PT85090B

PT85090B - Processo para a preparacao de derivados de 4(3h)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropirido{2,3-d}pirimidina

Info

Publication number: PT85090B
Application number: PT85090A
Authority: PT
Inventors: Edward C Taylor; James Marino Hamby; George Peter Beardsley
Original assignee: Univ Princeton
Priority date: 1986-06-30
Filing date: 1987-06-16
Publication date: 1990-03-08
Also published as: HUT44548A; EP0255228B1; IL82896A; KR880000432A; IE871586L; DE3769721D1; GR870943B; KR950001017B1; EP0255228A1; AU594163B2; AU7426287A; IE60038B1; DK307387A; SU1581222A3; NZ220871A; DK172896B1; JPS6333379A; JPH07116189B2; CA1301156C; DK307387D0

Description

THE TRUSTEES OF PRINCETON UNIVERSITY

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE 4(3H)-OXO-5,6,7,8-TETRA-HIDR0PIRID0/~2,3-d7PIRIMIDINA

< 5 5 e de seus derivados, em que R é hidrogénio ou R C0-; R é hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; e a configu ração à volta do carbono designado por é L.

Estes compostos são úteis como agentes anti-neoplásticos.

processo de preparação consiste por exemplo, em se hidrolisar um composto de fórmula

CONH-jZH-CHjCHjCOOR³

COOR²

3 em que R e R sao o mesmo ou diferentes grupos protectores do ácido carboxilico e R⁴ é um grupo protector do amino.

Campo Técnico invento diz respeito a derivados do ácido N—/^—4—(N—/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutâmico, cujos derivados são agentes anti-neoplásticos, à sua preparação e uso, e a intermediários úteis nas suas preparações .

Antecedentes aminopterino e o ametopterino (também conhecido como 10-metil-aminopterino ou metotrexato), anti-metabolitos do ácido fólico, são agentes anti-neoplásticos. Estes compostos inibem conversões enzimáticos, que envolvem derivados metabólicos do ácido fólico. 0 ametopterino por exemplo, inibe a di-hidrofolate reductase, um enzima necessário para a regeneração do tetra-hidrofolato a partir do di-hidro-folato que é formado durante a conversão do 2-deoxi-uridilato a timidilato pelo enzima timidilato sintetase.

Outros derivados do ácido fólico e do aminopterino têm vindo a sèr sintetizados e testados como anti-metabolitos. Entre eles, existem compostos, em que um grupo metileno ou metilideno ocupa o posição na molécula normalmente ocupada por um grupo imino ou nitrilo, respectivamente. Estes derivados têm vários graus de actividade anti-metabólica. 0 10- deaza-aminopterino é altamente activo (Sirotale et al., Câncer Treat. Rep. , 1978, 62. 1047) e 5-deaza-aminopterino tem uma actividade similar

ao da do ametopterino (Taylor et al., J.Org.Chem.,1983, 48 4852). 0 8,10-di-deaza-aminopterino é descrito como sendo activo (Patente E.U. No. 4,460,591) e o 5,8,10-tri-deaza-aminopterino exibe actividade contra leucemia L1210 em ratos (Yan et al. , J. Heterocycl. Chem. , 1979, 16, 541). Por outro lado, o ácido 10-deaza-fólico não mostra actividade significativa (Struck et al., J.Med.Chem. , 1971, 14 693) e o ácido 5-deaza-fólico é unicamente fracamente citotó xico. O ácido 8,10-di-deaza-fólico é unicamente marginalmente efectivo como um inibidor da di-hidrofolate reductases De Graw et al., Chemistry and Biology of Pteridines, Elsevier, 1979, 229) e o ácido 5,8,10-tri-deazafólico também mostra unicamente actividade marginal contra leucemia L1210 em ratos (Oatis et al., J.Med.Chem., 1977, 20, 1393). 0 5,,10-di-deaza-a-minopterino e o 5,10-di-deaza-5,6,7,8-tetra-hidro-aminopterino, e os correspondentes derivados do ácido 5,10-di-deaza-fólico são descritos por Taylor et al., J .Med.Chem. 28: 7, 914 (1985).

Descrição do invento

O invento diz respeito a (i) 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-aZpirimidinas de fórmula

R

I

CH-CH₀-N

I ²ch₂

*

-CONH-CH-CH_nCH₀COOH | Z Z

COOH

I

χ 5 5 em que R é hidrogénio, metilo, etilo ou R C0- no qual R é hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; e a confirmação à volta do átomo de carbono designado por * é L; (ii) suas formas tautoméricas; e (iii) seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

invento também diz respeito a métodos de preparação de tais compostos, a intermediários úteis nessas preparações, e a métodos e composições para a utilização desses compostos no combate do crescimento neoplástico.

Modos de realização do invento

Os compostos do invento são derivados do anel heterociclico 5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7 pirimidina, que é numerado da seguinte forma:

Os compostos de fórmula I existem em equilíbrio tautomérico com os correspondentes compostos 4-hidroxi:

Por conveniência, a forma 4(3H)-oxo é retratada e a correspondente nomenclatura é usada através desta especificação, é entendido que em cada desses casos inclui-se a forma tautomérica 3,4-deidro-4-hidroxi.

