PL201084B1 - Analogi SP-C, syntetyczny surfaktant oraz zastosowanie analogów SP-C i zastosowanie polimyksyny - Google Patents
Analogi SP-C, syntetyczny surfaktant oraz zastosowanie analogów SP-C i zastosowanie polimyksynyInfo
- Publication number
- PL201084B1 PL201084B1 PL349785A PL34978500A PL201084B1 PL 201084 B1 PL201084 B1 PL 201084B1 PL 349785 A PL349785 A PL 349785A PL 34978500 A PL34978500 A PL 34978500A PL 201084 B1 PL201084 B1 PL 201084B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- surfactant
- analogs
- lks
- formula
- leu
- Prior art date
Links
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title abstract description 59
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 20
- 102000007620 Pulmonary Surfactant-Associated Protein C Human genes 0.000 claims abstract description 97
- 108010007125 Pulmonary Surfactant-Associated Protein C Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims abstract description 12
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 40
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 37
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 22
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 claims description 16
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 claims description 16
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 claims description 16
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003580 lung surfactant Substances 0.000 claims description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical group CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BIABMEZBCHDPBV-UHFFFAOYSA-N dipalmitoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Chemical group CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 38
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 30
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 17
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 11
- BWKILASWCLJPBO-UHFFFAOYSA-N (3-dodecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C BWKILASWCLJPBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 7
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MYAPQOBHGWJZOM-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C MYAPQOBHGWJZOM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- DGDCSVGVWWAJRS-AVGNSLFASA-N Pro-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 DGDCSVGVWWAJRS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000334993 Parma Species 0.000 description 3
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229940041153 polymyxins Drugs 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 3
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 125000003290 L-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- JLWZLIQRYCTYBD-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JLWZLIQRYCTYBD-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- 201000005085 Meconium Aspiration Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 2
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEXPNDORFYHJTM-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JEXPNDORFYHJTM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 101000612671 Homo sapiens Pulmonary surfactant-associated protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- UBZGNBKMIJHOHL-BZSNNMDCSA-N Leu-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 UBZGNBKMIJHOHL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- YNNPKXBBRZVIRX-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YNNPKXBBRZVIRX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 1
- AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 241000287531 Psittacidae Species 0.000 description 1
- 108010007100 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Proteins 0.000 description 1
- 102100027773 Pulmonary surfactant-associated protein A2 Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000978 circular dichroism spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229940092456 curosurf Drugs 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N fenofibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(=O)OC(C)C)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000047087 human SFTPC Human genes 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003434 inspiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 208000005923 otitis media with effusion Diseases 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108010050934 polyleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 208000024036 serous otitis media Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/785—Alveolar surfactant peptides; Pulmonary surfactant peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
Wynalazek dotyczy analogów SP-C o czynno sci powierzchniowej i ich zastosowania oraz za- stosowania polimyksyny do wytwarzania sztucznych surfaktantów przydatnych do stosowania we wszystkich przypadkach niedoboru surfaktantu. Ujawniono równie z syntetyczny surfaktant zawieraj a- cy, co najmniej jeden analog SP-C w mieszaninie z lipidami i fosfolipidami. PL PL PL PL
Description
(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 201084 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 349785 (13) (22) Data zgłoszenia: 09.02.2000 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
09.02.2000, PCT/EP00/01044 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
17.08.2000, WO00/47623 PCT Gazette nr 33/00 (51) Int.Cl.
C07K 14/785 (2006.01) A61P 11/00 (2006.01)
Opis patentowy przedrukowano ze względu na zauważ one błędy
Analogi SP-C, syntetyczny surfaktant oraz zastosowanie analogów SP-C i zastosowanie polimyksyny
| (73) Uprawniony z patentu: CHIESI FARMACEUTICI S.P.A.,Parma,IT | |
| (30) Pierwszeństwo: | |
| 12.02.1999,IT,MI99A000275 | (72) Twórca(y) wynalazku: Tore Curstedt,Parma,IT Jan Johansson,Parma,IT |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: | Hans Jornvall,Parma,IT |
| 09.09.2002 BUP 19/02 | Bengt Robertson,Parma,IT Paolo Ventura,Parma,IT |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | |
| 31.03.2009 WUP 03/09 | (74) Pełnomocnik: Elżbieta Pietruszyńska-Dajewska, POLSERVICE, Kancelaria Rzeczników Patentowych Sp. z o.o. |
(57) Wynalazek dotyczy analogów SP-C o czynności powierzchniowej i ich zastosowania oraz zastosowania polimyksyny do wytwarzania sztucznych surfaktantów przydatnych do stosowania we wszystkich przypadkach niedoboru surfaktantu. Ujawniono również syntetyczny surfaktant zawierający, co najmniej jeden analog SP-C w mieszaninie z lipidami i fosfolipidami.
PL 201 084 B1
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy analogów SP-C, syntetycznego surfaktantu oraz zastosowania analogów SP-C i zastosowania polimyksyny. Nowe sztuczne peptydy wykazują czynność powierzchniową. W szczególnoś ci, analogi SP-C, połączone z odpowiednimi lipidami, szczególnie skutecznie zmniejszają napięcie powierzchniowe na granicy faz powietrze-ciecz. Tak więc, tego rodzaju peptydy można stosować w połączeniu z lipidami, i ewentualnie w połączeniu z SP-B lub jego aktywnym analogiem lub substytutem SP-B, do wytwarzania syntetycznych surfaktantów przydatnych do leczenia zespołu zaburzeń oddechowych (RDS), innych niedoborów lub dysfunkcji surfaktantu, pokrewnych chorób płucnych, takich jak zapalenie płuc, zapalenie oskrzeli, astma, zespół aspiracji mekonium, a także innych chorób, takich jak surowicze zapalenie ucha środkowego.
Tło wynalazku
Płucny surfaktant zmniejsza napięcie powierzchniowe na granicy faz powietrze-ciecz wyściółki pęcherzyków płucnych, co chroni płuca przed zapadnięciem na koniec wydechu. Niedobór surfaktantu to pospolite zaburzenie u wcześniaków, powodujące zespół zaburzeń oddechowych (RDS) (respiratory distress syndrome), który można skutecznie leczyć naturalnymi surfaktantami ekstrahowanymi z płuc zwierzęcych (Fujiwara, T. i Robertson B. (1992), w: Robertson, B., van Golde, L. M. G. i Batenburg, B. (red.) Pulmonary Surfactant: From Molecular Biology to Clinical Practice, Amsterdam, Elsevier, str. 561-592). Główne składniki tych preparatów surfaktantów stanowią fosfolipidy takie jak 1,2-dipalmitoilo-sn-glicero-3-fosfocholina (DPPC), fosfatydyloglicerol (PG) i hydrofobowe białka powierzchniowo czynne B i C (SP-B i SP-C). Hydrofilowe białka powierzchniowo czynne SP-A i SP-D, które są lektynami kolagenowymi typu C (zależnymi od Ca2+) uznawanymi za działające przede wszystkim w układzie obronnym gospodarza, normalnie, dzięki stosowanym procedurom ekstrakcji rozpuszczalnikami organicznymi, nie są zawarte w preparatach surfaktantów.
SP-B i SP-C stanowią tylko około 1-2% masy surfaktantu, ale wciąż są w stanie wywierać dramatyczny wpływ na poprawę czynności powierzchniowej, w porównaniu z czystymi preparatami lipidów (Curstedt, T., i in. (1987) Eur. J. Biochem. 168, 255-262; Takahashi, A., Nemoto, T., i Fujiwara, T. (1994) Acta Paediatr. Jap. 36, 613-618). Określono pierwszorzędowe i drugorzędowe struktury SP-B i SP-C oraz trzeciorzędową strukturę SP-C w roztworze (patrz 4). SP-B składa się z dwóch identycznych łańcuchów polipeptydowych mających 79 aminokwasów, połączonych międzyłańcuchowym mostkiem dwusiarczkowym (Curstedt, T. i in. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 2985-2989; Johansson, J., Curstedt, T. i JómvaN, H. (1991) Biochemistry 30, 6917-6921). Każdy łańcuch monomeryczny ma trzy wewnątrzłańcuchowe mostki dwusiarczkowe i co najmniej cztery helisy amfipatyczne wykazujące jedną stronę polarną i jedną stronę niepolarną, dzięki czemu SP-B może oddziaływać z dwiema dwuwarstwami lipidowymi i doprowadzać je do bezpośredniej bliskości (Andersson, M. i in. (1995) FEBS Lett . 362, 328-332). SP-C to lipoproteina złożona z 35 reszt aminokwasów z domeną α-helikalną między resztami 9-34 (Johansson, J. i in. (1994) Biochemistry 33, 6015-6023). Helisa składa się głównie z reszt walilowych i jest osadzona w podwójnej warstwie lipidowej i ustawiona równolegle z lipidowymi łańcuchami acylowymi (Vandenbussche, i in. (1992) Eur. J. Biochem., 203, 201-209). Dwie grupy palmitoilowe są kowalencyjnie związane z resztami cysteiny w pozycjach 5 i 6 w N-końcowej części peptydu (Curstedt, T. i in. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 2985-2989). Dwie zachowane reszty naładowane dodatnio, arginina i lizyna, w pozycjach 11 i 12, ewentualnie oddziałują z ujemnie naładowanymi grupami główek błony lipidowej, zwiększając w konsekwencji jej sztywność. Sztywność oddziaływania lipid-peptyd może maleć w stronę C-końca, ponieważ zawiera on tylko reszty małe lub hydrofobowe, co sprawia, że ta część jest potencjalnie bardziej mobilna w dwuwarstwie fosfolipidowej. Uważa się, że SP-C wpływa na grubość i płynność otaczających lipidów przez skrajnie trwałą helisę poliwalilową (Johansson, J., i Curstedt, T. (1997) Eur. J. Biochem. 244, 675-693).
