PL207018B1 - Kompozycja farmaceutyczna, sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII i zastosowanie polipeptydu czynnika VII - Google Patents

Kompozycja farmaceutyczna, sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII i zastosowanie polipeptydu czynnika VII

Info

Publication number
PL207018B1
PL207018B1 PL373904A PL37390403A PL207018B1 PL 207018 B1 PL207018 B1 PL 207018B1 PL 373904 A PL373904 A PL 373904A PL 37390403 A PL37390403 A PL 37390403A PL 207018 B1 PL207018 B1 PL 207018B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
composition
factor vii
fvii
polypeptide
preparation
Prior art date
Application number
PL373904A
Other languages
English (en)
Other versions
PL373904A1 (pl
Inventor
Michael Bech Jensen
Birthe Lykkegaard Hansen
Troels Kornfelt
Original Assignee
Novo Nordisk Helth Care Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34178323&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL207018(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novo Nordisk Helth Care Ag filed Critical Novo Nordisk Helth Care Ag
Publication of PL373904A1 publication Critical patent/PL373904A1/pl
Publication of PL207018B1 publication Critical patent/PL207018B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII i o zastosowanie polipeptydu czynnika VII. Kompozycja farmaceutyczna otrzymana zgodnie z wynalazkiem może być przechowywana, transportowana i używana w temperaturze pokojowej.
Tło wynalazku
Czynnik VII jest polipeptydem zaangażowanym w proces krzepnięcia krwi. Obecnie, czynnik VIIa można wytworzyć technikami rekombinacyjnymi (rFVIIa) i jest on szeroko stosowany jako środek powodujący zatrzymanie krwawienia. Czynnik VII (ludzki typu dzikiego) został opisany w patencie USA nr 4784950. rFVIIa zapewnia obecnie szybką i wysoce skuteczną odpowiedź powodującą zatrzymanie krwawienia u pacjentów z hemofilią doświadczających krwawienia. Korzystnie, rFVIIa można zastosować do leczenia pacjentów z hemofilią, którzy nie mogą być leczeni innymi produktami czynników krzepnięcia z powodu tworzenia się przeciwciał. Pacjenci cierpiący na niedobór czynnika VII lub pacjenci mający prawidłowy układ krzepnięcia, lecz wciąż doświadczający nadmiernych krwawień, mogą być leczeni za pomocą rFVIIa.
Podczas opracowywania leku obejmującego polipeptyd, taki jak np. czynnik VII, trzeba brać pod uwagę kilka parametrów. Na przykład, lek musi być skuteczny, bezpieczny i musi prowadzić do prawidłowego stosowania go przez pacjenta. Ponadto, lek można przygotować w postaci preparatu do podania pozajelitowego przy użyciu akceptowalnych farmaceutycznie zaróbek, które będą musiały spotkać się z aprobatą różnych instytucji odpowiadających za medyczne regulacje prawne. Przy zamiarze podania pozajelitowego wysoce pożądane jest, aby preparat był w przybliżeniu izotoniczny i aby pH preparatu było w fizjologicznie odpowiednim zakresie podczas wstrzyknięcia/wlewu, w przeciwnym razie może wywołać ból i dyskomfort u pacjenta. W celu ogólnego przeglądu preparatów białkowych zobacz, na przykład, Cleland i wsp.: The development of stable protein formulations: A closer look at protein aggregation, deamidation and oxidation, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993, 10(4):307-377; oraz Wang i wsp., Parental formulations of protein and peptides: Stability and stabilizers, Journal of Parental Science and Technology 1988 (Supplement), 42 (2S).
Jednak, dla leków obejmujących polipeptydy bezpieczeństwo może bezpośrednio być związane z fizyczną i chemiczną stabilnoś cią polipeptydu. Bę dą c polipeptydem, czynnik VII lub polipeptyd pokrewny czynnikowi VII jest podatny na fizyczną degradację, włączając w to denaturację i agregację, tak jak tworzenie się rozpuszczalnych lub nierozpuszczalnych agregatów w postaci dimerów, oligomerów i polimerów, lub na chemiczną degradację, włączając w to, na przykład, hydrolizę, deaminację i utlenienie. W konsekwencji, ta fizyczna i chemiczna niestabilność może prowadzić do utraty aktywności polipeptydu czynnika VII, tworzenia się toksycznych i immunogennych produktów degradacji, poważnego ryzyka powstania zakrzepicy po wstrzyknięciu zdegradowanych polipeptydów czynnika VII, zatkania igieł stosowanych do zastrzyków i ryzyka niehomogeniczności, żeby wymienić tylko kilka.
Zatem, istotne jest dostarczenie kompozycji zawierających polipeptydy czynnika VII, które są stabilizowane przeciwko fizycznej i chemicznej degradacji.
Obecnie wytworzony w wyniku rekombinacji polipeptyd FVII dostarczany jest jako produkt liofilizowany, który ma być przechowywany w temperaturze pomiędzy około 2 a około 8°C. Wymaganie warunków chłodniczych powoduje utrudnienia i jest niedogodne dla producenta lub dostawcy, jak również dla końcowego użytkownika (pacjenta).
Obecnymi wytwarzany w wyniku rekombinacji produktem FVII jest NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Dania), który składa się z 1,2 mg rekombinowanego ludzkiego czynnika VIIa, 5,84 mg NaCl, 2,94 mg CaCl2, 2H2O, 2,64 mg glicyloglicyny, 0,14 mg polisorbatu 80 i 60,0 mg mannitolu. Po ponownym, odtworzeniu roztworu przy użyciu 2,0 ml wody do wstrzyknięć (WFI, ang. water for injection) pH wynosi 5,5 i w ten sposób przygotowany roztwór zawierający FVII jest wystarczająco stabilny przez 24 godziny w temperaturze pokojowej.
Niniejsi wynalazcy stwierdzili, że podczas przechowywania liofilizowanego produktu NovoSeven® przez 6 miesięcy w 25°C około 6 do 7% w/w początkowej zawartości rFVIIa było obecnych w postaci agregatów.
Zatem, kompozycje zawierające polipeptydy czynnika VII muszą być stabilizowane, aby umożliwić ich przechowywanie i przewożenie w temperaturze otoczenia. Jednak, niestabilność polipeptydów dotyczy
PL 207 018 B1 kilku parametrów i niemożliwe jest przewidzenie właściwego sposobu stabilizowania czynnika VIIa lub polipeptydu pokrewnego czynnikowi VII.
Jedno z podejść stabilizowania białka dotyczy usunięcia wody z białka, np. tak, aby dostarczać białko w postaci masy liofilizowanej, substancji końcowej otrzymanej w procesie liofilizacji. Jednak, sam proces liofilizacji jest także szkodliwy dla białek; podczas liofilizacji roztwór białka jest najpierw schładzany, dopóki odpowiednio zmrożona i obecna w dużych ilościach woda w roztworze białka nie utworzy na tym etapie lodu. Przez to białko jest podatne na stres indukowany zamrażaniem, powodujący deformację i wytrącanie. W następnym, etapie, tak zwanym pierwotnym etapie suszenia, lód sublimuje i we wtórnym etapie suszenia zaadsorbowana lub związana woda jest usuwana w wyższych temperaturach. W czasie tego usuwania wody białka mogą tracić ich właściwą konformację, która jest zapewniana głównie dzięki wiązaniom wodorowym.
Dlatego, aby zachować konformację, aktywność i stabilność białka podczas liofilizacji, do roztworu polipeptydów należy dodać wystarczające ilości odpowiednich zaróbek o właściwościach chroniących w niskich temperaturach i/lub podczas liofilizacji tak, aby chronić białko, odpowiednio przed stresem indukowanym, zamrażaniem i/lub stresem podczas usuwania wody.
Dodatkowo, podczas dostarczania produktu liofilizowanego istotna cecha dotyczy właściwości masy liofilizowanej. Musi ona mieć dobre właściwości, jeśli chodzi o jej postać i strukturę, tj. nie powinna się zapadać, ponieważ takie zapadnięte masy mogą być twarde lub nawet niemożliwe do rozpuszczenia (przywrócenia ich pierwotnej postaci) przed użyciem. Odwrotnie, struktura fizyczna liofilizowanej masy nie może być zbyt luźna i miękka. Dlatego do roztworu białka przed liofilizacją dodaje się jeden lub więcej tak zwanych środków zwiększających objętość.
Inne publikacje będące przedmiotem zainteresowania, jeśli chodzi o stabilizację polipeptydów, są następujące:
U.S. 20010031721 A1 (American Home Products) dotyczy wysoce stężonych, liofilizowanych i ciekł ych preparatów czynnika IX.
WO 97/26909 (Genetics Institute) dotyczy preparatów liofilizowanych czynnika IX odpowiednich do przechowywania i podawania. Te preparaty mogą zawierać sacharozę lub mannitol jako środek chroniący w niskich temperaturach.
WO 95/28954 (Genetics Institute) dotyczy preparatów czynnika IX odpowiednich do przechowywania i podawania. Te preparaty mogą zawierać sacharozę jako krioprotektant.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie stabilnych kompozycji polipeptydów czynnika VII, zasadniczo bez obecności produktów degradacji i bez obniżonej aktywności polipeptydów czynnika VII, korzystnie po długim czasie przechowywania w warunkach otoczenia, np. przez przynajmniej 6 miesięcy.
Ponadto, celem jest, aby stabilne kompozycje były odpowiednie do podawania pozajelitowego tak, aby nie sprawiać żadnych niedogodności pacjentowi.
Podsumowanie wynalazku
Niniejsi wynalazcy stwierdzili, że polipeptydy czynnika VII można dostarczyć w kompozycji, która jest wystarczająco stabilna, umożliwić przechowywanie jej w temperaturze pokojowej przez przynajmniej 3 miesięcy. Wynalazcy odkryli, że stabilizacja dotyczy właściwego połączenia pewnych akceptowalnych farmaceutycznie zaróbek.
Odpowiednio, niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej polipeptyd czynnika VII i połączenie sacharozy i poliolu, przy czym kompozycja ta ma zawartość wilgoci nie większą niż 3%.
Korzystnie w kompozycji tej połączenie sacharozy i poliolu zawiera ponadto przeciwutleniacz.
Przeciwutleniacz jest korzystnie jest wybrany z grupy składającej się z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny, glutationu i peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny i glutationu, a poliol jest wybrany z grupy składającej się z mannitolu, sorbitolu i ksylitolu.
W korzystnym wykonaniu wynalazku kompozycja wedł ug wynalazku jest stabilna tak, ż e nie więcej niż 5% w/w początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do agregatów podczas przechowywania tej kompozycji w 30°C przez 8 miesięcy, korzystnie nie więcej niż 4,0% w/w, 3,0% w/w, 2,5% w/w, 2,0% w/w, 1,5% w/w lub nie więcej niż 1,0% w/w.
Także korzystnie, kompozycja według wynalazku jest stabilna tak, że nie więcej niż 6% w/w początkowe zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do postaci utlenionych podczas
PL 207 018 B1 przechowywania w 30°C przez 3 miesięcy, korzystnie nie więcej niż 5% w/w, 4,0% w/w, 3,0% w/w, 2,5% w/w, 2,0% w/w lub nie więcej niż 1,5% w/w.
Poliol jest obecny w kompozycji według wynalazku w ilości wahającej się od 0,5 do 75% mg/ml, takich jak od 2 do 50 mg/ml, 5 mg/ml do 55 mg/ml, 8 do 45 mg/ml, 10 do 40 mg/ml, 10 do 30 mg/ml, lub od 2 do 45 mg/ml, 5 mg/ml do 45 mg/ml, 5 do 35 mg/ml, 5 do 25 mg/ml, 5 do 20 mg/ml, 20 do 40 mg/ml lub takich jak od 20 do 30 mg/ml.
Sacharoza jest obecna w kompozycji według wynalazku w ilości wahającej się od 0,5 do 75 mg/ml, takich jak od 2 do 60 mg/ml, od 5 mg/ml do 55 mg/ml, od 8 do 45 mg/ml, od 10 do 40 mg/ml, od 10 do 30 mg/ml, lub od 2 do 45 mg/ml, od 5 do 25 mg/ml, takiej jak 5 do 20 mg/ml.
Poliol jest w kompozycji według wynalazku w stosunku wagowym względem wspomnianej sacharozy wahającym, się od 100:1 do 1:50, korzystnie od 50:1 do 1:10; 20:1 do 1:5; 10:1 do 1:2; 6:1 do 1:2; 4:1 do 1:1 lub od 4:1 do 3:2.
W innym, korzystnym wykonaniu kompozycja zawiera ponadto ś rodek odpowiedni do utrzymywania pH tej kompozycji w zakresie 3 do 9 po rozpuszczeniu w rozpuszczalniku wodnym, korzystnie pH jest w zakresie 4 do 7, korzystniej w zakresie 4,5 do 6,5, jeszcze korzystniej w zakresie 5 do 6. Środek ten jest wybrany z grupy składającej się z cytrynianu, octanu, histydyny, jabłczanu, fosforanu, kwasu winowego, kwasu bursztynowego, MES, HEPES, PIPES, imidazolu, TRIS, mleczanu, glutaminianu i glicyloglicyny.
W kolejnym korzystnym wykonaniu kompozycja według wynalazku zawiera ponadto ś rodek modyfikujący toniczność. Ten środek modyfikujący toniczność jest wybrany z grupy składającej się z octanu sodu, mleczanu sodu, chlorku sodu, chlorku potasu i chlorku wapnia.
W następnym korzystnym wykonaniu kompozycja według wynalazku zawiera ponadto surfaktant. Sufaktant ten jest wybrany z grupy składającej się z polisorbatów, takich jak Polisorbat 20 lub 80; eterów alkilowych polioksyetylenu, takich jak Brij 35® lub poloksamerów, takich jak Poloksamer 188 lub 407, oraz innych polimerów blokowych etylenu/polipropylenu lub polietylenoglikolu (PEG), takiego jak PEG8000.
W kompozycji według wynalazku korzystnie poliolem jest mannitol.
W korzystnym, wykonaniu wynalazku w kompozycji według wynalazku polipeptyd czynnika VII jest wybrany z grupy składającej się z ludzkiego czynnika VIIa, rekombinowanego ludzkiego czynnika VIIa i wariantu sekwencji czynnika VII.
Bardziej korzystnie jest gdy wspomniany polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem: VIIa lub rekombinowanym ludzkim czynnikiem VIIa.
W innym korzystnym wykonaniu kompozycja charakteryzuje się tym, że polipeptyd czynnika VII jest polipeptydem pokrewnym czynnikowi VII, przy czym stosunek aktywności tego polipeptydu pokrewnego czynnikowi VII i czynnika VII typu dzikiego wynosi przynajmniej 1,25 podczas testowania w jednym lub więcej z oznaczeń proteolizy in vitro i oznaczeń hydrolizy in vitro.
W kolejnym korzystnym wykonaniu kompozycja według wynalazku charakteryzuje się tym, że polipeptyd czynnika VII jest obecny w stężeniu od 0,6 mg/ml do 10,0 mg/ml, tak jak od 0,6 mg/ml do 6 mg/ml, od 0,6 mg/ml do 5 mg/ml lub od 0,6 mg/ml do 4 mg/ml.
W kompozycji według wynalazku zawartość wilgoci korzystnie wynosi nie więcej niż 2,5% w/w, korzystnie nie więcej niż 2% w/w, najkorzystniej nie więcej niż 1,5% w/w.
Kompozycja, korzystnie jest masą liofilizowaną.
Kompozycja według wynalazku w kolejnym jej korzystnym wykonaniu zawiera: polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę oraz surfaktant wybrany z polisorbatu lub poloksameru. Bardziej korzystnie kompozycja ta zawiera ponadto metioninę. Kompozycja ta może ponadto zawierać L-histydynę.
Bardziej korzystnie kompozycja ta zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny.
W najbardziej korzystnym, wykonaniu kompozycja jest wybrana z listy preparatów A do D:
Związek Preparat A Preparat B Preparat C Preparat D
1 2 3 4 5
polipeptyd FVII 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml
CaCl2 x 2H2O 5 do 20 mM 5 do 20 mM 5 do 2 0 mM 5 do 20 mM
NaCl 0 - 50 mM 0 - 50 mM 0 - 50 mM 0 - 50 mM
PL 207 018 B1 cd. tabeli
1 2 3 4 5
glicyloglicyna 0 - 15 mM 0 - 15 mM 0 - 15 mM 0 - 15 mM
L-histydyna 0 - 20 mM 0 - 20 mM 0 - 20 mM 0 - 20 mM
mannitol 20 do 40 mg/ml 20 do 40 mg/ml 20 do 40 mg/ml 20 do 40 mg/ml
sacharoza 5 do 20 mg/ml - - 5 do 20 mg/ml
metionina 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml
polisorbat 80 0,05 do 0,15 mg/ml 0,05 do 0,15 mg/ml
poloksamer 188 - - 0,5 do 3 mg/ml 0,5 do 3 mg/ml
PH 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0
Kompozycja według wynalazku może też być wybrana z listy preparatów Ex do Lx:
Związek Preparat Ex Preparat Fx Preparat Gx Preparat Hx
polipeptyd FVIIa 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
CaCl2 x 2H2O 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
NaCl 39 mM 39 mM 39 mM 39 mM
glicyloglicyna 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
mannitol 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml
sacharoza 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml
metionina 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml
polisorbat 80 0,1 mg/ml - 0,1 mg/ml -
poloksamer 188 1,0 mg/ml - 1,0 mg/ml
L-histydyna - - 10 mM 10 mM
pH 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0
Związek Preparat Ix Preparat Jx Preparat Kx Preparat Lx
polipeptyd FVII 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
CaCl2 x 2H2O 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
NaCl 39 mM 39 mM 39 mM 39 mM
glicyloglicyna 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
mannitol 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml
sacharoza 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml
metionina - - -
polisorbat 80 0,1 mg/ml - 0,1 mg/ml -
poloksamer 188 - 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
L-histydyna - - 10 mM 10 mM
pH 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0
W kompozycjach powyżej opisanych to znaczy tych zawierających polisorbat lub poloksamer ich korzystnych wykonaniach polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII, który obejmuje etapy:
PL 207 018 B1
i) dostarczania tego polipeptydu czynnika VII w roztworze zawierającym przynajmniej jeden środek stabilizujący składający się z połączenia sacharozy i poliolu oraz ewentualnie przeciwutleniacza.
ii) przetwarzania tego roztworu tak, aby otrzymać stałą kompozycję o zawartości wilgoci nie większej niż 3% w/w.
Przeciwutleniacz korzystnie jest wybrany z grupy składającej się chomocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny, glutationu i peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny i glutationu.
Poliol w sposobie według wynalazku korzystnie jest wybrany z grupy składającej się z mannitolu, sorbitolu i ksylitolu. Ilościowy skład poliolu w roztworze jest tak skomponowany, że jest on obecny w ilości wahającej się od 0,5 do 75 mg/ml, korzystnie od 2 do 45 mg/ml, takiej jak od 5 mg/ml do 45 mg/ml, od 5 do 35 mg/ml, od 5 do 25 mg/ml, 5 do 20 mg/ml, 20 do 40 mg/ml lub od 20 do 30 mg/ml.
Sacharoza natomiast jest obecna w roztworze w ilości wahającej się od 0,5 do 75 mg/ml, korzystnie od 2 do 45 mg/ml, takiej jak od 5 mg/ml do 45 mg/ml, od 5 do 35 mg/ml, od 5 do 25 mg/ml lub od 5 do 20 mg/ml.
