RU2464272C2

RU2464272C2 - Арилфосфорамидаты нуклеозида и их применение в качестве противовирусных средств для лечения вирусного гепатита с

Info

Publication number: RU2464272C2
Application number: RU2009123104/04A
Authority: RU
Inventors: ГАЙГЭН Кристофер МАК (GB); ГАЙГЭН Кристофер МАК; Плинио ПЕРРОНЭ (GB); Плинио ПЕРРОНЭ
Original assignee: Юнивесити Колледж Кардифф Кэнсалтэнтс Лимитед; Католиеке Университеит Лувен
Priority date: 2006-11-24
Filing date: 2007-11-23
Publication date: 2012-10-20
Also published as: CN101547932B; WO2008062206A3; MX2009005120A; CO6230992A2; SG171596A1; GB0623493D0; PL2097434T3; RU2009123104A; JP2010510301A; MY145856A; NO20092399L; AU2007323220B2; SI2097434T1; PT2097434E; CY1112254T1; CN101547932A; US20110124592A1; KR20090114356A; EP2412717A1; ECSP099462A

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I с противовирусной активностью, которые могут применяться в медицине

где Ar - нафтил; Т выбран из Н-, F-, N₃-,

-NH₂, -ОН, C_1-3-алкила, С_1-3алкил-О-, -SH и С_1-3алкилтио; V выбран из -ОТ′, -Н, -F и -Cl; где Т′ выбран из -Н, -СН₃, С_1-16алкилкарбонила, С_2-18алкенилкарбонила, С_1-10алкоксикарбонила, С_3-6циклоалкилкарбонила и С_3-6циклоалкилоксикарбонила; Т′′ выбран из -Н, -СН₃, С_1-16алкилкарбонила, С_2-18алкенилкарбонила, С_1-10алкилоксикарбонила, С_3-6циклоалкилкарбонила и С_3-6циклоалкилоксикарбонила; n-0 или 1, и, когда n=1, Х=О, когда n=0, существует двойная связь между положением 3 и 4 и X выбран из Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкила и NR₅R₆; R₅ и R₆ выбраны из Н и С_1-6алкила; Z выбран из Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкила и NR₅R₆; Y выбран из Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкила, С_2-8алкинила, NR₅R₆; Q выбран из О, S и CR₇R₈; R₇ и R₈ выбраны из Н и С_1-6алкила; R₁ и R₂ выбраны из Н, С_1-20алкила, С_2-20алкенила, С_1-20алкоксиС_1-20алкила, С_1-20алкоксиС_6-30арила, С_2-20алкинила, С_3-20циклоалкилС_6-30арила и С_5-20гетероциклила; R₃ и R₄ выбраны из Н, С_1-20алкила, С_2-20алкенила, С_1-20алкоксиС_1-20алкила, С_1-20алкоксиС_6-30арила, С_2-20алкинила, С_6-30арила, С_3-20циклоалкилС_6-30арила и С_5-20гетероциклила; R₁ и R₄ могут вместе содержать цепь -(СН₂)₃-алкилен. Предложены новые биологически активные соединения. 6 н. и 21 з.п. ф-лы, 9 пр., 2 табл.

Description

Настоящее изобретение относится к химическим соединениям, их изготовлению и использованию при лечении и профилактике вирусных инфекций, особенно заболеваний человека. В частности, хотя не исключительно, настоящее изобретение относится к химическим соединениям, полезным как противовирусные средства, активные в отношении к вирусу гепатита С (HCV).

В заявке WO 2006/012078 описываются определенные фосфорамидаты арила нуклеозида, их синтез и их использование в качестве исходного вещества ингибитора зависимой от РНК вирусной полимеразы, в частности их использование в качестве исходного вещества ингибиторов вируса гепатита С (HCV) полимеразы NS5B в качестве исходного вещества к ингибиторам HCV и для терапии инфекции гепатита С.

Заявка WO 2006/100439 относится к фосфорамидатам кладрибина, изокладрибина, флударибина и клофарибина и их использованию при лечении рака, в частности лейкемии. Внутриклеточная опосредованная киназой активация соединений, описанных в WO 2006/100439, относящаяся к лечению рака, различна по отношению к внутриклеточной опосредованной киназой активации, требуемой при лечении и профилактике вирусных инфекций.

Целью настоящего изобретения является создание новых химических соединений, которые обеспечивают улучшенную профилактику и терапию вирусных инфекций в человеке, в частности улучшенную профилактику и терапию инфекции гепатита С.

Согласно первой цели настоящего изобретения, создается соединение формулы I:

в котором

Ar содержит два или более конденсированных ароматических ядер и выбран из группы, состоящей из С_9-30арил и С_6-30гетероарил, любое из ядер которых произвольно замещено;

Т выбран из группы, включающей: -Н, -F, -N₃, -NH₂, -ОН, С_1-3алкил, C_1-3алкокси, меркапто и C_1-3алкилтио;

V выбран из группы, включающей: -ОТ′, -Н, -F и -Cl, где T′ выбрано из группы, включающей: -Н, -СН₃, С_1-16алкилкарбонил, С_2-18алкенилкарбонил, С_1-10алкоксикарбонил, С_3-6циклоалкилкарбонил и С₃-₆циклоалкилоксикарбонил;

Т′′ выбран из группы, включающей: -Н, -СН₃, С_1-16алкилкарбонил, С_2-18алкенилкарбонил, С_1-10алкоксикарбонил, С_3-6циклоалкилкарбонил и С_3-6циклоалкилоксикарбонил; n=0 или n=1, в котором

когда n=1, X=О и

когда n=0, между положением 3 и положение 4 существует двойная связь, и X выбран из группы, включающей: Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкил и NR₅R₆, где каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из Н и С_1-6алкила;

Z выбран из группы, включающей: Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкил и NR₅R₆, где каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из Н и С_1-6алкила;

Y выбран из группы, включающей: Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкил, С_2-8алкенил и NR₅R₆, где каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из Н и C_1-6алкила;

Q выбран из группы, включающей: О, S и CR₇R₈, где R₇ и R₈ независимо выбраны из Н и C_1-6алкила;

При этом каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из Н и группы, включающей:

С_1-20алкил, С_2-20алкенил, С_1-20алкокси, С_1-20алкоксиС_1-20алкил, С_1-20алкоксиС_1-30арил, С_2-20алкинил, С_3-20циклоалкилС_6-30арил, С_6-30арилокси, С_5-20гетероциклил, любой из которых произвольно замещен; и

каждый из R₃ и R₄ независимо выбран из Н и группы, включающей: С_1-20алкил, С_2-20алкенил, С_1-20алкоксиС_1-20алкил, С_1-20алкоксиС_6-30арил, С_2-20алкинил, С_3-20циклоалкил, С_6-30арил, С_6-20гетероциклил, любой из которых произвольно замещен, при этом R₃ предпочтительно алкил, более предпочтительно R₃ выбран из группы, включающей: метил, этил, 2-пропил, n-пропил, циклогексил, 2-бутил и бензил;

при условии, что R₁ и R₄ вместе могут содержать цепь -(СН₂)₃-;

и фармацевтически приемлемые соли, сольваты и их пролекарства.

Согласно еще одной цели настоящего изобретения, предложено соединение формулы I для использования в способе терапии для профилактики и лечения вирусной инфекции, более конкретно, в профилактике и лечении вируса гепатита С.

Согласно еще одной цели настоящего изобретения, предлагается использовать соединения формулы I в производстве лекарства для профилактики или терапии вирусной инфекции, предпочтительно лекарства для профилактики или терапии вируса гепатита С.

Согласно еще одной цели настоящего изобретения, предлагается способ профилактики или лечения вирусной инфекции, особенно вируса гепатита С, включающий введение эффективного количества соединения формулы I пациенту, нуждающемуся в таком лечении.

Согласно еще одной цели настоящего изобретения, предлагается фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, растворителем или наполнителем.

Согласно еще одной цели настоящего изобретения, предлагается способ изготовления фармацевтической композиции, включающий стадию комбинирования соединения формулы I с фармацевтически приемлемым наполнителем, носителем или растворителем.

Согласно еще одной цели настоящего изобретения, предлагается процесс изготовления соединения формулы I, содержащий взаимодействие соединения формулы III:

с соединением формулы IV:

где Ar, Т, V, Т′′, n, X, Y, Z, Q, R₁, R₂, R₃ и R₄ имеют значения, приведенные выше соглансо формулы I.

Следует понимать, что настоящее изобретение распространяется на метаболические промежуточные звенья соединений формулы I, в которой Ar=Н и R₃=Н или R₃, как определено выше.

Следует отметить, что в соединениях, определенных выше согласно формулам I и III, соединение, в котором n=1 и X=О, представляет собой кето-таутомерическую форму, иную, чем в эквивалентном энольном соединении, где n=0 и X=ОН.

Настоящее изобретение, в частности, включает гуанин как основную часть, где n=1, X=O, Y=NH₂ и между положением 3 и положением 4, т.е. между атомом углеродного кольца, несущего =O, и смежным атомом азотного кольца, не существует никакой двойной связи.

Соединения, воплощающие настоящее изобретение, обладают удивительно высокой антивирусной активностью. В частности, было найдено, что соединения, воплощающие настоящее изобретение, имеют высокий потенциал по отношению к вирусу гепатита С.

Предполагается, что повышенный антивирусный потенциал соединений по настоящему изобретению имеет место из-за присутствия в молекуле формулы I комбинации конденсированного многоядерного кольца объекта для Ar в части фосфорамидата и метилен-группы -СН₂- в положении β-2′ в части гликозида нуклеозида, с Т, V и Т′′, установленными выше.

С_9-30арил является ароматическим соединением, содержащим 9-30 атомов углеродного кольца в формате арила. С_6-30гетероарил представляет собой ароматическое соединение, содержащее 6-30 атомов углеродного кольца в формате арила, по меньшей мере, с одним ариловым кольцом, содержащим атом гетероатомное кольцо.