Stan techniki
Ponieważ preparaty surfaktantów otrzymywane z tkanki zwierzęcej mają pewne wady, takie jak ich ograniczona dostępność oraz możliwość, że zawierają one czynniki zakaźne i indukują odczyny immunologiczne, podejmowano próby tworzenia syntetycznych surfaktantów (Johansson, J. i Curstedt, T. (1997) Eur. J. Biochem. 244, 675-693; Johansson, J. i in. (1996) Acta Paediatr. 85, 642-646), zazwyczaj z lipidów syntetycznych i białek hydrofobowych.
Poprzednia praca wykazała, że syntetyczne SP-C nie może zwijać się tak, jak natywny peptyd, w konformację α-helikalną konieczną dla optymalnej czynności powierzchniowej (Johansson, J. i in. (1995) Biochem. J., 307, 535-541), a więc nie oddziałuje właściwie z lipidami powierzchniowo czynnymi.
PL 201 084 B1
Wskutek tego, syntetyczne analogi SP-C nie zwijają się jak natywny peptyd i nie oddziałują właściwie z lipidami powierzchniowo czynnymi. W celu obejścia tego problemu dokonano kilku prób zmodyfikowania sekwencji, na przykład przez zastąpienie w natywnym SP-C wszystkich helikalnych reszt
Val przez Leu, która mocno faworyzuje konformację α-helikalną. Odpowiedni analog transmembranowy, SP-C(Leu), w połączeniu z DPPC : PG : PA (68 : 22 : 9) (wag.), wykazywał dobre rozprzestrzenianie się na granicy faz powietrze-ciecz. Jednak maksymalna wartość napięcia powierzchniowego podczas cyklicznej kompresji powierzchni (Ymax) była znacznie wyższa, niż dla natywnego środka powierzchniowo czynnego. Ponadto nie można było wytworzyć mieszanin lipid-peptyd o stężeniach wyższych niż około 20 mg/ml, prawdopodobnie wskutek tworzenia oligomerów peptydu (Nilsson, G. i in. (1998) Eur. J. Biochem. 255, 116-124). Inni syntetyzowali bioaktywne polileucynowe analogi SP-C o różnych długościach (Takei, T. i in. (1996) Biol. Pharm. Buli. 19, 1550-1555). W tych ostatnich badaniach nie opisano ani autooligomeryzacji, ani problemów wytwarzania próbek o wysokim stężeniu lipidów.
Rozmaite publikacje dotyczą problemu uzyskania analogów peptydowych naturalnych peptydów powierzchniowo czynnych, dając szereg różnych rozwiązań. Wśród tych publikacji, WO 93/21225, EP 733645, WO 96/17872, dla Tokyo Tanabe, ujawniają analogi peptydowe naturalnego SP-C, które w ogólności różnią się od natywnego peptydu sekwencją części N-końcowej.
Zgłoszenia patentowe Scripps Research Institute WO 89/06657 i WO 92/22315 ujawniają analogi SP-B mające naprzemienne reszty aminokwasowe hydrofobowe i hydrofilowe. Między innymi zastrzega się peptyd (KL4) zawierający naprzemienne reszty leucyny i lizyny.
Clercx A. i in., Eur. J. Biochem. 229, 465-72, 1995, ujawniają peptydy o różnych długościach odpowiadające N-końcowej części wieprzowego SP-C oraz peptydy hybrydowe pochodzące od wieprzowego SP-C i bakteriorodopsyny.
Johansson J. i in., Biochem. J. 307, 535:41, 1995, ujawniają peptydy syntetyczne, które różnią się od natywnego wieprzowego SP-C przez podstawienie pewnych aminokwasów.
WO 89/04326 dla California Biotechnology - Byk Gulden, i WO 91/18015 dla California Biotechnology - Scios Nova, ujawniają analogi SP-C zawierające początkową sekwencję N-końcową, w której dwie reszty Cys naturalnego SP-C są zastąpione przez dwie reszty Ser.
Opis wynalazku
Obecnie stwierdzono, że peptydy będące analogami SP-C, które łączą następujące cechy charakterystyczne:
i. podstawienie reszt Val przez inne reszty obojętne i hydrofobowe;
ii. podstawienie reszt Cys przez reszty Ser;
iii. insercja dodatnio naładowanych reszt aminokwasów lub reszt aminokwasów o dużej objętości w sekwencję SP-C, wykazują szczególnie korzystne właściwości dla zmniejszania napięcia powierzchniowego. W szczególności stwierdzono, że ta ostatnia cecha, dzięki ładunkom dodatnim wnoszonym przez reszty polarne, albo zawada przestrzenna wnoszona przez podstawniki o dużej objętości, umożliwia uniknięcie autooligomeryzacji.
Przedmiotem wynalazku są analogi SP-C o wzorze ogólnym (I), zgodnie z jednoliterowym kodem aminokwasów: FeGf IPZZPVHLKR(XaB)n(XbB)n(XcB)mXdGALLMGL (I) w którym:
X oznacza aminokwas wybrany z grupy obejmującej I, L, Nle (norleucynę);
B oznacza aminokwas wybrany z grupy obejmującej K, W, F, Y, ornitynę;
Z oznacza S i może być ewentualnie powiązana przez wiązanie estrowe z grupą acylową zawierającą 12-22 atomów węgla;
a oznacza liczbę całkowitą od 1 do 19; b oznacza liczbę całkowitą od 1 do 19; c oznacza liczbę całkowitą od 1 do 21; d oznacza liczbę całkowitą od 0 do 20; e oznacza 0 lub 1;
f oznacza 0 lub 1; n oznacza 0 lub 1; m oznacza 0 lub 1, pod warunkami, że:
- n + m > 0;
- f > e;
PL 201 084 B1
- (XaB)n(XbB)n(XcB)mXd oznacza sekwencję maj ą c ą maksymalnie 22 aminokwasy, korzystnie od do 22 aminokwasów.
Korzystnie analogi SP-C mają wzór (la):
(la) FGIPSSPVHLKRX4BX4BX4BXGALLMGL.
Korzystnie analogi SP-C mają wzór (Ib):
(Ib) FGIPSSPVHLKRX5BX5BX4GALLMGL.
Korzystnie analogi SP-C mają wzór (Ic):
(Ic) FGIPSSPVHLKRX4BX11GALLMGL.
Korzystnie analogi SP-C mają wzór (Id):
(Id) FGIPSSPVHLKRX8BX7GALLMGL.
Korzystnie analogi SP-C mają wzór (le):
(le) FGIPSSPVHLKRX11BX4GALLMGL.
Korzystnie w tych analogach SP-C reszty Ser są acylowane, korzystnie grupami palmitoilowymi.
Korzystnie B oznacza lizynę lub fenyloalaninę i X oznacza leucynę, izoleucynę lub norleucynę.
Korzystniej analogi SP-C, wybrane są z grupy obejmującej:
SP-C (LKS) FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLKILLLKLGALLMGL
SP-C (LKS)! FGIPSSPVHLKRLLILLKLLLLIKLLILGALLMGL
SP-C (LKS)2 FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLLILLLILGALLMGL
SP-C (LKS)3 FGIPSSPVHLKRLLILLLLLKLILLLILGALLMGL
SP-C (LKS)4 FGIPSSPVHLKRLLILLLLLLLIKLLILGALLMGL
SP-C (LFS) FGIPSSPVHLKRLLILFLLLLFILLLFLGALLMGL.
