde für Chinaldinsäure in Schritt
A von Beispiel 3, so ergab der identisch ausgeführe Prozess die Titelverbindung,
Schmelzen bei 171°–172°C, in einer
Ausbeute von 68%; NMR(DMSO-d6) 2,75 (m,
2H, asn CH2); 4,8 (m, 1H, asn CH); 6,7–8,8 (m,
6H, aromatisch, NH2); 9,0 (d, 1H, NH); 12,7 (breit
s, 1H, OH).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-picolinoyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-aspargin in Beispiel 20, ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 58%; Schmelztemperatur: 101°–108°C; Rf(C)
= 0,16; Rf(D) = 0,48; NMR (CDCl3): 1,0 (m,
6H, Isopropyl CH3); 1,4 (s, 9H, t-Butyl
CH3); 2,15–3,23(m 7H, Butyl CH2-1,4, CH-3, asn CH2;
3,23–4,53
(m, 3H, Butyl CH-2, Isopropyl CH, OH); 4,94 (m, 1H, asn CH); 5,1–6,41 (m,
3H, NH); 6,7–8,7
(m, 10H, aromatisch, NH); 9,05 (m, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 28
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-(2-pyridyl)methoxycarbonyl-anthranilyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Wenn das Produkt von Schritt A von
Beispiel 4 ersetzt wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 20, ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 61%; Schmelztemperatur:
155°–157°C; Rf(C)
= 0,79; Rf(D) = 0,78; NMR (CDCl3): 1,0 (m,
6H, Isopropyl CH3); 1,42 (s, 9H, t-Butyl CH3); 2,33–3,22
(m, 5H, Butyl CH2-1,4 CH-2); 3,62 (m, 1H,
Butyl CH-3); 4,25 (m, 1H, Isopropyl CH); 4,67 (breit s, 1H, OH);
5,3 (s, 2H, Methoxy CH2); 6,52–8,44 (m,
15H, aromatisch, NH); 8,55 (m, 1H, NH).
-
BEISPIEL 29
-
tert-Butyl-3-benzyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: tert-Butyl-3-benzylcarbazat:
-
Wenn Benzaldehyd ersetzt wurde für Aceton
in Schritt A von Beispeil 1, ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 69% als einen schweren
farblosen Sirup; NMR (CDCl3): 1,44 (s, 9H,
t-Butyl CH3); 3,63 (breit s, 1H, NH); 4,0
(s, 2H, CH2); 6,08 (s, 1H, NH); 7,3 (s,
5H, aromatisch).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-benzyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxy-carbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl carbazat in Schritt B von Beispiel 19, ergab
der identisch ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 72%; Schmelztemperatur:
142°–143°C; Rf(A)
= 0,16; Rf(B) = 0,59; NMR (CDCl3) 1,31 (s,
9H, t-Butyl CH3); 2,12–3,12 (m, 5H, Butyl CH2-1,4, CH-3); 3,35–4,11 (m, 3H, Benzyl CH2, Butyl CH-2); 4,41 (breit s, 1H, OH); 5,05
(s, 2H, Methoxy CH2); 5,2 (m, 2H, NH); 7,22
(m, 15H, aromatisch).
-
BEISPIEL 30
-
tert-Butyl-3-benzyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Wenn das Produkt von Beispiel 29
ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
in Beispiel 20, ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 71%; Schmelztemperatur: 150°–153°C; Rf(C)
= 0,38; Rf(D) = 0,53; NMR (CDCl3): 1,3 (s,
9H, t-Butyl CH3); 2,13–3,2 (m, 7H, Butyl CH2-1,4, CH-3, asn CH2);
3,2–4,73
(m, 4H, Benzyl CH2, Butyl CH-2, OH); 5,0
(m, 1H, asn CH); 5,14–6,7
(m, 4H, NH); 6,7–8,35
(m, 16H aromatisch); 9,25 (breit m, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 31
-
tert-Butyl-3-cyclohexyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: tert-Butyl-3-cyclohexylcarbazat:
-
Wenn Cyclohexanon ersetzt wurde für Aceton
in Schritt 1 von Beispiel 1, ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 59% als einen farblosen
Feststoff, NMR (CDCl3): 0,75–2,2 (m,
19H, t-Butyl CH3, Cyclohexyl CH2);
2,75 (m, 1H, Cyclohexyl CH); 3,75 (breit s, 1H, NH); 6,27 (breit s,
1H, NH).