Przeciwutleniacz jest obecny w ilości wahającej się od 0,05 do 10 mg/ml, korzystnie od 0,1 do 5 mg/ml, korzystniej od 0,1 mg/ml do 2,5 mg/ml, jeszcze korzystniej od 0,1 do 2 mg/ml, najkorzystniej od 0,1 do 1 mg/ml.
W sposób wedł ug wynalazku przeciwutleniaczem jest metionina, a poliolem jest mannitol.
W sposób wedł ug wynalazku przetwarzanie obejmuje liofilizację .
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie polipeptydu czynnika VII do przygotowania leku do leczenia zespołu odpowiadającego na czynnik VII, przy czym lek ten obejmuje kompozycję zawierającą zarówno polipeptyd czynnika VII jak i połączenie sacharozy i poliolu, przy czym kompozycja ma zawartość wilgoci nie większą niż 3%.
Zastosowanie polipeptydu czynnika VII do przygotowania leku charakteryzuje się tym, że zespół odpowiadający na czynnik VII jest wybrany z grupy składającej się z hemofilii A, hemofilii B, niedoboru czynnika XI, niedoboru czynnika VII, małopłytkowości, choroby von Willebranda, obecności inhibitora czynnika krzepnięcia, operacji, urazu i terapii antykoagulantem.
Jak wspomniano, niniejszy wynalazek dotyczy stabilnych podczas przechowywania kompozycji zawierających polipeptydy czynnika VII. Kompozycje te można przechowywać w temperaturze pokojowej przez wydłużony okres czasu bez powodowania zasadniczej degradacji polipeptydu czynnika VII. Przez temperaturę pokojową rozumie się temperaturę otoczenia wewnątrz pokoju; zwykle mieści się ona w zakresie od około 5°C do około 40°C, tak jak od około 10°C do 30°C lub od 15°C do 25°C.
Przez połączenie poszczególnych akceptowalnych farmaceutycznie zaróbek niniejsi wynalazcy dostarczyli stabilizowane kompozycje zawierające polipeptydy czynnika VII, pozwalając w ten sposób na przechowywanie kompozycji w temperaturze pokojowej w wydłużonym, okresie czasu, takim jak przynajmniej około 8 miesięcy, co jest korzystne i stabilizowane kompozycje nie muszą być przechowywane w warunkach chłodniczych, takich jak pomiędzy 2 a 8°C.
Niniejszy wynalazek dotyczy także stabilnych podczas przechowywania kompozycji, które są stabilne przez przynajmniej około 8 miesięcy podczas przechowywania w około 30°C. Kompozycje korzystnie przechowuje się w ciemności. Zatem, niniejszy wynalazek umożliwia przechowywanie takich kompozycji w temperaturze pokojowej bez zwiększania ryzyka zdarzeń niepożądanych dla pacjenta podającego takie kompozycje. Korzystnie, w wyniku polepszonej stabilności podczas przechowywania zmniejszą się także koszty, ponieważ nie wymagane są żadne specjalne chłodnicze warunki podczas przechowywania, co ponadto sprawi, że przewożenie kompozycji przez użytkownika stanie się dogodniejsze.
Określenie „polipeptyd czynnika VII ma w domyśle oznaczać dowolny polipeptyd czynnika VII, który jest skuteczny w zapobieganiu lub leczeniu krwawienia. Obejmuje ono polipeptydy czynnika VII pochodzące z krwi lub osocza, albo wytworzone sposobami rekombinacyjnymi.
Stosowane tutaj określenie „polipeptyd czynnika VII obejmuje, bez ograniczeń, czynnik VII, jak również polipeptydy pokrewne czynnikowi VII. Określenie „czynnik VII ma na celu obejmować, bez ograniczeń, polipeptydy mające sekwencję aminokwasową 1-405 ludzkiego czynnika VII typu dzikiego (jak to ujawniono w patencie USA nr 4784950), jak również czynnik VII typu dzikiego pochodzący z innych gatunków, takich jak, na przykład, wół, świnia, pies, mysz i łosoś, przy czym ten czynnik VII pochodzi z krwi lub osocza albo jest wytworzony sposobami rekombinacyjnymi. Obejmuje ono ponadto naturalne warianty alleli czynnika VII, które mogą istnieć i pojawiać się w różnych osobnikach. Także stopień i usytuowanie glikozylacji lub innych modyfikacji posttranslacyjnych może się zmieniać w zaPL 207 018 B1 leżności od wybranych komórek gospodarza i natury środowiska komórkowego gospodarza. Określenie „czynnik VII ma także na celu obejmować polipeptydy czynnika VII w ich nieprzeciętej postaci (zymogenu), jak również te, które zostały poddane obróbce proteolitycznej dając w wyniku ich odpowiednie postacie bioaktywne, które można określić jako czynnik VIIa. Typowo, czynnik VII jest cięty pomiędzy resztami 152 i 153 dając w wyniku czynnik VIIa.
Jak wspomniano, określenie „polipeptydy czynnika VII ma także w domyśle oznaczać „polipeptydy pokrewne czynnikowi VII. Określenie „polipeptydy pokrewne czynnikowi VII ma na celu obejmować takie polipeptydy w ich nieprzeciętej postaci (zymogenu), jak również te, które zostały poddane obróbce proteolitycznej dając w wyniku ich odpowiednie postacie bioaktywne. Stosowane tutaj określenie „polipeptydy pokrewne czynnikowi VII obejmuje, bez ograniczeń, polipeptydy wykazujące zasadniczo tę samą lub polepszoną aktywność biologiczną w porównaniu z ludzkim czynnikiem VII typu dzikiego. Te polipeptydy obejmują, bez ograniczeń, czynnik VII lub czynnik VIIa, który został chemicznie zmodyfikowany, i warianty czynnika VII, do których wprowadzono specyficzne zmiany sekwencji aminokwasowych, które nieznacznie modyfikują lub polepszają aktywność biologiczną polipeptydu.
Ponadto, polipeptydy pokrewne czynnikowi VII, włączając w to warianty czynnika VII wykazujące zasadniczo tę samą lub lepszą aktywność biologiczną niż czynnik VII typu dzikiego, obejmują bez ograniczeń polipeptydy mające sekwencję aminokwasową, która różni się od sekwencji czynnika VII typu dzikiego wstawieniem, usunięciem lub podstawieniem jednego lub więcej aminokwasów.
Polipeptydy pokrewne czynnikowi VII, włączając w to warianty, mające zasadniczo tę samą lub polepszoną aktywność biologiczną w porównaniu z czynnikiem VIIa typu dzikiego, obejmują te, które wykazują przynajmniej około 25%, korzystnie przynajmniej około 50%, korzystniej przynajmniej około 75%, korzystniej przynajmniej około 100%, korzystniej przynajmniej około 110%, korzystniej przynajmniej około 120%, a najkorzystniej przynajmniej około 130% specyficznej aktywności czynnika VIIa typu dzikiego, który został wytworzony w tym samym typie komórek podczas testowania w jednym lub więcej oznaczeń krzepnięcia, oznaczeń proteolizy lub oznaczeń wiązania TF, jak to opisano w niniejszej specyfikacji.
W niektórych wykonaniach polipeptydy czynnika VII są polipeptydami pokrewnymi czynnikowi VII, w szczególności wariantami, gdzie stosunek pomiędzy aktywnością tego polipeptydu czynnika VII a aktywnoś cią natywnego ludzkiego czynnika VIIa (FVIIa typu dzikiego) wynosi przynajmniej około 1,25 podczas testowania w „oznaczeniu hydrolizy in vitro (zobacz Przykład 9, poniżej); w innych wykonaniach stosunek wynosi przynajmniej około 2,0; w dalszych stosunek wynosi przynajmniej około 4,0. W niektórych wykonaniach wynalazku polipeptydy czynnika VII są polipeptydami pokrewnymi czynnikowi VII, w szczególności wariantami, gdzie stosunek pomiędzy aktywnością tego polipeptydu czynnika VII a aktywnością natywnego ludzkiego czynnika VIIa (FVIIa dzikiego typu) wynosi przynajmniej około 1,25 podczas testowania w „oznaczeniu proteolizy in vitro (zobacz Przykład 9, poniżej); w innych wykonaniach stosunek wynosi przynajmniej około 2,0; w dalszych wykonaniach stosunek wynosi przynajmniej około 4,0; w dalszych wykonaniach stosunek wynosi przynajmniej około 8,0.
Nie ograniczające przykłady wariantów czynnika VII mające zasadniczo tę samą lub polepszoną aktywność biologiczną co czynnik VII typu dzikiego obejmują 352A-FVII, S60A-FVII (Lino i wsp., Arch. Biochem. Biophys. 352:132-192, 1998); L305V-FVII, L305V/M306D/D3093-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M293Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII, M293Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/-K337A-FVII, V158D/E296V/M293Q/L305V/K337A-FV11, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298QFVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M293K-FVII oraz S3363-FVII; warianty FVIIa wykazujące zwiększoną stabilność proteolityczną, jak to ujawniono w patencie USA nr 5580560; czynnik VIIa, który został przecięty proteolitycznie pomiędzy resztami 290 a 291 lub pomiędzy resztami 315 a 316 (Mollerup i wsp., Biotechnol. Bioeng. 43:501-505, 1995); utlenione postaci czynnika VIIa (Komfelt i wsp., Arch. Biochem. Biophys. 365:43-54, 1999); warianty FVII, jak to ujawniono w PCT/DK02/00189; warianty FVII wykazujące zwiększoną stabilność proteolityczną, jak to ujawniono w WO 02/38162 (Scripps Research Institute); warianty FVII mające zmodyfikowaną domenę Gla i wykazujące zwiększone wiązanie się do błony, jak to ujawniono w WO 99/20767 (Uniwersytet w Minnesocie); warianty FVII, jak to Ujawniono w WO 01/58935 (Maxygen ApS, warianty FVII mające zwiększoną aktywność biologiczną w porównaniu z FVIIa typu dzikiego, jak to ujawniono w WO 01/83725, WO 02/22776, WO 02/077218, PCT/DK02/00635, duńskim wniosku patentowym PA 2002 01423, duńskim wniosku patentowym PA
PL 207 018 B1
2001 01627; WO 02/38162 (Scripps Research Institute); oraz warianty FVIIa ze zwiększoną aktywnością, jak to ujawniono w JP 2001061479 (Chemo-Sero-Therapeutic Res Inst.).
Przykłady polipeptydów czynnika VII lab pokrewnych czynnikowi VII obejmują, bez ograniczeń, czynnik VII typu dzikiego, L305V-FVII, L3C5V/M30cD/D3093-FVII, L305I-FVII,
L305T-FVII, F374P-FVII, VI58T/M298Q-FVII, VI53D/E296V/M2932FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, VI53D/M293Q-FVII, L305V/K337AFVII, V153D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V15SD/F2 9SV/'M2 93Q/K33‘AFVII, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296VFVII, E296V/M298Q-FVII, VI53D/E296V-FVII, VI53D/M298K-FVII oraz 3336G-FVII, L305V/X337A-FVII,
L305V/E296V-FVII, L305V/M298Q-FVII,
L305V/K337A/V158T-FVII,
L305V/K337Α/Ξ296V-FVII,
L305V/V158D/M298Q-FVII,
L305V/V153T/M293Q-FVII,
L305V/E296V/M298Q-FVII,
L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII,
L305V/V158T/E296V/K337A-FV±I,
L305V/V15 8D/E296V/K337A-FVII,
FVII, L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII,
L305V/VI58D-FVII,
L305V/V158±-FVII,
L3 C 5 V/K3 37A./M2 98Q-FVII,
L3C 5V/K3 3 7A/VI53 D-FVII,
L30 5V/VI5 3 D/E2 9 6V-FVII,
L 3 0 5 V / V15 8 T / E 2 9 6 V - F V11, L 3 0 5 V / V15 3 D / E 2 9 5 V / M2 9 3 (2 - F V11, L305V/V158T/K337A/F293Q-FVII,
L305V/V153D/K337A/M293Q-FVII,
L3 0 5 V/VI 5 3 D/E2 9 6V./M2 9 3Q/ K3 3 7 AS314E/X316Q-FVII,
3314E/V158D-FVII,
K316H/L305V-FVII,
K3 i6H/E296V-FVII,
K3I6Q/L305V-FVII,
K316Q/E296V-FVII,
S314E/L305V/K337A-FVII,
S314E/L305V/E296V-FVII,
S314E/L305V/V158T-FVII,
3314E/L305V/K337A/M298Q-FVII,
3314E/L3C5V-FVII,
S314E/E29oV-FVII,
K316H./K337A-FVII,
K316H/M298Q-FVII,
K316Q/K337A-FVII,
K316Q/M298Q-FVII,
S3I4E/K316H-FVII,
3314E/K337A-FVII, S314E./V158T-FVII,
K316H./V158D-FVII,
K316H/V158T-FVII,
K3I6Q/V158D-FVII,
K316Q/V158T-FVII,
S314E/L3C5V/V158D-FVII, S 314 E/L3 0 5V/M2 9 8Q-FVII,
S 314E./L30 5V/K33 7A/VI5 8T-FVII, 3314E/L305V/K337A/E296V-FVII,
PL 207 018 B1
S 3 i 4 Ξ / L 3 0 5 V / K 3 3 7 A / V15 8 D - F V11, S 3 14 E Z L 3 0 5 V / V1 5 3 D Z M 2 9 3 Q - F V11,
5 314 E/L 3 0 5V/VI5 8 D/E2 9 6V-?VII, S 314 E / L 3 0 5 V / V15 3 T Z M 2 9 3 Q - F V11,
S 314 E ZL 3 0 5VZVI5 3 TΖΞ2 96V-FVII, S 314 E / L 3 0 5 V Z E 2 3 8V Z M 2 9 8 Q - F V11,
3314E/L305V/V15 3 DZE 2 9 6V/K29 3 Q-F V11,
3 314 E / L 3 0 5 V./ V15 8 T / E 2 9 6 V / M2 93Q- -FVII,
3314E/L305V/V158T/K337A/M298Q- -FVII,
S314E/L305V/V153T/E29SV/K337A- -FVII,
S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q- -FVII,
3314E./L3C 5V/VI58 O/E2 96V/S337A- -FVII,
S 314 E Z L 3 O 5 V/V ± 5 8 D Z E 2 9 βV Z M2 9 8 Q/R3 3 7 A-eVII,
S314EZL305VN158TZE296WM293Q/K337A-FVII, K315HZL305V/R337AFVII, K316H7L305V/Vi59D-FVII, K316H/L3O5VZE296V-FVII,
K 3 1 6 H Z L 3 0 5 V / M2 9 8 Q - F V11, K 316 H / L 3 0 5 V Z V15 3 T - F V11,
K 316 H / L 3 0 5 V / K 3 3 7 A / V15 3 T - F V11, K316H/L305V/K333A/M293Q-FVII,
K 316 H/L 3 3 5V/K3 3 7A/E 2 9 6V-FVII, K 316 H / L 3 0 5V Z K 3 3 7 A Z V15 8 D - F V11,
K316H/L3O5V/V153D/M298Q-FV2I, K 316 H / L 3 0 5 V Z V15 8 D / E 2 9 6V - F V11,
K316H/L3 3 5V/VI5 8T/M2 9 8Q-FVII, K 316 H / L 3 0 5 V Z V15 8 T / E 2 '9 6 V - F V11,
K316H/L 3 0 5VZ E2 9 6V/M2 9 8Q-FV±I, K 316 H Z L 3 0 5 V Z V i 5 8 D / E2 9 6V Z M 2 9 3 Q -
FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M293Q-FVII,
K316H./L3 0 5V/V158T/K3 37A/M2 98Q- FVII,
K316HZL305VZV158T/E296V/K337A- •FVII,
K316H Z L 3 C 5V/VI5 8 D/K3 3 7AZM2 9 8 Q- •FVII,
K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII,
K316H/L30 5V/yi58D/E2 96V/M2 93Q/K3 37A-FVH,
K316H/L305V/yi58T/E296V/M298Q/K337A-FVII, R31SQ/L305V/K337AFVII, K316Q/Ł305V/V158D-FVII, K3i6Q/L3C5V/E296V-FVII,
K316QZL305V/M298Q-FVII, K316Q/L3C5V/V158T-FVII,
K318Q/L305V/K337AZV158T-FVII, K316Q ZL3 0 5V/K3 3 7A/M2 9 8 2-FVII,
K316QZL3O5V/K337AZE296V-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII,
PL 207 018 B1
K 3 1 o Q / L 3 0 5 V / V15 8 D / M 2 9 8 Q - F V11, K 316 Q / L 3 0 5 V / V15 8 D / E 2 9 β V - F V11,
K 3 16 Q / L 3 0 5 V / V15 3 T / M2 9 8 Q - F V11, K 316 Q / L 3 0 5 V / V15 3 T / E 2 9 6 V - F V11,
K 3 16 Q / L 3 C 5 V / Ξ 2 9 β V / M 2 9 8 Q - F V11, K 316 Q / L 3 0 5 V ί V15 3 D ! E 2 9 6 V / M 2 9 3 Q -
FVII, Κ316Q/L3C5V/V1537/Ε296V/M293Q-FVII,
K316Q/L3 O 5V/VI5 3 T/K3 3 7A/M2 93 Q-FVII,
K31 6Q/L30 5V/V15 3T ,/E2 96WK3 37 A-FVII,
K316Q/L3 O 5V/VI5 8 D/K3 3 7A/M2 9 3 Q-FVII,
K316Q/L30 5V/V158 D/E2 9 6V/K3 3 7A-FVII,
F316Q/L305V/V158D/E296V/M293Q/K337A-FVII,
K316Q/L3O5V/V158T/E296V/M298Q/F337A-FVII, F374Y/K337A-FV1I,
E374Y/V153D-FVII, F374Y/E296V-FVII, F374Y/M298Q-FV1I,
F374Yi VI58T-FVII, F374Y/S314E-FVII, F374Y/L395V-FVII,
F37 4 Y/L3 Q 5 V./K3 3 7 A-FVII, F374Y/L3C5V/V153D-FVII,
F374Y/L3C5V/E296V-FVII, F374Y/L3O5V/M293Q- FVIT,
F374Y/L305V/V158T-FVII, F374Y/L305V/S314E-FVII,
F374Y/K337A/S314E-FVI1, F374Y/K337A/V153T-FVII,
F374Y/K337A/M298Q-FVII, F374Y/K337A/E296V-FVII,
F 3 7 4 Y / K3 3 7 A / V15 8 D - F V11, F374Y/V158D/3 314E-FVII,
F3 7 4 Y/V15 3 D/M2 98 Q-FVII, F3 7 4 Y/V15 8 D/E2 9 6V-FVII,
F374Y/V158T/S314E-FVII, F37 4 Y/V15 8T/M2 93Q-FVII,
F374Y/V153T/E296V-FVII, F 3 7 4 Y / E 2 9 6 V / S 3 14 Ξ - F V11,
F374Y/S314E/M298Q-FVII, F3 7 4 Y/E2 96V/M2 93Q-FVII,
F374Y/L305V/K337A/V158D-FVII, F374Y/L305V/K337Ά/Ε296V-FVII,
F374Y/L305V/K337A/M293Q-FVII, F374Y/L305V/K337A/V158T-FVII,
F374Y/L305V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V-FVII,
F374Y/L305V/V158D/M293Q-FVII, F37 4 Y/L30 5V/'V158 D/S314E-FVII,
F374Y/L305V/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/E296V/V153T-FVII,
F374Y/L305V/E296V/S314E-FV1I, F374Y/L305V/M298Q/V153T-FVII,
F374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/S314E-FVII,
PL 207 018 B1
F37 4Ύ/K3 3 7A/3 314 E/VI53T-FVII, F374Y/K337A/3314E/M293Q-FVII,
F374Y/K337A/3314E/E29 6V-FVII, F37 4 Y/K3 37A/3 314 E/VI53 D-F7II,
F3 7 4 Y/K3 3 7A/V15 8T/M2 98Q-FVII, F37 4 Y/K3 3 7A/715 3T/E2 967-F7II,
F37 4 Y/K33 7A/M2 9 3 Q/Ξ2 9 6V-FVII, F 3 7 4 Y / K 3 3 7 A / M 2 9 3 Q / V15 8 D - F V11,
F374Y/K337A/F2967/VI58D-FVII, F 3 7 4 Y / V15 3 D / 3 3 14 E / M 2 9 3 Q - F 711,
F37 4 Y/7153 D/S3 24Ξ/E2 967-F7Ii, F 3 7 4 Y / V1 5 3 D / M 2 9 3 Q / E 2 9 6 V - F V11,
F37 4 Y/VI53T /3 314E ,/E2 9 6V- FVII, F 3 7 4 Y / V15 3 T / 3 314 E / M 2 9 3 Q - F V11,
F37 4 Y/VI5 3T/M2 93Q/E2 9 67-FVII, F374Υ/Ξ2967/S314E/M293Q-F7II,
F374Y/L335V/M298Q/K337A/S314E- -FVII,
F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E- -F7II,
F374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E- -F7II,
F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A- -FVII,
F374Y/L305V/E296V/M293Q/S314E- -F7II,
F374Y/V158D/E296V/M293Q/K337A- -F7IT,
F374Y/V153D/E296V/M293Q/S314E- -F7II,
F374Y/L335V/V158D/K337A/S314E- -FVII,
F374Y/V153D/M298Q/K337A/S314E- -F7II,
F374Y/7153D/E2967/K337A/S314E- -F7II,
F3 7 4Y/L3 3 5V/V15 8D,/E2 9 6V/M2 93Q- -F7II,
F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A- -FVII,
F374Y/L3357/7153D/E2967/K337A- -F7II,
F374Y/L335VN158D/M293Q/S314E-F7II,
F374Y/L335V/V15SD/E296V/S314E- -F7II,
F374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A- -F7II,
F374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E- -F7II,
F374Y/L305V/V158T/K337A/S314E- -F7II,
F374Y/V153T/M298Q/K337A/S314E- -FVII,
F374Y/7153T/E2967/K337A/S314E- -FVII,
F374Y/L305V/V153T/E2967/M298Q- -F7II,
PL 207 018 B1
F 3 7 4 Υ / L 3 Ο 5 V / V15 3 Τ / Μ 2 9 3 Q / Κ3 3 7 A - FV11,
F374Y/L305V/VI53T/E296V/K337A-FVII,
F374Y/L3O 5V/V158T/M293Q/S314E-FVII,
F374Y/L30 57/715 3T/E2 9 67/S 314 E-FVI1
F374Y/E2967/M298Q/K337A/VI58T/3314E-F7II,
F374Y/7153D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/3314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M293Q/V158T/S314E-FVII,
F374Y/L3057/E29SV/M293Q/K337A/V158T-F7II, F374Y/L3Q5V/E296V/K337A/V158T/S314E-FVII,
F374Y/L3C5V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII,
F374Y/L305V/V158D/E2967/M298Q/K337A-FVII, F374Y/Ł305V/V153D/E296V/K337A/3314E-FVII,
F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII,
F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/VI58T/S314E-F711,
F374Y/L3u5V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, S52A-czynnik VII, S60A-czynnik VII oraz PI1Q/K33E-FVII, T1Q6N-FVII, KI 43N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315/V317T-FVII, K143N/N145T/R315M/7317T-FVII, FVII mający podstawienia, addycje lub delecje w sekwencji aminokwasowej od 233Thr do 240Asn, FVII mający podstawienia, addycje lub delecje w sekwencji aminokwasowej od 304Arg do 329Cys oraz FVII mający podstawienia, delecje lub addycje w sekwencji aminokwasowej Ilel53-Arg223.
