PL194240B1 - Zastosowanie pochodnych N-formylohydroksyloaminy i amidowa pochodna N-formylohydroksyloaminy - Google Patents

Zastosowanie pochodnych N-formylohydroksyloaminy i amidowa pochodna N-formylohydroksyloaminy

Info

Publication number
PL194240B1
PL194240B1 PL99342296A PL34229699A PL194240B1 PL 194240 B1 PL194240 B1 PL 194240B1 PL 99342296 A PL99342296 A PL 99342296A PL 34229699 A PL34229699 A PL 34229699A PL 194240 B1 PL194240 B1 PL 194240B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
methyl
ion
nmr
acid
lrms
Prior art date
Application number
PL99342296A
Other languages
English (en)
Other versions
PL342296A1 (en
Inventor
Michael George Hunter
Raymond Paul Beckett
John Martin Clements
Mark Whittaker
Stephen John Davies
Lisa Marie Pratt
Zoe Marie Spavold
Steven Launchbury
Original Assignee
British Biotech Pharm
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9802549.7A external-priority patent/GB9802549D0/en
Priority claimed from GBGB9806300.1A external-priority patent/GB9806300D0/en
Priority claimed from GBGB9810463.1A external-priority patent/GB9810463D0/en
Priority claimed from GBGB9828318.7A external-priority patent/GB9828318D0/en
Application filed by British Biotech Pharm filed Critical British Biotech Pharm
Publication of PL342296A1 publication Critical patent/PL342296A1/xx
Publication of PL194240B1 publication Critical patent/PL194240B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C259/00—Compounds containing carboxyl groups, an oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a nitrogen atom, this nitrogen atom being further bound to an oxygen atom and not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C259/04—Compounds containing carboxyl groups, an oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a nitrogen atom, this nitrogen atom being further bound to an oxygen atom and not being part of nitro or nitroso groups without replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group, e.g. hydroxamic acids
    • C07C259/06—Compounds containing carboxyl groups, an oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a nitrogen atom, this nitrogen atom being further bound to an oxygen atom and not being part of nitro or nitroso groups without replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group, e.g. hydroxamic acids having carbon atoms of hydroxamic groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/164—Amides, e.g. hydroxamic acids of a carboxylic acid with an aminoalcohol, e.g. ceramides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4402—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 2, e.g. pheniramine, bisacodyl
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4453—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine only substituted in position 1, e.g. propipocaine, diperodon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C239/00—Compounds containing nitrogen-to-halogen bonds; Hydroxylamino compounds or ethers or esters thereof
    • C07C239/08—Hydroxylamino compounds or their ethers or esters
    • C07C239/14—Hydroxylamino compounds or their ethers or esters having nitrogen atoms of hydroxylamino groups further bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by doubly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D263/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D263/16—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D263/18—Oxygen atoms
    • C07D263/20—Oxygen atoms attached in position 2
    • C07D263/26—Oxygen atoms attached in position 2 with hetero atoms or acyl radicals directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/182—Radicals derived from carboxylic acids
    • C07D295/185—Radicals derived from carboxylic acids from aliphatic carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
    • C07C2601/08—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Abstract

1. Zastosowanie pochodnej N-formylohydroksyloaminy o wzorze (IA) lub (ID) w których R 2 oznacza n-butyl, benzyl lub cyklopentylometyl, R 4 oznacza tert-butyl, izobutyl, benzyl lub metyl, R 5 oznacza atom wodoru lub metyl, a R 6 oznacza metyl, lub R 5 i R 6 , razem z atomem azotu, do którego sa przylaczone, tworza ewentualnie podstawiony nasycony pierscien heterocykliczny o 3 do 8 atomach wegla, albo jej farmaceutycznie lub weterynaryjnie dopuszczalnych soli, do wytwarzania kompozycji przeciwbakteryjnej. 2. Pochodna amidowa N-formylohydroksyloaminy, która jest (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylo- propylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-cyklopentylopropionowego, i jej far- maceutycznie lub weterynaryjnie dopuszczalne sole. PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie pochodnych N-formylohydroksyloaminy jako środków przeciwbakteryjnych oraz amidowa pochodna N-formylohydroksyloaminy.
Na ogół, bakterie patogenne klasyfikuje się jako Gram-dodatnie albo Gram-ujemne. Wiele środków przeciwbakteryjnych (z antybiotykami włącznie) wykazuje specyficzność przeciw jednej z obu wyżej wymienionych Gram-klas patogenów. W związku z tym środki przeciwbakteryjne skuteczne przeciw patogenom Gram-dodatnim i Gram-ujemnym uważa się za środki o szerokim zakresie aktywności.
Znanych jest wiele klas środków przeciwbakteryjnych, na przykład penicyliny i cefalosporyny, tetracykliny, sulfonamidy, monobaktamy, fluorochinolony i chinolony, aminoglikozydy, glikopeptydy, makrolidy, polimyksyny, linkozamidy, trimetoprim i chloramfenikol. Podane klasy środków przeciwbakteryjnych różnią się zasadniczymi mechanizmami działania.
Poważnym problemem staje się oporność bakterii na wiele znanych środków przeciwbakteryjnych. Z tego powodu konieczne są nowe środki przeciwbakteryjne, zwłaszcza takie, których mechanizm działania zasadniczo różni się od mechanizmów znanych klas takich środków.
Spośród grupy patogenów Gram-dodatnich, takich jak Staphylococci, Streptococci, Mycobacteria i Enterococci, powstały/wyewoluowały oporne szczepy, co szczególnie utrudnia ich eliminację. Przykładami takich szczepów są metycylinooporny Staphylococcus aureus (MRSA), koagulazoujemne metycylinooporne Saphylococci (MRCNS), penicylinooporny Streptococcus pneumoniae i Entertococcus faecium wielooporny.
Patogenne bakterie zwykle wykazują oporność względem antybiotyków typu aminoglikozydu, b-laktamu (penicyliny i cefalosporyny) i chloramfenikolu. Oporność ta obejmuje enzymatyczną inaktywację antybiotyku na drodze hydrolizy lub tworzenia nieaktywnych pochodnych. Antybiotyki z rodziny b-laktamów (penicylina i cefalosporyna) zawierają pierścień b-laktamowy. Oporność względem tej rodziny antybiotyków w izolatach klinicznych polega zwykle na wytwarzaniu przez oporną bakterię enzymu „penicylinazy (b-laktamazy), który hydrolizuje pierścień b-laktamowy, eliminując tym samym jego aktywność przeciwbakteryjną.
Ostatnio zagrożeniem były szczepy wankomycynoopornych enterococci (Woodford N. 1998 Glycopeptide resistant enterococci: a decade of experience. Journal of Medical Microbiology, 47 (10): 849-62). Wankomycynooporne enterococci są szczególnie niebezpieczne ze względu na to, że często powodują infekcje szpitalne i są naturalnie oporne na większość antybiotyków. Wankomycyna działa wiążąc terminalne reszty D-Ala-D-Ala prekursora peptydolikanu, głównego składnika ściany komórkowej bakterii. Wysoka oporność na wankomycynę znana jest jako VanA i powodują ją geny mieszczące się na przenoszonym elemencie, który zmienia terminalne reszty D-Ala-D-Ala, przez co zmniejsza powinowactwo do wankomycyny.
W świetle nagłych zagrożeń bakteriami wieloopornymi, kwestią najwyższej wagi staje się opracowywanie środków przeciwbakteryjnych o nowych mechanizmach działania, które są skuteczne przeciw wzrastającej liczbie opornych bakterii, w szczególności wankomycynoopornych enterococci i bakterii opornych względem antybiotyków b -laktamowych, takich jak metycylinooporny Staphylococcus aureus.
Podstawą wynalazku jest stwierdzenie, że pewne pochodne N-formylohydroksyloaminy wykazują aktywność przeciwbakteryjną i tworzą nową klasę środków przeciwbakteryjnych. Stwierdzono, że pewne związki są środkami przeciwbakteryjnymi względem drobnoustrojów Gram-dodatnich i Gramujemnych. Ponadto, istnieje dowód na to, że pewne związki są środkami przeciwbakteryjnymi względem bakterii, które wykazują oporność na zwykle stosowane antybiotyki, takie jak wankomycyna iantybiotyki b-laktamowe, na przykład względem metycylinoopornego Staphylococcus aureus.
Mimo że poznanie mechanizmu działania tych związków może być pożyteczne, o ich użyteczności decyduje zdolność do zahamowania wzrostu bakterii. Obecnie uważa się jednak, że ich aktywność przeciwbakteryjna jest wynikiem, przynajmniej w części, wewnątrzkomórkowego hamowania bakteryjnego enzymu, deformylazy polipeptydowej (PDF).
Bakteryjne deformylazy polipeptydowe (PDF) (EC 3,5,1,31) są rodziną metaloenzymów (przegląd: Meinnel t., Lazennec C., Villoing S., Blanquet S., 1997, Journal of Molecular Biology 267, 749-761), które są istotne dla życia bakterii, a ich funkcją jest usuwanie grupy formylowej z N-końcowej reszty metioniny w syntetyzowanych w rybosomach białkach uebakterii.
PL 194 240 B1
Mazel i wsp. (EMBO J. 13(4): 914-923, 1994) ostatnio sklonowali i scharakteryzowali PDF E. coli. Jako że PDF jest istotnym czynnikiem we wzroście bakterii, a u eukariota nie istnieje część odpowiadająca PDF, Mazel i wsp. (ibid), Rajagopalan i wsp. (J. Am. Chem. Soc. 119: 12418-12419, 1997) i Becker i wsp. (J. Biol. Chem. 273(19): 11413-11416, 1998) podali, że PDF jest znakomitym celem dla środków przeciwbakteryjnych.
Pewne pochodne N-formylohydroksyloaminy zostały już zastrzeżone w patentach podanych poniżej, jednak tylko kilka przykładów takich związków zostało wytworzonych i opisanych.
EP-B-0236872 (Rosche)
WO 92/09563 (Glycomed)
WO 92/04735 (Syntex)
WO 95/19965 (Glycomed)
WO 95/22966 (Sanofi Winthrop)
WO 95/33709 (Rosche)
WO 96/23791 (Syntex)
WO 96/16027 (Syntex/Agouron)
WO 97/03783 (British Biotech)
WO 97/18207 (DuPont Merck)
WO 98/38179 (GlaxoWellcome)
WO 98/47863 (Labs Jaques Logeais)
Farmaceutyczna użyteczność przypisywana pochodnym N-formylohydroksyloaminy w tych opisach polega na ich zdolności do hamowania mataloproteinaz macierzy (MMP), a w niektórych przypadkach hamowania uwalniania czynnika martwicy nowotworu (TNF) i leczeniu, w ten sposób, chorób lub stanów związanych z tymi enzymami, takich jak rak i reumatoidalne zapalenia stawów. Stan techniki nie ujawnia i nie sugeruje, że pochodne N-formylohydroksyloaminy wykazują aktywność przeciwbakteryjną.