A configuração absoluta à volta do átomo de carbono designada por * na cadeia do ácido glutâmico é L, sendo a mesma configuração absoluta daquela à volta do correspondente atomo de carbono alfa e alanino. 0 átomo de carbono na posição 6 do sistema do anel 5,6,7,8-tetra-

-hidro-pirido-/~2,3-d7pirimidina também tem um centro quiral levando aos diastereoisómeros -d,L e 1,L. Ambas as formas que podem ser separadas mecanicamente como por cromatografia, estão no âmbito do presente invento.

invento inclui os sais farmaceuticamente aceitáveis. Sais com tanto ácido (envolvendo um átomo de azoto na posição 8), ou base (envolvendo os grupos ácido carboxílico no residuo ácido glutâmico) podem ser formados. Aqueles formados a partir da base incluem sais de metal alcalino, metal alcalino-terroso, metal não tóxico, amónio, ou sais de amónio substituídos, como por exemplo de sódio, potássio, litio, cálcio, magnésio, alumínio, zinco, amónio, trimetil-amónio, tri-etil-amónio, tri-etanol-amónio, Diridinio, piridinio substituído, e semelhantes. Aqueles formados a partir do ácido incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, de adição dum ácido não tóxico, tais como os formados a partir de (i) ácidos inorgânicos, como por exemplo ácido clorídrico, ácido brómico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, e semelhantes (ii) ácidos carboxílicos orgânicos, como por exemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succinico, ácido maleico, ácido hidroxi-maleico, ácido metil-maleico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido salicilico, ácido 4-amino-salicilico, ácido 4-fenoxi-benzoico, ácido 2-acetoxi-benzoico, ácido embórico, ácido nicotinico, e iii) ácidos sulfónicos orgânicos, como por exemplo ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido 2-hidroxi-etanossulfónico ácido etano-1,2,di-sulfónico ácido benzeno sulfónico, ácido p-toluenosulfónico ou ácido naftaleno-2-sulfónico.

Os compostos deste invento têm um efeito em uma enzimas que utilizam ácido fálico, e em deri vados metabólicos particulares do ácido fálico, como um substracto.

Os compostos podem ser preparados num primeiro processo por hidrólise ou por hidrogenolise do derivado do ácido 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/^-2,3-d7pirimidini1-L-alutâmico de fórmula

II , 2 3 em que R é como anteriormente definido; R e R são como o mesmo ou diferente grupos protectores do ácido ,

carboxilico; R e um grupo protector amino; e a configuração à volta do átomo de carbono designada por * é L.

Grupos protectores incluídos em R ,

4

R e R e reacções para a sua remoção sao descritos, por exemplo, em Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, London and New York (1973); Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley New York (1981); The Peptides, Vol. I, Schroder and Lubke Academic Press, London and New York (1965), em Metoden der Organischen Chemie, Houben-Weyl, 4 th Edition Vol. 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart (1974).

Grupos protectores do ácido carboxilico podem ser, por exemplo, esteres conceptualmente derivados a partir de alcanois inferiores de desde 1 a 6 átomos de carbono, incluindo aqueles ramificados na posição 1 e aqueles que são substituídos com um ou com mais grupos aromáticos como fenilo, ou com halo ou alcoxi, por exemplo, metilo, etilo, t-butilo, benzilo, 4-nitro-benzilo, di-fenil-L-metilo, metoxi-metilo e esteres semelhantes. Esteres sililo tais como trimetilsililo também pode ser empregados.

Grupos protectores amino incluem acilo, notávelmente alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono, alcoxi-carbonilo, cada um pode ser substituído com halo, alcoxi, ou fenilo; por exemplo, acetilo, pivaloilo, 2,2,2-tri-cloro-acetilo, benzoilo, t-butoxi-carbonilo, 4-nitrobenziloxi-carbonilo, e semelhantes.

A hidrólise é conduzida a temperaturas normais utilizando uma base aquosa diluída, como por exemplo, hidróxido dum metal alcalino aquoso, 0,1-0.,3 N, opcionalmente na presença dum solvente orgânico miscivel em água como metanol, etanol, tetra-hidrcfurano, dimetil10-

formamida, e semelhantes ou um ácido, como por exemplo, ácido trifluoro-acético. O uso dum ácido ou duma base forte leva à hidrólise se o grupo -N -COR estiver presente. Alguma racemização da porção ácido glutâmico da molécula pode ser observado.

O produto de hidrólise inicialmente é formado como sal olutamato di-catiónico e pode ser rapidamente precipitado como ácido livre por ajuste de pH através acidificação com por exemplo, ácido acético ou ácido clorídrico, 0,5 N. Os produtos resultantes geralmente são sólidos cristalinos ou micro-cristalinos de alto ponto de fusão.

Os compostos de fórmula I alternativamente podem ser preparados, como pode o intermediário do ácido glutâmico de fórmula II, por hidrogenação do composto de pirido/”2,3-d7pirimidina, de fórmula

III

ι 21 em que R é como anteriormente definido, cada um de R , 31

R é hidrogénio ou um grupo protector do ácido carboxili2 3 4 z co como anteriormente definido para o R e R , R e hidrogénio ou um grupo protector amino como anteriormente defi4 nido para o R .

A hidrogenação é conduzida num meio ácido na presença dum catalizador de metal nobre, como platina., rutério, ou ródio, incluindo os seus óxidos e suas formas suportadas. 0 catalisador preferido é um óxido de platina.

As condições de tempo, temperatura e pressão são seleccionados de modo que a redução do anel de piridina seja alcançada, sem o envolvimento do anel de pirimidina. Com óxido de platina, por exemplo· o produto é obtido em cerca de 15 minutos, utilizando temperaturas ambiente e uma pressão de hidrogénio de 50 a 60 psi.

Quando R²\. e R^ são hidrogénio, o produto desta redução será um composto de fórmula I. Se todos R²\ r31 e R^ são outros do que hidrogénio o produto será um composto de fórmula II.

Compostos de fórmula III são conhecidos ou podem ser preparados por procedimentos convencionais. Por exemplo, o 2-amino-4(3H)-oxo-6-formil-pirido /”2,3-d7-pirimidina pode ser tratado com um reagente apropriado para introduzir o grupo protector R , como o anidrido acético, e o produto resultante é deixado reagir com um derivado do ácido N-(4-aminobenzoil)-L-glutamico protegido, para se obter o composto de fórmula III aqui descrito, em que R^=H /'ver por exemplo, Taylor

et al., J.Org.Chem., 48, 4852 (1983)7.