Соответственно, Ar может содержать два, три, четыре, пять или шесть конденсированных ароматических колец. Предпочтительно, Ar содержит арил в виде двух или трех конденсированных ароматических колец. Более предпочтительно, Ar представляет собой два конденсированных кольца ароматического соединения, выбранного от арила С₉ до арила С₂₀ и гетероарила С₆-С₂₀. Здесь Ar - гетероарил, имеющий, соответственно, 1-12 гетероатомов в пределах колец арила и, соответственно, независимо выбраны 1-4 атома азота, 1-4 атома кислорода и 1-4 атома серы. Предпочтительно, гетероатомы включают азот.

Имеющиеся атомы углерода и/или гетероатомы в ариле или гетероатомное кольцо гетероарила Ar могут быть замещены на кольцо с одним или несколькими заместителями, как изложено ниже по отношению к заместителям, которые могут присутствовать в группе Ar. Предпочтительно, Ar является незамещенным.

Соответственно, Ar = нафтил или Ar = хинолил, каждый из которых может быть произвольно замещен.

Наиболее предпочтительно, когда Ar = нафтил. Нафтил, предпочтительно, связан со структурой О-Р в положении 1 или α в группе нафтила, т.е. в атоме углерода, примыкающем к конденсированной связи между двумя кольцами в группе нафтила. Любой дополнительный заместитель, предпочтительно, присутствует в 4 положении. Предпочтительно, Ar является незамещенным 1-нафтилом.

Если Аг = хинолил, он, предпочтительно, связан со структурой О-Р в 4 положении на группе хинолила, т.е. на том же кольце, как и кольцо, содержащее гетероатом N, причем N пронумерован, как положение 1. Любой заместитель, предпочтительно, присутствует в 6 положении, т.е. на кольце, не содержащем гетероатома N, причем N пронумерован, как положение 1.

Предпочтительно, Т выбран из группы, включающей: Н-, F-, СН₃- и С₂Н₅-.

Предпочтительно, V выбран из группы, включающей: Н-, F- и ОТ′, где Т′=Н- или Т=СН₃-.

Предпочтительно, Т′′=Н-.

Предпочтительная комбинация Т, V и Т" представляет собой Т=Н, V=ОН и Т′′=Н.

Комбинация вышеупомянутых объектов для Ar с Т=Н, V=ОН и Т′′=Н является наиболее предпочтительной.

Предпочтительно, n=1 и X=O. Более предпочтительно, n=1, X=O и Y=NH₂ и объект основы нуклеозида соответствует 9-сшитому гуанину. Если Z=Н, объект основы нуклеозида соответствует незамещенному 9-сшитому гуанину. Если Z не Н, объект основы нуклеозида соответствует 8-замещенному 9-сшитому гуанину.

Альтернативно, предпочтительно, n=0 и X выбран из группы, включающей: NH₂, F, Cl и NR₅R₆, где один из R₅ и R₆ является Н и один из R₅ и R₆ является С_1-6алкил. Если n=0, Х=NH₂, Y=Н и Z=Н, при этом объект основы нуклеозида соответствует 9-сшитому аденину.

Предпочтительно, Y выбран из группы, включающей: Н, F, Cl, NH₂ и NR₅R₆, где один из R₅ и R₆ является Н и один из R₅ и R₆ является C_1-6алкилом.

Предпочтительно, Z выбран из группы, включающей: Н, F и Cl.

Предпочтительно, Q=О.

Предпочтительно, R₃=алкил. Более предпочтительно, R₃ выбран из группы, включающей: -СН₃, CH₃CH₂-, 2-пропил, n-пропил, циклогексил, 2-бутил и бензил, еще более предпочтительно, R₃ выбран из группы, включающей: метил, этил, 2-пропил и бензил, и, еще более предпочтительно, R₃ выбран из группы, включающей этил и бензил.

Предпочтительно, R₄=Н или вместе с R₁ содержит -(СН₂)₃-, чтобы предоставить группу, соответствующую пролину.

Предпочтительно, R₁ и R₂ независимо выбраны из группы, включающей: Н, 2-пропил, бензил и -СН₂изопропил, или выбраны таким образом, что они соответствуют боковым цепям природной аминокислоты.

Предпочтительно, один из R₁ и R₂ является метилом и один из R₁ и R₂ является Н, в результате чего атом С, несущий R₁ и R₂, имеет хиральность L, как в природном аланине.

Предпочтительные соединения имеют в сочетании предпочтительные сходства для Ar, Т, V, Т′, Т′′, X, Y, Z, Q, R₁, R₂, R₃ и R₄, как описано выше.

В частности, предпочтительные соединения имеют:

n=1, X==O, Y=NH₂, Z=Н, Q=О, Т=Н, V=ОН и Т′′=Н и, таким образом, получены из гуанина; и

n=0, X=NH₂, Y=Z=Н, Q=О, Т=Н, V=ОН и Т′′=Н и, таким образом, получены из аденина.

Каждое из наиболее предпочтительных соединений, описанных выше и полученных из гуанина или аденина, является наиболее предпочтительным, когда каждый Ar, R₁, R₂, R₃ и R₄ имеют сходство и являются наиболее предпочтительными, когда Ar = 1-нафтил и R₃ = бензил или R₃ = этил.

В частности, предпочтительные соединения описаны в примерах 2, 3, 4, 6, 7, 8 и 11 и представлены в таблице II.

Центр фосфора в соединениях формулы I может быть диастереоизомером R_p или S_p или он может быть смесью диастереоизомера R_p или S_p.Предпочтительно, чтобы это был один чистый диастереоизомер. Соответственно, выбирается наиболее активный диастереоизомер.

Соответственно, фармацевтические приемлемые соли, сольваты и пролекарства соединений формулы I представляют собой сложные эфиры или амиды в 3′-ОН части гликозида группы нуклеозида.

Предпочтительно, процесс приготовления соединения формулы I включает стадию защиты свободных групп ОН, кроме 5′ на части гликозида группы нуклеозида. Фосфорохлоридат может быть получен из арилокси фосфорохлоридата и, соответственно, защищенной производной аминокислоты. Альтернативно, может использоваться фосфатная химия с подходящими конденсирующими агентами.

Каждый из Ar, R₁, R₂, R₃ и R₄ может быть замещен одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или большим числом заместителей, независимо выбранными из группы, содержащей электронодонорные и электроноакцепторные заместители.

Соответственно, заместители Ar независимо выбраны из группы, включающей: ОН-, R′C(=O)-, R′C(=O)O-, -NO₂, (-NH₂), -SO₃H, -SH, R′S-, в котором R′ независимо выбран из той же самой группы, упомянутой выше как R₁; -СООН, С_1-6эфиры, С_1-6альдегид, -CN, С_1-6алкиламино, С_1-6циалкиламино, тиол, хлор, бром, фтор, йод, С_1-6алкил, С_2-6алкенил, С_1-6алкокси-С_1-6алкил, С_1-6алкокси-С_5-10арил, С_5-7циклоалкил, С_5-11циклоалкил-С_1-6алкил, С_5-7циклоалкенил, С_5-7циклоалкинил, С_5-11арилС_1-6алкил, C_1-6алкилС_5-11арил, С_5-11арил, С_1-6фторалкил и С_2-6фторалкенил. Каждый заместитель может быть замещен любым другим заместителем.

Заместители R₁, R₂, R₃ и R₄ независимо выбраны из группы, включающей: -ОН, R′C(C=O)-, R′C(C=O)-, -NO₂, -NH₂, -CONH₂, -S0₃, -H, -SH, -SR′, в котором R′ независимо выбран из той же самой группы, обозначенной выше как R₁, -СООН, C_1-6эфиры, C_1-бальдегид, CN-, С_1-6алкиламино, C_1-6циалкиламино, тиол, хлор бром, фтор, йод,

С₅-₇циклоалкил, С₅-₇циклоалкенил, С_5-7арил, С_5-11арилС_1-6алкил и С_5-10гетероциклил. Каждый заместитель может быть замещен любым другим заместителем.

R₁ и R₂ независимо выбраны из группы, включающей: Н, С_1-10алкил, С_2-10алкенил, С_2-10алкоксиС_1-10алкил, С_1-10алкоксиС_6-10арил, С_2-10алкинил, С_3-20циклоалкил, С_3-20циклоалкенил, С_4-20циклоалкинил и С_5-10гетероциклил.

R₁ и R₂, соответственно, выбраны из боковых цепей природных или синтетических аминокислот.

R₁ и/или R₂, предпочтительно, являются боковой цепью природной аминокислоты, выбранной из группы, включающей: глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, тирозин, триптофан, серии, треонин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновую кислоту, глютаминовую кислоту, аспарагин, глутамин, цистеин и метионин. Конкретно, R₁ и/или R₂, предпочтительно, выбраны из группы, включающей: -Н, -СН₃, -СН(СН₃)₂, -СН₂СН(СН₃)₂, -СН(СН₃)(СН₂СН₃), -CH₂Ph, -CH₂Ph-ОН, -CH₂SH, -CH₂CH₂SCH₃, -СН₂ОН, -СН(СН₃)(ОН), -CH₂CH₂CH₂CH₂NH₃ ⁺, -CH₂CH₂CH₂NHC(=NH₂ ⁺)NH₂, -CH₂C(O)O, -CH₂CH₂C(O)O, -CH₂C(O)NH₂, -CH₂CH₂(O)NH₂, и

в котором R₁ и R₄ вместе могут формировать 5-членное гетероциклическое кольцо, имеющее структурную формулу

R₃ и R₄, соответственно, независимо выбраны из группы, включащей: Н, С_1-10алкил, С_2-10алкенил, С_1-10алкоксиС_1-10алкил, С_1-10алкоксиС_6-10арил, С_2-10алкинила, С_3-20циклоалкила, С_3-20циклоалкенила, С_4-20циклоалкинила и С_5-20гетероциклила.

