PT1511752E - Camptotecinas com um anel de lactona modificado - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "CAMPTOTECINAS COM UM ANEL DE LACTONA MODIFICADO" A invenção aqui descrita refere-se a compostos úteis como medicamentos, de um modo particular a derivados de camptotecina com modificações estruturais do anel de lactona, a processos para a sua preparação, às suas utilizações como agentes activos dotados de actividade inibidora para topoisomerase I e a composições farmacêuticas contendo-os como ingredientes activos.

Antecedentes da Invenção A camptotecina é um alcaloide isolado pela primeira vez por Wall et al. (J. Am. Chem. Soc., 88, 3888-3890 (1966)) da árvore Camptotheca acuminata, uma planta nativa da China, pertencente à familia das Nyssaceae. A molécula consiste numa estrutura pentaciclica com uma lactona no anel E, a qual é essencial para citotoxicidade.

Para um revisão das camptotecinas e dos problemas relacionados à sua utilização como medicamentos, bem como a resolução de um número de tais problemas, ver a Patente Europeia EP 1044977, apresentada no nome do requerente.

No que diz respeito ao problema do anel de lactona, o qual é uma porção da molécula essencial à capacidade das camptotecinas em exercerem a sua actividade farmacológica, um 1 aspecto que ainda está por ser completamente resolvido é a estabilidade do próprio anel, o qual, por sua vez, é responsável pela meia-vida do fármaco. 0 pedido de patente WO 97/00876, registado em nome da Societè de Conseils de Recherches et d'Applications

Scientifiques, e publicado em 09.01.1997, descreve camptotecinas nas quais o anel de lactona foi modificado, a partir da sua estrutura original, de β-hidroxilactona para uma estrutura de β-hidroxilactona (homocamptotecinas), elevando o ciclo de lactona de seis para sete membros. Estes compostos inibem a actividade de relaxação da ADN topoisomerase I e são dotados de actividade citotóxica contra diversas linhas tumorais. A estrutura da β-hidroxilactona é definida como uma lactona que envolve a presença de um átomo de carbono suplementar entre o átomo de carbono do carboxilo e o átomo de carbono em a- que comporta o hidroxilo na estrutura da β-hidroxilactona. Para aumentar a estabilidade do anel de lactona, o requerente sugere substituintes no átomo de carbono suplementar, e os substituintes indicados são os alquilos inferiores em conjunto com o alcoxilo inferior, halogéneo ou hidroxilo. No pedido de patente mencionado, não é proporcionada qualquer evidência de estabilidade melhorada do anel de lactona. Num pedido de patente subsequente, WO 98/28304, publicado em 02.07.1998, o mesmo requerente descreve mais camptotecinas com uma estrutura de β-hidroxilactona, em que o grupo hidroxilo é funcionalizado com grupos que são capazes de o restabelecer in vivo, deste modo fornecendo efectivamente pró-fármacos das moléculas descritas no pedido de patente precedente e resolvendo, também, o problema de efeitos secundários severos de produtos no presente estado da técnica. Também neste caso não foram proporcionadas evidências experimentais de que o problema técnico tenha sido resolvido. No 2 1998, vol 41, J. Med. Chem., 1998, vol 41, N° 2Ί, 5410-5419, o mesmo requerente dos pedidos de patentes acima mencionados indicam a lactona na posição 7, ai descrita, como sendo um instrumento para aumentar a estabilidade do anel de lactona e, deste modo, como um modelo útil para elaborar outros derivados de camptotecinas. Ver também Bioorg. Med. Chem. Lett., 9, (1999) 2599-2602; Biochemistry, 1999, 38, 15556-15563; Câncer Research, 59 2939-2943. Outras modificações dos anéis A e B da homocamptotecina são descritas no documento WO 00/61146, University of Pittsburgh et al., publicado em 19.10.2000, e em J. Med. Chem., 1999, 42, 3018-3022 para os assim denominados "homosilatecanos", que são inibidores potentes e estáveis da topoisomerase I. Em J. Med. Chem., 2000, 43, 2285-2289,

Anti-cancer Drug Design, (2001), 12, 9-19, são descritas homocamptotecinas com outras modificações, em que a actividade anticancerigena é aumentada graças à fluoretação do anel A. Ver também Anti-cancer Drug Design, (2001), 16, 21-36, para a substituição com cloro na posição 12. O problema da hidrossolubilidade das homocamptotecinas é abordado na Patente US 6291676, University of Kentucky, publicada em 18.09.2001 com várias substituições do tipo (poli)alquilamina na posição 7.

Apesar de muitos dos problemas na concepção de novos fármacos serem de natureza fisico-química, tais como a estabilidade da molécula em plasma ou a sua hidrossolubilidade para propósitos de formulação, há uma procura constante por um melhor indice terapêutico. 3

Sumário da Invenção

Foi agora verificado de um modo surpreendente, que as 7-oximas camptotecinas substituídas, com um anel de lactona modificado, são dotadas de actividade anticancerígena substancial e são estáveis em plasma. Estes compostos têm um melhor índice terapêutico.