A utilização do correspondente ao ácido N-(4-metil-amino-benzoil)-L-glutâmico ou ao ácido N-(4-etil-amino-benzoil)-L-glutâmico origina o correspondente composto de fórmula III, em que R' é metilo ou etilo, respectivamente.

R¹ é R⁵CO pode fórmula III em

Os compostos de fórmula III em que ser obtido por acilação dum composto de que r! é hidrogénio.

Quando R é hidrogénio a acilação pode ser realizada usando um excesso de ácido fórmico/ ver pro exemplo Haynes et al., J.Med.Chem. 20, 588-591 (1977)7ou um dreivado acilante reactivo do ácido fórmico como o anidrido misto do ácido fórmico, como por exemplo o formado a partir do ácido fórmico e do anidrido acético.

Quando R é alquilo, um derivado reactivo dum ácido carboxilico, como por exemplo um haleto ácido como cloreto de acetilo, pode ser empregado.

Os compostos de fórmula II e III, 1x5 em que R é R CO- são intermediários valiosos, particularmente para a preparação do composto final de fórmula I, em que R é hidrogénio, nomeadamente o ácido N-/4—(Ν'—/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-d7 pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutâmico. Este composto tem actividade anti-neoplástica e pode ser preparado através de hidrogenação directa dum composto

de fórmula IV, opcionalmente seguido por remoção de qualquer 21 31 41 dos grupos protectores R , R e R .

Contudo, a introdução dum grupo Ν'-acilo, como o grupo formilo, antes da redução, alcança-se protecção adicional do grupo amino que, sendo da natureza duma amina benzilica, é susceptível de hidrogenolise. Assim, pela formação, em primeiro lugar, do derivado N'-formilo de formula III, hidrogenação do mesmo, obtem-se o intermediário N¹-formil-tetra-hidreto de fórmula II, e depois sujeição do mesmo à hidrólise, preferencialmente hidrólise ácida ou básica, realizada sequencialmente, obtem-se o ácido N-/~4-(N'-/ 2-amino-4(3H)-oxo-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutâmico.

Dois centros quirais estão presentes na molécula final: o átomo de carbono na posição 6 do anel / 2,3-d7pirimidina e o carbono alfa no grupo do ácido glutâmico. Das quatro formas teóricas do composto, o uso dum reagente ácido N-(4-amino-benzoil-L-glutâmico protegido na preparação dum composto de fórmula III reduz as possibilidades a dois. Contudo, ambas delas são geradas durante a subsequente hidrogenação a um composto de fórmula II e consequentemente, após remoção dos grupos protectores, o composto desejado é produzido como uma mistura de diastereoisómeros (S,S)-(R,S). Estes podem ser representados pelo composto em que R^\ R^ _{e s}§_o ^-_odos hidrogénio, da seguinte forma:

(S,S) :

IV (R,S) :

H₂N

CONH^Ç—«COOH

V

ÇH₂CH₂COOH

Estes diastereoisómeros podem ser separados mecanicamente, como por cromatografia, por isso cada um está numa forma substancialmente livre do outro; isto é, tendo uma pureza óptica de 95%. Em alternativa uma mistura de compostos de diastereoisómeros de fórmula I é tratada com um ácido quiral operável para formar um sal com ele. Os sais diastereoisomericas resultantes são depois separados através duma ou mais cristalizações fraccionadas e depois a base livre da porção catiónica de

pelo mênps um dos sais separados é libertado através do tratamento com uma base e remoção dos grupos protectores. A libertação do catião do sal pode ser realizada como um passo discreto antes ou depois da remoção dos grupos protectores, ou concomitantemente com a remoção, quando esses grupos são susceptíveis à remoção sob condições básicas, isto é,, hidrólise básica.

Ácidos quirais adequados incluem os enantiomeros individuais do ácido 10-canforsulfónico, ácido canfórico, ácido alfa bromo-canfórico, ácido mentoxi-acético, ácido tartárico, ácido di-acetil-tartárico, ácido málico, ácido pirrolidona-5-carboxilico, e semelhantes .

Os compostos de fórmula I podem ser usados, sozinhos ou em combinação para tratar neoplasmas, quando no passado têm vindo a ser tratados com metotrexato, incluindo cariocarcinoma, leucemia, adenocarcinoma do peito em mulheres, cancros epidérmicos da cabeço e pescoço sutura escarmosa ou cancro do pulmão de pequenas células e vários linfossarcomas.

Em modelos representativos por exemplo, o ácido N-/ 4-(N'-/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7 pirimidin-6-il-metil7-amino)benzoil7-L-glutâmico eibe um CI50 de 0,0052-0,0079 mcg/ml <2,2x10 molar) em 72 horas de ensaio contra linhas de cálulas CCRF-CEM (uma cálula-T humana derivada de leucemia).

Os seus diastereoisómeros exibem um Cl^g de 0,0026 e 0,0027 mcg/ml, respectivamente. O ácido N-/^-4-(N'-/~2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/2,3-d7 pirimidin-6-il-metil7-N'-formil-amino)benzoil7-L-glutâmi co exibe um CI^q de 0,011, no mesmo teste. Por outro lado o ácido 5-deaza-fólico é relativamente inactivo neste tes te. Os compostos podem também ser usados no tratamento de micoses fungoides e psoriases.

Os compostos podem ser administrados ranto oralmente ou preferencialmerfe parenteralmente, sozinhos ou em combinação com outros agentes anti-neoplásticos, esteroides, etc., a mamíferos que sofrem de neoplasma e necessitam de tratamento. Vias parenterais de administração incluem intramuscular, intratecal,intravenosa ou intra-arterial. No geral, os compostos são administrados do mesmo modo do que o metotrextato, mas devido ao diferente modo de acção, podem ser admisnistrados em dosagens mais elevadas do que aquelas usualmente empregadas com metotrexato leucovorino, salvamento não é necessário. 0 regime de dosagens deve ser titulado ao neoplasma particular, às condições do paciente, e da resposta, mas geralmente as doses estarão desde cerca de 10 a cerca de 100 mg/dia durante 5-10 dias ou administração simplas diária de 250-500 mg, repetida periodicamente; por exemplo, todos 14 dias.

