PT1866324E

PT1866324E - Derivados de fosforamidato de compostos de nucleósido para utilização no tratamento do cancro

Info

Publication number: PT1866324E
Application number: PT06710096T
Authority: PT
Inventors: Christopher Mcguigan; Kenneth Mills; Costantino Congiatu
Original assignee: Cardiff Protides Ltd
Priority date: 2005-03-21
Filing date: 2006-03-16
Publication date: 2010-09-16
Also published as: GB0505781D0; AU2006226182B2; ZA200709011B; EP1866324A1; ES2348741T3; PL1866324T3; JP2013173786A; US20090215715A1; CY1111538T1; WO2006100439A1; DE602006014949D1; SI1866324T1; JP2008533191A; CN101175763A; AU2006226182C1; BRPI0609704B8; IL186104A0; DK1866324T3; US8263575B2; JP5863702B2

Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE FOSFORAMIDATO DE COMPOSTOS DE NUCLEÓSIDO PARA UTILIZAÇÃO NO TRATAMENTO DO CANCRO" A presente invenção refere-se a compostos químicos, à sua preparação e à sua utilização no tratamento do cancro. Particularmente, apesar de não exclusivamente, a presente invenção refere-se a compostos químicos úteis no tratamento da leucemia em homo sapiens.

Alguns nucleósidos de purina modificados são conhecidos por apresentarem propriedades biológicas potentes, incluindo potencial quimioterapêutico. Os agentes anticancerígenos clínicos conhecidos incluem cladribina e fludarabina e, também, clofarabina, a qual está em desenvolvimento clínico.

As fórmulas seguintes mostram as estruturas químicas de cladribina, isocladribina, fludarabina e clofarabina:

OH X = NH2, Y = Cl cladribina X =CI, Y = NH2 “isocladribina”

OH X = NH2, Y = F fludarabina

X

X = NH2, Y = Cl clorofarabina 1 A cladribina é um fármaco útil, mas tóxico. É administrado por infusão para o tratamento de leucemias e, em particular, de leucemia dos tricoleucócitos (BNF, 2004) . É também utilizada para a leucemia linfocitica crónica em doentes que não tiveram sucesso em regimes padrão com agentes alquilantes. A fludarabina está autorizada para o tratamento da leucemia linfocitica crónica avançada de células B. A clofarabina é o tratamento de terceira linha na leucemia linfoblástica pediátrica nos Estados Unidos e tem actividade na leucemia mielóide aguda. O isómero estrutural da cladribina, "isocladribina" acima, é conhecido como um intermediário sintético, mas as suas propriedades biológicas não foram descritas.

Como com todos os análogos de nucleósido, estes agentes requerem a activação intracelular mediada por cinases para as suas formas de fosfato bioactivas. Os fosfatos pré-formados, em geral, não podem ser utilizados em terapia, devido à sua baixa permeabilidade membranar. De facto, a fludarabina é frequentemente, administrada sob a forma do seu monofosfato 5' livre, apenas para aumentar a solubilidade em água, mas este actua apenas como um profármaco de nucleósido.

Reid G. et al. Molecular Pharmacology Vol. 63 N°. 5 (2003) pp. 1094 a 1103, referem-se à utilização de cladribina no tratamento de várias leucemias. Reid G. et al., referem-se também à utilização de 2', 3'-didesoxinucleósidos no tratamento anti-viral do HIV e a contornar a necessidade de cinase dos 2',3'-didesoxinucleósidos pela sua distribuição intracelular, 2 sob as suas formas monofosfato pela utilização de triéster de fosforamidato permeável celularmente. É um objectivo da presente invenção proporcionar um composto que, em utilização, intensificou a potência terapêutica, particularmente a potência no que respeita a um cancro, tal como a leucemia.

De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, é proporcionado um composto de fórmula I:

em que: cada de X e Z é seleccionado independentemente de H, OH, F, Cl, Br, I, alquiloCi-6 e NR5R6, em que cada de R5 e R6 é seleccionado independentemente de H e alquiloCi-6; Y é seleccionado de OH, F, Cl, Br, I, alquiloCi_6, alciniloC2-8 e NR5R6, em que cada de R5 e R6 é seleccionado independentemente de H e alquiloCi_6; 3 cada de T e Τ' é seleccionado independentemente de H, Fe OH, com a condição de que apenas um de T e Τ' possa ser OH; Q é seleccionado de 0, Se CR7R.8, em que R7 e R8 são seleccionados independentemente de H e alquiloCi_6;

Ar é seleccionado de ariloC6-3o e heteroariloC6-3o/ cada dos quais é, opcionalmente, substituído com um ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo consistindo de hidroxilo, acilo, aciloxilo, nitro, amino, SO3H, SH, SR', em que R' é seleccionado independentemente do mesmo grupo que Ri; carboxilo, ésteresCi_6; aldeídoCi_6, ciano, alquilaminoCi-6, dialquilaminoCi_6^ tiol, cloro, bromo, fluoro, iodo, alquiloCi-6, alceniloC2-6, alcoxiCi-6-alquiloCi-6, alcoxiCi_6-ariloC5_io/ cicloalquiloC5_7, cicloalquilC5-ii-alquiloCi_6, cicloalceniloC5-7, cicloalciniloC5_7, arilC5-nalquiloCi-6, alquilCi-6ariloC5-n, ariloCs-n, fluoroalquiloCi-6e fluoroalceniloC2_6, cada de Rj e R2 é seleccionado independentemente de H e do grupo consistindo de alquiloCi_20, alceniloC2_20, alcoxiloCi- 2 0, alcoxiCi-2oalquiloCi-2o, alcoxiCi_2oariloC6-3(u alciniloC2_2o, cicloalquilC3_2oariloC6-30/ ariloxiloC6-3o, heterocicliloC5-2cu estando, qualquer destes, opcionalmente substituído; e cada de R3 e R4 é seleccionado independentemente de H e do grupo consistindo de alquiloCi_2o, alceniloC2_20, alcoxiloCi- 20, alcoxiCi-20alquiloCi-20, alcoxiCi-20ariloC6-3(u alciniloC2_20, cicloalquilC3-2oariloC6-3o^ ariloxiloC6-3(u heterocicliloCs-2o^ estando, qualquer destes, opcionalmente substituído; 4 quaisquer substituintes opcionais em Rx, R2, R3 e R4 sendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo consistindo de hidroxilo, acilo, aciloxilo, nitro, amino, amido, S03H, SH, SR', em que R' é seleccionado independentemente do mesmo grupo que Rx, carboxilo, ésteresCi-6, aldeidoCi-6, ciano, alquilaminaCi-6, dialquilaminaCi_6, tiol, cloro, bromo, fluoro, iodo, cicloalquiloC5-7, cicloalceniloC5_7, cicloalciniloC5_7, ariloC5_u, arilC5_xxalquiloCx_6 e heterocicliloC5_2or e os seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Foi, surpreendentemente, verificado que os compostos que realizam a presente invenção têm actividade anti-cancerígeno intensificada em homo sapiens. Em particular, foi verificado que os compostos que realizam a presente invenção têm actividade anti-leucémica intensificada, em comparação com os compostos conhecidos cladribina, fludarabina e isocladribina. Os compostos que realizam a presente invenção são considerados como tendo actividade anti-cancerigeno intensificada particular, no que respeita à leucemia mielóide aguda. Os compostos que realizam a presente invenção podem ser, também, úteis no que respeita à profilaxia e ao tratamento de outros tipos de leucemia e de outros cancros, incluindo, por exemplo, tumores sólidos.

Acredita-se que a actividade anti-cancerígeno intensificada dos compostos da presente invenção, seja devida à solubilidade membranar dos nucleósidos de purina fosforamidato da presente invenção.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção é proporcionado um composto de fórmula I, incluindo a opção de Y 5 ser H, para utilização num método de tratamento, adequadamente na profilaxia ou no tratamento do cancro, mais adequadamente na profilaxia ou no tratamento da leucemia.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção é proporcionada a utilização de um composto de fórmula I, incluindo a opção de Y ser H, na preparação de um medicamento para a profilaxia ou o tratamento do cancro, de um modo preferido, um medicamento para a profilaxia ou o tratamento da leucemia.

Um método de profilaxia ou tratamento do cancro, adequadamente leucemia, pode compreender a administração de uma dose eficaz de um composto de fórmula I a um doente com necessidade desse tratamento, incluindo a opção de Y ser H.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula I em combinação com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é proporcionado um método de preparação de uma composição farmacêutica compreendendo o passo de combinar um composto de fórmula 1 com um excipiente, veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é proporcionado um processo de preparação de um composto de fórmula I, compreendo o processo fazer reagir um composto de fórmula III: 6

X

com um composto de fórmula IV: R—o oII-c- R. R4 O 1 14 ii -N-P-CI I 0 1Ar em que Ar, Q, R2, R2, R3, R4, X, Y, Z, T e Τ' têm os significados estabelecidos acima no que respeita à fórmula I.