R₃, соответственно, выбран из группы, включающей: Н, С_1-18алкил, С_3-20циклоалкил и бензил.

R₄, соответственно, выбран из группы, включающей: Н, С_1-18алкил, С_3-20циклоалкил и С_5-20гетероциклил. В частности, R₄ выбран из группы, включающей: Н, метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил и циклогексил.

В предпочтительном примере осуществления R₁ и R₂ являются метилом или связаны для формирования закрытого 5-членного гетероциклического или карбоциклического кольца, например, присутствующего в пролине.

Как используется здесь, термин "алкил" относится к прямому или разветвленному насыщенному одновалентному циклическому или ациклическому углеводородному радикалу, имеющему число атомов углерода, как обозначено (или не обозначено, при этом ациклическая алкильная группа, предпочтительно, имеет 1-20, более предпочтительно, 1-6 и, наиболее предпочтительно, 1-4 атомов углерода, и циклическая алкильная группа, предпочтительно, имеет 3-20, более предпочтительно, 3-10, и, наиболее предпочтительно, 3-7 атомов углерода), произвольно замещенных одним, двумя, тремя или более заместителями, независимо выбранными из группы, описанной выше по отношению к заместителям, которые могут присутствовать с R₁, R₂, R₃ и R₄. В качестве неограничивающего примера, подходящая алкильная группа включает метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, октил, нонил и додецил.

Как используется здесь, термин "алкенил" относится к прямому или разветвленному ненасыщенному одновалентному ациклическому или циклическому углеводородному радикалу, имеющему один или большее количество двойных связей С=С и имеющему ряд атомов углерода, как обозначено (или там, где не обозначено, ациклическая алкенильная группа, предпочтительно, имеет 2-20, более предпочтительно, 2-6 и, наиболее предпочтительно, 2-4 атома углерода, и циклическая алкенильная группа, предпочтительно, имеет 4-20, более предпочтительно, 4-6 атомов углерода), произвольно замещенных одним, двумя, тремя или большим числом заместителей, независимо выбранными из группы, описанной выше по отношению к заместителям, которые могут присутствовать как R₁, R₂, R₃ и R₄. В качестве неограничивающего примера подходящие алкенильные группы включают винил, пропенил, бутенил, пентенил и гексенил.

Как используется здесь, термин "алкинил" относится к прямому или разветвленному ненасыщенному одновалентному ациклическому или циклическому углеводородному радикалу, имеющему один или большее количество тройных связей С≡С и имеющему число атомов углерода, как обозначено (или не обозначено, ациклическая алкинильная группа, предпочтительно, имеет 2-20, более предпочтительно, 2-6 и, наиболее предпочтительно, 2-4 атома углерода, а циклическая алкенильная группа, предпочтительно, имеет 7-20 и, более предпочтительно, 8-20 атомов углерода), произвольно замещенных одним, двумя, тремя или большим количеством заместителей, независимо выбранных из группы, описанной выше по отношению к заместителям, которые могут присутствовать как R₁, R₂, R₃ и R₄.

Как используется здесь, термин "алкокси" или термин "алкилокси" относится к группе алкил-О-, где алкил, как он определен выше, и где часть алкила может быть произвольно замещена одним, двумя, тремя или большим числом заместителей, как описано выше для алкила. В качестве неограничивающего примера подходящие алкоксильные группы включают метокси, этокси, n-пропокси, изопропокси, n-бутокси, трет-бутокси, втор-бутокси, n-пентокси, n-гексокси и 1,2-диметилбутокси. Термин "циклоалкилокси" относится к группе циклоалкил-О-, где циклоалкил - как он определен выше, и где циклическая часть алкила может быть произвольно замещена одним, двумя, тремя или более заместителями, как описано выше для алкила.

Как используется здесь, термин "арилокси" относится к арильной группе, в которой арил определен ниже, и где часть арила может быть произвольно замещена одним, двумя, тремя или более заместителями, как описано выше по отношению к группе Ar.

Как используется здесь, термин "алкоксиалкил" относится к алкильной группе, имеющей алкокси-заместитель. Связь осуществляется через алкильную группу. Часть алкила и часть алкокси определены здесь по отношению к определениям алкила и алкокси, соответственно. Каждая из частей алкокси и алкила может быть замещена одним, двумя, тремя или большим числом заместителей, как описано выше по отношению к определению алкила.

Как используется здесь, термин "алкоксиарил" относится к арильной группе, имеющей заместитель алкокси. Связь осуществляется через арильную группу. Часть алкокси и часть арила определены здесь по отношению к алкокси и арилу, соответственно. Каждая из частей алкокси и арила может быть замещена одним, двумя, тремя или большим числом заместителей, как определено здесь по отношению к определениям алкокси и арила, соответственно.

Как используется здесь, термин "циклоалкиларил" относится к арильной группе, имеющей заместитель циклического алкила. Связь осуществляется через арильную группу. Часть циклоалкила и часть арила определены здесь по отношению к циклоалкилу и арилу, соответственно. Каждая из частей циклоалкила и арила может быть произвольно замещена одним, двумя, тремя или большим числом заместителей, как изложено здесь по отношению к алкилу и арилу, соответственно.

Если не определено иначе по отношению к определению "Ar", термин "арил" относится к одновалентному ненасыщенному ароматическому карбоциклическому радикалу, имеющему одно, два, три, четыре, пять или шесть колец, предпочтительно, одно, два или три кольца, которые могут быть конденсированными или бицикличными. Группа арила может быть произвольно замещена одним, двумя, тремя или большим числом заместителей, как описано выше по отношению к дополнительным заместителям, которые могут присутствовать на группе Ar. Предпочтительные арильные группы - ароматическое моноциклическое кольцо, содержащее 6 атомов углерода; ароматическая бициклическая или конденсированная система кольца, содержащая 7, 8, 9 или 10 атомов углерода; или ароматическая трициклическая система кольца, содержащая 10, 11, 12, 13 или 14 атомов углерода. Неограничивающие примеры арила включают фенил и нафтил. Предпочтительные группы заместителей независимо выбраны из -ОН, R′-C(=O)-, R′-C(=O)-O-, -NO₂, -NH₂, -SO₃H, -SH, - SR, в которых R′ независимо выбран из тех же самых групп, что и R₁; -СООН, -CN, С_1-6алкиламин, C_1-6диалкиламин, тиол, хлор, бром, фтор и йод.

Как используется здесь, термин "гетероциклил" относится к насыщенной или частично ненасыщенной системе гетероциклического кольца, имеющего одно, два, три, четыре, пять или шесть колец, предпочтительно, одно, два или три кольца, которые могут быть конденсированными или бицикличными и содержать в пределах кольца или колец, по меньшей мере, один атом, выбранный из группы, включающей N, О и S. Префикс "С_5-20" или "С_5-10", используемый перед гетероциклической системой, соответственно, означает пять-двадцать или пять-десять членов кольца в системе, по меньшей мере, один из которых выбран из группы, включающей N, О и S. Предпочтительны гетероциклические системы: моноциклическая система кольца, имеющая пять элементов, из которых, по меньшей мере, один элемент - N, О или атом S, и которая произвольно содержит один дополнительный атом О или один, два или три дополнительных атома N; моноциклическое кольцо, имеющее шесть элементов, из которых два или три элемента - атом N; бициклическая система кольца, имеющая девять элементов, из которых, по меньшей мере, один элемент - N, О или атом S, и которое произвольно содержит один, два или три дополнительных атома N; или бициклическая система кольца, имеющая десять элементов, из которых два или три элемента - атом N. Примеры включают, без ограничения, пирролинил, пирролидинил, 1,3-диоксоланил, имидазолинил, имидазолидинил, пиразолинил, пиразодилинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил.

Описанные выше атомы углерода и/или гетероатомы системы "гетероциклического" кольца могут быть замещены одним или несколькими гетероатомами в кольце. Здесь кольцо (кольца) замещены одним или несколькими гетероатомами, заместители-гетероатомы выбраны из кислорода, азота, серы и галогена F, Cl, Br и I. Здесь кольцо (кольца) замещены одним или несколькими гетероатомами, предпочтительно, 1, 2, 3 или 4 заместителями гетероатома, выбранными из группы, включающей кислород, азот и галоген. Предпочтительные группы заместителей независимо выбраны из гидрокси, ацила, ацилокси, нитро, амино, SO₃H₂, SH, SR′, где R′ независимо выбран из тех же самых групп, как и R′; карбоксил, циано, C_1-6алкиламино, C_1-6диалкиламино, тиол, хлор, бром, фтор и йод.

Процесс получения соединений, предпочтительно, осуществляется в присутствии подходящего растворителя. Подходящие растворители включают углеводородные растворители, такие как бензол и толуол; эфирные растворители, такие как диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, дифениловый эфир, анизол и диметоксибензол; галоидированные углеводородные растворители, такие как метиленхлорид, хлороформ и хлорбензол; растворители типа кетона, такие как ацетон, метилэтилкетон и метилизобутилкетон; растворители на основе спирта, такие как метанол, этиловый спирт, пропанол, изопропиловый спирт, н-бутиловый спирт и трет-бутиловый спирт; растворители на основе нитрила, такие как ацетонитрил, пропионитрил и бензонитрил; сложные эфиры типа этилацетата и бутилового эфира уксусной кислоты; карбонаты, такие как этиленкарбонат и пропиленкарбонат и т.д. Они могут использоваться отдельно или два или несколько из них могут использоваться в смеси.