Dla celów wynalazku aktywność biologiczną polipeptydów czynnika VII („aktywność biologiczną czynnika VII) można oznaczyć ilościowo przez zmierzenie zdolności preparatu do przyczyniania się do krzepnięcia krwi z zastosowaniem, osocza z brakiem czynnika VII i z zastosowaniem tromboplastyny, jak to opisano np., w patencie USA nr 5997864. W tym, oznaczeniu aktywność biologiczna jest wyrażona jako zmniejszenie czasu krzepnięcia w porównaniu z próbką kontrolną i jest przekształcona na „jednostki czynnika VII” przez porównanie ze standardem połączonych frakcji ludzkiej surowicy
PL 207 018 B1 zawierających 1 jednostkę/ml aktywności czynnika VII. Inaczej, aktywność biologiczną czynnika VIIa można oznaczyć ilościowo przez:
(i) Mierzenie zdolności czynnika VIIa lub polipeptydu pokrewnego czynnikowi VIIa do wytwarzania aktywowanego czynnika X (czynnik Xa) w układzie zawierającym TF zanurzony w błonie lipidowej oraz czynnik X. (Persson i wsp., J. Biol. Chem. 272:19919-19924, 1997);
(ii) Mierzenie hydrolizy czynnika X w układzie wodnym („oznaczenie proteolizy in vitro, zobacz Przykład 12, poniżej);
(iii) Mierzenie wiązania fizycznego czynnika VIIa lub polipeptydu pokrewnego czynnikowi VIIa do TF przy użyciu instrumentu opartego na rezonansie plazmonów powierzchniowych (Persson, FEBS Letts. 413:359-363, 1997) oraz (iv) Mierzenie hydrolizy syntetycznego substratu przez czynnik VIIa i/lub polipeptyd pokrewny czynnikowi VIIa („oznaczenie hydrolizy in vitro, zobacz Przykład 12, poniżej) oraz (v) Mierzenie wytwarzania trombiny w niezależnym od TF układzie in vitro.
Określenie „aktywność biologiczna czynnika VIIa lub „aktywność czynnika VII ma na celu obejmować zdolność do wytwarzania trombiny; określenie obejmuje także zdolność do wytwarzania trombiny na powierzchni aktywowanych płytek krwi w nieobecności czynnika tkankowego.
P r z y k ł a d 12 niniejszej specyfikacji opisuje szczegółowo oznaczenia użyteczne do oznaczania aktywności biologicznej FVII.
Ponadto, w całej niniejszym opisie wynalazku poniższe określenia mają następujące znaczenia:
Określenie „stabilizowanie ma na celu obejmować minimalizowanie tworzenia się agregatów (nierozpuszczalnych i/lub rozpuszczalnych) i/lub degradacji chemicznej, jak również zapewnianie utrzymania pH i właściwej konformacji białka podczas przechowywania lub wytwarzania kompozycji tak, aby utrzymać zasadnicze zachowanie aktywności biologicznej i stabilności białka. Ponadto, stabilizowanie ma także w domyśle oznaczać ochronę białka podczas liofilizacji oraz w niskich temperaturach podczas wytwarzania kompozycji w warunkach liofilizacji.
Określenie „stabilizacja strukturalna lub „stabilność strukturalna ma na celu obejmować zdolność do tworzenia czopa lub masy liofilizowanej o dobrych właściwościach i wyglądzie, np. takich, że nie zapada się ona i łatwo rozpuszcza się przed użyciem.
Określenie „stabilny podczas przechowywania ma na celu określać produkt, który jest stabilizowany podczas przechowywania w temperaturach pomiędzy 5°C - 40°C i zachowuje wcześniej wybrane właściwości produktu przez odpowiedni okres czasu - często kilka miesięcy.
Określenie „stabilność fizyczna polipeptydów czynnika VII dotyczy tworzenia się nierozpuszczalnych i/lub rozpuszczalnych agregatów w postaci dimerycznej, oligomerycznej i polirerycznej polipeptydów czynnika VII, jak również dowolnych strukturalnych deformacji i denaturacji i cząsteczki.
Określenie „stabilność chemiczna ma na celu dotyczyć tworzenia się dowolnej zmiany chemicznej w polipeptydach czynnika VII podczas przechowywania w stanie rozpuszczonym lub stałym, w warunkach przyspieszonych. Przykładami są hydroliza, deaminacja i utlenienie. W szczególności, aminokwasy zawierające siarkę są podatne na utlenianie z utworzeniem odpowiednich sulfotlenków.
Stosowane tutaj określenie „środki chroniące w niskich temperaturach na ogół obejmuje środki, które zapewniają białku stabilność przed stresami indukowanymi zamrażaniem. Przykłady środków chroniących w niskich temperaturach obejmują poliole, takie jak, na przykład, mannitol, i obejmują sacharydy, takie jak, na przykład, sacharoza, jak również obejmują surfaktanty, takie jak, na przykład, polisorbat, poloksamer lub glikol polietylenowy, itp. Środki chroniące w niskich temperaturach mają także wpływ na toniczność preparatów.
Stosowane tutaj określenie „środki chroniące podczas liofilizacji obejmuje środki, które zapewniają białku stabilność podczas usuwania wody podczas procesu suszenia w procesie liofilizacji. Na przykład, przez utrzymanie właściwej konformacji białka. Przykłady środków chroniących podczas liofilizacji obejmują sacharydy, w szczególności di- lub trisacharydy. Środki chroniące w niskich temperaturach mogą także mieć właściwości środków chroniących podczas liofilizacji.
Określenie „środek odpowiedni dla utrzymywania pH w zakresie 3 do 9 obejmuje te środki, które utrzymują pH roztworu w akceptowalnym zakresie pomiędzy 3,0 a 9,0. Typowymi przykładami środków zdolnych do utrzymywania pH w zakresie 3 do 9 są postać kwasu lub sole kwasu cytrynowego, kwasu octowego, histydyny, kwasu jabłkowego, kwasu fosforowego, kwasu winowego, kwasu bursztynowego, MES, HEPES, PIPES, imidazolu, TRIS, kwasu mlekowego, kwasu glutarowego i glicyloglicyny. Należy rozumieć, że połączenie środków, charakteryzujące się tym, że to połączenie jest odpowiednie dla utrzymania pH w wyżej opisanym zakresie, także można zastosować w niniejszym wynalazku.
PL 207 018 B1
Stosowane tutaj określenie „masa liofilizowana ma w domyśle obejmować stałą kompozycję uzyskaną podczas przetwarzania rozpuszczonej lub przynajmniej częściowo rozpuszczonej kompozycji w warunkach obejmujących przynajmniej jeden etap schładzania tej rozpuszczonej/częściowo rozpuszczonej kompozycji do postaci lodu, a następnie przynajmniej jeden etap suszenia w próżni.
Określenie „liofilizacja i „suszenie sublimacyjne obejmuje proces, podczas którego usuwana jest ciecz z rozpuszczonej lub przynajmniej częściowo rozpuszczonej kompozycji w warunkach obejmujących przynajmniej jeden etap schładzania rozpuszczonego lub częściowo rozpuszczonego roztworu do postaci lodu, a następnie suszenia w próżni. Liofilizacja lub suszenie sublimacyjne jest najpowszechniejszym procesem, wytwarzania stałych białkowych preparatów farmaceutycznych. Proces ten składa się z dwóch głównych etapów: zamrażania roztworu białka oraz suszenia zamrożonego ciała stałego w próżni. Etap suszenia jest dalej podzielony na dwie fazy: suszenie pierwotne i wtórne. Pierwotne suszenie usuwa zamrożoną wodę (sublimacja lodu), a suszenie wtórne usuwa niezamrożoną „związaną wodę (desorpcja wody). Bardziej szczegółowa analiza każdego etapu liofilizacji podana jest w np. Wang i wsp. International Journal of Pharmaceuticals 203 (2000): 1-60 (zobacz rozdział 4, strona 16 i dalej).
Typowo, kompozycja jest suszona sublimacyjnie przez napełnienie fiolek, zamrażanie na półkach liofilizatora, po czym ustala się próżnię, a półki ogrzewa w celu przeprowadzenia suszenia pierwotnego (lub sublimacji lodu). Następnie ma miejsce suszenie wtórne (lub desorpcja zaadsorbowanej wody) w wyższej temperaturze do czasu zakończenia procesu, tj. dopóki kompozycja nie będzie miała wystarczająco niskiej zawartości wilgoci (wody). Sposoby suszenia sublimacyjnego są na ogół znane w tej dziedzinie, zobacz, na przykład, Wang i wsp., International Journal of Pharmaceutics 203 (2000):1-60. W ramach zwykłych umiejętności specjalisty w tej dziedzinie le ży optymalizacja dla specyficznej kompozycji warunków liofilizacji ze względu na temperaturę(y), czas(y) w każdej temperaturze, a także ciśnienie, które należy zastosować podczas procesu.
Określenie „zawartość wilgoci ma w domyśle obejmować wodę związaną z produktem, włączając w to, ale nie ograniczając się do, wody w postaci zaadsorbowanej, takiej jak woda niezamrożona uwięziona wewnątrz lub zaadsorbowana przez zamrożoną fazę stałą i/lub związana z fazą amorficzną lub zaadsorbowana w krystalicznym ciele stałym. Określenie „zawartość wody stosowane jest zamiennie z „zawartością wilgoci. Pożądany poziom resztkowej wilgoci (zawartość wilgoci) jest funkcją czasu trwania i temperatury etapu suszenia wtórnego. Znanych jest w tej dziedzinie kilka sposobów określania wilgoci resztkowej podczas liofilizacji; na przykład można zastosować elektroniczny higrometr lub analizator gazu resztkowego. Zawartość wilgoci preparatów liofilizowanych można określić kilkoma sposobami znanymi w tej dziedzinie, takimi jak, ubytek wagi podczas suszenia, miareczkowanie Karla Fischera, termiczna analiza wagowa (TGA, ang. thermal gravimetric analysis), chromatografia gazowa (GC, ang. gaschromatography) lub bliska IR (zobacz, np. Wang i wsp., International Journal of Pharmaceutics 203 (2000):1-60). Sposoby określania zawartości wody (zawartości wilgoci) zostały także opisane zarówno w Farmakopei Europejskiej, jak i USA. Na przykład, określenie zawartości wody można przeprowadzić przy użyciu miareczkowania kulometrycznego Karla Fischera, jak to opisano w Farmakopei USA (USP <921, Ic>) lub w Farmakopei Europejskiej (EP <2.5.32>).
W skrócie, tymi sposobami są :
Określanie zawartości wody przy użyciu miareczkowania kulometrycznego: W kulometrycznym określaniu zawartości wody stosowana jest reakcja Karla Fischera, które to określanie oparte jest na ilościowej reakcji wody z dwutlenkiem siarki i jodem w środowisku bezwodnym. Jod wytwarzany jest elektrochemicznie w komorze reakcyjnej przez utlenienie jodku. Jod wytwarzany na anodzie reaguje natychmiast z wodą i dwutlenkiem siarki zawartymi w komorze reakcyjnej. Ilość wody w substancji jest bezpośrednio proporcjonalna do ilości ładunku elektrycznego, który przepłynął do momentu osiągnięcia punktu końcowego miareczkowania. Kiedy cała woda w komorze reakcyjnej została zużyta, osiągnięty zostaje punkt końcowy, a zatem pojawia się nadmiar jodu, który wyrywa się elektrometrycznie oznaczając w ten sposób punkt końcowy. Następnie oblicza się procentową zawartość wody obecnej w substancji.
Zawartość wilgoci można określić przeliczywszy to na wagę próbki w fiolce w czasie analizy (tj. ciało stałe plus obecna woda zwane podstawą wagi wilgotnej próbki) lub można określić w takich kategoriach, gdzie bierze się poprawkę na zmierzoną wodę w próbce (tj. podstawa wagi suchej próbki). W przypadku produktów liofilizowanych o niskiej zawartoś ci wilgoci te dwa pomiary (podstawa wagi wilgotnej próbki kontra podstawa wagi suchej próbki) dają w rezultacie bardzo podobne wyniki.
PL 207 018 B1
Stosowana tutaj definicja zawartości wilgoci jest określona jako ciało stałe plus obecna woda (tj. podstawa wagi wilgotnej próbki).
Określenie „środek zwiększający objętość na ogół obejmuje środki, które zapewniają dobre właściwości masy liofilizowanej, które dają w rezultacie farmaceutycznie udany produkt, które pomagają przezwyciężyć białku różne stresy, na przykład wstrząsania/zamrażania, związane z procesami liofilizacji, i które pomagają utrzymać poziom aktywności białka podczas procesu suszenia sublimacyjnego, a następnie przechowywania. Typowe przykłady środków zwiększających objętość obejmują mannitol, glicynę, sacharozę, laktozę. Te środki mogą także przyczyniać się do toniczności preparatów.
Określenie „środek modyfikujący toniczność ma w domyśle oznaczać dowolny środek zdolny do dostosowania toniczności kompozycji tak, aby podczas rozpuszczania kompozycji w czasie użycia kompozycja miała toniczność w fizjologicznym zakresie krwi, płynu otrzewnowego lub innych odpowiednich płynów ciała. Oczywiście, toniczność może także zależeć od tego, czy wytwarzany roztwór zawiera środki modyfikujące toniczność.
Określenie „surfaktanty na ogół obejmuje te środki, które chronią białko przed stresami indukowanymi na styku powietrze/powierzchnia roztworu i stresami indukowanymi na styku roztwór/powierzchnia. Na przykład surfaktanty mogą chronić białko przed agregacją. Odpowiednie surfaktanty mogą obejmować np. polisorbaty, etery alkilowe polioksyetylenu, takie jak Brij 35®, lub poloksamer, taki jak Tween 20, Tween 80 lub Poloksamer 138. Korzystnymi detergentami są poloksamery, np. Poloksamer 188, Poloksamer 407; etery alkilowe polioksyetylenu, np. Brij 35®, Cremophor A25, Sympatens ALM/230; oraz polisorbaty/Tweeny, np. Polisorbat 28, Polisorbat 80. Korzystniejsze są poloksamery, np. Poloksamer 188 i Tweeny, np. Tween 20 i Tween 80.
Określenie „zawartość początkowa dotyczy ilości polipeptydów czynnika VII dodanych do kompozycji w czasie jej przygotowania. Stężenie tutaj podawane (mg/ml) odnosi się albo do stężenia polipeptydu czynnika VII w roztworze przed usunięciem wilgoci np. przed suszeniem sublimacyjnym) lub w wytworzonej ponownie kompozycji, albo jest okreś lone jako % w/w, który wtedy dotyczy stężenia w stał ej kompozycji, np. masie liofilizowanej.
Stosowane tutaj wyszczególnione ilości należy rozumieć jako ± około 10%; zatem około 50 mM obejmuje 50 mM ± 5 mM, 4% obejmuje 4% ± 0,4%, itp.
Jak to stwierdzono powyżej, niniejsi wynalazcy istotnie zasłużyli się w tej dziedzinie przez stabilizowanie polipeptydów czynnika VII, pozwalając tym samym na ich długoterminowe przechowywanie bez powodowania zwiększonego ryzyka i niedogodności dla użytkownika.
Niniejsi wynalazcy odkryli, że należy dostosować szereg parametrów krytycznych przy stabilizowaniu polipeptydów czynnika VII. Jeden z ważnych parametrów dotyczy, przynajmniej częściowo, zawartości wilgoci, np. wody. Zawartość wilgoci powinna być ograniczona. Jako kolejny istotny parametr, kompozycja powinna zawierać przynajmniej jeden czynnik stabilizujący. Według niniejszego wynalazku właściwy czynnik stabilizujący obejmuje połączenie przynajmniej dwóch grup akceptowalnych farmaceutycznie zaróbek wybranych z grupy składającej się z przeciwutleniaczy, sacharydów i polioli. Sacharydy i poliole mają właściwoś ci chroniące podczas liofilizacji i/lub w niskich temperaturach, które mogą być ważne, przynajmniej częściowo, w przypadku, gdy kompozycja jest liofilizowana. Na ogół, polepszoną stabilność można osiągnąć, częściowo, przez właściwe połączenie przynajmniej dwóch zaróbek z tej grupy. Jednak, bardziej szczegółowo, odkryto, że kiedy to połączenie obejmuje sacharyd (sacharozę) lub przeciwutleniacz (metioninę), efekt stabilizacyjny może być jeszcze bardziej znaczący. Ponadto, nieoczekiwanie także odkryto, że metionina zapobiega degradacji oksydatywnej polipeptydów czynnika VII.