As formas de dosagem oral incluem comprimidos e capsulas contendo desde 1-10 mg de droga por unidade de dosagem.

Soluções salinas isotónicas contem 2-100 mg/ml, podem ser usadas para administração parenteral.

-17Os seguintes exemplos servirão para melhor ilustrar o invento.

Exemplo 1

N-/~4-(N¹-/~2-acetamido-4(3H)-oxo-pirido/~2,3-d7-pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-glutamato de di-etilo.

Uma mistura de 800 mg de 2-acetamido-6-f ormil-4 ( 3H) -oxo-pirido/2,3-d7pirimidina/^_Tay·¹ o¹et al J Qrg.Chem. 48, 4852 (1983)7em 55 ml de ácido acético glacial e 1,2 g de p-amino-benzoil-L-glutamato de di-etilo é deixada ficar à temperatura ambiente, durante 5 horas. À mistura adicionou-se depois 0,19 ml do complexo de hidreto de boro: tri-etilamina. Esta mistura é agitada durante 40 minutos à temperatura ambiente e depois aquecida a 60°C, durante 10 minutos. A mistura reaccional é arrefecida, e concentrada in vacuo. O resíduo resultante é dissolvido em 90 ml de metanol, e a solução foi filtrada. O sólido que é recuperado é lavado com 20 ml de metanol e 360 ml de éter. Os filtrados são combinados e evaporados até à secura. O residuo é cromatografado em flash /^-ver Still et al., J.Org.Chem., 43 2923 (1978)7sobre silica clorofórmio:metanol em 97:3), obtendo-se 1,08 g de N-/~4-(N¹-/~2-acetilamino-4(3H)-oxapirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo.

-18Exemplo 2

N-/~4-(Ν¹-/~2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo.

Uma mistura de 340 mg de N-/ 4-(N'-/^-2-acetil-amino-4(3H)-oxo-pirido/ 2, 3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo em 80 ml de metanol e 40 ml de ácido acético glacial é colocada num vaso com um aparato de hidrogenação (Adams). Adicionou-se cinguenta e cinco miligramas de catalisador óxido de platina, e a mistura é hidrogenada a 60 psi, à temperatura ambiente durante 15 minutos. O catalisador é removido por filtração, e o filtrado é concentrado in vacuo O residuo é cromatografado em flash, sobre silica com gradientes de cloroformio:metanol (97:3 a 95,5:5), recolhendo-se fracções de 20 ml.

As fracções 62-73 contêm um produto secundário, o 2-acetilamino-6-metil-4(3H)-oxo-pirido /~2,3-d7pirimidina. As fracções 74-88 contêm 15,4 mg do produto desejado, o N-/ 4-(N'-/ 2-acetilamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7 amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo.

Exemplo 3

Acido N-/~4-(N'-/^-2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-amino)benzoil7 -L-glutamato

Dissolveu-se vinte miligramas de N-/ 4—(Ν'—/ 2-acetilamino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7-pirimidin-6-il-metil7amino)-benzoil7-L-glutamato de di-etilo, em 8 ml de metanol e adicionou-se 0,4 ml de hidróxido de sódio aquoso, Ι,ΟΝ. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 96 horas e depois adicionou-se 0,1 ml de ácido acético glacial. 0 metanol é removido in vacuo e o residuo resultante é dissolvido em 5 ml de água. A mistura é acidificada com 0,16 ml de ácido acético glacial e a solução que se forma é recolhida por filtração, obtendo-se 6,0 mg do produto; ácido N-/ 4-(N'/~2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-d7 pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutamico, espectro de massa a 144.

Exemplo 4

N-/^-4-(N'-/”2-acetamido-4(3H)-oxopirido/ 2, 3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-formil-amido)benzoil7-glutamato de di-etilo.

Uma mistura de ácido formico a 98% (25 ml) e anidrido acético 14,9 ml; 5,25 g; 51,5 mmol) é agitada a 25°C durante 2 horas. A esta solução adicionou-se 2,43 g (4,5 mmol) de N-/~4-(N'-/~2-acetamido-4(3H)-oxo-pirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-2-glutamato de di-etilo/^-Taylor et al J.Org.Chem.48, 4852 (1983)7. esta mistura é agitada a 55°C, durante 15 minutos, e a 25°C durante 1 hora. 0 solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo é triturado com éter. O sólido é filtrado e recristalizado a partir do 2-propanol, para dar 2,0 g (78%) de N-/ 4-(N'-/~2-acetamido-4(3H)-oxo-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formilamino)benzoil7 glutamato de di-etilo: ponto de fusão 180-182°C; EMN^H (Me₂SO-d₆) delta 1.05-1.23 (m, 6 Η), 1.95-2.10 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.49 (t, 1H, J = 7.36 Hz), 3.97-4.10 (m, 4H) , 4.36-4.39 (m, 1H), 5.24 (m, 2H), 7.51-7.54 (m, 2H, ΑΑ’ΒΒ’), 7.84-7.87 (m, 2H, ΑΑ’ΒΒ’), 8.21 (m, 1H), 8.69-8.75 (m, 2H), 8.82 (s, 1H).

Anal. Calcd.para C, 57.24; H, 5.34; N,

14.83.

Énc. C, 56.94; H, 5.11; N, 14.57.

