PT1931673E - Compostos que compreendem cadeias de aminoálcoois e complexos metálicos para imagiologia médica - Google Patents

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DESCRIÇÃO "COMPOSTOS QUE COMPREENDEM CADEIAS DE AMINOÁLCOOIS E COMPLEXOS METÁLICOS PARA IMAGIOLOGIA MÉDICA" A invenção refere-se a novos compostos de utilização para imagiologia médica de diagnóstico e a composições farmacêuticas que compreendem esses compostos. Estes compostos são utilizados em particular como agentes de contraste em MRI (do inglês Magnetic Resonance Imaging) . A administração de produtos de contraste a doentes contribui para melhorar a resolução das imagens obtidas e a precisão do diagnóstico. Assim, um especialista na técnica conhece, para MRI (ressonância magnética de imagem), um grande número de produtos de contraste, referidos como produtos de contraste não específicos, com base em quelatos de gadolínio lineares ou macrocíclicos, por exemplo, os compostos DTPA, DTPA BMA, DTPA BOPTA, D03A, DOTA. Os produtos de contraste, que compreendem metais paramagnéticos ou superparamagnéticos, modificam o tempo de relaxação dos protões e o aumento da relaxividade obtida torna possível a obtenção de um sinal mais forte e uma maior resolução espacial. Os quelatos de gadolínio utilizados no tratamento clínico de seres humanos, tais como Magnevist® (DTPA), Dotarem® (DOTA) ou Omniscan® (DTPA BMA), são de baixo peso molecular, têm relaxividades molares rl por Gd da ordem de 3 a 4 mM-1s-1 nos campos magnéticos habituais de 0,5 a 1,5 Tesla. Estes compostos são adequadamente referidos como compostos não específicos, isto é, que têm um largo espectro de indicações de diagnóstico, mesmo que possam ser mais ou menos adequados para determinadas indicações de 2 diagnóstico, em comparação com os compostos concebidos especificamente para o direcionamento de indicações altamente especificas. Por exemplo, a técnica anterior divulga um grande número de compostos que compreendem uma parte de sinal (tal como um derivado de DOTA ou DTPA) e uma parte de direcionamento (por exemplo péptido) destinado a reconhecer especificamente uma ou mais moléculas biológicas geralmente sobre-expressas em determinadas patologias, tais como cancros, doenças inflamatórias ou doenças cardiovasculares.

Permanece a necessidade de encontrar novos compostos, em particular não específicos, cuja síntese não seja demasiado complexa e que tenham uma relaxividade significativamente melhor do que a dos quelatos não específicos já conhecidos, de forma a aumentar a eficiência na imagiologia de diagnóstico.

Entre os quelatos conhecidos, os quelatos do ácido biciclopoliazamacrociclocarboxílico de fórmula (I) foram divulgados, em particular no documento EP 438 206:

(I) em que X representa um grupo carboxilato ou fosfato e Ro representa um grupo alquilo ou fenilo, ou um dos símbolos Ro é um grupo que forma uma ligação com uma molécula biológica. Entre estes compostos, o composto seguinte, denominado PCTA no restante da descrição, é conhecido por 3 um especialista na técnica (Inorganic Chemistry, 36 (14) , 2992-3000 (1997), e Magn. Reson. Chem., 36, S200-208 (1988)).

Os compostos conhecidos que têm a estrutura de base da fórmula (I) do tipo PCTA têm uma relaxividade da ordem de 4 a 6 mM“1s”1GD~1.

Deve ser lembrado que os compostos de fórmula (I) são vantajosos uma vez que tornam possíveis as trocas de duas moléculas de água por quelato, de forma a completar a esfera de coordenação do gadolínio (9 possíveis interações) presente no quelato. Isto deve-se ao facto da estrutura de base do PCTA contribuir com 7 interações potenciais (4 átomos de azoto + 3 grupos funcionais ácido), o que deixa uma interação entre o gadolínio e 2 moléculas de água, designada q = 2 (ou seja, 9-7).

Mais especificamente, o documento WO 93/11800 divulga compostos de fórmula (I) com grupos Ro selecionados a partir de H, OH ou Ci-C3 alquilo. O documento US 5 403 572 divulga compostos nos quais os grupos Ro podem ser álcoois; a síntese destes compostos envolve a síntese da cadeia álcool e, posteriormente, por uma reação de alquilação, o acoplamento desta cadeia com os átomos de azoto do macrociclo. 4

Tais compostos, dos quais os grupos Ro são alquilos ou álcoois, são susceptiveis de apresentar relaxividades bastante variáveis e bastante baixas, como será descrito mais adiante.

Além disso, o documento US 6 440 956 divulga compostos com Ro = -CH2-CH2-CO-NH-Y, em que Y representa necessariamente uma cadeia pesada de aminoálcool, com exemplos de cadeias com um peso molecular de aproximadamente 500 a 1500. Estes compostos de peso molecular da ordem de 3000 tem uma relaxividade muito elevada, da ordem de 20 a 30 mM mM_1s” 1GD_1, mas apresentam o problema de uma sintese dispendiosa do ponto de vista industrial e uma viscosidade excessivamente alta, não sendo possível que a sua concentração seja muito elevada durante a sua administração. Além disso, estes compostos podem exibir propriedades altamente específicas no compartimento vascular, tais como o comportamento de difusão lenta do agente (LDA), que não são necessariamente desejadas para um composto não específico ou composto de baixa especificidade. Em particular, estes compostos podem difundir para o sistema nervoso central.

Um problema importante a ser resolvido é, assim, o de ter sucesso na obtenção de novos compostos que exibem tanto uma síntese química simplificada como uma relaxividade marcadamente melhorada em comparação com os compostos não específicos já descritos ou disponíveis comercialmente.

Outro problema é o da obtenção de compostos que têm uma eficiência de imagem (relaxividade) que não seja afectada de modo prejudicial quando utilizada num campo magnético de valor elevado, em particular acima de 3 Tesla. Isto 5 deve-se ao facto dos dispositivos de imagiologia médica estarem a evoluir em direção a um aumento do valor do campo. Deve ser lembrado que a relaxividade de vários compostos conhecidos que compõem uma estrutura de base de DOTA, DTPA ou D03A diminui acentuadamente em campos de valor elevado.

Surpreendentemente, o Requerente teve sucesso na obtenção de produtos muito eficientes por enxerto de cadeias, não mais pesadas nem complexas, mas, pelo contrário, curtas, nas cadeias na posição α em relação aos grupos funcionais carboxilo quelantes.

Os resultados são particularmente vantajosos utilizando cadeias de aminoálcoois, sendo esta a situação em especial no caso dos compostos que exibem um valor de q=2 (em particular, quelatos do tipo PCTA e D03A), e, assim formam compostos referidos como compostos (II) no restante da descrição. 0 Requerente obteve assim compostos que, quando estão complexados com um metal, têm uma relaxividade (eficiência na imagiologia) e uma eficiência em massa (preço de custo industrial), que são muito marcadamente melhoradas, com valores rl da ordem de 9 a 15 mM‘1s”1GD”1, ou seja multiplicados por um factor de 2 a 3 com respeito a derivados anteriores, em particular PCTA, D03A, DOTA, ou DTPA.

Estes compostos (II), quando não compreendem uma parte de direcionamento biológico, exibem várias caracteristicas funcionais que são particularmente relevantes, uma vez combinadas: 6 não ionicidade: isto permite restringir em muito a osmolalidade do produto a ser injetado, e desse modo, a dose de produto injetado, o que é um critério vantajoso para produtos de contraste, a fim de melhorar o conforto dos doentes (sendo a osmolalidade mais próxima da osmolalidade do plasma), e reduzir o custo da injeção, alta hidrofilicidade: isto permite uma solubilidade e não toxicidade adequadas do produto. alta relaxividade (alta intensidade do sinal): a relaxividade é elevada e não é prejudicialmente afectada (não é reduzida) pelos grupos hidroxilo da estrutura, baixo preço de custo industrial (em particular, a alta eficiência em massa): os compostos particularmente os compostos II permitem atingir uma relaxividade elevada de cerca de 12 mM“1s“1GD‘1 com um peso molecular de apenas cerca de 800 a 1000. baixo peso molecular, tornando possível a obtenção de uma biodistribuição dos compostos não específicos: por exemplo, é evitado o comportamento indesejável de tipo de agente de acumulação de sangue, que corresponde à difusão seletiva para o compartimento vascular, em particular. Não foi de todo óbvio prever o comportamento físico-químico altamente satisfatório do grupo funcional carboxamida no que diz respeito ao gadolínio na combinação da invenção, nem que o encurtamento das cadeias de aminoálcoois tornaria possível reter uma relaxividade muito boa, em contraste com os outros quelatos da técnica anterior que compreende uma cadeia curta.

Além disso, o Requerente constatou, inesperadamente, que a relaxividade é estável com o campo magnético para os 7 compostos (II) complexados com um metal, o que é altamente vantajoso em comparação com os compostos anteriores, em particular aqueles do documento US 6 440 956.

Assim, a invenção refere-se portanto, de acordo com um primeiro aspecto, a compostos (II) de fórmulas (lia)

(Ha) em que

Rl, R2 e R3 representam, independentemente um do outro, -COOH, -P (O) (OH) 2 ou -R6-P (O)-OH em que R6 representa um átomo de H ou um grupo alquilo C1-C3, de preferência COOH;

Xi, X2 e X3 representam, independentemente um do outro, L-Y em que L representa um grupo alquilo C1-C3, de preferência (CH2)n com η = 1 a 3, Y representa CO-NR7R8, em que R7 representa H ou um grupo alquilo Ci-C6 ou um grupo hidroxialquilo C1-C6, em particular um grupo C2-C4, vantajosamente -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, -CH-(CH20H) 2, - (CH2)m-(CHOH)p-CH2OH, com m = 1 a 3, p =la4em+p=2a5, ou -C-(CH2OH)3, e R8 representa um grupo alquilo Ci~Ce ou hidroxialquilo Ci-C6, em particular um grupo C2-C4, vantajosamente -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, -CH-(CH2OH)2, - (CH2) m-(CHOH) p-CH2OH, com m = 1 a 3, p = la4e 8 m + ρ = 2 a 5, ou -C-(CH2OH)3, desde que, pelo menos, R7 ou R8 represente um grupo hidroxialquilo CR-Ce; D representa CH ou N; E representa CH ou N;

Fi representa CH ou N;

Ki a K12, cada um representa independentemente H, -(CH2)j-CH3 ou -(CH2)i-OH, em que j = 0a3ei = la3, vantajosamente H, ou K3 ou K4 com K5 ou Κβ, e/ou K7 ou Ks com K9 ou K10, formam um anel que contém 3 a 6 átomos de carbono; ou um enantiómero ou um diastereoisómero dos mesmos ou das suas misturas.