De um modo preferido, cada de X e Z é seleccionado independentemente de H, OH, F, Cl e NH2 e Y é seleccionado de OH, F, Cl, NH2 e alciniloC2_8. Os compostos preferidos incluem aqueles em que: x é nh2, Y é Cl e z é Η; x é Cl, Y é nh2 e z é h; x é NH2, YéFeZéH; eXé NH2, Y é alciniloC2-8/ de um modo preferido, alciniloC2_6 e Z é H.

Onde Y é alciniloC2_8, de um modo preferido, Y é alciniloC2_6 linear e, de um modo preferido, Y contém uma ligação tripla C=C na posição alfa. 7

De um modo preferido, cada de T e Τ' é H, um ou, de um modo preferido, ambos de T e Τ' são F ou de um modo preferido, T é H e Τ' é OH. Onde um de T e Τ' é F, o outro de T e Τ' é, adequadamente, H.

De um modo preferido, Q é 0.

De um modo preferido, R4 é H.

De um modo preferido, Ri e R2 são seleccionados de forma a que estes correspondam às cadeias laterais de um aminoácido natural.

De um modo preferido, um de Ri e R2 é Me e um de Ri e R2 é H, de forma a que o átomo C contendo Ri e R2 tenha quiralidade L como na alanina natural.

De um modo preferido, R3 é alquilo, de um modo mais preferido, R3 é seleccionado do grupo consistindo de metilo, etilo, 2-propilo, 2-butilo e benzilo, de um modo ainda mais preferido, R3 é seleccionado do grupo consistindo de metilo (-CH3) e benzilo (-0Η206Η5) .

As entidades Ar preferidas incluem fenilo, piridilo, naftilo e quinolilo, cada das quais pode ser substituída ou não substituída. Como Ar, são especialmente preferidos naftilo, particularmente, naftilo não substituído. Piridilo é -C5NH4. Deste modo "heteroariloC6-3o" para Ar pretende significar um sistema de anel aromático com seis a trinta membros que pode conter um ou mais heteroátomos no sistema de anel, como adicionalmente definido abaixo. 8

Os compostos preferidos têm identidades preferidas para X, Y, Z, T, Τ', Q, Ar, Rx, R2, R3 e R4 como estabelecido acima.

Os compostos particularmente preferidos têm: x = nh2, y = Cl, z = h, Q = 0 e τ = τ' = He são, deste modo, derivados da cladribina; X = Cl, Y = NH2, z = H, Q = 0 e Τ = T' = He são, deste modo, derivados da isocladribina; X = NH2, Y = Cl, Ζ = H, Q = O, T = F e Τ' = H e são, deste modo, derivados da clofarabina; e X = NH2, Y = alciniloC2_8/· mais preferido, alciniloC2_6(· Z = H, Q = 0, T = H e Τ' = OH.

Cada dos compostos particularmente preferidos estabelecidos acima, incluindo, respectivamente, os derivados de cladribina, isocladribina e clofarabina é, especialmente, preferido quando cada de Ar, Ri, R2, R3 e R4 tem uma identidade preferida como estabelecido acima.

Nos Exemplos e na Tabela II abaixo são estabelecidos compostos particularmente preferidos. 0 centro de fósforo nos compostos de fórmula I pode ser um diastereoisómero RP ou Sp ou este pode ser uma mistura dos diastereoisómeros RP ou SP. De um modo preferido, este é um 9 diastereoisómero puro. Adequadamente é seleccionado o diastereoisómero mais activo.

Adequadamente, os sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis de compostos de fórmula I são ésteres e amidas no OH 3' .

De um modo preferido, o processo de preparação de um composto de fórmula I, inclui o passo de protecção dos grupos OH livres, para além dos 5' no nucleósido. 0 fosforocloridato pode ser preparado a partir de um fosforodicloridato de ariloxilo e de um derivado de aminoácido adequadamente protegido. Alternativamente, pode ser utilizada quimica de fosfato com agentes de condensação adequados.

Cada de Ar, Rx, r2, R3 e R4 pode ser substituído com um, dois, três, quatro, cinco ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo compreendendo partes dadoras de electrões e aceitadoras de electrões.

Os substituintes em Ar podem estar localizados em orto, meta, para ou de outra forma nos grupos aromáticos.

Ri e R2 são adequadamente seleccionados independentemente do grupo consistindo de H, alquiloCx_Xo, alceniloC2-io, alcoxiC2-ioâlquiloCi-io, alcoxiCX-XOariloC6-io, alciniloC2-icu cicloalquiloC3_2cu cicloalceniloC3_2o, cicloalciniloC4-2o e heterocicliloC5-io.

Ri e R2 são adequadamente seleccionados a partir das cadeias laterais de aminoácidos naturais ou sintéticos. 10

Ri e/ou R2 são, de um modo preferido, uma cadeia lateral de um aminoácido natural seleccionado do grupo consistindo de glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, serina, treonina, lisina, arginina, histidina, ácido aspártico, ácido glutâmico, asparaginas, glutamina, cisteína e metionina. Especificamente, Ri e/ou R2 são, de um modo preferido, seleccionados do grupo consistindo de H, CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3) (CH2CH3) , -CH2Ph, -CH2Ph-OH, -CH2SH, -CH2CH2SCH3, -CH2OH, -CH(CH3) (OH) , -CH2CH2CH2CH2NH3+, -CH2CH2CH2NHC(=NH2+)NH2, -CH2C(0)0-, -CH2CH2C(0)0-, -CH2C(0)NH2, -CH2CH2C(0)NH2, /

e em que R4 e R4, em conjunto, podem formar um anel heterocíclico com 5 membros tendo a estrutura

R3 e R4 são adequadamente seleccionados independentemente do grupo consistindo de H, alquiloCi-10, alceniloC2-i0, alcoxiloC4-io, alcoxiCi-ioalquiloCi_io, alcoxiCi_ioariloC6-io/ alciniloC2_i0, cicloalquiloC3_20, cicloalceniloC3_20, cicloalciniloC4_20 e heterocicliloC5-2o. R3 é, adequadamente, seleccionado do grupo consistindo de H, alquiloCi_i8, cicloalquiloC3_20 e benzilo. 11 R-4 é adequadamente seleccionado do grupo consistindo de H, alquiloCi_i8, cicloalquiloC3_2o e heterocicliloC5_2o · R4 é, particularmente, adequadamente seleccionado do grupo consistindo de H, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo e ciclo-hexilo.

Numa forma de realização preferida, Ri e R2 são metilo ou são ligados para formar um anel heterocíclico ou carbociclico com 5 membros fechado, por exemplo, como presente na prolina.

Como aqui utilizado, o termo "alquilo" refere-se a um radical hidrocarboneto ciclico ou aciclico monovalente saturado linear ou ramificado, tendo o número de átomos de carbono como indicado (ou quando não indicado, um grupo alquilo aciclico tem de um modo preferido, 1-20, de um modo mais preferido, 1-6, de um modo mais preferido, 1-4 átomos de carbono e um grupo alquilo ciclico tem de um modo preferido, 3-20, de um modo preferido, 3-10, de um modo mais preferido, 3-7 átomos de carbono), opcionalmente substituído com um, dois, três ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo estabelecido acima no que respeita a substituintes que podem estar presentes em Ri, r2, R3 e R4. A título de exemplos não- limitativos, os grupos alquilo adequados, incluem metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, octilo, nonilo e dodecilo.

Como aqui utilizado, o termo "alcenilo" refere-se a um radical hidrocarboneto aciclico ou cíclico monovalente insaturado linear ou ramificado tendo uma ou mais ligações duplas C=C e tendo o número de átomos de carbono como indicado (ou quando não indicado, um grupo alcenilo aciclico tem de um modo preferido, 2-20, de um modo mais preferido, 2-6, de um modo mais preferido, 2-4 átomos de carbono e um grupo alcenilo 12 cíclico tem de um modo preferido, 4-20, de um modo mais preferido, 4-6 átomos de carbono), opcionalmente substituído com um, dois, três ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo estabelecido acima no que respeita a substituintes que podem estar presentes em Ri, R2, R3 e R4. A título de exemplos não-limitativos, os grupos alcenilo adequados incluem vinilo, propenilo, butenilo, pentenilo e hexenilo.