Предпочтительно, в процессе получения соединений настоящего изобретения используется инертный растворитель. Термин "инертный растворитель" означает растворитель, инертный в условиях проведения реакции описанных соединений, включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран, диметилформамид, хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), диэтиловый эфир, этилацетат, ацетон, метилэтилкетон, метанол, этиловый спирт, пропанол, изопропиловый спирт, трет-бутанол, диоксан, пиридин и т.д. В частности, предпочтителен тетрагидрофуран.

Предпочтительно, процесс получения соединений по настоящему изобретению осуществляется в сухих условиях.

Как используется здесь, термин "стереоизомер" определяет все возможные соединения, состоящие из одинаковых атомов, связанных той же самой последовательностью связей, но имеющие различные трехмерные структуры, которые не являются взаимозаменяемыми и которыми могут обладать соединения по настоящему изобретению.

Там, где соединения по настоящему изобретению имеют, по меньшей мере, один хиральный центр, они могут, соответственно, существовать как энантиомеры. Там, где соединения обладают двумя или более хиральными центрами, они могут дополнительно существовать как диастереомеры. Там, где процессы получения соединений согласно изобретению дают смеси стереоизомеров, эти изомеры могут быть отделены обычными способами, такими, как препаративная хроматография. Соединения могут быть получены в стереохимически смешанной форме, или отдельные энантиомеры могут быть получены стандартными способами, известными квалифицированным специалистам, например, энантиоспецифическим синтезом или растворением, формированием диастереометрических пар кислым формированием оптически активной кислотой, сопровождаемым фракционной кристаллизацией и регенерацией свободного основания. Соединения также могут быть растворены формированием диастереометрических сложных эфиров или амидов, сопровождаемым хроматографическим разделением и удалением хирального вспомогательного вещества. Альтернативно, соединения могут быть растворены, используя колонку хиральной HPLC. Следует отметить, что все такие изомеры и их смеси входят в объем настоящего изобретения.

Кроме того, следует отметить, что фосфорнокислый центр является хиральным в соединениях по настоящему изобретению, и соединения могут существовать как диастереоизомеры R_p и S_p.Состав соединения может быть смесью R_p и S_p или одним чистым диастереомером. Предпочтительно соединение, в основном, в виде чистого одного изомера.

Может быть сформирована смесь диастереомеров R_p к S_p в соотношении 1:1. Альтернативно, могут быть соотношения 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:15, 1:20, 1:50 или 1:100 смеси диастереомеров R_p к S_p или наоборот.

Термин "сольват" означает соединение, как оно определено здесь, или фармацевтически приемлемую соль соединения структуры (I) или (II), в котором молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель представляет собой физиологически приемлемый агент с регулируемой дозировкой. Примеры подходящих растворителей: этиловый спирт, вода и т.д. Когда растворителем является вода, молекула упоминается как гидрат.

Соединения по настоящему изобретению могут также присутствовать в виде фармацевтически приемлемых солей. При использовании в медицине соли соединений по настоящему изобретению относятся к нетоксичным "фармацевтически приемлемым солям". Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) одобрило фармацевтически приемлемые соли (см. журналы International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1977, Jan. 66(1)), включая фармацевтически приемлемые кислоты или соли активных оснований.

Фармацевтически приемлемые кислотно-анионные соли включают без ограничения ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, цитрат, дигидрохлорид, соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, эдисилат, эстолат, эсилат, фумарат, глицертат, глюконат, глутамат, гликолевый санилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинавтоат, йодид, изетионат, лактат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, памоат, пантотенат, фосфат, дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, основную уксуснокислую соль, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат и тритиодид.

Фармацевтически приемлемые основные/катионные соли включают без ограничения алюминий, бензоатин, кальций, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, литий, магний, калий, прокаин, натрий и цинк.

Настоящее изобретение включает пролекарства. В основном, такие пролекарства будут функциональными производными соединений, которые в естественных условиях легко преобразуются в необходимое соединение. Таким образом, в способах обработки по настоящему изобретению, термин "введение" (препарата) будет охватывать терапию различных нарушений конкретно раскрытым соединением или соединением, которое, возможно, конкретно не раскрыто, но которое преобразуется в соединение, определенное в естественных условиях после ввода лекарства пациенту. Обычные процедуры для выбора и изготовления подходящих производных пролекарства описаны, например, в докладе "Создание пролекарств", под редакцией Н.Bundgaard, Elsevier, 1985.

Фармацевтически приемлемые производные сложного эфира, в котором одна или несколько свободных гидроксильных групп этерифицируются в фармацевтически приемлемый сложный эфир, являются, в частности, сложными эфирами пролекарства, которые могут быть преобразованы сольволизом при физиологических условиях в соединения по настоящему изобретению, имеющие свободные гидроксильные группы.

Фармацевтические композиции для использования в соответствии с настоящим изобретением могут быть сформированы обычным способом, используя один или несколько физиологически приемлемых носителей, содержащих наполнители и вспомогательные вещества, которые облегчают переработку активных соединений в фармацевтические препараты. Эти фармацевтические соединения могут быть произведены способом, который сам по себе известен, например, посредством обычного смешивания, растворения, гранулирования, создания драже, отмучивания, эмульгирования, заключения в капсулу, захватывания или с помощью процессов лиофилизации. Правильная дозировка соединения зависит от маршрута выбранного введения. Соединение формулы I или фармацевтическое соединение согласно настоящему изобретению можно вводить пациенту, который может быть человеком или животным, любыми подходящими средствами.

Лекарства, используемые в настоящем изобретении, можно вводить перорально или перентерально, включая внутривенное, внутримышечное, внутрибрюшное введение, подкожно, трансдермально, по воздуху (аэрозоль), ректально, во влагалище и путем местного применения (включая введение через рот, щеку или под язык).

Для перорального введения соединения по изобретению будут, в основном, предоставлены в виде таблеток или капсул, в виде порошка или гранул или как водный раствор или суспензия.

Таблетки для перорального использования могут включать активный ингредиент, смешанный с фармацевтически приемлемым наполнителем, таким, как инертные растворители, драже, связующие вещества, смазывающие агенты, подслащивающие агенты, ароматические агенты, красители и консервирующие средства. Подходящие инертные растворители включают карбонат натрия и кальция, фосфат натрия и кальция и лактозу, в то время как кукурузный крахмал и альгиновые кислоты являются подходящие агентами расщепления. Связующие вещества могут включать крахмал и желатин, в то время как смазывающий агент, если он вообще присутствует, может быть стеаратом магния, стеариновой кислотой или тальком. При желании, таблетки могут быть покрыты материалом, таким, как моностеарат глицерина или дистеарат глицерина, для задержания поглощения в желудочно-кишечном тракте.

Капсулы для перорального использования включают твердые капсулы из желатина, в которых активный ингредиент смешан с твердым растворителем, и мягкие капсулы из желатина, в которых активный ингредиент смешан с водой или маслом, таким, как арахисовое масло, вазелиновое масло или оливковое масло.

Соединения для ректального введения могут быть представлены в виде свеч с подходящей основой, содержащей, например, масло какао или салицилат.

Соединения, подходящие для влагалищного введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремы, геля, мази, пены или спрея, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые являются подходящими для данной технологии.

Для внутримышечного, интраперитонеального, подкожного и внутривенного использования соединения по изобретению могут быть представлены в виде стерильных водных растворов или суспензии, буферизованной подходящим рН и изотоничностью. Подходящие водные носители включают раствор Рингера-Локка и изотонический раствор хлорида натрия. Водная суспензия согласно изобретению может включать суспендирующие агенты, такие как производные целлюлозы, альгинат натрия, поливинилпирролидон и трагант и смачивающее вещество, такое как лецитин. Подходящие консервирующие средства для водной суспензия включают этил и n-пропил п-гидроксибензоат.

Соединения по настоящему изобретению могут также быть представлены как липосомальные препараты.

В целом, подходящая доза будет в диапазоне от 0,1 до 300 мг на килограмм массы тела реципиента в сутки. Предпочтительная более низкая доза составляет 0,5 мг на килограмм массы тела реципиента в сутки, более предпочтительная доза - 1,0 мг на килограмм массы тела реципиента в сутки. Подходящая доза, предпочтительно, находится в диапазоне 1-50 мг на килограмм массы тела в сутки и, более предпочтительно, в диапазоне 1-10 мг на килограмм массы тела в сутки. Желательная доза, предпочтительно, представлена как два, три, четыре, пять или шесть или несколько поддоз, которые вводят через подходящие интервалы в течение дня. Эти поддозы можно вводить в виде однократной дозы, например, содержащей 10-1500 мг, предпочтительно, 20-1000 мг и, наиболее предпочтительно, 50-700 мг активного ингредиента в виде однократной дозы.

Примеры

Варианты осуществления настоящего изобретения будут теперь описаны на следующих примерах.

Целевые соединения были приготовлены взаимодействием нуклеозида или его модифицированного исходного вещества с необходимым фосфорхлоридатом. Последние упомянутые реагенты были приготовлены известными способами из арилфосфордихлоридатов с гидрохлоридами эфира аминокислоты. Ниже приводятся несколько примеров.

Стандартная процедура С2: Приготовление фосфорамидатов

2′,3′-циклопентилидин-модифицированного нуклеозида

^tBuMgCl (2,0 моль-эквивалент) и 2′,3′-циклопентилиден, 4′-азидо-цитидина (1,0 моль-эквивалент) были растворены в сухом тетрагидрофуране (ТГФ) (31 моль-эквивалент) и перемешаны в течение 15 минут. Затем был добавлен по каплям 1М раствор подходящего фосфорхлоридата (2,0 моль-эквивалент) в сухом ТГФ, после чего энергично размешан. Был добавлен насыщенный раствор NH₄C,l и растворитель был удален при пониженном давлении, чтобы получить твердое вещество желтого цвета, которое затем было очищено.