Stąd, w pierwszym aspekcie wynalazek dotyczy kompozycji zawierającej polipeptyd czynnika VII i przynajmniej jeden czynnik stabilizacyjny wybrany z grupy skł adają cej się z
a) połączenia przeciwutleniacza i mannioolu;
b) połączenia metioniny i poliolu;
c) połączenia sacharydu i mannitolu;
d) połączenia sacharozy i poliolu oraz
e) metioniny, przy czym ta kompozycja ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3%.
To oznacza, że jedno z wykonań wynalazku obejmuje połączenie przeciwutleniacza i mannitolu; drugie z wykonań obejmuje połączenie metioniny i poliolu; inne z wykonań obejmuje połączenie sacharydu i mannitolu; w jeszcze innym, wykonaniu kompozycja obejmuje połączenie sacharozy i poliolu i wreszcie w innym odpowiednim wykonaniu kompozycja obejmuje metioninę.
PL 207 018 B1
Jak stwierdzono, środek stabilizujący według wynalazku obejmuje połączenie przynajmniej dwóch grup z akceptowalnych farmaceutycznie zaróbek. W odpowiednich jego wykonaniach środek stabilizujący obejmuje dalej trzecią grupę zaróbek. Stąd, w jednym z wykonań połączenie przeciwutleniacza i mannitolu obejmuje jeszcze sacharyd. W drugim jego wykonaniu połączenie metioniny i poliolu obejmuje dalej sacharyd. W bardziej interesującym wykonaniu połączenie sacharydu i mannitolu obejmuje jeszcze przeciwutleniacz, a połączenie sacharozy i poliolu obejmuje jeszcze przeciwutleniacz. W jednym z wykonań kompozycja według wynalazku zawiera mannitol i sacharozę; w innym wykonaniu kompozycja zawiera mannitol, sacharozę i metioninę; w innym wynalazku kompozycja zawiera mannitol i trehalozę; w innym wykonaniu kompozycja zawiera mannitol, trehalozę i metioninę.
Według wynalazku polipeptyd czynnika VII ma w domyśle obejmować polipeptydy opisane powyżej. W odpowiednich wykonaniach wynalazku polipeptyd czynnika VII jest wybrany z grupy składającej się z ludzkiego czynnika Vlla, rekombinowanego ludzkiego czynnika VIIa i wariantu sekwencji czynnika VII. Korzystnie polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa lub rekombinowanym ludzkim, czynnikiem VIIa lub polipeptydem pokrewnym czynnikowi VII, gdzie stosunek pomiędzy aktywnością tego polipeptydu pokrewnego czynnikowi VII a czynnika VII dzikiego typu wynosi przynajmniej 1,25 podczas testowania w jednym lub więcej z „oznaczeń preoteolizy in vitro oraz „oznaczeń hydrolizy in vitro, jak to opisano w niniejszej specyfikacji.
Jak to stwierdzono, zawartość wilgoci powinna być ograniczona. Dla celów niniejszego wynalazku polipeptydy czynnika VII, kiedy są dostarczane jako duża porcja, można dostarczyć w postaci stałej lub ciekłej. Jednak, typowo polipeptydy czynnika VII, kiedy są dostarczane jako duża porcja, są dostarczane w postaci ciekłej. Zatem, dalsza obróbka dużej porcji białek w celu wytworzenia kompozycji wymaga etapów dodawania odpowiednich zaróbek i usuwania cieczy z dużej porcji, przy czym to dodanie zaróbek można przeprowadzić przed lub po usunięciu cieczy. Jeden z takich sposobów usuwania cieczy z białka dotyczy liofilizacji. Dlatego w korzystnym wykonaniu niniejszego wynalazku kompozycja jest w postaci masy liofilizowanej. Jednak, niniejszy wynalazek nie wyklucza innych procesów usuwania cieczy z dużej porcji polipeptydu, aby uzyskać stałą kompozycję o zawartości wilgoci nie większej niż około 3% w/w.
Ponadto, według wynalazku zawartość wilgoci wynosi korzystnie nie więcej niż około 2,5% w/w, korzystnie nie więcej niż około 2%, najkorzystniej nie więcej niż około 1,5% w/w.
Jak można zrozumieć, wynalazek dotyczy, częściowo, ograniczenia degradacji polipeptydów czynnika VII podczas przygotowania, np. podczas pomieszania zaróbek i usuwanie cieczy tak, aby uzyskać stałą kompozycję o zawartości wilgoci najwyżej 3% w/w, i ograniczenia tej degradacji od czasu wytworzenia stałej kompozycji do czasu jej użycia, np. do czasu, kiedy kompozycja ma być podana pacjentowi.
Dlatego, jako jeszcze dalszy parametr w stabilizowaniu kompozycji zawierających polipeptydy czynnika VII, pH powinno zostać utrzymywane w zakresie pomiędzy 3 a 9 podczas rozpuszczania w rozpuszczalniku wodnym, takim jak, np. czysta woda lub wodny bufor. Oznacza to, ż e pH w roztworze polipeptydu w czasie przed usunięciem zawartości wilgoci, np. przed liofilizacją, powinno być utrzymywane w zakresie pH około 3 do około 9. Korzystnie, zakres pH mieści się także w pożądanym fizjologicznym zakresie, nie powodując w ten sposób szkody użytkownikowi po podaniu kompozycji sposobami poza jelitowymi. Korzystnie pH roztworu wynosi od około 4,0 do około 9,0, tak jak 4,0 do 3,0, 4,0 do 7,5, 4,0 do 7,0, 4,5 do 7,0, 4,5 do 6,8, 4,5 do 6,5, 5,0 do 7,0, 5,0 do 6,5, 5,0 do 6,0, 5,5 do 6,5 lub około 5,5 do około 6,0, tak jak około 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9 lub 6,0.
Stąd, interesujące wykonania wynalazku obejmują środek odpowiedni do utrzymywania pH tej kompozycji w zakresie 3 do 9 podczas rozpuszczania w roztworze wodnym (np. wodzie). Odpowiednio, w odpowiednich jego wykonaniach środek odpowiedni do utrzymywania pH w zakresie 3 do 9 jest wybrany z grupy składającej się z kwasu lub soli kwasu cytrynowego, kwasu octowego, histydyny, kwasu jabłkowego, kwasu fosforowego, kwasu winowego, kwasu bursztynowego, MES, HEPES, imidazolu, TRIS, kwasu mlekowego, kwasu glutarowego, PIPES i glicyloglicyny.
Ponadto, odpowiedni środek do utrzymywania pH w zakresie 3 do 9 może także być mieszaniną przynajmniej dwóch takich wymienionych środków, gdzie mieszanina jest zdolna zapewnić wartość pH w wyszczególnionym zakresie. Stężenie odpowiednich czynników jest w zakresie od około 0,1 mM do 100 mM; od około 0,2 mM do 50 mM; od około 0,5 mM do 25 mM; od około 1 mM do 20 mM lub od około 1 mM do 10 mM.
Jak można zobaczyć z Przykładu 5 i 6, niniejsi wynalazcy dostarczyli kompozycję o niskiej zawartości postaci utlenionych i agregatów po zakończeniu procesu wytwarzania, tj. po zakończeniu
PL 207 018 B1 procesu liofilizacji, przez połączenie właściwych ilości mannitolu (poliolu), sacharozy (sacharydu) i przeciwutleniacza (metioniny). Zatem, kompozycje wedł ug wynalazku charakteryzują się niską początkową zawartością postaci utlenionych i agregatów przed poddaniem ich przechowywaniu.
Degradacja polipeptydu czynnika VII na drodze utleniania, jak również na drodze agregacji, jest wrażliwym, parametrem, stabilności.
Typowo, kompozycje stabilizuje się po zakończeniu liofilizacji tak, aby mniej niż 5% w/w, tak jak mniej niż 4, 3 lub 2% w/w, początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII było przekształcone w swoje postacie utlenione. Początkowa zawartość tego polipeptydu czynnika VII jest ilością dodaną do kompozycji po przygotowaniu kompozycji przed etapem, liofilizacji. Ponadto, mniej niż 5% w/w, tak jak mniej niż 4,0%, 3,0%, 2,5%, 1,5% lub mniej niż 1% w/w, początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII odzyskuje się jako postacie agregatów, jak to określono konwencjonalnymi sposobami analitycznymi (takimi jak, na przykład, te opisane w Przykładach niniejszego wniosku).
Niniejsi wynalazcy odkryli, że dalsza degradacja (tj. liczona od czasu zakończenia procesu wytwarzania do 3 miesięcy przechowywania w 30°C) polipeptydu czynnika VII jest minimalna podczas przechowywania w warunkach otoczenia. Jak można zobaczyć z Przykładu 5, podczas przechowywania w 30°C przez 8 miesięcy wzrost jest taki, że mniej niż 10% w/w początkowej zawartości polipeptydów czynnika VII jest odzyskiwanych jako postacie utlenione polipeptydów czynnika VII oprócz zawartości tych postaci utlenionych obecnych w czasie zakończenia liofilizacji. Bardzo ważne jest odkrycie, że kompozycję zawierające przeciwutleniacz (metioninę) są bardziej stabilne na degradację oksydatywną polipeptydu czynnika VII.
Dlatego, według niniejszego wynalazku odpowiednie kompozycje wykazują ograniczony wzrost zawartości postaci utlenionych podczas przechowywania przez przynajmniej 3 miesięcy w warunkach otoczenia. Oznacza to, że w jeszcze bardziej interesujących wykonaniach kompozycja jest stabilna tak, że nie więcej niż około 6% w/w początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest dodatkowo degradowanych do postaci utlenionych podczas przechowywania kompozycji przez 3 miesięcy w 30°C po zakoń czeniu procesu wytwarzania, np. procesu liofilizacji. W dalszych odpowiednich jego wykonaniach nie więcej niż około 5, 4, 3, 2 lub 1,5% w/w polipeptydu czynnika VII jest dodatkowo przekształcanych do postaci utlenionych, jak to obliczono od czasu zakończenia procesu wytwarzania do 8 miesięcy przechowywania w 30°C. W tych wykonaniach wynalazku kompozycje są stabilne tak, że nie więcej niż około 5% (4, 3, 2 lub 1,5%) w/w początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do postaci utlenionych podczas przechowywania tej kompozycji w 30°C przez 3 miesięcy. Jak stwierdzono powyżej, początkowa zawartość dotyczy ilości polipeptydu czynnika VII dodanej do kompozycji podczas przygotowania kompozycji przed etapem liofilizacji.
Jak wskazano, degradacja polipeptydów czynnika VII na drodze agregacji może także być uważana za istotny parametr wskazujący na stabilność. Niniejsi wynalazcy odkryli, że dalsza degradacja tj. liczona od czasu zakończenia procesu wytwarzania do 3 miesięcy przechowywania w 30°C) polipeptydu czynnika VII jest minimalna podczas przechowywania w warunkach otoczenia. Jak można zobaczyć z Przykładu 6, nie więcej niż około 5% w/w, tak jak nie więcej niż około 4, 3, 2,5, 2,0, 1,5 lub 1% w/w, zawartości polipeptydu czynnika VII jest dodatkowo odzyskiwanych jako agregaty podczas przechowywania przez 3 miesięcy w 30°C. Również bardzo ważne jest odkrycie, że kompozycje zawierające sacharyd (sacharozę) są bardziej stabilne na tworzenie agregatów.
Zatem, interesujące wykonania wynalazku dotyczą kompozycji farmaceutycznych, które są stabilne tak, że nie więcej niż około 5% w/w początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do agregatów podczas przechowywania tej kompozycji w 30°C przez 8 miesięcy. Jak stwierdzono powyżej, początkowa zawartość tego polipeptydu czynnika VII jest ilością dodaną do kompozycji podczas przechowywania kompozycji przed etapem liofilizacji. Przez właściwą optymalizację, przynajmniej częściowo, zawartości sacharydów, polioli i przeciwutleniaczy kompozycja farmaceutyczna jest stabilna tak, że nie więcej niż około 4,0%, 3,0% w/w, tak jak 2,5, 2,0, 1,5 lub 1,0% w/w, początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcana do agregatów podczas przechowywania tej kompozycji w 30°C przez 8 miesięcy.
Zatem, korzystnie, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mają niską zawartość postaci utlenionych i agregatów po zakończeniu procesu wytwarzania, tj. po zakończeniu procesu liofilizacji, a zatem kompozycje według wynalazku charakteryzują się posiadaniem niskiej zawartoś ci postaci utlenionych i agregatów przed poddaniem przechowywaniu, np. nie więcej niż około 5% w/w, tak jak 4%, 3% lub 2% w/w, początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do postaci utlenionej i mniej niż 5% w/w, tak jak nie więcej niż około 4,0%, 3,0%, 2,5%, 2%, 1,5% lub nie
PL 207 018 B1 więcej niż około 1% w/w, jest przekształcanych w postać dimeryczną lub polimeryczną wyższego rzędu po zakończeniu procesu wytwarzania.
Ponadto, i korzystnie, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku są stabilne podczas przechowywania, np. mniej niż 10% w/w, tak jak 6%, 5%, 4%, 3%, 2% lub 1,5% w/w, początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do postaci utlenionej i mniej niż 5% w/w, tak jak 4%, 3%, 2,5%, 2%, 1,5% lub 1% w/w, jest przekształcanych do postaci dimerycznej lub polimerycznej wyższego rzędu podczas przechowywania w 30°C przez przynajmniej 8 miesięcy w ciemności.
Jak wspomniano, ta polepszona stabilność dotyczy właściwego połączenia poszczególnych zaróbek. Według niniejszego wynalazku zaróbki powinny być wybrane z grupy sacharydów, polioli i przeciwutleniaczy, w tym sacharydy i poliole powinny wykazywać właściwoś ci chroniące podczas liofilizacji i/lub w niskich temperaturach. Bardziej szczegółowo, w odpowiednich wykonaniach według wynalazku sacharydy będące przedmiotami zainteresowania są di- i trisacharydami oraz polisacharydami tak, że te sacharydy mogą być wybrane z grupy składającej się z sacharozy, dekstrozy, laktozy, maltozy, trehalozy, cyklodekstryn, maltodekstryn i dekstranów. Ponadto, w niektórych wykonaniach poliol jest wybrany z grupy składającej się z mannitolu, sorbitolu i ksylitolu. W bardziej interesujących wykonaniach przeciwutleniacz jest wybrany z grupy składającej się z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny, glutationu i peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, metioniny i glutationu.
Rozumie się, że zaróbki, odpowiednio, z sacharydem i poliolem mogą także być mieszaniną przynajmniej dwóch takich wymienionych czynników. W jednej z serii wykonań wynalazku stosowana zaróbka z sacharydem jest połączeniem, przynajmniej dwóch di-, tri- i/lub polisacharydów, takich jak, na przykład, sacharoza w połączeniu z cyklodekstryną, trehaloza w połączeniu z cyklodekstryną, sacharoza w połączeniu z dekstranem, lub sacharoza w połączeniu z laktozą. W jednej z serii wykonań wynalazku stosowana zaróbka z poliolem jest połączeniem przynajmniej dwóch polioli, takich jak, na przykład, mannitol w połączeniu z sorbitolem, mannitol w połączeniu z ksylitolem lub sorbitol w połączeniu z ksylitolem. W jednej z serii wykonań wynalazku stosowana zaróbka z przeciwutleniaczem jest połączeniem, przynajmniej dwóch przeciwutleniaczy, takich jak, na przykład, metionina w połączeniu z jednym, lub wię cej spoś ród homocysteiny, cysteiny, cyscationiny, glutationu i peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, cyscationiny, raetioniny i glutationu.
Niniejsi wynalazcy odkryli właściwe połączenie polioli i sacharydów, jak również ich zawartość tak, aby, przynajmniej częściowo, uzyskać korzystną stabilność.
Stąd, w pewnych interesujących wykonaniach wynalazku, poliole powinny być obecne w ilości wahającej się od około 5% w/w do około 90% w/w. Korzystnie, ilość poliolu powinna mieścić się w zakresie od około 18% w/w do około 83% w/w, tak jak od około 18% w/w do około 83% w/w, 25% do 80%, 30% do 65%, 30% do 80%, 40% do 80%, 50% do 80%, 30% do 75%, 40% do 75%, 50% do 75% lub od około 50% do około 70% w/w.
Poliol powinien być obecny w ilości wahającej się od około 0,5 do 75 mg/ml, tak jak od około 2 do 60 mg/ml, 5 mg/ml do 55 mg/ml, 8 do 45 mg/ml, 10 do 40 mg/ml, 10 do 30 mg/ml lub od około 2 do 45 mg/ml, 5 mg/ml do 45 mg/ml, 5 do 35 mg/ml, 5 do 25 mg/ml, 5 do 20 mg/ml, 20 do 40 mg/ml lub tak jak od około 20 do 30 mg/ml.
Ponadto, w interesujących jego wykonaniach, jak również w pewnych innych interesujących wykonaniach wynalazku, sacharyd powinien być obecny w kompozycji w ilości wahającej się od około 0 do okoł o 35% w/w. W dalszych interesują cych jego wykonaniach ilość waha się od okoł o 3% w/w do około 80% w/w, tak jak od około 7% w/w do około 75% w/w, 10% do 70%, 10% do 50%, 20% do 50%, 10% do 40% lub od około 10% w/w do około 35% w/w.
Sacharyd powinien być obecny w ilości wahającej się od około 0,5 do 75 mg/ml, tak jak od około 2 do 60 mg/ml, od około 5 mg/ml do 55 mg/ml, od około 3 do 45 mg/ml, od około 10 do 40 mg/ml, od około 10 do 30 mg/ml lub od około 2 do 45 mg/ml, od około 5 mg/ml do 45 mg/ml, od około 5 do 35 mg/ml, od około 5 do 25 mg/ml, tak jak od około 5 do 20 mg/ml.
Ponadto, niniejsi wynalazcy odkryli, że właściwe ilości przeciwutleniaczy powinny się wahać pomiędzy od około 0,05 do 10 mg/ml, tak jak od około 0,1 do 5 mg/ml, 0,1 do 5 mg/ml, 0,1 do 5 mg/ml, 0,1 mg/ml do 2,5 mg/ml, 0,1 do 2 mg/ml lub od około 0,1 do 1 mg/ml.
Ważne jest to, że stosunek pomiędzy poliolem i sacharydem musi być właściwie dobrany. W odpowiednich wykonaniach wynalazku ten poliol jest w stosunku wagowym względem tego sacharydu wahającym się od około 100:1 do 1:50. W jeszcze bardziej odpowiednich jego wykonaniach ten stosunek wagowy wynosi od około 50:1 do 1:10, korzystniej od około 20:1 do 1:5. W innych odpowiedPL 207 018 B1 nich wykonaniach stosunek wagowy dotyczy zakresu od około 10:1 do 1:2 oraz od około 6:1 do 1:2. Jednak, jak odkryli niniejsi wynalazcy (zobacz Przykład 5), masa liofilizowana zapadała się po wprowadzeniu wyższych ilości sacharydów. W związku z tym, bardzo odpowiednie wykonania dotyczą tych, gdzie ta pochodna alkoholowa cukru jest w stosunku wagowym względem, tego sacharydu wahającym, się od około 4:1 do 1:1, tak jak od około 4:1 do 3:2 lub od około 1:1 do 3:2.