Como aqui utilizado, o termo "alcinilo" refere-se a um radical hidrocarboneto acíclico ou cíclico monovalente insaturado linear ou ramificado tendo uma ou mais ligações triplas C=C e tendo o número de átomos de carbono como indicado (ou quando não indicado, um grupo alcinilo aciclico tem de um modo preferido, 2-20, de um modo mais preferido, 2-6, de um modo mais preferido, 2-4 átomos de carbono e um grupo alcinilo cíclico tem de um modo preferido, 7-20, de um modo mais preferido, 8-20 átomos de carbono), opcionalmente substituído com um, dois, três ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo listado acima no que respeita a substituintes que podem estar presentes em R4, R2, R3 e R4.

Como aqui utilizado, o termo "alcoxilo" refere-se ao grupo alquil-O-, em que alquilo é como definido acima e em que a parte alquilo pode ser, opcionalmente, substituída com um, dois, três ou mais substituintes como estabelecidos acima para alquilo. A título de exemplos não-limitativos, os grupos alcoxilo adequados incluem metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, iso-propoxilo, n-butoxilo, terc-butoxilo, sec-butoxilo, n-pentoxilo, n-hexoxilo e 1,2-dimetilbutoxilo.

Como aqui utilizado, o termo "ariloxilo" refere-se ao grupo aril-O-, em que arilo é como definido abaixo e em que a parte 13 arilo pode ser, opcionalmente, substituída com um, dois, três ou mais substituintes como estabelecido acima, no que respeita ao grupo Ar.

Como aqui utilizado, o termo "alcoxialquilo" refere-se a um grupo alquilo tendo um substituinte alcoxilo. A ligação é através do grupo alquilo. A parte alquilo e a parte alcoxilo são como aqui definidas no que respeita, respectivamente, às definições de alquilo e alcoxilo. As partes alcoxilo e alquilo podem ser cada substituídas com um, dois, três ou mais substituintes como estabelecido acima no que respeita à definição de alquilo.

Como aqui utilizado, o termo "alcoxiarilo" refere-se a um grupo arilo tendo um substituinte alcoxilo. A ligação é pelo grupo arilo. A parte alcoxilo e a parte arilo são como definidas aqui no que respeita, respectivamente, às definições de alcoxilo e arilo. As partes alcoxilo e arilo podem ser cada uma substituídas com um, dois, três ou mais substituintes, como definidos aqui no que respeita, respectivamente, às definições de alcoxilo e arilo.

Como aqui utilizado, o termo "cicloalquilarilo" refere-se a um grupo arilo tendo um substituinte alquilo cíclico. A ligação é pelo grupo arilo. A parte cicloalquilo e a parte arilo são como aqui definidas no que respeita, respectivamente, às definições de cicloalquilo e arilo. A parte cicloalquilo e a parte arilo podem ser cada, opcionalmente substituídas com um, dois, três ou mais substituintes como estabelecido aqui no que respeita, respectivamente, às definições de alquilo e arilo. 14

Como aqui utilizado, o termo "arilo" refere-se a um radical carbociclico aromático insaturado monovalente tendo um, dois, três, quatro, cinco ou seis anéis, de um modo preferido, um, dois ou três anéis, que podem ser fundidos ou biciclicos. Um grupo arilo pode ser, opcionalmente, substituído com um, dois, três ou mais substituintes como estabelecido acima no que respeita a substituintes opcionais que podem estar presentes no grupo Ar. Os grupos arilo preferidos são: anel monocíclico aromático contendo 6 átomos de carbono; sistema de anel bicíclico ou fundido aromático contendo 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono; ou sistema de anel tricíclico aromático contendo 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono. Os exemplos não-limitativos de arilo incluem fenilo e naftilo. Os grupos substituinte preferidos são seleccionados independentemente de hidroxilo, acilo, aciloxilo, nitro, amino, SO3H, SH, SR', em que R' é seleccionado independentemente dos mesmos grupos que Ri; carboxilo, ciano, alquilaminaCi_6c dialquilaminaCi_6, tiol, cloro, bromo, fluoro e iodo.

Como aqui utilizado, o termo "heteroariloC6_30" refere-se a um radical heterocíclico com 6 a 30 membros aromático insaturado monovalente tendo um, dois, três, quatro, cinco ou seis anéis, de um modo preferido, um, dois ou três anéis, o qual pode ser fundido ou bicíclico e tendo contido dentro do anel, pelo menos, um heteroátomo seleccionado do grupo consistindo de N, O e S. Os átomos de carbono disponíveis e/ou os heteroátomos no sistema de anel de heteroarilo podem ser substituídos no anel com um ou mais substituintes, como estabelecido acima, no que respeita aos substituintes que podem estar presentes no grupo Ar. Os grupos heteroarilo preferidos são: um sistema de anel monocíclico aromático contendo seis membros dos quais, pelo menos, um membro é um átomo N, O ou S e que, opcionalmente, contém um, dois ou 15 três átomos N adicionais; um anel monociclico aromático tendo seis membros, dos quais um, dois ou três membros são um átomo N; um anel biciclico ou fundido aromático tendo nove membros dos quais, pelo menos, um membro é um átomo de N, 0 ou S e o qual opcionalmente contém um, dois ou três átomos N adicionais; ou um anel biciclico aromático tendo dez membros, dos quais um, dois ou três membros são um átomo N. Os exemplos incluem e não estão limitados a piridilo e quinolilo.

Como aqui utilizado, o termo "heterociclilo" refere-se a um sistema de anel heterociclico saturado ou parcialmente insaturado tendo um, dois, três, quatro, cinco ou seis anéis, de um modo preferido, um, dois ou três anéis, o qual pode ser fundido ou biciclico e tendo contido dentro do anel ou anéis, pelo menos, um membro seleccionado do grupo consistindo de N, 0 e S. 0 prefixo "C5-20" ou "C5-10" utilizado depois de heterociclilo significa, respectivamente, um sistema de anel com cinco a vinte ou cinco a dez membros sendo, pelo menos, um desses membros seleccionado do grupo consistindo de N, 0 e S. Os sistemas heterociclilo preferidos são: sistema de anel monociclico tendo cinco membros dos quais, pelo menos, um membro é um átomo N, 0 ou S e que, opcionalmente, contém um átomo 0 adicional ou um, dois ou três átomos N adicionais; anel monociclico tendo seis membros dos quais um, dois ou três membros são um átomo N; sistema de anel biciclico tendo nove membros dos quais, pelo menos, um membro é um átomo de N, 0 ou S e que, opcionalmente, contém um, dois ou três átomos N adicionais; ou sistema de anel biciclico tendo dez membros dos quais um, dois ou três membros são um átomo N. Os exemplos incluem e não estão limitados a, pirrolinilo, pirrolidinilo, 1,3-dioxolanilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, morfolinilo ou piperazinilo. 16

Os átomos de carbono disponíveis e/ou os heteroátomos dos sistemas de anel "heterociclilo" descritos acima podem ser substituídos no anel com um ou mais heteroátomos. Em que o(s) anel(éis) é(são) substituído(s) com um ou mais heteroátomos, os substituintes de heteroátomo são seleccionados de oxigénio, azoto, enxofre e halogéneo (F, Cl, Br e I). Em que o(s) anel(éis) é(são) substituído(s) com um ou mais heteroátomos, de um modo preferido, estão presentes 1, 2, 3 ou 4 substituintes heteroátomo seleccionados do grupo consistindo de oxigénio, azoto e/ou halogéneo. Os grupos substituinte preferidos são seleccionados independentemente de hidroxilo, acilo, aciloxilo, nitro, amino, SO3H, SH, SR', em que R' é seleccionado independentemente dos mesmos grupos que Ri; carboxilo, ciano, alquilaminoCi-6, dialquilaminoCi-6, tiol, cloro, bromo, fluoro e iodo. 0 processo é, de um modo preferido, realizado na presença de um solvente adequado.

Os solventes adequados incluem solventes hidrocarbonetos tais como benzeno e tolueno; solventes do tipo éter, tais como éter dietílico, tetra-hidrofurano, éter difenílico, anisole e dimetoxibenzeno; solventes hidrocarbonetos halogenados, tais como cloreto de metileno, clorofórmio e clorobenzeno; solventes do tipo cetona, tais como acetona, metiletilcetona e metilisobutilcetona; solventes do tipo álcool tais como metanol, etanol, propanol, isopropanol, álcool n-butílico e álcool terc-butílico; solventes do tipo nitrilo tais como acetonitrilo, propionitrilo e benzonitrilo; solventes do tipo éster, tais como acetato de etilo e acetato de butilo; solventes do tipo carbonato, tais como carbonato de etileno e carbonato de propileno; e semelhantes. Estes podem ser utilizados 17 isoladamente ou podem ser utilizados dois ou mais destes em mistura.