Стандартная процедура СЗ: Приготовление фосфорамидатов модифицированного нуклеозида

2′,3′-циклопентилиден фосфорамидаты модифицированного нуклеозида растворяли в водном растворе 80% муравьиной кислоты течение 4 часов. Растворитель был удален при пониженном давлении, чтобы получить твердое вещество белого цвета, которое затем было очищено.

Стандартная процедура С4: Приготовление фосфорамидатов модифицированного нуклеозида

2′,3′-изопропилиден фосфорамидаты модифицированного нуклеозида были растворены в водном растворе 60% уксусной кислоты при 90°С в течение ночи.

Растворитель был удален при пониженном давлении, чтобы получить твердое вещество белого цвета, которое затем было очищено.

Пример 1

Синтез β-2′-метил-аденозина (CHCl)

N6-трет-бутаноил-β-2′-метил-2′,3′,5′-трибензоил-аденозина (400 мг, 0,590 ммоль) было добавлено к раствору МеОН, насыщенного аммиаком, и размешано при комнатной температуре. Спустя 12 часов растворитель был удален, и полученное вещество было постепенно очищено на хроматографических колонках, начиная со смеси CHCl₃/МеОН в соотношении 9:1, затем 8:2. Был получен чистый продукт в виде твердого вещества белого цвета (120 мг, 0,427 ммоль, 72%).

δ_H(d₆-DMSO): 8,47 (IH, s, Н8-аденозин), 8,15 (1H, s, Н2-аденозин), 7,30 (1H, s, NH₂6-аденозин), 5,95 (1Н, s, Н1′-аденозин), 5,25-5,21 (3Н, m, ОН5′-аденозин, ОН3′-аденозин, ОН2′- аденозин), 4,12-4,05 (1Н, d, Н3′-аденозин, J=8,6 Гц), 3,91 (1H, м, Н4′-аденозин), 3,84 (1Н, м, Н5′-аденозин), 3,70 (1Н, м, Н5′-аденозин), 0,77 (3Н, s, СН₃2′-аденозин); δ_C (d₆-диметилсульфоксид): 156,02 (1С, С6-аденозин), 152,53 (1С, С2-аденозин), 149,01 (1С, С4-аденозин), 138,68 (1С, С8-аденозин), 118,67 (1С, С5-аденозин), 90,78 (1С, C1′-аденозин), 82,52 (1С, С4′-аденозин), 78,46 (1С, С2′-аденозин), 71-63 (1С, С3′-аденозин), 59,47 (1С, С5′-аденозин), 19,83 (1С, СН₃-2′-аденозин).

Рассчитано для C₁₁H₁₅N₅O₄: С 46,97%, Н 5,38%, N 24,90%.

Найдено: С 46,67%, Н 5,22%, N 24,20%.

Пример 2

Синтез 2′,3′-O,O-циклопептилидин-β-2′-метил-аденозин 5′-О-[фенил(этокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозина (60 мг, 0,172 ммоль), ^tBuMgCl (0,5 мл, 1М раствор в ТГФ, 0,519 ммоль) и α-нафтил(этокси-L-аланинил)фосфорохлоридата (0,5 мл 1М раствора в ТГФ, 0,519 ммоль). Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель СНС₃/МеОН (95:5). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (30 мг, 0,046 ммоль, 26%).

δ_P(d₄-СН₃ОН): 4,31, 4,26;

δ_H(d₄-СН₃ОН: 8,19 (1Н, s, Н2-аденозин), 8,10 (1H, s, Н8-аденозин), 7,88 (1Н, m, CH-нафтил), 7,73 (1H, m, СН-нафтил), 7,57-7,52 (4Н, m, СН-нафтил), 7,45-7,43 (1H, m, CH-нафтил), 6,26 (1H, m, Н1′-аденозин), 4,56-4,42 (4Н, m, Н4′-аденозин, Н3′-аденозин, 2′ Н5-аденозин), 4,08 (3Н, m, СНα, СН₂-этил), 2,21-2,09 (2Н, m, СН₂-циклопентил), 1,76-1,71 (6Н, m, 3 СН₂-циклопентил), 1,35 (3Н, d, СН₃-аланин, J=6,9 Гц), 1,25 (3Н, m, СН₃-этил), 0,95 (3Н, s, СН₃2′-аденозин).

Синтез β-2′-метил-аденозин 5′-О-[α-нафтил(этокси-L-аланинил)]фосфата (СНС2)

Изготовлен по стандартной процедуре С3 из 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозина 5′-О-[α-нафтил(этокси-L-аланинил)]фосфата (30 мг, 0,036 ммоль) и 10 мл 80% водного раствора НСООН. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой CHCl₃/МеОН (95:5), с последующей полупрепаративной HPLC. Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (4 мг, 0,007 ммоль, 19%).

δ_H (d₄-CH₃OH): 4,23. 4,20; δ_Н (d₄-CH₃OH): 8,24-8,19 (3Н, м, Н2-аденозин, Н8-аденозин, СН-нафтил), 7,90 (1Н, m, СН-нафтил), 7,63 (1H, СН-нафтил), 7,53 (4Н, m, СН-нафтил), 7,41 (1Н, m, СН-нафтил), 6,12 (1H, d, H1′-аденозин, J=2,1 Гц), 4,61-4,59 (2Н, d, Н1′-аденозин, Н4′-аденозин), 4,30 (1Н, m, Н5′-аденозин), 4,02-3.99 (3Н, m, СНα, СН₂-этил), 1,37 (3Н, m, СН₃-аланин), 1,27 (3Н, m, СН₃-этил), 0,95 (3Н, s, СН₃-2′-аденозин).

MS(ES) m/e: 609,2 (MNa+, 100%); точная масса: C₂₆H₃₁N₆O₈NaP, требуется 609,1846, найдено 609,1839.

Пример 3

Синтез 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозин 5′-О-[фенил(бензокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозина (40 мг, 0,115 ммоль), ^tBuMgCl (0,35 мл, 1М раствор в ТГФ, 0,345 ммоль) и α-нафтил(бензокси-L-аланинил)фосфорохлоридата (0,35 мл 1М раствора в ТГФ, 0,345 ммоль). Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель CHCl₃/МеОН (95:5). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (20 мг, 0,028 ммоль, 24%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,34, 4,18; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,50 (1Н, s, Н2-аденозин), 8,17 (1Н, s, Н8-аденозин), 7,90 (1Н, m, СН-нафтил), 7,71 (1H, m, СН-нафтил), 7,69 (1Н, СН-бензил), 7,55-7,50 (3Н, m, СН-нафтил, 2 СН-бензил), 7,42-7,27 (6Н, m, СН-нафтил, 2 СН-бензил), 6,25 (1Н, d, Н1′-аденозин), 5-10 (2Н, s, СН₂-бензил), 4,61 (1H, m, Н3′-аденозин), 4,41 (1Н, m, Н4′-аденозин), 4,15 (1H, m, CHα), 3,95 (1H, m, Н5′-аденозин, J=12,2 Гц), 3,85 (IH, m, Н5′-аденозин, J=12,2 Гц), 2,12-2,03 (2H, m, СН₂-циклопентил), 1,79-1,72 (6H, m, 3 СН₂-циклопентил), 1,37 (3H, d, СН₃-аланин, J=7,2 Гц), 0,89 (3H, s, СН₃-2′-аденозин).

Синтез β-2′-метил-аденозин 5′-O-[α-нафтил(бензокси-L-аланинил)]фосфата (СНС3)

Изготовлен по стандартной процедуре С3 из 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозина 5′-О-[α-нафтил(бензокси-L-аланинил)]фосфата (30 мг, 0,036 ммоль) и 10 мл 80% водного раствора НСООН. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой CHCl₃/МеОН (95:5), с последующей полупрепаративной HPLC. Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (5 мг, 0,008 ммоль, 21%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,25, 4,14;

δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,04-7,95 (3Н, m, Н2-аденозин, Н8-аденозин, СН-нафтил), 7,68 (1H, m, СН-нафтил), 7,48 (1H, m, СН-нафтил), 7,32-7,23 (3Н, m, СН-нафтил, 2 СН-6ензил), 7,16 (1Н, m, СН-нафтил), 7,05 (6Н, m, 3 СН-нафтил, 3 СН-6ензил), 5,88 (1H, d, H1′-аденозин, J=2.9 Гц), 4,85-4,65 (2Н, m, СН₂-6ензил), 4,37-4,35 (2Н, d, Н3′-аденозин Н3, Н4′-аденозин), 4,06 (2Н, m, Н5′-аденозин), 3,88-3,83 (1H, m, CHα), 1,35 (3Н, m, СН₃-аланин), 0,88 (3Н, s, СН₃-2′-аденозин).

MS(ES) m/е: 671,2 (MNa⁺, 100%); точная масса: C₃₁H₃₃N₆O₈NaP: требуется 671,1990, найдено 671,1995.

Пример 4

Синтез 2′,3′-O,O-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозин 5′-О-[фенил(трет-бутокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозина (60 мг, 0,172 ммоль), ^tBuMgCl (0,51 мл, 1М раствор в ТГФ, 0,51 ммоль) и α-нафтил(трет-бутокси-L-аланинил)фосфорохлоридата (0,5 мл 1М раствора в ТГФ, 0,519 ммоль). Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель CHCl₃/МеОН (95:5). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (27 мг, 0,039 ммоль, 22%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,37, 4,28;

δ_H (d₄-СН₃ОН): 8,21 (1Н, s, Н8-аденозин), 7,85 (1H, m, СН-нафтил), 7,73 (1H, m, CH-нафтил), 7,57-7,52 (4Н, m, СН-нафтил), 7,43-7,41 (1Н, m, СН-нафтил), 6,25 (1Н, M, Н1′-аденозин), 4,55-4,40 (4Н, m, Н4′-аденозин, Н3′-аденозин, 2′ Н5′-аденозин), 4,05 (1Н, m, СНα), 2,20-2,12 (2Н, m, СН₂-циклопентил), 1,79-1-69 (6Н, m, 3 СН₂-циклопентил), 1,36 (9Н, 3 СН₃-трет-бутил), 1,25 (3Н, d, СН₃-аланин, J=6,9 Гц), 0,96 (3Н, s, CH₃-2′-аденозин).