W WO 9410990 opisano zastosowanie konkretnych pochodnych kwasu hydroksamowego i N-formylohydroksyloaminy jako inhibitorów TNF-a i stąd ich zastosowanie w leczeniu stanów zapalnych i posocznicy. W publikacji tej nie ma sugestii, że ujawnione związki mają aktywność przeciwbakteryjną.
W WO 9407527 opisano użycie konkretnych pochodnych kwasu hydroksamowego i N-formylohydroksyloaminy jako inhibitorów aktywności endoteliny i stąd ich zastosowanie w leczeniu nadciśnienia, arytmii, zastoinowej niewydolności serca, niedokrwienia mięśnia sercowego, nadciśnienia płucnego, astmy, skurczu naczyń mózgowych, krwotoku podpajęczynówkowego, stanu przedrzucawkowego, miażdżycy tętnic, choroby Bϋrgera, zapalenia tętnicy Takayusu, zjawiska Raynauda, cukrzycy, raka (zwłaszcza raka płuc), uszkodzenia śluzówki żołądka, chorób przewodu pokarmowego, posocznicy, wstrząsu endotoksycznego, niewydolności wielonarządowej wywołanej endotoksynami oraz ostrej iprzewlekłej niewydolności nerek. Również w tej publikacjinie ma sugestii, że ujawnione związki wykazują aktywność przeciwbakteryjną.
Dodatkowo, w US-A-4738803 (Roques i wsp.) ujawniono również pochodne N-formylohydroksyloaminy, jednakże związki te są opisane jako inhibitory enkefalinazy i proponuje się ich zastosowanie jako środków przeciwdepresyjnych i obniżających ciśnienie. Ponadto w WO 97/38705 (BristolMyers Squibb) ujawniono pewne pochodne N-formylohydroksyloaminy, jak inhibitory enkefalinazy ienzymów przekształcających angiotensynę. W tym przypadku w stanie techniki również brak jest ujawnień bądź sugestii, że pochodne N-formylohydroksyloaminy wykazują aktywność przeciwbakteryjną.
Szczegółowy opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnej N-formylohydroksyloaminy o wzorze (IA)
PL 194 240 B1 w których
R2 oznacza n-butyl, benzyl lub cyklopentylometyl,
R4 oznacza tert-butyl, izobutyl, benzyl lub metyl,
R5 oznacza atom wodoru lub metyl, a R6 oznacza metyl, lub
R5 i R6, razem z atomem azotu, do którego są. przyłączone, tworzą ewentualnie podstawiony nasycony pierścień heterocykliczny o 3 do 8 atomach węgla, albo ich farmaceutycznie lub weterynaryjnie dopuszczalnych soli do wytwarzania kompozycji przeciwbakteryjnej.
Związki o wzorach (IA) i (ID), zdefiniowanych powyżej, mogą być stosowane jako składnik (składniki) przeciwbakteryjnych substancji czyszczących i dezynfekujących.
W korzystnej wersji wykonania, różne postaci wynalazku mogą być stosowane przeciw wankomycyno-, chinolono- i „b-laktamo”-opornym bakteriom i spowodowanym przez nie zakażeniom.
Na podstawie hipotezy, że związki o wzorach (IA) i (ID) działają przez hamowanie wewnątrzkomórkowej PDF, najsilniejszy efekt przeciwbakteryjny osiągnąć można stosując związki, które skutecznie przenikają ścianę komórkową bakterii. Stąd, związki o dużej aktywności hamującej in vitro względem PDF i zdolności do przenikania do komórki bakterii są korzystne do stosowania według niniejszego wynalazku. Należy spodziewać się, że właściwości przeciwbakteryjne związków, które są silnymi inhibitorami enzymu PDF in vitro, ale słabo przenikają przez ścianę komórki, mogą być zwiększone przez stosowanie ich jako proleków, to jest strukturalnie zmodyfikowanych analogów, które przekształcane są w rodzimą cząsteczkę o wzorze IA lub ID, na przykład, pod wpływem działania enzymu, po tym jak przenikną przez ścianę komórkową bakterii.
Ponadto przedmiotem wynalazku jest nowy związek, (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S) - [(formylohydroksyamino)metylo]-3-cyklopentylopropionowego i jego farmaceutycznie albo weterynaryjnie dopuszczalne sole.
W związkach do stosowania według wynalazku, ze względu na obecność asymetrycznych atomów węgla, istnieją rzeczywiste lub potencjalne centra chiralności. Obecność kilku asymetrycznych atomów węgla zwiększa liczbę diastereoizomerów o stereochemii R lub S na każdym centrum chiralności. Wynalazek obejmuje wszystkie takie diastereoizomery oraz ich mieszaniny. Obecnie, korzystną stereokonfiguracją atomu węgla podstawionego grupą R2 jest konfiguracja R; atomu węgla podstawionego grupą R4 (jeżeli jest asymetryczny) jest konfiguracja S.
Konkretnymi przykładami związków użytecznych jako środki przeciwbakteryjne, według niniejszego wynalazku, są związki podane w przykładach. Korzystnym związkiem do stosowania według wynalazku jest nowy związek (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)-amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-cyklopentylopropionowego oraz jego farmaceutycznie lub weterynaryjnie dopuszczalne sole.
Związki, których dotyczy niniejszy wynalazek, wytwarza się sposobem polegającym na usunięciu grupy zabezpieczającej z O-zabezpieczonego N-formylo-N-hydroksyloamino-związku o wzorze (IIA) lub (IID):
w których R2, R4, R5,R6 mają znaczenia podane dla wzorów ogólnych (IA) i (ID), a R25 oznacza grupę zabezpieczającą grupę hydroksylową, w wyniku usunięcia której , w procesie uwodornienia lub hydrolizy, otrzymuje się grupę hydroksylową. Korzystnie, R25 oznacza grupę benzylową, usuwaną w procesie uwodornienia, a grupy tert-butylową i tetrahydropiranylową są korzystnymi grupami usuwanymi w procesie hydrolizy kwaśnej.
PL 194 240 B1
Związki o wzorze (IIA) i (IID) wytwarza się sposobem polegającym na tym, że kwas o wzorze (III) lub jego aktywowaną pochodną poddaje się reakcji z aminą o wzorze, odpowiednio, (IVA) lub (IVD)
w których R2, R4, R5 i R6 mają znaczenia podane dla ogólnych wzorów (IA) i (ID), a R25 ma znaczenie zdefiniowane powyżej dla wzorów (IIA) i (IID).
Związki o wzorze (III) wytwarza się w reakcji N-formylowania związku o wzorze (V) przy zastosowaniu, przykładowo, bezwodnika octowego i kwasu mrówkowego albo 1-formylobenzotriazolu,
w którym R2 i R25 mają znaczenie podane dla wzorów (IIA) i (IID), a X oznacza pomocnik chiralny albo grupę OR26, w której R26 oznacza atom wodoru lub grupę zabezpieczającą grupę hydroksylową. W przypadku, gdy X oznacza grupę OR26 albo chiralny pomocnik, grupę zabezpieczającą grupę hydroksylową albo pomocnik usuwa się po etapie formylowania, w wyniku czego otrzymuje się związek o wzorze (V). Odpowiednimi pomocnikami chiralnymi są podstawione oksazolidynony, które usuwa się w procesie hydrolizy w obecności zasady.
W alternatywnej procedurze, związki o wzorze ogólnym (IIA) lub (IID) wytwarza się w reakcji N-formylowania, przy zastosowaniu, przykładowo, bezwodnika octowego i kwasu mrówkowego albo 1-formylobenzotriazolu, związku o wzorze (VI)
PL 194 240 B1
w którym R2 i R25 mają znaczenia podane dla wzorów (IIA) i (IID), a A oznacza
Związki o wzorze (VI) wytwarza się sposobem polegającym na tym, że kwas o wzorze ogólnym
w którym R2 i R25 mają znaczenia podane dla wzorów (IIA) i (IID), poddaje się reakcji z aminą, odpowiednio, o wzorze (IVA) lub (IVD), jak podano powyżej.
Alternatywnie, związki o wzorze ogólnym (VI) wytwarza się w procesie redukcji oksymu o wzorze ogólnym (VIII).
Odczynniki redukujące obejmują niektóre wodorki metali (na przykład cyjanoborowodorek sodu w kwasie octowym, trietylosilan lub boran/pirydyna) i wodór w obecności odpowiedniego katalizatora.
Alternatywnym sposobem, w jaki można otrzymać związki o wzorze ogólnym (IIA), w którym R2 ma znaczenia podane dla wzorów ogólnych (IA) i (ID), R6 oznacza wodór, R25 oznacza grupę zabezpieczającą grupę hydroksylową, jest 4-składnikowa reakcja Ugi kwasu karboksylowego o wzorze ogólnym (III), zdefiniowanym powyżej, aminy o wzorze (IX), aldehydu o wzorze (X) i izonitrylu o wzorze (XI)
R3-NK, (IX)
R4-CHO (X)
R5-CN (XI) w których R4 i R5zdefiniowano powyżej dla wzorów (IA) i (ID), a R3 oznacza wodór.
PL 194 240 B1
Związek o wzorze ogólnym V wytwarza się w procesie redukcji oksymu o wzorze ogólnym (XII)
w którym R2 i R25 zdefiniowano powyżej, a X oznacza grupę OR26, zdefiniowaną powyżej albo pomocnik chiralny. Odczynniki redukujące obejmują niektóre wodorki metali (na przykład cyjanoborowodorek sodu w kwasie octowym, trietylosilan lub boran/pirydyna) i wodór w obecności odpowiedniego katalizatora. W przypadku gdy X oznacza chiralny pomocnik, po przeprowadzeniu redukcji może być on ewentualnie przekształcony w grupę OR26.
Związek o wzorze ogólnym (XlI) wytwarza się w reakcji związku b-keto-karbonylowego o wzorze ogólnym (XIII)
w którym R2 i X zdefiniowano powyżej z O-zabezpieczoną hydroksyloaminą.
Związki b-keto-karbonylowe o wzorze (XIII) wytworzyć można w postaci racemicznej w reakcji formylowania albo acylowania związku karbonylowego o wzorze ogólnym (XIV)
w którym R2 i X zdefiniowano powyżej, ze związkiem o wzorze ogólnym (XV)
w którym Z oznacza grupę opuszczającą, taką jak atom fluorowca albo grupę alkoksylową, w obecności zasady.