Assim, a invenção abrange os isómeros dos compostos (II), em particular os isómeros RRS, RSR, RSS.

Deve ser lembrado que "Ci-Cn" é entendido por qualquer grupo selecionado a partir de Clr C2, C3, ...Cn.

Na acepção da presente invenção, entende-se que o termo "alquilo" (ou alquileno), significa qualquer cadeia de átomos de carbono (de preferência 1 a 5) linear ou ramificada e não substituída.

Na acepção da presente invenção, entende-se que o termo "grupo hidroxialquilo" significa qualquer cadeia alquilo tal como definido acima que compreende um ou mais grupos hidroxilo. 0 termo "arilo" tal como utilizado na presente invenção refere-se a um sistema de anéis carbocíclico, monocíclico ou bicíclico contendo 5 a 8 átomos de carbono e que tem um ou mais anéis aromáticos incluindo, mas não se limitando 9 a, fenilo, naftilo, tetra-hidronaftila, indanilo e outros, vantajosamente fenilo. A preferência é particularmente dada aos compostos (II) em que as três cadeias Y cada tem um peso molecular inferior a 200, vantajosamente entre 50 e 100, e em particular aos compostos em que cada uma das cadeias Y compreende 1 a 5 qrupos OH. A invenção também abranqe os compostos (II) em que m+p > 5, isto é, resultantes de cada uma das possíveis combinações entre m = 1, 2, 3 e p = 1, 2, 3, 4.

De acordo com implementações vantajosas, a invenção refere-se a compostos de fórmula (lia) em que E representa um átomo de N e D e Fi representam CH.

Os dados, em particular para relaxividade e solubilidade, também são vantajosos para os compostos que possuam uma estrutura de base de DOTA ou DTPA ou outros quelatos que exibem um valor q = 1.

Em geral, a invenção refere-se a compostos selecionados a partir de:

(Ha) (Ilb) de acordo com a reivindicação 1 10

De acordo com implementações vantajosas, a invenção refere-se a compostos de fórmula (II) em que XI a X3 independentemente representam - (CH2) n-CO-NR7R8, em que n é entre 1 e 3, R7 representa H ou um grupo metilo e R8 representa um grupo hidroxialquilo C1-C6, vantajosamente C2-C3, de preferência -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, -CH- (CH20H) 2, -CH2- (CHOH) p-CH2OH, com p = 1 a 4 ou -C-(CH2OH)3.

Vantajosamente, XI a X3 independentemente representam -(CH2) n-CONR7R8, em que n é entre 1 e 3, R7 representa H ou um grupo metilo e R8 representa um grupo hidroxialquilo C1-C4, preferencialmente -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, -CH-(CH2OH)2, -CH2-(CHOH)p-CH2OH com p = 1 ou 2, ou -O(CH20H)3.

Vantajosamente, XI a X3 independentemente representam - (CH2) n-CONR7R8, em que n é entre 1 e 3, R7 representa H e R8 representa -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, CH-(CH2OH)2, -CH2-(CHOH) p-CHOH, com p = 1 a 4 ou -C-(CH2OH)3.

Mais provavelmente, o Requerente interessou-se pelos compostos (II) que exibem as caracteristicas d) a f) adiante a serem estudas em termos de equivalência funcional (relaxividade, quimica fisica, biodistribuição) em comparação com os compostos (II) descritos acima: d) Composto da seguinte fórmula (IIc) 11

em que E é selecionado de N, S, 0, =C; Fi é selecionado de (-CHRg-)n ou (=CRg-)n com R9 tendo o significado indicado no documento US 5 403 572, coluna 63; D é selecionado a partir de N, O 0 11 0, -ND1 com Dl sendo selecionado a partir de H, um alquilo C1-C3, -CH-D2, =C -D2, sendo D2 selecionado a partir de: H, alquilo C1-C3 (opcionalmente substituído por um ou mais grupos hidroxilo), -0-D3 (com D3 um alquilo C1-C3 opcionalmente substituído por grupos hidroxilo ou D3 sendo -(CH2)m-C0-N-D4, D4 sendo selecionado de forma análoga ao documento US 5 403 572); e) L é uma cadeia alquilo (cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada que compreende até 6 carbonos que é opcionalmente substituída por grupos hidroxilo ou fenilo) ou L é uma cadeia alquileno de 1 a 6 átomos de carbono que é opcionalmente interrompida por um ou mais átomos de oxigénio, um ou mais grupos hidroximetileno (CHOPH), grupos imino, uma ou mais ligações duplas ou triplas; f) Y é uma cadeia A-B-R2 em que AB é um grupo funcional que não seja um grupo funcional carboxamida CONH ou que não seja um grupo funcional carbonilamino NHCO; em particular, A é um grupo funcional selecionado a partir de: -NCS, -NH-NH2, -CHO, alquilpirocarbonilo (-CO-O-CO- 12 alquilo), acilazidilo (-CO-N3) , iminocarbonato (-O-C(NH)-NH2) , vinilsulfurilo (-S-CH=CH2) , piridildissulfurilo (-SS-Py), haloacetilo, maleimidilo, diclorotriazinilo ou halogéneo; com, por exemplo, o grupo AB a formar uma ligação covalente do tipo -COO-, -OCO-, -NH-CS-NH-, -CH2-S-, -NH-NH-CO-, -CO-NH-NH-, -CH2-NH-, -NH-CH2-, -NH-CS-N-, -CO-CH2- S-, -nh-co-ch2-s-, -n-co-ch2-ch2-s-, -CH=NH-NH-, -NH-NH=CH, -CH=N0-, ou -0-N=CH; 0 Requerente também estudou compostos em que Y representa um grupo carbamoilo CONR'2R'3 em que R'2 e R'3 são cada um independentemente, uma cadeia que não seja um hidroxialquilo e em particular um grupo selecionado dos grupos alquilo (linear ou substituído), alcoxi (isto é, alquilo-O-), alcoxicarbonilo (isto é, alcoxi-C=0), cicloalquilo, alcoxialquilo, arilo (em particular fenilo, piridilo, furilo) ou aralquilo (isto é, um grupo arilo ligado a um grupo alquilo).

De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se aos multímeros (vantajosamente os dímeros ou trímeros) dos compostos de fórmulas (II) tal como definido acima. Para produzir tais multímeros, os compostos de fórmula (II) são acoplados uns aos outros, vantajosamente através de um grupo de ligação. Em particular, estes grupos de ligação podem ser ligados ao composto de fórmula (lia) em D. Podem ser utilizados vários grupos de ligação. 0 Requerente estudou em particular os compostos de fórmula (lia) em que D representa um grupo -CH-G com G tendo o significado

indicado no documento US 5 403 572. Em particular, G representa pelo menos um segundo macrociclo de fórmula (II) ligado através de um grupo de ligação ao primeiro 13 macrociclo. Grupos de ligação que podem ser utilizados são dadas nas colunas de 12 a 14 da Patente US 5 403 572. O Requerente estudou também, em particular, os compostos que compreendem um grupo de ligação capaz de ser ligado a mais de dois macrociclos e, em particular a três macrociclos (II), tal como um grupo de ligação que compreende o grupo:

X

NH

De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se aos compostos vetorizados que compreendem um composto de fórmula (II) tal como definido acima acoplado a pelo menos um biovetor através do intermediário opcional de um grupo de ligação, sendo possível para este biovetor ser um biovetor de direcionamento para uma região patológica. Isto deve-se ao facto de que, embora tenha sido explicado que os compostos de fórmula (II) são particularmente vantajosos como compostos não específicos, será também possível utilizar os mesmos como entidades de sinal para compostos específicos, por exemplo por acoplamento a biovetores de direcionamento. A vantagem da relaxividade, da estabilidade, da solubilidade do monómero é, assim, combinada com a utilização como produto específico. O grupo de ligação pode ser ligado aos compostos de fórmula (Ila) em D ou Fi e o grupo de ligação opcional ou a biomolécula, no caso da ausência do grupo de ligação, pode ser ligado aos compostos de fórmula (II) em XI a X3. Neste caso, pelo menos um dos grupos XI a X3 é uma biomolécula ou um grupo funcional capaz de ser ligado a uma 14 biomolécula, ou D ou Fi é um grupo funcional capaz de ser ligado a uma biomolécula.

Inúmeros biovetores que podem ser utilizados são divulgados, por exemplo, no documento WO 2004/112839, em particular nas páginas 60 a 82 e em particular os números 1 a 27, o acoplamento dos biovetores com quelatos sendo exemplificado, por exemplo, neste documento, em particular nas páginas 135-137, incorporado por referência. O Requerente, assim, estudou compostos de fórmula (VlIIa), escrito: (II)r—(grupo de ligação)s-(biovetor)t, com r, s e t tipicamente entre 1 e 5.

Inúmeros outros biovetores que podem ser utilizados foram divulgados, por exemplo, nos documentos WO 2005/049005, WO 2005/049095, WO 2005/042033 e WO 2001/9188: biovetores de direcionamento para VEGF e receptores para a angiopoietina, polipéptidos direcionados para a fibrina, péptidos para direcionar integrinas, os péptidos para o direcionamento das metaloproteases (MMP), péptidos de direcionamento, por exemplo, do receptor KDR/Flk-1 ou os receptores Tie-le, ligandos para o direcionamento de receptores GPCRs da proteina G, em particular colecistoquinina, péptidos RGD, agentes para direcionar depósitos amilóide, péptidos clivados por catepsina, inibidores de angiogénese, biovetores de direcionamento para a P-selectina ou para a E-selectina, inibidores da tirosina cinase, análogos da somatostatina, péptidos para o direcionamento de GRP ou receptores para a bombesina, biovetores dados em Topics in Current Chemistry, vol. 222, 260-274, Fundamentais of Receptor-based Diagnostic Metallopharmacuticals, e em particular: 15 biovetores de direcionamento para receptores de péptidos sobre-expressos em tumores (receptores LHRH, bombesina/GRP, receptores de VIP, receptores CCK, receptores para a taquicinina, por exemplo), em particular, análogos da somatostatina ou análogos da bombesina, péptidos derivados de octreotida que são opcionalmente glicosilados, péptidos VIP, a-MSHS, péptidos CCK-B; péptidos selecionados a partir de: péptidos RGD cíclicos, cadeia alfa de fibrina, CSVTCR, tuftsina, fMLF, YIGSR (receptor: laminina).