Синтез β-2′-метил-аденозин 5′-О-[α-нафтил(трет-бутокси-L-аланинил)]фосфата (СНС4)

Изготовлен по стандартной процедуре С3 из 2′,3′-О,О-циклопентилидин-β-2′-метил-аденозина 5′-О-[α-нафтил(трет-бутокси-L-аланинил)]фосфата (27 мг, 0,039 ммоль) и 10 мл 80% водного раствора НСООН. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой CHCL₃/MeOH (95:5) с последующей полупрепаративной HPLC. Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (10 мг, 0,016 ммоль, 41%).

δ_Р (d₄-СН₃ОН): 4,20, 4,08; δ_Н (d_4-CH₃OH): 8,20-8,15 (3Н, m, Н2-аденозин, Н8-аденозин, СН-нафтил), 7,81 (1Н, m, СН-нафтил), 7,60 (1H, СН-нафтил), 7,54 (4Н, m, СН-нафтил), 7,39 (1Н, m, СН-нафтил), 6,15 (1H, d, Н1′-аденозин), 4,63-4,57 (2Н, d, Н3′-аденозин, Н4′-аденозин), 4,31 (1Н, m, Н5′-аденозин), 4,00-3,97 (1Н, m, СНα), 1,39 (9Н, 3 CH₃-трет-бутил), 1,27 (3Н, m, СН₃-аланин), 0,97 (3Н, s, СН₃-2′-аденозин).

Пример 5

Синтез β-2′-метил-гуанозина (СНС5)

N2-ацетил-β-2′-метил-2′,3′,5′-трибензоил-гуанозин (1,42 г, 2,18 ммоль) был добавлен к раствору МеОН, насыщенным аммиаком и перемешивался при комнатной температуре. После 12 часов растворитель был удален, и полученное вещество было очищено на хроматографических колонках, используя в качестве растворителя смесь CHCl₃/МеОН в соотношении 8:2. Чистый продукт был получен в виде твердого вещества белого цвета (565 мг, 1,90 ммоль, 87%).

δ_Н (d₆-диметилсульфоксид): 10,52 (1Н, s, NH1-гуанозин), 8,48 (1Н, s, Н8-гуанозин), 6,52 (2Н, s, NH₂2-гуанозин), 5,73 (1Н, s, Н1-гуанозин), 5,24 (1H, d, ОН3′-гуанозин, J=6,3 Гц), 5,11 (1Н, m, ОН5′-гуанозин), 5,03 (1H, s, ОН2′-гуанозин), 3,97 (1H, m, Н3′-гуанозин)), 3,85-3,79 (2Н, m, Н4′,Н5′-гуанозин), 3-66 (1H, d, Н5′-гуанозин, J=12,2 Гц), 0,81 (3Н, s, СН₃-2′-гуанозин); δ_C (d₄-диметилсульфоксид): 156,72 (1С, С6-гуанозин), 153,68 (1С, С2-гуанозин), 150,77 (1С, С4-гуанозин), 135,07 (1С, С8-гуанозин), 116,38 (1С, С5-гуанозин), 90,10 (1С, С1′-гуанозин), 82.30 (1С, С3′-гуанозин), 78,52 (1С, С2′-гуанозин), 71,63 (1С, С4′-гуанозин), 59,40 (1С, С5′-гуанозин), 19,96 (1С, СН₃-2′-гуанозин).

MS(ES) m/e: 320,2 (MNa⁺, 100%); точная масса: C₁₁H₁₅N₅O₅Na, требуется 320,0968, найдено 320,0971.

Пример 6

Синтез 2′,3′-O,O-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[фенил(бензокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозина (170 мг, 0,503 ммоль), ^tBuMgCl (1,0 мл, 1М раствор в ТГФ, 1,006 ммоль) и α-нафтил(бензокси-L-аланинил) фосфорохлоридата (1,0 мл раствора 1М в ТГФ, 1,006 ммоль). Сырье было очищено хроматографией на колонках, используя растворитель CHCl₃/МеОН (95:5). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (70 мг, 0,098 ммоль, 19%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,53, 4,40; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,28 (1Н, s, Н8-гуанозин), 7,84 (1Н, m, CH-нафтил), 7,77-7,71 (1Н, m, СН-бензил), 7,55-7,49 (4Н, m, 2 СН-нафтил, 2 СН-бензил), 7,44-7,29 (6Н, m, 4 СН-нафтил, 2 СН-6ензил), 6,06 (1H, d, Н1′-гуанозин), 5,10 (2Н, s, СН₂-бензил), 4,59 (1Н, m, Н3′-гуанозин), 4,52-4,45 (1Н, m, Н4′-гуанозин), 4,34 (2Н, Н5′-гуанозин), 4,14 (1Н, m, СНα), 1,59 (3Н, d, СН₃-изопропилидин, J=10,4 Гц), 1,37 (6Н, d, СН₃-аланин, СН₃-изопропилидин), 0,99 (3Н, d, СН₃-2′-гуанозин, J=20,11 Гц).

Синтез β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[нафтил(бензокси-L-аланинил)]фосфата (СНС6)

Изготовлен по стандартной процедуре С4 из 2′,3′-О,О-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозина 5′-О-[нафтил (бензокси-L-аланинил)] фосфата (70 мг, 0,098 ммоль) и 10 мл 60% раствора СН₃СООН в воде при 90°С в течение 15 часов. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой CHCl₃/МеОН (85:5), с последующей полупрепаративной HPLC. Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (12 мг, 0,018 ммоль, 18%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,25, 4,14; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,17 (1Н, m, Н8-гуанозин), 7,88 (1Н, m, СН-нафтил), 7,79 (1Н, m, СН-нафтил), 7,53 (2Н, m, СН-нафтил, СН-бензил), 7,42-7,40 (1Н, m, СН-нафтил), 7,36-7,21 (7Н, m, 3 СН-нафтил, 4 СН-6ензил), 6,05 (1Н, d, Н1′-гуанозин, J=8,4 Гц), 5,15-4,90 (2Н, m, СН₂-бензил), 4,58-4,49 (2Н, d, Н3′-гуанозин), 4,44-4,34 (2Н, m, Н5′-гуанозин), 4,17-4,11 (1Н, m, СНα), 1,37 (3Н, m, СН₃-аланин), 1,00 (3Н, s, СН₃-2′-гуанозин).

MS(ES) m/е: 687,2 (MNa⁺, 100%); точная масса: C₃₁H₃₃H₆O₉NaP, требуется 687,1954, найдено 687,1944.

Пример 7

Синтез 2′,3′-O,O-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозин 5′-O-[фенил(этокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозина (220 мг, 0,652 ммоль), ^tBuMgCl (1,3 мл, 1М раствор в ТГФ, 1,30 ммоль) и α-нафтил (этокси-L-аланинил)фосфорохлоридата (1,3 мл 1М раствора в ТГФ, 1,30 ммоль). Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель CHCl₃/МеОН (95:5). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (35 мг, 0,054 ммоль, 9%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,41, 4,32; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,18 (1Н, s, Н8-гуанозин), 7,88 (1Н, m, CH-нафтил), 7,73 (1Н, m, СН-нафтил), 7,59-7,52 (4Н, m, 4 СН-нафтил), 7,46-7,42 (1Н, m, СН-нафтил), 6,08 (1Н, d, Н1′-гуанозин), 4,62-4,40 (4Н, m, Н3′-гуанозин, Н4′-гуанозин, Н5′-гуанозин), 4,11-4,09 (3Н, m, СНα, СН2-этил), 1,59 (3Н, d, СН₃-изопропилидин, J=13,2 Гц), 1,37 (6Н, m, СН₃-аланин, СН₃-изопропилидин), 1-20 (3Н, m, СН₃-этил), 1,00 (3Н, m, СН₃-2′-гуанозин).

Синтез β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[α-нафтил(этокси-L-аланинил)]фосфата (СНС7)

Изготовлен по стандартной процедуре С4 из 2′,3′-О,О-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозина 5′-О-[нафтил(этокси-L-аланинил)]фосфата (35 мг, 0,054 ммоль) и 10 мл раствора 60% СН₃СООН в воде при 90°С в течение 15 часов. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой СНО₃/МеОН (85:5), с последующей полупрепаративной HPLC. Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (10 мг, 0,018 ммоль, 31%).

δ_P (d₄-CR₃OH): 4,25, 4,14; δ_Н (d₄-CR₃OH): 8,18 (1H, m, Н8-гуанозин), 7,87 (1H, m, СН-нафтил), 7,71 (1Н, m, СН-нафтил), 7,53 (4Н, m, 4 СН-нафтил), 7,51-7,40 (1Н, m, CH-нафтил), 5.93 (1Н, d, Н1′-гуанозин), 4,62-4,57 (2Н, m, Н3′-гуанозин, Н4′ гуанозин), 4,24 (2Н, m, Н5′-гуанозин), 4,03-3,98 (3Н, m, СНа, СН₂-этил), 1,31 (3Н, d, СН₃-аланин, J=7,9 Гц), 1,15 (3Н, m, СН₃-этил), 1,00 (3Н, m, СН₃-2′-гуанозин).

MS(ES) m/е: 625,3 (MNa⁺, 100%); точная масса: C₂₆H₃₁N₆O₉NaP, требуется 625,1795, найдено 6251788.