W pewnych wykonaniach wynalazku, poliol jest mannitolem, a w jeszcze dalszych wykonaniach sacharyd jest sacharozą. Ponadto, w jeszcze dalszych wykonaniach przeciwutleniacz jest metionina.
Kompozycje farmaceutyczne mogą ponadto być odpowiednio przygotowane w postaci preparatu przez wprowadzenie innych akceptowalnych farmaceutycznie zaróbek tak, aby uzyskać kompozycje akceptowalne do podania pozajelitowego, w szczególności do podania dożylnego. Faktyczne sposoby do przygotowania kompozycji do podania pozajelitowego będą znane lub oczywiste dla specjalistów w tej dziedzinie i są opisane bardziej szczegółowo na przykład w Remington: The Science and Practice of Pharmacy, wyd. 19-te, Mack Publishing Company, Easton, PA (1995). Określenie „zaróbki obejmuje odczynniki akceptowalne farmaceutycznie w celu zapewnienia dobrych właściwości masy liofilizowanej (czynniki zwiększające objętość), jak również zapewnienia właściwej konformacji białka podczas przechowywania tak, aby nastąpiło zasadnicze zachowanie aktywności biologicznej i stabilności białka.
Zatem, według wynalazku, kompozycje farmaceutyczne zawierają ponadto środek modyfikujący toniczność. Środek modyfikujący toniczność może być wybrany z grupy składającej się z octanu sodu, mleczanu sodu, cnlorku sodu, chlorku potasu i chlorku wapnia. Jednak, nie wyklucza się innych odpowiednich środków modyfikujących toniczność. Należy także zauważyć, że kompozycje mogą zawierać dużo większe stężenia środka modyfikującego toniczność, dopóki kompozycja pozostaje izotoniczna lub bliska izotonicznej przed użyciem (np. nieznacznie hipertoniczna lub hipotoniczna), na przykład duże porcje kompozycji nie muszą być izotoniczne w zakresie fizjologicznym.
Dalszą stabilność kompozycji zawierającej polipeptyd czynnika VII można uzyskać przez dodanie surfaktantów. Zatem, we wciąż interesujących wykonaniach wynalazku kompozycje zawierają ponadto surfaktant, przy czym surfaktant jest wybrany spośród grupy składającej się z polisorbatów, np. Tween®, takich jak Polisorbat 20 lub 80; etery alkilowe polioksyetylenu, np. eter laurylowy polioksylu 23 (Brij 35®) lub poloksamery, takie jak Poloksamer 188( np. Pluronic®) lub Poloksamer 407 (np. Lutrol®) i inne polimery blokowe etylenu/polipropylenu, polietylenoglikole (PEG), takie jak PEG8000 lub [luka] Typowo, surfaktanty dodaje się w ilości od 0,005 do 5 mg/ml. Korzystne ilości wynoszą od 0,01 do 3 mg/ml, korzystniej od 0,01 do 0,3 mg/ml dla Tween 20 i/lub Tween 80 i od 0,05 do 3,0 mg/ml dla Poloksameru 188.
We wciąż korzystnych wykonaniach wynalazku kompozycja zawiera ponadto inne farmaceutyczne zaróbki działające jako środki zwiększające objętość. Oznacza to, że środki zwiększające objętość inne niż mannitol są włączone do kompozycji. W szczególności, środki zwiększające objętość są włączone do kompozycji przygotowanych przy użyciu liofilizacji.
Początkowa zawartość polipeptydu czynnika VII w kompozycji wynosi korzystnie od około 0,6 mg/ml do około 5 mg/ml lub od około 0,6 mg/ml do około 4 mg/ml.
W jednym, z wykonań kompozycja farmaceutyczna zostaje rozpuszczona w wodzie zawiera: polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę i Tween 80, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie od 5,0 do 7,0. W jednym z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub wię cej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym, z wykonań polipeptydem czynnika VII jest ludzki czynnik VIla.
W jednym z wykonań kompozycja zawiera: polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę, metioninę i Tween 80, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0, kiedy kompozycja zostaje rozpuszczona w wodzie. W jednym, z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym z wykonań polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIla.
W innym wykonaniu kompozycja zawiera polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę, histydynę i Tween 80, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0, kiedy kompozycja zostaje rozpuszczona w wodzie. W jednym z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicynoglicyny. W jednym z wykonań polipeptydem czynnika VII jest ludzki czynnik VIIa.
W jednym, z wykonań kompozycja farmaceutyczna kiedy jest rozpuszczana w wodzie zawiera polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę, metioninę, hiscydynę i Tween 80, ma zawartość wilgoci
PL 207 018 B1 nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0. W jednym z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym z wykonań polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa.
W innym wykonaniu kompozycja farmaceutyczna zawiera polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharoza i Poloksamer 188, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0, kiedy kompozycja zostaje rozpuszczona w wodzie. W jednym, z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym z wykonań polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa.
W innym wykonaniu kompozycja farmaceutyczna zawiera polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę, metioninę i Poloksamer 188, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0, kiedy kompozycja zostaje rozpuszczona w wodzie. W jednym z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym z wykonań polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa.
W innym wykonaniu kompozycja farmaceutyczna zawiera polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę, histydynę i Poloksamer 188, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0, kiedy kompozycja zostaje rozpuszczona w wodzie. W jednym z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranycń z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym z wykonań polipepcyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa.
W innym wykonaniu kompozycja farmaceutyczna zawiera polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę, histydynę, metioninę i Poloksamer 188, ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3% i ma pH w zakresie 5,0 do 7,0, kiedy kompozycja zostaje rozpuszczona w wodzie. W jednym, z wykonań kompozycja zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny. W jednym z wykonań polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIla.
W dalszych wykonaniach kompozycje są takie, jak pokazano w Tabeli A poniżej.
T a b e l a A
Związek Preparat A Preparat B Preparat C Preparat D
polipeptyd FVII 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml
CaCl2 x 2H2O 5 do 20 mM 5 do 20 mM 5 do 20 mM 5 do 20 mM
NaCl 0 - 50 mM 0 - 50 mM 0 - 50 mM 0 -50 mM
glicyloglicyna 0 - 15 mM 0 - 15 mM 0 - 15 mM 0 - 15 mM
L-histydyna 0 - 20 mM 0 - 20 mM 0 - 20 mM 0 - 20 mM
mannitol 20 - 40 mg/ml 20 - 40 mg/ml 20 - 40 mg/ml 20 - 40 mg/ml
sacharoza 5 do 20 mg/ml - - 5 do 20 mg/ml
metionina 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml
polisorbat 80 0,05 do 0,15 mg/ml 0,05 do 0,15 do mg/ml
poloksamer 188 - - 0,5 - 3 mg/ml 0,5 do 3 mg/ml
pH 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0
W dalszych wykonaniach kompozycję są takie, jak pokazano w Tabeli B poniżej.
T a b e l a B
Związek Preparat E Preparat F Preparat G Preparat H
1 2 3 4 5
polipeptyd FVII 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
CaCl2 x 2H2O 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
NaCl 39 mM 39 mM 39 mM 39 mM
glicyloglicyna 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
mannitol 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml
sacharoza 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
PL 207 018 B1 cd. tabeli B
1 2 3 4 5
metionina 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml
polisorbat 80 0,1 mg/ml - 0,1 mg/ml -
poloksamer 188 - 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
L-histydyna - - 10 mM 10 mM
pH 6,0 6,0 6,0 0,6
Tabela B (ciąg dalszy)
Związek Preparat I Preparat J Preparat K Preparat L
polipeptyd FVII 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
CaCl2 x 2H2O 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
NaCl 39 mM 39 mM 39 mM 39 mM
glicyloglicyna 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
mannitol 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml
sacharoza 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml
metionina - - - -
polisorbat 80 0,1 mg/ml - 0,1 mg/ml -
poloksamer 188 - 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml
L-histydyna - - 10 mM 10 mM
pH 6,0 6,0 6,0 6,0
W dalszych wykonaniach E1-L1 kompozycje zawierają zaróbki zawierają zaróbki przygotowane przy i ich ilości wymienione w tabeli B, ale są przygotowane przy pH 5,9.
W dalszych wykonaniach E2-L2 kompozycje i ich ilości wymienione w Tabeli B, ale są przygotowane przy pH 5,3.
W dalszych wykonaniach E3-L3 kompozycje zawierają zaróbki i ich ilości wymienione w Tabeli B, ale są przygotowane przy pH 5,7.
W dalszych wykonaniach E4-L4 kompozycje zawierają zaróbki i ich ilości wymienione w Tabeli B, ale są przygotowane przy pH 5,5.
W dalszych wykonaniach E5-L5 kompozycje zawierają zaróbki i ich ilości wymienione w Tabeli B, ale są przygotowane przy pH 5,6.
Jak to dyskutowano powyżej, niniejsi wynalazcy dostarczyli sposobu stabilizowania polipeptydów czynnika VII przez dostarczenie białek w stałych kompozycjach zawierających wybrane akceptowalne farmaceutycznie zaróbki, w których istotne jest, aby zawierały środek stabilizujący. Według wynalazku, taki środek stabilizujący składa się z połączenia zaróbek z przynajmniej dwóch grup wybranych z zaróbek będących sacharydami, poliolami lub przeciwutleniaczami. Ponadto, niniejsi wynalazcy odkryli, że sacharydy (sacharoza) i przeciwutleniacze (metionina) są istotne dla polepszenia stabilności polipeptydów czynnika VII.
Dlatego, dalszy aspekt wynalazku dotyczy sposobu przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII. Sposób ten obejmuje etapy:
i) dostarczania tego polipeptydu czynnika VII w roztworze zawierającym, przynajmniej jeden środek stabilizujący wybrany z grupy składającej się z:
a) połączenia przeciwutleniacza i mannitolu;
b) połączenia metioniny i poliolu;
c) połączenia sacharydu i mannitolu;
d) połączenia sacharozy i poliolu oraz
e) metioniny ii) dostarczania tego roztworu tak, aby otrzymać stałą kompozycję o zawartość wilgoci nie większej niż około 3% w/w.
PL 207 018 B1
W szczególnie interesują cych jego wykonaniach sposób obejmuje taki przeciwutleniacz, który jest wybrany z grupy składającej się z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny i glutationu oraz peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, cytstationiny, metioniny i glutationu. W korzystnym wykonaniu przeciwutleniaczem jest metionina. W jeszcze dalszych interesuj ą cych wykonaniach ten sacharyd jest wybrany z grupy składającej się z sacharozy, dekstrozy, laktozy, maltozy, trehalozy, cyklodekstryn, maltodekstryn i dekstranów. W korzystnych wykonaniach poliol jest mannitolem, a sacharyd jest sacharozą. Ponadto, we wciąż korzystnych jego wykonaniach przeciwutleniacz jest metionina.
Korzystnie zawartość sacharydu i opcjonalnie zawartość przeciwutleniacza w tym roztworze i powinna być dostosowana tak, aby uzyskać lepiej stabilizowane polipeptydy czynnika VII.
Według wynalazku sacharyd powinien być obecny w ilości wahającej się od około 0,5 do 75 mg/ml, takiej jak od około 2 do 60 mg/ml, od około 5 mg/ml do 55 mg/ml, od około 8 do 45 mg/ml, od około 10 do 40 mg/ml, od około 10 do 30 mg/ml od około 2 do 45 mg/ml, od około 5 mg/ml do 45 mg/ml, od około 5 do 35 mg/ml, od około 5 do 25, tak jak od około 5 do 20 mg/ml.
Według wynalazku poliol powinien być obecny w ilości wahającej się od około 0,5 do 75 mg/ml, takiej jak od około 2 do 60 mg/ml, od około 5 mg/ml do 55 mg/ml, od około 8 do 45 mg/ml, od około 10 do 40 mg/ml, od około 10 do 30 mg/ml lub od około 2 do 45 mg/ml, od około 5 mg/ml do 45 mg/ml, od około 5 do 35 mg/ml, od około 5 do 25 mg/ml, tak jak od około 5 do 20 mg/ml.
Przeciwutleniacz powinien być obecny w ilości wahającej się od około 0,05 do 10 mg/ml, korzystnie od około 0,1 do 5 mg/ml, korzystniej od około 0,1 mg/ml do 2,5 mg/ml, jeszcze korzystniej od około 0,1 do 2 mg/ml, najkorzystniej od około 0,1 do 1 mg/ml.
W korzystnych wykonaniach sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII obejmuje liofilizację. Liofilizacja dotyczy procesu, gdzie roztwór zawierający ten polipeptyd czynnika VII zostaje napełniony do fiolek do liofilizacji lub tym podobnych. Ten polipeptyd czynnika VII opcjonalnie może być poddany sterylnej filtracji przed rozpoczęciem liofilizacji. Dokonuje się schłodzenia półek liofilizatora w celu zamrożenia fiolek i roztworu poniżej temperatury krytycznej produktu. Wodę usuwa się doprowadzając próżnię i powodując kondensację pary wodnej na kondesatorze lodu liofilizatora. Kiedy produkt jest wysuszony, zwykle o resztkowej zawartości wilgoci mniejszej niż 3% (np. mierzonej przy użyciu miareczkowania kulometrycznego Karla Fischera, jak to opisano powyżej), fiolki są zamykane i zakorkowywane. Wytwarzanie kończy się i kompozycja jest teraz w postaci masy liofilizowanej.
Takie kompozycję podczas podawania pacjentowi w postaci zastrzyków muszą być przed użyciem przywracane do postaci odpowiedniej cieczy. Mogą one także być przywracane do postaci roztworu w innych celach, np., aby przygotować preparaty innych kompozycji farmaceutycznych. Jednak, niniejszy wynalazek nie wyklucza, że kompozycje mogą być podawane pacjentowi w ich postaci stałej.
Kompozycje są przywracane do postaci roztworu przy użyciu akceptowalnych, korzystnie sterylnych, rozcieńczalników lub nośników, korzystnie nośników wodnych. Można zastosować rozmaite nośniki wodne, np. wodę (np. wodę do zastrzyków/WFI), wodę buforowaną, solankę (np. 0,4% roztwór solanki), glicynę (np. 0,3% roztwór glicyny), histydynę itp. Rozcieńczalnik do przywracania postaci roztworu może także zawierać jedną lub więcej soli, takich jak sól wapniowa (np. CaCl2) lub połączenie soli sodowej i soli wapniowej (np. NaCl i CaCl2).
Przywracane do postaci roztworu kompozycje są przeznaczone do podania pozajelitowego w leczeniu profilaktycznym i/lub terapeutycznym. Korzystnie, kompozycje farmaceutyczne są podawane pozajelitowe, tj. dożylnie, podskórnie lub do mięśniowo, albo są podawane przy użyciu wlewu ciągłego pulsacyjnego.
Dlatego, jeszcze dalszy aspekt wynalazku dotyczy zastosowania stałej stabilizowanej kompozycji do przygotowania leku do leczenia zespołu odpowiadającego na czynnik VII.
Oznacza to, że jeden z aspektów wynalazku dotyczy zastosowania polipeptydu czynnika VII do przygotowania leku do leczenia zespołu odpowiadającego na czynnik VII, przy czym ten lek zawiera kompozycję zawierającą:
polipeptyd czynnika VII i przynajmniej jeden środek stabilizujący wybrany z grupy składającej się z
a) połączenia przeciwutleniacza i mannitolu;
b) połączenia metioniny i poliolu;
c) połączenia sacharydu i mannitolu;
d) połączenia sacharozy i poliolu oraz
e) mietioniny, przy czym ta kompozycja ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3%.
PL 207 018 B1
Ponadto, w innym aspekcie wynalazek dotyczy podawania tego stabilizowanego polipeptydu czynnika VII pacjentowi do leczenia zespołu odpowiadającego na czynnik VII. Zatem, wynalazek dotyczy sposobu leczenia zespołu odpowiadającego na czynnik VII obejmującego podawanie pacjentowi, tego potrzebującemu, skutecznej ilości kompozycji zawierającej polipeptyd czynnika VII i przynajmniej jeden środek stabilizujący wybrany z grupy składającej się z
a) połączenia przeciwutleniacza i mannitolu;
b) połączenia metioniny i poliolu;
c) połączenia sacharydu i mannitolu;
d) połączenia sacharozy i poliolu oraz
e) metioniny;
przy czym ta kompozycja ma zawartość wilgoci nie większą niż około 3%.
W róż nych wykonaniach tym zespoł em, odpowiadają cym na czynnik VII jest hemofilia A, hemofilia B, niedobór czynnika XI, niedobór czynnika VII, małopłytkowość, choroba von Willebranda, obecność inhibitora czynnika krzepnięcia, operacja lub uraz. Dodatkowo, zespół odpowiadający na czynnik VII może być związany z terapią antykoagulantem.
Jak stwierdzono, kompozycja jest w postaci stałej. Odpowiednio, w korzystnym wykonaniu lek powinien być odpowiedni do rozpuszczenia, co pozwala na podanie pozajelitowe leku. Zatem, podczas podawania kompozycji pacjentowi, wykonanie to obejmuje etap rozpuszczania kompozycji w odpowiedniej cieczy przed etapem, podawania.
Stosowane tutaj skróty:
FVII czynnik krzepnięcia VII w jego postaci jednołańcuchowej
FVIIa czynnik krzepnięcia VII w jego przeciętej, aktywowanej postaci dwułańcuchowej rFVII (rFVIIa) rekombinowany czynnik VII (rekombinowany czynnik VIIa)
Następujące przykłady podano w celu zilustrowania, ale bez zamiaru ograniczania się do nich: Przykłady
P r z y k ł a d 1
Pokazane są kompozycje zawierające polipeptydy czynnika VII i przygotowane według Przykładu 2. Pokazane są typowe zaróbki i ich typowe ilości.
Tabela 1 pokazuje stężenie składników czynnych i zaróbek w przypadku, gdy kompozycja jest w postaci ciekłej, to znaczy, w postaci kompozycji przed zakończeniem, wytwarzania (np. zakończeniem liofilizacji) lub odtworzonego roztworu.
Tabela 2 pokazuje stężenie składnika czynnego i zaróbek w przypadku, gdy kompozycja jest w postaci stał ej, tj. w postaci liofilizowanej.
T a b e la 1
Kompozycję, zawartość zaróbek w roztworze.
Główna funkcja Zaróbki: Zawartość (mg/ml) w ciekłej kompozycji
składnik czynny rFVIIa 0,6 - 5
środek modyfikujący toniczność chlorek sodu 0 - 4
środek modyfikujący toniczność/stabilizator chlorek wapnia, 2H2O 1 - 7
środek buforujący glicyloglicyna 1,32 (0 - 1,5)
surfaktant Polisorbat 80 0,05 - 2
środek zwiększający objętość/środek chroniący w niskich temperaturach/środek chroniący podczas liofilizacji mannitol 10 - 40
środek zwiększający objętość/środek chroniący w niskich temperaturach/środek chroniący sacharoza 10 - 40
podczas liorilizac]i
przeciwutleniacz metionina 0 - 1,0
pH 5 - 6
PL 207 018 B1
T a b e l a 2
Kompozycje, zawartość zaróbek w postaci liofilizowanej.