Os objectos da invenção aqui descritos são, portanto, compostos de fórmula geral (I):

Ri é um grupo -C (R5) =N-0-R4, no qual R4 é hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C5 ou alcenilo C1-C5 linear ou ramificado, ou um grupo cicloalquilo C3-C10, ou um grupo cicloalquil (C3-C10) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, ou um grupo arilo C6-C14, ou um grupo aril (C6-C14) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, ou um grupo heterocíclico ou um grupo heterocicloalquilo (C1-C5) linear ou ramificado, contendo o referido grupo heterocíclico, pelo menos, um heteroátomo 4 seleccionado de entre um átomo de azoto, de um modo opcional substituído com um grupo alquilo (C1-C5) , e/ou um átomo de oxigénio e/ou de enxofre; os referidos grupos alquilo, alcenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aril-alquilo, heterocíclico ou heterociclo - alquilo podem ser, de um modo opcional, substituídos com um ou mais grupos seleccionados de entre o grupo consistindo em halogéneo, hidroxilo, alquilo C1-C5, alcoxilo C1-C5, fenilo, ciano, nitro e -NR6R7, em que R6 e R7, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, o grupo -COOH ou um dos seus ésteres farmaceuticamente aceitáveis; ou o grupo -CONRsRçi, em que Rs e Rg, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo (C1-C5) linear ou ramificado; ou R4 é um resíduo aroílo (C6-C10) ou arilsulfonilo (C6-C10) , de um modo opcional substituído com um ou mais grupos seleccionados de entre: halogéneo, hidroxilo, alquilo C1-C5 linear ou ramificado, alcoxilo C1-C5 linear ou ramificado, fenilo, ciano , nitro, -NR10R11, em que Rio e Rn, OS quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo C1-C5 linear ou ramificado; ou: R4 é um resíduo de poliaminoalquilo; ou R4 é um resíduo de glicosilo; R5 é hidrogénio, alquilo C1-C5 linear ou ramificado, alcenilo C1-C5 linear ou ramificado, cicloalquilo Cs-Cio, cicloalquil (C3-C10) - alquilo (Οχ-Οε) linear ou ramificado, arilo C6-Ci4, aril (C6-C14) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado ; 5 R.2 e R3, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, hidroxilo, alcoxilo Ci-Cõ linear ou ramificado; η = 1 ou 2, os Ni-óxidos, as misturas racémicas, os seus enantiómeros individuais, os seus diastereoisómeros individuais, as suas misturas, e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, com a condição de que, na fórmula (I), Ri, R2 e R3 não podem ser simultaneamente hidrogénio. A presente invenção inclui a utilização de compostos com a fórmula (I) acima mencionada como ingredientes activos para medicamentos, de um modo particular para medicamentos que sejam úteis como inibidores da topoisomerase I. Entre as aplicações terapêuticas que derivam da inibição da topoisomerase I deve-se mencionar o tratamento de tumores e infecções parasíticas ou virais . A presente invenção inclui composições farmacêuticas que contêm compostos de fórmula (I) como ingredientes activos, em mistura com veículos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis. A presente invenção também inclui os processos para a preparação de compostos de fórmula (I) e (II), e os produtos intermediários chave.

Descrição detalhada da invenção os exemplos do entendidos como

Dentro do esquema da presente invenção, grupo alquilo C1-C5 linear ou ramificado são 6 incluindo metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo e os seus isómeros possíveis, tais como, por exemplo, isopropilo, isobutilo e terc-butilo.

Exemplos do grupo alcenilo C1-C5 ramificado ou linear são metilideno, etilideno, vinilo, alilo, propargilo, butileno e pentileno, em que a ligação dupla carbono-carbono pode estar situada nas várias posições possíveis do anel de alquileno, o qual pode também ser ramificado no contexto da isomeria permitida.

Exemplos do grupo cicloalquilo Cs-Cio são ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclooctilo e grupos policíclicos, tal como, por exemplo, adamantilo.

Exemplos do grupo cicloalquil (C3-C10) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado são ciclopropilmetilo, 2-ciclopropiletilo, 2-ciclopropilpropilo, 2-ciclobutiletilo, 2-ciclobutilpropilo, 2-ciclo-hexiletilo, 2-ciclo-hexilpropilo, 1-ciclopropiletilo, 3-ciclopropilpropilo, 1-ciclopropilpropilo, ciclobutilmetilo, 1-ciclobutiletilo, 3-ciclobutilpropilo, 1-ciclobutilpropilo, ciclo-hexilmetilo, 1-ciclo-hexiletilo, 3-ciclo-hexilpropilo, 1- ciclo-hexilpropilo, 5-ciclo-hexilpentilo, 3-ciclo- hexilpentilo, 3-metil-2-ciclo-hexilbutilo, 1-adamantiletilo, 2- adamantiletilo, adamantilmetilo.

Exemplos do grupo arilo (C6-Ci4) ou aril (C6-C14) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado são fenilo, 1- ou 2-naftilo, antracenilo, benzilo, 2-feniletilo, 1-feniletilo, 3-fenilpropilo, 2-antracenilpropilo, 1-antracenilpropilo, naftilmetilo, 2-naftiletilo, 1-naftiletilo, 3-naftilpropilo, 2-naftilpropilo, 7 1- naftilpropilo, ciclo-hexilmetilo, 5-fenilpentilo, 3- fenilpentilo, 3-metil-2-fenilbutilo.

Exemplos do grupo heterocíclico ou heterocicloalquilo (C1-C5) linear ou ramificado são tienilo, quinolilo, piridilo, N-metilpiperidinilo, 5-tetrazolilo, 2- (4,5-di-hidroxazolilo), 1,2,4-oxadiazolidin-3-il-5-ona, bases de purina e pirimidina, e. g., uracilo, de um modo opcional substituídas, tal como indicado nas definições gerais acima.

Exemplos dos grupos aroilo (Cô-Cio) são benzoilo e naftoilo.

Exemplos dos grupos arilsulf onilo (C6-Cio) são tosilo e benzoilsulfonilo. 0 que se quer dar a entender por halogéneo é flúor, cloro, bromo e iodo. grupos substituídos são pentafluorofenrlo, 2,4-difluorobenzilo, 4-aminobutilo, dimetilaminoetilo, p-nitrobenzoilo,

Exemplos de 4- fenilbenzilo, 4-hidroxibutilo, p-cianobenzoilo.

Um exemplo do residuo de poliaminoalquilo é - (CH2)m-NR 12- (CH2)P-NR is- (CH2)q-NH2 em que m, p e q são números inteiros de 2 a 6 inclusive e Rl2 e R13 são um grupo alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, por exemplo 4-aminobutil-2-aminoetilo, 3-amino-propil-4-aminobutilo, 3-aminopropil-4-aminobutil-3-aminopropilo.