Przedmiotem wynalazku jest syntetyczny surfaktant, charakteryzujący się tym, że zawiera co najmniej jeden analog SP-C o wzorze (I) w mieszaninie z lipidami i fosfolipidami.
Korzystnie mieszanina lipidów/fosfolipidów zawiera DPPG, PG, PA.
Korzystnie syntetyczny surfaktant ponadto zawiera SP-B lub jego aktywną pochodną lub polimyksynę.
Korzystnie syntetyczny surfaktant ma postać roztworu, dyspersji, zawiesiny, suchego proszku.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie analogów SP-C określonych powyżej do wytwarzania sztucznego surfaktantu do stosowania we wszystkich przypadkach niedoboru surfaktantu płucnego lub pokrewnych dysfunkcji.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie polimyksyny, korzystnie polimyksyny B, do wytwarzania sztucznego surfaktantu, do leczenia wszystkich przypadków niedoboru surfaktantu płucnego lub pokrewnych dysfunkcji.
Korzystnie niedobór surfaktantu stanowi zespół zaburzeń oddechowych.
Korzystne peptydy według wynalazku o wzorze (I) mają następujące sekwencje:
(la) FGIPSSPVHLKRX4BX4BX4BXGALLMGL (lb) FGIPSSPVHLKRX5BX5BX4GALLMGL (lc) FGIPSSPVHLKRX4BX11GALLMGL (ld) FGIPSSPVHLKRX8BX7GALLMGL (le) FGIPSSPVHLKRX11BX4GALLMGL
Wśród sekwencji (la) - (le) zalecane są te, które mają B = Lys lub Phe i X = Leu, Ile lub Nle.
Zgodnie z korzystnymi realizacjami wynalazku, peptydy o wzorze (la) -(If) mają następujące sekwencje, odpowiednio:
FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLKILLLKLGALLMGL [SP-C(LKS)]
FGIPSSPVHLKRLLILLKLLLLIKLLILGALLMGL [SP-C (LKS)1]
FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLLILLLILGALLMGL [SP-C (LKS)2]
FGIPSSPVHLKRLLILLLLLKLILLLILGALLMGL [SP-C (LKS)3]
FGIPSSPVHLKRLLILLLLLLLIKLLILGALLMGL [SP-C (LKS)4]
FGIPSSPVHLKRLLILFLLLLFILLLFLGALLMGL [SP-C (LFS)]
W zalecanej postaci wynalazku reszty Ser są kowalencyjnie związane z grupami arylowymi zawierającymi 12-22 atomów węgla.
Peptydy o wzorze (I) można wytworzyć metodami syntetycznymi lub technikami rekombinacji.
Konwencjonalne metody syntezy są opisane, na przykład, w publikacjach Schroeder i in., „The peptides” tom 1, Academic Press, 1965; Bodanszky i in., „Peptide synthesis”, Interscience Publisher, 1996; Baramy & Merrifield, „The peptides; Analysis, Synthesis, Biology”, tom 2, rozdział 1, Academic Press, 1980. Wspomniane techniki obejmują syntezę peptydów w fazie stałej, w roztworze, metody syntetyczne chemii organicznej, lub ich dowolne połączenie.
PL 201 084 B1
Peptydy S- lub O-acylowane dogodnie syntetyzuje się działając na peptydy nieacylowane chlorkiem acylu w nierozcieńczonym kwasie trifluorooctowym, jak opisano w publikacji Yousefi-Salakdeh i in., Biochem J., 1999, 343, 557-652. Po syntezie i oczyszczeniu peptydy syntetyczne scharakteryzowano biochemicznie i biofizycznie, jak opisano w następującym rozdziale „Przykłady”.
Czynność peptydów według wynalazku przy zmniejszaniu napięcia powierzchniowego oceniano w połączeniu z lipidami i fosfolipidami, SP-B, analogami SP-B lub substytutami SP-B. W szczególności, peptydy połączono z DPPC (1,2-dipalmitoilo-sn-glicero-3-fosfocholina)/PG (fosfatydyloglicerol)/PA (kwas palmitynowy) z albo bez SP-B, jego aktywnym analogiem i polimyksynami.
Wyniki testów czynności powierzchniowej na pulsujących pęcherzykach wyraźnie pokazują, że peptydy syntetyczne według niniejszego wynalazku mocno zmniejszają minimalne i maksymalne napięcie powierzchniowe podczas cyklicznej kompresji powierzchni (Ymin i Ymax) do wartości porównywalnych z otrzymanymi przy użyciu surfaktantów ze źródeł naturalnych.
Dodanie SP-B lub jego aktywnego analogu do mieszaniny peptydu/lipidów-fosfolipidów dało szczególnie korzystne wyniki. Ponadto nieoczekiwanie stwierdzono, że polimyksyny, w szczególności polimyksyna B, działają jako substytuty SP-B i ich dodanie dało wyniki porównywalne z osiąganymi dla SP-B.
Zgodnie z wynalazkiem opracowano syntetyczny surfaktant zawierający jeden lub więcej peptydów o wzorze (I), w mieszaninie z lipidami i/lub fosfolipidami i ewentualnie SP-B, jego aktywną pochodną lub polimyksynami. Odpowiednie lipidy/fosfolipidy mogą być wybrane z grupy obejmującej fosfatydylocholiny (korzystnie DPPC) PG, PA, triacyloglicerole, sfingomielinę.
Zaleca się stosowanie mieszanin surfaktantów zawierających peptyd, w którym łańcuchy palmitoilowe są połączone O-kowalencyjnie z resztami Ser. Stwierdzono, że mieszaniny surfaktantów zawierające postać dipalmitoilowaną peptydu odniesienia (SP-C(Leu)) wykazują wyższą trwałość warstewki powierzchniowej i zwiększoną wielkość rezerwy lipidów związanych powierzchniowo, w porównaniu z mieszaninami zawierającymi odpowiedni peptyd niepalmitoilowany, jak zmierzono w układzie uwięzionego pęcherzyka. W próbkach zawierających 5% peptydu dipalmitoilowanego Ymin wynosiło poniżej 1,5 mN/m, a warstewki były bardzo trwałe, kiedy napięcie powierzchniowe wzrastało o mniej niż 0,5 mN/m w ciągu 10 min. przy stałej objętości pęcherzyka. Przeciwnie, Ymin dla peptydu niepalmitoilowanego wynosiło ok. 5 mN/m i warstewki były mniej trwałe, jak zaobserwowano w związku z częstym zapadaniem pęcherzyka przy niskich napięciach powierzchniowych. Ponadto, po zubożeniu subfazy dla próbek, które zawierają peptyd niepalmitoilowany, zdolność do osiągania bliskiego zeru trwałego napięcia powierzchniowego była tracona po paru etapach adsorpcji, podczas gdy dla peptydu dipalmitoilowanego jakość warstwy nie pogarszała się nawet po ponad 10 etapach rozszerzania i włączania materiału rezerwowego równoważnego więcej niż dwóm monowarstwom. Lepszą czynność powierzchniową peptydów dipalmitoilowanych wykazano także przy pomocy surfaktometru z pulsującym pęcherzykiem. Ponadto stwierdzono, że obecność grup acylowych dalej redukuje tendencję do tworzenia oligomerów. To ustalenie jest bardzo ważne, ponieważ stwierdzono, że podczas wytwarzania syntetycznych surfaktantów oligomeryzacja peptydu przeszkadza przy wytwarzaniu mieszanin o stężeniach wyższych niż 20 mg/ml (Nilsson i in. Eur. J. Biochem. 1998, 255, 116-124).
Syntetyczny surfaktant można wytworzyć mieszając roztwory lub zawiesiny peptydów i lipidów i z kolei susząc mieszaninę.
W chwili użycia suchą mieszaninę można zawiesić, zdyspergować lub podać jako taką pacjentom, którym potrzeba leczenia niedoboru środka powierzchniowo czynnego.
Syntetyczny surfaktant można dogodnie podawać dotchawiczo lub jako aerozol. Ta ostatnia postać podawania będzie wymagać połączenia małych cząstek surfaktantu z przydatnym obojętnym propelentem. Można także zastosować inne postacie podawania, jak nebulizacja lub spryskiwanie trwałymi roztworami/zawiesinami surfaktantu.
Zgodnie z wynalazkiem opisane peptydy można zastosować do wytwarzania surfaktantu do stosowania we wszystkich przypadkach niedoboru lub dysfunkcji surfaktantu płucnego u dorosłych lub noworodków, pokrewnych chorób płucnych, takich jak zapalenie płuc, zapalenie oskrzeli, astma, zespół aspiracji mekonium, a także innych chorób takich jak surowicze zapalenie ucha środkowego.