Inna metoda wytwarzania związku o wzorze ogólnym (V) polega na tym, że przeprowadza się addycję Michaela pochodnej hydroksyloaminy do a,b-nienasyconych związków karbonylowych o wzorze ogólnym (XVI)
PL 194 240 B1
w którym R2 i X zdefiniowano powyżej. Po przeprowadzeniu reakcji addycji Michaela, w przypadku, gdy grupa X oznacza pomocnik chiralny, może być on ewentualnie przekształcony w grupę OR26. a,b-nienasycone związki karbonylowe o wzorze XVI wytwarza się znanymi metodami.
Sole związków według wynalazku obejmują fizjologicznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasami, na przykład, chlorowodorki, bromowodorki, siarczany, metanosulfoniany, p-toluenosulfoniany, fosforany, octany, cytryniany, bursztyniany, mleczany, winiany, fumarany i maleiniany. Sole mogą być tworzone również z zasadami, na przykład sole sodu, potasu, magnezu i wapnia.
Kompozycje, będące przedmiotem wynalazku, wytwarza się w postaci odpowiedniej do podawania w każdy sposób zgodny z własnościami farmakokinetycznymi aktywnego składnika (składników).
Kompozycje do podawania doustnego mogą mieć postać tabletek, kapsułek, proszków, granulek, romboidalnych pastylek, cieczy lub preparatów żelowych, takich jak doustne, miejscowe lub sterylne roztwory lub zawiesiny do podawania pozajelitowego. Tabletki i kapsułki do podawania doustnego mogą mieć formę dawek jednostkowych i mogą zawierać konwencjonalne substancje pomocnicze, takie jak środki wiążące, na przykład, syrop, gumę arabską, żelatynę, sorbitol, gumę tragakantową lub poliwinylopirolidon; wypełniacze, na przykład, laktozę, cukier, skrobię kukurydzianą, fosforan wapnia, sorbitol lub glicynę; substancje poślizgowe, na przykład stearynian magnezu, talk, glikol polietylenowy lub krzemionkę; środki rozsadzające, na przykład skrobię ziemniaczaną, lub dopuszczalne środki zwilżające, takie jak laurylosiarczan sodu. Tabletki mogą być powlekane sposobami dobrze znanymi w zwykłej praktyce farmaceutycznej. Ciekłe preparaty do podawania doustnego mogą mieć postać, na przykład, wodnych lub olejowych zawiesin, roztworów, emulsji, syropów, eliksirów lub mogą mieć postać wyrobów suchych do roztwarzania przed użyciem z wodą lub innym odpowiednim nośnikiem. Takie ciekłe preparaty zawierać mogą zwykłe dodatki, takie jak środki wspomagające tworzenie zawiesiny, na przykład sorbitol, syrop, metylocelulozę, syrop glukozowy, utwardzane żelatyną tłuszcze jadalne; środki emulgujące, na przykład lecytynę, monooleinian sorbitanu lub gumę arabską; nośniki niewodne (obejmujące jadalne oleje), na przykład, olej migdałowy, frakcjonowany olej kokosowy, oleiste estry, takie jak gliceryna, glikol propylenowy albo alkohol etylowy, konserwanty, na przykład p-hydroksybenzoesan metylu lub propylu lub kwas sorbinowy, i, jeśli to pożądane, środki smakowozapachowe i barwniki.
Do stosowania miejscowego na skórę aktywny składnik (składniki) może być zawarty w kremie, płynie lub maści. Kremy lub maści, które mogą być stosowane jako nośniki leku, stanowią zwykłe preparaty, dobrze znane w tej dziedzinie, na przykład, opisane w zwykłych podręcznikach farmacji, takich jak British Pharmacopoeia.
Składnik (składniki) aktywne mogą być podawane również pozajelitowo w sterylnym środowisku. W zależności od nośnika i zastosowanego stężenia lek może być zawieszony lub rozpuszczony w nośniku. Korzystnie, w nośniku rozpuszczone mogą być substancje pomocnicze, takie jak środki do znieczulenia miejscowego, konserwanty i bufory. Kolejnym sposobem podawania związków stosowanych według wynalazku jest wlew dożylny.
Bezpieczne i skuteczne dawki dla różnych grup pacjentów i różnych stanów chorobowych określa się na drodze badań klinicznych, jak jest to wymagane w tej dziedzinie. Należy rozumieć, że konkretne wielkości dawek dla każdego pacjenta zależą od wielu czynników, obejmujących aktywność zastosowanego związku, wiek, masę ciała, ogólny stan zdrowia, płeć, dietę, czas podawania, tryb podawania, szybkość wydalania, kombinację leków i zaawansowanie danej choroby podlegającej leczeniu.
Stwierdzenie, że związki o aktywności hamującej względem PDF mogą hamować lub zapobiegać wzrostowi bakterii, stwarza nową możliwość identyfikacji nowych środków przeciwbakteryjnych w teście skriningowym inhibitorów PDF in vitro, a następnie na potwierdzenie ich właściwości przeciwbakteryjnych w badaniach hamowania wzrostu bakterii. Stwierdzenie to umożliwia również (i) zastoPL 194 240 B1 sowanie związków o aktywności hamującej względem PDF jako środków przeciwbakteryjnych i (ii) powstanie metody leczenia zakażenia lub zarażenia bakteriami przez zastosowanie lub podanie związku będącego inhibitorem aktywności bakteryjnej PDF.
Tak więc niniejszy wynalazek umożliwia identyfikację związków przeciwbakteryjnych obejmującą test skriningowy tych związków pod kątem ich aktywności jako inhibitorów PDF in vitro, w którym wybiera się związki, wykazujące taką zdolność i klasyfikuje się je pod kątem zdolności do zahamowania wzrostu bakterii. Zdolność do hamowania wzrostu bakterii bada się stosując typowe metody badania hamowania wzrostu kultur bakterii na płytkach lub w pożywce płynnej, takie jak przeprowadzone w opisanych tu przykładach biologicznych.
Odpowiedni test skriningowy na hamowanie PDF obejmować może zmieszanie PDF, substratu PDF, korzystnie znakowanego wykrywalnym markerem i testowanego związku, po czym ocenę, po odpowiednim czasie, czy obecność związku testowanego powoduje hamowanie zdolności PDF do deformylowania substratu.
W korzystnej wersji wykonania wynalazku, rozszczepiony substrat wykrywa się za pomocą fluorescencyjnego markera, takiego jak fluoreskamina. Po usunięciu grupy formylowej z N-końcowej metioniny substratu PDF, wolna grupa aminowa ulega reakcji z fluoreskaminą tworząc fluorescencyjny produkt.
Alternatywny test skriningowy obejmuje ocenę, czy białko wytwarzane przez ekspresję przez bakterie, wyrażające endogenną PDF (lub wytwarzaną przez ekspresję rekombinacyjnie), podczas wzrostu w obecności testowanego związku tworzy odpowiedni do N-końcowego sekwencjonowania substrat, czy tworzy mniejszą ilość substratu niż białko wyrażane przez tę samą bakterię wzrastającą w nieobecności testowanego związku. Metoda taka może bazować na metodach opisanych tutaj w biologicznych przykładach.
Osoba z odpowiednim doświadczeniem, bez nowatorskiego wkładu, opracuje alternatywne sposoby testowania związków pod kątem ich zdolności do hamowania bakteryjnej PDF.
Naturalny antybiotyk, aktynonina (patrz, dla przykładu, J.C.S. Perkin I, 1975, 819) jest pochodną kwasu hydroksamowego o wzorze A
Poza aktynoniną, różne analogi strukturalne aktynoniny również wykazują aktywność przeciwbakteryjną (patrz, na przykład, Broughton iwsp. (Devlin i wsp. Journal of the Chemical Society, Perkin Transaction 1(9): 830-841, 1975; Broughton i wsp. Journal of the Chemical Society, Perkin Transaction 1(9): 857-860, 1975).
Jednak do dziś mechanizm leżący u podstawy aktywności przeciwbakteryjnej aktynoniny jest nieznany. Obecnie stwierdzono, że aktynonina powoduje hamowanie aktywności bakteryjnej PDF.
Związki z grupy matlystatyn wykazują wiele strukturalnych podobieństw z aktynoniną. Obie są cząsteczkami peptydów z wiążącymi metale grupami kwasu hydroksamowego (Ogita i wsp. J. Antibiotics, 45(11): 1723-1732; Tanzawa i wsp. J. Antibiotics, 45(11): 1733-1737; Haruyama i wsp. J. Antibiotics, 47(12): 1473-1480; Tamaki i wsp. J. Antibiotics, 47(12): 1481-1492). Matlystatyny i ich analogi o zbliżonej budowie charakteryzuje obecność w cząsteczce dwuwartościowej grupy piperazyn-1,6diylowej, to jest
PL 194 240 B1
Ze stwierdzenia podobieństwa w budowie do aktynoniny oraz obserwacji, że aktynonina hamuje PDF wynika, że matlystatyny mogą również hamować PDF.
Niniejszy wynalazek umożliwia leczenie infekcji bakteryjnej albo kontaminacji bakteriami przez podanie pacjentowi, który uległ takiej infekcji lub kontaminacji, albo przez zastosowanie na miejsce takiej infekcji albo kontaminacji, przeciwbakteryjnie skutecznej ilości związku, który ma zdolność hamowania aktywności bakteryjnego enzymu PDF.
Poniższe przykłady ilustrują wersje wykonania wynalazku.
N-metyloamid L-tert-leucyny i N,N-dimetyloamid L-tert-leucyny i inne pochodne aminokwasów wytwarza się zgodnie ze znanymi metodami literaturowymi.
Stosuje się poniższe skróty:
DMF N,N-dimetyloformamid
EDC chlorowodorek N-etylo-N'-(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu
HOAt 1-hydroksy-7-aza-benzotriazol
HOBt 1-hydroksybenzotriazol
HPLC wysokosprawna chromatografia cieczowa
LRMS spektrometria mas o niskiej rozdzielczości
TLC chromatografia cienkowarstwowa
Widma 1H i 13C zarejestrowano stosując spektrometr Burker AC 250E, odpowiednio przy 250,1 i 62,9 MHZ. Widma mas uzyskano stosując spektrometr Perkin Elmer Sciex API 165, przy rejestracji zarówno dodatnich, jak i ujemnych jonów. Widma podczerwieni zarejestrowano stosując FTIR spektrometr Perkin Elmer PE 1600.