Ν-/ 4-(Ν'-/~2-pivaloil-amino-4(3Η)-oxo-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7glutamato de di-etilo composto do titulo é preparado analogamente ao procedimento do Exemplo 4, utilizando N-/ 4-(N‘-/~2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo; RMl^H (MegSO-dg) delta 1,09-1,16 (m, (m,6H); 1,21 (s,9H); 1,90-2,10 (m, 2H); 2,39 (t,2H, J=7,37 Hz); 3,96-4,09 (m, 4H); 4,31-4,43 (m, 1H); 5,22 (s,2H); 7,50-7,53 (AA¹ BB', 2H); 7,83-7,86 (AA¹ BB’); 8,21 (m, 1H); 8,71 (d, 1H=5,87 Hz); 8,72 (m, 1H), 8,80 (s, 1H).

Ν-/^-4-/~Ν'-/^-2-pivaloil-amino-4(3Η)-oxo-pirido-/ 2,3-d7 pirimidin-6-il-metil7-N'-acetil-amino)benzoil7glutameto de di-etilo.

A uma suspensão agitada de 0,65 g de N-/^-4-(N¹-/~2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-pirido/ 2,3-d7 -pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7glutamato de di-etilo (1,1-mmol) e 0,22 g (2,2 mmols) de bicarbonato de potássio em 10 ml de cloreto de metileno arrefecida a 0-5°C adicionou-se 0,097 g (1,2 mmol) de cloreto de acetilo. A mistura reaccional é agitada a 0-5°C durante 10 minutos e depois é permitida alcançar a temperatura ambiente. Após agitação à temperatura ambiente durante 45 minutos adicionou-se 50 ml de cloreto de metileno. A mistura é extractada com 25 ml de água, 25 ml de uma solução saturada de bicarbonato de sódio, e novamente com 25 ml de água. Os extractos aquosos são combinados e inversamente extractados com 50 ml de cloreto de metileno. O extracto orgânico é seco sobre sulfato de.magnésio anidro, filtrado, e o solvente é removido sob pressão reduzida, para dar 0,7 g de N-/ 4-(N¹-/ 2-pivaloil-amino-4(3H)-oxopirido / 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-acetil-amino)benzoil7 glutamato de di-etilo;

¹H NMR (Me₂SO-d₆) delta 1.10-1.17 (m, 6 H), 1.22 (s,

9H), 1.88 (s, 3 H), 1.88-2.13 (m, 2H), 2.40 (t, 2H, J =

7.46 Hz), 3.97-4.08 (m, 4H), 4.30-4.42 (m, 1H), 5.02 (s,

2H), 7.34-7.36 (ΑΑ'ΒΒ', 2H), 7.83-7.86 (ΑΑ'ΒΒ', 2H),

8.19 (m, 1H), 8.64 (m, 1H), 8.75 (d, 1H, J = 7.39 Hz).

-23Ν¹-/4-(N-/^-2-acetamido-4(3Η)-οχο-5,6,7, 8-tetra-hidro-pirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7“L-glutamato de di-etilo.

Uma mistura de 0,743 g (0,36 mmol) de N-/4-(N'-/2-acetamido-4(3H)-oxo-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo e 230 mg de óxido de platina em 75 ml de uma solução de etanol: ácido acético de 2:1 é abanada sob atmosfera de hidrogénio (40 psi) durante 1,5 horas. A mistura reaccional é filtrada através de celite e o filtrado evaporado orimeiro sob um aspirador de vácuo e depois sob alto vácuo, mantendo a temperatura tão baixa quanto possível. 0 residuo é dissolvido em cloreto de metileno e cromatografado (chromatotron), tendo como eluente 5% de metanol em cloreto de metileno, para dar 0,684 g (93%) de N-/^-4-(N'-/~2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo; ponto de fusão 188-190°C;

ⁱH NMR (Me₂S0-d₆) delta 1.12-1.19 (M, 6 H, ester CH₃'s), 1.89-2.11 (m, 4H), 2.08 (s, 3H) , 2.42 (t, 2H, J = 7.26 Hz), 2.78-2.91 (m, IH), 3.09-3.19 (m, 1 H), 3.89 (d, 2H, J = 5.98 Hz), 3.99-4.12 (m, 4H), 4.42 (m, IH), 6.64 (m, 1H), 7.51-7.54 (m, 2H, ΑΑ'ΒΒ’), 7.91-7.94 (m, 2H, ΑΑ’ΒΒ'), 8.61 (s,

IH), 8.74 (d, IH, J = 7.32 Hz).

Uma amostra analítica é cromatografar uma porção da amostra anterior, fracção central. Após triturada com éter e o Análise calculada para ^C27^H34^N6°8^{: C 56f83}’ preparada por tirada da amostra foi

Encontrada: C 56,60; H

5,90; N 14,43

N-/ 4-(N'-/ 2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo.

-24Exemplo 8

N-/~4-(N‘-/^-2-pivaloil-amino-4 (3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo é identicamente obtido após redução do N-/^_4-(N'/~2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-ilmetil7-N¹-formil-amino)benzoil7glutamato de di-etilo; ponto de fusão

152-153°C; IR (KBr)

V 3369 and 3250 (NH) , 1732, 1637, and 1605 (C=0) fflâ X η cm ; H NMR (Me₂SO-d_g) delta 1.12-1.2 (m, 6 H), 1.17 (s, 9H), 1.90-2.18 (m, 4H), 2.43 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 2.80-2.94 (m, 1H), 3.12-3.20 (m, 1 H), 3.89 (d, 2H, J = 5.59 Hz), 4.00-4.11 (m, 4H), 3.90-4.47 (m, 1H), 6.40 (m, 1H), 7.52-7.55 (ΑΑ'ΒΒ', 2H), 7.92-7.94 (ΑΑ'ΒΒ', 2H), 8.62 (s, 1H), 8.75 (d, 1H, J = 7.33 Hz).

Anal. Calcd. for. C^H^NgOg: C, 58.81; H, 6.58; N, 13.72.

Enc. 1: C, 58.53; H, 6.60; N, 13,61.

-25Exemplo 9

N-/ 4-(4'-/ 2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-acetil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo .

A uma solução de 0,64 g (1,03 mmol) de N-/~4-(N¹-/~2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-pirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-acetil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo, em 40 ml de ácido glacial acético são adidónadas a 96 mg de áxido de platina. A suspensão é abanada sob uma atmosfera de hidrogénio (45 psi) durante 2,5 horas, a mistura é diluída com 100 ml de cloreto de metileno e filtrada através de celite para remover o catalizador. O filtrado é evaporado sob pressão reduzida e o residuo é dissolvido em 100 ml de cloretc de metileno, e extractado duas vezes com porções de 75 ml duma solução saturada de bicarbonato de sódio. As camadas aquosas são inversamente extractadas com 75 ml de cloreto de metileno e as camadas orgânicas são combinadas e secas sobre sulfato de magnésio anidro. Após remoção do agente exicante por filtração sob pressão reduzida para dar 0,54 g (84% de rendimento) de N-/4-(N¹-/^-2-pivaloil-amino 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-acetil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo, que pode ser melhor purificado por recristalização a partir de acetato de etilo de fusão

120-123°C

NMR (Me2SO-dg) delta 1.06-1.19 (m, 6 H), 1.16 (s, 9H), 1.82 (s, 3H) 1.84-2.17 (m, 6H), 2.42 (t, 2H, J = 7.40 Hz), 2.80-2.94 (m, 1H) , 3.17-3.23 (m, 1 H), 3.68 (d, 2H, J = 5.59 Hz), 3.98-4.10 (τη, 4H) , 4.39-4.45 (m, 1H), 6.38 (s, 1H), 7.43-7.46 (ΑΑ’ΒΒ', 2H), 7.90-7.93 (ΑΑ’ΒΒ', 2H), 8.79 (d, 1H, J = 7.33 Hz).

Acido Ν-/ 4-(N¹ -y2-amino-4( 3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropirido/2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-formil-amino) benzoil7-L-glutâmico

Uma mistura de 0,092 g (0,16 mmol) de N-/^_4-(N'-/^-2-acetamido-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropirido/”2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-formil-amino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo em 10 ml de uma solução de hidróxido de sódio aquoso 0,25, é agitada a 25°C durante 72 horas e depois a água é evaporada sob pressão reduzida. O residuo é dissolvido em 15 ml de água, e a solução é arrefecida a 0°C e acidificada com ácido acético. O sólido é recolhido após 30 minutos para dar 0,046 g (60,5%) de ácido N-/^-4-(N'-/^-2-amino-4(3H)-oxo5,6,7,,8-tetra-hidro-pirido/~2, 3-d7pirimidin-6-il-metil7 -N'-f ormil-amino)-benzoil7~L-glutâmico , RMN^H (N^SO-dg)

delta 1,81-2,2 (m,4H);	2,33	(m, 3H);	2,73	(m,	1H) ;
3,1 (m, 1H); 3,85	(m,	2H) ;	4,39 (m,	1H) ;	6,2	(m,	1H) ;
7,49-7,51 (m, 2H,	AA'	BB ' ;	7,90-7,93	(m,	2H,	AA'	BB' ) ;

8,59-8,62 (m, 2H).

Analogamente 200 mg de N'-/~4-(N-/~2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidrc-pirido / 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-acetilamino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo é agitado durante 72 horas em 5 ml de hidróxido de sódio 0,2N. A mistura reaccional é neutralizada com ácido clorídrico, 0,5 arrefecida a 0°C e o sólido formado é recolhido por filtração para dar o ácido N-/^-4-(N'-/~2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido / 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N¹-acetil-amino)benzoil7-L-glutâmico.

Exemplo 11

Acido N-/ 4—(Ν' —/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropirido/ ^-2 ,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-formil-amino)benzoil-L-glutâmico

Uma solução de 20 mg de ácido N-/~4-(N'-/~2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido /~2,3-d7-pirimidin-6-il-metil7-amino)benzoil7-L-glutâmico em 0,5 ml de ácido fórmico a ^Q7;' é aquecida a 90^ durante 1 hora. O solvente é removido sob pressão reduzida e o residuo é triturado com éter. O sólido insolúvel é recolhido para dar 17 mg de produto, ácido N-/ 4-(N¹-/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7-N'-formil-amino)benzoil7-L-glutâmico, que é melhor purificado por dissolução em hidróxido de sódio O,1N, e precipitado através da adição de ácido glacial acético.

-28Exemplo 12

Acido N-/^-4-(N'-/^-2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7, 8-tetra-hidro-pirido/~2,3-d7pirimidin-6-il-metil/-amino)benzoil7-L-glutâmico

A 32 ml de uma solução de 5 % de ácido clorídrico em metanol (preparada por diluição em 2 ml de ácido clorídrico concentrado em 60 ml com metanol) adicionou-se 0,717 g (1,3 mmol) de N-/~4-(N'-/ 2-acetamido -4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-d7-pirimidin-6-il-metil7-N¹-formilamino)benzoil7-L-glutamato de di-etilo (preparado como no Exemplo 2). A mistura reaccional é agitada a 45°C durante 18 horas. Após deixar arrefecer a mistura reaccional até 25°C, adicionou-se 4 ml de hidróxido de sódio (6N), e a mistura é agitada durante outras 72 horas a 25°C. A solução é concentrada sob pressão reduzida. Adicionou-se vinte mililitros de água, e a mistura é acidificada por adição gota a gota de ácido acético glacial. Após ter ficado 2 horas a 0°C, o sólido é recolhido para dar 0,485 g (88% de rendimento) de ácido N-/ 4-(N'-/ 2-amino-4 ( 3H) -oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-çirido/^-2,3-d7pirimidin-6-il -metil7aniino)benzoil7-L-glutâmico; ponto de fusão de composição começou a 198°C; EMN^H (N^SO-d^) delta 1,86-2,1 (m, 6H); 2,31 (t, 2H,J=7,2); 2,8-2,86 (m, 1H); 3,24-3,28 (m, 2H); 4,2-4,4(m, 1H); 5,94 (s, 2H); 6,29 (s, 1H); 6,34 (t, 1H, J=5,24); 6,56-6,58 (AA¹ BB', 2H); 7,62-7,65 (AA¹, BB', 2H); 8,06 (d, J=5,15); 9,7 larga s, 1H).