Typowo, surfaktant będzie stosowany, korzystnie przy podawaniu dotchawiczym, do leczenia zespołu zaburzeń oddechowych, który często występuje u wcześniaków.
Następujące przykłady ilustrują wynalazek bardziej szczegółowo.
PL 201 084 B1
P r z y k ł a d 1
Synteza i oczyszczanie peptydów
Używając technologii etapowej syntezy w fazie stałej i chemii grup tert-butyloksykarbonylowych (Kent, S.B.H. (1988) Annu. Rev. Biochem., 57, 957-989) zsyntetyzowano SP-C(LKS) (Fig. 1), analog
SP-C, w urządzeniu Applied Biosystems 430A.
Rozszczepienie wiązania żywica-peptyd i odbezpieczenie łańcuchów bocznych przeprowadzono w bezwodnym fluorowodorze/metoksybenzenie/siarczku dimetylu, 10:1:1 (obj.) przez 1,5 h w temperaturze 0°C. Grupy zabezpieczające i zmiatacze usunięto przez powtarzaną ekstrakcję eterem dietylowym i peptyd z kolei ekstrahowano z żywicy dichlorometanem/kwasem trifluorooctowym (TEA) 3:1 (obj.), a następnie odparowano na wyparce obrotowej. Surowy ekstrakt peptydu ponownie rozpuszczono, uzyskując stężenie 100 mg/ml w chloroformie/metanolu 1:1 (obj.) zawierającym 5% H2O. Porcję 10 mg naniesiono na kolumnę Sephadex LH-60 (40 x 1cm) w tym samym rozpuszczalniku (Curstedt, T. i in. (1987) Eur. J. Biochem. 168, 255-262). Zbierano frakcje po 2,5 ml i mierzono absorbancje przy 214 i 280. Identyfikację i pomiar ilościowy przeprowadzono metodą analizy aminokwasów.
W celu acylowania oczyszczony peptyd (typowo okoł o 5 mg) suszy się , rozpuszcza w destylowanym TFA (100 μΐ) i dodaje się chlorek acylu (10-20 równoważników względem peptydu). Po 10 minutach reakcję szybko schłodzono 80% wodnym etanolem (1,9 ml). Oczyszczanie acylopeptydów prowadzi się stosując chromatografię na Lipidex 5000 w chlorku etylenu/metanolu 1:4 (obj.), a następnie HPLC z odwróconymi fazami na kolumnie C18, stosując liniowy gradient 2-propanolu/0,1% TFA rosnący do 60% (wodnego) metanolu/0,1% TFA lub 75% (wodnego) etanolu/0,1% TFA.
P r z y k ł a d 2
Charakterystyka biochemiczna
Czystość peptydu sprawdzano metodą elektroforezy na żelu poliakryloamidowym (PAGE) z dodecylosiarczanem sodu (SDS)(Phast-system, Pharmacia, Szwecja) i metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (HPLC), stosując kolumnę C18 i liniowy gradient 60% wodnego metanolu/0,1% TFA i izopropanolu/0,1% TFA (Gustafsson, M. i in. (1997) Biochem. J. 326, 799-806).
Masy cząsteczkowe określano techniką czasu przelotu laserowej desorpcji/jonizacji z wykorzystaniem matrycy (MALDI-TOF) na spektrometrze masowym (Lasermat 2000, Finnigan MAT) wykalibrowanym na naczyniowoczynny peptyd jelitowy (Mr 3326,8).
Strukturę drugorzędową peptydu badano stosując spektroskopię dichroizmu kołowego (CD) (Jasco-720 Jasco, Japan). Po rozpuszczeniu w trifluoroetanolu (TFE) rejestrowano widma od 260 do 184 nm z szybkością przemiatania 20 nm/min i rozdzielczością 2 punkty danych/nm. Resztkową eliptyczność molarną obliczano i wyrażano w tysiącach stopni x cm2/dmol. Eliptyczności molarne przy 208 i 222 nm wykorzystywano do oszacowania zawartości struktury helikalnej (Barrow, C. J. i in. (1992) J. Mol. Biol., 225, 1075-1093).
Badania struktury drugorzędowej SP-C(LKS) przy użyciu spektroskopii CD pokazały widmo typowe dla peptydów α-helikalnych i z minimów przy 208 nm i 222 nm oszacowano zawartość struktury α-helikalnej na równą w przybliżeniu 75%. Struktura drugorzędowa pozostawała trwała w kolejnych rozcieńczeniach przy pomocy H2O aż do 12% TFE, pod warunkiem, że peptyd rozpuszczono w nierozcieńczonym TFE.
SDS-PAGE dla SP-C(LKS) wykazała pojedyncze pasmo podobne do natywnego SP-C, zaś SP-C(Leu), które w części helikalnej nie ma Lys, tworzy oligomery. W przeciwieństwie do naszego doświadczenia z mieszaninami SP-C(Leu)/lipidów, które trudno rozpuścić uzyskując stężenia wyższe niż 20 mg/ml (Nilsson, G. i in. (1998) Eur. J. Biochem. 255, 116-124), można było wytworzyć mieszaninę SP-C(LKS)/lipid o stężeniu lipidu 80 mg/ml i proporcji polipeptyd/lipid równej 0,03.
P r z y k ł a d 3
Wytwarzanie mieszanin peptydu/lipidu
DPPC, PG i PA zakupiono z firmy Sigma Chemical Co. (St Louis, MO). Lipidy, rozpuszczone w chloroformie/metanolu 98:2 (obj.), zmieszano w proporcjach DPPC:PG:PA 68:22:9 (wag.) lub DPPC/PG 7:3 (wag.). Preparaty surfaktantów wytworzono dodając sam SP-C(LKS) albo SP-C(LKS) i SP-B, do każdej z mieszanin lipidów, uzyskując łączne proporcje wagowe polipeptydu/lipidu równe 0-0,05. Mieszaniny odparowano w atmosferze azotu i ponownie zawieszono w 150 mmol/l NaCl lub w 10 mmol/l buforu Hepes pH 6,9 zawierającego 140 mmol/l NaCl i 2,0 mmol/l CaCl2, przy stężeniach lipidów równych 10 - 80 mg/ml. Wielokrotne zamrażanie i działanie ultradźwiękami (50 W, 48 kHz) prowadzono aż do otrzymania jednorodnych zawiesin. W pewnych przypadkach końcowe zawiesiny inkubowano w temperaturze 45°C przez 1 h.
PL 201 084 B1
Preparaty surfaktantów zawieszone w 150 mmol/l NaCl mają pH równe 3,5-5,5. Niższe wartości pH 3,5-4,5 obserwowano w preparatach zawierających SP-B. Ponieważ natywne SP-B oczyszcza się stosując zakwaszone rozpuszczalniki organiczne (Curstedt, T. i in. (1987) Eur. J. Biochem. 168, 255262), to w preparatach mogą pozostać małe ilości kwasu. pH bliskie fizjologicznemu otrzymano zawieszając preparat surfaktantu w buforze Hepes o pH 6,9, zawierającym 140 mmol/l NaCl i 2 mmol/l
CaCl2 (Tabela 1). W porównaniu z odpowiednimi preparatami w solance niezbuforowanej nie było zmian
Ymax lub Ymin kiedy jako mieszaninę lipidów zastosowano DPPC/PG 7:3 (wag.). Jednak, kiedy w mieszaninie lipidów znajdowało się PA, to zarówno Ymax jak i Ymin wzrosły przy wyższych pH (Tabele 1 i 2).