P r zyk ł a d 1 (2,2-dimetylo-1S-metylokarbamoilopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-heksanowego
Tytułowy związek wytwarza się sposobem podanym na schemacie 1, opisanym dokładnie poniżej: SCHEMAT 1
PL 194 240 B1
Odczynniki i warunki: A. piperydyna, HCHO, EtOH, 80°C o/n; B. H2NOBzl, 80°C o/n; C. HCOOH, Ac2O; D. pentafluorofenol, EDC, CH2Cl2; E. H-tert-LeuNHMe, DMF 35°C; F. H2, 10% Pd/C, EtOAc/EtOH.
Etap A: kwas 2-butyloakrylowy
Kwas butyloamalonowy (25 g, 156 mmoli) rozpuszcza się w etanolu (250 ml) i dodaje 37% roztwór formaldehydu (15,45 ml, 156 mmoli), po czym piperydynę (47 ml, 624 mmole). Mieszaninę miesza się przez noc w temperaturze 80°C pod chłodnicą zwrotną. Rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozcieńcza się 1M kwasem solnym, po czym ekstrahuje dichlorometanem (3x30 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, odsącza i odparowuje, w wyniku czego otrzymuje się pożądany produkt w postaci żółtego oleju (25 g, z resztkowym rozpuszczalnikiem). 1H-NMR: d (CDCl3), 10,04 (1H, szer. s), 6,22 (1H, s), 5,57 (1H, d, J = 1,3 Hz), 2,30 (2H, t, J = 6,9 Hz), 1,38 (4H, m), i 0,91 (3H, t, J = 7,2 Hz).
Etap B: kwas 2RS-(benzyloksyaminometylo)-heksanowy
Mieszaninę kwasu 2-butyloakrylowego (3,43 g, 27,1 mmola) i 0-benzylohydroksyloaminy (5 g, 40,65 mmola) ogrzewa się w temperaturze 80°C przez noc. Mieszaninę schładza się do temperatury pokojowej, rozcieńcza się octanem etylu (40 ml) i przemywa 1M kwasem solnym (3x20 ml), nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu (2x20 ml) i solanką (2x20 ml), suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, po czym otrzymuje się tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (2,62 g, 39%). 1H-NMR: d (CDCl3), 5,05 (1H, szer. s), 7,35 (5H, m), 5,00 (2H, m), 3,28 (2H m), 2,98 (1H, m), 1,31 (6H, m) i 0,88 (3H, t, J = 5,0 Hz).
Etap C: kwas 2RS-[(benzyloksyformyloamino)-metylo]heksanowy
Kwas 2RS-(benzyloksyaminometylo)heksanowy (2,62 g, 10,51 mmola) rozpuszcza się w kwasie mrówkowym (4 ml, 105 mmoli) i bezwodniku octowym (1,9 ml, 21,02 mmola) i miesza przez noc w temperaturze pokojowej. Roztwór rozcieńcza się octanem etylu (40 ml), przemywa wodą (2x20 ml), nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu (20 ml) i solanką (20 ml), suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, po czym otrzymuje się pożądany produkt w postaci żółtego oleju (2,9 g, 99%). 1H-NMR: d (CDCl3, rotamery). 8,21 (0,5H, 5), 8,14 (0,5H, 5), 7,37 (5H, m), 4,98 (2H, m), 3,86 (1H, m), 3,27 (0,5H, dd, J = 6,0, 14,0 Hz), 2,93 (0,5H, m), 2,77 (1H, m), 1,50 (2H, m), 1,30 (4H, m) i 0,88 (3H, m).
Etap D: ester pentafluorofenylowy kwasu 2RS-[benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego
Kwas 2RS-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowy (30,72 g, 110 mmoli) i pentafluorofenol (26,31 g, 143 mmole) rozpuszcza się w dichlorometanie (150 ml) i roztwór miesza się, po czym, podczas dodawania EDC (25,3 g, 131 mmoli), schładza się w łaźni lodowej. Mieszaninę reakcyjną pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez noc. Roztwór przemywa się kolejno 1M kwasem solnym (2x50 ml), 0,5M węglanem sodu (2x50 ml) i solanką (50 ml), suszy nad bezwod12
PL 194 240 B1 nym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszcza się metodą szybkiej chromatografii (silikażel, dichlorometan) i otrzymuje się tytułowy związek w postaci bezbarwnego oleju (15,0 g, 31%). 1H-NMR: d (CDCl3, rotamery), 8,17 (1H, szer. s), 7,37 (5H, m), 4,95-4,70 (2H, szer. m), 4,10-3,75 (2H, szer. m), 3,10 (1H, szer. s), 1,88-1,55 (2H, m), 1,39 (4H, m) i 0,92 (3H, t, J = 7,0Hz).
Etap E: (2,2-dimetylo-1S-metylokarbamoilo-propylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego
Ester pentafluorofenylowy kwasu 2RS-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego (5 g, 11 mmoli) i N-metyloamid tert-leucyny (1,62 g, 11 mmoli) rozpuszcza się w DMF (60 ml) i mieszaninę miesza się przez noc w temperaturze 35°C. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza się w dichlorometanie. Roztwór przemywa się kolejno 0,5M roztworem węglanu sodu (1,0M kwasem solnym i solanką), suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i odsącza. Dwa diastereoizomeryczne produkty rozdziela się metodą szybkiej chromatografii (silikażel, elucja gradientowa 30% do 0% heksan w octanie etylu). Diastereoizomer A (wyższy Rf): 1H-NMR: d (CDCl3, rotamery), 8,12, 7,87 (1H, 2 szer. s), 7,27 (5H, m), 6,26 (1H, d, J = 8,7 Hz), 5,78 (1H, szer. s), 4,914,60 (2H. szer. m), 4,15 (1H, d, J = 9,2 Hz), 3,75 (2H, szer. m), 2,79 (3H, d, J = 4,3 Hz), 2,56 (1H, m), 1,60-1,35 (2H, szer. m), 1,24 (4H, m), 0,96 (9H, 5) i 0,86 (3H, t, J = 6,7 Hz).
Diastereoizomer B (niższy Rf): 1H-NMR: d (CDCl3, rotamery), 8,16, 7,38 (1H, 2 szer. s), 7,27 (5H, m), 6,28 (1H, d, J = 8,9 Hz), 5,70-5,44 (1H, szer. s), 4,98-4,61 (2H, szer. m), 4,14 (1H, d, J = 9,2 Hz), 3,78-3,62 (2H, szer. m), 2,85-2,60 (3H, szer. m), 2,47 (1H, m), 1,72-1,25 (6H, szer. m), 0,98 (9H, s) i 0,88 (3H, t, J = 6,7 Hz).
Etap F: (2,2-dimetylo-1S-metylokarbamoilopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego (2,2-dimetylo-1S-metylokarbamoilopropylo)amid kwasu 2-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego (diastereoizomer A) (1,0 g, 2,5 mmola) rozpuszcza się w mieszaninie octanu etylu (20 ml) i etanolu (1 ml) i roztwór umieszcza się w atmosferze argonu. Dodaje się 10% pallad na węglu drzewnym i przez zawiesinę przepuszcza się silnym strumieniem gazowy wodór. Po 40 minutach analiza TLC wykazuje, że cała substancja wyjściowa została przekształcona w bardziej polarny, widzialny pod wpływem chlorku żelaza, związek. Przez układ przepuszcza się argon, po czym odsącza się katalizator. Przesącz odparowuje się do sucha i otrzymuje się tytułowy związek w postaci piany o barwie kości słoniowej (810 mg, zawiera resztkowy rozpuszczalnik). 1H-NMR: d (CD3)2SO, rotamery), 9,81,
9.41 (1H, 2 szer. s), 7,82-7,60 (3H, m), 4,04 (1H, d, J = 9,3 Hz), 3,50-3,02 (2H, m), 2,87-2,60 (1H, m),
2.41 (3H, d, J = 4,5 Hz), 1,39-0,93 (6H, m), 0,75 (9H, 5) i 0,67 (3H, t, J = 5,7 Hz). 13C-NMR: d ((CD3)2SO), 172,5, 170,2, 157,5, 59,9, 42,8, 33,3, 29,0, 28,4, 28,2, 26,4, 24,8, 21,7 i 13,3. IR (dysk
KBr), Vmax 3309, 2959, 2873, 1646 i 1540 cm-1.
Z (2,2-dimetylo-1S-metylokarbamoilopropylo)amidu kwasu 2-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego (diastereoizomeru B) (1,0 g, 2,5 mmola) w podobny sposób usuwa się grupę zabezpieczającą i otrzymuje się diastereoizomer B tytułowego związku (740 mg, 97%). 1H-NMR d ((CD3)2SO, rotamery), 9,75, 9,30 (1H, 2 szer. s), 7,81-7,42 (3H, m), 4,04 (1H, d, J = 9,5 Hz), 3,53-3,02 (2H, m), 2,80-2,55 (1H, m), 2,41 (3H, d, J = 4,5 Hz), 1,33-0,82 (6H, m), 0,72 (9H, s) i 0,67 (3H, t, J = 6,7 Hz). 13C-NMR: d ((CD3)2SO), 172,6, 170,4, 161,7, 157,0, 59,8, 34,0, 29,4, 28,6, 26,7, 25,2, 22,1 i 14,1. IR (dysk KBr), Vmax 3312, 2959, 1640, 1541, 1369 i 1240 cm-1.
P r zyk ł a d 2 (2,2-dimetylo-1S-tert-butylokarbamoilopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksy-
PL 194 240 B1
Tytułowy związek wytwarza się sposobem opisanym w przykładzie 1 stosując w etapie E N-tertbutyloamid L-tert-leucyny zamiast N-tert-metyloamidu L-tert-leucyny. Diastereoizomery nie dają się rozdzielić metodą, szybkiej chromatografii (silikażel, octan etylu) w etapie E, więc przekształca się je w mieszaninę pożądanych pochodnych N-formylohydroksyloaminy w procesie uwodornienia. Białe ciało stałe 13C-NMR: d ((CD3)2SO), 172,8, 172,5, 170,1, 169,6, 161,6, 156,9, 59,9, 59,7, 51,9, 51,7, 50,2, 49,6, 48,3, 43,2, 43,1, 42,7, 34,2, 34,0, 29,6, 29,3, 29,2, 28,8, 28,6, 26,7, 22,2, 22,1, 20,3 i 13,9. IR (KBr), Vmax 3311, 2964, 1639, 1548, 1456, 1394, 1364 i 1226 cm-1.