Pode ser feita utilização, em particular, de vetores para direcionar integrinas que têm uma especificidade superior a 1000, de preferência superior a 10 000, 100 000 ou mais, que têm uma possível utilização em MRI ou em cintigrafia, por exemplo mencionados em: J Med. Chem., 2003, 46, 4790-4798, Bioorg. Med. Chem. Letters, 2004, 14, 4515-4518, Bioorg. Med. Chem. Letters, 2005, 15, 1647-1650.

No que se refere aos péptidos, a preparação, a ciclização opcional e o acoplamento com quelatos são divulgados, por exemplo, no documento US 2004/0210041, em particular nas páginas 15 a 20 para o acoplamento de quelatos com dois péptidos diferentes.

Pode ser utilizado um grande número de grupos de ligação, desde que sejam capazes de interagir com pelo menos um grupo funcional do biovetor e pelo menos um grupo funcional dos compostos de fórmula (II) . Será feita menção particular de: A) - (CH2)2-fenil-NH, -(CH2)3-NH, -NH- (CH2) 2_NH, -NH-(CH2) 3-NH, nada ou uma ligação simples 16

Β) Ρ1-1-Ρ2, que são idênticos ou diferentes, PI e P2 sendo selecionados de 0, S, NH, nada, -CO2, -NCS, -NCO, -SO3H, -NHCO, -CONH, -NHCONH, -NHCSNH, -S02NH-, -NHS02-, OU esquarato com 1 = alquileno, alcoxialquileno, polialcoxialquileno, alquileno interrompido por fenileno, alquilideno ou alcilideno C) grupos de ligação divulgados na Patente US 6 264 914, capazes de reagir com os grupos funcionais amino, hidroxilo, tiol, carboxilo, carbonilo, hidrato de carbono, tioéter, 2-aminoálcool, 2-aminotiol, guanidinilo, imidazolilo ou fenol (do biovetor e do composto de fórmula (II)) ·

Os grupos capazes de reagir com os grupos tiol incluem compostos de α-haloacetilo do tipo -Z-CH2C0 (em que Z=Br, Cl ou I), que também podem ser utilizados para agir com grupos imidazolilo, tioéter, fenol ou amino.

Os grupos capazes de reagir, em particular com grupos amino incluem: compostos alquilantes: compostos de a-haloacetilo, derivados de N-maleimida, compostos de arilo (por exemplo, compostos nitro-haloaromáticos), aldeidos e cetonas, capazes de formação de bases de Schiff, derivados de epóxidos, tais como epicloridrina, derivados de triazina que contêm cloro que são altamente reativos no que se refere a nucleófilos, aziridinas, ésteres de ácido esquárico ou éteres de α-haloalquilo. compostos acilantes: isocianatos e isotiocianatos, cloretos de sulfonilo, ésteres, tais como ésteres de 17 nitrofenilo ou N-hidroxisuccinimidilo ésteres, ácido anídricos, acilazidas e azolactonas ou imidoésteres.

Os grupos capazes de reagir com grupos carboxilo incluem compostos diazo (ésteres de diazoacetato e diazoacetamidas), compostos que modificam os ácidos carboxílicos (por exemplo, carbodiimidas) , derivados de isoxazólio (cloroformato de nitrofenilo; carbonildiimidazoles, e outros) ou derivados de quinolina.

Os grupos capazes de reagir com grupos guanidinilo incluem compostos de diona, tais como fenilenodiglioxalo, ou sais de diazónio. D) grupos de ligação divulgados na Patente US 6 537 520 de fórmula (Cr6r7)g- (W)h- (Cr6ar7a)g,_ (Z)k- (W) 'h- (CrgrçOg'- (W)h- (Crgar9a)g'" com o significado divulgado neste documento.

E) grupos de ligação divulgados no documento WO 2005/009393, páginas 17 a 20. O Requerente também estudou os compostos de fórmula (VIIIa) acima indicados que compreendem uma parte de biovetor de direcionamento biológico de tal modo que sofra uma modificação na sua estrutura in vivo que modifica a relaxividade do composto. Esta modificação, descrita na técnica anterior como conceito SMART, tem lugar, por exemplo, em virtude de uma clivagem enzimática (proteases (metaloproteases, caspases, catepsinas, e outras) , lipases, nucleases, e outras) ou modificações físico-químicas locais numa região patológica. 18 A invenção também se refere a um método para o rastreio de compostos específicos de fórmula (II) que tenham uma elevada afinidade, que compreende a preparação dos compostos que compreendem uma parte de direcionamento, colocando em contacto com um alvo biológico e medindo a ligação (em particular a constante de dissociação) com o alvo.

Num outro aspecto particularmente vantajoso, a presente invenção refere-se a um complexo de um composto de fórmula (II) de acordo com a presente invenção, de um multímero de acordo com a presente invenção ou de um composto vetorizado de acordo com a presente invenção, vantajosamente de fórmula (VlIIa), com M, sendo que M representa um ião de um metal paramagnético de número atómico 21-29, 42-44 ou 58-70 (por exemplo, escândio, titânio, vanádio, crómio, manganês, ferro, cobalto, níquel, molibdénio, cobre, ruténio, cério, praseodímio, neodímio, promécio, samário, európio, gadolínio, térbio, disprósio, hólmio, érbio, túlio e itérbio; os elementos Gd (III) , Μη (II), európio e disprósio são particularmente preferidos) , ou um radionuclídeo selecionado a partir de "Tc, 117Sn, 111In, 97Ru, 67Ga, 68Ga, 89Zr, 177Lu, 47Sc, 105Rh, 188Re, 60Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 90Y, 159Gd, 149Pr e 166Ho, ou um ião de um metal pesado de número atómico 21-31, 39-49, 50, 56-80, 82, 83 ou 90.

Vantajosamente, o complexo de acordo com a presente invenção é tal que M é um ião de um metal paramagnético selecionado a partir de Gd3+, Mn2+ e Fe3+, vantajosamente Gd3+. Vantajosamente, o complexo de acordo com a presente invenção é selecionado a partir dos complexos com as seguintes fórmulas: 19

HN

HO

D

OH

5 6 20

13

21 OH

A invenção refere-se, em particular, aos complexos de compostos (II) de acordo com a presente invenção que sejam não iónicos e que exibem: uma relaxividade em água de pelo menos 9 mM_1s 1Gd 1, de preferência pelo menos 10, 12, 14 mM s Gd , uma osmolalidade entre 800 e 1200 mOsm/kg, vantajosamente da ordem de 900 a 1100, vantajosamente cerca de 1000 mOsm/kg (tonómetro Wescor 5220, Bioblock), para uma concentração de Gd de 400 a 600 mM, vantajosamente de cerca de 500 mM. um peso molecular entre 800 e 1300, em particular entre 950 e 1100, uma viscosidade inferior a 10 mPa.s (viscosimetro Anton Paar AMVn), vantajosamente entre 2 e 5 mPa.s. A comparação entre um complexo com Gd3+ de acordo com a presente invenção e os produtos do estado da técnica anterior está apresentada na tabela a seguir. 22 PRODUTO Dose de administração do produto em ser humano Relaxividade rl a 60 MHz em água Osmolalidade (mOsm/kg) Dotarem® 500 mM 3,5 mM.s'1Gd'1 1350 Magnevist® 500 mM 3,5 mM.s'1Gd'1 1950 Gadovist® 1000 mM 3,5 mM.s'1Gd'1 1400 Complexo dos compostos (II) com Gd3+ 500 mM 10 a 5 mM.s'1Gd“1 1000 A relaxividade é multiplicada por um factor de aproximadamente 3 em comparação com os produtos comerciais administradas de acordo com a mesma dose de produto, tal como acontece para uma dose de aproximadamente 500 mM (tipicamente uma dose injetável de 15 mL para Dotarem®).

Para a mesma dose injetada de gadolinio, os compostos são duplamente eficazes como Gadovist®, que pode ser administrado a 1 M (isto é, duas vezes mais concentrado do que Dotarem), sendo este resultado obtido por comparação do produtos (4 x 1000) para Gadovist® e dos produtos (11 x 500) para os complexos dos compostos (II). A viscosidade satisfatória dos complexos dos compostos (II) faz com que seja possível que os mesmos sejam utilizados clinicamente a uma concentração de 500 mM, em contraste com os compostos do tipo PCTA que transportam cadeias pesadas e que têm uma viscosidade elevada, não sendo possível que a sua concentração varie para além de cerca de 150 mM.

Entre os complexos dos compostos (n: ), os complexos dos compostos (II) para os quais a relaxividade rl é substancialmente estável entre 40 MHz (1 T) e 300 MHz (7 23 T) são particularmente vantajosos. 0 termo "relaxividade substancialmente estável entre 40 MHz e 300 MHz" tem como significado uma manutenção ou uma queda relativamente pequena em relaxividade, esta queda não excedendo os 20%, de preferência não excedendo os 10 a 20%.

Esta combinação de amplitudes preferidas dos parâmetros acima referidos não exclui, no entanto, complexos extraordinários que sofrem uma maior diminuição na relaxividade rl, por exemplo de 30% para os campos elevados da ordem de 3 a 7 Tesla, quando este parâmetro de estabilidade em campos elevados é compensado por outras caracteristicas fisico-quimicas altamente vantajosas para a utilização clinica do referido complexo. Este é o caso com o complexo 7 de acordo com a presente invenção, em particular, para o qual a relaxividade é 14,7 mM“1s“1Gd“1 a 20 MHz, 12,8 a 40 MHz, 10,4 a 300 MHz. Este complexo será assim muito eficaz para dispositivos de ressonância magnética entre 1 e 3 T, o que representa uma parte importante do conjunto de dispositivos. O Requerente constatou ainda, surpreendentemente, um aumento na relaxividade dos complexos dos compostos (II) em torno de 60 MHz (1,5 T) , com valores para rl da ordem de 12 a 15 mM”1s”1Gd”1, que assim os torna muito eficaz para os clinicos. O aumento da relaxividade entre 20 MHz e 60 MHz é de aproximadamente 20%.