T a b e l a 1: Właściwości powierzchniowe preparatów sztucznego surfaktantu w roztworze soli fizjologicznej
Pomiary wykonywano bezpośrednio po wytworzeniu próbek albo po inkubacji przez 1 godzinę w temperaturze 45°C. Stężenie fosfolipidów wynosiło 10 mg/ml w NaCl 150 mmol/l. Odczyty uzyskiwano w różnych okresach czasu stosując surfaktometr z pulsującym pęcherzykiem w temperaturze 37°C, przy 50% kompresji powierzchni i z szybkością 40 cykli na min. Wartości to średnie (odchylenie standardowe) z 3-5 pomiarów. Skróty są zdefiniowane w tekście.
| Preparat surfaktantu | Napięcie powierzchniowe (mN/m) | ||||||||
| SP-C (LKS) (%wag.) | SP-B (%wag.) | Fosfolipidy | Temperatura inkubacji | 7,5 s | 1 min. | 5 min. | |||
| Ymin | Ymax | Ymin | Ymax | Ymin | Ymax | ||||
| 3 | - | DPPC/PG/PA | - | <1 | 41(1) | <1 | 41(1) | <1 | 41(0) |
| 3 | - | DPPC/PG/PA | 45°C | <1 | 41(1) | <1 | 41(1) | <1 | 41(1) |
| 3 | 2 | DPPC/PG/PA | - | <1 | 33(2) | <1 | 33(2) | <1 | 33(2) |
| 3 | 2 | DPPC/PG/PA | 45°C | <1 | 34(1) | <1 | 34(2) | <1 | 25(2) |
| 3 | - | DPPC/PG | - | 12 | 39(5) | 14(4) | 42(4) | 9(5) | 42(2) |
| 3 | - | DPPC/PG | 45 °C | 8(3) | 35(5) | 9(3) | 39(5) | 6(4) | 42(3) |
| 3 | 2 | DPPC/PG | - | 2(1) | 31(1) | 2(1) | 31(3) | 2(1) | 33(1) |
| 3 | 2 | DPPC/PG | 45 °C | 3(3) | 29(3) | 1(1) | 33(2) | 1(0) | 36(1) |
| 3 | 1 | DPPC/PG | - | <1 | 24(4) | 1(2) | 26(4) | <1 | 31(1) |
| 3 | 0,5 | DPPC/PG | 45 °C | 4(2) | 29(1) | 4(3) | 29(1) | 3(1) | 34(2) |
T a b e l a 2: Właściwości powierzchniowe preparatów sztucznego surfaktantu w zbuforowanym roztworze soli
Pomiary wykonywano na próbkach zawierających fosfolipidy w stężeniu 10 mg/ml w buforze Hepes (pH 6,9), który z kolei zawierał NaCl 140 mmol/l i CaCl2 2,0 mmol/l. Odczyty uzyskiwano w różnych okresach czasu stosując surfaktometr, z pulsującym pęcherzykiem w temperaturze 37°C, przy 50% kompresji powierzchni i z szybkością 40 cykli na min. Wartości to średnie (odchylenia standardowe) z 3-5 pomiarów. Skróty są zdefiniowane w tekście.
| Preparat surfaktantu | Napięcie powierzchniowe (mN/m) | |||||||
| SP-C (LKS) (%wag.) | SP-B (%wag.) | Fosfolipidy | 7,5 s Ymin Ymax | 1 min. Ymin Ymax | 5 min. Ymin Ymax | |||
| 3 | - | DPPC/PG/PA | 4(1) | 44(2) | 5(2) | 47(2) | 7(2) | 50(1) |
| 3 | 2 | DPPC/PG/PA | 3(3) | 38(3) | 4(4) | 40(2) | 3(3) | 44(2) |
| 3 | - | DPPC/PG | 15(3) | 16(2) | 42(3) | 13(3) | 44(3) | |
| 3 | 2 | DPPC/PG | 39(4) 2(2) | 26(3) | 1(1) | 29(3) | <1 | 35(1) |
PL 201 084 B1
P r z y k ł a d 4
Wytwarzanie mieszanin fosfolipidów z SP-C(LKS) i polimyksyną B.
DPPC i PG zakupiono z firmy Sigma Chemical Co (St Louis, MO). Fosfolipidy, rozpuszczone w chloroformie/metanolu 98:2 (obj.), zmieszano w proporcjach DPPC/PG 7:3 (wag.). Do mieszanin fosfolipidów dodano SP-C (LKS), uzyskując łączną proporcję wagową polipeptydu/fosfolipidu równą 0,03. Mieszaniny odparowano w atmosferze azotu i ponownie zawieszono w temperaturze pokojowej w 10 mmol/l buforu Hepes o pH 6,9 zawierającego 140 mmol/l NaCl i 2,0 mmol/l CaCl2 lub w tym samym buforze zawierającym 0,01% polimyksyny B (PxB) (Sigma Chemical Co, St. Louis, MO). Powtarzane zamrażanie i działanie ultradźwiękami (50 W, 48 kHz) prowadzono aż do osiągnięcia jednorodnych zawiesin. Końcowe stężenie fosfolipidów dla obu preparatów wynosiło 10 mg/ml. Dodanie PxB zmniejszyło zarówno Ymin jak i Ymax i uzyskano optymalną czynność powierzchniową (Tabela 3).
T a b e l a 3. Właściwości powierzchniowe sztucznego surfaktantu z polimyksyną B i bez
Odczyty uzyskiwano w różnych okresach czasu stosując surfaktometr z pulsującym pęcherzykiem w temperaturze 37°C, przy 50% kompresji powierzchni i z szybkością 40 cykli na min. Wartości to średnie (odchylenie standardowe) z 5-11 pomiarów. Skróty są zdefiniowane w tekście.
| Preparat surfaktantu | Napięcie powierzchniowe (mN/m) | |||||||
| SP-C (LKS) (% wag.) | PxB (% wag.) | Fosfolipidy | 7,5 s Ymin Ymax | 1 min. Ymin Ymax | 5 min. Ymin Ymax | |||
| 3 | - | DPPC/PG | 15(3) | 39(4) | 16(2) | 42(3) | 13(3) | 44(3) |
| 3 | 1 | DPPC/PG | 3(2) | 29(3) | 2(2) | 31(4) | 1(1) | 34(2) |
P r z y k ł a d 5
Charakterystyka biofizyczna
Kinetykę rozprzestrzeniania się na powierzchni mierzono w temperaturze około 34-37°C stosując wagę powierzchniową Wilhelmy'ego (Biegler, Wiedeń, Austria). Napięcie powierzchniowe kontrolowano przez 10 min stosując płytkę platynową połączoną z czujnikiem tensometrycznym i wstawioną na 1 mm do hipofazy 20 ml 150 mmol/l NaCl w wannie teflonowej.
Zawiesiny dodawano jako kropelki, łącznie 1 mg lipidów, na hipofazę, 4 cm od płytki platynowej.
Pomiary kinetyczne 3% wag. SP-C(LKS) w DPPC/PG, 7:3 (wag.), przy użyciu wagi Wilhelmy'ego wykazały gwałtowne rozprzestrzenianie się przy napięciu powierzchniowym równym 28 mN/m po 3 sek. (Fig. 2). Rozprzestrzenianie się było raczej wolniejsze przy użyciu 1% wag. SP-C(LKS) w tej samej mieszaninie lipidów (danych nie pokazano). Dodanie 2% wag. SP-B nie zmieniło znacznie szybkości rozprzestrzeniania się ani równowagowego napięcia powierzchniowego (Fig. 2). Nie zaobserwowano poprawy po inkubacji mieszaniny przez 1 h w temperaturze 45°C (danych nie pokazano). Podobne wyniki otrzymano dla DPPC:PG:PA, 68:22:9 (wag.) jako mieszaniny lipidów (danych nie pokazano).
Dynamiczne napięcie powierzchniowe rejestrowano stosując surfaktometr z pulsującym pęcherzykiem (Surfactometer International, Toronto, Canada) w temperaturze 37°C podczas 50% cyklicznej kompresji powierzchni pęcherzyka i z szybkością 40 cykli na min. Wszystkie pomiary prowadzono przez 5 min. i przy stężeniu lipidów równym 10 mg/ml. W określonych przedziałach czasu mierzono gradienty ciśnienia na ściance pęcherzyka i stosowano do obliczania napięć powierzchniowych przy minimalnej (ymin) i maksymalnej (Ymax) wielkości pęcherzyka.
W surfaktometrze z pulsującym pęcherzykiem 3% wag. SP-C(LKS) w DPPC:PG:PA, 68:22:9 (wag.) dało napięcie powierzchniowe mniejsze niż 1 mN/m przy minimalnym promieniu pęcherzyka (Ymin) i zaś Ymin równe 9-14 mN/m obserwowano dla 3% wag. SP-C(LKS) w DPPC:PG, 7:3 (wag.) (Tabela 1). Napięcie powierzchniowe przy maksymalnym promieniu pęcherzyka (Ymax) wynosiło około 40 mN/m w obu przypadkach. Dodanie 2% wag. SP-B dało wartości Ymax równe 31-33 mN/m i Ymin równe 0-2 mN/m dla obu preparatów lipidów. Te wartości były bardzo podobne do otrzymanych dla preparatów surfaktantów (1990) Próg. Respir. Res. 25, 237-246. Inkubacja preparatów w temperaturze 45°C przez 1 h nie miała znaczącego wpływu na czynność powierzchniową (Tabela 1). Malejąca ilość SP-B do 0,5% wag, w 3% wag. SP-C(LKS) w DPPC-PG 7:3 (wag.) miała tendencję do zwiększania Ymin, chociaż wyniki nie osiągnęły istotności statystycznej (Tabela 1). W przeciwieństwie do SPB, dodanie 2% wag. KL4 (Cochrane, C. G. i Revak, S. D. (1991) Science 254, 566-568 do 3% wag.