P r zyk ł a d 3 (1S-metylo-2-morfolin-4-ylo-2-oksoetylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Roztwór estru pentafluorofenylowego kwasu 2RS-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego (przykład 1, etap D) (445 mg, 1 mmol) w DMF (5 ml) dodaje się do N-morfolinoamidu L-alaniny (158 mg, 1 mmol) we wrzącej tubie i miesza w temperaturze 35°C przez noc. DMF usuwa się pod próżnią, a pozostałość rozpuszcza się w dichlorometanie (2 ml) i przepuszcza przezwkład oczyszczający (Isolute-NH2) wymywając dichlorometanem (4 ml) w celu usunięcia pentafluorofenolu. Dichlorometan usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza się w kwasie mrówkowym (2 ml) i octanie etylu (2 ml). Roztwór traktuje się 10% palladem na węglu drzewnym (200 mg) i miesza w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Katalizator odsącza się na celicie, przemywa dokładnie metanolem i rozpuszczalnik usuwa pod próżnią. Związki oczyszcza się metodą HPLC z odwróconymi fazami (elucja gradientowa, 10-90% acetonitryl/woda).
Diastereoizomer A: 1H-NMR; d (CD3OD), 8,03 (0,5H, s), 7,84 (0,5H, s), 4,75 (1H, m), 3,65 (8H, m), 3,39 (1H, m), 3,24 (1H, dd, J=4,0, 13,2 Hz), 2,84 (1H, m), 1,57 (2H, m)3 1,34 (7H, m), i 0,92 (3H, m), LRMS: -ve jon 328 [M-H].
Diastereoizomer B: 1H-NMR; d (CD3OD), 3,66 (8H, m), 3,41 (1H, dd, J=9,98, 13,1 Hz), 3,23 (1H, m), 2,90 (0,5H, m), 2,71 (0,5H, m), 1,62 (2H, m), 1,33 (7H, m), i 0,92 (3H, t, J=6,7 Hz). LRMS: -vejon 328[M-H].
Związki z przykładów 4 do 12 wytwarza się sposobem opisanym w przykładzie 3 stosując odpowiedni aminozwiązek w miejsce N-morfolinoamidu L-alaniny. W przypadku, gdy wytwarzane są oba diastereoizomery, diastereoizomer A wymywany jest szybciej i jest on silniejszym środkiem przeciw PDF in vitro. W pewnych przypadkach tylko szybciej wymywany diastereoizomer jest brany bezpośrednio do produktu końcowego.
Przykła d 4 (1S-dimetylokarbamoiloetylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A: 1H-NMR; d (CD3OD), 4,7Z (1H, 10 m), 3,53 (1H, dd, J=8,9, 13,0 Hz), 3,23 (1H, m), 3,14 (3H, s), 2,95 (3H, s), 2,83 (0,5H, m), 2,74 (0,5H, m), 1,57 (2H, m), 1,33 (7H, m) i 0,92 (3H, m). LRMS; +ve jon 288 [M+H], -ve jon 286 [M-H].
Diastereoizomer B: 1H-NMR; d (CD3OD), 4,74 (1H, m), 3,41 (1H, dd, J=9,9, 13,0 Hz), 3,25 (1H, dd, J=4,0, 13,1 Hz), 3,15 (3H, s), 2,97 (3H, s), 2,89 (0,5H, m), 2,72 (0,5H, m), 1,53 (2H, m), 1,33 (7H, m) i 0,93 (3H, t, J=6,7 Hz). LRMS: +ve jon 310 [M+Na], -ve jon 286 [M-H].
Przykład 5 (1S-hydroksymetylo-3-metylobutylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Diastereoizomer A: 1H-NMR; d (CD3OD), 4,07 (1H, m), 3,55 (1H, m), 3,45 (2H, m), 3,20 (1H, m), 2,85 (0,5H, m), 2,80 (0,5H,m), 1,60 (3H, m), 1,35 (6H, m) i 0,93 (9H, m). LRMS: +ve jon 289 [M+H], ve jon 287 [M-H].
Diastereoizomer B: 1H-NMR; d (CD3OD), 4,07 (1H, m), 3,59 (1H, m), 3,45 (2H, m), 3,24 (1H, m), 2,70 (1H, m), 1,62 (3H, m), 1,35 (6H, m) i 0,93 (9H, m). LRMS: +ve jon311 [M+Na], 289 [M+H], -vejon 287 [M-H].
Przykład 6 (1S-hydroksymetylo-2-fenyloetylo) amid kwasu 2R (albo S)-(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Diastereoizomer A: 1H-NMR; d (CD3OD), 7,24 (5H, m), 4,15 (1H, m), 3,54 (2H, d, J=5,4Hz), 3,38 (1H, dd, J=7,8, 13,1 Hz), 3,14 (1H, dd, J=4,7, 13,2 Hz), 2,95 (1H, dd, J=7,3, 13,7 Hz), 2,68 (2H, m), 1,58(2H, m), 1,32 (4H, m), i 0,91 (3H, t, J=6,7 Hz). LRMS: +ve jon 345 [M+Na], 323 [M+H], -ve jon 321 [M-H].
Diastereoizomer B: LRMS: +ve jon 345 [M+Na], 323 [M+H], -ve jon 321 [M-H].
Przykład 7
[2,2-dimetylo-1-S-pirydyn-2-ylokarbamoilo)propylo]amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CD3OD), 8,34 (1H, m), 8,06 (1H, m), 7,90 (1H, m), 7,33 (1H, m), 4,45 (1H, s), 3,55 (1H, dd, J=8,3, 13,2 Hz), 3,25 (1H, m), 3,05 (1H, m), 1,61 (2H, m), 1,32 (4H, m), 1,11 (9H, s) i 0,85 (3H, m). LRMS: +ve jon 379 (M+H], -ve jon 377 [M-H].
Diastereoizomer B: bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CD3OD), 8,33 (1H, m), 8,20 (0,5H, m), 7,93 (1H, m), 7,41 (0,5H, m), 7,28 (1H, m), 4,48 (1H, s), 3,52 (1H, dd, J=8,8, 13,1 Hz), 3,23 (1H, dd, J=3,9, 13,1 Hz), 3,05 (0,5H, m), 2,87 (0,5H, m), 1,62 (2H, m), 1,36 (4H, m), 1,11 (9H, s) i 0,93 (3H, m). LRMS: +ve jon 393 [M+Na], 379 [M+H], -ve jon 377 [M-H].
P r zyk ł a d 8 (1S-dimetylokarbamoilo-2-metylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Diastereoizomer A: bezbarwnyolejLRMS: +ve 338[M+Na], -ve jon 319 [M-H].
P r zyk ł a d 9 (1S-dimetylokarbamoilo-2-fenyloetylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. LRMS: +ve 386 [M+Na], -ve jon 362 [M-H].
Diastereoizomer B: bezbarwny olej. LRMS: +ve 338 [M+Na], -ve jon 319 [M-H].
P r zyk ł a d 10 (1S-dimetylokarbamoilo-3-metylobutylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. LRMS: +ve 352 5 [M+Na], -ve jon 328 [M-H].
P r z y k ł a d 11
[3-metylo-1S-pirolidyno-1-karbonylo)butylo]amid kwasu 2R (albo S)-(formylohydroksyaminometylo]heksanowego
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. LRMS: -ve jon 354 [M-H].
Przykła d 12
Dimetyloamid kwasu 1-{2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanoilo}-pirolidyno-2Skarboksylowego
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. LRMS: +ve 336 [M+Na], -ve jon 312 [M-H].
Diastereoizomer B: bezbarwny olej. LRMS: +ve 336 [M+Na], -ve jon 312 [M-H].
Przykła d 13 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)-amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-heksanowego
PL 194 240 B1
Metoda I
Sposób syntezy tytułowego związku podany jest na schemacie 2 i szczegółowo opisany poniżej.
Odczynniki i warunki: A. HCOOEt, NaOEt; B. HCl.NHOBzl, NAOAc, wodny roztwór EtOH; C. NaOH, MeOH; D. H-TleNMe2, EDC, HOAt, DMF; E. NACNBH3; AcOH, po czym rozdział diastereoizomerów; F. HCOBt, THF; G. H2, Pd/C, MeOH.
Etap A: ester etylowy kwasu 2RS- formyloheptanowego
Sód metaliczny (4,38 g, 0,191 mmola) tnie się na małe kawałki i umieszcza w dwuszyjnej, wysuszonej w piecu, kolbie okrągłodennej w atmosferze argonu. Dodaje się bezwodny eter dietylowy (100 ml) i zawiesinę miesza się i schładza do temperatury 0°C. Do kolby dołącza się chłodnicę zwrotną, po czym wkrapla się etanol (1,03 ml, 17,3 mmola). Następnie przez około 20 minut dodaje się kroplami z wkraplacza mieszaninę mrówczanu etylu (15,41 g, 0,208 mmola) i kapronianu etylu (25 g, 0,173 mmola). Otrzymaną pomarańczową zawiesinę (metaliczny sód wciąż widoczny) pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez noc. Otrzymaną lepką pomarańczową zawiesinę (nie widać sodu) schładza się do temperatury 0°C i rozcieńcza lodowatą wodą (100 ml). Mieszaninę przenosi się do rozdzielacza i oddziela fazę wodną, przemywa ją eterem dietylowym, schładza do temperatury 0°C i zakwasza 1M kwasem solnym (200 ml). Emulsję ekstrahuje się octanem etylu i oddziela warstwę organiczną, przemywa ją solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się żółty olej zawierający głównie tytułowy produkt (11,09 g), który używa się bez dalszego oczyszczania w Etapie B.
PL 194 240 B1
Etap B: ester etylowy kwasu 2RS-(benzyloksyiminometylo)heptanowego
Surowy produkt Claisena z etapu A (11,0 g, 63,9 mmola) rozpuszcza się w etanolu (100 ml) i wodzie (10 ml), po czym, dodając octan sodu (6,2 g, 76,6 mmola) i chlorowodorek O-benzylohydroksyloaminy (12,23 g, 76,6 mmola), schładza do temperatury 0°C. Mieszaninę pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez noc. Otrzymaną zawiesinę przesącza się, a przesącz zatęża pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymaną żółtą pastę rozdziela się pomiędzy octan etylu i wodę. Warstwę organiczną przemywa się 1M kwasem solnym i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, aż do otrzymania żółtego oleju. Pożądany produkt otrzymuje się po przeprowadzeniu szybkiej chromatografii (silikażel, elucja gradientowa 10% do 25% octan etylu w heksanie). Wydajność 9,19 g (52%). 1H-NMR: d (CDCl3, mieszanina izomerów syn- i anti-), 7,46 (0,6H, d, J = 8,0 Hz), 7,38-7,28 (5H, m), 6,79 (0,4H, d, J = 7,1 Hz), 5,11 (0,8H, s), 5,08 (1,2H, s), 4,16 (1,2H, q, J = 7,0 Hz), 4,13 (0,6H, q, J = 7,0 Hz), 3,91 (0,4H, q, J = 7,2 Hz), 3,21 (0,6H, td, J = 8,0 i 6,1 Hz), 1,90-1,48 (2H, m), 1,37-1,20 (7H, m), 0,87 (3H, t, J = 7,0 Hz).