Os compostos (II) particularmente vantajosos (em particular o composto 2 descrito em detalhe acima) são aqueles que exibem uma relaxividade estável mesmo em condições fisiológicas, com a presença de iões sem o efeito indesejado de redução devido aos iões endógenos. 24

Surpreendentemente, os Inventores constataram que a relaxividade dos complexos de acordo com a presente invenção (que transportam cadeias curtas de aminoálcoois) é nitidamente melhor do que a de compostos que compreendem uma estrutura de base de PCTA enxertados com cadeias curtas de álcool. 0 Requerente, assim, comparou dos resultados obtidos em comparação com os compostos do documento US 5 403 572, que exibem cadeias curtas de álcoois e não cadeias curtas de aminoálcoois.

Assim, o composto do Exemplo Comparativo 8, de acordo com a técnica anterior (ramificação -CH (CO2H) -CH2OH) tem uma relaxividade de apenas de 4,7, devido provavelmente à dobragem indesejável da ramificação, que interfere com as trocas de água do quelato (barreira da troca com o anel de uma das duas moléculas de água) . O composto do Exemplo Comparativo 9 de acordo com a técnica anterior (ramificação -CH (C02H)-CH2-CH2OH) tem uma relaxividade de apenas 6. 25Os resultados da comparação com a técnica anterior estão representados na Tabela 2 abaixo.

Produto Relaxividade rl em água (mM-ls-1) a 0,5 T Complexos dos compostos II (Exemplos 2 a 7) Rl = 10 a 15 Composto 2 ο í Λ o, OH d''N > >-[)- { Y-W- ,U( * (Η γγ /** 0 i- Lo 0 -\ Y --0H 2 " X Rl = 11 (PM = 970 PM/rl = 88 osmolalidade = 1000) Exemplo Comparativo (técnica anterior) sem acoplamento a cadeias curtas de aminoálcoois 7,2 Vo' V —C h o'^0 6,2 Exemplo Comparativo 8 (técnica anterior) .,0 [L4] °N o1—\ ySΛ /—«>' )—fT h—( HO °H 5 X HO 9 Exemplo Comparativo 9 (técnica anterior) 6 Composto com um núcleo DOTA que transporta grupos aminoálcoois com um peso molecular superior a 200 J l' 1 1 J Rl = 14 °A-A° 0*^w° <r~j ΐ/° HOCHjXOCHjY^'* ° ° "^Nkhom^oh FM—zUU) PM/rl = 140

Esta tabela também reflete a eficiência em massa muito vantajosa (proporção de PM/rl = peso molecular/relaxividade) dos compostos II. Notavelmente os 26 compostos II. a com núcleo de PCTA têm em combinação uma relaxividade muito boa, uma proporção de eficiência em massa optimizada (da ordem de 90) e baixa osmolalidade.

Os compostos da invenção são altamente vantajosos em comparação com produtos conhecidos que são complexos ou não muito estáveis ou de osmolalidade excessivamente elevada, em particular: quelatos que transportam cadeias longas que apresentam problemas de viscosidade e de custos de produção, quelatos que compreendem uma parte de direcionamento que se destina ao acoplamento no doente do produto injetado com macromoléculas biológicas, tais como a albumina; sendo o acoplamento em in vivo reflectido por um aumento na relaxividade por um efeito de imobilização do quelato.

Graças à sua não ionicidade, os compostos II têm uma osmolalidade da ordem de 1000 que se compara com cerca de 1400 e 2000 para compostos iónicos (respectivamente um e dois grupos COOH livres). Na prática, isto permite a concentração da solução injetada, a saber, para injetar um volume de produto muito menor (proporção de 1400/1000 e 2000/1000, respectivamente) no doente, o que é muito vantajoso para o seu conforto. Na prática, por exemplo 15 mL de composto II é injetado em vez de 20 mL para os compostos Dotarem ou outros da técnica anterior e a relaxividade é pelo menos duas vezes melhor.

Os complexos dos compostos (II) obtidos são, portanto, inteiramente adequados, como agentes de contraste não específicos (não vetorizados por uma entidade biovetor de direcionamento biológico; no entanto, são úteis em muitas 27 indicações de diagnóstico, tais como a angiografia, sistema nervoso central (CNS) e suas variantes). Além disso, podem ser esterilizados. A presente invenção adicionalmente refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com a presente invenção ou um multimero de acordo com a presente invenção ou um composto vetorizado de acordo com a presente invenção ou um complexo de acordo com a presente invenção, um veiculo farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, aditivos de formulação. A presente invenção refere-se em particular a uma composição farmacêutica lipídica que compreende um composto de acordo com a presente invenção ou um multimero de acordo com a presente invenção ou um composto vectorizado de acordo com a presente invenção ou um complexo de acordo com a presente invenção ligado a uma nanoparticula lipidica.

Vantajosamente, estas composições são emulsões lipídicas do tipo lipossomas, micelas ou partículas lipidicas análogas. Nestas composições, de preferência, o composto, multimero, ou complexo de acordo com a presente invenção é modificado de modo a apresentar pelo menos um grupo lipofilico para a ligação à partícula lipidica. Este composto, este multimero ou este complexo são, assim, acoplados, vantajosamente por acoplamento químico com um transportador lipofilico adequado, a partículas lipídicas ou sistemas de encapsulação de lípidos de preferência selecionados a partir de lipossomas, nanopartículas de fluorocarbono, emulsões de óleo e micelas. 28

Os compostos de fórmula (II) podem ser tornados lipofilicos nos grupos XI a X3, pela seleção de pelo menos um dos grupos XI a X3 de grupos lipofilicos, tais como os grupos -(CH2) a-C0NRllR12, ou

C5 O ^f (CHj)a-NH nriirm em que a = 1, 2 ou 3, Rn e Ri2 representam, independentemente, um átomo de H ou uma cadeia alquilo C7-C3o saturada ou insaturada, linear ou ramificada, substituída ou não substituída de cadeia alquilo opcionalmente interrompida por uma ligação dupla, 0, NH, NR13 ou S, em que R13 é um alquilo C1-C3, ou Rn e Rn representam, independentemente, um grupo —(espaçador)b ΟΡ(Ο)^—O CHj ÇH ÇH^ OCOR10OCOR,0 com b = 0, 1 ou 2 e Rio um grupo saturado ou insaturado de pelo menos 6 átomos de carbono que está opcionalmente substituído, o espaçador representando um grupo -CH2CH2-, ou polialquileno glicol, fosfatidiletanolamina ou um derivado de péptido, tal como serina. A presente invenção também se refere às composições de diagnóstico, em particular aos agentes de contraste, mais particularmente uma composição de diagnóstico para imagiologia por ressonância magnética, que compreende um composto de acordo com a presente invenção ou um multimero de acordo com a presente invenção ou um composto 29 vetorizado de acordo com a presente invenção ou um complexo de acordo com a presente invenção.

Um processo para a preparação de um complexo metálico de acordo com a presente invenção de um composto de fórmula (lia), em que XI a X3 representam, independentemente, (CH2) n-CO-NR7R8, em que n = la3eR7eR8 são como definido acima, compreende as etapas: a) fazer reagir o macrociclo condensado da seguinte fórmula (IV)

IV em que D, E e Fi são como definido acima, com um composto de fórmula R'OOC-CHQ-(CH2) n-COOR', em que n = 1 a 3, Q representa um grupo de saida, vantajosamente um átomo de halogéneo, de preferência bromo, ou um grupo (C2— C3) alquilsulfonato, tosilato ou triflato, e R' representa H ou um grupo (C1-C3) alquilo ou benzilo, com a finalidade de obter o hexaácido ou éster da seguinte fórmula (V)

V; 30 b) que opcionalmente hidrolisa ou hidrogena os grupos funcionais éster do hexaácido de fórmula (V) , quando R' é diferente de H, a fim de obter o hexaácido de fórmula (Va)

Va em que D, E e Fi são como definido acima e n está entre 1 e 3; c) fazer reagir o hexaácido de fórmula (Va) com um sal ou um óxido de metal a ser complexado, a fim de obter o complexo correspondente ou um dos seus sais com uma base; d) fazer reagir o complexo, na presença de um agente que ative os grupos funcionais do ácido carboxilico, com o grupo aminoálcool ou grupos NHR7R8, em que R7 e R8 são como definido acima, de forma a obter a triamida de fórmula (lia), em que XI a X3 representam, independentemente, - (0¾) n-CO-NR7R8 em que n=la3eR7e R8 são como definido acima. A substituição dos átomos de azoto (etapa (a) ) é levada a cabo, por exemplo, por ação de um éster a-bromoglutárico na presença de uma base inorgânica ou orgânica, tal como NaOH, Na2C03 ou N(C2Hs)3, em solução num solvente polar, tal como um álcool ou, de preferência, um solvente aprótico, tal como acetonitrilo ou tetra-hidrofurano. A hidrólise dos grupos éster funcionais (etapa (b) ) é vantajosamente obtida por ação de uma base ou de um ácido num meio aquoso ou aquoso/alcoólico. 31 A complexação (fase (c) ) é realizada convencionalmente, por exemplo como divulgado no documento US 5 554 748 ou em Helv. Chim. Acta, 69, 2067-2074 (1986).

Em particular, com a finalidade de obter o complexo de gadolinio, GdCl3 ou Gd2C>3 pode reagir com o composto de fórmula (V) em solução aquosa a um pH entre 5 e 6,5. É também possível efetuar a troca do catião de um complexo de fórmula (Va) ou (II), quando a estabilidade relativa dos dois complexos o permite, em particular com uma resina de troca iónica. A reação de amidação (etapa (d) ) pode ser obtida num meio aquoso, opcionalmente na presença de um terceiro solvente, tal como dioxano ou tetra-hidrofurano, com um agente de ativação, tal como uma carbodiimida solúvel, por exemplo as que transportam um grupo amina divulgado em J Org.

Chem., 21, 439-441 (1956) e 26, 2525-2528 (1961) ou documento US 3 135 748 ou que transportam um grupo de amónio quaternário divulgados em Org. Synth., V, 555-558, que se refere a l-etil-3-(3-dimetilamino)carbodiimida (EDCI) e l-ciclo-hexil-3-(2-morfolinoetil)carbodiimida meto-p-toluenossulfonato. Pode também ser realizado com N-hidroxissulfosuccinimida, como descrito em Bioconj ugate Chem., 5, 565-576 (1994), ou tetrafluoroborato de 2-succinimido-l,1,3,3-tetrametilurónio e análogos, descrito em Tetrahedron Letters, 30, 1927-1930 (1989).