Główna funkcja Zaróbki: Zawartość (% w/w) w kompozycji stałej
składnik czynny rFVIIa,0,6 - 19
środek modyfikujący toniczność chlorek sodu 0 - 15
środek modyfikujący toniczność/stabilizator chlorek wapnia, 2H2O 1,0 do 24,0
środek buforujący glicyloglicyna 0 - 6,0
surfaktant Polisorbat 80 0,05 - 8,0
środek zwiększający objętość/środek chroniący w niskich temperaturach/środek chroniący podczas liofilizacji mannitol 13 - 76
środek zwiększający objętość/środek chroniący w niskich temperaturach/środek chroniący podczas liofilizacji sacharoza 13 - 76
przeciwutleniacz metionina 0 - 4,2
pH 5 - 6
P r z y k ł a d 2
Wytwarzanie kompozycji
Na ogół kompozycje były przygotowywane z oczyszczonej dużej porcji roztworu. Dodano zaróbki i roztwór rozcieńczono do pożądanego stężenia rFVIIa. Otrzymany roztwór przesączono sterylnie przy użyciu filera membranowego o wielkości porów 0,2 mikrona lub równoważnego) i napełniono nim sterylne szklane fiolki. Fiolki liofilizowano, zatkano i uszczelniono kapslami aluminiowymi typu zsuwanego.
P r z y k ł a d 3
Kompozycje 1 - 19 zawierające różne ilości chlorku sodu, mannitolu, sacharozy i metioniny oraz o różnych wartościach pH przygotowano według procesu opisanego w Przykładzie 2. Kompozycje zawierające ustalone stężenia czynnika VII (1,0 mg/ml), chlorku sodu, 2H2O (1,47 mg/ml), glicyloglicyny (1,32 mg/ml) i Polisorbatu 80 (1,0 mg/ml).
T a b e l a 3 Kompozycje 1 - 19
Kompozycje 1 - 19. Zawartość zaróbek mg/ml
Kompozycja nr NaCl mannitol sacharoza metionina pH
1 2 3 4 5 6
1 0 10 10 0 6,0
2 3,5 10 10 0 5,0
3 0 40 10 0 5,0
4 3,5 40 10 0 6,0
5 0 10 40 0 5,0
6 3,5 10 40 0 6,0
7 0 40 40 0 6,0
8 3,5 40 40 0 5,0
9 0 10 10 0,5 5,0
10 3,5 10 10 0,5 6,0
11 0 40 10 0,5 6,0
12 3,5 40 10 0,5 5,0
13 0 10 40 0,5 6,0
14 3,5 10 40 0,5 5,0
PL 207 018 B1 cd. tabeli 3
1 2 3 4 5 6
15 0 40 40 0,5 5,0
16 3,5 40 40 0,5 6,0
17 1,75 25 25 0,25 5,5
18 1,75 25 25 0,25 5,5
19 1,75 25 25 0,25 5,5
P r z y k ł a d 4
Sposoby analityczne stosowane przy określaniu parametrów wskazujących na stabilność:
A. Określanie postaci utlenionych przy użyciu HPLC z odwróconymi fazami (RP-HPLC, ang. Reverse Phase HPLC):
Kolumna HPLC: kolumna 4,5 x 250 mm: upakowana krzemionką ze związanymi resztami butylowymi o rozmiarze cząsteczek 5 μm, i wielkością porów 300 A. Temperatura kolumny: 70°C. Eluent A: woda 99,9% v/v i kwas trifluorooccowy 0,1% v/y. Eluent B: acetcnitryl 80% v/v, kwas trifluorocctowy 0,09% v/v i woda 19,91% v/v. Kolumnę eluowano liniowym, gradientem od X% B do (X+13)% B w ciągu 30 minut. Szybkość przepływu: 1,0 ml/min. Wykrywanie: 214 nm.
Postacie utlenione są sulfotlenkami metioniny polipeptydów czynnika VII. Na przykład dwiema głównymi pochodnymi FVII są Met(O)293 FVII i Met(O)306 FVII.
Zawartość postaci utlenionych jest wyrażona jako procent początkowej ilości czynnika VII w kompozycji podczas przygotowania, która jest odzyskiwana jako postacie utlenione czynnika VII.
B. Określenie agregatów polipeptydów czynnika VII przy użyciu wysokosprawnej chromatografii przesączania przez żel (GP-HPLC, ang. High Performance Gel Permeation Chromatography).
GP-HPLC przeprowadzono na kolumnie Waters Protein Pak 300 SW. 7,5 x 300 mm przy użyciu 0,2 M siarczanu amonu pH 7,0 zawierającego 5% izopropanolu jako fazy ruchomej. Szybkość przepływu: 0,5 ml/min i wykrywanie: 215 nm.
Zawartość agregatów jest wyrażona jako procent początkowej ilości czynnika VII w kompozycji podczas przygotowania, który jest odzyskiwany jako postacie dimeryczne, oligomeryczne i polimeryczne czynnika VII.
P r z y k ł a d 5
Zawartość postaci utlenionych czynnika VIIa po zakończeniu procesu liofilizacji i podczas przechowywania:
Kompozycje 1 - 19 z Przykładu 3 analizowano sposobem A (Przykład 4) na zawartość postaci utlenionych po zakończeniu liofilizacji oraz po 2 i 3 miesiącach przechowywania w 30°C.
T a b e l a 4
Zawartość postaci utlenionych i jej wzrost podczas przechowywania przez 8 miesięcy.
% początkowej zawartości czynnika VIIa odzyskanego jako postacie utlenione
Kompozycja nr 0 2 8 wzrost 0 - 8 miesięcy
1 2 3 4 5
1 2,5 3,5 4,8 2,3
2 2,7 3 6,1 3,4
3 2,3 3,7 7 4,7
4 2,7 5,5 12 9,3
5 2,6 3,6 5,3 2,7
6 2,7 3,3 5,8 3,1
7 3 3,5 5,2 2,2
8 2,3 2,9 3,4 1,1
9 1,6 1,5 1,7 0,1
10 1,7 1,7 2,1 0,4
PL 207 018 B1 cd. tabeli 4
1 2 3 4 5
11 1,7 1,8 2,5 0,8
12 1,6 1,6 1,9 0,3
13 1,7 1,6 1,7 0
14 1, 6 1,5 1,6 0
15 1,6 1,5 1,8 0,2
16 1,7 1,6 1,8 0,1
17 1,7 1,6 n.a. n.a.
18 1,7 1,6 1,9 0,2
19 1,7 1,6 1,3 0,1
n.a. nie analizowano
Analiza statystyczna pokazuje, że kompozycje zawierające metioninę są bardziej stabilne na degradację oksydatywną.
P r z y k ł a d 6
Zawartość agregatów czynnika Vlla po zakończeniu procesu liofilizacji i podczas przechowywania: Kompozycje 1 - 19 z Przykładu 3 analizowano sposobem B (Przykład 4) na zawartość agregatów po zakończeniu procesu liofilizacji oraz po 2 i 8 miesiącach przechowywania w 30°C.
T a b e l a 5
Zawartość agregatów i jej wzrost podczas przechowywania przez 8 miesięcy.
% początkowej zawartości czynnika VIIa odzyskanego jako agregaty
Kompozycja nr 0 2 8 wzrost 0 - 8 miesięcy
1 0,7 0,8 0,9 0,2
2 1 2 2,9 1,9
3 1,5 2,5 3,5 2
4 1,1 2,1 3,1 2
5 0,8 1 1,1 0,3
6 0,3 1,2 1,1 0,8
7 0,9 1 0,9 0
8 0,9 1 1,2 0,3
9 0,9 1 1,1 0,2
10 0,8 1,7 2,5 1,7
11 1 1,2 1,5 0,5
12 1,3 2 2,8 1,5
13 0,7 0,8 0,9 0,2
14 1 1,7 1,4 0,4
15 1,1 1,4 1,5 0,4
16 0,8 0,9 1 0,2
17 0,9 1,1 n.a. n.a.
18 0,8 1 1,5 0,7
19 1 1 1,1 0,1
n.a. nie analizowano
PL 207 018 B1
Analiza statystyczna pokazuje, że obecność sacharozy w kompozycjach jest ważna w celu zmniejszenia tworzenia się agregatów.
P r z y k ł a d 7
Zawartość postaci dimerycznych i oligorterycznych czynnika VIIa po zakończeniu procesu liofilizacji:
Kompozycję A zawierającą poliol i sacharyd wymienione w tabeli poniżej przygotowano według procesu opisanego w Przykładzie 2. Kompozycja zawiera ponadto czynnik Vlla (1,0 mg/ml), chlorek wapnia 2H2O (1,47 mg/ml), glicyloglicynę (1,32 mg/ml) i Polisorbat 80 (0,7 mg/ml). pH wynosiło 5,0.
Kompozycję A analizowano sposobem B (Przykład 4) na zawartość agregatów po zakończeniu liofilizacji i po 1 i 2 miesiącach przechowywania w 30°C. Tabela wymienia % początkowej zawartości czynnika Vlla odzyskanego jako agregaty:
T a b e l a 6
% początkowej zawartości czynnika Vlla odzyskanego jako agregaty
Kompozycja Dodatek Miesiące
0 1 2
A mannitol 25 mg/ml trehaloza 15 mg/ml 1,1 2,0 1,7
P r z y k ł a d 8
Strukturalna stabilność masy liofilizowanej pokazana jest dla różnych kompozycji, 1-19, zobacz Przykład 3. Podany jest stosunek mannitolu do sacharozy w każdej kompozycji.
T a b e l a 7
Stabilność masy liofilizowanej według stosunku pomiędzy mannitolem a sacharozą
Kompozycje
5, 6, 13, 14 1, 2, 7, 8, 9, 10, 15, 16 17, 18 i 19 3, 4, 11, 12
stosunek wagowy man:sach 1:4 1:1 1:1 4:1
masa liofilizowana C OK OK OK
C: zapadnięta masa, man: mannitol, sach: sacharoza,
OK: nieznacznie zapadnięta lub niezapadnięta P r z y k ł a d 9
Następujące preparaty przygotowano jak to opisano Przykładzie 2 przy użyciu napełnionych objętości 1 i 5 ml:
Preparat A B C
rFVIIa (mg/ml) 0,6 1,0 1,0
CaCl2 (mM) 10 10 10
glicyloglicyna 10 10 10
L-histydyna (mM) - 10 10
NaCl (mM) 50 39 39
Tween 80 (mg/ml) 0,038 0,07 0,07
metionina (mg/ml) - 0,5 2,0
mannitol (mg/ml) 30 25 25
sacharoza (mg/ml) - 10 10
pH 5,5 5,5 5,5
Stabilność preparatów badano w 25°C, 30°C i 40°C i otrzymano następujące wyniki. Przed analizą odtworzono roztwór w wodzie.
Postacie dimeryczne i oligomeryczne
PL 207 018 B1
Zawartość postaci dimerycznych i oligomerycznych zmierzono przy użyciu GP-HPLC, jak to opisano w Przykładzie 4. Wszystkie wyniki są wyrażone w %.
Objętość napełniania 5 ml:
Preparat 0 miesięcy 1Z miesiąca 1 miesiąc 3 miesiące 6 miesięcy
40°C 40°C 40°C 30°C 25°C 25°C
A 3,3 5,5 6,4 3,0 6,0 6,3 6,3
B 2,3 2,7 2,8 3,0 2,7 3,2 3,0
C 4,0 4,2 4,6 4,7 4,3 4,4 4,4
Objętość napełniania 1 ml:
Preparat 0 miesięcy 3 miesiące
40°C 30°C 25°C
A 2,7 11,0 7,0 6,5
B 2,2 7,4 3,4 2,9
C 3,3 6,9 3,8 3,7
Ponadto, zawartość postaci agregatów dla preparatu A (= odn.) i preparatu B (= nowy), objętość napełniania 5 ml, można zobaczyć na Fig. 2a.
Postacie utlenione
Zawartość postaci utlenionych zmierzono przy użyciu RP-HPLC, jak to opisano w Przykładzie 4. objętość napełniania 5 ml:
Preparat 0 miesięcy 1Z miesiąca 1 miesiąc 3 miesiące 6 miesięcy
40°C 40°C 40°C 30°C 25°C 25°C
A 2,1 2,8 3,4 4,0 3,4 3,1 3,5
B 1,3 1,3 1,6 1,3 1,6 1, 6 1,4
C 1,2 1,4 1,6 1,8 1,6 1,6 1,3
objętość napełniania 1 ml:
Preparat 0 miesięcy 3 miesiące
40°C 30°C 25°C
A 2,5 4,6 4,0 5,3
B 1,3 2,0 1,1 1,8
C 1,3 1,8 1,7 1,5
Ponadto, zawartość postaci utlenionych dla preparatu A (=odn.) i preparatu B (=nowy), objętość napełniania 5 ml, można zobaczyć na Fig. 2b.
Aktywność
Aktywność można zobaczyć przy użyciu jednoetapowego oznaczenia krzepnięcia, jak to opisano w Przykładzie 12, dla preparatów, które były przechowywane w 30°C przez 3 miesiące. Specyficzną aktywność obliczono w oparciu o zawartość rFVIIa w preparatach i otrzymano następujące wyniki:
Preparat Specyficzna aktywność (lU/mg)
A 50523
B 58373
C 60318
PL 207 018 B1
Interpretacja wyników:
Wyniki pokazują, że preparaty B i C, które zawieraną mannitol, sacharozę i metioninę, są bardziej stabilne - tj. pokazują wolniejszy wzrost zawartości postaci dimerów i oligomerów i postaci utlenionych. Odpowiednio, aktywności tych preparatów są wyższe, jak to zmierzono po 3 miesiącach przechowywania w 30°C.
P r z y k ł a d 10
Następujące preparaty przygotowano, jak to opisano w Przykładzie 2, stosując objętość napełniania 5 ml.
Preparat A B C D E
rFVIIa (mg/ml) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
CaCl2 (mM) 10 10 10 10 10
glicyloglicyna (mM) 10 10 10 10 10
L-histydyna (mM) 10 10 10 10 10
NaCl (mM) 39 39 39 39 39
metionina (mg/ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Tween 20 (mg/ml) 0,1
Tween 80 (mg/ml) 0,1
Poloksamer 188 (mg/ml) 1,0
Brij 35 (mg/ml) 0,1
mannitol (mg/ml) 25 25 25 25 25
sacharoza (mg/ml) 10 10 10 10 10
pH 5,5 5,5 5,5 5, 5,5
Odtworzono w wodzie roztwór we fiolkach i poddano go wytrząsaniu przez 19 godzin w celu testowania fizycznej stabilności preparatów. Efekt wytrząsania oceniano badaniem, wizualnym oraz pomiarem absorbancji UV przy 400 nm (= Abs w tabeli poniżej). Poniższe wyniki jasno pokazują zwiększoną stabilność fizyczną uzyskaną przez dodatek detergentu.
Przed wytrząsaniem Po wytrząsaniu
Preparat Wygląd wizualny Abs Wygląd wizualny Abs
A przejrzysta ciecz 0,01 przejrzysta ciecz z niewielką ilością drobin 0,01
B przejrzysta ciecz 0,00 nieznacznie mętna 0,36
C przejrzysta ciecz 0,00 przejrzysta ciecz z niewielką ilością drobin 0,00
D przejrzysta ciecz 0,00 przejrzysta ciecz z niewielką ilością drobin 0,00
E przejrzysta ciecz 0,01 mętna 2,18
Przygotowano sześć preparatów, jak to opisano Przykładzie 2. Kompozycja tych preparatów była
P r z y k ł a d 11
następująca:
rFVIIa 1,0 mg/ml
CaCl2 10 mM
glicyloglicyna 10 mM
L-histydyna 10 mM
MaCl 39 mM
Tween 80 0,07 mg/ml
miannitol 25 mg/ml
sacharoza 10 mg/ml
PL 207 018 B1
Każdy z sześciu preparatów doprowadzono do innego pH:
Preparat A: pH 5,0 Preparat B: pH 5,5 Preparat C: pH 6,0 Preparat D: pH 6,5 Preparat E: pH 7,0 Preparat E: pH 7,5
Badano stabilność tych sześciu preparatów dla fiolek przechowywanych w 25°C i 40°C. Otrzymano wyniki pokazane w tabelach poniżej (oraz na Fig. 1a i 1b).
Preparat Postacie dimeryczne i oligomeryczne (agregaty) (%)
0 miesięcy 40°C/3 miesiące 25°C/3 miesiące
A 2,2 3,8 2,5
B 1,7 3,2 1,9
C 1,5 2,7 1,7
D 1,1 1,9 1,3
E 0,8 1,6 1,0
F 0,8 1,6 1,0
Preparat Postacie utlenione (%)
0 miesięcy 40°C/3 miesiące 25°C/3 miesiące
A 2,7 3,3 3,4
B N/A 4,0 3,6
C 2,6 5,0 3,7
D 2,5 4,9 3,6
E 2,6 10,0 4,6
F 2,6 8,7 4,7
Zawartość postaci dimerycznych i oligomerycznych określono, jak to opisano w Przykładzie 4.
P r z y k ł a d 12
Oznaczenia do testowania aktywności biologicznej polipeptydów czynnika VII:
Test aktywności czynnika VIIa:
Odpowiednie oznaczenie do testowania aktywności czynnika VIIa, a tym samym wybrania odpowiedniego wariantu czynnika VIIa, można przeprowadzić jako prosty wstępny test in vitro: („oznaczenie hydrolizy in vitro).
Oznaczenie hydrolizy in vitro
Natywny (typu dzikiego) czynnik VIIa i wariant czynnika VIla (obydwa określane poniżej jako „czynnik VIla) można oznaczyć pod względem, specyficznych aktywności. Można je także oznaczyć równolegle tak, aby bezpośrednio porównać ich specyficzne aktywności. Oznaczenie przeprowadza się na płytce do mikromiareczkowania (MaxiSorp, Nunc, Dania). Chromogenny substrat D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilid (S-2288, Chromogenix, Szwecja) w stężeniu końcowym 1 mM dodaje się do czynnika VIIa (stężenie końcowe 100 nM) w 50 mM Hepes, pH 7,4, zawierającym 0,1 M NaCl, 5 mM CaCl2 i 1 mg/ml albuminy surowicy wołu. Absorbancję przy 405 nm mierzy się w sposób ciągły w czytniku płytek SpectraMaxTM 340 (Molecular Deylces, USA). Absorbancję pojawiającą się po 20 minutowej inkubacji, po odjęciu absorbancji w kontrolnej studzience nie zawierającej enzymu, stosuje się do obliczenia stosunku aktywności wariantu i czynnika VIIa typu dzikiego:
Stosunek = (A405 nm wariantu czynnika VII)/(A405 nm czynnika VIIa typu dzikiego).
W oparciu o to można zidentyfikować warianty czynnika VIIa o aktywności porównywalnej z lub wyższej od natywnego czynnika VIIa, takie jak, na przykład, warianty, gdzie stosunek pomiędzy
PL 207 018 B1 aktywnością wariantu a aktywnością natywnego czynnika VIIa FVII typu dzikiego) wynosi około lub powyżej 1,0.
Aktywność czynnika VIIa lub wariantów czynnika VIIa można także zmierzyć przy użyciu substratu fizjologicznego, takiego jak czynnik X, odpowiednio w stężeniu 100-1000 nM, gdzie wytworzony czynnik Xa mierzy się po dodaniu odpowiedniego substratu chromogennego (np. S-2765) („oznaczenie proteolizy in vitro). Dodatkowo, oznaczenie aktywności można przeprowadzić w temperaturze fizjologicznej.