-290 mesmo produto pode ser obtido através de hidrólise de N-/~4-(N'-/2-pivaloil—amino-4(3H)-oxopirido/^-2,3-d7pirimidin-6-ilmetil7-N¹-formilamino)benzoil7 glutamato de dietilo.

Em alternativa, 1,44 g (2,4 mmol) de N¹-/^-4-(N-/~2-pivaloil-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropirido/~2,3-d7pirimidin-6-ilmetil7-N'-formil-amino) benzoil7-L-glutamato de di-etilo. È dissolvido em hidróxido de sódio, IN e a solução é agitada a 25°C durante 72 horas. Carvão activo é adicionado e a suspensão é agitada e filtrada. 0 filtrado é acidificado com ácido acético glacial e o sólido branco é recolhido após 30 minutos, arrefecendo a 0°C para dar 0,87 g (84%) de rendimento do mesmo produto; ponto de fusão decomposição lenta acima dos 198°C;

IR (KBr) V 3460-2500 (NH and COOH), 1695, 1655, and 1600 max i η (C=O) cm” ; ^ΧΗ NMR (Me^O-dg) delta 1.85-2.02 (m, 6 H) , 2.3 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 2.81-2.88 (m, 1H) 3.23-3.32 (m, 2H) 4.2-4.4 (m, 1H), 5.92 (s, 2H), 6.34 (t, 1H, J = 5.28 Hz), 6.55-6.57 (m, 2HAA'BB'), 7.61-7.64 (ΑΑ’ΒΒ’, 2H), 8.08 (d, 1H, J = 7.64 Hz), 9.7 (br, s, 1H).

-30Exemplo 13

Uma solução de ácido N-/^-4-(N'-/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/ 2,3-d7pirimidin-6-il-metil7amino)benzoil7-L-glutâmico a 1 mg/ml em acetonitrilo em 15% e 85% duma solução de trietilamina a 0,1% em ácido acético (tamponizada a pH 7,0) é preparada. Esta solução é introduzida numa coluna de HPLC em fase oposta, cyclobond I de 10 mm x 50 cm, utilizando o mesmo sistema de solvente. A velocidade de refluxo é de 1,10 ml/ /min e é empregada um monitor de UV a 254 nm.

Um primeiro diastereoisómero substancialmente livre do outro é obtido a um tempo de retenção de 45-58 minutos, designado aqui, como Isómero A. O segundo diastereoisómero substancialmente livre do primeiro é obtido a um tempo de retenção de 48,32 minutos, designado aqui como Isómero B.

-31Exemplo 14

Grupos de 10 ratos fêmeas C3H foram inoculadas intraperitonealmente na região axilar com células de adenocarcinoma de mamiferos C3H. O composto teste é depois administrado com Emulphor IP (0,5 ml) durante 10 dias. Os de controle receberam tratamento idêntico sem composto teste.

O ácido N-/ 4-(N'-/ 2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/^-2,3-b7pirimidin-6-il-metil7amino-benzoil7-L-glutâmico produziu 96% de inibição em 7 de 10 sobreviventes com uma dose de 6,25 mg/kg.

Contra o linfossarcoma 6C3HED com um periodo de tratamento de 8 dias, os resultados seguintes foram observados, para o mesmo composto:

Dose	Inibiç
(mg/kg)
6,0	77
12,5	100
25,0	100
50,0	100
100,0	100

Sobreviventes

10/10

9/10

7/10

4/10

1/10

Claims

REIVINDICAÇÕES lã. - Processo de preparação de um composto seleccionado do grupo, que consiste em:

(i) 4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pirido/”2,3-d7 pirimidinas de fórmula *

-CONH-CH-CH.CH.COOR³'

I ^{2 2} ¹ 9 ’

COOR

III

1 , _z 5 2 3¹ em que R é hidrogénio, metilo, etilo, ou R CO; R ¹ e R são hidrogénio ou o mesmo ou diferentes grupos protectores do ácido carboxilico; R é hidrogénio ou um grupo protector do amino; e R é hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; e a configuração à volta do átomo de carbono, desigando por é L; e ii) suas formas tautoméricas, caracterizado por

a) se hidrolisar um composto de fórmula:

4 R HN h-ch₂ch₂coor^{1 * 3}

COOR²

1 z 2 3 em que R é como a seguir definido; R e R são o mesmo ou diferentes grupos protectores do ácido carboxilico; e R⁴ é um grupo protector do amino, de modo a obter um composto de fórmula

H₂N

N

H *

CONH-CH-CH CH₂COOH I

COOH

I

1 ζ ζ 5 5 ζ em que R é hidrogénio ou R C0-; R é hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; e a configuração à volta de carbono designado por * é L, e suas formas tautoméricas, ou

b) se tratar um composto de fórmula *

C0NH-CH-CH„CH_oC00R Z Z ¹ 2'

COOR

3' em que R e R são hidrogénio ou o mesmo ou diferente grupos protectores do ácido carboxilico; e R é hidrogénio ou um grupo protector amino; e a configuração à volta do átomo de carbono designado por é L, com um ácido de fórmula R COOH, ao qual R é hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, ou um seu derivado por acilação reactivo, de modo a obter um composto de fórmula III em que R¹ é R⁵CO- ou •Cl

c) se proceder à hidrogenação catalítica dum composto de fórmula:

3 ¹ 4'

R e R sao como anteriormente definidos.
2a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto de fórmula III em que R é hidrogénio, cada um de R e R é hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e R é hidro génio ou alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

3a. vindicação 2, caracterizado Processo de por cada um acordo 2 ¹de R com a rei- 3 ¹e R ser 4 etilo, e R 1 _Λser acetilo.. 4a. - Processo de acordo com a reivin- dicação 2, caracterizado por cada um de 2 ' R e R 3 . ' ser etilo,

4 ¹ e R ser pivaloilo.