-
Schritt B: tert-Butyl-3-cyclohexyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
tert-Butyl-3-isopropylcarbazat in Schritt B von Beispiel 19, ergab
der identisch ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 76%; Schmelztemperatur:
142°–143°C; Rf(A)
= 0,28; Rf(B) = 0,7; NMR (CDCl3): 0,73–2,0 (m,
19H, t-Butyl CH3, Cyclohexyl CH2);
2,53 (m, 3H, Butyl CH2-1, CH-3); 3,0 (d,
2H, Butyl CH2-4); 3,35–4,0 (m, 2H, Butyl CH-2, Cyclohexyl
CH); 4,49 (breit s, 1H, OH); 5,13 (s, 2H, Methoxy CH2);
5,35 (m, 2H, NH); 7,3, 7,4 (m, s, 5H, 5H, aromatisch).
-
BEISPIEL 32
-
tert-Butyl-3-cyclohexyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Wenn das Produkt von Beispiel 31
ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
in Beispiel 20, ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 75%; Schmelztemperatur: 140°–144°C; Rf(C)
0,42; Rf(D) = 0,56; NMR (CDCl3): 0,7–2,17 (m,
19H, t-Butyl CH3, Cyclohexyl CH2);
2,17–3,29
(m, 7H, Butyl CH2-1,4, CH-3 asn CH2); 3,3–4,87
(m, 3H, Butyl CH-2, Cyclohexyl CH, OH): 4,95 (m, 1H, asn CH); 5,14–6,4 (m,
3H, NH); 6,62–8,3
(m, 12H, aromatisch, NH); 9,15 (d, 1H, asn NH).
-
BEISPIEL 33
-
tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-(1-carbamoylmethyl)acrylyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
-
Schritt A: (1-Carbamoylmethyl)acrylsäure:
-
Zu einer Mischung von 3 g (0,027
mM) Itaconsäureanhydrid
in 30 ml Tetrahydrofuran wurden 3 ml 28%iges Ammoniumhydroxid gegeben.
Nach 1 Stunde war das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck bis
zur Trockene eingedampft. Der Rückstand
wurde in 15 ml Wasser aufgelöst,
anschließend
auf pH 2 mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und wurde über Nacht
bei 4°C
stehen gelassen. Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert, mit
einer kleinen Portion kalten Wassers gewaschen und getrocknet, um
1,4 g (Ausbeute 40%) der Titelverbindung zu ergeben; Schmelzen bei
153°–154°C; NMR (DMSO-d6): 3,11 (s, 2H, CH2); 5,67,
6,13 (s, s, 1H, 1H, CH); 6,7, 7,9 (breit s, s 1H, 1H, NH); 12,15
(breit s, 1H, OH).
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Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-(1-carbamoylmethyl)-acrylyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat:
-
Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 20, ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 61%; Schmelztemperatur: 118°–122°C; Rf(C)
= 0,27; Rf(D) = 0,49; NMR (CDCl3): 1,0 (m,
6H, Isopropyl CH3); 1,4 (s, 9H, t-Butyl
CH3); 2,49 (m, 2H, Butyl CH2-1);
3,0 (m, 3H, Butyl CH2-4, CH-3); 3,2 (s,
2H, Methyl CH2); 3,6 (m, 1H, Isopropyl CH);
4,07 (m, 1H, Butyl CH-2); 4,6 (breit s, 1H, OH); 5,2–5,8 (m,
4H, Acryl CH, NH); 6,4–7,0
(m, 2H, NH2); 7,2 (m, 5H, aromatisch).
