SK286428B6 - Analógy povrchovo aktívnej látky typu C, syntetická povrchovo aktívna látka a použitie analógov povrchovo aktívnej látky typu C - Google Patents

Analógy povrchovo aktívnej látky typu C, syntetická povrchovo aktívna látka a použitie analógov povrchovo aktívnej látky typu C Download PDF

Info

Publication number
SK286428B6
SK286428B6 SK1144-2001A SK11442001A SK286428B6 SK 286428 B6 SK286428 B6 SK 286428B6 SK 11442001 A SK11442001 A SK 11442001A SK 286428 B6 SK286428 B6 SK 286428B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
surfactant
analogs
lks
formula
gallmgl
Prior art date
Application number
SK1144-2001A
Other languages
English (en)
Other versions
SK11442001A3 (sk
Inventor
Tore Curstedt
Jan Johansson
Hans J�Rnvall
Bengt Robertson
Paolo Ventura
Original Assignee
Chiesi Farmaceutici S.P.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chiesi Farmaceutici S.P.A. filed Critical Chiesi Farmaceutici S.P.A.
Publication of SK11442001A3 publication Critical patent/SK11442001A3/sk
Publication of SK286428B6 publication Critical patent/SK286428B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/785—Alveolar surfactant peptides; Pulmonary surfactant peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

Opísané sú SP-C analógové umelé peptidy a ich použitie na prípravu umelých povrchovo aktívnych látok užitočných na liečbu syndrómu dýchacích ťažkostí(RDS) a iných ochorení týkajúcich sa deficitu alebo dysfunkcie povrchovo aktívnej látky.

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález poskytuje nové umelé peptidy s povrchovou aktivitou. Vynález poskytuje najmä SP-C analógy, ktoré, keď sa skombinujú s vhodnými lipidmi, sú výnimočne účinné na redukciu povrchového napätia na rozhraní vzduch-kvapalina.
Takže peptidy podľa vynálezu môžu byť použité v kombinácii s lipidmi a, voliteľne, v kombinácii s SP-B alebo jeho aktívnym analógom alebo môžu nahrádzať SP-B, pri príprave umelých povrchovo aktívnych látok užitočných na liečbu syndrómu respiračných ťažkostí (RDS) alebo iných deficitov, alebo dysfunkcií povrchovo aktívnych látok, príbuzných pľúcnych ochorení, ako napríklad pneumónie, bronchitídy, astmy, syndrómu vdýchnutia mekónia a aj iných ochorení, ako napríklad hlienového zápalu stredného ucha (lepkavého ucha).
Doterajší stav techniky
Pľúcna povrchovo aktívna látka znižuje povrchové napätie na rozhraní vzduch-kvapalina v alveolárnej výstelke, čím zabraňuje kolapsu pľúc na konci výdychu. Nedostatok povrchovo aktívnej látky je bežnou poruchou predčasne narodených detí a spôsobuje syndróm respiračných ťažkostí (RDS), ktorý je možné účinne liečiť prirodzenými povrchovo aktívnymi látkami extrahovanými z pľúc živočíchov (Fujiwara, T. a Robertson B. (1992) v: Robertson, B., Van Golde, L. M. G a Batenburg, B. (vyd.) Puhnonary Surfactant: From Molecular Biology to Clinical Practice, Amsterdam, Elsevier, str. 561-592). Hlavnou zložkou týchto prípravkov povrchovo aktívnych látok sú fosfolipidy, ako napríklad l,2-dipalmitoyl-í»-glyccro-3-fosfocholín (DPPC), fosfatidylglycerol (PG) a hydrofóbne povrchovo aktívne proteíny B a C (SP-B a SP-C). Hydrofilné povrchovo aktívne proteíny SP-A a SP-D, ktoré sú kolagénnymi lektínmi typu C (Ca -závislé) a sú považované za proteíny primáme účinkujúce v systéme hostiteľskej obrany, nie sú normálne zahrnuté v prípravkoch povrchovo aktívnych látok kvôli využívaniu extrakčných procedúr s organickým rozpúšťadlom.
SP-B a SP-C predstavujú len približne 1 až 2 % masy povrchovo aktívnych látok, ale aj tak sú schopné zabezpečiť dramatické zlepšenie povrchovej aktivity v porovnaní s čistými lipidovými prípravkami (Curstedt, T. a ďalší, (1987), Eur. J. Biochem. 168, 255-262; Takahashi, A., Nemoto, T. a Fujiwara, T. (1994) Acta Paediatr. Jap. 36, 613-618). Primárna a sekundárna štruktúra SP-B a SP-C a terciáma štruktúra SP-C v roztoku boli stanovené (pozri 4). SP-B je zložený z dvoch rovnakých polypeptidových reťazcov s dĺžkou 79 aminokyselín, ktoré sú spojené medzireťazcovým disulfidovým mostíkom (Curstedt, T. a ďalší (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 2985-2989; Johansson, J., Curstedt, T. a Jomvall, H. (1991) Biochemistry 30, 6917-6921). Každý monomémy reťazec má tri vnútroreťazcové disulfidové mostíky a najmenej štyri amfipatické závitnice majúce jednu polámu a jednu nepolámu plochu, prostredníctvom ktorých môže SP-B interagovať s dvoma lipidovými dvojvrstvami a dať ich do tesnej blízkosti (Andersson, M. a ďalší (1995) FEBS Lett. 362, 328-332). SP-C je lipoproteín zložený z 35 aminokyselinových zvyškov, s α-závitnicovou doménou medzi zvyškami 9 až 34 (Johansson, J. a ďalší (1994) Biochemistry 33, 6015-6023). Závitnica je zložená najmä z valínových zvyškov a je zakotvená v lipidovej dvojvrstve a je orientovaná paralelne s lipidovými acylovými reťazcami (Vandenbussche a ďalší (1992) Eur. J. Biochem. 203, 201-209). Dve palmitoylové skupiny sú kovalentné spojené cysteínovými zvyškami v polohách 5 a 6 v N-koncovej časti peptidu (Curstedt, T. a ďalší (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 2985-2989). Dva konzervatívne pozitívne nabité zvyšky, arginín a lyzín, v polohách 11 a 12, možno interagujú z negatívne nabitými prednými skupinami lipidovej membrány a tak zvyšujú jej stálosť. Stálosť interakcie lipid-peptid sa môže znižovať smerom k C-koncu, keďže obsahuje len malé hydrofóbne zvyšky, čo robí túto časť potenciálne mobilnejšou vo fosfolipidovej dvojvrstve. SP-C sa považuje za peptid, ktorý ovplyvňuje hrúbku a fluiditu okolitých lipidov prostredníctvom extrémne stabilnej poly-valylovej závitnice (Johansson, J. a Curstedt, T. (1997) Eur. J. Biochem. 244, 675-693).
Keďže povrchovo aktívne prípravky získané zo živočíšneho tkaniva majú určité nedostatky, ako napríklad ich dostupnosť v obmedzených množstvách, a možnosť, že obsahujú infekčné agensy a indukujú imunologické reakcie, uskutočňovali sa pokusy vytvoriť umelé povrchovo aktívne látky (Johansson, J. a Curstedt, T. (1997) Eur. J. Biochem. 244, 675-693; Johansson, J. a ďalší (1996) Acta Paediatr. 85, 642-646) zvyčajne zo syntetických lipidov a hydrofóbnych proteínov.
Predchádzajúca práca demonštrovala, že syntetický SP-C sa nemôže poskladať ako natívny peptid do a-závitnicovej konformácie nevyhnutnej na optimálnu povrchovú aktivitu (Johansson, J. a ďalší, (1995) Biochem. J. 307, 535-541) a preto neinteraguje správne s povrchovo aktívnymi lipidmi.