De um modo preferido, é utilizado um solvente inerte no processo da presente invenção. 0 termo "solvente inerte" significa um solvente inerte nas condições de reacção que são descritas em conjunto com esta, incluindo, por exemplo, benzeno, tolueno, acetonitrilo, tetra-hidrofurano, dimetilformamida, clorofórmio, cloreto de metileno (ou diclorometano), éter dietílico, acetato de etilo, acetona, metiletilcetona, metanol, etanol, propanol, isopropanol, terc-butanol, dioxano, piridina e semelhantes. É particularmente preferido, tetra-hidrofurano.

De um modo preferido, o processo da presente invenção é realizado sob condições substancialmente secas.

Como aqui utilizado, o termo "estereoisómero" define todos os compostos possíveis constituídos pelos mesmos átomos ligados pela mesma sequência de ligações mas tendo estruturas tridimensionais diferentes que não são permutáveis, que os compostos da presente invenção possam possuir.

Quando os compostos de acordo com esta invenção têm, pelo menos, um centro quiral, estes podem estar presentes, consequentemente, como enantiómeros. Quando os compostos possuem dois ou mais centros quirais, estes podem estar presentes adicionalmente como diastereómeros. Quando os processos de preparação dos compostos de acordo com a invenção dão origem a uma mistura de estereoisómeros, estes isómeros podem ser separados por técnicas convencionais, tal como cromatografia preparativa. Os compostos podem ser preparados numa forma esteroquimicamente misturada ou podem ser preparados 18 enantiómeros individuais por técnicas comuns conhecidas dos especialistas na técnica, por exemplo, por síntese enantioespecífica ou resolução, formação de pares diastereoméricos por formação de um sal com um ácido opticamente activo, seguida por cristalização fraccionada e regeneração da base livre. Os compostos podem ser também resolvidos por formação de ésteres ou de amidas diastereoméricos, seguida por separação cromatográfica e remoção do auxiliar quiral. Alternativamente, os compostos podem ser resolvidos utilizando uma coluna de HPLC quiral. Deve ser entendido que todos esses isómeros e suas misturas estão abrangidos dentro do âmbito da presente invenção.

Além disso, deve ser tido em consideração que o centro fosfato é quiral nos compostos da presente invenção e os compostos podem estar presentes sob a forma de diastereoisómeros Rp e Sp. A composição do composto pode ser uma mistura de Rp e Sp ou ser um diastereómero puro. De um modo preferido, o composto é um único isómero substancialmente puro.

Pode estar presente uma mistura dos diastereómeros 1:1 Rp a Sp. Alternativamente, podem estar presentes proporções de 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:15, 1:20, 1:50 ou 1:100 entre os diastereómeros Rp e Sp ou vice-versa. O termo "solvato" significa um composto de fórmula (I) como aqui definido ou de um sal f armaceuticamente aceitável de um composto da estrutura (I), em que as moléculas de um solvente adequado são incorporadas no retículo cristalino. Um solvente adequado é fisiologicamente tolerável na dosagem administrada. Os exemplos de solventes adequados são etanol, água e 19 semelhantes. Quando o solvente é água, a molécula é designada como um hidrato.

Os compostos da presente invenção também podem estar presentes sob a forma de sais aceitáveis farmacêuticos. Para a utilização em medicina, os sais dos compostos desta invenção referem-se "a sais farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos". A FDA aprovou formas de sais farmaceuticamente aceitáveis (Ref. International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci.r 1977, Jan, 66 (1)) que incluem sais acídicos/aniónicos ou básicos/catiónicos farmaceuticamente aceitáveis.

Os sais acídicos/aniónicos farmaceuticamente aceitáveis incluem e não estão limitados a acetato, benzenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartarato, brometo, edetato de cálcio, carnsilato, carbonato, cloreto, citrato, di-cloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gliceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromidrato, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isetionato, lactato, maleato, mandelato, mesilato, metilbrometo, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato, pantotenato, fosfato, difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato e trietiodeto.

Os sais básicos/catiónicos farmaceuticamente aceitáveis incluem e não estão limitados a alumínio, benzatina, cálcio, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, lítio, magnésio, potássio, procaína, sódio e zinco. A presente invenção inclui, dentro do seu âmbito profármacos dos compostos desta invenção. Em geral, esses 20 profármacos serão derivados funcionais dos compostos que são facilmente convertiveis, in vivo, no composto pretendido. Deste modo, nos métodos de tratamento da presente invenção, o termo "administração" irá abranger o tratamento de vários distúrbios descritos com o composto especificamente divulgado ou com um composto que pode não ser especif icamente divulgado, mas que se converte no composto especificado in vivo após administração ao individuo. Por exemplo, em "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985 são descritos processos convencionais de selecção e preparação de derivados de profármaco adequados.

Os derivados éster farmaceuticamente aceitáveis, em que um ou mais grupos hidroxilo livres são esterifiçados sob a forma de um éster farmaceuticamente aceitável são, particularmente, ésteres profármaco que podem ser convertiveis, por solvólise sob condições fisiológicas, nos compostos da presente invenção tendo grupos hidroxilo livres.

As composições farmacêuticas para utilização de acordo com presente invenção podem ser formuladas, de uma forma convencional utilizando um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos compostos activos em preparações que podem ser utilizadas farmaceuticamente. Estas composições farmacêuticas podem ser preparadas numa forma que é em si, conhecida, e. g., utilizando processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, formação de drageias, levigação, emulsionação, encapsulação, aprisionamento ou liofilização. A formulação adequada depende da via de administração seleccionada. 21 0 composto tendo a fórmula I ou a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ser administrada a um doente, o qual pode ser homo sapiens ou um animal, por qualquer meio adequado.

Os medicamentos utilizados na presente invenção podem ser administrados por vias orais ou parentéricas, incluindo administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea, transdérmica, vias aéreas (aerossol), rectal, vaginal e tópica (incluindo bucal e sublingual).

Para a administração oral, os compostos da invenção irão ser, geralmente, proporcionados sob a forma de comprimidos ou de cápsulas, como um pó ou grânulos ou como uma solução ou suspensão aquosa.

Os comprimidos para utilização oral podem incluir o ingrediente activo misturado com excipientes farmaceuticamente aceitável, tais como diluentes inertes, agentes desintegrantes, agentes ligantes, agentes lubrificantes, agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes e conservantes. Os diluentes inertes adequados incluem carbonato de sódio e de cálcio, fosfato de sódio e de cálcio e lactose, enquanto o amido de milho e o ácido alginico são agentes desintegrantes adequados. Os agentes ligantes podem incluir amido e gelatina, enquanto o agente lubrificante, se estiver presente, irá ser geralmente estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Se pretendido, os comprimidos podem ser revestidos com um material, tais como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo, para atrasar a absorção no tracto gastrointestinal. 22

As cápsulas para utilização oral incluem cápsulas de gelatina rigidas em que o ingrediente activo é misturado com um diluente sólido e cápsulas de gelatina moles em que o ingrediente activo é misturado com água ou com um óleo, tais como óleo de amendoim, parafina liquida ou azeite.

As formulações para administração rectal podem ser apresentadas como um supositório com uma base adequada compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicilato.

As formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como formulações em pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou vaporizações contendo para além do ingrediente activo os veículos que são conhecidos na técnica como sendo adequados.

Para utilização intramuscular, intraperitoneal, subcutânea e intravenosa, os compostos da invenção serão geralmente proporcionados em soluções ou suspensões aquosas estéreis, tamponados a pH e isotonicidade adequados. Os veículos aquosos adequados incluem solução de Ringer e cloreto de sódio isotónico. As suspensões aquosas de acordo com a invenção podem incluir agentes de suspensão, tais como derivados de celulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona e goma de tragacanto e um agente molhante, tal como lecitina. Os conservantes adequados de suspensões aquosas incluem p-hidroxibenzoato de etilo e de n-propilo.