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BEISPIEL 34
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tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-2-(RS)-3-tert-butylthio-2-carbamoylmethylpropionyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat
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Zu einer Mischung von 0,057 g (0,127
mM) des Produktes von Beispiel 33 und 0,0172 ml (0,152 mM) tert-Butylmercaptan
in 0,5 ml wasserfreiem Methanol wurde 1 Tropfen einer frisch angesetzten
20%igen Lösung
Natriummethoxid in Methanol zugesetzt. Nach dem Rühren für 12 Stunden
bei Raumtemperatur wurde die Mischung bis zur Trockene eingedampft,
anschließend
mit Ether auf 10 ml verdünnt
und mit Wasser und gesättigter
Natriumchloridlösung
gewaschen. Nach dem Trocknen über
wasserfreiem Magnesiumsulfat wurde der Ether unter vermindertem
Druck eingedampft. Der Rückstand
wurde mit Hilfe der Säulenchromatographie (Silicagel;
Ethylacetat) gereinigt, um 0,032 g (Ausbeute 47%) der Titelverbindung
zu ergeben; Schmelztemperatur: 116°–120°C; Rf(C) = 0.42; Rf(D) = 0,56;
NMR (CDCl3): 0,6–1,63 (m, 24H, t-Butyl CH3, Isopropyl CH3); 2,0–4,47 (m,
13H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3, Isopropyl CH,
Methyl CH2, Propionyl CH2,
CH, OH); 4,82–6,78
(m, 4H, NH2, NH); 7,11 (m, 5H, aromatisch)
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BEISPIEL 35
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tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-benzoyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
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Schritt A: N-Benzoyl-L-asparagin:
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Zu einer heftig gerührten Lösung von
2 g (0,013 Mol) von L-Asparagin-monohydrat und 2,02 g (0,014 Mol)
Kaliumcarbonat in 15 ml Wasser wurden tropfenweise 1,51 ml (0,013
Mol) Benzoylchlorid über
eine Dauer von 15 min. bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Rühren wurde
für 2 Stunden
fortgesetzt und die Mischung anschließend mit 10 ml Ehter extrahiert
und die wässrige
Phase mit konzentrierter Salzsäure
auf pH 2 angesäuert.
Der weiße
Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und durch Kristallisation
aus Isopropanol gereinigt, um 2,1 g (Ausbeute 68%) der Titelverbindung
bei 190°–192°C zu ergeben;
NMR (DMSO-d6): 2,62 (m, 2H, CH2);
3,32 (breit s, 1H, OH); 4,72 (m, 1H, CH); 6,64–8,0(m. 7H, aromatisch, NH2); 8,6 (d, 1H, NH).
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Schritt B: tert-Butyl-3-isopropyl-3-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-benzoyl-L-asparaginyl)-amino-4-phenylbutyl]carbazat:
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Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 20, so ergab der identisch ausgeführte Prozess
die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 65%; Schmelztemperatur: 182°–185°C; Rf(C)
= 0,22; Rf(D) = 0,51; NMR (CDCl3/DMSO-d6, 1 : 1): 0,92 (m, 6H, Isopropyl CH3); 1,38 (s, 9H, t-Butyl CH3);
2,19–3,11
(m, 7H, Butyl CH2-1, 4, CH-3, asn CH2); 3,11– 4,57
(m, 3H, Isopropyl CH, Butyl CH-2, OH); 4,83 (m, 1H, asn CH); 6,5–8,17 (m,
14H, aromatisch NH); 8,56 (m, 1H, asn NH).
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BEISPIEL 36
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1-tert-Butyloxycarbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]hexahydropyridazin
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Schritt A: 1-tert-Butyloxycarbonylhexahydropyridazin:
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Wenn 1,4-Dibrombutan ersetzt wurde
für cis-1,2-Cyclohexandimethyliodid
in Schritt A von Beispiel 8, ergab der identisch ausgeführte Prozess
1-tert-Butoxycarbonyl-2-phenylmethoxycarbonylhexahydropyridazin mit
einer Ausbeute von 65%; Schmelztemperatur: 71°–72°C; NMR (CDCl3)
1,15–1,9
(m, 13H, t-Butyl CH3; CH2-4,5);
3,0, 4,15 (breit m, m, 2H, 2H, CH2-3,6);
5,2 (m, 2H, Methoxy CH2); 7,35 (s, 5H, aromatisch).
Diese wurde in die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 93% durch
Hydrogenolyse umgewandelt, die entsprechend der Beschreibung in
Beispiel 2 ausgeführt
wurde. Das Produkt wurde als ein farbloser Sirup abgetrennt.