PL 201 084 B1
SP-C(LKS) w DPPC:PG:PA 68:22: 9 (wag.) nie zmniejszyło Ymax, które pozostało względnie wysokie i równe 41-42 mN/m.
P r z y k ł a d 6
Porównanie mieszanin zawierających dipalmitoilowane i niepalmiotoilowane peptydy odniesienia
Preparaty surfaktantów wytworzono przez dodanie 3% wag. SP-C(Leu) lub dipalmitoilowanego SP-C(Leu) do każdej mieszaniny lipidów, wytworzonej z DPPC/PG/PA 68:22:9 (wag.). Mieszaniny odparowano w atmosferze azotu i ponownie zawieszono w 150 mmol/l NaCl przy stężeniach lipidów równych 10 mg/ml. Do próbek, w których zastosowano także substytut SP-B, dodano 1% wag. polimyksyny B.
Mieszaniny zawierające dipalmitoilowane SP-C(Leu), z polimyksyną B lub bez, wykazują znaczące polepszenie zwłaszcza w zmniejszaniu Ymax dla 5 min i Ymin dla wcześniejszych okresów czasu.
T a b e l a 4: Właściwości powierzchniowe
Napięcie powierzchniowe mieszanin otrzymano przy użyciu surfaktometru z pulsującym pęcherzykiem. Po dwóch minutach stabilizowania odczyty uzyskiwano w różnych okresach czasu, w temperaturze 37°C, przy 50% kompresji powierzchni i z szybkością 40 cykli na min.
| Preparat surfaktantu | Napięcie powierzchniowe (mN/m) | |||||||
| SP-C(Leu) (% wag.) | Dipalm. SP-C(Leu) (% wag.) | PxB (% wag.) | Ymin | 7,5 s Ymax | 1 min Ymin | Ymax | 5 min Ymin | Ymax |
| 1 | 11 | 39 | 6,2 | 39 | 2 | 42 | ||
| 1 | 1 | 3 | 37 | 3 | 38 | 0 | 40 | |
| 1 | - | 1 | 34 | 1 | 35 | 1 | 36 | |
| 1 | 1 | 0 | 29 | 0 | 34 | 0 | 35 |
P r z y k ł a d 7
Oznaczanie in vivo
Wpływ leczenia surfaktantem na właściwości mechaniczne niedojrzałych płuc oceniano na 9 królikach urodzonych przedwcześnie w 27 dniu ciąży. Zwierzęta tracheotomizowano przy urodzeniu i pięć z nich otrzymało, przez rurkę tchawiczą, dwukrotnie 2,5 ml/kg sztucznego surfaktantu zawierającego DPPC, PG, i SP-C (LKS), z polimyksyną B lub bez, w podanych wyżej proporcjach. Całkowite stężenie fosfolipidów w egzogennym materiale surfaktantu wynosiło 40 mg/ml. Dwa zwierzęta służące jako ujemna próba kontrolna nie otrzymywały materiału przez rurkę tchawiczą, zaś inne dwa służące jako dodatnia próba kontrolna potraktowano taką samą dawką zmodyfikowanego naturalnego surfaktantu (Curosurf, Chiesi Farmaceutici Spa, Parma, Italy), rozcieńczonego do 40 mg/ml. Jedno zwierzę potraktowano mieszaniną DPPC i PG w roztworze soli fizjologicznej (stężenia takie same jak wyżej) w dawce 2,5 ml/kg. Wszystkie zwierzęta trzymano w pojemnikach pletyzmografu w temperaturze 37°C i wentylowano równolegle przez 60 min przy użyciu 100% tlenu, stosując Servo Ventilator 900B (Siemens-Eletna, Solna, Sweden) nastawiony na częstość 40 na min i 50% czasu wdechu. Objętości oddechowe mierzono pneumotachygrafem połączonym z każdym pojemnikiem pletyzmografu. Zwierzęta wentylowano znormalizowaną objętością oddechową 8-10 ml/kg bez dodatniego końcowego ciśnienia wydechowego (PEEP, positive end-expiratory pressure). Podatność płucklatki piersiowej zdefiniowano jako proporcję między objętością oddechową i szczytowym ciśnieniem wdechu, i wyrażono jako ml/cm H2O kg.
W porównaniu z nieleczonym zwierzęciem kontrolnym, podatność polepszyła się znacznie u zwierząt leczonych syntetycznym surfaktantem, zwłaszcza u zwierzęcia otrzymującego surfaktant zawierający polimyksynę B. W szczególności, poprawa wydaje się przewyższać poprawę obserwowaną po leczeniu podobną dawką zmodyfikowanego naturalnego surfaktantu (Fig. 3).
Zwięzły opis figur
Fig. 1. Sekwencja aminokwasów i przedstawienia kołowe helis SP-C i jego analogów.
Sekwencja ludzkiego SP-C jest wzięta z publikacji Johansson, J. i in. (1988) FEBS Lett. 232, 61-64, zaś sekwencja SP-C(Leu) z publikacji Nilsson, G., i in. (1998) Eur. J. Biochem. 255, 116-124). SP-C(LKS) opiera się na strukturze pierwszorzędowej SP-C, ale wszystkie reszty Val w pozycjach 16-28 z wyjątkiem pozycji 17 są zastąpione resztami Leu, reszty Lys zostały wprowadzone w pozycjach 17, 22 i 27, a palmitoilowane Cys w pozycjach 5 i 6 są zastąpione przez Ser.
PL 201 084 B1
Fig.2. Rozprzestrzenianie się syntetycznych preparatów surfaktantów na powierzchni.
Kinetyka rozprzestrzeniania się 3% wag. SP-C(LKS) (pełne kwadraty, linia ciągła) i 3% wag.
SP-C(LKS) z dodatkiem 2% wag. SP-B (puste trójkąty, linia kropkowana). Wszystkie preparaty badano przy stężeniu 10 mg/ml DPPC/PG, 7:3 (wag.) w 150 mmol/l NaCl. Odczyty otrzymano stosując wagę Wilhelmy'ego a każdy punkt danych to średnia trzech różnych odczytów.
Fig. 3 Wyniki in vivo
Podatność płuc-klatki piersiowej u 5 królików urodzonych przedwcześnie (w 27 dniu ciąży) wentylowanych znormalizowaną objętością oddechową 8-10 ml/kg i bez dodatniego końcowego ciśnienia wydechowego (PEEP). Podatność u leczonych zwierząt jest znacznie polepszona. Okazuje się, że dodanie polimyksyny B (PxB) zwiększa działanie sztucznego surfaktantu. Stężenie fosfolipidów jest takie samo we wszystkich preparatach surfaktantów, tj. 40 mg/ml.
Lista sekwencji <110> Chiesi Farmaceutici spa <120> Analogi SP-C, syntetyczny surfaktant oraz zastosowanie analogów SP-C i zastosowanie polimyksyny <130> Chiesi <140>
<141>
<15'0> MI99A000275 <151> 1999-02-12 <160> 6 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 35 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: peptydy syntetyczne <400> 1
| Phe Gly | Ile | Pro | Ser | Ser | Pro | Val | His | Leu | Lys | Arg | Leu | Leu | Tle | Leu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
| Lys Leu | Leu | Leu | Leu | Lys | Ile | Leu | Leu | Leu | Lys | Leu | Gly | Ala | Leu | Leu |
| 20 | 25 | 30 |
PL 201 084 B1
Met Gly Leu 35 <210> 2 <211> 3 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: peptydy syntetyczne <400> 2
| Phe 1 | Gly | Ile | Pro | Ser 5 | Ser | Pro | Val | His | Leu 10 | Lys | Arg | Leu | Leu | Ile 15 | Leu |
| Leu | Lys | Leu | Leu | Leu | Leu | Ile | Lys | Leu | Leu | Ile | Leu | Gly | Ala | Leu | Leu |
| 20 | 25 | 30 |
Met Gly Leu <210> 3 <211> 35 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: peptydy syntetyczne <400> 3
| Phe | Gly | Ile | Pro | Ser | Ser | Pro | Val | His | Leu | Lys | Arg | Leu | Leu | Ile | Leu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Lys | Leu | Leu | Leu | Leu | Leu | Ile | Leu | Leu | Leu | Ile | Leu | Gly | Ala | Leu | Leu |
| 20 | 25 | 30 |
Met Gly Leu 35
PL 201 084 B1 <210> 4 <211> 35 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: peptydy syntetyczne <400> 4
| Phe_ Gly | Ile | Pro | Ser | Ser | Pro | Vul | His | Leu | Lys | Ary | Leu | Leu | Ile | LcU |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
| Leu Leu | Leu | Leu | Lys | Leu | Ile | Leu | Leu | Leu | Ile | Leu | Gly | Ala | Leu | Leu |
| 20 | 25 | 30 |
Met Gly Leu 35 <210> 5 <211> 35 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: peptydy syntetyczne <400> 6
| Phe 1 | Gly | Ile | Pro | Ser 5 | Ser Pro Val | His | Leu Lys Arg Leu Leu Ile Leu | ||||
| 10 | 15 | ||||||||||
| Leu | Leu | Leu | Leu | Leu | Leu | Ile | Lys | Leu | Leu | Ile | Leu, Gly Ala Leu Leu |
| 20 | 25 | 30 |
Met Gly Leu 35 <210> 6 <211> 35 <212> PRT
PL 201 084 B1 <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: peptydy syntetyczne <400> 6
| Phe 1 ' | Gly | Ile | Pro | Ser 5 | Ser | Pro Val | His | Leu 10 | Lys Acg Leu Leu | Ile 15 | Leu | |||
| Phe | Leu | Leu | Leu | Leu | Phe | Ile | Leu | Leu | Leu | Phe | Leu | Gly Ala | Leu | Leu |
| 20 | 25 | 30 |
Met Gly Leu 35
Zastrzeżenia patentowe
Claims (16)
1. Analogi SP-C o wzorze ogólnym (I), zgodnie z jednoliterowym kodem aminokwasów:
FeGfIPZZPVHLKR(XaB)n(XbB)n(XcB)mXdGALLMGL (I) w którym:
X oznacza aminokwas wybrany z grupy obejmują cej I, L, Nle (norleucynę );
B oznacza aminokwas wybrany z grupy obejmującej K, W, F, Y, ornitynę;
Z oznacza S i może być ewentualnie powiązana przez wiązanie estrowe z grupą acylową zawierającą 12-22 atomów węgla.