Outro processo de acordo com a etapa (d) consiste em formar um éster intermediário ativado fazendo reagir, por exemplo, N-hidroxissulfosuccinimida (NHS) ou hidroxibenzotriazole (HOBT), na presença de carbodiimida, tal como EDCI, com o complexo (Va) , que pode ser 32 dissolvido por salificação com um catião inorgânico, por exemplo um amónio ou de sódio.

Com 2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina (EEDQ), a reação pode ser levada a cabo num meio aquoso/alcoólico. As aminas NHR7R8 são compostos conhecidos disponíveis comercialmente ou podem ser preparadas por meio de processos bem conhecidos de um especialista na técnica.

De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se a um método de diagnóstico e a um método de tratamento radiofarmacêutico utilizando um complexo tal como descrito acima.

De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se à utilização de um composto ou complexo, como descrito acima, na preparação de uma composição de diagnóstico ou composição radiofarmecêutica.

Para o diagnóstico por ressonância magnética, a administração intravenosa, por injeção, geralmente em solução, tipicamente tem lugar a uma dose de 1 a 500 ymol de Gd/kg. As doses unitárias dependerão da natureza do produto de contraste, da via de administração e do doente e, em particular, da natureza do distúrbio a ser estudado.

Para injeção intravenosa e observação por ressonância magnética, a concentração da solução será tipicamente entre 0,001 e 1 mole/litro e, conforme o caso, de 0,001 a 0,3 milimole/kg serão administrados ao doente. Os produtos de contraste que compreendem os complexos de acordo com a presente invenção destinam-se, em particular, para a imagiologia do cérebro, órgãos, tais como o figado, coração ou rins, a totalidade ou parte do sistema vascular 33 (coronariografia, angiografia, e outros), e para estudar a perfusão destas regiões e caracterizar as anomalias em permeabilidade tumoral, inflamatória ou isquémica.

Para o diagnóstico radiofarmacêutico, a administração intravenosa por injeção, geralmente em solução salina, tipicamente tem lugar a uma dose de 1 a 100 mCi por 70 kg de peso corporal, de preferência de 5 a 50 mCi. A escolha do radionuclideo depende em particular da sua semivida (geralmente de 0,5 a 8 dias), da energia de emissão do radionuclideo (em particular radionuclideos de radiação β) . O radioisótopo é incorporado por meio de métodos conhecidos adequados. Para 99 mTc, é apresentado um protocolo geral no documento WO 2005/009393, páginas 25-26, no caso de um péptido: o conjugado não metálico de quelato-grupo de ligação ao péptido é dissolvido, quando existe um grupo SH no péptido, é feita a utilização de um grupo que protege o grupo tiol da oxidação, a marcação utilizada é pertecnetato de sódio e um agente de redução para reduzir o tecnécio, o conjugado marcado obtido é separado. Um protocolo com transquelação é apresentado na página 26.

Deve ser lembrado que é também possível marcar o quelato antes do acoplamento com o biovetor. Por exemplo, para i:L1In e 177Lu, é preparada uma solução que compreende 30-150 yg de conjugado não metálico grupo quelato que liga o biovetor (péptido) e 20 mCi de 177LuCl3. O pH é ajustado, por exemplo para 6. A solução é incubada à temperatura ambiente durante 60 minutos. O 177Lu não complexado é quelado por adição de uma solução de Na2EDTA. A formação dos complexos marcados é avaliada numa coluna de 34 cromatografia de troca iónica, por exemplo Sephadex C25. A solução preparada é ajustada ao pH fisiológico.

Para utilização como agentes de contraste de raios-X, a concentração de átomos pesados é tipicamente de 0,1 M a 5 M, com concentrações por administração intravenosa da ordem de 0,5 a 1,5 mmol/kg.

De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se à utilização de um complexo tal como descrito acima na preparação de uma composição pretendida para imagiologia óptica. A invenção também se refere a um método de imagem que compreende a síntese de um complexo que compreende um metal paramagnético de acordo com a invenção, a sua administração a um doente e a imagiologia por ressonância magnética. A invenção também se refere a um método de imagiologia que compreende a síntese de um complexo radiofarmacêutico de acordo com a invenção capaz de atingir uma região patológica, a sua administração a um doente e a imagiologia por SPECT ou cintigrafia γ planar ou tomografia por emissão de positrões (método PET). A invenção também se refere a composições que compreendem um complexo de acordo com a presente invenção para imagiologia por ressonância magnética, quando M representa um catião paramagnético, ou para medicina nuclear, quando M representa um radioelemento, ou para radiologia, quando M é o catião de um átomo pesado, que absorve os raios X, sendo possível que as referidas composições contenham os aditivos e veículos habituais para a administração por via oral ou parentérica. 35

De um modo mais genérico, as condições habituais para utilização em diagnóstico ou opcionalmente a utilização terapêutica (em radioterapia) que podem ser utilizadas para os complexos de acordo com a presente invenção são apresentadas no documento WO 2005/062828, nas partes "Diagnostic and Therapeutic Uses" e "Radiotheraphy".

No caso de radionuclideos para imagiologia por PET, PET-SCAN ou métodos análogos, a sintese dos quais é possivel no momento da utilização, excepto perto do local da injeção do

produto no doente, será vantajosa a utilização de um biovetor (por exemplo a somatostatina) , acoplado a um composto (II) ou qualquer outro composto utilizado em PET (por exemplo NOTA) que exibe um comportamento "transparente" em relação ao biovetor. Mais especificamente, esta transparência consiste no facto do composto não interferir de forma significativa com o reconhecimento (a afinidade) do biovetor para o seu alvo biológico. Esta transparência é promovida pelos grupos hidrófilos das cadeias de aminoálcool, que são capazes de mascarar o composto, mesmo quando este se encontra na sua forma complexada. Um teste de rastreio da afinidade do biovetor com várias estruturas e comprimentos de cadeias de natureza hidrofilica pode, assim, tornar possivel selecionar satisfatoriamente os produtos de fórmula (VIII). Além disso, o efeito de mascaramento desejado pode ser estudado para grupos químicos que não sejam aminoálcoois.

Este efeito protetor sobre o biovetor será altamente vantajoso em especial no caso de gálio 68Ga, para o qual um protocolo extemporâneo de preparação apropriado (protocolo em particular de Maecke et al. de germânio 68Ge, tornando possível melhorar muito marcadamente a utilização do 36 radionuclideo) é conhecido por um especialista na técnica. 0 acoplamento do composto com gálio (por exemplo divulgado no documento US 6 071 490, com um conjugado DTPA-péptido) é realizado utilizando, por exemplo, 10-100 mCi de 68Ga. Podem também ser escolhidos grupos de ligação apropriados entre o composto e o biovetor de modo a facilitar o efeito de dissimulação desejado, que protege a afinidade. Em particular, de acordo com uma implementação, é utilizado um grupo de ligação hidrofilico (derivado de PEG, por exemplo). A dimensão dos grupos de ligação irá vantajosamente ser suficientemente longa para mover o composto para longe da região ou regiões do biovetor que interagem com o alvo biológico. A invenção também se refere a métodos de imagiologia médica, que consistem na administração, ao doente, de uma composição que compreende um complexo de um composto de fórmula (II) de acordo com a presente invenção e na observação da região a ser estudada obtida por ressonância magnética, por cintigrafia ou sob raios-X.

As composições de diagnóstico da invenção podem compreender, com um complexo da invenção, aditivos, tais como antioxidantes, tampões, reguladores de osmolalidade, agentes estabilizadores, sais de cálcio, magnésio ou zinco, ou pequenas proporções de outros quelatos destes catiões ou de compostos complexantes. Exemplos de formulação aparecem nas obras gerais e, em particular em Pharmaceutical Science Remington, 18a Edição (1990), Mack. Pub. É possível, por exemplo, preparar soluções salinas estéreis ou aquosas que compreendem adjuvantes de formulação (lactose, metilcelulose, manitol) e/ou tensioativos (lecitinas, Tween®, e outros) . 37

Para complexos não iónicos (tais como, por exemplo, os complexos dos compostos de fórmula (II) de acordo com a invenção), podem ser utilizados excipientes, por exemplo, o manitol.

Uma dose farmaceuticamente aceitável refere-se a uma dose apropriada para uma utilização terapêutica ou de diagnóstico. A invenção, salvo indicado de outra forma, abrange todas as formas quirais, diastereoisoméricas, racémicas, em particular cis-trans, R-S, L-D, dos compostos descritos.

Para além dos compostos (II) acima descrito, o Requerente estudou quelatos de fórmula: tBu-OCO—f

C00-f8u COCMBu (CH2)r>-COO-Bn

tBu-OCQ

COO-tBu e <A2) <A1)

N—CH

COON

CHa-COOH (A3) em que D, E e Fi são como definido acima 38 o quelato orgânico (ou a composição que compreende este quelato orgânico) exibe um excesso enantiomérico, isto é, tem mais de 50% do isómero (R) ou do isómero (S), do quelato. Em particular, n será entre 1 e 4, especialmente n = 2, e estará presente um excesso de pelo menos 80, 85, 90 ou 95% de um dos dois isómeros. Tal excesso pode ser vantajoso na obtenção de agentes de contraste enriquecidos ou opticamente puros que possuem relaxividade melhorada. COO-tBu / CHv

Para (Al) , o grupo * pode ser ligado a qualquer um dos três átomos de azoto. COO-tBu / CHn

Para (A2) , o grupo (CH?)n COOH pOCje ser iigac[0 a qualquer um dos três átomos de azoto.

COOH /

CH

Para (A3) , o grupo · (CHjJn-COOH pOC^e ser iígado a qualquer um dos três átomos de azoto.

Tais compostos podem ser utilizados para a síntese de compostos acoplados a biovetores, como é divulgado por DOTAs nos Exemplos 4 e 5 do documento WO 2005/001415.