Exemplos do residuo de glicosilo são 6-D-galactosilo e

Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são, no caso de átomos de azoto de uma natureza básica, sais com ácidos farmaceuticamente aceitáveis, inorgânicos e orgânicos, tais como, por exemplo, ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido acético ou, no caso de um grupo ácido, tal como carboxilo, sais com bases farmaceuticamente aceitáveis, tais como, por exemplo, hidróxidos alcalinos e alcalino-terrosos, hidróxido de amónio e aminas, incluindo aminas heterocíclicas.

Um primeiro grupo de compostos preferidos compreende compostos de fórmula (I) nos quais o anel de lactona tem 7 ou 8 membros, de um modo particular 7 membros.

No contexto dos dois grupos preferidos acima mencionados, os preferidos são os compostos de fórmula (I) , nos quais R4 é diferente de hidrogénio e, de um modo particular, um alquilo C1-C5 ou alcenilo C1-C5 ou cicloalquilo Cs-Cio linear ou ramificado, ou grupo cicloalquil (C3-C10) - alquilo (C1-C5) , ou um grupo arilo C6-C14 ou aril (C6-C14) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, ou um grupo heterociclico ou heterocicloalquilo (C1-C5) linear ou ramificado, contendo o referido grupo heterociclico, pelo menos, um heteroátomo seleccionado de entre um átomo de azoto, de um modo opcional substituído com um grupo alquilo (C1-C5) , e/ou de oxigénio e/ou de enxofre, os referidos grupos alquilo, alcenilo, cicloalquilo, arilo, aril-alquilo, heterociclico ou heterocicloalquilo, podem ser substituídos com um ou mais grupos seleccionados de entre: halogéneo, hidroxilo, alquilo C1-C6, alcoxilo C1-C6, fenilo, ciano, nitro, -NR6R7, em que Rg e R7, os quais podem ser iguais ou diferentes, são alquilo (C1-C5) linear ou ramificado; o grupo -COOH ou um dos seus ésteres farmaceuticamente aceitáveis; ou o grupo -CONR8R9, em que 9 R-8 e R9, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, de acordo com as definições acima delineadas como exemplos.

Um grupo inicial de compostos particularmente preferidos consiste em compostos de fórmula (I), com um anel de lactona de 7 membros e, de entre estes, de um modo particular: R,S-7-metoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-etoxiiminometil-homocamptotecina; R, S-7-isopropoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-(2-metilbutoxi)iminometil-homocamptotecina; R,S-7-(1-t-butoxi)iminometil-homocamptotecina (ST2127); R, S-7-(4-hidroxibutoxi)iminometil-homocamptotecina; R, S-7-trifenilmetoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-carboximetoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-aminoetoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-(N,N-dimetilaminoetoxi)iminometil-homocamptotecina; R, S-7-aliloxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-ciclo-hexiloxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-ciclo-hexilmetoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-ciclooctiloxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-ciclooctilmetoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-benziloxiiminometil-homocamptotecina (ST2143); R,S-7-(benziloxi)iminofenilmetil-homocamptotecina; R,S-7-(1-benziloxi)iminoetil-homocamptotecina; R, S-7-(1-t-butoxi)iminoetil-homocamptotecina; R,S-7-p-nitrobenziloxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-p-metilbenziloxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-pentafluorobenziloxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-p-fenilbenziloxiiminometil-homocamptotecina; 10 R, S-7-(2,4-difluorobenzilmetoxi)iminometil- homocamptotecina; R,S-7-(4-t-butilfenilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; R,S-7-(1-adamantiloxi)iminometil-homocamptotecina; R,S-7-(1-adamantilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; R,S-7-(2-naftaleniloxi)iminometil-homocamptotecina; R,S-7-(9-antracenilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; R,S-7-(6-uracil)metoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-(4-piridil)metoxiiminometil-homocamptotecina; R, S-7-(2-tienil)metoxiiminometil-homocamptotecina; R,S-7-[(N-metil)-8-piperidinil]metoxiiminometil- homocamptotecina; R,S-7-hidroxiiminofenilmetil-homocamptotecina.

De entre estes compostos, os mais preferidos são R,S-7-(1-t-butoxi)iminometil-homocamptotecina (ST2127) e R,S-7-benziloxiiminometil-homocamptotecina (ST2143).

Numa primeira forma de realização preferida da presente invenção, são visados os compostos de fórmula geral (I), em que o anel de lactona tem 7 a 8 membros.

Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados com o processo aqui abaixo descrito e exemplificado para os compostos preferidos de acordo com a presente invenção. 11

É bastante óbvio para a pessoa com experiência comum na área, que o esquema de processo se aplica a todos os compostos abrangidos pela fórmula (I), uma vez que o método para obtenção dos compostos com o anel de lactona de 7/8 membros está completamente descrito. A preparação dos diversos compostos abrangidos pela fórmula I difere no substituinte na posição 7.

Esta preparação está ampla e completamente descrita na Patente EP 104977 acima mencionada.

No que concerne aos compostos de fórmula (I) nos quais Ri é hidrogénio, o composto de partida é camptotecina, de um modo 12 opcional substituída nas posições 8 e 9 de acordo com os significados dos grupos R2 e R3 acima visados.