Os compostos da invenção podem ser também apresentados como formulações de lipossomas. 23

Em geral, uma dose adequada irá estar na gama de 0,1 a 300 mg por quilograma de peso corporal do receptor por dia. Uma dose mais baixa preferida é de 0,5 mg por quilograma de peso corporal do receptor por dia, uma dose mais baixa mais preferida, é de 1 mg por quilograma de peso corporal do receptor por dia. Uma dose adequada está, de um modo preferido, na gama de 1 a 50 mg por quilograma de peso corporal por dia e, de um modo mais preferido, na gama de 1 a 10 mg por quilograma de peso corporal por dia. A dose pretendida é, de um modo preferido, apresentada como duas, três, quatro, cinco ou seis ou mais sub-doses administradas em intervalos adequados ao longo do dia. Estas sub-doses podem ser administradas em formas de dosagem unitárias, por exemplo, contendo 10 a 1500 mg, de um modo preferido, 20 a 1000 mg e de um modo muito preferido, 50 a 700 mg do ingrediente activo por forma de dosagem de unidade.

Exemplos

Os compostos alvo foram preparados fazendo reagir o nucleósido adequado com o fosforocloridato pretendido. Os últimos reagentes foram preparados por métodos publicados, a partir de fosforodicloridatos de arilo com cloridratos de ésteres de aminoácidos. São proporcionados vários exemplos.

Sintese de fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninilo)] (CPF203).

Foi adicionado N-metilimidazole (NMI) (0,29 g, 3,50 mmol, 0,29 mL) a uma suspensão, sob agitação, de 2-cloro-2'-desoxiadenosina (0,200 g, 0,70 mmol) em THF seco (10 mL) . Foi 24 adicionado, gota a gota, a -78 °C fosforocloridato de fenil-(metoxi-L-alaninilo) (0,58 g, 2,10 mmol) em THF seco. Após 15 min a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. A reacção foi seguida por TLC (DCM/MeOH 95/5), após 4 horas foi adicionado mais fosforocloridato de fenil-(metoxi-L-alaninilo) (0,28 g, 1,0 mmol) e a reacção foi deixada a misturar, de um dia para o outro. Foi adicionado MeOH para inactivar a reacção, os voláteis foram evaporados e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH 100/0 a 95/5) e TLC preparativa (DCM/MeOH 96/4) para originar o produto sob a forma de uma espuma branca (0,008 g, rendimento de 2%; Recuperadas 0,15 g de cladribina) . RMN de 31P (CDC13, 121 MHz) : δ 4,56, 4,21. RMN de XH (CDC13, 300 MHz): δ 8,14, 8,07 (1H, 2s, H-8), 7, 52-7,29 (5H, m, Ph), 6, 56-6,50 (1H, m, H-l'), 6,18-6,01 (1H, bs, NH2), 4,90-4,77 (1H, m, H-3') , 4, 46-4, 56 (2H, m, H-5') , 4,32-4,26 (1H, m, H-4'), 4,22-4, 02 (1H, m, CHNH), 3,85, 3, 83 (3H, 2s, CH30), 2, 92-2,61 (2H, m, H-2'), 1, 56-1, 44 (3H, m, Oí3CH) . Síntese de fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)] (CPF204).

Foi adicionado NMI (0,29 g, 3,50 mmol, 0,29 mL) a uma suspensão, sob agitação, de 2-cloro-2'-desoxiadenosina (0,200 g, 0,70 mmol) em THF seco (10 mL) . Foi adicionado, gota a gota, a -78 °C, fosforocloridato de fenil-(benzoxi-L-alaninilo) (0,74 g, 2,10 mmol) em THF seco. Após 15 min a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e a reacção foi deixada a misturar de um dia para o outro. Foi adicionado MeOH para inactivar a reacção, os voláteis foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH 100/0 a 95/5) e TLC preparativa (DCM/MeOH 96/4) para originar o produto sob a forma 25 de uma espuma branca (0,015 g, rendimento de 4%). RMN de 31P (MeOH, 121 MHz): δ 5,11, 4,81. RMN de ΧΗ (MeOH, 300 MHz): δ 8,12, 8,10 (1H, 2s, H-8), 7,23-7,04 (10H, m, PhO, PhCH2), 6,30-6,24 (1H, m, H-l'), 5, 04-5, 00 (2H, m, PhCH2), 4,52-4, 48 (1H, m, H-3'), 4,29-4,15 (2H, m, H-5'), 4,08-4,04 (1H, m, H-4'), 3,91-3,81 (1H, m, CPNH), 2, 63-2,54 (1H, m, um de H-2'), 2,41-2,33 (1H, m, um de H-2'), 1,24-1,17 (3 H, m, CH CH3) . RMN de 13C (MeOD; 75 MHz): δ 20, 6, 20, 8 (CH3), 41,2 (C-2'), 52,0, 52, 1 (CfíCH3), 67, 7, 68, 1, 68, 2, 68,3 (C-5', CH2 Ph) , 72,6 (C-3'), 86,2, 86, 4 (C-l'), 87,2, 87,3 (C-4'), 121,7, 121,8, 126,5, 129,6, 129,7, 129,9, 131,1, 137,6, 141,5 (C-5, C-8, PhCH2, PhO, "ipso" PhCh2) , 151,8, 151,9 (C—6), 152,4, 152,5 ("ipso" PhO), 155,7, 155, 8 (C-2), 158,4 (C- 4), 175,0, 175,2 (COOCH2Ph). Síntese de fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[1-naftil-(benzoxi-L-alaninilo)].

Foi adicionado NMI (0,29 g, 3,50 mmol, 0,29 mL) a uma suspensão, sob agitação, de 2-cloro-2'-desoxiadenosina (0,200 g, 0,70 mmol) em THF seco (6 mL) . Foi adicionado, gota a gota, a -78 °C fosforocloridato de i-naftil-(benzoxi-L-alaninilo) (0,85 g, 2,10 mmol) em THF seco (4 mL). Após 15 min a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi deixada, sob agitação, de um dia para o outro. Foi adicionado MeOH para inactivar a reacção, os voláteis foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH 100/0 a 95/5) e por HPLC preparativa (H20/CH3CN 60/40) para originar o produto sob a forma de uma espuma branca (mistura. 26 mg, eluição rápida. 11 mg, eluição lenta. 8 mg). 26 MISTURA (CPF210) RMN de 31P (CDC13, 202 MHz) : δ 3,64, 3,23 (int.: 1,00, 0,97) . HPLC: Tr 8,92, 9,59 min RMN de XH (CDC13, 500 MHz): δ 8,00-7,98 (1H, m, H-8 Naph), 7,86 (0,5 H, s, um de H-8 de um diastereoisómero), 7,77 (1H, d, H-5 Naph, 3J = 7,4 Hz), 7,75 (0,5 H, s, um de H-8 de um diastereoisómero), 7,56 (1H, d, H-4 Naph, 3J = 8,3 Hz), 7, 44-7, 40 (3H, m, H-2 Naph, H-6 Naph, H-7 Naph), 7,31-7,15 (6H, m, H-3 Naph, Ph), 6,25-6,21 (1H, m, H-l'), 5,73 (2H, bs, NH2), 5,04 (1H, s, CH2Ph de um diastereoisómero), 4,97 (0,5H, d, 2J = 12,2 Hz, um CH2Ph de um diastereoisómero), 4,94 (0,5H, d, 2J = 12,2 Hz, um CH2 Ph de um diastereoisómero), 4,57-4,54 (0,5H, m, H-3' de um diastereoisómero), 4,49-4,46 (0,5H, m, H-3' de um diastereoisómero), 4,34-4,23 (2H, m, H-5'), 4,11-4,00 (2H, m, H-4', CHNH), 3,91 (0,5H, CHNH de um diastereoisómero), 3,90 (0,5H, CH NH de um diastereoisómero), 3,13 (0,5H, OH de um diastereoisómero), 3,01 (0,5H, OH de um diastereoisómero), 2,56-2,51 (0,5H, m, um H-2' de um diastereoisómero), 2,43-2,29 (1,5H, m, três H-2'), 1, 27-1, 24 (3H, 2d, CHCH3) . RMN de 13C (CDC13; 125 MHz): δ 19,7, 19,8 (CH3), 38,8 (C-2'), 49, 4, 49,5 (CHCH3), 64, 8, 66,2, 66,3 (C-5', CH2Ph), 69,8 (C-3'), 83,0 (C-l'), 83,9, 84,0 (C-4'), 113,9, 114,0 (C-2 Naph), 117,6, 120,2, 120,3, 123,9, 124,5, 125,2, 125,4, 125,5, 125,7, 126,8, 127,1, 127,4, 127,5, 127,6 (C-5, C-8, PhCH2, C-5a Naph, C-3 Naph, C-4 Naph, C-5 Naph, C-6 Naph, C-7 Naph, C-8 Naph, C-8a Naph), 133,6, 133,7, 134,1 ("ipso" PhCH2, C-4a Naph), 145,3 (C-l Naph), 149,3 (C-6), 153,0 (C-2), 155,13 (C-4), 172,4 (COOCH2Ph). 27 ELUIÇÃO RÁPIDA (cpf211) RMN de 31P (CDC13, 202 MHz): δ 3,60, 3,22 (int.: 4,87, 1,00). HPLC: Tr 7,59, 8,92 min RMN de XH (CDC13, 500 MHz): δ 8,03 (1H, d, 3J = 7,5 Hz, H-8 Naph), 7,92 (0,2H, s, um de H-8 do diastereoisómero minoritário), 7,80 (0,8H, s, H-8), 7,79 (1H, d, 3J = 7,4 Hz, H-5 Naph), 7,61 (1H, d, H-4 Naph, 3J = 8,3 Hz), 7,47-7,44 (3H, m, H-2 Naph, H-6 Naph, H-7 Naph), 7,35-7,12 (6H, m, H-3 Naph, Ph), 6,29-6,26 (1H, m, H-l'), 5,88 (2H, bs, NH2), 5,08 (0,4H, s, CH2 Ph do diastereoisómero minoritário), 5,05, 4,97 (1,6H, 2H, 2J = 12,2 Hz, Ctf2Ph) , 4,61-4,58 (0,2H, m, H-3' do diastereoisómero minoritário), 4,54-4,51 (0,8H, m, H-3'), 4,36- 4,32 (2H, m, H-5'), 4,12-4,06 (2,2H, m, H-4', CHNH, CHNH do diastereoisómero minoritário), 3,82 (0,8H, CHNH), 3,32 (0,2H, OH do diastereoisómero minoritário), 3,25 (0,8H, OH), 2,58-2,53 (0,2H, m, um H-2' do diastereoisómero minoritário), 2,46-2,42 (0,2H, m, um H-2' do diastereoisómero minoritário, 2,41-2,33 (1,6H, m, H-2'), 1,31-1,29 (3H, 2H, CHCH3) . ELUIÇÃO LENTA (cpf212) RMN de 31P (CDCI3, 202 MHz): δ 3, 64, 3,25 (int.: 1,00, 28,15) . HPLC: Tr 9,59, 10,92 min RMN de XH (CDC13, 500 MHz): δ 7,99-7,97 (1H, dd, H-8 Naph), 7,87 (1H, s, H-8), 7, 77-7, 74 (1H, m, H-5 Naph), 7,57 (1H, d, H-4 Naph, 3J = 8,3 Hz), 7,44-7,40 (3H, m, H-2 Naph, H-6 Naph, H-7 Naph), 7, 29-7, 20 (6H, m, H-3 Naph, Ph), 6,23 (1H, m, H-l'), 5,81 (2H, bs, NH2) , 5,03 (2H, s, CH2Ph), 5,00, 4,92 (d, 2J = 12,3 Hz, CH2Ph do diastereoisómero minoritário), 4,58-4,55 (1H, m, H-3'), 4,49, 4,48 (m, H-3' do diastereoisómero 28 minoritário), 4,34-4,23 (2H, m, H-5'), 4,08-3,99 (3H, m, H-4', CHNH, CHNH), 3,78 (CRNH do diastereoisómero minoritário), 3,31 (1H, bs, OH), 2,56-2,50 (1H, m, um H-2'), 2, 42-2,38 (1H, m, um H-2'), 2,37-2,31 (m, H-2' do diastereoisómero minoritário), 1,26 (3H, 2H, CHCH3) Síntese de fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[4-cloro-l-naftilo-(benzoxi-L-alaninilo)] (CPF218).