Etap C: kwas 2RS-(benzyloksyiminometylo)heptanowy
Ester etylowy kwasu 2RS-(benzyloksyiminometylo)heptanowego (7,0 g, 25,24 mmola) rozpuszcza się w metanolu (125 ml) i roztwór schładza się do temperatury 0°C. Przez 2 minuty porcjami dodaje się 1M wodorotlenek sodu (26 ml, 26 mmoli) i otrzymuje się bladożółtą emulsję. Następnie dodaje się metanol aż do otrzymania klarownego roztworu. Roztwór miesza się przez 90 minut w temperaturze 0°C, po czym przez 5 godzin w temperaturze pokojowej, aż do stwierdzenia metodą TLC, że w całości zaniknął związek wyjściowy. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozdziela się pomiędzy wodęi octan etylu. Warstwę wodną schładza się do temperatury 0°C i zakwasza 1M kwasem solnym. Utworzoną emulsję ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemywa się solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i odsącza. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się tytułowy związek w postaci żółtego oleju (5,15 g, 82%), który stosuje się bez dalszego oczyszczania w etapie D. 1H-NMR: d (CDCl3, mieszanina izomerów syn- i anti-), 8,00 (1H, szer. s), 7,46 (0,6H, d, J = 7,9 Hz), 7,36-7,24 (5H, m), 6,80 (0,4H, d, J = 7,0 Hz), 5,13 (0,8H, s), 5,09 (1,2H, s), 3,94 (0,4H, q, J = 7,1 Hz), 3,27 (0,6H, td, J = 6,4 i 8,0 Hz), 1,94-1,58 (2H, m), 1,48-1,24 (4H, m) i 0,94-0,84 (3H, m).
Etap D: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2RS-(benzyloksyiminometylo)heptanowego
Kwas 2-(benzyloksyiminometylo)heptanowy (5,16 g, 20,7 mmola), N,N-dimetyloamid tertleucyny (3,60 g, 22,77 mmola) i EDC (4,76 g, 24,84 mmola) miesza się razem w DMF (75 ml) i schładza do temperatury 0°C. Dodaje się HOAt (250 mg, kat.) i jasnożółtą mieszaninę pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez noc. Rozpuszczalnik odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostały olej rozdziela pomiędzy octan etylu i 1M kwas solny. Warstwę organiczną przemywa się solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Tytułowy związek otrzymuje się w postaci bezbarwnego oleju po przeprowadzeniu szybkiej chromatografii (silikażel, elucja gradientowa 33% do 66% octan etylu w heksanie). Wydajność 6,84 g, (85%). 1H-NMR: d (CDCl3, mieszanina izomerów syn- i anti-), 7,45 (0,6H, 2d), 7,40-7,26 (5H, m), 6,72 (0,4H, 2d), 6,58 (1H, m), 5,20-4,69 (3H, m), 3,82 (0,4H, m), 3,163,10 (3H, m), 3,05 (0,6H, m), 2,99-2,92 (3H, m), 1,90-1,54 (2H, m), 1,39-1,17 (4H, m), 0,97 (2,7H, s), 0,96 (1,8H, s), 0,94 (2,7H, s), 0,92 (1,8H, s) i 0,92-0,82 (3H, m).
Etap E: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-(benzyloksyaminometylo)heptanowego
Do roztworu (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amidu kwasu 2RS-(benzyloksyiminometylo)heptanowego (5,0 g, 12,84 mmola) w kwasie octowym (40 ml) dodaje się w jednej porcji cyjanoborowodorek sodu (2,02 g, 32,0 mmola). Przez jedną godzinę reagent powoli rozpuszcza się z łagodnym wydzielaniem gazu, po czym otrzymuje się bezbarwny roztwór, który miesza się przez noc. Rozpuszczalnik odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, po czym przeprowadza destylację azeotropową z toluenem. Pozostały olej rozdziela się pomiędzy eter dietylowy a 1M węglan sodu (OSTROŻNIE - wydziela się gaz). Warstwę organiczną przemywa się solanką (70 ml), suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Dwa diastereoizomery tytułowego związku oczyszcza się i rozdziela metodą szybkiej chromatografii (silikażel, elucja gradientowa 50% do 100% octan etylu w heksanie).
Diastereoizomer A (wymywany szybciej): bezbarwny olej (2,27 g, 45%): 1H-NMR: d (CDCl3), 7,43-7,28 (5H, m), 6,76 (1H, szer. d, J = 9,4 Hz), 5,69 (1H, szer. s), 4,93 (1H, d, J = 9,4 Hz), 4,72 (2H, s),
PL 194 240 B1
3,15 (3H, s), 3,18-3,00 (2H, m), 2,96 (3H, s), 2,49 (1H, m), 1,66-1,49 (2H, m), 1,46-1,19 (4H, m), 0,99 (9H, s) i 0,86 (3H, t, J = 6,8 Hz).
Diastereoizomer B (wymywany wolniej): bezbarwny olej (1,44 g, 46%): 1H-NMR: d (CDCl3), 7,40-7,27 (5H, m), 6,70 (1H, szer. d, J = 9,0 Hz), 5,99 (1H, szer. s), 4,85 (1H, d, J = 9,0 Hz), 4,71 (2H, d, J = 1,6 Hz), 3,16 (3H, s), 3,06-2,97 (2H, m), 2,95 (3H, s), 2,57 (1H, m), 1,74-1,21 (6H, m), 1,00 (9H, s) i 0,88 (3H, szer. t, J = 6,7 Hz).
Etap F: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heptanowego (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-benzyloksyaminometylo)heptanowego (diastereoizomer A) (2,02 g, 5,13 mmola) rozpuszcza się w bezwodnym THF (50 ml) i umieszcza w atmosferze argonu. Dodaje się N-formylobenzotriazol (A.R. Katritzky i wsp. Synthesis 1995, 503) (0,83 g, 5,65 mmola) i mieszaninę miesza się przez 4 godziny w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, a otrzymany olej rozdziela pomiędzy dichlorometan i 1M wodorotlenek sodu. Warstwę organiczną przemywa się wodorotlenkiem sodu i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Tytułowy związek otrzymuje się w postaci białego, krystalicznego ciała stałego po przeprowadzeniu szybkiej chromatografii (silikażel, elucja 33% octan etylu w heksanie). Wydajność 1,60 g (74%). 1H-NMR: d (CDCl3, rotamery), 8,00 (1H, szer. m), 7,47-7,29 (5H, m), 6,25 (1H, szer. d, J = 9,3Hz), 5,08-4,74 (2H, brm), 4,87 (1H, d, J = 9,4Hz), 3,89-3,52 (2H, szer. m), 3,13 (3H, s), 2,94 (3H, 5), 2,54 (1H, m), 1,67-1,11 (6H, m), 0,95 (9H, s) i 0,85 (3H, szer. t, J = 6,9Hz).
(1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2-benzyloksyaminometylo)heptanowego (diastereoizomer B) wywarza się podobnie z wolniej wymywanego diastereoizomeru z etapu E. Wydajność 0,38g (41%). 1H-NMR: d(CDCl3, rotamery), 8,00 (1H, szer. m), 7,47-7,28 (5H, szer, m), 6,29 (1H, szer. d, J = 9,3 Hz), 5,01-4,63 (2H, szer. m), 4,88 (1H, d, J = 9,3 Hz), 3,82-3,51 (1,5H, szer. m), 3,20-2,78 (6,5H, szer. m), 2,50 (1H, szer. m), 1,76-1,17 (6H, szer. m), 0,97 (9H, s) i 0,85 (3H, szer. t, J = 6,7Hz).
Etap G: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heptanowego (diastereoizomer A) (1,43 g, 3,41 mmola) rozpuszcza się w metanolu (50 ml) i umieszcza w atmosferze argonu. Dodaje się zawiesinę 10% palladu na węglu drzewnym (100 mg, kat.) woctanie etylu (2 ml) i mieszaninę miesza się energicznie przepuszczając przez nią gazowy wodór. Po 10 minutach mieszaninę umieszcza się w atmosferze wodoru i miesza przez 3 godziny, aż analiza TLC wykaże, że związek wyjściowy całkowicie zaniknął. Przez układ przepuszcza się argon, po czym odsącza się katalizator. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się tytułowy związek w postaci bezbarwnej, higroskopijnej piany (1,11 g, 99%). 1H-NMR: d (CDCl3, rotamery), 8,41 (0,35H, s), 7,83 (0,65H, szer. s), 6,80 (0,35H, szer. d, J = 8,9 Hz), 6,62 (0,65H, szer. d, J = 9,4 Hz), 4,91 (0,65H, szer. d, J = 9,4 Hz), 4,88 (0,35H, szer. d, J = 8,9 Hz), 4,04 (1H, dd, J = 14,7 i 7,4 Hz),
3,82 (0,65, dd, J = 14,0 i 9,7 Hz), 3,56 (0,35H, dd, J = 14,7 i 3,3 Hz), 3,48 (0,65H, dd, J = 14,0 i 4,0 Hz), 3,16 (1,05H, s), 3,15 (1,95H, s), 2,98 (1,05H, s), 2,96 (1,95H, s), 2,90-2,74 (0,65H, szer. m), 2,74-2,61 (0,35H, szer. m) 1,73-1,17 (6H, szer. m), 0,99 (3,15H, s), 0,95 (5,85H, s) i 0,87 (3H, szer. t, J = 6,7Hz). 13C-NMR; d (CDCl3), 174,6, 171,2, 162,2, 157,2, 60,1, 54,5, 54,3, 52,3, 48,4, 44,8, 44,3, 35.6, 35,4, 29,6, 29,0, 26,3, 20,8, 20,2, 14,0 i 13.7. LRMS: +ve jon 352 (M+Na), -vejon 328 (M-H).
(1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)-amid kwasu 2-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego (diastereoizomer B) wytwarza się podobnie z diastereoizomeru B z etapu E. 1H-NMR; d (CDCl3, ro-tamery), 9,37 (0,5H, s), 8,40 (0,5H, s), 7,75 (0,5H, szer. s), 6,62 (0,5H, szer. s), 6,41 (0,5H, szer. d, J=7,1 Hz), 4,87 (0,5H, szer. d, J=6,6 Hz), 4,66 (0,5H, szer. d, J=7,6 Hz), 3,84-3,39 (2H, m), 3,21 (1,5H, szer. s), 3,14 (1,5H, szer. s), 2,98 (3H, szer. s), 2,91-2,54 (1H, m), 1,79-1,23 (6H, m) i 1,08-0,83 (12H, m). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 174,9, 173,3, 56,3, 54,8, 51,6, 50,3, 45,5, 45,1, 38,6, 38,4, 36,2, 36,0, 35,3,
34,4, 29,5, 29,4, 29,3, 29,2, 26,6, 26,5, 22,6, 22,5 i 13,9. LRMS: +ve jon 352 [M+Na], -ve jon 328 [M-H].