De uma maneira mais genérica, o Requerente estudou qualquer quelato de cadeias curtas ao qual aminoálcool são enxertadas. Estes quelatos são, por exemplo, DOTMA, NOTA, TETA, TTHA, CYDTA, HPD03A, PA-DOTA, MeO-DOTA, MXDTPA, DTPA, PDTA, MECAM, CMDOTA, CDTA, CDTPA ou do tipo OTTA, AAZTA (Inorganic Chemistry, vol 43, n° 24, 2004, 7588-7590) e qualquer derivado do mesmo, sendo acoplados a cadeias aminoálcool diretamente ou por meio de agentes 39 ligantes), a nomenclatura da qual é conhecida, qualquer que seja o isomerismo dos quelatos.

Além disso, o Requerente estudou compostos que possuem uma estrutura de base de PCTA, de fórmula

N—{CR^R^v-G, em que: U, V e W são independentemente 1 ou 2/ cada R13 é selecionado independentemente do grupo: H, alquilo, alcoxi, cicloalquilo, arilo, aralquilo, alquilamino, alcanoilo ou alcanoiloxi, sendo possível que cada um seja substituído, ou representa um grupo funcional capaz de formar um conjugado com uma biomolécula ou de formar de um multímero deste composto de fórmula (VII) ou um grupo funcional que forma um conjugado com uma biomolécula;

Gi, G2 e G3 representam independentemente -C00R14, P(0) (OR14)2, -P (0) (0R14) (R14) , -C(0)N(R14)2 ou -R15-P(0)- 0R14 (fosfinatos em que cada R14 é H e cada R15 é um alquilo (C1-C4) ou um arilalquilo) ; cada Ki a Ki2 é independentemente selecionado de: H, alquilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo ou um grupo funcional capaz de formar um conjugado com uma biomolécula ou de formar um multímero deste composto de fórmula (VII).

Na fórmula (VII), aplicam-se as definições seguintes: 40 "cicloalquilo" refere-se a um grupo hidrocarboneto cíclico de 3 a 8 átomos de carbono. Os grupos podem ser não substituídos ou substituídos, por exemplo por: alquilo, halogéneo, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcanoílo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, nitro, ciano, carboxilo, carbamoílo, alcoxicarbonilo alquilsulfonilo, sulfonamido e outros; "alcoxi" refere-se a -alquil(O); "arilo" refere-se a fenilo, piridilo, furilo, tiofenilo, pirrolilo, imidazolilo e outros. Os grupos arilo substituídos preferidos são substituídos por 1, 2 ou 3 halogéneos, nitroamino, maleimido, isotiocianato, hidroxilo, hidroxialquilo, alquilo, alcoxi, carbamoílo, carboxamido, acilamino ou carboxilo; "aralquilo" refere-se a um grupo arilo ligado a um grupo alquilo; "halogéneo" refere-se a bromo, flúor, cloro ou iodo; "alcanoílo" refere-se a alquil-(C=0)-; "alcanoiloxi" refere-se a alquil-(C=0)-O-; "alquilamino" refere-se a -NHR com R sendo um alquilo.

Em todo o texto, um grupo hidroxialquilo refere-se a uma cadeia alquilo linear ou ramificada que compreende um ou mais grupos hidroxilo. A invenção será ilustrado com o auxílio dos seguintes exemplos não limitativos.

Medições de Relaxividade:

Os tempos de relaxamento TI e T2 foram determinados por procedimentos padrão de um dispositivo Minispec 120 (Bruker) a 20 MHz (0,47 T) e 37 °C. O tempo de relaxamento 41 longitudinal TI é medido utilizando uma sequência de recuperação de inversão e o tempo de relaxamento transversal T2 é medido por meio de uma técnica de CPMG.

As taxas de relaxamento RI (= 1/T1) e R2 (= 1/T2) foram calculadas para diferentes concentrações totais de metais (variando de 0,1 x 10”3 a 1 x 10~3 mol/L) em solução aquosa a 37 °C. A correlação entre RI ou R2 como função da concentração é linear e o declive representa a relaxividade rl (Rl/C) ou r2 (R2/C), expressa como (1/segundo) x (1/mmol/L) , isto é, mM-1.s_1.

Os compostos foram preparados em meios diferentes: água, NaCl, citrato, fosfato, carbonato, mistura de iões. O Requerente confirmou que os produtos obtidos são estáveis e, em particular não sofrem transmetalação pelos protocolos apropriados. Contrariamente ao quelatos lineares em particular, na presença de ZnCl2, o produto é completamente estável (protocolo padrão: concentração de produto = concentração de ZnCl2 = 1,25 mM na solução estudada; temperatura 37 °C) .

Exemplo 1:

OH NH É preparada uma solução que compreende 1,05 mol de amoníaco em 200 mL de água. O pH é ajustado para 6 com 42 HC1. São adicionados à solução precedente 17,5 g de complexo de gadolinio de 3,6,9,15- tetraazabiciclo[9.3.1]pentadeca-1(15),11,13-trieno-3, 6,9-tri(ácido α-glutárico), 1,96 g de HOBT, 24,92 g de EDCI e 150 mL de dioxano. O pH é ajustado para 6. Após 24 h, o meio de reação é concentrado até aproximadamente 70 mL. O meio de reação é precipitado de 700 mL de etanol + 200 mL de éter. O sólido é removido por filtração e, em seguida, purificado por cromatografia em silica RP2 silanizada, sendo a eluição levada a cabo com água. São obtidos 5,43 g do produto 1. m/z (ES+) = 749.

Exemplo 2:

HO

O V-O' ;0 HO :0

OH

HO' OH 2

OH É preparada uma solução que compreende 0,763 g de 3-aminopropano-1,2-diol em 40 mL de água. O pH é ajustado para 6 com HC1. São adicionados à solução precedente 2 g de complexo de gadolinio de 3,6,9,15- tetraazabiciclo[9.3.1] pentadeca-1(15),11,13-trieno-3,6,9-tri (ácido α-glutárico) , 0,162 g de HOBT, 1,99 g de EDCI e 30 mL de dioxano. O pH é ajustado para 6. Após 24 h, o meio de reação é concentrado até aproximadamente 20 mL. O meio de reação é precipitado de 100 mL de etanol + 100 mL de éter. O sólido é removido por filtração e, em seguida, purificado por cromatografia em silica RP18, sendo a eluição levada a cabo com água/CHsCN: gradiente de 100% a 43 90% (ν/ν) . São obtidos 980 mg do produto 2. m/z (ES +) = 971.

Exemplo 3:

3 É preparada uma solução que compreende 0,512 g de etanolamina em 40 mL de água é preparado. O pH é ajustado para 6 com HC1. São adicionados à solução precedente 2 g de complexo de gadolinio de 3,6,9,15- tetraazabiciclo[9.3.1]pentadeca-1(15),11,13-trieno-3,6,9-tri (ácido α-glutárico) , 0,162 g de HOBT, 1,99 g de EDCI e 30 mL de dioxano. O pH é ajustado para 6. Após 24 h, o meio de reação é concentrado até aproximadamente 20 mL. O meio de reação é precipitado de 100 mL de etanol + 100 mL de éter. O sólido é removido por filtração e, em seguida, purificado por cromatografia em silica RP-18, sendo a eluição levada a cabo com água/CH3CN: gradiente de 100% a 90% (v/v) . São obtidos 560 mg do produto 3. m/z (ES + ) = 881. HPLC: Coluna Lichrospher RP18, 250 x 4, 6 mm, caudal: 1 mL/min, detecção por UV a 201 nm.

Fase móvel: A: água/B: CH3CN 44

Tempo (min) % A % B 0 98 2 20 70 30 30 50 50

Tempo de retenção (tr) = 10 a 11 min (vários picos)

4 É preparada uma solução que compreende 6,1 g de serinol em 110 mL de água. O pH é ajustado a 6 com HC1. São adicionados à solução precedente 11,25 g de complexo de gadolinio de 3, 6, 9,15-tetraazabiciclo[9.3.1]pentadeca-1(15) , 11, 13-trieno-3,6,9-tri(ácido α-glutárico), 1,3 g de HOBT, 16 g de EDCI e 50 mL de dioxano. O pH é ajustado para 6. Após 24 h, o meio de reação é concentrado até à secura. A pasta é endurecida em etanol. 0 sólido é removido por filtração e, em seguida, purificado por cromatografia em silica RP2 silanizada, sendo a eluição levada a cabo com água. São obtidos 5,2 g de produto 4. m/z (ES+) = 971. HPLC: Coluna Lichrospher RP18, 250 x 4, 6 mm, caudal: 1

mL/min, detecção por UV a 201 nm. Fase móvel: A: água/B: CH3CN 45

Tempo (min) % A % B 0 98 2 20 70 30 30 50 50

Tempo de retenção (tr) = 10-12 min (vários picos)

Exemplo 5:

5 São dissolvidos 3,66 g de glucamina em 70 mL de água. O pH é ajustado para 6 com HC1. São adicionados à solução precedente 5 g de complexo de gadolinio de 3,6,9,15-tetraazabicyclo[9.3.1]pentadeca-1(15),11,13-trieno-3, 6,9-tri(ácido α-glutárico) , 0,372 g de HOBT, 4,576 g de EDCI e 50 mL de dioxano. O pH é ajustado para 6. Depois de reação à temperatura ambiente por 9 h, 6 g de glucamina são adicionados ao meio de reação e o pH é ajustado a 6 com HC1. São adicionados 0,372 g de HOBT e 4,576 g de EDCI ao meio de reação. O pH é ajustado a 6. Depois de reação de um dia para o outro, o meio de reação é concentrado. Os 26 g de produto em bruto são purificados por HPLC preparativa numa coluna Lichrospher RP18. São obtidos 4,7 g do produto 5. m/z (ES+) = 1241

Exemplo 6: 46

6 São dissolvidos 2,896 g de 3-metilamino-l,2-propanodiol em 100 mL de água. O pH é ajustado para 6 com HC1. São adicionados à solução precedente 5 g de complexo de gadolinio de 3,6,9,15-tetraazabiciclo[9.3.1]pentadeca-1 (15),11,13-trieno-3,6,9-tri(ácido α-glutárico) , 0,372 g de HOBT, 4,576 g de EDCI e 75 mL de dioxano. O pH é ajustado para 6. Depois de reação à temperatura ambiente durante 8 h, são adicionados 2,896 g de 3-metilamino-l,2-propanodiol ao meio de reação. O pH é ajustado a 6 com HC1. São adicionados 0,372 g de HOBT e 4,576 g de EDCI ao meio de reação. O pH é ajustado para 6. Depois de reação de um dia para o outro, o meio de reação é concentrado. O 29 g de produto em bruto são purificados por HPLC preparativa numa coluna Lichrospher RP18. São obtidos 3,8 g do produto 6. m/z (ES+) = 1213