Oznaczenie proteolizy in vitro
Natywny (typu dzikiego) czynnik VIIa i wariant czynnika VIIa (obydwa określane poniżej jako „czynnik VIIa) oznacza się równolegle tak, aby bezpośrednio porównać ich specyficzne aktywności. Oznaczenie przeprowadza się na płytce do mikromiareczkowania (MaxiSorp, Nunc, Dania). Czynnik Vlla (10 nM) i czynnik X (0,8 mikroM) w 100 mikrol 50 mM Hepes, pH 7,4, zawierającym 0,1 M NaCl, 5 mM CaCl2 i 1 mg/ml albuminy surowicy wołu inkubuje się przez 15 min. Cięcie czynnika X następnie się zatrzymuje przez dodanie 50 mikrol 50 mM Hepes, pH 7,4, zawierającego 0,1 NaCl, 20 mM EDTA i 1 mg/ml albuminy surowicy wołu. Ilość wytworzonego czynnika namierzy się przez dodanie substratu chromogennego Z-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilidu (S3-265, Chromogenix, Szwecja) w stężeniu końcowym 0,5 mM. Absorbancję przy 405 nm mierzy się w sposób ciągły w czytniku płytek SpectraMaxTM 340 (Molecular Devices, USA). Absorbancję pojawiającą się w czasie 10 minut, po odjęciu absorbancji w kontrolnej studzience nie zawierającej FVIIa, stosuje się do obliczenia stosunku pomiędzy aktywnościami proteolitycznymi wariantu i czynnika VIIa typu dzikiego:
stosunek = (A405 nm wariantu czynnika VIIa)/(A405 nm czynnika VIIa typu dzikiego).
W oparciu o to można zidentyfikować warianty czynnika VIIa o aktywności porównywalnej z lub wyższej niż natywnego czynnika VIIa, takie jak, na przykład, warianty, gdzie stosunek aktywności wariantu i aktywności natywnego czynnika VII (typu dzikiego) wynosi około lub powyżej 1,0. Oznaczenie wytwarzania trombiny:
Zdolność czynnika VII lub polipeptydów pokrewnych czynnikowi VII lub czynnika VIII lub polipeptydów pokrewnych czynnikowi VIII (np. wariantów) do wytwarzania trombiny można zmierzyć w oznaczeniu zawierającym wszystkie potrzebne do tego czynniki krzepnięcia i inhibitory w stężeniach fizjologicznych i aktywowane płytki krwi (jak to opisano na str. 543 w Monroe i wsp. (1997) Brit. J. Haematol. 99, 542-547, które jest tutaj włączone przez odniesienie).
Oznaczenie krzepnięcia:
Aktywność polipeptydów czynnika VII można także zmierzyć przy użyciu jednoetapowego oznaczenia krzepnięcia (oznaczenie 4) zasadniczo opisanego w WO 92/15686 lub US 5997864. W skrócie, próbkę, która ma być testowana, rozcieńcza się w 50 mM Tris (pH 7,5), 0,1% BSA i 100 μl inkubuje się z 100 μl osocza pozbawionego czynnika VII i 200 μl tromboplastyny C zawierającej 10 mM Ca2+. Mierzy się czasy krzepnięcia i porównuje ze standardową krzywą przy użyciu standardu odniesienia lub połączonych frakcji serii rozcieńczeń prawidłowego ludzkiego osocza traktowanego cytrynianem.

Claims (41)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca polipeptyd czynnika VII i połączenie sacharozy i poliolu, przy czym kompozycja ta ma zawartość wilgoci nie większą niż 3%.
  2. 2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że połączenie sacharozy i poliolu zawiera ponadto przeciwutleniacz.
  3. 3. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że przeciwutleniacz jest wybrany z grupy składającej się z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny, glutationu i peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny i glutationu.
  4. 4. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że poliol jest wybrany z grupy składającej się z miannitolu, sorbitolu i ksylitolu.
  5. 5. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta kompozycja jest stabilna tak, że nie więcej niż 5% w/w początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do agregatów podczas przechowywania tej kompozycji w 30°C przez 8 miesięcy, korzystnie nie więcej niż 4,0% w/w, 3,0% w/w, 2,5% w/w, 2,0% w/w, 1,5% w/w lub nie więcej niż 1,0% w/w.
    PL 207 018 B1
  6. 6. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta kompozycja jest stabilna tak, że nie więcej niż 6% w/w początkowej zawartości polipeptydu czynnika VII jest przekształcanych do postaci utlenionych podczas przechowywania w 30°C przez 8 miesięcy, korzystnie nie więcej niż 5% w/w, 4,0% w/w, 3,0% w/w, 2,5% w/w, 2,0% w/w lub nie więcej niż 1,5% w/w.
  7. 7. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że wspomniany poliol jest obecny w ilości wahającej się od 0,5 do 75% mg/ml, takich jak od 2 do 60 mg/ml, 5 mg/ml do 55 mg/ml, 8 do 45 mg/ml, 10 do 40 mg/ml, 10 do 30 mg/ml, lub od 2 do 45 mg/ml, 5 mg/ml do 45 mg/ml, 5 do 35 mg/ml, 5 do 25 mg/ml, 5 do 20 mg/ml, 20 do 40 mg/ml lub takich jak od 20 do 30 mg/ml.
  8. 8. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że wspomniana sacharoza jest obecna w ilości wahającej się od 0,5 do 75 mg/ml, takich jak od 2 do 60 mg/ml, od 5 mg/ml do 55 mg/ml, od 8 do 45 mg/ml, od 10 do 40 mg/ml, od 10 do 30 mg/ml, lub od 2 do 45 mg/ml, od 5 do 25 mg/ml, takiej jak 5 do 2 0 mg/ml.
  9. 9. Kompozycja wed ł ug dowolnego z wcześ niejszych zastrz., znamienna tym, ż e ten poliol jest w stosunku wagowym wzglę dem wspomnianej sacharozy wahaj ącym się od 100:1 do 1:50, korzystnie od 50:1 do 1:10; 20:1 do 1:5; 10:1 do 1:2; 6:1 do 1:2; 4:1 do 1:1 lub od 4:1 do 3:2.
  10. 10. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., zawierająca ponadto środek odpowiedni do utrzymywania pH tej kompozycji w zakresie 3 do 9 po rozpuszczeniu w rozpuszczalniku wodnym, korzystnie pH jest w zakresie 4 do 7, korzystniej w zakresie 4,5 do 6,5, jeszcze korzystniej w zakresie 5 do 6.
  11. 11. Kompozycja według zastrz. 10, znamienna tym., że ten środek jest wybrany z grupy składającej się z cytrynianu, octanu, histydyny, jabłczanu, fosforanu, kwasu winowego, kwasu bursztynowego, MES, HEPES, PIPES, imidazolu, TRIS, mleczanu, glutaminianu i glicyloglicyny.
  12. 12. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., zawierająca ponadto środek modyfikujący toniczność.
  13. 13. Kompozycja według zastrz.12, znamienna tym, że ten środek modyfikujący toniczność jest wybrany z grupy składającej się z octanu sodu, mleczanu sodu, chlorku sodu, chlorku potasu i chlorku wapnia.
  14. 14. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., zawierająca ponadto surfaktant.
  15. 15. Kompozycja według zastrz. 14, znamienna tym, że ten surfaktant jest wybrany z grupy składającej się z polisorbatów, takich jak Polisorbat 20 lub 80; eterów alkilowych polioksyetylenu, takich jak Brij 35 lub poloksamerów, takich jak Poloksamer 188 lub 407, oraz innych polimerów blokowych etylenu/polipropylenu lub polietylenoglikolu (PEG), takiego jak PEG8000.
  16. 16. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., zawierająca ponadto inne zaróbki farmaceutyczne działające jak środek zwiększający objętość.
  17. 17. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że tym poliolem jest mannitol.
  18. 18. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że polipepcyd czynnika VII jest wybrany z grupy składającej się z ludzkiego czynnika VIIa, rekombinowanego ludzkiego czynnika VIla i wariantu sekwencji czynnika VII.
  19. 19. Kompozycja według zastrz. 18, znamienna tym, że ten polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa lub rekombinowanym ludzkim czynnikiem VIIa.
  20. 20. Kompozycja według dowolnego z zastrz. 1-19, znamienna tym, że ten polipeptyd czynnika VII jest polipeptydem pokrewnym czynnikowi VII, znamiennym tym, że stosunek aktywności tego polipeptydu pokrewnego czynnikowi VII i czynnika VII typu dzikiego wynosi przynajmniej 1,25 podczas testowania w jednym, lub więcej z „oznaczeń proteolizy in vitro i „oznaczeń hydrolizy in vitro, jak to opisano w niniejszej specyfikacji.
  21. 21. Kompozycja według dowolnego z zastrz. 18 do 20, znamienna tym, że polipeptyd czynnika VII jest obecny w stężeniu od 0,6 mg/ml do 10,0 mg/ml, tak jak od 0,6 mg/ml do 6 mg/ml, od 0,6 mg/ml do 5 mg/ml lub od 0,6 mg/ml do 4 mg/ml.
  22. 22. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta zawartość wilgoci wynosi nie więcej niż 2,5% w/w, korzystnie nie więcej niż 2% w/w, najkorzystniej nie więcej niż 1,5% w/w.
  23. 23. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta kompozycja jest masą liofilizowaną.
    PL 207 018 B1
  24. 24. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta kompozycja zawiera: polipeptyd czynnika VII, mannitol, sacharozę oraz surfaktant wybrany z polisorbatu lub poloksameru.
  25. 25. Kompozycja według zastrz. 24, która zawiera ponadto metioninę.
  26. 26. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz. 24 lub 25, która zawiera ponadto L-histydynę.
  27. 27. Kompozycja według dowolnego z zastrz. 24 do 26, która zawiera ponadto jeden lub więcej składników wybranych z listy: CaCl2, NaCl i glicyloglicyny.
  28. 28. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta kompozycja jest wybrana z listy preparatów A do D:
    Związek Preparat A Preparat B Preparat C Preparat D polipeptyd FVII 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml 0,6 do 10 mg/ml CaCl2 x 2H2O 5 do 20 mM 5 do 20 mM 5 do 20 mM 5 do 20 mM NaCl 0 - 50 mM 0 - 50 mM 0 - 50 mM 0 -50 mM glicyloglicyna 0 - 15 mM 0 - 15 mM 0 - 15 mM 0 - 15 mM L-histydyna 0 - 20 mM 0 - 20 mM 0 - 20 mM 0 - 20 mM mannitol 20 - 40 mg/ml 20 - 40 mg/ml 20 - 40 mg/ml 20 - 40 mg/ml sacharoza 5 do 20 mg/ml - - 5 do 20 mg/ml metionina 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml 0 - 1 mg/ml polisorbat 80 0,05 do 0,15 mg/ml 0,05 do 0,15 do mg/ml poloksamer 188 - - 0,5 - 3 mg/ml 0,5 do 3 mg/ml pH 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0 5,0 do 7,0
  29. 29. Kompozycja według dowolnego z wcześniejszych zastrz., znamienna tym, że ta kompozycja jest wybrana listy preparatów Ex do Lx Związek Preparat Ex Preparat Fx Preparat Gx Preparat Hx polipeptyd FVIIa 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml CaCl2 x 2H2O 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM NaCl 39 mM 39 mM 39 mM 39 mM glicyloglicyna 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM mannitol 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml sacharoza 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml metionina 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml 0,5 mg/ml polisorbat 80 0,1 mg/ml - 0,1 mg/ml - poloksamer 188 - 1,0 mg/ml - 1,0 mg/ml L-histydyna - - 10 mM 10 mM pH 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 Związek Preparat Ix Preparat Jx Preparat Kx Preparat Lx polipeptyd FVII 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml CaCl2 x 2H2O 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM NaCl 39 mM 39 mM 39 mM 39 mM glicyloglicyna 10 mM 10 mM 10 mM 10 mM
    PL 207 018 B1 mannitol 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml 25 mg/ml sacharoza 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml metionina - - - polisorbat 80 0,1 mg/ml - 0,1 mg/ml - poloksamer 188 - 1,0 mg/ml 1,0 mg/ml L-histydyna - - 10 mM 10 mM PH 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0 5,5 do 6,0
  30. 30. Kompozycje według dowolnego z zastrz. 24 do 29, znamienne tym, że polipeptyd czynnika VII jest ludzkim czynnikiem VIIa.
  31. 31. Sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII, znamienny tym, że zawiera etapy:
    i) dostarczania tego polipeptydu czynnika VII w roztworze zawierającym przynajmniej jeden środek stabilizujący składający się z połączenia sacharozy i poliolu oraz korzystnie przeciwutleniacza ii) przetwarzania tego roztworu tak, aby otrzymać stałą kompozycję o zawartości wilgoci nie większej niż 3% w/w.
  32. 32. Sposób według zastrz. 31, znamienny tym, że przeciwutleniacz jest wybrany z grupy składającej się z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny, glutationu i peptydów zawierających którekolwiek z homocysteiny, cysteiny, cystationiny, metioniny i glutationu.
  33. 33. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 32, znamienny tym, że poliol jest wybrany z grupy składającej się z mannitolu, sorbitolu i ksylitolu.
  34. 34. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 33, się od 0,5 do 75 mg/ml, korzystnie od 2 do 45 mg/ml, takiej jak od 5 mg/ml do 45 mg/ml, od 5 do 35 mg/ml, od 5 do 25 mg/ml, 5 do 20 mg/ml, 20 do 40 mg/ml lub od 20 do 30 mg/ml.
  35. 35. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 34, znamienny tym, że sacharoza jest obecna w ilości wahającej się od 0,5 do 75 mg/ml, korzystnie od 2 do 45 mg/ml, takiej jak od 5 mg/ml do 45 mg/ml, od 5 do 35 mg/ml, od 5 do 25 mg/ml lub od 5 do 20 mg/ml.
  36. 36. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 35, znamienny tym, że ten przeciwutleniacz jest obecny w ilości wahającej się od 0,05 do 10 mg/ml, korzystnie od 0,1 do 5 mg/ml, korzystniej od 0,1 mg/ml do 2,5 mg/ml, jeszcze korzystniej od 0,1 do 2 mg/ml, najkorzystniej od 0,1 do 1 mg/ml.
  37. 37. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 35, znamienny tym, że tym przeciwutleniaczem jest metionina.
  38. 38. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 37, znamienny tym, że tymi poliolem jest mannitol.
  39. 39. Sposób według dowolnego z zastrz. 31 do 38, znamienny tym, że to przetwarzanie obejmuje liofilizację.
  40. 40. Zastosowanie polipeptydu czynnika VII do przygotowania leku do leczenia zespołu odpowiadającego na czynnik VII, przy czym lek ten obejmuje kompozycję zawierającą i polipeptyd czynnika VII połączenie sacharozy i poliolu, przy czym ta kompozycja ma zawartość wilgoci nie większą niż 3%.
  41. 41. Zastosowanie według zastrz. 40, znamienne tym, że wspomniany zespół jest wybrany z grupy skł adają cej się z hemofilii A, hemofilii B, niedoboru czynnika XI, niedoboru czynnika VII, małopłytkowości, choroby obecności inhibitora czynnika krzepnięcia, terapii ancykoagulantem.
PL373904A 2002-06-21 2003-06-20 Kompozycja farmaceutyczna, sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII i zastosowanie polipeptydu czynnika VII PL207018B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200200963 2002-06-21
US39415302P 2002-07-03 2002-07-03

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL373904A1 PL373904A1 (pl) 2005-09-19
PL207018B1 true PL207018B1 (pl) 2010-10-29

Family

ID=34178323

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL373904A PL207018B1 (pl) 2002-06-21 2003-06-20 Kompozycja farmaceutyczna, sposób przygotowania stabilnego polipeptydu czynnika VII i zastosowanie polipeptydu czynnika VII

Country Status (16)

Country Link
US (11) US20040248793A1 (pl)
EP (2) EP1517698B2 (pl)
JP (1) JP4648002B2 (pl)
KR (2) KR20050013148A (pl)
CN (2) CN101912601B (pl)
AU (1) AU2003240438A1 (pl)
BR (1) BRPI0311959B8 (pl)
CA (1) CA2490342C (pl)
DK (2) DK1517698T4 (pl)
ES (2) ES2653555T3 (pl)
HU (1) HUE037603T2 (pl)
IL (1) IL165608A (pl)
PL (1) PL207018B1 (pl)
PT (2) PT1517698E (pl)
RU (1) RU2366451C2 (pl)
WO (1) WO2004000347A1 (pl)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040247607A1 (en) * 1999-11-08 2004-12-09 Novus International, Inc. Use of surfactants to stabilize oocysts
CN1607958A (zh) 2001-12-21 2005-04-20 诺和诺德医疗保健公司 因子ⅶ多肽的液体组合物
BRPI0311959B8 (pt) * 2002-06-21 2021-05-25 Novo Nordisk Healthcare Ag composição, métodos para preparar um polipeptídeo estável do fator vii, e para tratar uma síndrome responsiva do fator vii, e, uso do polipeptídeo do fator vii
EP1641487B1 (en) 2003-06-25 2012-02-29 Novo Nordisk Health Care AG Liquid composition of factor vii polypeptides
JP5306597B2 (ja) * 2003-07-01 2013-10-02 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 第ｖｉｉ因子ポリペプチドの液体水性薬学的組成物
AU2011203354B2 (en) * 2003-12-19 2014-07-17 Novo Nordisk Health Care Ag Stabilised compositions of factor VII polypeptides
KR20140093711A (ko) 2003-12-19 2014-07-28 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
EP2492261B1 (en) 2003-12-23 2015-02-18 Infinity Discovery, Inc. Analogs of benzoquinone-containing ansamycins for the treatment of cancer
MXPA06012676A (es) † 2004-05-04 2007-04-02 Novo Nordisk Healthcare Ag Glucoformas o-enlazadas de polipeptidos y metodos de fabricacion de los mismos.
JP2008531523A (ja) * 2005-02-24 2008-08-14 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト Ｖｉｉ因子ポリペプチド製剤を安定化する化合物
AU2012213951B2 (en) * 2005-04-28 2014-10-16 Novo Nordisk Health Care Ag A closed container comprising an activated factor VII polypeptide, processes for the preparation of the same, and a kit and a method for use of the kit
EP1877037A2 (en) * 2005-04-28 2008-01-16 Novo Nordisk Health Care AG A closed container comprising an activated factor vii polypeptide, processes for the preparation of the same, and a kit and a method for use of the kit
US8137677B2 (en) * 2005-10-06 2012-03-20 Allergan, Inc. Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions
ES2257225B1 (es) * 2006-02-17 2007-03-16 Grifols, S.A Preparacion terapeutica de fviia de muy alta pureza y metodo para su obtencion.