Následkom toho sa SP-C analógy neskladajú ako natívny peptid a neinteragujú správne s povrchovo aktívnymi lipidmi. Aby sa obišiel tento problém, uskutočnilo sa niekoľko pokusov modifikovať sekvenciu, naprí klad zamenením všetkých závitnicových Val zvyškov v prirodzenom SP-C s Leu, ktorý silne zvýhodňuje azávitnicovú konformáciu. Zodpovedajúci transmembránový analóg SP-C(Leu) vykazoval dobré rozptyľovanie na rozhraní vzduch-kvapalina, keď sa kombinoval s DPPC : PG : PA (68 : 22 : 9) (w/w/w). Avšak maximálna hodnota povrchového napätia počas cyklickej povrchovej kompresie (ymax) bola významne vyššia ako hodnota natívnej povrchovo aktívnej látky. Navyše nebolo možné pripraviť zmes lipid-peptid s vyššou koncentráciou ako približne 20 mg/ml, pravdepodobne v dôsledku vytvárania peptidových oligomérov (Nilsson, G. a ďalší, (1998) Eur. J. Biochem. 255, 116-124). Ďalší syntetizovali biologicky aktívne polyleucínové SP-C analógy s rozličnými dĺžkami (Takei, T. a ďalší, (1996) Biol. Pharm. Bull. 19, 1550-1555). V týchto štúdiách nebolo publikované ani vytváranie oligomérov, ani problémy s produkciou vzoriek s vysokou koncentráciou lipidov.
Rôzne publikácie sa zaoberali problémom poskytnutia peptidových analógov prirodzených povrchovo aktívnych peptidov, pričom bolo podaných množstvo rozličných riešení. V rámci týchto publikácií, WO93/21225, EP 733645, WO96/17872, v mene Tokyo Tanabe, opisujú peptidové analógy prirodzeného SP-C, ktoré sa vo všeobecnosti líšia od natívneho peptidu sekvenciou v N-koncovej časti.
Prihlášky vynálezov WO89/06657 a WO92/22315, v mene Scrips Research Inštitúte, opisujú SP-B analógy so zmenenými hydrofóbnymi a hydrofilnými aminokyselinovými zvyškami. Medzi inými sú nárokované peptidy so zamenenými leucínovými a lyzínovými zvyškami (KL4).
Clercx A. a ďalší, Eur. J. Biochem 229, 465-72, 1995, opisujú peptidy s rozličnou dĺžkou zodpovedajúce Nkoncu prasačieho SP-C a hybridné peptidy odvodené od prasačieho SP-C a bakteriorodopsínu.
Johansson J. a ďalší, Biochem. J. 307, 535-541, 1995, opisujú syntetické peptidy, ktoré sa odlišujú od natívneho prasačieho SP-C substitúciou niektorých aminokyselín.
WO89/04326 v mene Califomia Biotechnology - Byk Gulden, a WO91/18015 v mene Califomia Biotechnology- Scios Nová, opisujú SP-C analógy obsahujúce počiatočnú N-koncovú sekvenciu, v ktorej sú dva Cys prirodzeného SP-C nahradené dvoma Ser.
Podstata vynálezu
Teraz sa zistilo, že SP-C analógové peptidy, ktoré kombinujú nasledujúce znaky: i) substitúcia Val zvyškov inými neutrálnymi a hydrofóbnymi zvyškami; ii) substitúcia Cys zvyškov Ser zvyškami; iii) nahradenie niektorých neutrálnych aminokyselinových zvyškov veľkými alebo polárnymi zvyškami, vykazujú výnimočne výhodné vlastnosti znižovania povrchového napätia. Najmä sa zistilo, že posledný znak, umožňuje prostredníctvom pozitívnych nábojov udeľovaných polárnymi zvyškami alebo prostredníctvom priestorového zatienenia poskytnutého veľkými substituentmi, zabrániť oligomerizácii.
Z toho vyplýva, že ako prvé uskutočnenie poskytuje vynález SP-C analógy s nasledujúcim všeobecným vzorcom (I), pričom je použitý jednopísmenový aminokyselinový kód:
FeGfIPZZPVHLKR(XaB)n(XbB)n(XcB)nlXdGALLMGL (I), kde:
X znamená aminokyselinu vybranú zo skupiny, ktorá obsahuje V, I, L, Nie (norleucín);
B znamená aminokyselinu vybranú zo skupiny, ktorá obsahuje omitín, K, I, W, F, Y, Q, N;
Z znamená aminokyselinu vybranú zo skupiny, ktorá obsahuje S, C, F, kde sú Ser alebo Cys zvyšky voliteľne spojené esterovou alebo tio-esterovou väzbou s acylovými skupinami obsahujúcimi 12 až 22 spojených atómov uhlíka;
a znamená prirodzené číslo od 1 do 19;
b znamená prirodzené číslo od 1 do 19;
c znamená prirodzené číslo od 1 do 21;
d znamená prirodzené číslo od 0 do 20;
e je 0 alebo 1;
f je 0 alebo 1;
n je 0 alebo 1;
m je 0 alebo 1;
s podmienkami, že:
- n + m > 0,
- f > e;
- (XaB)n(XbB)„('XcB)mXd je sekvencia, ktorá má maximálne 22 aminokyselín, výhodne 10 až 22 aminokyselín.
Výhodné peptidy vzorca I majú nasledujúce sekvencie:
(la) FGIPSSPVHLKRX4BX4BX4BXGALLMGL (lb) FGIPSSPVHLKRX5BX5BX4GALLMGL (lc) FGIPSSPVHLKRX4BXHGALLMGL (ld) FGIPSSPVHLKRX8BX7GALLMGL (le) FGIPSSPVHLKRXnBX+GALLMGL
Spomedzi sekvencií la až Ie sú výhodné tie, v ktorých B znamená Lys alebo Phe a X znamená Leu, íle alebo Nie.
Podľa výhodných uskutočnení majú peptidy vzorca (la) až (If) nasledujúce sekvencie: FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLKILLLKLGALLMGL [SP-C (LKS)] FGIPSSPVHLKRLLILLKLLLLIKLLILGALLMGL [SP-C (LKS)i] FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLLILLLILGALLMGL [SP-C (LKS)J FGIPSSPVHLKRLLILLLLLKLILLLILGALLMGL [SP-C (LKS)3] FGIPSSPVHLKRLLILLLLLLLIKLLILGALLMGL [SP-C (LKS)4j FGIPSSPVHLKRLLILFLLLLFILLLFLGALLMGL [SP-C (LFS)]
Vo výhodnejšom uskutočnení vynálezu sú Ser zvyšky kovalentne spojené s acylovými skupinami obsahujúcimi 12 až 22 atómov uhlíka.
Peptidy vzorca (I) môžu byť pripravené syntetickými metódami alebo rekombinantnými technikami.
Bežné syntetické metódy sú opísané napríklad v Schroeder a ďalší, „The peptides“, zv. 1, Academic Press, 1965; Bodanszky a ďalší, „Peptide synthesis“, Interscience Publisher, 1996; Baramy a Merrifield, „The peptides; Analysis, Synthesis, Biology“, zv. 2, kapitola 1, Academic Press, 1980. Uvedené techniky zahŕňajú peptidovú syntézu v tuhej fáze, v roztoku, organické chemické syntetické metódy alebo ich akúkoľvek kombináciu.
S- alebo O- acetylované peptidy sa výhodne syntetizujú pôsobením acylchloridu na neacylované peptidy v čistej kyseline trifluóroctovej, ako je opísané v Yousefi-Salakdeh a ďalší, Biochem J. 1999, 343, 557-562. Po syntéze a purifikácii sa syntetické peptidy biochemický a biofyzikálne charakterizovali, ako je uvedené v nasledujúcej časti Príklady uskutočnenia vynálezu.