Metoda II
Alternatywną syntezę asymetryczną związku z przykładu 13 przedstawia schemat 3, a jej opis znajduje się poniżej.
PL 194 240 B1
Odczynniki i warunki: A. piperydyna, HCHO, EtOH, 80°C, o/n; B. tBuCOCl, Et3N, po czym
2-lito-4-benzylo-5,5-dimetylo-oksazolidyn-2-on; C. H2NOBzl, temp. pok., o/n, następnie pTsOH, EtOAc; D. LiOH, wodny roztwór THF, 0°C; E. H-Tle-NMe2, HOBt, EDC, DMF; F. HCOBt, THF; G. H2, Pd/C, EtOH.
Etap A; kwas 1-butyloakrylowy
Do roztworu kwasu n-butylomalonowego (17,2 g, 107 mmoli) w etanolu (200 ml) dodaje się piperydynę (12,76 ml, 129 mmoli) i 37% wodny roztwór formaldehydu (40,3 ml, 538 mmoli). Roztwór ogrzewa się do temperatury 80°C, w tym czasie wytrąca się osad, który stopniowo rozpuszcza się wciągu 1 godziny. Mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze 80°C przez noc, po czym schładza do temperatury pokojowej. Rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza się w octanie etylu (200 ml), przemywa stopniowo 1M kwasem solnym i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz zatęża się i otrzymuje tytułowy związek w postaci klarownego oleju (13,37 g, 97%). 1H-NMR; d (CDCl3)1 6,29 (1H, s), 5,65 (1H, s), 2,3-2,28 (2H, m), 1,54-1,26 (4H, m) i 0,94 (3H, t, J=7,1 Hz).
PL 194 240 B1
Etap B: 4S-benzylo-3-(2-butyloakryloilo)-5,5-dimetylooksazolidyn-2-on
Kwas 2-butyloakrylowy (21,5 g, 168 mmola) rozpuszcza się w suchym THF (500 ml) i schładza do temperatury -78°C w atmosferze argonu. Z szybkością, przy której temperatura pozostaje poniżej -60°C dodaje się trietyloaminę (30 ml, 218mmoli) i chlorek piwaloilu (21 ml, 168 mmoli). Mieszaninę miesza się w temperaturze -78°C przez 30 minut, pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i ostatecznie ponownie schładza do -78°C.
W oddzielnej kolbie 4-S-benzylo-5,5-dimetylooksazolidyn-2-on rozpuszcza się w suchym THF (500 ml)i schładza do temperatury -78°C w atmosferze argonu. Powoli dodaje się n-butylolit (2,4M roztwór w heksanie, 83 ml, 200 mmoli) i mieszaninę miesza się przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Otrzymany anion przenosi się rurką do pierwszego naczynia reakcyjnego. Mieszaninę pozostawia się do ogrzania się do temperatury pokojowej i miesza przez noc w tej temperaturze. Reakcję zatrzymuje się 1M wodorowęglanem potasu (200 ml), po czym rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozdziela się pomiędzy octan etylu i wodę. Warstwę organiczną przemywa się solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża pod zmniejszonym ciśnieniem, po czym otrzymuje się pomarańczowy olej. Analiza TLC wykazuje obecność, obok żądanego produktu, nieprzereagowanego pomocnika chiralnego. Część tego materiału (30 g) rozpuszcza się w dichlorometanie i przepuszcza przez warstwę krzemionki, w wyniku czego otrzymuje się czysty związek tytułowy w postaci żółtego oleju (25,3 g). 1H-NMR; d (CDCl3), 7,31-7,19(5H, m), 5,41 (2H, s), 4,51 (1H, dd, J=9,7, 4,2Hz), 3,32 (1H, dd, J=14,2, 4,2 Hz), 2,82(1H, dd, J=14,2, 9,7Hz), 2,40-2,34 (2H, m), 1,48-1,32 (4H, m), 1,43 (3H, s), 1,27 (3H, s) i 0,91 (3H, t, J=7,1Hz).
Część pomocnika chiralnego odzyskuje się przemywając warstwę krzemionki metanolem.
Etap C: 4S-benzylo-3-[2-(benzyloksyaminometylo)heksanoilo]-5,5-dimetylooksazolidyn-2-onu (sól kwasu p-toluenosulfonowego)
4S-benzylo-3-(2-butyloakryloilo)-5,5-dimetylooksazolidyn-2-on (19,8 g, 62,8 mmola) miesza się z O-benzylohydroksyloaminą (15,4 g, 126 mmoli) i miesza przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę rozpuszcza się w octanie etylu i roztwór przemywa się 1M kwasem solnym 1M węglanem sodu i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i odsącza. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się żółty olej (25,3 g), w którym analiza NMR i HPLC wykazuje zawartość 4S-benzylo-3-[2-(benzyloksyaminometylo)heksanoilo]-5,5-dimetylooksazolidyn-2-onu(około 82% d.e.) oraz ślady związku wyjściowego. Produkt łączy się z kolejną porcją (26,9 g, 76% d.e.) i rozpuszczaw octanie etylu (200 ml). Dodaje się kwas p-toluenosulfonowy (22,7 g, 119 mmoli) i mieszaninę schładza się do temperatury 0°C. Tytułowy związek otrzymuje się w postaci białego, krystalicznego ciała stałego po zaszczepieniu i potarciu bagietką ścianki naczynia. Wydajność: 25,2 g (34%, pojedynczy diastereoizomer). Otrzymuje się również drugi rzut (14,7 g,20%, pojedynczy diastereoizomer). 1H-NMR; d (CDCl3), 7,89 (2H, d, J=8,2 Hz), 7,37-7,12 (10H, m), 7,02 (2H, d, J=6,9 Hz), 5,28-5,19 (2H, m), 4,55 (1H, m), 4,23 (1H, m), 3,93 (1H, m), 3,58 (1H, m), 2,58 (1H, m), 2,35 (3H, s), 1,67-1,51 (2H, m), 1,29-1,16 (4H, m),1,25 (3H, s), 1,11 (3H, s) i 0,80-0,75 (3H, m).
Etap D: kwas 2R-(benzyloksyaminometylo)heksanowy
Sól kwasu p-toluenosulfonowego 4S-benzylo-3-[2R-(benzyloksyaminometylo)heksanoilo]-5,5-dimetylooksazolidyn-2-onu (25,2 g, 40,2 mmola) rozdziela siępomiędzy octan etylu i 1M węglan sodu. Fazę organiczną suszy się nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostały olej rozpuszcza się w THF (150 ml) i wodzie (50 ml), schładza do temperatury 0°C i traktuje wodorotlenkiem litu (1,86 g, 44,2 mmola). Roztwór miesza się przez 30 minut w temperaturze 0°C, po czym przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę zakwasza się do pH4 1M kwasem cytrynowym i odparowuje rozpuszczalniki. Pozostałość rozdziela się pomiędzy dichlorometan i 1M węglan sodu. Zasadową warstwę wodną zakwasza się dopH4 1M kwasem cytrynowym i ekstrahuje 3 razy octanem etylu. Połączone warstwy organiczne suszy się nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża, po czym otrzymuje się tytułowy związek w postaci bezbarwnego oleju (7,4g, 73%). 1H-NMR; d (CDCl3), 8,42 (2H, szer. s), 7,34-7,25 (5H, m), 4,76-4,66 (2H,m), 3,20-3,01 (2H, m), 2,73 (1H, m), 1,70-1,44 (2H, m), 1,34-1,22 (4H, m) i 0,92-0,86 (3H, m).
Etap E: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylo-1-propylo)amid kwasu 2R-(benzyloksyaminometylo)heksanowego
Kwas 2R-(benzyloksyaminometylo)heksanowy (7,98 g, 31,8 mmola) rozpuszcza się w DMF (150 ml) i roztwór schładza się do temperatury 0°C. Dodaje się EDC(6,1 g, 31,8 mmola) i HOBt (430 mg, 3,2 mmola) i mieszaninę miesza się przez 15 minut. Następnie dodaje się N,N-dimetyloamid tert-leucyny (5,53 g, 34 mmola) i mieszaninę reakcyjną pozostawia się do ogrzania do temperatury
PL 194 240 B1 pokojowej mieszając przez noc. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza się w octanie etylu, przemywa kolejno 1M kwasem solnym, nasyconym wodorowęglanem sodu i solanką, suszy i przesącza. Odparowuje się rozpuszczalnik i otrzymuje tytułowy związek w postaci żółtego oleju (8,7 g, 69%), który stosuje się w etapie F bez dalszego oczyszczania. 1H-NMR; d (CDCl3), 7,35-7,28 (5H, m), 6,77 (1H, szer. d, J=9,2 Hz), 5,69 (1H, szer. s), 4,93 (1H, d, J=9,4 Hz). 4,72 (2H, s), 3,15 (3H, s), 3,10-3,00 (2H, m), 2,95 (3H, s), 2,49 (1H, m), 1,64-1,21 (6H, m), 0,99 (9H, s) i 0,86 (3H, t, J = 6, 8 Hz).
Etap F: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylo-1-propylo)amid kwasu 2R-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylo-1-propylo)amid kwasu 2R-(benzyloksyaminometylo)heksanowego (7,8 g, 19,9 mmola) rozpuszcza się w suchym THF (100 ml) i traktuje 1-formylobenzotriazolem (3,08 g, 21,0 mmoli). Mieszaninę reakcyjną miesza się przez noc w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza się w octanie etylu, przemywa 2M roztworem wodorotlenku sodu i solanką. Warstwę organiczną suszy się nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt krystalizuje się z układu eter-heksan (4,83 g, 57 w dwóch rzutach). 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,12 (0,6H, szer. s), 7,89 (0,4H, szer. s), 7,37 (5H, s), 6,25 (1H, d, J=9,3 Hz), 4,96 (0,6H, szer. s), 4,86 (1H, d, J=9,4 Hz), 4,80 (0,4H, szer. s), 3,74 (2H, szer. s), 3,13 (3H, s), 2,94 (3H, s), 2,53 (1H, m), 1,38-1,21 (6H, m), 0,95 (9H, s) i 0,85 (3H, t, J=6,9 Hz).