a oznacza liczbę całkowitą od 1 do 19; b oznacza liczbę całkowitą od 1 do 19; c oznacza liczbę cał kowitą od 1 do 21; d oznacza liczbę całkowitą od 0 do 20; e oznacza 0 lub 1; f oznacza 0 lub 1; n oznacza 0 lub 1; m oznacza 0 lub1, pod warunkami, że:
- n + m > 0;
- f > e;
- (XaB)n(XbB)n(XcB)mXd oznacza sekwencję mającą maksymalnie 22 aminokwasy, korzystnie od
10 do 22 aminokwasów.
2. Analogi SP-C według zastrz. 1, mające wzór (la):
(la) FGIPSSPVHLKRX4BX4BX4BXGALLMGL.
3. Analogi SP-C według zastrz. 1, mające wzór (Ib):
(lb) FGIPSSPVHLKRX5BX5BX4GALLMGL.
4. Analogi SP-C według zastrz. 1, mające wzór (Ic):
(lc) FGIPSSPVHLKRX4BX11GALLMGL.
5. Analogi SP-C według zastrz. 1, mające wzór (Id):
(ld) FGIPSSPVHLKRX8BX7GALLMGL.
6. Analogi SP-C według zastrz. 1, mające wzór (Ie):
(le) FGIPSSPVHLKRX11BX4GALLMGL.
7. Analogi SP-C według zastrz. 1-6, znamienne tym, że reszty Ser są acylowane, korzystnie grupami palmitoilowymi.
8. Analogi SP-C według zastrz. 1-7, znamienne tym, że B oznacza lizynę lub fenyloalaninę i X oznacza leucynę, izoleucynę lub norleucynę.
9. Analogi SP-C według zastrz. 8, znamienne tym, że wybrane są z grupy obejmującej:
SP-C (LKS) FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLKILLLKLGALLMGL SP-C (LKS)i FGIPSSPVHLKRLLILLKLLLLIKLLILGALLMGL
PL 201 084 B1
SP-C (LKS)2 FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLLILLLILGALLMGL
SP-C (LKS)3 FGIPSSPVHLKRLLILLLLLKLILLLILGALLMGL
SP-C (LKS)4 FGIPSSPVHLKRLLILLLLLLLIKLLILGALLMGL
SP-C (LFS) FGIPSSPVHLKRLLILFLLLLFILLLFLGALLMGL.
10. Syntetyczny surfaktant, znamienny tym, że zawiera co najmniej jeden analog SP-C o wzorze (I) w mieszaninie z lipidami i fosfolipidami.
11. Syntetyczny surfaktant według zastrz. 10, znamienny tym, że mieszanina lipidów/fosfolipidów zawiera DPPG, PG, PA.
12. Syntetyczny surfaktant według zastrz. 10-11, znamienny tym, że ponadto zawiera SP-B lub jego aktywną pochodną lub polimyksynę.
13. Syntetyczny surfaktant według zastrz. 10-12, znamienny tym, że ma postać roztworu, dyspersji, zawiesiny, suchego proszku.
14. Zastosowanie analogów SP-C określonych w zastrz. 1-7 do wytwarzania sztucznego surfaktantu do stosowania we wszystkich przypadkach niedoboru surfaktantu płucnego lub pokrewnych dysfunkcji.
15. Zastosowanie polimyksyny, korzystnie polimyksyny B, do wytwarzania sztucznego surfaktantu określonego w zastrz. 10-13, do leczenia wszystkich przypadków niedoboru surfaktantu płucnego lub pokrewnych dysfunkcji.
16. Zastosowanie według zastrz. 14 i 15, znamienne tym, że niedobór surfaktantu stanowi zespół zaburzeń oddechowych.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT1999MI000275A IT1308180B1 (it) | 1999-02-12 | 1999-02-12 | Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante |
| PCT/EP2000/001044 WO2000047623A1 (en) | 1999-02-12 | 2000-02-09 | Artificial peptides having surface activity and the use thereof in the preparation of artificial surfactant |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL349785A1 PL349785A1 (en) | 2002-09-09 |
| PL201084B1 true PL201084B1 (pl) | 2009-03-31 |
Family
ID=11381859
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL349785A PL201084B1 (pl) | 1999-02-12 | 2000-02-09 | Analogi SP-C, syntetyczny surfaktant oraz zastosowanie analogów SP-C i zastosowanie polimyksyny |
Country Status (33)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7053044B1 (pl) |
| EP (1) | EP1151008B1 (pl) |
| JP (1) | JP4754073B2 (pl) |
| KR (1) | KR100645145B1 (pl) |
| CN (1) | CN1221570C (pl) |
| AR (1) | AR022578A1 (pl) |
| AT (1) | ATE280181T1 (pl) |
| AU (1) | AU758735B2 (pl) |
| BG (1) | BG65196B1 (pl) |
| BR (1) | BR0009964A (pl) |
| CA (1) | CA2362507C (pl) |
| CO (1) | CO5241361A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ301108B6 (pl) |
| DE (1) | DE60015082T2 (pl) |
| EA (1) | EA004058B1 (pl) |
| EE (1) | EE04879B1 (pl) |
| ES (1) | ES2228473T3 (pl) |
| GE (1) | GEP20032976B (pl) |
| HK (1) | HK1042500A1 (pl) |
| HU (1) | HU228997B1 (pl) |
| IL (1) | IL144842A0 (pl) |
| IT (1) | IT1308180B1 (pl) |
| MA (1) | MA25381A1 (pl) |
| NO (1) | NO20013888L (pl) |
| NZ (1) | NZ513451A (pl) |
| PL (1) | PL201084B1 (pl) |
| PT (1) | PT1151008E (pl) |
| SK (1) | SK286428B6 (pl) |
| TR (1) | TR200102308T2 (pl) |
| UA (1) | UA72751C2 (pl) |
| WO (1) | WO2000047623A1 (pl) |
| YU (1) | YU57701A (pl) |
| ZA (1) | ZA200106530B (pl) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1308180B1 (it) * | 1999-02-12 | 2001-12-07 | Chiesi Farma Spa | Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante |
| JP2003522138A (ja) * | 2000-02-11 | 2003-07-22 | アルタナ ファルマ アクチエンゲゼルシャフト | 慢性肺疾患の予防および治療のための肺表面活性剤の新規使用 |
| DE60217060T2 (de) * | 2002-03-01 | 2007-06-21 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Pharmazeutische Zusammensetzungen, die Lungensurfactants und ein Polymyxin umfassen und verbesserte Oberflächenspannung-senkende Eigenschaften haben |
| ITMI20021058A1 (it) | 2002-05-17 | 2003-11-17 | Chiesi Farma Spa | Miscele di lipidi sintetici ottimizzate per la preparazione di un surfattante ricostituito |
| CN100401896C (zh) * | 2002-12-09 | 2008-07-16 | 儿童医院医疗中心 | 诊断和治疗间质性肺病的方法 |
| EP1481665A1 (en) * | 2003-05-30 | 2004-12-01 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | Novel lipid mixtures for synthetic surfactants |
| US20090011978A1 (en) * | 2003-08-28 | 2009-01-08 | Atlanta Pharma Ag | Use of Surfactant Preparations for the Treatment of Surgical Adhesions |
| US20060004185A1 (en) * | 2004-07-01 | 2006-01-05 | Leese Richard A | Peptide antibiotics and peptide intermediates for their prepartion |
| US8337815B2 (en) * | 2004-12-23 | 2012-12-25 | Discovery Laboratories, Inc. | Pulmonary surfactant formulations |
| WO2008011559A2 (en) | 2006-07-20 | 2008-01-24 | University Of Rochester | Synthetic lung surfactant and use thereof |
| UA94477C2 (ru) * | 2006-10-13 | 2011-05-10 | КЬЕЗИ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.п.А. | Воспроизведенные сурфактанты, которые имеют улучшенные свойства |
| EP1997502A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | Reconstituted surfactants having improved properties |
| US8048043B2 (en) | 2007-06-08 | 2011-11-01 | Chiesi Farmaceutici S. P. A. | Method of administration of a pulmonary surfactant |
| EP2022798A1 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-11 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | Synthetic pulmonary surfactant peptides |
| US8343912B2 (en) | 2008-12-23 | 2013-01-01 | Biosource Pharm, Inc. | Antibiotic compositions for the treatment of gram negative infections |
| CN102470150B (zh) | 2009-09-08 | 2013-12-11 | 奇斯药制品公司 | 包含肺表面活性物质和抗氧化酶的治疗组合物 |