Foi adicionado NMI (0,26 g, 3,20 mmol, 0,25 mL) a uma suspensão, sob agitação, de 2-cloro-2'-desoxiadenosina (0,183 g, 0,64 mmol) em THF seco (6 mL).

Foi adicionado, gota a gota, a -78 °C f osfocloridato de 4-cloro-l-naftilo-(benzoxi-L-alaninilo) (0,87 g, 1,92 mmol) em THF seco (4 mL). Após 15 min a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi deixada, sob agitação, de um dia para o outro.

Foi adicionado MeOH para inactivar a reacção, os voláteis foram evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH 100/0 a 95/5) e por HPLC preparativa (H2O/CH3CN 60/40) para originar o produto sob a forma de uma espuma branca (15 mg, 3%). RMN de 31P (CDC13, 202 MHz) : δ 3, 45, 3, 26. HPLC: Tr 7,92, 10,20 min. RMN de XH (CDCI3, 500 MHz): δ 8,14-8,10 (1H, m, H-5 Naph), 7, 99-7, 96 (1H, m, H-8 Naph), 7,88 (0,5 H, s, um de H-8 de um diastereoisómero), 7,82 (0,5 H, s, um de H-8 de um diastereoisómero), 7,54-7,49 (1H, m, H-6 Naph), 7,47-7,40 (1H, m, H-7 Naph), 7,32-7,14 (7H, m, H-2 Naph, H-3 Naph, Ph), 6,25- 29 6,22 (1H, m, H-l') , 6,04 (2H, bs, NH2), 5,00 (1H, s, CHZ Ph de um diastereoisómero) , 4,97 (0, 5H, d, 2J = 12, 2 Hz, um CH2Ph de um diastereoisómero), 4,90 (0,5H, d, 2J = 12, 2 Hz, um CH2Ph de um diastereoisómero), 4,59-4,54 (1H, m, H- -3'), 4,33- -4,19 (2, 5H, m, H-5 ', CH NH de um diastereoisómero), 4 ,08-3, 9 6 ( 2,5H, m, H- 4', CHNH, CHNH de um diastereoisómero), 3,61, 3,57 (1H, 2 bs, OH 3'), 3,01 (0,5H, OH de um diastereoisómero), 2,59-2,34 (2H, m, H-2'), 1,25-1,23 (3H, m, CHCH3) . RMN de C13 (CDC13; 125 MHz) : (δ 20,8 (CH3), 39, 7 (C-2'), LO O LO (CHCH3) , 66,2, 66,3 (C-5') , 67,4 (CH2 Ph) , 71,0 (C-3'), 84,1 (C-l'), CO 85, 0, 85,1 (C-4'), 114,8, 114,9, 115,1, 118,8, 121,8, 124,7, 125,5, 127,2, 127,8, 128,1, 128,3, 128,5, 128,6, 128,7 (C-2 Naph, C-3 Naph, C-4 Naph, C-5 Naph, C-6 Naph, C-7 Naph, C-8 Naph, C-8a Naph, Ph), 131,6 (C-4a), 135,0 ("ipso" PhCHz), 139,3,139,4 (C-8), 145,3,145,4 (C-l Naph), 150,4 (C-6), 154,1 (C-2), 156,1 (C-4), 173,3 (COOCH2Ph). Síntese de fosfato de 2-amino-6-cloropurina-2'-desoxirribósido-5'-[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)] (CPF194).