No caso de compostos de fórmula (I) nos quais Ri é diferente de hidrogénio, a funcionalização da posição 7 para obter o composto final não pode acontecer antes da modificação do anel de lactona original da camptotecina, no sentido da sua amplificação para 7 ou 8 membros. Para este propósito, foi provado ser necessário encontrar um produto intermediário adequado para a via de síntese visada. Este intermediário chave é a 7-(dialcoximetil)camptotecina. Este novo composto é um objecto adicional da presente invenção. De entre estes, o composto preferido é a 7-(dimetoximetil)camptotecina. A camptotecina é feita reagir com o álcool desejado, o qual também pode ser utilizado como um meio reaccional, na presença de um ácido mineral, tal como, por exemplo, ácido sulfúrico, e um sistema oxidante adequado, tal como sulfato de ferro/peróxido de hidrogénio, depois um outro agente oxidante, tal como dióxido de manganês para obter a 7-(dialcoximetil)camptotecina. A camptotecina, ou o seu derivado de 7-(dialcoximetilo) , são sujeitos a redução selectiva do carbonilo na posição 19, para obter o derivado de 19,20-di-hidroxilo correspondente. A redução é realizada na presença de um agente redutor, por exemplo, hidretos mistos de AI ou B e exemplificados no esquema por boro-hidreto de sódio, de 1 a 10 equivalentes na presença de um solvente alcoólico por um período de tempo que varia desde 1 até 16 h a uma temperatura que varia desde a temperatura ambiente até 50 °C. O solvente é subsequentemente evaporado e o produto em bruto é utilizado no passo subsequente, em que o anel E, na forma do derivado de 19,20-di-hidroxilo, é sujeito a abertura com entre 1 a 10 equivalentes de um agente oxidante, 13 tal como, por exemplo, periodato ou acetato de chumbo. A reacção é convenientemente realizada num solvente orgânico, tal como, por exemplo, tolueno, cloreto de metileno ou ácido acético, por um período de tempo que varia desde 1 até 24 h, a uma temperatura que varia desde a temperatura ambiente até 50 °C. O solvente é removido em vácuo e o produto é finalmente purificado por cromatografia ou por outros meios equivalentes. O produto intermediário então obtido é, por sua vez, dissolvido num meio de solvente adequado, de um modo preferido numa mistura de solventes e, então, sujeito à bem conhecida reacção de Reformatsky, na qual o ácido ω-bromocarboxílico é adequadamente seleccionado como uma função do valor n visado na fórmula (I) ou (II). Neste ponto, no contexto da forma de realização da presente invenção relativamente aos compostos de fórmula (I), ao produto da reacção de Reformatsky, dissolvido numa mistura de solventes adequada, tal como, por exemplo, cloreto de metileno, ácido acético e dimetilformamida, de um modo opcional na presença de um ácido (por exemplo, ácido trifluoroacético ou um ácido de Lewis) e de um agente de condensação (dicilo-hexilcarbodiimida - DCC - ou hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida) ou um agente exsicante (por exemplo, sulfato de sódio ou magnésio, ou peneiros moleculares), são adicionados de 1 a 10 equivalentes de uma hidroxilamina NH2OR4 adequada, também na forma de um sal, em que R4 tem os significados acima descritos para tempos que variam desde 1 até 24 h, a uma temperatura que varia desde a temperatura ambiente até ao ponto de ebulição do solvente, para obter o composto final de fórmula (I). O produto final é isolado por remoção do solvente e purificação final, por exemplo, por cromatografia. 14 A reacção com a hidroxilamina NH2OR4 é amplamente descrita na patente EP 1044977 acima mencionada, assim como é a preparação de possiveis N-óxidos.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis são obtidos com métodos convencionais indicados na literatura e não requerem qualquer descrição adicional.

Os compostos descritos na presente invenção são inibidores da topoisomerase I e, como tal, são úteis como medicamentos, de um modo particular para o tratamento de doenças que beneficiem da inibição da referida topoisomerase. Os compostos de acordo com a presente invenção demonstram, de um modo particular, actividade antiproliferativa e são, como tal, utilizados tendo em conta a sua actividade terapêutica e possuem propriedades fisico-quimicas que os tornam adequados para formulação em composições farmacêuticas.

As composições farmacêuticas contêm, pelo menos, um composto de fórmula (I) como ingrediente activo, numa quantidade tal que seja produzido um efeito terapêutico significativo. As composições abrangidas pela presente invenção são totalmente convencionais e são obtidas com métodos que são de prática comum na indústria farmacêutica. De acordo com a via de administração escolhida, as composições estarão na forma sólida ou liquida, adequadas para administração oral, parentérica ou intravenosa. As composições de acordo com a presente invenção contêm, em conjunto com o ingrediente activo, pelo menos um veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Os coadjuvantes de formulação, tais como, por exemplo, solubilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensão e emulsionantes, podem ser particularmente úteis. 15

Os compostos de fórmula (I) podem, também, ser utilizados em combinação com outros ingredientes activos, tais como, por exemplo, outros fármacos anticancerigenos ou outros fármacos com actividade antiparasítica ou antiviral, ambos em separado e em formas de dosagem única.

Os compostos de acordo com a presente invenção são úteis como medicamentos com actividade anticancerigena, por exemplo, em cancros do pulmão, tal como o cancro das células não pequenas do pulmão, ou em tumores ou gliomas colorrectais ou da próstata. A actividade citotóxica dos compostos de acordo com a presente invenção tem sido ensaiada em sistemas celulares de células tumorais humanas, utilizando o teste de actividade antiproliferativa como método para avaliar o potencial citotóxico. A linha celular utilizada é um adenocarcinoma pulmonar das células não pequenas denominado NCI H460, pertencente à classe dos NSCLC (cancro do pulmão das células não pequenas).