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Schritt B: 1-tert-Butyloxycarbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)-amino-4-phenylbutyl]hexahydropyridazin:
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Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
tert-Butyl-3-isopropylcarbazat in Schritt B von Beispiel 19, ergab
der identisch ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 71% als einen schweren
farblosen Sirup; NMR (CDCl3) 1,0–1,87 (m,
13H, t- Butyl CH3, Pyridazin CH2-4,5);
2,0– 4,0
(m, 11H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3, Pyridazin
CH2-3,6, OH); 5,05 (s, 2H, Methoxy CH2); 5,47(d, 1H, NH); 7,19 (m, 10H, aromatisch).
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BEISPIEL 37
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1-tert-Butyloxycarbonyl-2-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-L-asparaginyl)amino-4-phenylbutyl]hexahydropyridazin
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Wenn das Produkt von Beispiel 36
ersetzt wurde für
tert-Butyl-3-isopropyl-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(phenylmethoxycarbonyl)amino-4-phenylbutyl]carbazat
in Beispiel 20, ergab der identisch ausgeführte Prozess die Titelverbindung
mit einer Ausbeute von 65% Schmelztemperatur: 104°–110°C; Rf(C) = 0,3; Rf (D)
= 0,62; NMR (CDCl3) 1,0–2,04 (m, 13H, t-Butyl CH3, Pyridazin CH2-4,5);
2,15 –4,31
(m, 13H, Butyl CH2-1,4, CH-2,3, asn CH2, Pyridazin CH2-3,6,
OH); 4,95 (m, 1H, asn CH); 5,14– 6,6
(m, 3H, NH); 6,8– 8,4
(m, 11H, aromatisch); 9,21 (d, 1H, asn NH).
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BEISPIEL 38
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cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-3-cyano-L-alanyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-bicyclo[4.4.0]decan
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Schritt A: N-Chinaldyl-3-cyano-L-alanin:
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Zu einer Mischung von 0,198 g (0,69
mMol) N-Chinaldyl-L-asparagin und 0,24 ml (1,38 mMol) N,N-Diisopropylethylamin
in 1 ml Chloroform wurden 0,146 g (0,71 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid gegeben.
Das Reaktionsgemisch wurde für
24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend zwischen
10 ml 5%igem Natriumhydrogencarbonat und 10 ml Ether aufgetrennt.
Die wässrige
Phase wurde auf pH 2 angesäuert
und die Säure
durch Extraktion mit Chloroform (3 × 10 ml) aufgenommen. Die organische
Phase wurde über
wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft,
um 0,101 g Rohprodukt zu ergeben. Dieses wurde aus einer kleinen
Portion Dichlormethan umkristallisiert, um 0,06 g der Titelverbindung
zu ergeben, Schmelzen bei 144°–146°C; NMR (5%
DMSO-d6 in CDCl3):
3,22 (d, 2H, ala CH2); 4,95 (m, 1H, ala
CH); 7,2–8,57
(m, 7H, aromatisch, OH); 9,19 (d, 1H, NH).
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Schritt B: cis-1,6-3-tert-Butoxycarbonyl-4-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-(N-chinaldyl-3-cyano-L-alanyl)amino-4-phenylbutyl]-3,4-diaza-biyclo[4.4.0]decan:
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Wenn das Produkt von Schritt A ersetzt
wurde für
N-Chinaldyl-L-asparagin in Beispiel 22 (Isomer A), ergab der identisch
ausgeführte
Prozess die Titelverbindung mit einer Ausbeute von 67%, Schmelzen
bei 106°–112°C; Rf(C)
= 0,87; Rf(D) = 0,89; NMR (CDCl3) 0,7–2,84 (m,
24H, t-Butyl CH3, Decan CH2-
7,8,9,10, CH-1,6, Butyl CH2-1, CH-3, Cyanoalanyl
CH2); 2,85–4,65 (m, 8H, Butyl CH2-4, CH-2, Decyl CH2-2,5.
OH); 4,7–5,6
(breit m, 2H, Cyanoalanyl CH, NH); 6,9–8,5 (m, 11H, aromatisch);
8,9 (breit m, 1H, NH).