Аналитический расчет для C₂₆H₃₁N₆O₉P: С 51,83%, Н 5,19%, N 13,95%. Найдено: С 51,86%, Н 5,10%, N 12,04%,

Пример 8

Синтез 2′,3′-O,O-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[фенил(трет-бутокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозина (120 мг, 0,355 ммоль), ^tBuMgCl (0,70 мл, 1M раствор в ТГФ, 0,711 ммоль) и α-нафтил (третбутокси-L-аланинил)фосфорохлоридата (0,70 мл 1М раствора в ТГФ, 0,711 ммоль). Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель CHCl₃/МеОН (95:5). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (24 мг, 0,036 ммоль, 10%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,41, 4,32; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,20 (1Н, s, Н8-гуанозин), 7,89 (1H, m, CH-нафтил), 7,73 (1Н, m, СН-нафтил), 7,59-7,54 (4Н, m, 4 СН-нафтил), 7,49-7,42 (1Н, m, СН-нафтил), 6,07 (1Н, d, Н1′-гуанозин), 4,62-4,40 (4Н, m, Н3′-гуанозин, Н4-гуанозин), 2 Н5′-гуанозин), 3,99-3,86 (1Н, m, СНα), 1,58 (3Н, d, СН₃-изопиридин, J=13,7 Гц), 1,44 (9Н, s, 3 СН₃-трет-бутил), 1,38-1,34 (6Н, m, СН₃-аланин, СН₃-изопиридин), 1,01 (3Н, m, СН₃2′-гуанозин).

Синтез β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[нафтил(третбутокси-L-аланинил)]фосфата (СНС8)

Изготовлен по стандартной процедуре С4 из 2′,3′-О,О-изопропилидин-β-2′-метил-гуанозина 5′-О-[α-нафтил(третбутокси-L-аланинил)]фосфата (24 мг, 0,036 ммоль) и 10 мл раствора 60% СН₃СООН в воде. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой СНСН₃/МеОН (85:5), с последующей полупрепаративной HPLC. Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (4 мг, 0,018 ммоль, 17%).

δ_P (d₄-CH₃OH): 4,23, 4,10; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,20 (1H, m, Н8-гуанозин), 7,85 (1Н, m, СН-нафтил), 7,67 (1H, m, СН-нафтил), 7,57 (4Н, m, 4 СН-нафтил), 7,53-7,43 (1Н, m, CH-нафтил), 6,00 (1Н, d, Н1′-гуанозин). 4,61-4,55 (2Н, m, Н3′-гуанозин, Н4′- гуанозин), 4,25 (2Н, m, 2 Н5′-гуанозин), 4,00-3,97 (1Н, m, СНα), 1,47 (9Н, s, 3 СН₃-трет-бутил), 1.36 (3Н, m, СН₃-аланин), 1,00 (3Н, m, СН₃2′-гуанозин).

Пример 9

Синтез 2′,3′-O,O-изопропилиден-β-2′-метил-гуанозин 5′-O-[нафтил(метокси-L-аланинил)]фосфата

Изготовлен по стандартной процедуре С2 из 2′,3′-О,О-изопропилиден-β-2′-метил-гуанозина (130 мг, 0,385 ммоль), ^tBuMgCl (0,96 мл, 1М раствор в ТГФ, 0,96 ммоль) и α-нафтил (метокси-L-аланинил)фосфорохлоридата (0,96 мл 1М раствора в ТГФ, 0,96 ммоль). Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель CHCl₃/МеОН (97:3). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (26 мг, 0,041 ммоль, 11%).

δ_Р (d₄-СН₃ОН): 4,51, 4,45; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,21 (1Н, d, Н8-гуанозин, J=7,5 Гц), 7,91-7,89 (1Н, m, СН-нафтил), 7,73 (1Н, m, СН-нафтил), 7,58-7,53 (4Н, m, 4 СН-нафтил), 7,48-7,45 (1Н, m, СН-нафтил), 6,09 (1Н, d, Н1′-гуанозин, J=7,4 Гц), 4,63 (1Н, d, Н3′-гуанозин, J=3,0 Гц), 4,57-4,53 (2Н, m, Н4′-гуанозин), 4,43-4,41 (2Н, m, Н5′-гуанозин), 4,12-4,05 (1Н, m, СНα), 3,62 (3Н, d, СН₃-метил, J=10,1 Гц), 1,59 (3Н, d, СН₃-изопропилидин, J=7,9 Гц), 1,40 (3Н, d, СН₃-аланин, J=3,4 Гц), 1,35 (3Н, d, СН₃-изопропилидин, J=7,2 Гц), 1,05 (3Н, d, СН₃-2′-гуанозин, J=7,0 Гц).

Синтез β-2′-метил-гуанозин 5′-O-[α-нафтил(метокси-L-аланинил)]фосфата (СНС9)

Изготовлен по стандартной процедуре С4 из 2′,3′-О,О-изопропилиден-β-2′-метил-гуанозина 5′-О-[α-нафтил(метокси-L-аланинил)]фосфата (26 мг, 0,041 ммоль) и 10 мл 60% раствора СН₃СООН в воде при 90°С в течение 15 часов. Сырье было очищено на хроматографических колонках, используя растворитель для первой CHCl₃/МеОН (92:8). Полученный чистый продукт представлял собой твердое вещество белого цвета (4,1 мг, 0,007 ммоль, 17%).

δ_P (d₄-СН₃ОН): 4,35, 4,26; δ_Н (d₄-СН₃ОН): 8,20 (1Н, d, Н8-гуанозин, J=5,8 Гц), 7,91-7,87 (2Н, m, СН-нафтил), 7,70 (1H, m, СН-нафтил), 7,58-7,52 (3Н, m, 3 СН-нафтил), 7,50-7,41 (1Н, m, СН-нафтил), 5,93 (1Н, s, Н1′-гуанозин), 4,58-4,56 (2Н, m, Н3′-гуанозин Н4′-гуанозин), 4,29-4,21 (2Н, m, Н5′-гуанозин), 4,06-4,03 (1Н, m, СНα), 3,56 (3Н, d, CH₃-метил, J=1,7 Гц), 1,31 (3Н, d, СН₃-аланин, J=7,4 Гц), 1,00 (3Н, d, СН₃-2′-гуанозин, J=12,4 Гц).

Каждое из соединений от СНС1 до СНС9 было изготовлено согласно примерам 1-9, соответственно, и было проверено на его эффективность по отношению к HCV.

Используемые пробирные анти-HCV анализы:

Пробирный анти-HVC анализ в культуре клеток Huh 7. Были описаны культуры клеток Huh 7, содержащих подгеномные HCV репликоны I₃₈₉luc-ubi-neo/NS3-3′5.1 (Huh 5-2) или I₃₇₇/NS3-3′wt (Huh 9-13), (Lohmann V., Korner F., Kox J., Herian U., Theilmann L., Bartenschlager R. (1999). Репликация подгеномного РНК вируса гепатита С в гепатомной линии ячейки. «Science» 285:110-113, Lohmann V., Korner F., Dobierzewska A., Bartenschlager R. (2001). Мутации в РНК вируса гепатита С, относящиеся к адаптации клеточной культуры. J. Virol. 75:1437-1449). Клетки были выращены в модифицированной среде Eagle (DMEM) (Gibco, Merelbeke, Бельгия) с добавкой 10% термоинактивированной эмбриональной бычьей сыворотки (FCS) (Integro, Zaandam, Нидерланды) с несущественным количеством аминокислот (Gibco), 100 МЕ/мл пенициллина (Gibco), 100 мкг/мл стрептомицина (Gibco) и 250 мкг/мл генетицина (G418) (Gibco) для клеток Huh 5-2, 1000 мкг/мл для клеток Huh 9-13.

Пробирный анти-HVC анализ в культуре клеток Huh 5-2. Клетки Huh 5-2 были посеяны с плотностью 5×10³ на лунку в чашке Петри для обработки культуры ткани с 96 лунками (Packard, Канберра, Канада) вместе с DMEM с добавкой 250 мкг/мл G418. Последующая инкубация выполнялась в течение 24 часов при температуре 37°С (5% СО₂); среда была удалена и последовательные разведения тестируемых соединений в DMEM без G418 были добавлены в общий объем 100 мкл. После 4 дней инкубации при 37°С была удалена питательная среда, и люцеферазная активность была определена, используя систему пробирного анализа люцеферазы Steady-Glo (Промега, Лейден, Нидерланды); сигнал люцеферазы был измерен, используя аппарат Luminoskan Ascent (Термо, Вантаа, Финляндия). 50% эффективная концентрация (ЕС50) была определена как концентрация соединения, которое снижает сигнал люцеферазы на 50%.

Пробирный анти-HVC анализ в культуре клеток Huh 9-13.

Были посеяны клетки Huh 9-13 с плотностью 5×10³ на лунку в чашке Петри для обработки культуры ткани с 96 лунками вместе с DMEM с добавкой 1000 мкг/мл G418. Последующая инкубация выполнялась в течение 24 часов при температуре 37°С (5% СО₂), среда была удалена и последовательные разведения тестируемых соединений в DMEM без G418 были добавлены в общий объем 100 мкл. После 4 дней инкубации при 37°С была удалена жидкая питательная среда клеточной культуры, и монослои были промыты один разфизиологическим раствором с фосфатным буфером. Клетки были лизированы в 350 мкл буфер RLT (Qiagen, Venlo, Нидерланды) по инструкции изготовителя. Лизаты были сохранены при -80°С для дальнейшего использования.