Actividade anticancerigena

Para avaliar o efeito dos compostos de acordo com a presente invenção, foi avaliada a sua citotoxicidade contra a linha celular do cancro do pulmão das células não pequenas (NCI-H460). Foram mantidas células da American Type Culture Collection (ATCC) em cultura em RPMI 1640 (GIBCO) contendo 10% de soro fetal de vitelo e sulfato de gentamicina a uma concentração de 50 pg/mL. 16

As células foram semeadas num volume de 250 pL em placas de 96 poços e incubadas durante 24 h a 37 °C. No dia seguinte, os compostos em estudo foram adicionados em concentrações escalares de 1 μΜ a 0,004 μΜ, e as células foram incubadas durante mais 2 h a 37 °C em atmosfera humidificada contendo 5% de CO2. As células foram lavadas 3 vezes, voltando as placas de cada vez e adicionando PBS. Foram adicionados 200 pL/poço de meio RPMI 1640 contendo 10% de FCS e as placas foram incubadas a 37 °C durante mais 72 h. No dia 5, o meio de crescimento foi removido voltando as placas e foram adicionados 200 pL/poço de PBS e 50 pL de TCA frio a 80%. As placas foram então incubadas em gelo durante pelo menos 1 h. O TCA foi removido voltando as placas; as placas foram lavadas 3 vezes por imersão em água destilada e secas primeiro em papel mata-borrão e depois sob jacto de ar quente. Foram adicionados 200 pL de sulforrodamina B a 0,4% em ácido acético a 1%, a todos os poços. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante mais 30 minutos. A sulforrodamina B foi removida voltando as placas; as placas foram lavadas 3 vezes por imersão em ácido acético a 1% e depois secas primeiro em papel mata-borrão e, depois, com um jacto de ar quente. Foram adicionados 200 pL de base Tris a 10 mM a todos os poços e as placas foram sujeitas a agitação durante pelo menos 20 minutos. Foi medida a densidade óptica utilizando um espectrofotómetro Multiskan a 540 nm. A Tabela 1 apresenta os valores de IC50, ou seja, a concentração capaz de inibir 50% da sobrevivência das células, para cada composto examinado, processados através do software ALLFIT. 17

Tabela 1

Produto NCI.H4 60 IC50 (μΜ) ST2127 0,026 ST2143 0,007

Os exemplos seguintes ilustram de um modo adicional a invenção, fazendo referência ao esquema acima indicado.

Preparação 1

Sintese da 7-(dimetoximetil)camptotecina (ST2337) A uma suspensão de 1,53 g (4,4 mmol) de camptotecina em 92 mL de metanol, arrefecida com um banho de gelo sob agitação, foram lentamente adicionados 9,2 mL de H2SO4 a 96%, mantendo a temperatura da mistura abaixo de 50 °C. A suspensão assim obtida foi aquecida até à temperatura de refluxo; chegando aos 50 °C, foram adicionados 4 6 mg de FeS04.7H20 e, de seguida, 3 mL de H2O2 a 30%, gota a gota, mantendo a reacção à temperatura de refluxo. A reacção foi agitada durante 2 horas, verificando o desaparecimento do produto de partida por TLC. No final da reacção, a suspensão foi arrefecida até 25 °C e foram adicionados 2,8 mL de MnCt; a mistura foi agitada durante 2 h, verificando o desaparecimento do produto intermediário por TLC. A suspensão foi então filtrada através de uma camada de Celite colocada num filtro de placa porosa. A solução filtrada foi concentrada até aos 25 mL e, então, vertida para uma solução de NaHC03 em água de modo a obter uma solução de pH 6. O precipitado foi filtrado e purificado numa coluna de cromatografia de silica 18 gel (eluentes: CH2CÍ2/MeOH 99/1). Foram obtidos 1,02 g (2,42 mmol, 55%) de produto sob a forma de um sólido amarelo. C23H22N2O6 (422,4); p.f. (decomp.) = 201 °C;

Rf = 0,5 (CH2Cl2/MeOH 92/8). MS (IS): [M+Na]+ = 445; [M-l]" = 421.

Análise elementar: calculada: C 65,40, H 5,21, N 6,64; encontrada : C 65,37 , H 5,22, N 6, 67 • RMN de (CDCI3) δ = 1,00-1,06 (t, 3H, CH3) , 1,82-1,97 (m, 2H, CH2), 3,40 (s, 3H, CH3), 3,43 (s, 3H, ch3) , 5,28- (5,33 -5,72)-5, 78 (dd, 2H, CH2), 5,47 (s, 2H, CH2) , 6,24 (s, 1H, CH) , 7,62 -7,70 (m, 2H, CH + CHAr) , 7,78-7,84 (t, 1H, CHAr) , 8,23-8,33 (m, 2H, CHAr) . RMN de 13C (CDC13)5 = 8,0; 31,9; 52,1; 52,9; 53,2; 66,7; 72,9; 98,1; 100,5; 119,0; 124,6; 125,9; 127,8; 128,4; 130,5; 138,4; 146,2; 149,4; 150,2; 152,7; 158,0; 174,1.

Preparação 2 Síntese do produto intermediário 2a A uma solução de 2,12 g (56 mmol, 3,3 eg.) de NaBH4 em 70 mL de MeOH foram adicionados 7,2 g (17 mmol) de 7-dimetil-acetal camptotecina (]_a) : a mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. No final desta operação, foi adicionada acetona para destruir o NaBH4 em excesso e a solução foi completamente seca. O produto bruto de reacção foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (gradiente do eluente CH2Cl2/MeOH 92/8 CH2Cl2/MeOH 7/3) para produzir 3,7 g (8,7 mmol, 51%) de produto sob a forma de um sólido amarelo. 19 C23H24N2O6 (424,5); Rf = 0,41 (Io isómero) , 0,35 (2o isómero) (CH2Cl2/MeOH 92/8) . MS (IS): [MH]+ = 425; [M+Na]+ = 447; [M-l]- = 423.