Exemplo 7: 47

aminopropanodiol tfi1 6

Intermediário 3: São dissolvidos 5 g do composto Int. 1, 41 g de éster dietilico do ácido 2-bromo-hexanodióico (pureza de 75%) e 16 g de K2C03 em 400 mL de acetonitrilo. A solução é levada a refluxo de um dia para o outro. A solução é filtrada e o filtrado é concentrado e, em seguida, recolhido numa mistura de água/HCl ao pH = 2. O filtrado é lavado com éter. A fase aquosa é neutralizada e, em seguida, extraida com CH2C12. A fase orgânica é concentrada. São obtidos 12 g de intermediário 4 sob a forma de óleo. m/z = 806 48

HPLC: Coluna: Symmetry, C18, 250 x 4,6 mm; Fase móvel: A: água + TFA (pH = 2,8)/B: CH3CN

Tempo Caudal % A % B 0 1 98 2 5 1 90 10 8 1 90 10 13 1 85 15 25 1 60 40 30 1 40 60 45 1 20 80

Tempo de retenção (tr) = 34,5 min Intermediário 4: São dissolvidos 12 g de intermediário 3 em 60 mL de solução de hidróxido de sódio 5 N e 60 mL de metanol. A solução é levada a refluxo de um dia para o outro e é então concentrada. A solução é subsequentemente neutralizada por passagem através de uma resina Amberlite IRC50 e, em seguida, novamente concentrada. O óleo obtido é endurecido em etanol. São obtidos 9,5 g de intermediário 4 na forma de cristais com um rendimento de 100%. m/z = 638

HPLC: Coluna: Symmetry, C18, 250 x 4,6 mm Fase Móvel: A: água + TFA (pH = 2,8)/B: CH3CN

Tempo Caudal % A % B 0 1 98 2 5 1 90 10 8 1 90 10 13 1 85 15 25 1 60 40 30 1 40 60 45 1 20 80 49

Tempo de retenção (tr) = 18 min (2 picos)

Intermediário 5: São dissolvidos 9,5 g de intermediário 4 em 150 mL de água. O pH é ajustado para 6. são adicionados 2,73 g de Gd2C>3 a solução, que é levada a 60 °C durante 8 h. A solução é concentrada e depois o residuo é retomado em etanol. São obtidos 9 g de intermediário 5 na forma de cristais brancos, m/z = 792,25

HPLC: Coluna: Symmetry, C18, 250 x 4,6 mm Fase móvel: A: água + TFA (pH = 2,8)/B: CH3CN

Tempo Caudal % A % B 0 1 98 2 5 1 90 10 8 1 90 10 13 1 85 15 25 1 60 40 30 1 40 60 45 1 20 80

Tempo de retenção (tr) = 18,3 a 21 min (4 picos)

Produto 7:

São dissolvidos 5 g de 3-aminopropano-l, 2-diol em 120 mL de água e o pH é ajustado para 6. São adicionados à solução precedente 9 g de intermediário 5, 1,04 g de HOBT e 12,8 g de EDCI. A solução é agitada ao pH 6 durante 18 h. A solução é evaporada, o óleo obtido é retomado em etanol e os cristais que se formaram são removidos por filtração. Os cristais obtidos são purificados por cromatografia em silica silanizada RP2. São obtidos 2,9 g de produto 7. m/z = 1012,19 50

HPLC: Coluna: Symmetry, C18, 250 x 4,6 mm Fase móvel: A: água + TFA (pH = 2,8)/B: CH3CN

Tempo Caudal % A % B 0 1 98 2 5 1 90 10 8 1 90 10 13 1 85 15 25 1 60 40 30 1 40 60 45 1 20 80

Tempo de retenção = 13 min (3 picos)

Exemplos Comparativos 8 e 9: produtos da técnica anterior (US5 403 572) O Requerente teve que preparar protocolos apropriados.

Exemplo Comparativo 8:

Int. 3: 8 51 São introduzidos 3,83 g do composto Int. 1 e 12,82 g de K2CO3 calcinado anidro em 50 mL de acetonitrilo. Depois de agitação e refluxo durante 30 min, são adicionados 15 g de 3-benziloxi-2-bromopropanoato. Depois de reagir em refluxo com agitação durante 2 h 15, a suspensão, ainda quente, é filtrada através de um funil de vidro sinterizado. O sólido é lavado com acetonitrilo. Os filtrados são concentrados e, em seguida, retomados em 150 mL de HC1 5 N. A solução aquosa é extraida três vezes com Et20, depois três vezes com acetato de etilo e depois três vezes com diclorometano. As fases orgânicas resultantes das extrações com diclorometano são combinadas, secas sobre MgS04 e depois concentradas. São obtidos 6,4 g do produto Int. 3 com um rendimento de 67%. m/z (ES+) = 826.

Int. 4: É dissolvido o Int. 3 em 200 mL de HC1 a 37% e, em seguida, deixado a reagir com agitação a 40 °C durante 9 dias. O meio de reação é concentrado e depois purificado por cromatografia em silica silanizada RP2 (eluição com água). São obtidos 2,9 g do produto Int. 4 com um rendimento de 80%. m/z (ES +) = 468.

Produto 8: É dissolvido o Int. 4 em 120 mL de água. O pH é ajustado para 5 e, em seguida, são adicionados 1,134 g de Gd203. Depois de reagir com agitação a 40 °C durante 6 h mantendo o pH entre 5,2 e 5,7 com HC1 1 N, o meio de reação é filtrado através de um filtro 0,22 ym, concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em silica silanizada RP2 (eluição com água). São obtidos 1,4 g de produto 8 com um rendimento de 36%. m/z (ES +) = 625. 52 Exemplo Comparativo 9:

Int 1 ínt 2

Gd^O-j

Int.3: São dissolvidos 10 g de PCTA e 39,4 g de K2CO3 calcinado anidro em 100 mL de acetonitrilo a refluxo sob atmosfera de árgon. São adicionados 26,07 g de a-bromo-γ- butirolactona. Depois de reagir ao refluxo com agitação muito vigorosa e sob atmosfera de árgon durante 24 h, o meio de reação é filtrado. O sólido é lavado com

acetonitrilo. Os licores são concentrados. São obtidos 5,8 g de produto e, em seguida, purificados em 200 g de silica, sendo a eluição levada a cabo com CH2Cl2/MeOH (9/1). São obtidos 1,93 g do produto Int. 3 com um rendimento de 13%. m/z (ES +) = 668

Produto 9: É dissolvido o Int. 3 em 50 mL de água. O pH é ajustado para 5 e a temperatura a 60 °C. São adicionados 0,762 g de Gd203 ao meio de reação. O pH é mantido entre 5 e 5,5, durante as 5 horas de reação a 80 °C. O meio de reação é 53 filtrado através de um filtro 0,22 ym e em seguida concentrado. São obtidos 2,71 g de produto e, em seguida, purificado por cromatografia em silica silanizada. São obtidos 1,38 g do produto 9 com um rendimento de 50%.

Exemplo 10: 0 complexo de acordo com o Exemplo 2

CH,OH-CHQH-CH,-NHOC(CH,),-CH ch2)/íh2

^ N Gd3+ N—ÇH-(CH?)kCONH-CH2-CHOH-CH2OH COO- n > COO-

CH-{CH2)2CONH-CH2-CHOH-CHíOH coo- é acoplado a um biovetor que compreende um grupo funcional ácido carboxilico ou indiretamente utilizando um grupo de ligação.

Por exemplo, um biovetor peptidico, cujas caracteristicas estão apresentadas na Tabela 3 abaixo, é acoplado usando um grupo de ligação esquarato. N° Sequência PM p em mg 1 Asp(tBu)-Ala-His(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)OH 1073,31 172 2 Leu-Ile-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Pro-Phe-OH 945,22 151 3 Pro-Gly-Asp-(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-OH 1008,25 161

Etapa 1: Formação do composto 540a<s^“0,

OH 1 g de composto de acordo com o Exemplo 2 (CH2)3NH2 CH jOH "CHOH-C H ,-N HOC{CH,)2~C l·

c00' “o-

-N Gd3* N—CH-(CH2)2CONH-CH2-CHOH-CH2OH CH-{CH2)2CONH-CH2-CHOH-CH2OHcoo- é seco com tolueno e depois suspenso em 20 mL de DMSO anidro sob uma manta de árgon. São então adicionados 0,4 mL de Et3N seco sobre crivos (1,7 eq) e 720 mg de esquarato de dietilo (Aldrich, 2,5 eq.) . A mistura é agitada à temperatura ambiente sob uma manta de árgon durante 1 hora. O meio é precipitado de 120 mL de éter. O óleo amarelado é lavado com éter etilico. O sólido obtido é removido por filtração e, em seguida, lavado com diclorometano.

Após filtração, são obtidos 700 mg de um sólido branco. 55

Etapa 2: Acoplamento dos péptidos No. 1, 2 ou 3 com o derivado de esquarato 0 composto obtido na etapa 1 (155,5 mg, 1,35 x 10 mol) é dissolvido em 15 mL de solução aquosa de Na2C03, pH 9,4. O péptido protegido 1, 2 ou 3 (1,6 x IO-4 mol) é introduzido, mantendo o pH a 9,4 por adição de Na2C03· Se o péptido não for solúvel em água, são adicionadas algumas gotas de DMF até que a dissolução esteja completa. Depois de reagir à temperatura ambiente durante 48 h, o meio é precipitado a partir de uma mistura de etanol/éter etílico. O precipitado é removido por filtração e depois seco.