Foi adicionado NMI (0,36 g, 4,40 mmol, 0,35 mL) a uma suspensão, sob agitação, de 6-cloro-2'-desoxiguanosina (0,25 g, 0,88 mmol) e fosforocloridato de fenil-(benzoxi-L-alaninilo) (0,93 g, 2,64 mmol) em THF seco (10 mL) a -78 °C. Após 15 min a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e a reacção foi deixada a misturar de um dia para o outro. Foi adicionado MeOH para inactivar a reacção, os voláteis foram evaporados. O residuo foi purificado por cromatografia flash (DCM/MeOH 100/0 a 96/4) e TLC preparativa (DCM/MeOH 97/3) para originar o produto sob a forma de uma espuma branca (0,145 g, rendimento de 27,0%). RMN de 31P (MeOH, 121 MHz): δ 5,33, 5, 00. RMN de 2Η (MeOH, 300 MHz): δ 8,17, 8,16 (1H, 2s, H-8), 7,32-7,13 30 (10Η, m, PhO, PhO H2), 6,37, 6, 32 (1H, 2d, H-l'), 5,11-5,06 (2H, m, Ph CH2), 4,61-4,56 (1H, m, H-3'), 4,41-4,20 (1H, m, H-5'), 4,18-4,08 (1H, m, H-4'), 4, 00-3, 89 (1H, m, CfíNH) , 2, 84-2, 68 (1H, m, um de H-2'), 2,41-2,30 (1H, m, um de H-2'), 1,30-1,24 (3H, m, CHCH3) . RMN de 13C (MeOD; 75 MHz) : δ 20,6, 20, 7, 20, 8 (CH3), 40,4, 40,7 (C—2') , 51,9, 52,1 (CHCH3), 67, 8, 68,1, 68, 4 (C-5', CH2Ph), 72,8 (C- -3'), 86,4 (C-l'), 87, 1, 87,3, 87, 4 (C-4'), 121,7, 121,8, 125,8, 126,5, 129,7, 129,9, 131,1 (PhCH2, PhO), 137,5, 137, 6 ("ípso" PhCH2) , 143,2, 143,3 0 1 co 152,0 (C—6), 152,4, 152,5 ("ipso” PhO), 155,0, 155,1 (C—2), 161,9 (C-4), 175,0, 175, 2 (COOCH2Ph) . Síntese de fosfato de 9-p-D-arabinofuranosil-2-fluoroadenina-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninilo)]. (CPF109) 9-p-D-arabinofuranosil-2-fluoroadenina (50,0 mg, 0,175 mmol) foi co-evaporada, duas vezes, com tolueno, foi dissolvida em 6 mL de THF/Piridina (respectivamente, mistura 2:1) e foi adicionado NMI (71,8 mg, 0,875 mmol, 70 pL) . A mistura foi arrefecida a -17 °C, num banho de gelo/sal e foi adicionada ao longo de 1 hora, uma solução de f osf orocloridato de fenil-(metoxi-L-alaninilo) (145,8 mg, 0,525 mmol, 525 pL) 1 M em THF gota a gota, sob atmosfera inerte. Após lha reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente, foi agitada durante 16 h, depois, foi inactivada com metanol. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash utilizando diclorometano/metanol (gradiente de eluição de 95:5 a 85:5). O composto isolado foi, adicionalmente, purificado por cromatografia preparativa em camada fina utilizando clorofórmio/metanol como solvente (94:6) para originar o produto sob a forma de um óleo límpido incolor 31 que solidificou numa espuma branca após trituração e co-evaporação com éter dietílico (9,5 mg, 10,3%). RMN de 19F (MeOD; 282 MHz) : δ-54, 04. RMN de 31P (MeOD; 121 MHz) : δ 4,99. RMN de XH (MeOD; 300 MHz): δ 8,22, 8,20 (1H, 2xs, H-8) 7,38-7,19 (5H, m, PhO), 6,33, 6,32 (1H, 2xd, 3J = 3,4 Hz, H-l' ) 4,89-4,27 (4H, m, H-2 ' +H-5'+H-4'), 4,17-4,03 (1H, m, H-3 ') 4, 00-3, 85 (1H, m, CtfCH3), 3, 66-3, 65 (3H, 2xs, Ctf30) , 1,34, 1,29 (3 H, 2xd, 3J = 7,1 Hz, CH3CH) . RMN de 13C (MeOD; 75 MHz): δ 20,7, 20, 8, 20, 9 (CH3CH), 51,9 (CH3CH) , 53,1, 53,2 (ÇH30) , 67, 4, 67, 5, 67, 8, 67, 9 (C—5'), 77,3, 77, 4, 77, 6 (C-4'+C-2'), 84, 0, 84,1, 84,2, 84,3 (C—3'), 86,5, 86,7 (C-l'), 118,2 (adenosina-C), 121,8, 121,9 ("m", PhO), 126,5 ("p", PhO), 131,1 {"ipso", PhO), 142,9, 143,0 (5J = 2,9 Hz, C-8), 142,8, 142, 9 (C-8), 152,4, 152,5, 152,6 (adenosina-C + "ipso" PhO), 159,2, 159,4, 159,6, 162,4 (adenosina-C), 175,7, 175,8, 175,9 (COOMe). 32 Síntese de fosfato de 2-cloro-2'-beta-fluoro-2'-desoxiadenosina-5'-[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)] (CPT2001)

Fosfato de clofarabina-5[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)]

Foi preparado CPT2001 a partir de uma solução de Clofarabina (0,23 g, 0,75 mmol) e fosforocloridato de fenil-(benzoxi-L-alaninilo) (0,80 g, 2,25 mmol) em 12,5 mL de THF/Pyr anidro (4/1), sob agitação, a -80 °C. Foi adicionado NMI (0,31 g, 300 pL, 3,75 mmol), gota a gota, ao longo de 1 min. Após 15 min a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 12 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash, eluindo com diclorometano/metanol 98/2, para originar o produto puro sob a forma de um sólido espumoso branco (0,31, rendimento de 66,0%). 33

RMN de 31P (MeOD, 202 MHz) : δ 3, 77, 3,64; RMN de 19F (MeOD, 470 MHz): δ-198,98, - 199,01; RMN de XH (MeOD, 500 MHz): δ 8,17, 8,16 (1H, 2s, H-8), 7,34-7,15 (10H, m, PhO, PhCH2), 6,46-6,40 (1H, m, H-l'), 5,21-5,07 (3H, m, H-2', Ph CH2), 4, 56, 4,52 (1H, 2s, H-3'), 4,40-4,39 (2H, m, H-5'), 4,19-4,16 (1H, m, H-4'), 4,04-4,01 (1H, m, CHCH3), 1,35, 1,33 (3H, 2d, 3J = 8,5 Hz, CHCH3) } RMN de 13C (MeOD, 75 MHz): δ 20,3, 20, 4, 20,5 (CH3), 51,6, 51,8 (CfíCH3), 66, 8, 67, 1 (C—5'), 68,0 (CH2 Ph), 75, 0, 75, 1, 75, 3 (C-3'), 83,6, 83,7, 83,8 (C—4'), 84,3, 84,4, 84,5 (C-l'), 95,6, 97,2 (C-2'), 118,6 (C-5), 121,4, 121,5, 126,2, 129,2, 129,3, 129,6, 130,8 (PhO, CH2Ph), 137,2 {“ipso" CH2Ph) , 141,7, 141,8 (C-8), 151,7, 152,2 ("ipso" PhO, C-6), 155,6 (C-4), 158,1 (C-2), 174,8, 174,9 (C02CH2Ph) . HPLC (H20/CH3CN de 100/0 a 0/100 em 20 min) : tR 11,76 min. ESI MS (positivo): 621 [M].

Dados biológicos

Cada dos compostos CPF203, CPF204, CPF194, CPF210, CPF211, CPF212, CPF218 e CPT2001 foi testado em linhas de células leucémicas para avaliar a sua eficácia anti-cancerigeno. Os compostos foram testados utilizando os reagentes de ensaio MTS de Promega (CellTiter96 Aqueous One solution proliferation assay). Os compostos foram testados entre 10 μΜ e 0,002 μΜ em diluições de quatro vezes.

As linhas celulares utilizadas são estabelecidas nas Tabelas IA e IB abaixo e são linhas de células de leucemia NB4, HL60, NB4R2, K562, KG1 e U937. 34 A Tabela IA proporciona o valor IC50 ± desvio padrão de cada linha celular e o composto testado e para todas as linhas celulares em conjunto, em μΜ. Na Tabela IA abaixo são incluídos os dados da linha celular correspondente para a cladribina como um exemplo comparativo. A Tabela IB proporciona o valor de IC50 para cada linha celular e composto testado. Na Tabela IB abaixo são incluídos os dados da linha celular correspondente para a clofarabina, como um exemplo comparativo. 35

Tabela ΙΑ 3 6

Cladribina CPF203 CPF204 CPF194 CPF210 CPF211 CPF212 CPF218 NB4 9,39 ±4,25 1,16 i 0,04 0,23 i 0,10 - 0,24 i 0,11 0,43 i 0,04 0,23 i 0,04 0,27 i 0,03 HL60 10,28 ± 3,46 6,23 ± 1,75 1,75 ± 0,89 - - 0,65 ± 0,19 1,66 ± 0,24 1,78 ± 0,50 1,75 ± 0,76 NB4R2 7,81 ± 1,64 2,28 ± 0,59 0,63 ± 0,04 - 1,03 ± 0,15 1,18 ± 0,21 1,01 ± 0,39 1,09 ± 0,04 K562 - - - - 2,36 i 1,57 2,28 i 1,32 5,80 i 3,60 4,41 i 0,95 KG1 5,48 ± 1,86 2,23 ± 0,69 0,67 ± 0,20 2,64 ± 0,18 1,80 ± 0,72 2,63 ± 1,19 1,54 ± 0,44 1,56 ± 0,25 U937 2,08 i 2,75 1,29 i 0,91 0,08 i 0,01 - 0,19 i 0,09 0,28 i 0,03 0,14 i 0,15 0,55 i 0,44 Todas as linhas 7,21 ± 3,69 2,64 ± 2,09 0,67 ± 0,70 2,64 ± 0,18 1,04 ± 1,02 1,41 ± 1,09 1,75 ± 2,34 1,60 ± 1,47

Tabela IB

Clofarabina CPT2001 NB 4 0,20 0,12 U937 0,26 0,08 A tabela II abaixo estabelece as estruturas dos compostos presentemente exemplificados que realizam a presente invenção, nos termos da fórmula I acima, com, em cada caso, Z = H e Q = 0.