-375&. - Processo de acordo com a rei2' 3' 4 vindicação 2, caracterizado por cada um de R , R e R ' ser hidrogénio.

6a. - Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por se preparar o diastereómero R.S.

7â. - Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por se preparar o diastereómero S,S.

8^. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto de j 2'3', fórmula III, em que R é formilo, cada um de R e R é

4¹ , hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e R e hidro génio ou alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

vindicação 8, 4 ¹ etilo, e R 9a. caracterizado ser acetilo. - Processo de acordo 2 ' por cada um de R e com a rei- 3 ¹R° ser lOâ. - Processo de acordo com a rei- vindicação 8, caracterizado 2 ¹por cada um de R e 3 ¹ R ser etilo, e R^ ser pivaloilo. 11 a. - Processo de acordo com a rei- vindicação 8, caracterizado 2 ¹ por cada um de R , : R³ ' 4 ¹e R

ser hidrogénio.

-3812a. - Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por se preparar o diastereoisómero R,S.

13â. - Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por se preparar o diastereoisómero S,S.

14â. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto de fórmula III, em que R é acetilo, cada um de R e R é ,4' , hidrogénio ou alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e Re hidrogénio ou alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

15â. - Processo de acordo com a rei2 ¹3 vindicaçao 14, caracterizado por cada um de R e R ser

4¹ z etilo, e R e acetilo.

16^. _ Processo de acordo com

2¹3 vindicaçao 14, caracterizado por cada um de R e R

4 ¹ etilo e R ser pivaloilo.

a reiser

17^. - Processo de acordo com a rei2¹ 3¹4 vindicação 14, caracterizado por cada um de R , R e R ser hidrogénio.

18a. _ Processo de acordo com a reivindicação 1 a) caracterizado por R^ ser hidrogénio, 23 cada um de R e R ser alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e R ser alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

-39191. - Processo de acordo com a rei- vindicação 18, caracterizado por cada um de R e R ser etilo, e R ser pivaloilo.

211. - Processo de acordo com a reivindicação 1 a), caracterizado por R^ ser formilo, cada um 2 3 ,4 de R e R ser alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e R ser alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

221. - Processo de acordo com a rei- vindicação 21, caracterizado por cada um de R e R ser etilo, e R ser acetilo.

231. - Processo de acordo com a rei- vindicação 21, caracterizado por cada um de R e R ser etilo, e R ser pivaloilo.

241. - Processo de acordo com a reivindicação 1 a), caracterizado por R^ ser acetilo, cada 2 3 z4 um de R e R ser alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e R~ ser alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

251. - Processo de acordo com a reil ~ 23 vindicação 24, caracterizado por cada um de R e R ser etilo, e R⁴ ser acetilo.

261. - Processo de acordo com a rei~ 23 vindicação 24, caracterizado por cada um de R e R ser etilo, e R ser pivaloilo.

-40271. - Processo de vindicação 1 b) caracterizado por cada um e R° ser hidrogénio.

acordo com

2¹ 3 de R , R a reqR⁴

281. - Processo de acordo com a reivindicação alquilo de a 6 átomos

2 ' 3 ¹

27, caracterizado por cada um de R e R ser

4 i

1 a 6 átomos de carbono, R ser alcanoilo de 2

5 r de carbono e R ser hidrogénio.

291. - Processo de acordo com a rei1 vindicação 1 c) caracterizado por R ser hidrogénio, cada

2 ¹ 3¹ _z um de R e R ser alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e 4'

R ser alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

301. - Processo de acordo com a rei2 ¹ 3 ¹ vindicação 29, caracterizado por cada um de R e R ser

4 ' etilo, e R ser acetilo.

311. - Processo de acordo com a rei2 ¹ 3 ¹ vindicação 29, caracterizado por cada um de R e R ser

4 ¹ etilo, e R ser pivaloilo. vindicação 1 321. - Processo de acordo com a rei2' 3 ’ 4¹ c), caracterizado por cada R , R e R ser hidrogénio.

331. - Processo de acordo com a rei- vindicação 1 c) , caracterizado por R¹ ser formilo, cada um 2 ¹ 3 ' de R^z e R 1 ser alquilo de 1 a 6 átomos 4 ¹de carbono, e R

ser alcanoilo de 2 a 6 átomos de carbono.

34a. - Processo de acordo com a rei- vindicação 33, caracterizado por cada um 9 ¹ de R 3 ' e R ser etilo e R^ 1 ser acetilo.

35a. - Processo de acordo com a rei- vindicação 33, caracterizado por cada um de R² ' _ 3 ¹e R ser 4 ' etilo e R ser pivaloilo. 36a. - Processo de acordo com a rei-

vindicação 1 c), caracterizado por R ser formilo e cada

2¹ 3¹ 4¹ um de R , R e R ser hidrogénio.
3 7a. - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica para o combate do crescimento neoplástico em mamíferos, caracterizado por se incluir na referida composição uma quantidade dum composto obtido de acordo com qualquer reivindicação 5-7 ou 11-13, que ao ser administrada a mamíferos, num regime de dose simples ou múltipla, e eficaz no combate do referido crescimento, em combinação com um suporte farmaceuticamente aceitável.

38a. - Método de combater o crescimento neoplástico em mamíferos, caracterizado por compreender a administração a mamíferos num regime de dose simples ou múltipla duma quantidade efectiva dum composto obtido de acordo com qualquer das reivindicações 5-7 ou 11-13, sendo a gama de dosagem geralmente, de 10 a 100 mg por dia duran te 5 a 10 dias ou uma única administração diária de 250 a 500 mg repetida periodicamente por exemplo, de 2 em 2 sema