RT-qPCR. 25 мкл RT-qPCR реагента, содержащего 12,5 мкл 2-реакционного буфера (Eurogentec, Seraning, Бельгия), 6,3 мкл H₂O, 5 мкл общего экстракта клеток РНК и в случае Huh 9-13 и проб Huh6 300 нмоль/л нео-прямой затравки [5′-CCG GCT ACC TGC CCA TTC 3′], 300 нмоль/л нео-обратной затравки [5′-ССА GAT CAT CCT GAT CGA САА G-3′], 300 нмоль/л нео-пробы [5′-FAM- АСА TGG CAT CGA GCG AGC TAC-TAMRA-3′] или для Huh-моно образцов 300 нмоль/л UTR прямой затравки [5′-ACG CAG AAA GCG TCT AGC CAT GGC GTT AGT-3′], 300 нмоль/л UTR обратной затравки [5′-ТСС CGG GGC ACT CGC AAG САС ССТ АТС AGG-3′], 300 UTR-пробы [5′-FAM-TGG TCT GCG GAA CCG GTG AGT АСА CC-TAMRA-3′] Стадия RT была выполнена при 48°С в течение 30 минут, 15 минут при 95°С и последующего увеличения PCR до 40 циклов денатурации при 94°С в течение 20 секунд и ренатурацияи расширения при 60°С в течение 1 минуты в детекторе последовательности ABI 7000. 50% эффективная концентрация (ЕС₅₀) была определена как концентрация соединения, которое снижает репликацию РНК на 50%.

Результаты анализа HCV ЕС₅₀/мкМ и СС₅₀/мкМ приведены ниже в таблице I. В таблице I: А относится к 9-сшитому аденину, G относится к 9-сшитому гуанину, Nap относится к 1 нафтилу, Ph относится к фенилу, Et относится к этилу, Bn относится к бензилу, t-Bu относится к третичному бутилу и Me относится к метилу.

Таблица I
Соединение	Основа	Ar	R₃	HCV Huh 5-2EC₅₀/мкМ	HCV Huh 9-13 EC₅₀/мкМ	CC₅₀/мкМ
СНС1	А	-	-	0,14		29
				0,08		>33
				0,13		>33
СНС2	А	Nap	Et	0,12		>50
СНС3	А	Nap	Bn	0,16		44
СНС4	А	Nap	t-Bu	2,36		>50
СНС5	G	-	-	3	1,5	>50
				5		>50
СНС6	G	Nap	Bn	0,08	0,06	>50
				0,032		>50
				0,11		>50
				0,13		>50
				0,044		>50
СНС7	G	Nap	Et	0,15		>50
				0,2		>50
				0,16		>50
СНС8	G	Nap	t-Bu	>50		>50
СНС9	G	Nap	Me	0,14		>50
				0,063		>50

Данные в таблице показывают, что каждое из соединений СНС6 и СНС7 настоящего изобретения демонстрирует большую эффективность по отношению к HCV, чем соединение СНС5, которое соответствует свободному нуклеозиду 9-сшитому гуанину.

Представленная ниже таблица II представляет значения в структуре соединений СНС1-СНС9 согласно представленной выше формуле I, при этом в каждом случае Z=Н и Q=О.

Таблица II
Соединение	X	Y	T′′′	V	T	Ar	R1	R₂	R₃	R₄
СНС1	NH₂	H	H	OH	H	-	-	-	-	-
СНС2	NH₂	H	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	CH₃CH₂	H
СНС3	NH₂	H	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	C₆H₅CH₂	H
СНС4	NH₂	H	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	t-C₄H₉	H
СНС5	=O	NH₂	H	OH	H	-	-	-	-	-
СНС6	=O	NH₂	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	C₆H₅CH₂	H
СНС7	=O	NH₂	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	CH₃CH₂	H
СНС8	=O	NH₂	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	t-C₄H₉	H
СНС9	=O	NH₂	H	OH	H	C₁₀H₇	CH3	H	CH₃	H

Где Ar=C₁₀H₇=1-нафтил, где X=NH₂, n=0, X=O, n=1.

Каждое из соединений СНС1 является сравнительным соединением.

Соединение СНС1 соответствует не фосфорамидатерированному, а свободному нуклеозид 9-сшитому аденину.

Соединение СНС5 соответствует не фосфорамидатерированному, а свободному нуклеозид 9-сшитому гуанину.

Claims

1. Соединение формулы I:

в котором:
Ar - нафтил;
Т выбран из группы, включающей: Н-, F-, N₃-, -NH₂, -ОН, С_1-3-алкил, С_1-3алкил-О-, -SH и С_1-3алкилтио;
V выбран из группы, включающей: -ОТ′, -Н, -F и -Cl,
где Т′ выбран из группы, включающей: -Н, -СН₃, С_1-16алкилкарбонил, С_2-18алкенилкарбонил, С_1-10алкоксикарбонил, С_3-6циклоалкилкарбонил и С_3-6циклоалкилоксикарбонил;
Т′′ выбран из группы, включающей: -Н, -СН₃, С_1-16алкилкарбонил, С_2-18алкенилкарбонил, С_1-10алкилоксикарбонил, С_3-6циклоалкилкарбонил и С_3-6циклоалкилоксикарбонил;
n=0 или n=1, при этом, когда n=1, Х=О, и когда n=0, существует двойная связь между положением 3 и положением 4 и X выбран из группы, включающей: Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкил и NR₅R₆, где каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из Н и С_1-6алкила;
Z выбран из группы, включающей: Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкил и NR₅R₆, где каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из Н и С_1-6алкила;
Y выбран из группы, включающей: Н, ОН, F, Cl, Br, I, С_1-6алкил, С_2-8алкинил, NR₅R₆, где каждый из R₅ и R₆ независимо выбран из Н и C_1-6алкила;
Q выбран из группы, включающей: О, S и CR₇R₈, где R₇ и R₈ независимо выбраны из Н и С_1-6алкила;
каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из Н и группы, включающей: C_1-20алкил, С_2-20алкенил, С_1-20алкоксиС_1-20алкил, С_1-20алкоксиС_6-30арил, С_2-20алкинил, С_3-20циклоалкилС_6-30арил и С_5-20гетероциклил;
каждый из R₃ и R₄ независимо выбран из Н и группы, включающей: С_1-20алкил, С_2-20алкенил, С_1-20алкоксиС_1-20алкил, С_1-20алкоксиС_6-30арил, С_2-20алкинил, С_6-30арил, С_3-20циклоалкилС_6-30арил и С_5-20гетероциклил;
при условии, что R₁ и R₄ могут вместе содержать цепь -(СН₂)₃-алкилен;
и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Ar является незамещенным 1-нафтилом.

3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Т выбран из группы, включающей: Н-, F-, СН₃- и СН₃СН₂-.

4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что V выбран из группы, включающей: Н-, F- и ОТ′, где Т′=Н- или Т′=СН₃-.

5. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Т′=Н-.

6. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Т=Н-, V=OH- и Т′′=Н-.

7. Соединение по п.1, отличающееся тем, что n=1, Х=О и Y=NH₂-.

8. Соединение по п.7, отличающееся тем, что Z=H-.

9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что n=0, существует двойная связь между положением 3 и положением 4, X выбран из группы, включающей: NH₂, F, Cl и NR₅R₆, где один из R₅ и R₆ является С_1-6алкилом.

10. Соединение по п.9, отличающееся тем, что X=NH₂, Y=H и Z=H.

11. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Q=O.

12. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₃=алкил.

13. Соединение по п. 12, отличающееся тем, что R₃ выбран из группы, включающей: метил, этил, 2-пропил, n-пропил, циклогексил, 2-бутил и бензил.

14. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₄=H.

15. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R₁ и R₂ выбраны таким образом, что часть -N-CR₁R₂-COO- соответствует такой же части природной аминокислоты.

16. Соединение по п.1, отличающееся тем, что каждый из R₁ и R₂независимо выбран из -СН₃ и Н.

17. Соединение по п. 16, отличающееся тем, что один из R₁ и R₂ является метилом и один из R₁ и R₂ является Н, так что атом С, несущий R₁ и R₂, имеет хиральность L, как в природном аланине.

18. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Ar не замещен.

19. Соединение по п.1, отличающееся тем, что содержит диастереоизомер R_p, диастереоизомер S_p или смесь диастереоизомеров R_p и S_p.

20. Соединение по п.1, отличающееся тем, что выбрано из группы, включающей:
β-2′-метил-аденозин 5′-О-[α-нафтил(этокси-L-аланинил)]фосфат;
β-2′-метил-аденозин 5′-О-[α-нафтил(бензокси-L-аланинил)]фосфат;
β-2′-метил-аденозин 5′-О-[α-нафтил(трет-бутокси-L-аланинил)]фосфат;
β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[α-нафтил(бензокси-L-аланинил)]фосфат;
β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[α-нафтил(этокси-L-аланинил)]фосфат;
β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[α-нафтил(трет-бутокси-L-аланинил)]фосфат; и
β-2′-метил-гуанозин 5′-О-[α-нафтил(метокси-L-аланинил)]фосфат.

21. Способ получения соединения по п.1, в котором осуществляют взаимодействие соединения формулы III

с соединением формулы IV:

,
где Ar, Т, n, X, Y, Z, Q, R₁, R₂, R₃ и R₄ имеют значения, указанные в п.1;
V представляет собой ОТ′;
Т′ и Т′′ представляют собой атомы водорода, с предварительной защитой свободных групп ОН, кроме ОН в положении 5′ на части гликозида.

22. Применение соединения по любому из пп.1-20 в терапии в качестве активного ингредиента для профилактики и лечения вирусной инфекции.

23. Применение по п.21, отличающееся тем, что вирусной инфекцией является вирус гепатита С.

24. Способ профилактики и лечения вирусного гепатита С, включающий введение пациенту, нуждающемуся в такой профилактике или таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-20.

25. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения вирусной инфекции, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит соединение по любому из пп.1-20 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, растворителем или наполнителем.

26. Фармацевтическая композиция по п.25, отличающаяся тем, что вирусной инфекцией является гепатит С.

27. Способ получения фармацевтической композиции по п.25, отличающийся тем, что включает стадию комбинирования соединения по любому из пп.1-20 с фармацевтически приемлемым наполнителем, носителем или растворителем.