Análise elementar: calculada: C 65,09, H 5,66, N 6,60; encontrada: C 65,12, H 5,68, N 6,57. RMN de ΧΗ (DMSO-d6)õ = 0,84-0, 90 (t, 3H, CH3) , 1,65-1,73 (m, 2H, CH2) , 3, 38 (s, 6H, CH3), 4,43- (4,50-4,57) 4, 64 (dd, 2H, ch2) , 4, 98 (s, 1H, CH) , 5,28 (s, 2H, CH2) , 6,32 (s, 1H, CH) , 7,38 (s, 1H, CH) , 7,66-7,73 (t, 1H, CHAr) , 7,8-7,88 (t, 1H, CHAr) r 8,14-8,17 (d, 1H, CHAr) , 8,3-8,33 (d, 1H, CHAr) . RMN de 13C (DMSO-d6)õ = 7,6; 32,4; 50,7; 53,1; 53,5; 58,2; 70,1; 78,3; 92,5; 96,0; 98,4; 100,3; 123,1; 124,9; 127,3; 129,4; 129,9; 137,6; 142,3; 148,3; 150,1; 153,1; 157,1.

Preparação 3 Síntese do produto intermediário 3a A uma solução de 5,52 g (13 mmol) de 2a em 100 mL de CH3COOH, foram adicionados 4,17 g de NaI04 (19,5 mmol, 1,5 eq.). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h; no final desta operação, a solução foi concentrada e diluída com CH2C12, depois extraída com NaHCCç até pH neutro. A fase orgânica foi seca em Na2S04 e evaporada até à secura. A purificação foi realizada com cromatografia flash em sílica gel (eluentes: CH2Cl2/MeOH 98/2). Foram obtidos 3,58 g (8,48 mmol, 65%) de produto sob a forma de um sólido amarelo. 20 C23H22N2O6 (422,4); p.f. (decomp.) = 150 °C;

Rf = 0,6 (CH2Cl2/MeOH 95/5). 6, 64;

Análise elementar: calculada: C 65,40, H 5,21, N encontrada C 65,39, H 5,23, N 6,61 • MS (IS): [MH]+ = 423; [M+Na]+ = 445. RMN de (DMSO-d6)õ 1,07-1, 2 (t, 3H, ch3) 2,96-3,3 (m, 2H, CH2), 3,37 (s, 6H, CH3), 5, 12 (s, 2H, ch2) 5,18 (s, 2H , CH2), 6,37 (s, 1H, CH), 7,38 (s, 1H, CH) 7,73-7,79 (t, 1H, CHAr), 7,86-7,92 (t, 1H, CHAr) 8,16-8,20 (d, 1H, CHAr) , 8,27 (s, 1H, CH) 8,33-8,37 (d, 1H, CHAr) .

Preparação 4 Síntese do produto intermediário 4a

Uma suspensão de 7,6 g (116 mmol) de zinco em 60 mL de Et20 anidro (destilado), mantida sob árgon e agitação, foi activada por adição, gota a gota, de 0,87 mL (6,8 mmol) de clorotrimetilsilano. A suspensão foi agitada durante 15 minutos e, depois, aquecida até à temperatura de refluxo. Depois de remover o banho de óleo, foram adicionados, gota a gota, 17,5 mL (118 mmol) de bromoacetato de terc-butilo a uma velocidade tal que mantenha a mistura à temperatura de refluxo; foi obtida uma solução incolor. Depois de reiniciar o aquecimento, a reacção foi mantida à temperatura de refluxo durante 1 h; no final deste período, foi adicionada uma suspensão de 2,3 g (5 ,45 mmo1) de 3a em 45 mL de THF anidro (destilado) , mantendo a reacção sob árgon. A mistura assim obtida foi agitada à temperatura de refluxo. Depois de 1 h, a mistura, que se tinha tornado numa solução amarela, foi gasta com 200 mL de solução de cloreto de 21 amónio saturado e extraída com CH2CI2; a fase orgânica foi seca em Na2SC>4, o solvente foi evaporado e o produto em bruto purificado por cromatografia flash em sílica gel (gradiente do eluente CH2CI2 CíbC^/MeOH 98/2). Foram obtidos 1,6 g (3,14 mmol, 58%) de produto sob a forma de um sólido amarelo. C28H34N2O7 (510,6); p.f. (decomp.) = 190 °C;

Rf = 0,3 (CH2Cl2/MeOH 98/2); Rf = 0,5 (CH2Cl2/MeOH 95/5). MS (IS): [MH]+ = 511; [M+Na]+ = 533; [M-l]" = 509.

Análise elementar: calculada: C 65,88, H 6,67, N 5,49; encontrada C 66,00, H 6,68, N 5, 47 • RMN de XH (CDC13)õ = 0,90-0, 95 (t, 3H, CH3), 1,38 (a, 9H, t-Bu), 1,93-2,08 (m, 2H, CH2) , 2,8-(2,86-3, 08)-3, 14 (dd, 2H, CH2) , 3,4 (s, 6H, ch3) , 5,06- (5,01-5,13)-5,17 (d, 2H, CH2), 5 ,47 (s, 2H, CH2) , 6,24 (s, 1H, CH), 7,47 (s, 1H, CH) , 7, 64-7, 69 (t, 1H, CHAr) , 7,79-7, 84 (t, 1H, CHAr) , 8,23-8,32 (m, 2H, CHAr) . RMN de 18C (CDC13)õ = 8,4; 28,2; 34,8; 45,5; 52,0; 53,0; 53,1; 59,1; 82,7; 100,6; 101,0; 124,8; 125,9; 128,0; 128,2; 130,0; 130,4; 130,5; 138,6; 142,4; 148,9; 152,9; 155,2; 162,6; 172,6.

Exemplo 1 R,S-7-(1-t-butoxi)iminometil-homocamptotecina (ST2127); A uma solução de 510 mg (1 mmol) de 4a em 10 mL de CH3COOH foram adicionados 314 mg (2,5 mmol, 2,5 eq.) de tBuO-NH2-HCl; a solução foi mantida ao abrigo da luz a 80 °C durante 16 h. O CH3COOH foi então removido por evaporação. O produto em bruto assim obtido, dissolvido em CH2C12 e mantido ao abrigo da luz, 22 foi lavado com água. A fase orgânica foi seca em Na2S04, o solvente foi evaporado e o produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de silica, mantendo-o ao abrigo da luz (eluentes: CH2Cl2/dioxano 9/1). Foram obtidos 160 mg (0,35 mmol, 34%) de produto sólido amarelo. C26H27N3O5 (461,5); p.f. (decomp.) = 284 °C;

Rf = 0,4 (CH2Cl2/MeOH 95/5). MS (IS): [MH]+ = 462; [M+Na]+ = 484; [M-l]" = 460.