Tabela II

X Y Τ' T Ar Ri r2 r3 r4 CPF203 nh2 Cl H H C6H5 ch3 H ch3 H CPF204 nh2 Cl H H c6h5 ch3 H c6h5ch2 H CPF210 nh2 Cl H H o O ch3 H c6h5ch2 H CPF211 nh2 Cl H H C10H7 ch3 H c6h5ch2 H CPF212 nh2 Cl H H C10H7 ch3 H c6h5ch2 H CPF218 nh2 Cl H H 4-C1CioH6 ch3 H c6h5ch2 H CPF194 Cl nh2 H H c6h5 ch3 H c6h5ch2 H CPF109 nh2 F H OH c6h5 ch3 H ch3 H CPT2001 nh2 Cl H F c6h5 ch3 H c6h5ch2 H

No que se refere aos dados contidos na Tabela IA, é verificado que cada dos compostos que realizam a presente invenção apresenta actividade anti-cancerigeno intensificada, em comparação com a cladribina. 37

Notavelmente, o composto CPF210, em que Ar é naftilo não substituído, apresenta uma maior potência anti-leucémica do que o composto CPF203 correspondente, em que Ar é fenilo não substituído. É também notável a actividade anti-leucémica apresentada pelo composto CPF194, o qual é o fosforamidato do composto inactivo conhecido isocladribina.

No que se refere aos dados contidos na Tabela IB, é verificado que o composto CPT2001 que realiza a presente invenção, apresenta actividade anti-cancerígeno intensificada em comparação com a clofarabina.

Lisboa, 10 de Setembro de 2010 38

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I:

em que: cada de X e Z é seleccionado independentemente de H, OH, F, Cl, Br, I, alquiloCi_6 e NR5R6, em que cada de R5 e R6 é seleccionado independentemente de H e alquiloCi_6; Y é seleccionado de OH, F, Cl, Br, I, alquiloCi_6, alciniloC2-8f NR5R6, em que cada de R5 e R6 é seleccionado independentemente de H e alquiloCi_6; cada de T e Τ' é seleccionado independentemente de H, Fe OH, com a condição de que apenas um de T e Τ' possa ser OH; Q é seleccionado de 0 S e CR7R8, em que R7 e R8 são seleccionados independentemente de H e alquiloCi_6; 1 Ar é seleccionado de ariloC6-3o e heteroariloC6-30r cada dos quais é, opcionalmente, substituído com um ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo consistindo de hidroxilo, acilo, aciloxilo, nitro, amino, S03H, SH, SR', em que R' é seleccionado independentemente do mesmo grupo que Ri; carboxilo, ésteresCi-6, aldeídoCi-6, ciano, alquilaminoCi_6/ dialquilaminoCi_6, tiol, cloro, bromo, fluoro, iodo, alquiloCi-6, alceniloC2-6, alcoxiCi_6-alquiloCi_6, alcoxiCi_6-ariloC5_i0 cicloalquiloC5_7, cicloalquilC5-ii-alquiloCi_6f cicloalceniloC5-7, cicloalciniloC5-7, arilC5-ualquiloCi_6, alquilCi_6ariloC5_n, ariloCs-n, f luoroalquiloCi_6 e f luoroalceniloC2-6; cada de Ri e R2 é seleccionado independentemente de H e do grupo consistindo de alquiloCi_20, alceniloC2_20, alcoxiloCi_20/· alcoxiCi_20alquiloCi_2o, alcoxiCi_2oariloC6-3cu alciniloC2-20/ cicloalquilC3-2oariloC6-30í ariloxiloC6-30 e heterocicliloC5-20/ estando, qualquer destes, opcionalmente substituído; cada de R3 e R4 é seleccionado independentemente de H e do grupo consistindo de alquiloCi_2o, alceniloC2_2o, alcoxiloCi_2(u alcoxiCi_2oalquiloCi_20f alcoxiCi_2oariloC6-30/ alciniloC2-20/· cicoalquilC3_2oariloC6-3o, ariloxiloC6-3o e heterocicliloC5-20f estando, qualquer destes, opcionalmente substituído; quaisquer substituintes opcionais em Ri, r2, R3 e R4 sendo um ou mais substituintes seleccionados independentemente do grupo consistindo de hidroxilo, acilo, aciloxilo, nitro, amino, amido, S03 H, SH, SR', em que R' é 2 seleccionado independentemente do mesmo grupo que Ri, carboxilo, ésteresCi_6, aldeídoCi_6, ciano, alquilaminoCi-6, dialquilaminoCi-6, tiol, cloro, bromo, fluoro, iodo, cicloalquiloC5-7, cicloalceniloC5-7, cicloalciniloC5_7, ariloC5_n, arilC5_iialquiloCi_6 e heterocicliloC5_20; e os seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que cada de X e z é seleccionado independentemente de H, OH, F, Cl e nh2 e Y é seleccionado de OH, F, Cl, NH2 e alciniloC2-8 ·
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que X é NH2, Y é Cl e Z é H.
4. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que X é Cl, Y é nh2 e z é H.
5. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que X é NH2, Y é F e Z é H.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que T e Τ' são cada H.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 em que um ou ambos de T e T' é F.
8. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que X é NH2, Y é alciniloC2-8f zéH, τ é H e τ' é OH.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que Q é 0. 3
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R4 é H.
11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que Ri e R2 são seleccionados de forma a que a parte -N-CRiR2-COO- corresponde à de um aminoácido natural.
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que cada de r2 e R2 é seleccionado independentemente de Me e H.
13. Composto de acordo com a reivindicação 12 em que um de Ri e R2 é Me e um de R2 e R2 é H, de forma a que o átomo C contendo Ri e R2 tenha quiralidade L como na alanina natural.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que Ar é não substituído.
15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13 em que Ar é substituído com um, dois, três, quatro, cinco ou mais substituintes seleccionados do grupo compreendendo partes dadoras de electrões e partes aceitadoras de electrões.
16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores em que Ar é seleccionado do grupo compreendendo fenilo, piridilo, naftilo e quinolilo, cada dos quais pode ser substituído ou não substituído. 4
17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores compreendendo o diastereoisómero RP, o diastereoisómero SP ou uma mistura dos diastereoisómeros RP e SP.
18. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado do grupo compreendendo: fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninilo)]; fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)]; fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[1-naftil-(benzoxi-L-alaninilo)]; fosfato de 2-cloro-2'-desoxiadenosina-5'-[4-cloro-l-naftilo-(benzoxi-L-alaninilo)]; fosfato de 2-amino-6-cloropurina-2'-desoxirribósido-5'-[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)]; e fosfato de 9-p-D-ara'binofuranosil-2-fluoroadenina-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninilo)].
19. Composto de acordo com a reivindicação 1 sendo: fosfato de 2-cloro-2'-beta-fluoro-2'-desoxiadenosina-5'-[fenil-(benzoxi-L-alaninilo)]. 5
20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, incluindo a opção de Y ser H, para utilização num método de tratamento, adequadamente na profilaxia ou no tratamento do cancro, mais adequadamente na profilaxia ou no tratamento da leucemia.
21. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, incluindo a opção de Y ser H, na preparação de um medicamento para a profilaxia ou tratamento do cancro, de um modo preferido, um medicamento para a profilaxia ou tratamento da leucemia.
22. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18 em combinação com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
23. Método de preparação de uma composição farmacêutica compreendendo o passo de combinar um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18 com um excipiente, veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
24. Composto de acordo com a reivindicação 19 para utilização num método de tratamento, adequadamente na profilaxia ou no tratamento do cancro, mais adequadamente na profilaxia ou no tratamento da leucemia.
25. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 19 na preparação de um medicamento para a profilaxia ou tratamento do cancro, de um modo preferido, um medicamento para a profilaxia ou tratamento da leucemia. 6
26. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 19 em combinação com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
27. Método de preparação de uma composição farmacêutica compreendendo o passo de combinar um composto de acordo com a reivindicação 19, com um excipiente, veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
28. Processo de preparação de um composto de fórmula I, compreendendo o processo compreendendo o processo fazer reagir composto de fórmula III: X HO

OH com um composto de fórmula IV: O R, r, o

«2 O Ar 7 em que Ar, Q, Fq, X Y, Z, T e Τ' têm os R-2/ R-3/ R-4 r significados estabelecidos em qualquer uma reivindicações 1 a 17. das Lisboa, 10 de Setembro de 2010 8