Aktivita peptidov podľa vynálezu pri znižovaní povrchového napätia sa zhodnocovala v kombinácii s lipidmi a fosfolipidmi, SP-B, analógmi SP-B alebo substituentmi SP-B. Peptidy boli kombinované najmä s DPPC (l,2-dipalmitoyl-src-glycero-3-fosfocholín)/PG (fosfatidylglycerol)ZPA (kyselina palmitová) s alebo bez SP-B, jeho aktívnym analógom a polymyxínmi.
Výsledky testov pulzujúcej bublinovej povrchovej aktivity jasne ukazujú, že syntetické peptidy podľa predloženého vynálezu silne znižujú minimálne a maximálne povrchové napätie počas cyklickej povrchovej kompresie (ynlin a ymax) na hodnoty porovnateľné s hodnotami získanými použitím povrchovo aktívnym látok z prirodzených zdrojov.
Pridanie SP-B alebo jeho aktívneho analógu do zmesi peptid/lipidy-fosfolipidy poskytlo výnimočne priaznivé výsledky. Okrem toho sa prekvapujúco zistilo, že polymyxíny, najmä polymyxín B, slúžia ako substituenty SP-B a ich pridanie vedie k výsledkom porovnateľným s výsledkami dosiahnutými s SP-B.
Podľa druhého uskutočnenia poskytuje vynález syntetickú povrchovo aktívnu látku, ktorá obsahuje jeden alebo viac peptidov vzorca (I), v zmesi s lipidmi a/alebo fosfolipidmi a voliteľne s SP-B, jeho aktívnymi derivátom alebo polymyxínmi. Vhodné lipidy/fosfolipidy môžu byť vybrané zo skupiny pozostávajúcej z fosfatidylcholínov (výhodne DPPC), PG, PA, triacylglycerolov, sfingomyelínu.
V ešte výhodnejšom uskutočnení vynálezu by mali byť použité povrchovo aktívne zmesi obsahujúce peptid, v ktorom sú palmitoylové reťazce O-kovalentne spojené so Ser zvyškami. Zistilo sa, že povrchovo aktívne zmesi obsahujúce dipalmitoylovanú formu referenčného peptidu (SP-C(Leu) vykazujú vyššiu povrchovú filmovú stabilitu a zvyšujú veľkosť s povrchom asociovanej lipidovej zásoby v porovnaní so zmesami obsahujúcimi zodpovedajúci nepalmitoylovaný peptid, ako bolo merané záchytným bublinovým systémom. Pri vzorkách obsahujúcich 5 % dipalmitoylovaného peptidu bolo γη1ιη nižšie ako 1,5 mN/m a filmy boli veľmi stabilné, keďže povrchové napätie sa zvýšilo o menej ako 0,5 mN/m za 10 minút pri konštantnom objeme bubliny. Naproti tomu bolo ymin pre nepalmitoylovaný peptid približne 5 mN/m a filmy boli menej stabilné, čo sa pozorovalo častým praskaním bublín pri nízkych povrchových napätiach. Okrem toho po subfázovom vyčerpaní vzoriek, ktoré obsahujú nepalmitoylovaný peptid, sa schopnosť dosiahnuť skoro nulové stabilné povrchové napätie stratila po niekoľkých adsorpčných krokoch, zatiaľ čo s dipalmitoylovaným peptidom sa kvalita filmu nepoškodila ani po viac ako 10 expanzných krokoch a ani po začlenení zásobného materiálu, ktorý bol ekvivalentný viac ako dvom monovrstvám. Zlepšenie povrchovej aktivity dipalmitoylovaných peptidov bolo demonštrované aj pulzujúcim bublinovým surfaktometrom. Okrem toho sa zistilo, že prítomnosť acylových skupín znižuje aj tendenciu vytvárať oligoméry. Toto zistenie je veľmi dôležité, keďže sa počas prípravy umelých povrchovo ak tívnych látok zistilo, že oligomerizácia peptidov zabraňuje príprave zmesí s vyššími koncentráciami ako 20 mg/ml (Nilsson a ďalší, Eur. J. Biochem 1998,255, 116-124).
Syntetická povrchovo aktívna látka môže byť pripravená zmiešaním roztokov alebo suspenzií peptidov a lipidov a následným vysušením zmesi.
V prípade potreby môže byť zmes suspendovaná, dispergovaná alebo podávaná sama osebe subjektom, ktoré potrebujú liečbu deficitu povrchovo aktívnej látky.
Syntetická povrchovo aktívna látka bude výhodne podávaná endotracheálne alebo prostredníctvom aerosólu. Podávanie prostredníctvom aerosólu bude vyžadovať kombináciu malých častíc povrchovo aktívnej látky s vhodným inertným hnacím plynom. Do rozsahu vynálezu sú zahrnuté aj iné formy podávania, ako rozprašovanie alebo sprejovanie stabilných roztokov/suspenzií povrchovo aktívnej látky.
V súlade s ďalším uskutočnením vynález poskytuje použitie opísaných peptidov na prípravu povrchovo aktívneho činidla na použitie vo všetkých prípadoch deficitu alebo dysfunkcie povrchovo aktívnej látky u dospelých alebo novorodencov, ako aj v prípadoch príbuzných pľúcnych ochorení, ako napríklad pneumónie, bronchitídy, astmy, syndróme vdýchnutia mekónia a aj iných ochorení, ako napríklad v prípade serózneho zápalu stredného ucha (lepkavého ucha).
Typicky bude povrchovo aktívne činidlo používané, výhodne prostredníctvom endotracheálneho podávania, na liečbu syndrómu dýchacích ťažkostí, ktorý často postihuje predčasne narodené deti.
Nasledujúce príklady podrobnejšie ilustrujú vynález.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1
Aminokyselinové sekvencie a závitnicové kruhové vyobrazenia SP-C a jeho analógov
Sekvencia ľudského SP-C je prevzatá z publikácie Johansson, J. a ďalší (1988) FEBS Lett. 232, 61-64 a sekvencia SP-C(Leu) je prevzatá z publikácie Nilsson, G., a ďalší (1998) Eur. J. Biochem. 255, 116-124). SPC(LKS) je založený na primárnej štruktúre SP-C, ale všetky Val zvyšky v polohách 16 až 28, s výnimkou zvyšku v polohe 17, sú nahradené Leu zvyškami, Lys zvyšky boli začlenené do polôh 17, 22 a 27 a palmitoylované Cys v polohách 5 a 6 boli nahradené Ser.
Obrázok 2
Povrchové rozšírenie syntetických povrchovo aktívnych prípravkov
Rozširovacie kinetiky 3 hmotnostných % SP-C(LKS) (plné štvorčeky, neprerušovaná čiara) a 3 hmotnostných % SP-C(LKS) s pridaním 2 hmotnostných % SP-B (nevyplnené trojuholníky, prerušovaná čiara). Všetky prípravky sa skúmali v koncentrácii 10 mg/ml zmesi DPPC/PG s pomerom 7 : 3 (w/w), v 150mmol/ NaCl. Záznamy sa získali s Wilhelmy rovnováhou a každý údajový bod je priemerom troch rozličných záznamov.
Obrázok 3
In vivo výsledky
Pľúcno-hrudníková zhoda v 5 predčasne narodených králikoch (gestačný vek 27 dní), ktoré boli ventilovane štandardizovaným objemom respiračného vzduchu 8 až 10 ml/kg a bez pozitívneho koncového výdychového tlaku (PEEP). Zhoda sa významne zlepšila u ošetrených zvierat. Zistilo sa, že pridanie polymyxínu B (PxB) zvyšuje účinok umelej povrchovo aktívnej látky. Koncentrácia fosfolipidov je rovnaká ako vo všetkých povrchovo aktívnych prípravkoch, tzn. 40 mg/ml.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Syntéza a purifíkácia peptidu
SP-C analóg, SP-C(LKS) (obrázok 1) bol syntetizovaný použitím technológie postupnej syntézy v tuhej fáze a použitím terc-butyloxykarbonylu (Kent, S.B.H. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57, 957-989) v Applied Biosystems 430Λ zariadení. Štiepenie väzby medzi živicou a peptidom a odstránenie ochranných skupín bočných reťazcov sa uskutočňovalo v zmesi bezvodného hydrogénfluoridu, metoxybenzénu a dimetylsulfídu v pomere 10 : 1 : 1 (v/v/v), 1,5 hodiny pri 0 °C. Ochranné skupiny a odpadové látky sa odstránili opakovanou extrakciou s dietyléterom a peptid sa následne extrahoval zo živice zmesou dichlórmetánu a kyseliny trifluóroctovej (TFA) v pomere 3 : 1 (v/v) a nasledovala rotačná evaporácia. Surový peptidový extrakt sa znova rozpustil v koncen trácii 100 mg/ml v zmesi chloroformu a metanolu v pomere 1 : 1 (v/v) obsahujúcej 5 % H2O. 10 mg alikvoty sa nanášali na Sephadex LH-60 kolónu (40 x 1 cm) v rovnakom rozpúšťadle (Curstedt, T. a ďalší (1987) Eur. J. Biochem. 168, 255-262). Zbierali sa 2,5ml frakcie a absorbancie sa merali pri 214 nm a 280 nm. Identifikácia a kvantifikácia sa uskutočňovala aminokyselinovou analýzou.
Na acyláciu sa purifikovaný peptid (typicky približne 5 mg) vysušil, rozpustil v destilovanej TFA (100 μΐ) a pridal sa acylchlorid (10 až 20 ekvivalentov v porovnaní s peptidom). Po 10 minútach sa reakcia zastavila 80 % vodným etanolom (1,9 ml). Purifikácia acylových peptidov sa uskutočňovala použitím chromatografie na Lipidex 5000 v zmesi etylénchloridu a metanolu v pomere 1 : 4 (v/v) a nasledovala reverzná fázová HPLC na C18 kolóne použitím lineárneho gradientu zmesi 2-propanolu a 0,1 % TFA bežiacej do zmesi 60 % (vodného) metanolu a 0,1 % TFA alebo 75 % (vodného) etanolu a 0,1 % TFA.
Príklad 2
Biochemická charakterizácia
Čistota peptidu sa skontrolovala polyakrylamidovou gélovou elektroforézou (PAGE) v dedecylsulfáte sodnom (SDS) (Phast-system, Pharmacia, Švédsko) a reverznou fázovou kvapalnou chromatografiou s vysokou rozlišovacou schopnosťou (HPLC) použitím C18 kolóny a lineárneho gradientu zmesi 60 % vodného metanolu a 0,1 % TFA a zmesi izopropanolu a 0,1 % TFA (Gustafsson, M. a ďalší (1997) Biochem. J. 326, 799-806).
Sekundárna štruktúra peptidu sa skúmala použitím cirkulámej dichromickej (CD) spektroskopie (Jasco-720 Jasco, Japonsko). Po vytvorení roztoku s trifluóretanolom (TFE) sa zaznamenávali spektrá od 260 nm do 184 nm so skenovacou rýchlosťou 30 nm/min. a rozlíšením 2 údajové body/nm. Moláme eliptičnosti pri 208 nm a 222 nm sa využili na odhad obsahu závitnicovej štruktúry (Barrow, C. J. a ďalší (1992) J. Mol. Biol. 225, 10751093).
Skúmanie sekundárnej štruktúry SP-C(LKS) použitím CD spektroskopie ukázali spektrum typické pre ot-závitnicové peptidy a z 208 nm a 222 nm minima sa odhadol obsah α-závitníc na približne 75 %. Sekundárna štruktúra ostávala stabilná po postupnom riedení s H2O až kým TFE nebol v množstve 12 % za predpokladu, že peptid bol rozpustený v čistom TFE.
SDS-PAGE SP-C(LKS) ukázala jeden pás podobný prirodzenému SP-C, zatiaľ čo SP-C(Leu), ktorému chýba Lys v závitnicovej časti, vytvára oligoméry. Na rozdiel od našej skúsenosti so zmesami SP-C(Leu)/lipid, ktoré je ťažké rozpustiť vo vyšších koncentráciách ako 20 mg/ml (Nilsson, G. a ďalší (1998) Eur. J. Biochem. 255, 116-124), bolo možné vytvoriť zmes SP(LKS)/lipid s koncentráciou lipidu 80 mg/ml a s pomerom polypeptid/lipid 0,03.
Príklad 3
Príprava peptidových/lipidových zmesí
DPPC, PG a PA sa všetky kúpili od firmy Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Všetky lipidy, rozpustené v zmesi chloroformu a metanolu s pomerom 98 : 2 (v/v) sa zmiešali v zmesi DPPC : PG : PA s pomerom 68 : 22 : 9 (w/w/w) alebo DPPC/PG s pomerom 7 : 3 (w/w). Povrchovo aktívne prípravky sa pripravili pridaním samostatného SP-C(LKS) alebo SP-C(LKS) a SP-B do každej z lipidových zmesí do celkových hmotnostných pomerov polypeptidu a lipidu v rozsahu od 0 do 0,05. Zmesi sa evaporovali v dusíku a resuspendovali sa v 150 mmol/1 NaCl alebo v 10 mmol/1 Hepes tlmivého roztoku s pH 6,9 obsahujúcom 140 mmol/1 NaCl a 2,0 mmoVl CaCl2, s koncentráciami lipidu od 10 do 80 mg/ml. Uskutočňovalo sa opakované zmrazovanie a sonifikácia (50 W, 48 kHz), až kým sa nedosiahli homogénne suspenzie. V niektorých prípadoch sa finálne suspenzie inkubovali pri 45 °C 1 hodinu.
Povrchovo aktívne prípravky rozsuspendované v 150 mmol/1 NaCl majú pH 3,5 až 5,5. Nižšie pH hodnoty, 3,5 až 4,5, boli pozorované v prípravkoch obsahujúcich SP-B. Keďže prirodzený SP-B sa purifikuje použitím okyslených organických rozpúšťadiel (Curstedt, T. a ďalší, (1987) Eur. J. Biochem. 168, 255-262), môžu malé množstvá kyseliny ostať v prípravkoch. pH blízke fyziologickému pH sa získalo rozsuspendovaním povrchovo aktívneho prípravku v Hepes tlmivom roztoku s pH 6,9 obsahujúcom 140 mmol/1 NaCl a 2 mmoVl CaCl2 (tabuľka 1). V porovnaní so zodpovedajúcimi prípravkami v netlmenom fyziologickom roztoku sa nevyskytli žiadne zmeny ymax alebo ymin, keď sa ako lipidová zmes použila DPPC/PG s pomerom 7 : 3 (w/w). Avšak, keď sa do lipidovej zmesi zahrnula PA, pri zvýšenom pH sa zvýšilo ymax, ako aj γηιίη (tabuľka 1 a 2).
Tabuľka 1: Povrchové vlastnosti prípravkov umelých povrchovo aktívnych látok vo fyziologickom roztoku Merania sa uskutočňovali priamo po príprave vzoriek alebo po hodinovom inkubovaní vzoriek pri 45 °C. Koncentrácia fosfolipidov bola 10 mg/ml v NaCl 150 mmol/1. Záznamy sa získali v rozličných časových periódach pulzujúcim bublinovým surfaktometrom pri 37 °C, 50 % povrchovej kompresii a s rýchlosťou 40 cyklov za min. Hodnoty sú priemerom (štandardná odchýlka) 3 až 5 meraní. Skratky sú definované v texte.
Príprava povrchovo aktívnej látky Povrchové napätie (mN/m)
SP-C (LKS) (% w/w) SP-B (% w/w) Fosfolipidy Inkubačná teplota 7,5 s Ymin Ymax 1 min. Ymin Ymax 5 min. Ymin Ymax
3 - DPPC/PG/PA - <1 41(1) <1 41(1) <1 41(0)
3 - DPPC/PG/PA 45 °C <1 41(1) <1 41(1) <1 41(1)
3 2 DPPC/PG/PA - <1 33(2) <1 33(2) <1 33(2)
3 2 DPPC/PG/PA 45 °C <1 34(1) <1 34(2) <1 25(2)
3 - DPPC/PG - 12 39(5) 14(4) 42(4) 9(5) 42(2)
3 - DPPC/PG 45 °C 8(3) 35(5) 9(3) 39(5) 6(4) 42(3)
3 2 DPPC/PG - 2(1) 31(1) 2(1) 31(3) 2(1) 33(1)
3 2 DPPC/PG 45 °C 3(3) 29(3) 1(1) 33(2) 1(0) 36(1)
3 1 DPPC/PG - <1 24(4) 1(2) 26(4) <1 31(1)
3 0,5 DPPC/PG 45 °C 4(2) 29(1) 4(3) 29(2) 3(1) 34(2)
Tabuľka 2
Povrchové vlastnosti prípravkov umelej povrchovo aktívnej látky v tlmenom rozkoku solí
Merania sa uskutočňovali vo vzorkách obsahujúcich fosfolipidy s koncentráciou bola 10 mg/ml v Hepes tl5 mivom roztoku (pH 6,9), ktorý obsahoval NaCl, 140 mmol/1, a CaCl2, 2,0 mmol/1. Záznamy sa získali v rozličných časových periódach pulzujúcim bublinovým surfaktometrom pri 37 °C, 50 % povrchovej kompresii a s rýchlosťou 40 cyklov za min. Hodnoty sú priemerom (štandardná odchýlka) 3 až 5 meraní. Skratky sú definované v texte.
Príprava povrchovo aktívnej látky Povrchové napätie (mN/m)
SP-C (LKS) (% w/w) SP-B (% w/w) Fosfolipidy 7,5 s 1 min. 5 min.
Yrriin Ymax Ymin Ymax Ymin Ymax
3 - DPPC/PG/PA 4(1) 44(2) 5(2) 47(2) 7(2) 50(1)
3 2 DPPC/PG/PA 3(3) 38(3) 4(4) 40(2) 3(3) 44(2)
3 - DPPC/PG 15(3) 39(4) 16(2) 42(3) 13(3) 44(3)
3 2 DPPC/PG 2(2) 26(3) Kl) 29(3) <1 35(1)
Príklad 4
Príprava fosfolipidových zmesí s SP-C(LKS) a polymyxínom B
DPPC a PG sa kúpili od firmy Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Lipidy, rozpustené v zmesi chloroformu a metanolu s pomerom 98 : 2 (v/v), sa zmiešali v pomere DPPC : PG 7 : 3 (w/w). SP-C(LKS) sa pridal 15 ku fosfolipidovým zmesiam do celkového hmotnostného pomeru polypeptid/fosfolipid 0,03. Zmesi sa evaporovali v dusíku a resuspendovali sa pri laboratórnej teplote v 10 mmol/1 Hepes tlmivého roztoku s pH 6,9 obsahujúcom 140 mmol/1 NaCl a 2,0 mmol/1 CaCl2 alebo v rovnakom tlmivom roztoku obsahujúcom 0,01 % polymyxin B (PxB) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Uskutočňovalo sa opakované zmrazovanie a sonifikácia (50 W, 48 kHz), až kým sa nedosiahli homogénne suspenzie. Konečná fosfolipidová koncentrácia v oboch prí20 pravkoch bola 10 mg/ml. Pridanie PxB znížilo tak ymi„, ako aj ymaK, a bola dosiahnutá optimálna povrchová aktivita (tabuľka 3).
Tabuľka 3
Povrchové vlastnosti umelej povrchovo aktívnej látky s a bez polymyxínu B
Záznamy sa získali v rozličných časových periódach pulzujúcim bublinovým surfaktometrom pri 37 °C, % povrchovej kompresii a s rýchlosťou 40 cyklov za min. Hodnoty sú priemerom (štandardná odchýlka) 5 až 11 meraní. Skratky sú definované v texte.
Príprava povrchovo aktívnej látky Povrchové napätie (mN/m)
SP-C (LKS) (% w/w) PxB (% w/w) Fosfolipidy 7,5 s 1 min. 5 min.
Ymín Ymax Ymin Ymax Ymin Ymax
3 - DPPC/PG 15(3) 39(4) 16(2) 42(3) 13(3) 44(3)
3 1 DPPC/PG 3(2) 29(3) 2(2) 31(4) 1(1) 34(2)
Príklad 5
Biofyzikálna charakterizácia
Povrchové rozptyľovacie kinetiky sa merali pri približne 34 až 37 °C s Wilhelmy povrchovou rovnováhou (Biegler, Viedeň, Rakúsko). Povrchové napätie sa monitorovalo 10 minút použitím platinovej platne, ktorá bola spojená s napnutou mierkou a na 1 mm začlenená do hypofázy 20 ml 150mmol/l NaCl v teflónovom žľabe. Po kvapkách sa pridali suspenzie, celkovo 1 mg lipidov na hypofázu, 4 cm z platinovej platne.
Kinetické merania 3 hmotnostných % SP-C(LKS) v DPPC/PG s pomerom 7 : 3 (w/w), použitím Wilhelmy rovnováhy ukázali rýchle šírenie s povrchovým napätím 28 mN/m po 3 sekundách (obrázok 2). Rozširovanie bolo o niečo pomalšie použitím 1 hmotnostného % SP-C(LKS) v rovnakej lipidovej zmesi (údaje nie sú znázornené). Pridanie 2 hmotnostných % SP-B významne nezmenilo rozširovanie ani rovnováhu povrchového napätia (obrázok 2). Žiadne zlepšenia sa nepozorovali po inkubovaní zmesi 1 hodinu pri 45 °C (údaje nie sú znázornené). Podobné výsledky boli získané s DPPC : PG : PA s pomerom 68 : 22 : 9 (w/w/w) ako lipidovou zmesou (údaje nie sú uvedené).
Dynamické povrchové napätie sa zaznamenávalo použitím pulzujúceho bublinového surfaktometra (Surfactometer International, Toronto, Kanada), pri 37 °C počas 50 % cyklickej kompresie bublinového povrchu a s frekvenciou 40 cyklov za minútu. Všetky merania sa uskutočňovali 5 minút a s koncentráciou lipidov 10 mg/ml. Tlakové gradienty v stene bubliny sa merali v konkrétnych časových intervaloch a boli použité na vypočítanie povrchových napätí pri minimálnej (ymin) a maximálnej (y„,ax) veľkosti bubliny.
V pulzujúcom bublinovom surfaktometri vytvorili 3 hmotnostné % SP-C(LKS) v DPPC : PG : PA s pomerom 68 : 22 : 9 (w/w/w) povrchové napätie nižšie ako 1 mN/m pri minimálnom priemere bubliny (γηιίη), zatiaľ čo Ymin s hodnotou 9 až 14 mN/m bolo pozorované s 3 hmotnostnými % SP-C(LKS) v DPPC:PG s pomerom 7 : 3 (w/w) (tabuľka 1). Povrchové napätie pri maximálnom priemere bubliny (ymax) bolo v oboch prípadoch približne 40 mN/m. Výsledkom pridania 2 hmotnostných % SP-B boli y^ hodnoty 31 až 33 mN/m a yrain hodnoty 0 až 2 mN/m pre oba lipidové prípravky. Tieto hodnoty sú veľmi podobné s hodnotami získanými s povrchovo aktívnymi prípravkami izolovanými z prirodzených zdrojov (Robertson, B. a ďalší (1990) Prog. Respir. Res. 25, 237-246). Inkubovanie prípravkov pri 45 °C 1 hodinu nemalo žiaden významný účinok na povrchovú aktivitu (tabuľka 1). Zníženie množstva SP-B na 0,5 hmotnostných % v 3 hmotnostných % SP-C(LKS) v zmesi DPPC ·. PG s pomerom 7 : 3 (w/w) malo tendenciu zvyšovať ymin, hoci výsledky nedosiahli štatistickú významnosť (tabuľka 1). Na rozdiel od SP-B, pridanie 2 hmotnostných % KL4 (Cochrane, C.G. a Revak, S. D. (1991) Science 254, 566-568) k 3 hmotnostným % SP-C(LKS) v DPPC : PG : PA s pomerom 68 : 22 : 9 (w/w/w) neredukovalo ymax, ktoré ostávalo relatívne vysoké s hodnotou 41 až 42 mN/m.
Príklad 6
Porovnanie medzi zmesami obsahujúcimi dipalmitoylované a nepalmitoylované referenčné peptidy
Povrchovo aktívne prípravky sa pripravili pridaním 3 % w/w SP-C(Leu) alebo dipalmitoylovaného SP-C(Leu) do lipidovej zmesi vyrobenej ako DPPC/PG/PA s pomerom 68 : 22 : 9 w/w/w. Zmesi sa evaporovali v dusíku a rozsuspendovali sa v 150 mmol/1 NaCl do koncentrácie lipidov 10 mg/ml. Do vzoriek, v ktorých bol použitý aj SP-B substituent, sa pridalo 1 % w/w polymyxínu B.
Zmesi obsahujúce dipalmitoylovaný SP-C(Leu), s alebo bez polymyxínu B, vykazovali významné zlepšenie najmä v znižovaní ymax pri 5 minútach a Ymin v skorších časových intervaloch.
Príprava povrchovo aktívnej látky Povrchové napätie (mN/m)
SP-C(Leu) Dipalm. SP- -C(Leu) PxB 7,5 s 1 min. 5 min.
(% hmotn.) (% hmotn.) (% hmotn.) Ymin Ymax Ymin Ymax Ymin Ymax
1 - - 11 39 6,2 39 2 42
1 - 1 3 37 3 38 0 40
- 1 - 1 34 1 35 1 36
- 1 1 0 29 0 34 0 35
Príklad 7
In vivo determinácia
Účinok terapie s povrchovo aktívnou látkou na mechanické vlastnosti nezrelých pľúc sa zhodnocoval na 9 predčasne narodených králikoch s gestačným vekom 27 dní. Zvieratá sa pri narodení tracheotomizovali a päť z nich dostalo prostredníctvom tracheálnej kanyly dvakrát 2,5 ml/kg umelej povrchovo aktívnej látky obsahujúcej DPPC, PG a SP-C(LKS), s alebo bez polymyxinu B, v uvedených pomeroch. Celková fosfolipidová koncentrácia exogénneho povrchovo aktívneho materiálu bola 40 mg/ml. Dve zvieratá, slúžiace ako negatívna kontrola, nedostali cez tracheálnu trubicu žiadny materiál a ďalšie dve, slúžiace ako pozitívna kontrola, boli ošetrené rovnakou dávkou modifikovanej prirodzenej povrchovo aktívnej látky (Curosurf, Chiesi Farmaceutici Spa, Parma, Taliansko), nariedenou na 40 mg/ml. Jedno zviera sa ošetrilo zmesou DPPC a PG vo fyziologickom roztoku (rovnaké koncentrácie ako vyššie) v dávke 2,5 ml/kg. Všetky zvieratá sa udržiavali v telesných pletysmografických boxoch s teplotou 37 °C a paralelne sa ventilovali 60 minút so 100 % kyslíkom použitím Servo Ventilátora 900B (Siemens-Elema, Solna, Švédsko) nastaveného na frekvenciu 40 minút a 50 % inspiračný čas. Objemy respiračného vzduchu sa merali s pneumotachygrafom spojeným s každým pletysmografickým boxom. Zvieratá sa ventilovali so štandardnými objemami respiračného vzduchu 8 až 10 ml/kg a bez pozitívneho koncového výdychového tlaku (PEEP). Pľúcno-hrudníková zhoda bola definovaná ako pomer medzi objemom respiračného vzduchu a vrcholom nádychového tlaku, a bola vyjadrená ako ml/cm H2O kg.
V porovnaní s neošetrenými kontrolnými zvieratami sa významne zlepšila zhoda u zvierat ošetrených s umelou povrchovo aktívnou látkou, najmä u zvierat, ktoré dostali povrchovo aktívnu látku obsahujúcu polymyxín B. Pozoruhodné je, že zlepšenie je výraznejšie ako po ošetrení s podobnou dávkou modifikovanej prirodzenej povrchovo aktívnej látky (obrázok 3).
Zoznam sekvencii <110> Chiesi Farmaceutici spa < 120> Umelé peptidy s povrchovou aktivitou a ich použitie na prípravu umelých povrchovo aktívnych látok <130> chiesi <140>
<141>
<150> MI99A000275 <151> 1999-02-12 <160>6 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 35 <212>PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: syntetické peptidy <400> 1
Phe Gly íle Pro Ser Ser Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu íle Leu 15 10 15
Lys Leu Leu Leu Leu Lys íle Leu Leu Leu Lys Leu Gly Ala Leu Leu 20 25 30
Met Gly Leu <210> 2 <211> 35 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: syntetické peptidy <400> 2
Phe Gly íle Pro Ser Ser Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu íle Leu
5 10 15
Leu Lys Leu Leu Leu Leu íle Lys Leu Leu íle Leu Gly Ala Leu Leu 20 25 30
Met Gly Leu <210> 3 <211> 35 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: syntetické peptidy <400> 3
Phe Gly íle Pro Ser Ser Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu íle Leu 15 10 15
Lys Leu Leu Leu Leu Leu íle Leu Leu Leu íle Leu Gly Ala Leu Leu 20 25 30
Met Gly Leu <210> 4 <211>35 <212>PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: syntetické peptidy <400> 4
Phe Gly íle Pro Ser Ser Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu íle Leu 15 10 15
Leu Leu Leu Leu Lys Leu íle Leu Leu Leu íle Leu Gly Ala Leu Leu 20 25 30
Met Gly Leu <210> 5 <211> 35 <212>PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: syntetické peptidy <400>5
Phe Gly íle Pro Ser Ser Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu íle Leu
10 15
Leu Leu Leu Leu Leu Leu íle Lys Leu Leu íle Leu Gly Ala Leu Leu
25 30
Met Gly Leu <210> 6 <211> 35 <212>PRT <213> Umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: syntetické peptidy <400> 6
Phe Gly íle Pro Ser Ser Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu íle Leu
5 10 15
Phe Leu Leu Leu Leu Phe íle Leu Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu Leu
25 30
Met Gly Leu

Claims (16)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Analógy povrchovo aktívnej látky typu C všeobecného vzorca (I), v súlade s jednopísmenovým aminokyselinovým kódom:
    FeGfIPZZPVHLKR(XaB)n(XbB)n(XcB)mXdGALLMGL (I), kde:
    X znamená aminokyselinu vybranú zo skupiny, ktorá obsahuje V, I, L, Nie -norleucín;
    B znamená aminokyselinu vybranú zo skupiny, ktorá obsahuje K, W, F, Y, omitín;
    Z znamená S a môže byť voliteľne spojené esterovou alebo tio-esterovou väzbou s acylovou skupinou obsahujúcou 12 až 22 atómov uhlíka;
    a znamená celé číslo od 1 do 19;
    b znamená celé číslo od 1 do 19;
    c znamená celé číslo od 1 do 21;
    d znamená celé číslo od 0 do 20;
    e je 0 alebo 1;
    f je 0 alebo 1;
    n je 0 alebo 1;
    m je 0 alebo 1;
    s podmienkami, že:
    -n + m>0,
    -f >e;
    - (XaB)n(XbB)n(XcB)mXd je sekvencia, ktorá má maximálne 22 aminokyselín, výhodne 10 až 22 aminokyselín.
  2. 2. SP-C analógy podľa nároku 1, ktoré majú vzorec (la):
    (la) FGIPSSPVHLKRX4BX4BX4BXGALLMGL.
  3. 3. SP-C analógy podľa nároku 1, ktoré majú vzorec (lb):
    (lb) FGIPSSPVHLKRX5BX5BX4GALLMGL.
  4. 4. SP-C analógy podľa nároku 1, ktoré majú vzorec (lc):
    (lc) FGIPSSPVHLKRX4BXnGALLMGL.
  5. 5. SP-C analógy podľa nároku 1, ktoré majú vzorec (Id):
    (ld) FGIPSSPVHLKRX8BX7GALLMGL.
  6. 6. SP-C analógy podľa nároku 1, ktoré majú vzorec (Ie):
    (le) FGIPSSPVHLKRXhBX4GALLMGL.
  7. 7. SP-C analógy podľa nárokov 1 až 6, v ktorých sú Ser zvyšky acetylované, výhodne s palmitoylovými skupinami.
  8. 8. SP-C analógy podľa nárokov 1 až 7, v ktorých B znamená lyzín alebo fenylalanín a X znamená leucin, izoleucín alebo norleucín.
  9. 9. SP-C analógy podľa nároku 8,vybrané zo skupiny, ktorá obsahuje: SP-C (LKS) FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLKILLLKLGALLMGL SP-C (LKS), FGIPSSPVHLKRLLILLKLLLLIKLLILGALLMGL SP-C (LKS)2 FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLLILLLILGALLMGL SP-C (LKS), FGIPSSPVHLKRLLILLLLLKL1LLLILGALLMGL SP-C (LKS)4 FGIPSSPVHLKRLLILLLLLLLIKLLILGALLMGL SP-C (LFS) FGIPSSPVHLKRLLILFLLLLFILLLFLGALLMGL.
  10. 10. Syntetická povrchovo aktívna látka, vyznačujúca sa tým, že obsahuje najmenej jeden SP-C analóg vzorca (I) v zmesi s lipidmi a fosfolipidmi.
  11. 11. Syntetická povrchovo aktívna látka podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že v zmesi lipidov a fosfolipidov sa nachádza DPPC (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfocholín), PG (fosfatidylglycerol), P A (kyselina palmitová).
  12. 12. Syntetická povrchovo aktívna látka podľa nároku 10 alebo 11,vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje SP-B (povrchovo aktívna látka typu B) alebo jeho aktívny derivát alebo polymyxín.
  13. 13. Syntetická povrchovo aktívna látka podľa nárokov 10 až 12, v y z n a č u j ú c a sa t ý m , že je vo forme roztoku, disperzie, suspenzie, suchého prášku.
  14. 14. Použitie SP-C analógov podľa nárokov 1 až 7 na prípravu syntetickej povrchovo aktívnej látky užitočnej vo všetkých prípadoch deficitov povrchovo aktívnej látky.
  15. 15. Použitie polymyxínu, výhodne polymyxínu B na prípravu umelej povrchovo aktívnej látky podľa nárokov 10 až 13, na liečbu všetkých prípadov deficitov alebo dysfunkcie povrchovo aktívnej látky alebo prípadov serózneho zápalu stredného ucha - lepkavého ucha.
  16. 16. Použitie podľa nárokov 14 a 15, pričom deficitom povrchovo aktívnej látky je syndróm respiračnej poruchy.
SK1144-2001A 1999-02-12 2000-02-09 Analógy povrchovo aktívnej látky typu C, syntetická povrchovo aktívna látka a použitie analógov povrchovo aktívnej látky typu C SK286428B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT1999MI000275A IT1308180B1 (it) 1999-02-12 1999-02-12 Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante
PCT/EP2000/001044 WO2000047623A1 (en) 1999-02-12 2000-02-09 Artificial peptides having surface activity and the use thereof in the preparation of artificial surfactant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK11442001A3 SK11442001A3 (sk) 2001-12-03
SK286428B6 true SK286428B6 (sk) 2008-09-05

Family

ID=11381859

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1144-2001A SK286428B6 (sk) 1999-02-12 2000-02-09 Analógy povrchovo aktívnej látky typu C, syntetická povrchovo aktívna látka a použitie analógov povrchovo aktívnej látky typu C

Country Status (33)

Country Link
US (1) US7053044B1 (sk)
EP (1) EP1151008B1 (sk)
JP (1) JP4754073B2 (sk)
KR (1) KR100645145B1 (sk)
CN (1) CN1221570C (sk)
AR (1) AR022578A1 (sk)
AT (1) ATE280181T1 (sk)
AU (1) AU758735B2 (sk)
BG (1) BG65196B1 (sk)
BR (1) BR0009964A (sk)
CA (1) CA2362507C (sk)
CO (1) CO5241361A1 (sk)
CZ (1) CZ301108B6 (sk)
DE (1) DE60015082T2 (sk)
EA (1) EA004058B1 (sk)
EE (1) EE04879B1 (sk)
ES (1) ES2228473T3 (sk)
GE (1) GEP20032976B (sk)
HK (1) HK1042500A1 (sk)
HU (1) HU228997B1 (sk)
IL (1) IL144842A0 (sk)
IT (1) IT1308180B1 (sk)
MA (1) MA25381A1 (sk)
NO (1) NO20013888L (sk)
NZ (1) NZ513451A (sk)
PL (1) PL201084B1 (sk)
PT (1) PT1151008E (sk)
SK (1) SK286428B6 (sk)
TR (1) TR200102308T2 (sk)
UA (1) UA72751C2 (sk)
WO (1) WO2000047623A1 (sk)
YU (1) YU57701A (sk)
ZA (1) ZA200106530B (sk)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1308180B1 (it) * 1999-02-12 2001-12-07 Chiesi Farma Spa Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante
JP2003522138A (ja) * 2000-02-11 2003-07-22 アルタナ ファルマ アクチエンゲゼルシャフト 慢性肺疾患の予防および治療のための肺表面活性剤の新規使用
DE60217060T2 (de) * 2002-03-01 2007-06-21 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Pharmazeutische Zusammensetzungen, die Lungensurfactants und ein Polymyxin umfassen und verbesserte Oberflächenspannung-senkende Eigenschaften haben
ITMI20021058A1 (it) 2002-05-17 2003-11-17 Chiesi Farma Spa Miscele di lipidi sintetici ottimizzate per la preparazione di un surfattante ricostituito
CN100401896C (zh) * 2002-12-09 2008-07-16 儿童医院医疗中心 诊断和治疗间质性肺病的方法
EP1481665A1 (en) * 2003-05-30 2004-12-01 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Novel lipid mixtures for synthetic surfactants
US20090011978A1 (en) * 2003-08-28 2009-01-08 Atlanta Pharma Ag Use of Surfactant Preparations for the Treatment of Surgical Adhesions
US20060004185A1 (en) * 2004-07-01 2006-01-05 Leese Richard A Peptide antibiotics and peptide intermediates for their prepartion
US8337815B2 (en) * 2004-12-23 2012-12-25 Discovery Laboratories, Inc. Pulmonary surfactant formulations
WO2008011559A2 (en) 2006-07-20 2008-01-24 University Of Rochester Synthetic lung surfactant and use thereof
UA94477C2 (ru) * 2006-10-13 2011-05-10 КЬЕЗИ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.п.А. Воспроизведенные сурфактанты, которые имеют улучшенные свойства
EP1997502A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Reconstituted surfactants having improved properties
US8048043B2 (en) 2007-06-08 2011-11-01 Chiesi Farmaceutici S. P. A. Method of administration of a pulmonary surfactant
EP2022798A1 (en) * 2007-08-09 2009-02-11 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Synthetic pulmonary surfactant peptides
US8343912B2 (en) 2008-12-23 2013-01-01 Biosource Pharm, Inc. Antibiotic compositions for the treatment of gram negative infections
CN102470150B (zh) 2009-09-08 2013-12-11 奇斯药制品公司 包含肺表面活性物质和抗氧化酶的治疗组合物
US8415307B1 (en) 2010-06-23 2013-04-09 Biosource Pharm, Inc. Antibiotic compositions for the treatment of gram negative infections
SG11201406628RA (en) * 2012-04-23 2014-11-27 Chiesi Farma Spa Method and system for the administration of a pulmonary surfactant by atomization
CA2891933C (en) 2012-11-21 2022-07-05 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Recombinant pulmonary surfactants comprising sp-b and sp-c analogues and a phospholipid mixture
EP3106090A1 (en) 2015-06-15 2016-12-21 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. System for effective breath-synchronized delivery of medicament to the lungs
EP3285645B1 (en) 2015-04-22 2020-08-12 Chiesi Farmaceutici S.p.A. System for effective breath-synchronized delivery of medicament to the lungs
US11311691B2 (en) 2015-04-28 2022-04-26 Chiesi Farmaceutici S.P.A Device for facilitating the administration of a medicament to the lung by a catheter
US20180147262A1 (en) 2015-04-30 2018-05-31 University Of Bremen Novel skin medical and cosmetic care product
MA45772A (fr) 2016-07-28 2021-04-28 Chiesi Farm Spa Procédé et système d'administration d'un médicament sous forme d'aérosol
BR112019008169A2 (pt) 2016-10-26 2019-07-09 Chiesi Farm Spa dispositivo para facilitar o posicionamento de um cateter, sistema para entrega de um medicamento em aerossol por meio de um cateter, método para utilização de um dispositivo e kit
PL3558376T3 (pl) 2016-12-22 2022-02-14 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Kombinacja terapeutyczna zawierająca surfaktant płucny i steroid do leczenia rozwijającej się BPD
TW201927286A (zh) 2017-12-15 2019-07-16 義大利商凱西製藥公司 用於噴霧投藥之包含肺表面張力素的藥學調配物
WO2019115771A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Pari Pharma Gmbh Nebuliser system, holding system, combination comprising nebuliser system and holding system, and aerosol administration method
MX2020011127A (es) 2018-04-23 2021-01-15 Chiesi Farm Spa Combinacion terapeutica que comprende agente tensioactivo pulmonar y esteroide para la profilaxis de displasia broncopulmonar (bpd).
EP3666316A1 (en) 2018-12-14 2020-06-17 PARI Pharma GmbH Aerosol delivery device and method of operating the aerosol delivery device
EP3666315A1 (en) 2018-12-14 2020-06-17 PARI Pharma GmbH Aerosol delivery device and method of operating the aerosol delivery device
EP3843105A1 (en) 2019-12-23 2021-06-30 PARI Pharma GmbH Control device for aerosol nebulizer system
EP4097128A1 (en) 2020-01-28 2022-12-07 Chiesi Farmaceutici S.p.A. Polypeptides having improved properties
CN114159546A (zh) * 2021-12-20 2022-03-11 双鹤药业(海南)有限责任公司 新一代合成肺表面活性物质制剂及其临床应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5104853A (en) * 1984-12-11 1992-04-14 California Biotechnology Inc. Alveolar surfactant proteins having cys to ser mutations
SE8803713D0 (sv) * 1988-10-18 1988-10-18 Kabigen Ab Biologically active lipoprotein and its use
DK0733645T3 (da) * 1993-12-08 2003-07-14 Mitsubishi Pharma Corp Syntetisk peptid, lungeoverfladeaktivt stof indeholdende dette og præparat mod respiratory distress syndrome
DE4418936A1 (de) * 1994-05-31 1996-02-08 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Polypeptid
IT1308180B1 (it) * 1999-02-12 2001-12-07 Chiesi Farma Spa Peptidi sintetici aventi la capacita' di diminuire la tensionesuperficiale e loro impiego nella preparazione di un surfattante

Also Published As

Publication number Publication date
UA72751C2 (en) 2005-04-15
ES2228473T3 (es) 2005-04-16
EA004058B1 (ru) 2003-12-25
PL201084B1 (pl) 2009-03-31
CZ301108B6 (cs) 2009-11-11
ITMI990275A1 (it) 2000-08-12
BG65196B1 (bg) 2007-06-29
IT1308180B1 (it) 2001-12-07
DE60015082T2 (de) 2006-02-09
CA2362507C (en) 2012-01-03
EP1151008B1 (en) 2004-10-20
EE200100413A (et) 2002-12-16
PT1151008E (pt) 2005-01-31
NZ513451A (en) 2003-05-30
CO5241361A1 (es) 2003-01-31
BR0009964A (pt) 2002-04-09
DE60015082D1 (de) 2004-11-25
YU57701A (sh) 2003-07-07
EE04879B1 (et) 2007-08-15
NO20013888D0 (no) 2001-08-09
TR200102308T2 (tr) 2002-04-22
AU758735B2 (en) 2003-03-27
HU228997B1 (en) 2013-07-29
EP1151008A1 (en) 2001-11-07
CN1340060A (zh) 2002-03-13
HUP0200141A2 (en) 2002-06-29
WO2000047623A1 (en) 2000-08-17
CA2362507A1 (en) 2000-08-17
IL144842A0 (en) 2002-06-30
HUP0200141A3 (en) 2002-09-30
AU3279300A (en) 2000-08-29
JP4754073B2 (ja) 2011-08-24
AR022578A1 (es) 2002-09-04
KR100645145B1 (ko) 2006-11-10
MA25381A1 (fr) 2002-04-01
JP2002541062A (ja) 2002-12-03
US7053044B1 (en) 2006-05-30
HK1042500A1 (en) 2002-08-16
ZA200106530B (en) 2002-10-14
BG105764A (en) 2002-03-29
CZ20012876A3 (cs) 2002-06-12
CN1221570C (zh) 2005-10-05
KR20010101904A (ko) 2001-11-15
SK11442001A3 (sk) 2001-12-03
ATE280181T1 (de) 2004-11-15
EA200100749A1 (ru) 2002-02-28
GEP20032976B (en) 2003-05-27
NO20013888L (no) 2001-08-09
PL349785A1 (en) 2002-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK286428B6 (sk) Analógy povrchovo aktívnej látky typu C, syntetická povrchovo aktívna látka a použitie analógov povrchovo aktívnej látky typu C
CA2666344C (en) Reconstituted surfactants having improved properties
JP5441904B2 (ja) 合成肺サーファクタントペプチド
PALMBLAD et al. Biophysical activity of an artificial surfactant containing an analogue of surfactant protein (SP)-C and native SP-B
CA2486152C (en) Improved synthetic lipid mixtures for the preparation of a reconstituted surfactant
MXPA01008073A (en) Artificial peptides having surface activity and the use thereof in the preparation of artificial surfactant

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20200209