Análise elementar: calculada: C 67,68, H 5,86, N 9,11; encontrada: C 67,65, H 5,88, N 9,13. RMN de ΧΗ (CDC13)õ .= 0,87-1,03 (t, 3H, CH3) , 1,55 (s, 9H, CH3) , 1,7-1,9 (largo, 1H, OH), 1,92-2,1 (m, 2H, CH2) , 3,26- (3,32-3,38) 3,44 (dd, 2H, CH2), 5,13 -(5,21 -6, 36) 5,44 (dd, 2H, CH2) , 6, 35-(5,41-5, 62) 5, 68 (dd, 2H, CH2) , 7,43-7,50 (m, 2H, CH + CHAr) , 7,60-7,65 (t, 1H, CHAr) , 7,88-7,95 (t, 2H, CH), 8, 86 (s, 1H, CHAr) . RMN de 12C (CDC13) δ = 8,3; 27,9; 35,8; 42,7; 53,4; 62,4; 73,9; 82; 101,1 ; 122,9 ; 123,4; 125,1; 125, 5; 128,3; 130,1; 130,4; 132,5; 142,1; 144,7; 149,0; 151,6; 156,4; 160,0; 1716, A análise de HPLC do (R, S) ST2127 numa coluna quiral utilizando um detector de dicroismo circular revelou a separação dos dois enantiómeros.

Os enantiómeros do (R,S) ST2127 foram isolados via HPLC por cromatografia preparativa numa coluna quiral sob as seguintes condições: 23 coluna: (S,S). DACH-DNB 5/100; eluente: CH2Cl2/n-HEXANO (80/20) + 1% MetOH; fluxo: 1 mL/min; T: 22 °C; detector de UV λ 360 nm. A primeira fracção eluida com e. e. 99,46% corresponde ao ( + ) ST2127 = ST2522 ao qual foi atribuída a configuração R por analogia com as camptotecinas com [cx]D positivo. IC5o = 18 nM ± 0,2 (H460) . A segunda fracção eluida com e. e. 99,46% corresponde ao (-) ST2127 = ST2523 com [oí]d = -48,11 ± 0,16 (c = 1,17; CHC13 - MetOH 4:1). A configuração S foi atribuída ao A ST2523 por analogia com as camptotecinas com [a]D negativo. IC50 = > 200 nM (H460) .

Exemplo 2 R,S-7-benziloxiiminometil-homocamptotecina (ST2143) ; A uma solução de 510 mg (1 mmol) de 4a em 10 mL de CHsCOOH foram adicionados 400 mg (2,5 mmol) de PhCH2ONH2. HC1; a solução foi mantida ao abrigo da luz e agitada a 80 °C durante 16 h. O CH5COOH foi então removido por evaporação. O produto em bruto assim obtido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (eluentes: CH2Cl2/dioxano 9/1). Foram obtidos 223 mg de 24 produto sob a forma de um sólido amarelo (0,45 mmol, rendimento 45%) . C20H25N3O5 (495,5); p.f. (decomp.) = 263 °C;

Rf = 0,48 (CH2Cl2/MeOH 95/5). MS (IS): [MH]+ = 496; [M+Na]+ = 518; [M-l]' = 494.

Análise elementar: calculada: C 70,30, H 5,05, N 8,48; encontrada: C 70,33, H 5,09, N 8,47. RMN de ΧΗ (CDC13)õ = 0,95-1,02 (t, 3H, CH2) , 1, 99-2,06 (m, 2H, CH2) , 3, 04-(3, 08-3, 18)-3,42 (dd, 2H, CH2) , 5,32 (s, 2H, CH2), 5, 42- (5,44 -5,63)- 5,70 (dd + s, 4H, CH2 + ch2) , 7,33- 7,56 (m, 5H, CHAr) , 7,63-7 , 69 (m, 2H, CH + CHAr) , <1 co 0 1 7,84 (t, 1H , CHAr) 1 , 8, 16-8 , 22 (m, 2H, CHAr) , 9, 10 (s, 1H, CH) . RMN de 18C (CDCI3) δ = 8 ,4; 36 ,5; 42, 6 ; 52, 9; 62,2; 73, 6; 78,1; 101,1; 123,0; 123,1; 125,3; 126, 2; : 128,3; 128,5; 128,8; 129, 1 ; 130,3 ; 130,4; 131,4; 136,5; 14 4, - 0; 144,4; 149,2; 152,5; 156, 4 ; 159,7; 172,1.

Lisboa, 29 de Novembro de 2006 25

Claims (14)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Compostos de fórmula (I):