Etapa 3: Desproteção O composto obtido na etapa 2 é dissolvido numa mistura de 10 cm3 de TFA/TIS/H20 na proporção 90/5/5. O meio é agitado à temperatura ambiente durante 5 horas e depois o solvente é evaporado à pressão reduzida. O resíduo é retomado em éter etílico e o precipitado é removido por filtração e depois seco. O produto é subsequentemente purificado por HPLC preparativa numa coluna Symmetry® com um eluente composto por água/TFA pH 3/CH3CN. São obtidos compostos acoplados específicos, por exemplo, os compostos 10a, 10b e 10c, que se seguem, funcionalizados na posição C. 56

1 Ο ί Κ η 9 ί V Η Ô Ο Ο 3 /\ Ψ ΙΉ Η ? Ν- Μ = Η Λ 'Λ*° r Ο ο η -ΟΗ Η ? | Η Ν *>..Ν ... V tí ο kHjõU υ Η

ο J

CH ν CH

O ογ ΝΗ T 1 K5

HD'J Ο Ν Ν θΓ Ν-ί b.N ILi Ο 1. ο Μ Ο ί }ο ÇH ~W~ '"CH Ο Η

Κ> K)J ο °Λ

ηΊ Η Q

ί. Ν . -N0f Ν (/ w I Ο ι Υ-Ό ' ) \ ΟΗ , ο. ! N fN >M Η o 'í NH, cp

, CH I! O

CH

CH

Τ' " ί > Lo I >Η f^CH CH

~\ Vn OH ΜΗ 10c 10b É também possível enxertar biovetores nas ramificações aminoálcool na posição N-funcionalizada de PCTA do anel PCTA por acoplamento seletivo com um átomo de azoto do anel.

Exemplo Comparativo 11: Composto que possui uma estrutura de base D03A 57 o °f° ,JI—O J° 0^0 o^o- °

HO

Η,Ν'^γ^ΟΗ OH

OH

EOCt/NHS

É preparada uma solução que compreende 2,6 g de 3-aminopropano-1,2-diol em 60 mL de água. 0 pH é ajustado para 6 com HC1. São adicionados à solução precedente 6 g de complexo de gadolinio de ácido 2-[4,7-bis(1,4-dicarboxibutil)-1,4,7,10-tetraazaciclododec-l-il]-hexanóico. 0 pH é novamente ajustado antes da adição de 0,71 g de sulfo-NHS e 0,62 g de EDCI. 0 pH é monitorizado e ajustado para 6 com NaOH 2 N. Depois de uma noite à temperatura ambiente, o meio de reação é concentrado até aproximadamente 2 0 mL e em seguida precipitado de 100 mL de etanol. 0 sólido é removido por filtração, lavado com etanol e éter dietilico e, em seguida, purificado em silica silanizada RP2 com eluição apenas com água. São obtidos 2,2 g de produto 11. m/z (ES+) = 979

HPLC: Coluna: Lichrospher RP-18, 5 ym, 100 Â, 250 x 4,6 mm caudal: 1 mL/min, detecção UV a 201 nm. Fase móvel: A: água (TFA pH 2,8)/CH3CN

Tempo (min) % A %B 0 98 2 20 70 30 22 98 2 30 98 2

Tempo de retenção (tr) =7,8 min (2 picos)

Exemplos 12 a 14, 16, 18 e 19 e exemplos comparativos 15 e 17: 58 0 aplicante, de acordo com sínteses análogas, preparou em particular os seguintes compostos.

Exemplo 20: estudos de formação de imagens in vivo

Foram obtidos resultados muito vantajosos, notadamente para a detecção de glioma. Os compostos II (exemplo 2) 59 foram comparados com Dotarem® (R) e MultiHance® para a detecção de glioma C6 em ratos (n = 6/produto) . Cada animal recebeu todos os três produtos com a mesma dose (0,1 mmol/kg) numa ordem aleatória. Foi respeitado um atraso minimo de 4 horas entre as injeções, com a finalidade de evitar contraste remanescente da injeção anterior. Foi seguida a evolução durante 30 min com uma sequência de eco Tlw-Spin Echo (TR/TE=498/14,2 ms, FOV = 4x4 cm2, espessura do corte de 2 mm, distância intercortes de 3 mm, matriz 192x192, 2 acumulação) num sistema 2,35 T (BioSpec 24/40, Bruker, Alemanha). A melhoria das lesões foi quantitativamente (ROIs) e qualitativamente avaliada (cotação cego). Todas as lesões foram representadas com todos os agentes de contraste. No entanto entre os três agentes de contraste, o composto II induziu um contraste 2 vezes mais pronunciado entre a lesão e o cérebro saudável. O leitor cego julgou o contraste entre o cérebro com tumor e cérebro saudável como sendo distintamente superior para todos os ratos injetados com o composto II.

Lisboa, 18 de Setembro de 2012

Claims (16)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (lia) das seguintes fórmulas gerais:

em que: Rl, R2 e R3 representam, independentemente um do outro, -COOH, -P(0) (OH) 2 ou -R6-P(0)-0H em que R6 representa um átomo de H ou um grupo alquilo C1-C3, Xi, X2 e X3 representam, independentemente um do outro, L-Y em que L representa um grupo alquilo C1-C3, Y representa CO-NR7R8, em que R7 representa H ou um grupo alquilo C1-C6 ou um grupo hidroxialquilo Ci-Cô, e R8 representa um grupo alquilo Ci-C6 ou hidroxialquilo Ci-C6, desde que, pelo menos, R7 ou R8 represente um grupo hidroxialquilo Ci-C6; D representa CH ou N; E representa CH ou N; F2 representa CH ou N; Ki a K12, cada um representa independentemente H, (CH2)j-CH3 ou -(CH2)í-OH, em que j = 0a3ei = la3, ou K3 ou K4 com K5 ou K6, e/ou K7 ou Ks com Kg ou K10, formam um anel que contém 3 a 6 átomos de carbono; ou um enantiómero ou um diastereoisómero dos mesmos ou das suas misturas. 2

2. Composto de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por E representar um átomo de N e D e Fi representarem CH.

3. Composto de acordo com as Revindicações 1 ou 2, caracterizado por XI a X3 independentemente representarem -(CH2) n-CO-NR7R8, em que n é entre 1 e 3, R7 representa H ou um grupo metilo e R8 representa um grupo hidroxialquilo Ci-C6.

4. Composto de acordo com a Reivindicação 3 de fórmula (I Ia)

7 CH /' . R2 *2 caracterizado por XI a X3 independentemente representarem -((CH2) n_CONR7R8, em que n é entre 1 e 3, R7 representa H ou um grupo metilo e R8 representa um grupo hidroxialquilo C1-C4.

5. Composto de acordo com a Reivindicação 4, caracterizado por XI a X3 independentemente representarem -(CH2)n-CONR7R8, em que n é entre 1 e 3, R7 representa H e R8 representa -CH2-CH2OH, -CHOH-CH2OH, -CH- (CH2OH) 2, -CH2- (CHOH) p-CH2OH, com p = 1 a 4 ou -C-(CH2OH)3. 3

6. Multímero, de preferência um dímero ou trímero, de um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5.

7. Composto vetorizado que compreende um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5 acoplado a um biovetor por meio do intermediário opcional de um grupo de ligação.

8. Complexo de um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5 ou de um multimero de acordo com a Reivindicação 6 ou de um composto vetorizado de acordo com a Reivindicação 7 com M, sendo que M representa um ião de um metal paramagnético de número atómico 21-29, 42-44 ou 58-70, ou um radionuclideo selecionado a partir de 99Tc, 117Sn, inIn, 97Ru, 67Ga, 68Ga, 89Zr, 177Lu, 47, 60, 62 149, 159, 90, Sc, 105Rh, 1BBRe, 0UCu, b/Cu, b4Cu, b,Cu, 9UY, i39Gd, i99Pr e 64, 67, 166 Ho.

9. Complexo de acordo com a Reivindicação 8, caracterizado por o ião de um metal paramagnético ser selecionado de GD3+, Mn2+ e Fe3+.

10. Complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 e 9, caracterizado por exibir: - uma relaxividade em água de pelo menos 10 mM_1s_1Gd_1, - uma osmolalidade entre 800 e 1200 mOsm/kg, para uma concentração de Gd de 400 a 600 mM, e - uma relaxividade substancialmente estável entre 20 e 300 MHz, ou um aumento em relaxividade para além de 20 MHz. 4

11. Complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 a 10 caracterizado por ser selecionado dos complexos das seguintes fórmulas:

13 5

12. Complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 a 10 caracterizado por ser selecionado dos complexos das seguintes fórmulas:

6

13. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5 ou um multimero de acordo com a Reivindicação 6 ou um composto vetorizado de acordo com a Reivindicação 7 ou um complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 a 12, um veiculo farmaceuticamente aceitável e opcionalmente aditivos de formulação.

14. Composição farmacêutica lipídica que compreende um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5 ou um multimero de acordo com a Reivindicação 6 ou um composto vetorizado de acordo com a Reivindicação 7 ou um complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 a 12 ligado a uma nanoparticula lipidica.

15. Composição de diagnóstico para imagiologia por ressonância magnética que compreende um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 5 ou um multimero de acordo com a Reivindicação 6 ou um composto vetorizado de acordo com a Reivindicação 7 ou um complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 a 12.

16. Processo para a preparação de um complexo de acordo com qualquer uma das Reivindicações 8 a 12 de um composto de fórmula (lia) em que XI a X3 independentemente representam (-CH2) n-CO-NR7R8, em que n = la3eR7e R8 são como definido na Reivindicação 1, que compreende as etapas: a) fazer reagir o macrociclo condensado da seguinte fórmula (IV) 7

Ν-Η IV em que D, E e Fi são como definido acima, com um composto de fórmula R'OOC-CHQ-(CH2) n-COOR', em que n = 1 a 3, Q representa um grupo de saida, e R' representa H ou um grupo (Ci-C3) alquilo ou benzilo, a fim de obter o hexaácido ou éster da seguinte fórmula (V) D

^CH ROOC X(CH2)n-COOR’ V; b) que opcionalmente hidrolisa ou hidrogena os grupos funcionais éster do hexaácido de fórmula (V) , quando R' é diferente de H, a fim de obter o hexaácido de fórmula (Va)

Va em que D, E e Fi são como definido acima e n está entre 1 e 3; c) fazer reagir o hexaácido de fórmula (Va) com um sal ou um óxido de metal a ser complexado, a fim de obter o complexo correspondente ou um dos seus sais com uma base; d) fazer reagir o complexo, na presença de um agente que ative os grupos funcionais do ácido carboxilico, com o 8 grupo aminoálcool ou grupos NHR7R8, em como definido na Reivindicação 1, de triamida de fórmula (lia), em que XI a independentemente, - (0¾) n-CO-NR7R8 em que R8 são como definido na Reivindicação 1. Lisboa, 18 de Setembro de 2012 que R7 e R8 são forma a obter a X3 representam, n=la3eR7e