TW200806317A (en) * 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
JP2010513462A (ja) * 2006-12-20 2010-04-30 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ＶＩＩおよび第ＶＩＩａ因子組成物
CA2684211A1 (en) * 2007-04-12 2008-10-23 Infinity Discovery, Inc. Hydroquinone ansamycin formulations
JP5401446B2 (ja) * 2007-04-26 2014-01-29 バイエル ヘルスケア エルエルシー 凍結貯蔵を目的とした、組み換えタンパク質溶液の安定化
CN101674805A (zh) * 2007-05-02 2010-03-17 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 包括芳香族防腐剂和抗氧化剂的高浓度因子ⅶ多肽制剂
US7951368B2 (en) 2007-06-25 2011-05-31 Amgen Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
CN101648012A (zh) * 2008-04-24 2010-02-17 伊玛提克斯生物技术有限公司 结合到人类白细胞抗原(hla)ⅰ类或ⅱ类分子上用作疫苗的肿瘤相关肽新制剂
PL2113253T3 (pl) * 2008-04-30 2010-09-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Nowa postać leku - preparat zawierający peptydy nowotworowe wiążące się z antygenami ludzkich leukocytów klasy I i II, zastosowany w szczepionce
EP2348845A4 (en) 2008-10-15 2013-01-23 Infinity Pharmaceuticals Inc ANSAMYCIN HYDROQUINONE COMPOSITIONS
FR2947181B1 (fr) 2009-06-26 2012-05-04 Lfb Biotechnologies Composition de facteur vii
EP2364690A1 (en) 2010-02-12 2011-09-14 Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia Orally administrable pharmaceutical pellet of epidermal growth factor
CN102441172B (zh) * 2011-12-06 2014-05-07 中国医学科学院输血研究所 高纯度凝血酶原复合物制品冷冻干燥稳定剂
US8883979B2 (en) 2012-08-31 2014-11-11 Bayer Healthcare Llc Anti-prolactin receptor antibody formulations
RU2698210C2 (ru) * 2013-12-24 2019-08-23 Арес Трейдинг С.А. Состав fgf-18 в альгинатных/коллагеновых гидрогелях
CN104826117B (zh) * 2015-05-05 2017-11-14 广东卫伦生物制药有限公司 用于人体血清免疫球蛋白溶液制剂的储存稳定剂
CN104991079B (zh) * 2015-07-16 2016-04-06 青岛古高生物科技有限公司 一种凝血试剂用抗氧化剂
JP6882256B2 (ja) 2015-07-30 2021-06-02 バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド 骨格異形成症を処置するためのｃ型ナトリウム利尿ペプチド変異体の使用
CN106139127B (zh) * 2016-08-05 2020-04-07 无锡药明生物技术股份有限公司 重组凝血因子ⅷ冻干制剂
AR109621A1 (es) * 2016-10-24 2018-12-26 Janssen Pharmaceuticals Inc Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec
CN112138149A (zh) * 2019-06-28 2020-12-29 北京基科晟斯医药科技有限公司 重组凝血因子viii制剂
EP3833381B1 (en) 2019-08-15 2022-08-03 Catalyst Biosciences, Inc. Modified factor vii polypeptides for subcutaneous administration
WO2023245335A1 (en) * 2022-06-20 2023-12-28 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd . Activators of coagulation factor x and formulations thereof for treating bleeding disorders
CN117860874B (zh) * 2024-03-12 2024-07-02 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 重组人凝血因子VIIa的药物组合物

Family Cites Families (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US115590A (en) 1871-06-06 Lfxlproxeixie
DE2916711A1 (de) 1979-04-25 1980-11-06 Behringwerke Ag Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung
US4956386A (en) * 1980-04-25 1990-09-11 Gist-Brocades N.V. Pharmaceutical compositions and process for their preparation
US4404132A (en) 1980-05-27 1983-09-13 Cutter Laboratories, Inc. Blood coagulation promoting product
CA1182748A (en) 1980-11-21 1985-02-19 Gerard Marx Method for synthesizing procoagulant factor viii activity
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
US4382083A (en) 1981-06-25 1983-05-03 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Therapeutic method for treating blood-clotting defects with factor VIIa
GR860984B (en) 1985-04-17 1986-08-18 Zymogenetics Inc Expression of factor vii and ix activities in mammalian cells
EP0225160B1 (en) 1985-11-26 1991-08-21 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for the treatment of bleeding disorders
US5180583A (en) 1985-11-26 1993-01-19 Hedner Ulla K E Method for the treatment of bleeding disorders
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
WO1988000210A1 (en) 1986-06-24 1988-01-14 Nordisk Gentofte A/S A process for producing a coagulation active complex of factor viii fragments
ES2045167T5 (es) 1987-10-23 1996-07-01 Centre Regional De Transfusion Preparacion de concentrado de factor ix humano de elevada pureza y de otras proteinas plasmaticas.
CA1329760C (en) 1987-10-29 1994-05-24 Ted C. K. Lee Plasma and recombinant protein formulations in high ionic strength media
US5472850A (en) 1991-04-10 1995-12-05 Oklahoma Medical Research Foundation Quantitative clotting assay for activated factor VII
JP2824430B2 (ja) 1989-08-02 1998-11-11 財団法人化学及血清療法研究所 血液凝固第▲ｖｉｉ▼因子または活性型血液凝固第▲ｖｉｉ▼因子の調製方法
US5580560A (en) 1989-11-13 1996-12-03 Novo Nordisk A/S Modified factor VII/VIIa
DE3939346A1 (de) 1989-11-29 1991-06-06 Behringwerke Ag Arzneimitel zur subkutanen oder intramuskulaeren applikation enthaltend polypeptide
DE4001451A1 (de) 1990-01-19 1991-08-01 Octapharma Ag Stabile injizierbare loesungen von faktor viii und faktor ix
JP3330932B2 (ja) 1990-01-29 2002-10-07 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 抗凝固剤タンパク質
ATE273393T1 (de) 1991-02-28 2004-08-15 Zymogenetics Inc Modifizierter faktor-vii
US5788965A (en) 1991-02-28 1998-08-04 Novo Nordisk A/S Modified factor VII
US5817788A (en) 1991-02-28 1998-10-06 Zymogenetics, Inc. Modified factor VII
US5833982A (en) 1991-02-28 1998-11-10 Zymogenetics, Inc. Modified factor VII
US5997864A (en) 1995-06-07 1999-12-07 Novo Nordisk A/S Modified factor VII
AU2309692A (en) * 1991-07-03 1993-02-11 Cryolife, Inc. Method for stabilization of biomaterials
FR2684999A1 (fr) 1991-12-16 1993-06-18 Aquitaine Dev Transf Sanguine Procede de fabrication d'un concentre de facteur vii active de haute purete essentiellement depourvu des facteurs vitamine k dependants et des facteurs viiic et viiicag.
JP3155797B2 (ja) 1991-12-26 2001-04-16 株式会社日立製作所 過電圧自己保護型半導体装置、及び、それを使用した半導体回路
WO1993022336A1 (en) 1992-04-30 1993-11-11 Alpha Therapeutic Corporation Improved solubilization and stabilization of factor viii complex
DK0658168T3 (da) 1992-08-27 2001-01-22 Sanquin Bloedvoorziening Antistoffer, som er specifikke for et hæmostatisk protein, anvendelse heraf til isolering af intakt protein, hæmostatiske p
DK38293D0 (da) 1993-03-31 1993-03-31 Novo Nordisk As Fremstilling af proteiner
SE9301581D0 (sv) 1993-05-07 1993-05-07 Kabi Pharmacia Ab Protein formulation
DE69429429T2 (de) 1993-05-21 2002-05-16 Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd MODIFIZIERTER FAKTOR VII zur Hemmung der vaskulären Restenosis und Thrombozytenablagerung
AU7254894A (en) 1993-07-23 1995-02-20 Baxter International Inc. Activated human factor viii and method of preparation
US6277828B1 (en) 1993-08-20 2001-08-21 Syntex (U.S.A.) Inc. Pharmaceutical formulations of nerve growth factor
US5576291A (en) 1993-09-13 1996-11-19 Baxter International Inc. Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency
IL113010A (en) 1994-03-31 1999-10-28 Pharmacia & Upjohn Ab Pharmaceutical formulation comprising factor viii with an activity of at least 500iu/ml and an enhancer for improved subcutaneous intramuscular or intradermal administration
US6372716B1 (en) 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
US5580856A (en) 1994-07-15 1996-12-03 Prestrelski; Steven J. Formulation of a reconstituted protein, and method and kit for the production thereof
DE4435520A1 (de) 1994-10-04 1996-04-11 Immuno Ag Verfahren zur Trennung von rekombinantem pro-Faktor IX von rekombinantem Faktor IX
SE9403915D0 (sv) 1994-11-14 1994-11-14 Annelie Almstedt Process A
US5649959A (en) 1995-02-10 1997-07-22 Sherwood Medical Company Assembly for sealing a puncture in a vessel
US6255091B1 (en) 1995-04-28 2001-07-03 Axys Pharmaceuticals, Inc. Potentiating metal mediated serine protease inhibitors with cobalt or zinc ions
DE19531637A1 (de) 1995-08-28 1997-03-06 Immuno Ag Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung
DE19538715A1 (de) 1995-10-18 1997-04-30 Behringwerke Ag Verfahren zur Reinigung von Faktor VII und aktiviertem Faktor VII
SE9503679D0 (sv) 1995-10-20 1995-10-20 Pharmacia Ab Antioxidants
US5993795A (en) 1995-11-09 1999-11-30 Takemoto Yushi Kabushiki Kaisha Protein composition derived from sesame seed and use thereof
US5925738A (en) 1995-12-01 1999-07-20 The American National Red Cross Methods of production and use of liquid formulations of plasma proteins
US6320029B1 (en) 1996-11-29 2001-11-20 The American National Red Cross Methods of production and use of liquid formulations of plasma proteins
US5830852A (en) 1995-12-19 1998-11-03 Cobra Therapeutics, Ltd. Compositions for insulin-receptor mediated nucleic acid delivery
US5770700A (en) 1996-01-25 1998-06-23 Genetics Institute, Inc. Liquid factor IX formulations
DE19903693A1 (de) 1998-04-24 1999-10-28 Centeon Pharma Gmbh Protease zur Aktivierung des Gerinnungsfaktors VII
TWI240627B (en) 1996-04-26 2005-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Erythropoietin solution preparation
US5763401A (en) * 1996-07-12 1998-06-09 Bayer Corporation Stabilized albumin-free recombinant factor VIII preparation having a low sugar content
NZ336548A (en) 1996-12-24 2001-09-28 Biogen Inc Stable liquid interferon formulations comprising an amino acid as the stabilising agent
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
CZ298429B6 (cs) 1997-04-28 2007-10-03 Eli Lilly And Company Stabilní lyofilizovaný prostredek
US6461610B1 (en) 1997-07-18 2002-10-08 Novo Nordisk A/S Methods for modifying cell motility using factor VIIa or inactivated factor VIIa
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
AT409334B (de) 1997-09-19 2002-07-25 Immuno Ag Pharmazeutisches präparat enthaltend vitamin k-abhängige einzelfaktoren
US6017882A (en) 1997-10-23 2000-01-25 Regents Of The University Of Minnesota Modified vitamin K-dependent polypeptides
RU2142278C1 (ru) * 1997-10-31 1999-12-10 Чухаджян Ара Гарникович Гемостатическое средство местного действия
AT408613B (de) 1998-06-17 2002-01-25 Immuno Ag Pharmazeutisches faktor vii-präparat
DE69928961T2 (de) 1998-10-07 2006-07-13 Trinity Biotech Manufacturing Ltd. Thromboplastin-reagenzien und verfahren zur herstellung und anwendung derselben
DE19853033A1 (de) 1998-11-18 2000-05-25 Centeon Pharma Gmbh Stabilisierte Proteinzubereitung für einen Gewebekleber
EP2193809B1 (en) * 1999-02-22 2015-04-08 University of Connecticut Albumin-free factor VIII formulations
JP2000247903A (ja) 1999-03-01 2000-09-12 Chugai Pharmaceut Co Ltd 長期安定化製剤
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
EP1194161B1 (en) 1999-07-13 2005-11-23 Biovitrum Ab Stable factor viii compositions
DE19937218A1 (de) 1999-08-06 2001-02-08 Aventis Behring Gmbh Verfahren zur Reindarstellung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder eines Gemisches beider Proteine mittels Affinitätschromatographie
US6586574B1 (en) 1999-08-17 2003-07-01 Nn A/S Stabilization of freeze-dried cake
DE60009926T2 (de) 1999-08-17 2005-04-07 Novo Nordisk Health Care Ag Stabilisierung von gefriergetrocknetem kuchen
JP4451514B2 (ja) 1999-08-24 2010-04-14 財団法人化学及血清療法研究所 血液凝固第ｖｉｉ因子改変体
TWI245645B (en) 1999-09-08 2005-12-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Protein solution formulations and stabilization methods thereof
US6750053B1 (en) 1999-11-15 2004-06-15 I-Stat Corporation Apparatus and method for assaying coagulation in fluid samples
PL206148B1 (pl) 2000-02-11 2010-07-30 Bayer HealthCare LLCBayer HealthCare LLC Koniugat polipeptydowy, polipeptyd, sekwencja nukleotydowa, wektor ekspresyjny, komórka gospodarz, sposób wytwarzania koniugatu polipeptydowego, środek farmaceutyczny i zastosowanie koniugatu polipeptydowego
AU2001256148A1 (en) * 2000-05-03 2001-11-12 Novo-Nordisk A/S Subcutaneous administration of coagulation factor vii
WO2001083725A1 (en) 2000-05-03 2001-11-08 Novo Nordisk A/S Human coagulation factor vii variants
US7015194B2 (en) 2000-05-10 2006-03-21 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical composition comprising factor VIIa and anti-TFPI
EP1282438B1 (en) 2000-05-10 2005-08-03 Novo Nordisk Health Care AG Use of pharmaceutical composition comprising a factor viia and a factor xiii
JP4361728B2 (ja) 2000-09-13 2009-11-11 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト ヒト凝固因子ｖｉｉ変異型
IL154879A0 (en) 2000-10-02 2003-10-31 Novo Nordisk As Factor vii glycoforms
RU2325181C2 (ru) * 2000-10-02 2008-05-27 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг Гликоформы фактора vii
US7173000B2 (en) 2000-11-09 2007-02-06 The Scripps Research Institute Modified factor VIIa
EP1226829B1 (de) 2001-01-08 2008-06-11 CSL Behring GmbH Stabilisierte Flüssigzubereitung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease oder ihres Proenzyms
US6825323B2 (en) 2001-01-10 2004-11-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Compositions for treatment of hemorrhaging with activated factor VIIa in combination with fibrinogen and methods of using same
AU2002249096B2 (en) 2001-03-22 2007-06-28 Novo Nordisk Health Care Ag Coagulation factor VII derivatives
JP4813017B2 (ja) 2001-07-10 2011-11-09 一般財団法人化学及血清療法研究所 薬剤学的に安定な止血用組成物
GB0117879D0 (en) 2001-07-21 2001-09-12 Common Services Agency Storage of liquid compositions
US6858587B2 (en) 2001-11-02 2005-02-22 Novo Nordisk Pharmaceuticals, Inc. Use of tissue factor agonist or tissue factor antagonist for treatment of conditions related to apoptosis
US20030119743A1 (en) 2001-11-09 2003-06-26 Rasmus Rojkjaer Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and tissue plasminogen inhibitors
US7125846B2 (en) 2001-11-09 2006-10-24 Novo Nordisk Healthcare A/G Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor V polypeptides
US7078479B2 (en) 2001-11-09 2006-07-18 Novo Nordisk Healthcare A/G Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and alpha2-antiplasmin polypeptides
WO2003039585A1 (en) 2001-11-09 2003-05-15 Novo Nordisk Health Care Ag Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and protein c inhibitors
KR20040065278A (ko) 2001-12-21 2004-07-21 노보 노르디스크 에이/에스 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물
CN1607958A (zh) 2001-12-21 2005-04-20 诺和诺德医疗保健公司 因子ⅶ多肽的液体组合物
EP1458407A1 (en) 2001-12-21 2004-09-22 Novo Nordisk A/S Liquid composition of modified factor vii polypeptides
EP1485380B1 (en) 2002-03-15 2010-05-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Azolylaminoazines as inhibitors of protein kinases
US20040009918A1 (en) 2002-05-03 2004-01-15 Hanne Nedergaard Stabilised solid compositions of modified factor VII
ES2377959T3 (es) † 2002-05-03 2012-04-03 Novo Nordisk Health Care Ag Composiciones sólidas estabilizadas de factor VII modificado
BRPI0311959B8 (pt) 2002-06-21 2021-05-25 Novo Nordisk Healthcare Ag composição, métodos para preparar um polipeptídeo estável do fator vii, e para tratar uma síndrome responsiva do fator vii, e, uso do polipeptídeo do fator vii
US6933808B2 (en) 2002-07-17 2005-08-23 Qing Ma Microelectromechanical apparatus and methods for surface acoustic wave switching
EP1422309A1 (de) 2002-11-22 2004-05-26 Siemens Aktiengesellschaft Verwendung einer Sprühkompaktierungsanlage zur Erzeugung einer Schicht und Schichtsystem hergestellt mittels einer Sprühkompaktierungsanlage und Schichtsystem
AT501088A2 (de) 2002-12-18 2006-06-15 Bio Prod & Bio Eng Ag Stabile therapeutische proteine
CA2518327A1 (en) 2003-03-18 2004-09-30 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid, aqueous, pharmaceutical compositions of factor vii polypeptides
US7897734B2 (en) 2003-03-26 2011-03-01 Novo Nordisk Healthcare Ag Method for the production of proteins
MXPA05012476A (es) 2003-05-23 2006-02-22 Novo Nordisk Healthcare Ag Estabilizacion de proteina en solucion.
EP1646398A2 (en) 2003-06-13 2006-04-19 Novo Nordisk Health Care AG Formulations comprising factor viia and a factor vii related polypeptide
JP5306597B2 (ja) 2003-07-01 2013-10-02 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 第ｖｉｉ因子ポリペプチドの液体水性薬学的組成物
CN102872451A (zh) 2003-08-14 2013-01-16 诺和诺德医疗保健公司 因子vii多肽类的含水液体药物组合物
KR20140093711A (ko) 2003-12-19 2014-07-28 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
EP1877037A2 (en) 2005-04-28 2008-01-16 Novo Nordisk Health Care AG A closed container comprising an activated factor vii polypeptide, processes for the preparation of the same, and a kit and a method for use of the kit

Also Published As

Publication number Publication date
US20200254072A1 (en) 2020-08-13
CN1671410B (zh) 2010-05-12
CN101912601A (zh) 2010-12-15
DK2283856T3 (da) 2017-11-20
US20190328851A1 (en) 2019-10-31
US20180085439A1 (en) 2018-03-29
US20150343064A1 (en) 2015-12-03
PL373904A1 (pl) 2005-09-19
US8729022B2 (en) 2014-05-20
EP2283856A1 (en) 2011-02-16
US20130017184A1 (en) 2013-01-17
ES2523655T3 (es) 2014-11-28
CA2490342C (en) 2015-06-16
BRPI0311959B8 (pt) 2021-05-25
CN101912601B (zh) 2012-08-29
EP1517698B1 (en) 2014-08-13
BRPI0311959B1 (pt) 2021-01-05
US20040248793A1 (en) 2004-12-09
IL165608A0 (en) 2006-01-15
RU2366451C2 (ru) 2009-09-10
EP1517698B2 (en) 2017-12-06
US20170128550A1 (en) 2017-05-11
US8299029B2 (en) 2012-10-30
JP2006513983A (ja) 2006-04-27
PT1517698E (pt) 2014-11-19
KR101212025B1 (ko) 2013-01-09
CA2490342A1 (en) 2003-12-31
JP4648002B2 (ja) 2011-03-09
KR20050013148A (ko) 2005-02-02
BR0311959A (pt) 2005-04-26
RU2005101340A (ru) 2005-12-10
DK1517698T3 (en) 2014-11-24
DK1517698T4 (da) 2018-01-29
US20160228553A1 (en) 2016-08-11
HUE037603T2 (hu) 2018-09-28
AU2003240438A1 (en) 2004-01-06
KR20110049897A (ko) 2011-05-12
ES2653555T3 (es) 2018-02-07
EP1517698A1 (en) 2005-03-30
US20190111118A1 (en) 2019-04-18
US20140178356A1 (en) 2014-06-26
PT2283856T (pt) 2017-12-26
IL165608A (en) 2011-04-28
US20070207956A1 (en) 2007-09-06
WO2004000347A1 (en) 2003-12-31
CN1671410A (zh) 2005-09-21
EP2283856B1 (en) 2017-09-20
ES2523655T5 (es) 2018-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200254072A1 (en) Stabilised Solid Compositions of Factor VII Polypeptides
CA2549593C (en) Stabilised compositions of factor vii polypeptides
AU2011203354A1 (en) Stabilised compositions of factor VII polypeptides

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification