JP2002541062A - 表面活性をもつ人工ペプチドおよび人工のサーファクタントの製造におけるその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 表面活性をもつＳＰ−Ｃ類似体人工ペプチド、ならびに呼吸困難症候群（ＲＤＳ）およびサーファクタント欠乏症もしくは機能障害に関連する他の疾患の治療において有用な人工のサーファクタントを調製するためのそれらの使用が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、表面活性をもつ新規な人工ペプチドを提供する。特に、本発明は、
適当な脂質と組み合わされた場合、気−液界面における表面張力を低下させるの
に特に効果的であるＳＰ−Ｃ類似体を提供する。

【０００２】 かくして、本発明のペプチドは、呼吸困難症候群（ＲＤＳ）、他のサーファク
タント（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）欠乏症もしくは機能障害、関連する肺性疾患、
例えば肺炎、気管支炎、喘息、胎便性呼吸症候群、そしてまた他の疾患、例えば
漿液性中耳炎（グルーイアー（ｇｌｕｅ ｅａｒ））の治療において有用な人工
のサーファクタントを製造するために、脂質との組み合わせにおいて、そして場
合によっては、ＳＰ−Ｂもしくはその活性類似体もしくはＳＰ−Ｂ代替物との組
み合わせにおいて使用されてもよい。

【０００３】 発明の背景 肺胞表面上のサーファクタントは、肺胞内層の気−液界面における表面張力を
低下して、末端呼気における虚脱から肺を防御する。サーファクタント欠乏症は
、早産児では普通の障害であり、そして呼吸困難症候群（ＲＤＳ）を惹起するが
、これは動物の肺から抽出される天然のサーファクタントにより効果的に治療す
ることができる（Ｆｕｊｉｗａｒａ，Ｔ．ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ Ｂ．（
１９９２）Ｉｎ：Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｂ．，ｖａｎ Ｇｏｌｄｅ，Ｌ．Ｍ．Ｇ
．ａｎｄ Ｂａｔｅｎｂｕｒｇ，Ｂ．（ｅｄｓ）Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｓｕｒｆ
ａｃｔａｎｔ：Ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏ Ｃｌｉ
ｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ｐｐ
．５６１−５９２）。これらのサーファクタント調製物の主成分は、１，２−ジ
パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジ
ルグリセロール（ＰＧ）のようなリン脂質、および疎水性のサーファクタントタ
ンパク質ＢおよびＣ（ＳＰ−ＢおよびＳＰ−Ｃ）である。Ｃ型（Ｃａ²⁺依存性）
膠質性レシチンであり、そして宿主防御系において最初に作用すると考えられる
親水性のサーファクタントタンパク質ＳＰ−ＡおよびＳＰ−Ｄは、使用される有
機溶媒抽出操作のためにサーファクタント調製物中には通常は含まれない。

【０００４】 ＳＰ−ＢおよびＳＰ−Ｃは、サーファクタント量の約１−２％を構成するだけ
であるが、純粋な脂質調製物に比べて、なお、表面活性における劇的な改善を果
たすことができる（Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６８，２５５−２６２；Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ａ．，Ｎ
ｅｍｏｔｏ，Ｔ．ａｎｄ Ｆｕｊｉｗａｒａ，Ｔ．（１９９４）Ａｃｔａ Ｐａ
ｅｄｉａｔｒ．Ｊａｐ．３６，６１３−６１８）。溶液におけるＳＰ−Ｂおよび
ＳＰ−Ｃの１次および２次構造ならびにＳＰ−Ｃの３次構造は、既に決定されて
いる（４参照）。ＳＰ−Ｂは、鎖間ジスルフィド架橋により結合されたアミノ酸
７９個の２つの同一ポリペプチド鎖からなる（Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７ ，２９８５−２９８９；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｊ．，Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．ａ
ｎｄ Ｊｏｅｒｎｖａｌｌ，Ｈ．（１９９１）Ｂｉｏｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３ ０ ，６９１７−６９２１）。各モノマー鎖は、３個の鎖内ジスルフィド架橋、そ
して１つの極性と１つの非極性面を示す少なくとも４個の両親媒性ヘリックスを
もち、これらをとおして、ＳＰ−Ｂは、２つの脂質二重層と相互作用し、そして
それらを密接に接近させることができる（Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ
．（１９９５）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３６２，３２８−３３２）。ＳＰ−Ｃは、
残基９−３４間にα−ヘリックスドメインをもつ３５個のアミノ酸残基からなる
リポタンパク質である（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３，６０１５−６０２３）。ヘリックスは、ほとん
ど、バリル残基からなり、そして脂質二重層中に埋没され、そして脂質アシル鎖
と平行に配向されている（Ｖａｎｄｅｎｂｕｓｓｃｈｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９
２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０３，２０１−２０９）。２つのパルミト
イル基は、ペプチドのＮ末端部分の位置５と６におけるシステイン残基に共有結
合されている（Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７，２９８５−２９８９）。位置１
１と１２における２つの保存された正荷電の残基、アルギニンおよびリジンは、
脂質膜の負荷電の頭部の基と多分相互作用して、その強固さを増強する。脂質−
ペプチド相互作用の強固さは、Ｃ末端が小さいかまたは疎水性残基のみを含有す
るので、それに向かって減少し、この部分を、リン脂質二重層において潜在的に
一層動きやすくしている。ＳＰ−Ｃは、極端に安定なポリ・バリルヘリックスを
介して周囲の脂質の濃厚さと流動性に影響すると考えられる（Ｊｏｈａｎｓｓｏ
ｎ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．２４４，６７５−６９３）。

【０００５】 当該技術の状態 動物組織から得られたサーファクタント調製物は、それらの限られた量におけ
る利用性、ならびにそれらが感染性因子を含有し、そして免疫反応を誘起する可
能性等の、一定の短所を示すので、通常は、合成脂質および疎水性タンパク質か
ら人工のサーファクタントを創造する試みがなされている（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ
，Ｊ．ａｎｄ Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．２４４，６７５−６９３；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｊ．ｅｔ．ａｌ．（１９９
６）Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ．８５，６４２−６４６）。

【０００６】 従来の研究では、合成ＳＰ−Ｃは、自然のペプチドを最適な表面活性について
必要なα−ヘリックスコンホメーションのようには折り畳まず（Ｊｏｈａｎｓｓ
ｏｎ，Ｊ．ｅｔ．ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０７，５３５−５
４１）、したがってサーファクタント脂質と適切に相互作用しないことが例証さ
れた。

【０００７】 結論として、合成ＳＰ−Ｃ類似体は、自然のペプチドのように折り畳まれず、
そしてサーファクタント脂質と適切に相互作用しない。この問題を回避するため
に、いくつかの試みが行われ、例えば、α−ヘリックスコンホメーションを強く
支持するＬｅｕにより自然のＳＰ−Ｃ中のすべてのヘリックスのＶａｌ残基を置
換することによって配列を改変した。対応する膜貫通性類似体、ＳＰ−Ｃ（Ｌｅ
ｕ）は、ＤＰＰＣ：ＰＧ：ＰＡ（６８：２２：９）（ｗ／ｗ／ｗ）と組み合わさ
れた場合、気−液界面において良好な拡散を示した。しかしながら、周期的な（
ｃｙｃｌｉｃ）表面圧縮の間の最大表面張力の値（γ_max）は、自然のサーファ
クタントのそれよりも有意に高かった。さらにまた、多分ペプチドオリゴマーの
形成によって、約２０ｍｇ／ｍｌより高い濃度の脂質−ペプチド混合液を調製す
ることは不可能であった（Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５５，１１６−１２４）。他の研究者は、生物活性
のある種々の長さのポリロイシンＳＰ−Ｃ類似体を合成した（Ｔａｋｅｉ，Ｔ．
ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９，１５５０−
１５５５）。後者の研究では、自己オリゴマー化も、または高い脂質濃度のサン
プルを作成する際の問題も、いずれも報告されなかった。

【０００８】 種々の出版物は、天然のサーファクタントペプチドのペプチド性類似体を提供
する問題を取り扱い、多数の異なる回答を出している。これらの刊行物の中で、
Ｔｏｋｙｏ Ｔａｎａｂｅの名におけるＷＯ９３ ２１２２５、ＥＰ７３３ ６
４５、ＷＯ９６ １７８７２は、天然のＳＰ−Ｃのペプチド類似体を開示してお
り、これは、一般にはＮ末端部分の配列に関して自然のペプチドとは異なる。
Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの特許出願ＷＯ８９ ０
６６５７およびＷＯ９２ ２２３１５は、交互に並んでいる疎水性および親水性
アミノ酸残基をもつＳＰ−Ｂ類似体を開示している。他のものでは、ロイシンお
よびリジン残基が交互に並んでいるペプチド（ＫＬ₄）が特許請求されている。

【０００９】 Ｃｌｅｒｃｘ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ ２２９，４
６５−７２，１９９５は、ブタのＳＰ−ＣのＮ末端に対応する種々の長さのペプ
チド、およびブタのＳＰ−Ｃとバクテリオロドプシンから得られたハイブリッド
ペプチドを開示している。

【００１０】 Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０７，５３
５；４１，１９９５は、いくつかのアミノ酸の置換による自然のブタＳＰ−Ｃと
は異なる合成ペプチドを開示している。

【００１１】 Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ−Ｂｙｋ Ｇｕｌｄｅｎ
の名におけるＷＯ８９／０４３２６、およびＣａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ−Ｓｃｉｏｓ Ｎｏｖａの名におけるＷＯ９１／１８０１５は
、天然のＳＰ−Ｃの２つのＣｙｓが２つのＳｅｒによって置換されている、最初
のＮ末端配列を含有するＳＰ−Ｃ類似体を開示している。

【００１２】 発明の記述 次の特徴：ｉ）他の中性および疎水性残基によるＶａｌ残基の置換；ｉｉ）Ｓ
ｅｒ残基によるＣｙｓ残基の置換；ｉｉｉ）嵩高いまたは極性の残基による幾つ
かの中性アミノ酸残基の置換：を合わせもつＳＰ−Ｃ類似体ペプチドは、表面張
力低下のために特に好ましい性質を示すことが、ここに見い出された。特に、後
者の特徴は、極性残基によって与えられた正電荷か、または嵩高い置換基によっ
て与えられた立体障害の力で、自己オリゴマー化を回避させることが見い出され
た。

【００１３】 次の示すように、第１の態様によれば、本発明は、１文字のアミノ酸コードを
用いて、次の一般式（Ｉ）： F_eG_fIPZZPVHLKR(X_aB)_n(X_bB)_n(X_cB)_mX_dGALLMGL (I) ［式中、 Ｘは、Ｖ，Ｉ，Ｌ，Ｎｌｅ（ノルロイシン）からなる群から選ばれるアミノ酸で
あり； Ｂは、オルニチン、Ｋ，Ｉ，Ｗ，Ｆ，Ｙ，Ｑ，Ｎからなる群から選ばれるアミノ
酸であり； Ｚは、ＳｅｒもしくはＣｙｓ残基が、結合された炭素原子１２−２２個を含有す
るアシル基と、エステルもしくはチオ−エステル結合を介して場合によっては、
結合されていてもよいＳ，Ｃ，Ｆからなる群から選ばれるアミノ酸であり； ａは、１〜１９からの整数であり、 ｂは、１〜１９からの整数であり、 ｃは、１〜２１からの整数であり、 ｄは、０〜２０からの整数であり、 ｅは、０もしくは１であり、 ｆは、０もしくは１であり、 ｎは、０もしくは１であり、 ｍは、０もしくは１であるが、 条件： − ｎ＋Ｍ＞０、 − ｆ≧ｅ； − （Ｘ_aＢ）_n（Ｘ_bＢ）_n（Ｘ_cＢ）_mＸ_dは、最大アミノ酸２２個、好ましくは
１０〜２２個をもつ配列であることを前提とする］ で示されるＳＰ−Ｃ類似体を提供する。

【００１４】 好適な式（Ｉ）のペプチドは、次の配列： (Ia) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₄ＢＸ₄ＢＸ₄ＢＸＧＡＬＬＭＧＬ (Ib) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₅ＢＸ₅ＢＸ₄ＧＡＬＬＭＧＬ (Ic) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₄ＢＸ₁₁ＧＡＬＬＭＧＬ (Id) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₈ＢＸ₇ＧＡＬＬＭＧＬ (Ie) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₁₁ＢＸ₄ＧＡＬＬＭＧＬ をもつ。

【００１５】 配列（Ｉａ）−（Ｉｅ）において、Ｂ＝ＬｙｓもしくはＰｈｅおよびＸ＝Ｌｅ
ｕ，ＩｌｅもしくはＮｌｅをもつ配列が好適である。

【００１６】 好適な実施態様によれば、式（Ｉａ）−（Ｉｆ）のペプチドは、それぞれ、次
の配列：

【００１７】

【表２】

【００１８】 をもつ。

【００１９】 本発明のより好適な実施態様では、Ｓｅｒ残基は、炭素原子１２−２２個を含
有するアシル基と共有結合されている。

【００２０】 式（Ｉ）のペプチドは、合成法もしくは組み換え技術によって製造することが
できる。

【００２１】 慣用の合成法は、例えば、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，”Ｔｈｅ ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌ．１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９６５；Ｂ
ｏｄａｎｓｚｋｙ ｅｔ ａｌ．，”Ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，
Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ，１９９６；Ｂａｒａｍｙ ＆
Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，”Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ；Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ”，ｖｏｌ．２，ｃｈａｐｔｅｒ １，Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８０において記述されている。該技術は、固相
、溶液におけるペプチド合成、有機化学合成法またはそれらのすべての組み合わ
せを含む。

【００２２】 Ｓ−もしくはＯ−アシル化ペプチドは、好ましくは、Ｙｏｕｓｅｆｉ−Ｓａｌ
ａｋｄｅｈ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ １９９９，３４３，５５７−５
６２に記述されるように、ニートのトリフルオロ酢酸中で塩化アシルによるアシ
ル化されてないペプチドの処理によって合成される。合成および精製後、合成ペ
プチドは、次の「実施例」の節において報告されるように、生物化学的および生
物物理学的に特徴付けられる。

【００２３】 表面張力を低下させることにおいて、本発明のペプチドの活性は、脂質および
リン脂質、ＳＰ−Ｂ、ＳＰ−Ｂの類似体もしくはＳＰ−Ｂの代替物との組み合わ
せにおいて評価された。特に、ペプチドは、ＳＰ−Ｂ、その活性類似体およびポ
リミキシンの有無において、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセ
ロ−３−ホスホコリン）／ＰＧ（ホスファチジルグリセロール）／ＰＡ（パルミ
チン酸）と組み合わせられた。

【００２４】 脈動性（ｐｕｌｓａｔｉｎｇ）−気泡表面活性試験の結果は、本発明による合
成ペプチドが、周期的な表面圧縮の間の最小および最大表面張力（γ_minおよび
γ_max）を、天然起源からのサーファクタントを用いて得られるものに匹敵する
値まで強力に減少することを、明らかに示す。

【００２５】 混合物ペプチド／脂質−リン脂質へのＳＰ−Ｂもしくはその活性類似体の添加
は、特に好ましい結果を与えた。さらにまた、驚くべきことに、ポリミキシン、
特にポリミキシンＢは、ＳＰ−Ｂの代替物として働き、そしてそれらの添加は、
ＳＰ−Ｂにより達成されるものに匹敵する結果を与えることが見い出された。

【００２６】 第２の態様によれば、本発明は、脂質および／またはリン脂質、そして場合に
よってはＳＰ−Ｂ、その活性誘導体もしくはポリミキシンとが添加された状態で
、１種以上の式（Ｉ）のペプチドを含んでなる合成サーファクタントを提供する
。適当な脂質／リン脂質は、ホスファチジルコリン（好ましくはＤＰＰＣ）、Ｐ
Ｇ，ＰＡ，トリアシルグリセロール、スフィンゴミエリンからなる群から選ばれ
てもよい。

【００２７】 本発明のさらに、より好適な実施態様では、パルミトイル鎖がＳｅｒ残基にＯ
−共有結合されているペプチドを含有するサーファクタント混合物が使用される
べきである。参照ペプチド（ＳＰ−Ｃ（Ｌｅｕ））のジパルミトイル化された形
態を含有するサーファクタント混合物は、捕らわれた（ｃａｐｔｉｖｅ）気泡系
によって測定されるように、対応する非パルミトイル化ペプチドを含有する混合
物に比較して、より高い表面膜の安定性と表面に関わる脂質リザーバー（ｒｅｓ
ｅｒｖｏｉｒ）の増大されたサイズを示すことが分かった。ジパルミトイル化ペ
プチドの５％を含有するサンプルでは、γｍｉｎは、１．５ｍＮ／ｍ以下であり
、そして表面張力が一定の気泡容積において１０分以内に０．５ｍＮ／ｍ未満増
強されたように、膜は非常に安定であった。これに対して、非パルミトイル化ペ
プチドに関するγｍｉｎは、ほぼ５ｍＮ／ｍであり、そして低い表面張力におい
てしばしば起きる起泡のクリッキング（ｃｌｉｃｋｉｎｇ）によって観察される
ように、膜は、より低い安定性であった。さらに、非パルミトイル化ペプチドを
含有するサンプルについてのサブフェイス・デプレッション（ｓｕｂｐｈａｓｅ
ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）後、ゼロ安定表面張力近くに達する能力は、わずかな吸
着段階後に失われたが、これに対して、ジパルミトイル化ペプチドによっては、
膜の品質は、１０膨張段階後でさえも劣化せず、そしてリザーバー材料の組み入
れは、２つ以上の単層と同等であった。また、ジパルミトイル化ペプチドの改良
された表面活性は、振動性気泡サーファクトメーター（ｓｕｒｆａｃｔｏｍｅｔ
ｅｒ）によって例証された。さらに、アシル基の存在は、オリゴマーを形成する
傾向をさらに低下させることが分かった。人工のサーファクタントの製造中、ペ
プチドのオリゴマー化が、２０ｍｇ／ｍｌより高い濃度における混合物の調製を
妨げることが分かっているので、この発見は非常に重要である（Ｎｉｌｓｓｏｎ
ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９９８，２５５，１１６−１２
４）。

【００２８】 合成のサーファクタントは、ペプチドおよび脂質の溶液もしくは懸濁液を混合
することによって、そして混合物を続いて乾燥することによって調製できる。

【００２９】 この事象では、乾燥混合物は、サーファクタント欠乏症のための処置を必要と
する被験者に対して、懸濁、分散されるか、またはそのままで投与されてもよい
。

【００３０】 合成サーファクタントは、好ましくは、気管内に、またはエアゾルにより投与
できる。後者の投与形態は、適当な不活性噴射剤とサーファクタントの小粒子の
組み合わせを必要とするであろう。また、サーファクタントの安定な液剤／懸濁
剤の噴霧化もしくはスプレーのような他の投与形態も、本発明の範囲内に含まれ
る。

【００３１】 さらなる態様によれば、本発明は、成人もしくは新生児期のサーファクタント
欠乏症もしくは機能障害に関連する肺性疾患、例えば肺炎、気管支炎、喘息、胎
便吸引症候群のあらゆる症例、そしてまた他の疾患、例えば漿液性中耳炎（グル
ーイアー）において使用されるサーファクタント剤の製造のための前記ペプチド
の使用を提供する。

【００３２】 典型的には、サーファクタント剤は、しばしば早産児を冒す呼吸困難症候群の
治療において、好ましくは、気管内投与により使用できる。

【００３３】 次の実施例は、より詳細に本発明を説明する。

【００３４】 実施例１ ペプチド合成および精製 ＳＰ−Ｃ、ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）の類似体（図１）は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ ４３０Ａ装置において、段階的固相技術およびｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニル化学の使用によって合成された（Ｋｅｎｔ，Ｓ．Ｂ．Ｈ．（
１９８８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７，９５７−９８９）。樹脂
−ペプチド結合の切断および側鎖の保護は、０℃で１．５時間、無水フッ化水素
／メトキシベンゼン／ジメチルスルフィド、１０：１：１（ｖ／ｖ／ｖ）中で実
施された。保護基およびスカベンジャーが、ジエチルエーテルによる反復抽出に
よって除去され、そしてペプチドが、ジクロロメタン／トリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）３：１（ｖ／ｖ）によって樹脂から続いて抽出され、その後ロータリーエバ
ポレーターで処理された。粗ペプチド抽出物は、５％Ｈ₂Ｏを含有するクロロホ
ルム／メタノール１：１（ｖ／ｖ）中に濃度１００ｍｇ／ｍｌにおいて再溶解さ
れた。一定分量の１０ｍｇが、同じ溶媒においてＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−６０
カラム（４０ｘ１ｃｍ）に適用された（Ｃｕｒｓｔｅｄｔ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（
１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６８，２５５−２６２）。画分２．
５ｍｌが収集され、そして２１４および２８０ｎｍにおける吸光度が測定された
。同定および定量はアミノ酸分析における遂行された。

【００３５】 アシル化では、精製ペプチド（典型的には約５ｍｇ）が乾燥され、蒸留ＴＦＡ
（１００μｌ）中に溶解され、そして塩化アシル（ペプチドに比べて１０−２０
当量）が添加された。１０分後、反応が８０％エタノール水溶液（１．９ｍｌ）
を用いて停止される。アシルペプチドの精製は、塩化エチレン／メタノール１：
４（ｖ／ｖ）中でＬｉｐｉｄｅｘ５０００におけるクロマトグラフィーの使用と
、続く、６０％（水性）メタノール／０．１％ＴＦＡまたは７５％（水性）エタ
ノール／０．１％ＴＦＡ中に流入する２−プロパノール／０．１％ＴＦＡの直線
濃度勾配を用いてＣ１８カラム上での逆相ＨＰＬＣによって行われる。

【００３６】 実施例２ 生物学的特徴付け ペプチドの純度は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（ＰＡＧＥ）（Ｐｈａｓｔ−ｓｙｓｔｅｍ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｓ
ｗｅｄｅｎ）によって、そしてＣ１８カラムおよび６０％メタノール水溶液／０
．１％ＴＦＡおよびイソプロパノール／０．１％ＴＦＡの直線勾配を用いる逆相
高速度液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってチェックされた（Ｇｕｓｔ
ａｆｓｓｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２６，７
９９−８０６）。

【００３７】 分子質量は、マトリックス−アシステッド（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ
）レーザー デソープション イオニゼーション−タイム−オブ−フライト（ｌ
ａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆ
ｌｉｇｈｔ）（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析（Ｌａｓｅｒｍａｔ ２０００，
Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ）によって、血管作動性腸ペプチド（Ｍｒ ３３２６
．８）により校正されて決定された。

【００３８】 ペプチドの２次構造は、円二色性（ＣＤ）分光法（Ｊａｓｃｏ−７２０ Ｊａ
ｓｃｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて研究された。トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）
を用いて溶解後、スペクトルが、スキャン速度２０ｎｍ／ｍｉｎおよび解像度２
データポイント／ｎｍを用いて２６０から１８４ｎｍまで記録された。残余モル
エリプティーシー（ｒｅｓｉｄｕａｌ ｍｏｌａｒ ｅｌｌｉｐｔｉｃｙ）が計
算され、そしてｋｄｅｇ ｘ ｃｍ²／ｄｍｏｌにおいて表された。２０８およ
び２２２ｎｍにおけるモルエリプティシティー（ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｔｉｅｓ）
は、ヘリックス構造の含量を評価するために利用された（Ｂａｒｒｏｗ，Ｃ．Ｊ
．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２５，１０７５−１０９
３）。

【００３９】 ＣＤ分光法を用いるＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）の２次構造研究は、α−ヘリックスの
ペプチドについて典型的なスペクトルを示し、そしてα−ヘリックス含量約７５
％が、２０８ｎｍおよび２２２ｎｍ最小値から概算された。もしペプチドが純Ｔ
ＦＥ中に可溶化されるならば、２次構造は、１２％ＴＦＥまでのＨ₂Ｏによる段
階的希釈後には安定のまま留まった。

【００４０】 ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥは、ヘリックス部分においてＬｙｓを
欠くＳＰ−Ｃ（Ｌｅｕ）がオリゴマーを形成するのに対して、自然のＳＰ−Ｃに
類似する単一バンドを示した。２０ｍｇ／ｍｌより高い濃度において可溶化する
のが困難であるＳＰ−Ｃ（Ｌｅｕ）／脂質混合物による本発明者らの経験（Ｎｉ
ｌｓｓｏｎ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５
５，１１６−１２４）に反して、脂質濃度８０ｍｇ／ｍｌおよびポリペプチド／
脂質比０．０３をもつＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）／脂質混合物を作成することが可能で
あった。

【００４１】 実施例３ ペプチド／脂質混合物の調製 ＤＰＰＣ、ＰＧおよびＰＡは、すべてＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．
（Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入された。クロロホルム／メタノール９８：
２（ｖ／ｖ）に溶解された脂質は、比率ＤＰＰＣ：ＰＧ：ＰＡ６８：２２：９（
ｗ／ｗ／ｗ）またはＤＰＰＣ／ＰＧ７：３（ｗ／ｗ）において混合された。サー
ファクタント調製物は、全ポリペプチド／脂質重量比０−０．０５において、各
脂質混合物に対して、ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）単独またはＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）とＳＰ
−Ｂを添加することによって調製された。混合物は、窒素下で蒸発され、そして
ＮａＣｌ １５０ｍｍｏｌ／ｌ中、またはＮａＣｌ １４０ｍｍｏｌ／ｌとＣａ
Ｃｌ₂２．０ｍｍｏｌ／ｌを含有するＨｅｐｅｓバッファーｐＨ６．９ １０ｍ
ｍｏｌ／ｌ中に、脂質濃度１０−８０ｍｇ／ｍｌにおいて再懸濁された。繰り返
される凍結および音波処理（５０Ｗ，４８ｋＨｚ）が、均質懸濁液が得られるま
で実施された。若干の場合には、最終懸濁液は、４５℃で１次間インキュベート
された。

【００４２】 ＮａＣｌ １５０ｍｍｏｌ／ｌ中に懸濁されたサーファクタント調製物は、ｐ
Ｈ３．５−５．５を有した。より低いｐＨ値３．５−４．５は、ＳＰ−Ｂを含有
する調製物において観察された。自然のＳＰ−Ｂは、酸性化された有機溶媒を用
いて精製されるので（Ｃｕｒｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６８，２５５−２６２）、少量の酸が調製物中に残ってい
てもよい。近似の生理学的ｐＨは、ＮａＣｌ １４０ｍｍｏｌ／ｌとＣａＣｌ₂
２ｍｍｏｌ／ｌを含有するＨｅｐｅｓバッファーｐＨ６．９中にサーファクタ
ント調製物を懸濁することによって得られた（表１）。緩衝化されてない生理食
塩水中の対応する調製物に比較して、ＤＰＰＣ／ＰＧ７：３（ｗ／ｗ）が脂質混
合物として使用された場合は、γ_maxもしくはγ_minの変化はなかった。しかしな
がら、ＰＡが脂質混合物中に含まれた場合は、両γ_maxおよびγ_minは、より高い
ｐＨにおいて増加した（表１および２）。

【００４３】 表１：生理学的食塩溶液における人工サーファクタントの調製物の表面の性
質 測定は、サンプルの調製後または４５℃で１時間インキュベーション後、直接
実施された。リン脂質濃度は、ＮａＣｌ １５０ｍｍｏｌ／ｌ中１０ｍｇ／ｍｌ
であった。記録は、３７℃における振動性気泡サーファクトメーターにより種々
の時間、５０％表面圧縮において、そして速度４０サイクル／ｍｉｎにおいて得
られた。値は、３−５測定値の平均値（標準偏差）であった。略記は本文におい
て定義された。

【００４４】

【表３】

【００４５】 表２：バッファー塩溶液における人工サーファクタントの調製物の表面の性
質 測定は、順に、ＮａＣｌ １４０ｍｍｏｌ／ｌおよびＣａＣｌ₂ ２．０ｍｍ
ｏｌ／ｌを含有するＨｅｐｅｓバッファー（ｐＨ６．９）中、濃度１０ｍｇ／ｍ
ｌにおいてリン脂質を含有するサンプルにおいて実施された。記録は、３７℃に
おける振動性気泡サーファクトメーターにより種々の時間、５０％表面圧縮にお
いて、そして速度４０サイクル／ｍｉｎにおいて得られた。値は、３−５測定値
の平均値（標準偏差）であった。略記は本文において定義された。

【００４６】

【表４】

【００４７】 実施例４ ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）およびポリミキシンＢを含むリン脂質混合物の調製 ＤＰＰＣおよびＰＧは、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ Ｌｏ
ｕｉｓ，ＭＯ）から購入された。クロロホルム／メタノール９８：２（ｖ／ｖ）
に溶解されたリン脂質は、比率ＤＰＰＣ：ＰＧ７：３（ｗ／ｗ）において混合さ
れた。ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）は、全ポリペプチド／リン脂質重量比０．０３におい
て、リン脂質混合物に添加された。混合物は、窒素下で蒸発され、そしてＮａＣ
ｌ １４０ｍｍｏｌ／ｌおよびＣａＣｌ₂２．０ｍｍｏｌ／ｌを含有するＨｅｐ
ｅｓバッファーｐＨ６．９ １０ｍｍｏｌ／ｌ中に、またはポリミキシンＢ（Ｐ
ｘＢ）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を
含有する同じバッファー中に、室温において再懸濁された。繰り返される凍結お
よび音波処理（５０Ｗ，４８ｋＨｚ）が、均質懸濁液が得られるまで実施された
。両調製物の最終リン脂質濃度は、１０ｍｇ／ｍｌであった。ＰｘＢの添加は両
γ_maxおよびγ_minを減少し、そして最適表面活性が得られた（表３）。

【００４８】 表３：ポリミキシンＢの有無における人工サーファクタントの表面の性質 記録は、３７℃における振動気泡サーファクトメーターにより種々の時間およ
び速度４０サイクル／ｍｉｎにおける５０％表面圧縮において得られた。値は、
５−１１測定値の平均値（ＳＤ）である。略記は本文において定義されている。

【００４９】

【表５】

【００５０】 実施例５ 生物物理学的特徴付け 表面拡散速度論が、Ｗｉｌｌｈｅｌｍｙ表面圧計（Ｂｉｅｇｌｅｒ，Ｖｉｅｎ
ｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）を用いて約３４−３７℃において測定された。表面張力
は、ひずみ計に接続され、そしてテフロン（登録商標）水槽中のＮａＣｌ １５ ０ｍｍｏｌ／ｌの２０ｍｌの水相に１ｍｍ挿入された白金板を用いて１０分間モ ニターされた。懸濁液が、全量では脂質１ｍｇを小滴として、白金板から４ｃｍ の水相上に添加された。

【００５１】 Ｗｉｌｌｈｅｌｍｙ表面圧計を用いて、ＤＰＰＣ／ＰＧ７：３（ｗ／ｗ）にお
ける３重量％ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）の速度論的測定は、３秒後に表面張力２８ｍＮ
／ｍをもつ急速な拡散を示した（図２）。拡散は、同じ脂質混合物における１重
量％ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）を用いると若干遅かった（データ未提示）。２重量％Ｓ
Ｐ−Ｂの添加は、拡散速度または平衡表面張力を有意には変化させなかった（図
２）。４５℃で１時間の混合物のインキュベーション後に、改善は観察されなか
った（データ未提示）。同じような結果が、脂質混合物としてＤＰＰＣ：ＰＧ：
ＰＡ，６８：２２：９（ｗ／ｗ／ｗ）を用いて得られた（データ未提示）。

【００５２】 動的表面張力は、脈動性起泡サーファクトメーター（Ｓｕｒｆａｃｔｏｍｅｔ
ｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いて
、起泡表面の５０％周期的圧縮の間３７℃において、そして頻度４０サイクル／
ｍｉｎにおいて記録された。全測定は、５分間、脂質濃度１０ｍｇ／ｍｌにおい
て行われた。起泡壁を横切る圧力勾配（ｇｒａｄｉｅｎｓ）が、一定の時間間隔
で測定され、そして最小（γ_min）および最大（γ_max）起泡サイズにおける表面
張力を算出するために使用された。

【００５３】 脈動性起泡サーファクトメーターにおいて、ＤＰＰＣ：ＰＧ：ＰＡ，６８：２
２：９（ｗ／ｗ／ｗ）における３重量％ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）は、最小起泡半径に
おいて、１ｍＮ／ｍ未満の表面張力（γ_min）を生じたが、一方、γ_min９−１４
ｍＮ／ｍが、ＤＰＰＣ／ＰＧ，７：３（ｗ／ｗ）における３重量％ＳＰ−Ｃ（Ｌ
ＫＳ）を用いて観察された（表１）。最大起泡半径における表面張力（γ_max）
は、両場合において約４０ｍＮ／ｍであった。２重量％ＳＰ−Ｂの添加は、両脂
質調製物についてγ_max値３１−３３ｍＮ／ｍおよびγ_min０−２ｍＮ／ｍを与え
た。これらの値は、天然起源から単離されたサーファクタント調製物により得ら
れた値に非常に類似している（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９９
０）Ｐｒｏｇ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．２５，２３７−２４６）。４５℃で１時
間の調製物のインキュベーションは、表面活性には有意な影響をもたなかった（
表１）。ＳＰ−Ｂ量を、ＤＰＰＣ／ＰＧ，７：３（ｗ／ｗ）における３重量％Ｓ
Ｐ−Ｃ（ＬＫＳ）において０．５重量％まで減少することは、γ_minを増大する
傾向を示したが、その結果は、統計的な有意性には達しなかった（表１）。ＳＰ
−Ｂとは対照的に、ＤＰＰＣ：ＰＧ：ＰＡ，６８：２２：９（ｗ／ｗ／ｗ）にお
ける３重量％ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）に対して２重量％ＫＬ₄（Ｃｏｃｈｒａｎｅ，
Ｃ．Ｇ．ａｎｄ Ｒｅｖａｋ，Ｓ．Ｄ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４，
５６６−５６８）の添加は、γ_maxを低下せず、これは比較的高く４１−４２ｍ
Ｎ／ｍに留まっていた。

【００５４】 実施例６ ジパルミトイル化および非パルミトイル化参照ペプチドを含有する混合物間の 比較 ＤＰＰＣ／ＰＧ／ＰＡ ６８：２２：９ ｗ／ｗ／ｗから作られた各脂質混合
物に対して、３％ｗ／ｗＳＰ−Ｃ（Ｌｅｕ）もしくはジパルミトイル化ＳＰ−Ｃ
（Ｌｅｕ）を添加することによって作成された。混合物は、窒素下で蒸発され、
そしてＮａＣｌ １５０ｍｍｏｌ／ｌ中に脂質濃度１０ｍｇ／ｍｌにおいて再懸
濁された。また、ＳＰ−Ｂ代替物が使用されたサンプルでは、ポリミキシンＢ１
％ｗ／ｗが添加された。

【００５５】 ポリミキシンＢの有無においてジパルミトイル化ＳＰ−Ｃ（Ｌｅｕ）を含有す
る混合物は、５分におけるγ_maxを、そしてより早期の時間間隔においてγ_minを
低下することに、特に有意な改善を示した。

【００５６】 表４：表面の性質 混合物の表面張力は、脈動起泡サーファクトメーターを用いて得られた。平衡
の２分後、記録は、種々の期間、３７℃で５０％表面圧縮において、そして速度
４０サイクル／ｍｉｎにおいて得られた。

【００５７】

【表６】

【００５８】 実施例７ イン・ビボでの測定 幼若な肺の機械的性質に及ぼすサーファクタント療法の効果が、妊娠２７日令
の期前の新産ウサギ９匹において評価された。動物は、誕生時に気管切開され、
そしてそれらの５匹は、前記比率においてポリミキシンＢの有無におけるＤＰＰ
Ｃ、ＰＧおよびＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）を含有する人工サーファクタント２．５ｍｌ
／ｋｇ２回を気管カニューレを通して受けた。外因性サーファクタントの全リン
脂質濃度は、４０ｍｇ／ｍｌであった。ネガティブ対照として使われた２匹の動
物は、気管チューブによる物質を受けず、そしてポジティブ対照として使われた
他の２匹は、４０ｍｇ／ｍｌに希釈された同用量の改変された天然サーファクタ
ント（Ｃｕｒｏｓｕｒｆ，Ｃｈｉｅｓｉ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｉ Ｓｐａ，
Ｐａｒｍａ，Ｉｔａｌｙ）により処置された。１匹の動物は、用量２．５ｍｌ／
ｋｇにおいて生理食塩水中ＤＰＰＣおよびＰＧの混合液（上記と同じ濃度）によ
り処置された。全動物は、温度３０℃における肢体血量計ボックス中に維持され
、そして頻度４０分および５０％吸気時間に設定されたＳｅｒｖｏ Ｖｅｎｔｉ
ｌａｔｏｒ ９００Ｂ（Ｓｉｅｍｅｎｓ−Ｅｌｅｍａ，Ｓｏｌｎａ，Ｓｗｅｄｅ
ｎ）を用いて、１００％酸素により６０分間並行して換気された。呼吸量は、各
血量計ボックスに接続された呼吸速度描写器（ｐｎｅｕｍｏｔａｃｈｙｇｒａｐ
ｈ）により測定された。動物は、標準化された呼吸量８−１０ｍｌ／ｋｇにより
、そしてポジティブな末端呼気圧（ＰＥＥＰ）なしで換気された。肺−胸郭屈従
は、呼吸量とピークの吸気圧間の比として定義され、そしてｍｌ／ｃｍＨ₂Ｏｋ
ｇとして表された。

【００５９】 未処置の対照動物との比較において、コンプライアンス（ｃｏｍｐｌｉａｎｃ
ｅ）は、人工サーファクタントで処置された動物において、特にポリミキシンＢ
を含有するサーファクタントを受けている動物において有意に改善された。注目
すべきことに、改善は、同用量の改変された天然のサーファクタントによる処置
後に見られたものよりも優れていると思われる（図３）。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＳＰ−Ｃおよびその類似体のアミノ酸配列およびらせん回転表示 ヒトＳＰ−Ｃの配列は、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）
ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２３２，６１−６４から、そしてＳＰ−Ｃ（Ｌｅｕ）の配
列は、Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．２５５，１１６−１２４から採用した。ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）は、ＳＰ−
Ｃの１次構造に基づくが、位置１７を除く位置１６−２８のすべてのＶａｌ残基
がＬｅｕ残基により置換され、Ｌｙｓ残基が、位置１７，２２および２７に導入
されていて、そして位置５および６のパルミトイル化Ｃｙｓは、Ｓｅｒにより置
換されている。

【図２】 合成サーファクタント調製物の表面の拡がり性 ３重量％ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）（黒い四角、実線）、および２重量％ＳＰ−Ｂの
添加とともに３重量％ＳＰ−Ｃ（ＬＫＳ）（白い三角、点線）の拡散速度論。全
調製物が、ＮａＣｌ １５０ｍｍｏｌ／ｌ中ＤＰＰＣ／ＰＧ，７：３（ｗ／ｗ）
の１０ｍｇ／ｍｌの濃度において試験された。記録は、Ｗｉｌｈｅｌｍｙバラン
スにより得られ、そして各データポイントは、３回の異なる記録の平均値である
。

【図３】 イン・ビボの結果 早熟の新産ウサギ５匹（妊娠２７日令）における肺−胸郭コンプライアンスが
、標準化された呼吸量８−１０ｍｌ／ｋｇにより、そしてポジティブな末端呼気
圧（ＰＥＥＰ）なしで換気された。コンプライアンスは、処置された動物におい
て有意に改善された。ポリミキシンＢ（ＰｘＢ）の添加は、人工サーファクタン
ト調製物の効果を増強するように思われる。リン脂質の濃度は、すべてのサーフ
ァクタント調製物において同一、すなわち４０ｍｇ／ｍｌである。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１３年２月２３日（２００１．２．２３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項１１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項１５

【補正方法】変更

【補正の内容】

【手続補正４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ａ６１Ｐ 43/00 １２１ １２１ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ロベルトソン，ベンクト イタリア・アイ−43100パルマ・ビアパレ ルモ26／エイ (72)発明者 ベントウーラ，パオロ イタリア・アイ−43100パルマ・ビアパレ ルモ26／エイ Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA19 BA23 BA44 DA40 DA43 MA02 NA14 ZA341 ZA591 ZA601 ZB212 ZB352 ZC751 ZC752 4H045 AA10 AA30 BA33 EA23

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 １文字のアミノ酸コードにしたがって、一般式（Ｉ）： F_eG_fIPZZPVHLKR(X_aB)(X_bB)_n(X_cB)_mX_dGALLMGL (I) ［式中、 Ｘは、Ｖ，Ｉ，Ｌ，Ｎｌｅ（ノルロイシン）からなる群から選ばれるアミノ酸で
   あり； Ｂは、オルニチン、Ｋ，Ｉ，Ｗ，Ｆ，Ｙ，Ｑ，Ｎからなる群から選ばれるアミノ
   酸であり； Ｚは、ＳｅｒもしくはＣｙｓ残基が、炭素原子１２−２２個を含有するアシル基
   と、エステルもしくはチオ−エステル結合を介して場合によっては、結合されて
   いてもよいＳ，Ｃ，Ｆからなる群から選ばれるアミノ酸であり； ａは、１〜１９からの整数であり； ｂは、１〜１９からの整数であり； ｃは、１〜２１からの整数であり； ｄは、０〜２０からの整数であり； ｅは、０もしくは１であり； ｆは、０もしくは１であり； ｎは、０もしくは１であり； ｍは、０もしくは１であるが、 次の条件： − ｎ＋Ｍ＞０； − ｆ≧ｅ； − （Ｘ_aＢ）（Ｘ_bＢ）_n（Ｘ_cＢ）_mＸ_dは、最大アミノ酸２２個、好ましくはア
   ミノ酸１０〜２２個をもつ配列であることを前提とする］ で示されるＳＰ−Ｃ類似体。
2. 【請求項２】 式（Ｉａ）： (Ia) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₄ＢＸ₄ＢＸ₄ＢＸＧＡＬＬＭＧＬ で示される、請求項１記載のＳＰ−Ｃ類似体。
3. 【請求項３】 式（Ｉｂ）： (Ib) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₅ＢＸ₅ＢＸ₄ＧＡＬＬＭＧＬ で示される、請求項１記載のＳＰ−Ｃ類似体。
4. 【請求項４】 式（Ｉｃ）： (Ic) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₄ＢＸ₁₁ＧＡＬＬＭＧＬ で示される、請求項１記載のＳＰ−Ｃ類似体。
5. 【請求項５】 式（Ｉｄ）： (Id) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₈ＢＸ₇ＧＡＬＬＭＧＬ で示される、請求項１記載のＳＰ−Ｃ類似体。
6. 【請求項６】 式（Ｉｅ）： (Ie) ＦＧＩＰＳＳＰＶＨＬＫＲＸ₁₁ＢＸ₄ＧＡＬＬＭＧＬ で示される、請求項１記載のＳＰ−Ｃ類似体。
7. 【請求項７】 Ｓｅｒ残基が、好ましくはパルミトイル基によりアシル化さ
   れている、請求項１−６記載のＳＰ−Ｃ類似体。
8. 【請求項８】 Ｂがリジンもしくはフェニルアラニンであり、そしてＸがロ
   イシン、イソロイシンもしくはノルロイシンである、請求項１−７記載のＳＰ−
   Ｃ類似体。
9. 【請求項９】 【表１】 からなる群から選ばれる、請求項８記載のＳＰ−Ｃ類似体。
10. 【請求項１０】 脂質およびリン脂質が添加された状態で少なくとも１種の
    式（Ｉ）のＳＰ−Ｃ類似体を含んでなる合成サーファクタント。
11. 【請求項１１】 添加物脂質／リン脂質が、ＤＰＰＣ、ＰＧ、ＰＡを含有す
    る、請求項９記載の合成サーファクタント。
12. 【請求項１２】 ＳＰ−Ｂもしくはその活性誘導体もしくはポリミキシンを
    、さらに含有する、請求項１０−１１記載の合成サーファクタント。
13. 【請求項１３】 溶液、分散液、懸濁液、乾燥粉末の形態にある、請求項１
    ０−１２記載の合成サーファクタント。
14. 【請求項１４】 サーファクタント欠乏症のあらゆる症例において使用され
    る合成サーファクタントの調製のための、請求項１−７のＳＰ−Ｃ類似体の使用
    。
15. 【請求項１５】 サーファクタント欠乏症もしくは機能障害に関連する肺性
    疾患、例えば肺炎、気管支炎、喘息、胎便吸引症候群のあらゆる症例、そしてま
    た他の疾患、例えば漿液性中耳炎（グルーイアー）の処置のための、請求項１０
    −１３記載の人工サーファクタントの調製のための、ポリミキシン、好ましくは
    ポリミキシンＢの使用。
16. 【請求項１６】 サーファクタント欠乏症が呼吸困難症候群である、請求項
    １４および１５記載の使用。