| US8415307B1 (en) | 2010-06-23 | 2013-04-09 | Biosource Pharm, Inc. | Antibiotic compositions for the treatment of gram negative infections |
| SG11201406628RA (en) * | 2012-04-23 | 2014-11-27 | Chiesi Farma Spa | Method and system for the administration of a pulmonary surfactant by atomization |
| CA2891933C (en) | 2012-11-21 | 2022-07-05 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Recombinant pulmonary surfactants comprising sp-b and sp-c analogues and a phospholipid mixture |
| EP3106090A1 (en) | 2015-06-15 | 2016-12-21 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | System for effective breath-synchronized delivery of medicament to the lungs |
| EP3285645B1 (en) | 2015-04-22 | 2020-08-12 | Chiesi Farmaceutici S.p.A. | System for effective breath-synchronized delivery of medicament to the lungs |
| US11311691B2 (en) | 2015-04-28 | 2022-04-26 | Chiesi Farmaceutici S.P.A | Device for facilitating the administration of a medicament to the lung by a catheter |
| US20180147262A1 (en) | 2015-04-30 | 2018-05-31 | University Of Bremen | Novel skin medical and cosmetic care product |
| MA45772A (fr) | 2016-07-28 | 2021-04-28 | Chiesi Farm Spa | Procédé et système d'administration d'un médicament sous forme d'aérosol |
| BR112019008169A2 (pt) | 2016-10-26 | 2019-07-09 | Chiesi Farm Spa | dispositivo para facilitar o posicionamento de um cateter, sistema para entrega de um medicamento em aerossol por meio de um cateter, método para utilização de um dispositivo e kit |
| PL3558376T3 (pl) | 2016-12-22 | 2022-02-14 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Kombinacja terapeutyczna zawierająca surfaktant płucny i steroid do leczenia rozwijającej się BPD |
| TW201927286A (zh) | 2017-12-15 | 2019-07-16 | 義大利商凱西製藥公司 | 用於噴霧投藥之包含肺表面張力素的藥學調配物 |
| WO2019115771A1 (en) | 2017-12-15 | 2019-06-20 | Pari Pharma Gmbh | Nebuliser system, holding system, combination comprising nebuliser system and holding system, and aerosol administration method |
| MX2020011127A (es) | 2018-04-23 | 2021-01-15 | Chiesi Farm Spa | Combinacion terapeutica que comprende agente tensioactivo pulmonar y esteroide para la profilaxis de displasia broncopulmonar (bpd). |
| EP3666316A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-17 | PARI Pharma GmbH | Aerosol delivery device and method of operating the aerosol delivery device |
| EP3666315A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-17 | PARI Pharma GmbH | Aerosol delivery device and method of operating the aerosol delivery device |
| EP3843105A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-06-30 | PARI Pharma GmbH | Control device for aerosol nebulizer system |
| EP4097128A1 (en) | 2020-01-28 | 2022-12-07 | Chiesi Farmaceutici S.p.A. | Polypeptides having improved properties |
| CN114159546A (zh) * | 2021-12-20 | 2022-03-11 | 双鹤药业(海南)有限责任公司 | 新一代合成肺表面活性物质制剂及其临床应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5104853A (en) * | 1984-12-11 | 1992-04-14 | California Biotechnology Inc. | Alveolar surfactant proteins having cys to ser mutations |
| SE8803713D0 (sv) * | 1988-10-18 | 1988-10-18 | Kabigen Ab | Biologically active lipoprotein and its use |
| DK0733645T3 (da) * | 1993-12-08 | 2003-07-14 | Mitsubishi Pharma Corp | Syntetisk peptid, lungeoverfladeaktivt stof indeholdende dette og præparat mod respiratory distress syndrome |
| DE4418936A1 (de) * | 1994-05-31 | 1996-02-08 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Polypeptid |
| IT1308180B1 (it) * | 1999-02-12 | 2001-12-07 | Chiesi Farma Spa | Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante |
-
1999
- 1999-02-12 IT IT1999MI000275A patent/IT1308180B1/it active
-
2000
- 2000-02-09 BR BR0009964-3A patent/BR0009964A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-02-09 EA EA200100749A patent/EA004058B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-02-09 PT PT00910658T patent/PT1151008E/pt unknown
- 2000-02-09 CN CNB008036691A patent/CN1221570C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-09 GE GEAP20006042A patent/GEP20032976B/en unknown
- 2000-02-09 HU HU0200141A patent/HU228997B1/hu unknown
- 2000-02-09 DE DE60015082T patent/DE60015082T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-09 PL PL349785A patent/PL201084B1/pl unknown
- 2000-02-09 CA CA2362507A patent/CA2362507C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-09 KR KR1020017009666A patent/KR100645145B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-02-09 TR TR2001/02308T patent/TR200102308T2/xx unknown
- 2000-02-09 EE EEP200100413A patent/EE04879B1/xx unknown
- 2000-02-09 NZ NZ513451A patent/NZ513451A/en unknown
- 2000-02-09 SK SK1144-2001A patent/SK286428B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-02-09 AU AU32793/00A patent/AU758735B2/en not_active Ceased
- 2000-02-09 AT AT00910658T patent/ATE280181T1/de active
- 2000-02-09 WO PCT/EP2000/001044 patent/WO2000047623A1/en active IP Right Grant
- 2000-02-09 CZ CZ20012876A patent/CZ301108B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-02-09 JP JP2000598538A patent/JP4754073B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-02-09 EP EP00910658A patent/EP1151008B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-09 ES ES00910658T patent/ES2228473T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-09 IL IL14484200A patent/IL144842A0/xx unknown
- 2000-02-09 US US09/926,009 patent/US7053044B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-09 YU YU57701A patent/YU57701A/sh unknown
- 2000-02-11 AR ARP000100605A patent/AR022578A1/es unknown
- 2000-02-11 CO CO00009307A patent/CO5241361A1/es not_active Application Discontinuation
- 2000-09-02 UA UA2001075375A patent/UA72751C2/uk unknown
-
2001
- 2001-08-01 BG BG105764A patent/BG65196B1/bg unknown
- 2001-08-03 MA MA26285A patent/MA25381A1/fr unknown
- 2001-08-08 ZA ZA200106530A patent/ZA200106530B/en unknown
- 2001-08-09 NO NO20013888A patent/NO20013888L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-05-31 HK HK02104068A patent/HK1042500A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL201084B1 (pl) | Analogi SP-C, syntetyczny surfaktant oraz zastosowanie analogów SP-C i zastosowanie polimyksyny | |
| CA2689066C (en) | Reconstituted surfactants having improved properties | |
| KR20020081330A (ko) | 폴리펩토이드 폐 계면활성제 | |
| CA2666344C (en) | Reconstituted surfactants having improved properties | |
| KR101516451B1 (ko) | 인공 폐 계면활성제 펩티드 | |
| US20230302145A1 (en) | Surfactant protein c mimics displaying pathogen- or allergen-binding moieties | |
| MXPA01008073A (en) | Artificial peptides having surface activity and the use thereof in the preparation of artificial surfactant |