   Ri é um grupo -C (R5) =N-0-R4, no qual R4 é hidrogénio ou um grupo alquilo C1-C5 ou alcenilo C1-C5 linear ou ramificado, ou um grupo cicloalquilo C3-C10, ou um grupo cicloalquil (C3-C10) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, ou um arilo C6-C14, ou um grupo aril (C6-C14) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, ou um grupo heterociclico ou um grupo heterocicloalquilo (C1-C5) linear ou ramificado, contendo o referido grupo heterociclico, pelo menos, um heteroátomo seleccionado de entre um átomo de azoto, de um modo opcional substituído com um grupo alquilo (C1-C5) , e/ou um átomo de oxigénio e/ou de enxofre; os referidos grupos alquilo, alcenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aril-alquilo, heterociclico ou heterocicloalquilo podem ser, de um modo opcional, substituídos com um ou mais grupos seleccionados do grupo que consiste em halogéneo, hidroxilo, alquilo C1-C5, alcoxilo C1-C5, fenilo, ciano, nitro e -NR6R7/ 1 em que R6 e R7, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, o grupo -COOH ou um dos seus ésteres farmaceuticamente aceitáveis; ou o grupo -CONRsRg, em que Rs e Rg, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo (C1-C5) linear ou ramificado; ou R4 é um aroilo (C6-C10) ou resíduo de arilsulfonilo (C6-C10) , de um modo opcional, substituído com um ou mais grupos seleccionados de entre: halogéneo, hidroxilo, alquilo C1-C5 linear ou ramificado, alcoxilo C1-C5 linear ou ramificado, fenilo, ciano, nitro, -NR10R11, em que Rio e Rn, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, alquilo C1-C5 linear ou ramificado, ou: R4 é um resíduo de poliaminoalquilo; ou R4 é um resíduo de glicosilo; R5 é hidrogénio, alquilo Ci-C6 linear ou ramificado, alcenilo C1-C5 linear ou ramificado, cicloalquilo C3-C10, cicloalquil (C3-C10) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado, arilo C6~Ci4, aril (C6-Ci4) - alquilo (C1-C5) linear ou ramificado; R2 e R3, os quais podem ser iguais ou diferentes, são hidrogénio, hidroxilo, alcoxilo C1-C5 linear ou ramificado; η = 1 ou 2, os Ni-óxidos, as misturas racémicas, os seus enantiómeros individuais, os seus diastereoisómeros individuais, as suas 2 misturas, os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, com a condição que, na fórmula (I), Ri, R2 e R3 não podem ser simultaneamente hidrogénio,
2. 2. Compostos de acordo com a reivindicação 1, nos quais, na fórmula (I), n é 1.
3. 3. Compostos de acordo com a reivindicação 2, seleccionados de entre o grupo consistindo em: - R,S-7-metoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-etoxiiminometil-homocamptotecina; - R, S-7-isopropoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(2-metilbutoxi)iminometil-homocamptotecina, - R,S-7-(1-t-butoxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(4-hidroxibutoxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-trifenilmetoxiiminometil-homocamptotecina; - R, S-7-carboximetoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-aminoetoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(N,N-dimetilaminoetoxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-aliloxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-ciclo-hexiloxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-ciclo-hexilmetoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-ciclooctiloxiiminometil-homocamptotecina; - R, S-7-ciclooctilmetoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-benziloxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(benziloxi)iminofenilmetil-homocamptotecina; - R,S-7-(1-benziloxi)iminoetil-homocamptotecina; - R,S-7-(1-t-butoxi)iminoetil-homocamptotecina; - R,S-7-p-nitrobenziloxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-p-metilbenziloxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-pantafluorobenziloxiiminometil-homocamptotecina; 3 - R,S-7-p-fenilbenziloxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(2,4-difluorobenzilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(4-t-butilfenilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(1-adamantiloxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(1-adamantilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; - R, S-7-(2-naftaleniloxi)iminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(9-antracenilmetoxi)iminometil-homocamptotecina; - R, S-7-(β-uracil)metoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(4-piridil)metoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-(2-tienil)metoxiiminometil-homocamptotecina; - R, S-7 - [(N-metil)-3-piperidinil]metoxiiminometil-homocamptotecina; - R,S-7-hidroxiiminofenilmetil-homocamptotecina.
4. 4. Processo para a preparação de compostos de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais Ri é hidrogénio e R2 e R3 são como definidos acima, compreendendo: a) a redução do grupo cetona na posição 19 da camptotecina, de um modo opcional substituída com os significados visados de R2 e R3, para produzir o derivado de 19,20-hidroxilo; b) o tratamento do derivado obtido no passo a) com periodato e ácido acético, para obter a abertura do anel E; c) a reacção de Reformatsky no derivado obtido no passo b); d) a formação do anel E, em que n é 1 ou 2. 4
5. 5. Processo para a preparação de compostos de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais Ri é um grupo -C (R5) =N-0-R4 e R2, R3, R4 e R5 são como definidos acima, compreendendo: a) a transformação da camptotecina, de um modo opcional substituída com os significados visados de R2 e R3, em 7-(dimetoximetil)camptotecina; b) a redução do grupo cetona na posição 19 da 7-(dimetoximetil)camptotecina, para produzir o derivado de 19,20-hidroxilo; c) o tratamento do derivado obtido no passo b) com periodato e ácido acético, para obter a abertura do anel E; d) a reacção de Reformatsky no derivado obtido no passo c); e) o tratamento do derivado obtido no passo d) com uma fórmula R4ONH2 oxima e a formação simultânea do anel E, em que n é 1 ou 2.
6. 6. 7-(dimetoximetil)camptotecina.
7. 7. Utilização da 7-(dimetoximetil)camptotecina como um produto intermediário no processo de acordo com a reivindicação 5.
8. 8. Compostos de acordo com qualquer das reivindicações 1-3, como medicamentos. 5
9. 9. Composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de, pelo menos, um composto de acordo com as reivindicações 1-3 em mistura com veiculos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
10. 10. Composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de, pelo menos, um composto de acordo com as reivindicações 1-3 em mistura com veiculos e excipientes farmaceuticamente aceitáveis e, de um modo opcional, em combinação com outro ingrediente activo.
11. 11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, na qual o outro ingrediente activo é um agente anticancerigeno.
12. 12. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1-3, para a preparação de um medicamento com actividade inibidora da topoisomerase I.
13. 13. Utilização, de acordo com a reivindicação 12, para a preparação de um medicamento útil no tratamento de tumores.
14. 14. Utilização, de acordo com a reivindicação 12, para a preparação de um medicamento útil no tratamento de infecções parasiticas ou virais. Lisboa, 29 de Novembro de 2006 6