Przypis: Małą próbkę krystalizuje się z układu eter-heksan, w celu otrzymania kryształów odpowiednich do analizy rentgenostrukturalnej. Podana tu stereochemia została w ten sposób potwierdzona.
Etap G: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylo-1-propylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylo-1-propylo)amid kwasu 2R-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowego (4,72 g, 11,3 mmola) rozpuszcza się w etanolu (80 ml) i umieszcza się w atmosferze argonu. Dodaje się zawiesinę 10% palladu na węglu drzewnym (940 mg) w octanie etylu (2ml) i mieszaninę miesza się energicznie przepuszczając przez układ gazowy wodór. Po 30 minutach zawiesinę umieszcza się w atmosferze wodoru i miesza przez noc w temperaturze pokojowej. Przez kolbę przepuszcza się argon, po czym odsącza się katalizator. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się tytułowy związek w postaci bezbarwnej piany, która z czasem krystalizuje (3,65 g, 98%). 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,32 (0,4H, szer. s), 8,41 (0,4H, s), 7,88 (0,6H szer. s), 7,27 (0,6H, s), 6,75 (0,4H, szer. d, J=8,8 Hz), 6,58 (0,6H, szer. d, J=9,3 Hz), 4,89 (1H, m), 4,04 (0,4H, m), 3,82 (0,6H, m), 3,53 (1H, m), 3,16 (1,2H, s), 3,15 (1,8H, s), 2,98 (1,2H, s), 2,96 (1,8H, s), 2,79 (0,6, m), 2,65 (0,4H, m), 1,78-1,58 (6H, m), 0,99 (3,6H, s), 0,95 (5,4H, 5) i 0,87, 3H, t, J=6,7Hz). 13CNMR; d (CDCl3, rotamery), 175,8, 173,3, 172,0, 55,4, 54,9, 52,2, 48,8, 46,3, 38,9, 38,8, 36,3, 36,1,
30,3, 30,2, 29,7, 26,9, 23,0 i 14,3. LRMS: +ve jon 352 [M+Na], -ve jon 328 [M-H].
Związki z przykładów 14 do 27 wytwarza się sposobem analogicznym do opisanego w przykładzie 13, metoda I, stosując w etapie A odpowiedni ester zamiast kapronianu etylu. W przypadku, gdy wytwarzane są oba diastereoizomery, diastereoizomer A wymywany jest szybciej i jest on silniejszym środkiem przeciw PDF in vitro. W pewnych przypadkach tylko szybciej wymywany diastereoizomer (etap E) jest brany bezpośrednio do produktu końcowego.
P r zyk ł a d 14 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-cyklopentylopropionowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A. Bezbarwna, szklista substancja. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,33 (0,4H, szer. s), 8,94 (0,6H, szer. s), 8,40 (0,4H, s), 7,82 (0,6H, s), 6,82 (0,4H, szer. d, J=8,6 Hz), 6,62 (0,6H, szer. d, J=9,3 Hz), 4,90 (1H, m), 4,06 (0,4H, szer. dd, J=14,7, 7,3 Hz), 3,81 (0,6H, szer. dd, J=14,0, 9,7 Hz), 3,50 (1H, m), 3,16 (1,2H, s), 3,14 (1,8H, s), 2,97 (1,2H, s), 2,95 (1,8H, s), 2,80 (1H, m), 1,871,32 (9H, m), 1,16-0,95 (2H, m), 0,99 (3,6H, s) i 0,95 (5,4H, s). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 172,9,
171,3, 55,0, 54,5, 52,0, 48,6, 45,4, 44,2, 38,5, 38.4, 37,9, 37,6, 36,4, 36,3, 35,8, 35,6, 35,5, 32,7, 32,6,
26,5, 26,4 i 25,1. LRMS: +ve jon 378 [M+Na], -ve jon 354 [M-H].
Diastereoizomer B. Bezbarwna, szklista substancja. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,30 (0,6H, szer. S), 8,41 (0,6H, s), 7,75 (0,4H, s), 6,52 (0,4H, szer. d, J=8,7 Hz), 6,41 (0,6H, szer. d, J = 7,3 Hz), 4,85 (0,4H, szer. d, J=9,5 Hz), 4,63 (0,6H, szer. d, J=7,5 Hz), 3,85-3,40 (2H, m), 3,25-2,95 (6H, 3 szer. s), 2,78 (1H, 2 szer. m), 1,90-1,40 (8H, m), 1,30 (1H, m), 1,20-1,00 (2H, m) i 1,05-0,95 (9H, 2s). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 174,9, 173,3, 172,8, 56,5, 54,7, 51.5, 50,5, 44,7, 44,6, 38,6, 38,4,
38,0, 37,8, 36,2, 36,0, 35,7, 35,5, 35,3, 34,3, 33,0, 32,9, 32,4, 32,3, 30,9, 26,6, 26,5, 25,1, 25,0 i 24,9. LRMS: +ve jon 378 [M+Na], -vejon 354 [M-H].
Przykła d 15 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]heptanowego
7,76 (0,67H, szer. s), 6,78 (0,33H, szer. d, J=9,1 Hz), 6,68 (0,67H, szer. d, J=9,1 Hz), 4,87-4,79 (1H, m), 3,96 (0,33H, szer. dd, J=14,6, 7,6Hz), 3,74 (0,67H, szer. dd, J=13,9, 9,7 Hz), 3,51-3,36 (1H, m), 3,09 (1H, s), 3,08 (2H, s), 2,90 (1H, s), 2,89 (2H, s), 2,86-2,55 (1H, m), 1,53-1,19 (8H, szer. m), 0,92 (3H, s), 0,88 (6H, s) i 0,79 (3H, m). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 174,3, 172,0, 170,5, 170,4,
54,0, 53,5, 53.4, 50,8, 49,7, 47,4, 44,9, 43,8, 37,5, 37,4, 34,8, 34,7, 34,6, 30,6, 29,2, 29,1, 25,8, 25,5, 21,4 i 12,9. LRMS: +ve jon 344 [M+H], -vejon 342 [M-H].
Diastereoizomer B. Ciemnopomarańczowy olej. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,36 (0,5H, s), 7,74 (0,5H, s), 6,69 (0,5H, szer. s), 6,57 (0,5H, szer. d, J=7,6 Hz), 4,89 (0,5H, szer. s), 4,70 (0,5H, d, J=7,8 Hz), 3,76-3,40 (2H, m), 3,21 (1,5H, s), 3,16 (1,5H, s), 2,98 (3H, 5), 2,81 (1H, szer. s), 2,72-2,60 (1H, m), 1,67 (2H, szer. 5), 1,42-1,22 (6H, m), 1,02 (4,5H, s), 0,99 (4,5H, s), 0,90 (1,5H, s) i 0,87 (1,5H, s). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 175,2, 173,8, 173,1, 56.5, 55,1, 52,3, 51,1, 50,6, 45,8, 45,5,
39,0, 38,9, 36,6, 36,3, 35,6, 34,9, 32,1, 32,0, 30,1, 29,9, 27,4, 27,4, 27,0, 26,9, 22,9, i 14,3. LRMS: +ve jon 344 [M+H], -ve jon 342 [M-H].
Przykła d 16 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]pentanowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A. Biała, higroskopijna piana.
1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,40 (0,33H, s), 7,83 (0,67H, szer. s), 6,88 (0,33H, szer. d, J=8,6 Hz), 6,69 (0,67H, szer. d, J=9,2 Hz), 4,90 (1H, t), 4,06 (0,33H, szer. dd, J=14,5, 7,4 Hz), 3,82 (0,67H, szer. dd, J=13,7, 9,8 Hz), 3,57-3,44 (1H, m), 3,16 (1H, s), 3,15 (2H, s), 2,98 (1H, s), 2,96 (2H, s), 2,87-2,63 (1H, m), 1,64-1,26 (4H, szer. m), 0,98 (3H, s), 0,94 (6H, s) i 0,90 (3H, t, J=7,3 Hz). 13C-NMR; d (CDCl3,rotamery), 175,8, 173,2, 172,0, 55,4, 54,9, 52,2, 48,7, 46,2, 45,0, 38,9, 38,9, 36,3, 36,1, 36,1, 32,7, 32,6, 27,0, 26,9, 20,9, 20,8 i 14,4. LRMS: +ve jon 338 [M+Na], -ve jon 314 [M-H].
P r zyk ł a d 17 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)-
Diastereoizomer A. Białe, higroskopijne ciało stałe. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,41 (0,4H, s), 7,83 (0,6H, s), 6,65 (0,4H, d, J=8,6 Hz), 6,55 (0,6H, d, J=9,0 Hz), 4,91-4,83 (1H, m), 4,033,95 (0,4H, m), 3,84-3,74 (0,6H, m), 3,62-3,43 (1H, m), 3,16 (1H, s), 3,13 (2H, s), 2,98 (1H, s), 2,96 (2H, s), 2,89-2,79 (0,6H, m), 2,76-2,71 (0,4H, m), 1,69-1,34 (1,8H, m), 1,29-1,20 (1, 2H, m), 1,0 (3,6H, s), 0,95 (5,4H, s) i 0,93-0,88 (6H, m). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 175,8, 173,3, 172,0, 171,7, 55,5, 55,0, 52,4, 49,1, 44,3, 43,2, 39,5, 39,4, 38,9, 38,8, 36,3, 36,1, 27,0, 26,9, 26,3, 26,0, 23,1, 23,0 i 22,8. LRMS: +ve jon 352 [M+Na], -ve jon 328 [M-H].
P r zyk ł a d 18 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 3-cykloheksylo-2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]propionowego
Diastereoizomer A. Białe ciało stałe. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,38 (0,25H, s), 7,82 (0,75H, s), 6,93 (0,25H, d, J=8,9 Hz), 6,74 (0,75H, d, J=8,9 Hz), 4,90 (1H, d, J=9,4 Hz), 4,02 (0,25H, dd, J=9,7, 14,1 Hz), 3,78 (0,75H, dd, J = 9,7, 14,1 Hz), 3,46 (1H, m), 3,15 (3H, s), 2,96 (3H, s), 2,92 (1H, m), 1,65 (6H, m), 1,20 (5H, m), 0,98 (9H, s) i 0,87 (2H, m). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 176,4,
174,2, 172,4, 56,0, 55,6, 53,4, 49,9, 44,0, 43,3, 39,6, 39,4, 38,7, 38,5, 36,9, 36,7, 36,6, 34,8, 34,5,
27,5, 27,4 i 27,2. LRMS: +ve jon 370 [M+H], 368 [M-H].
P r zyk ł a d 19 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-cyklopentylo-3-(formylohydroksyamino)propionowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A. Piana koloru kości słoniowej 1H-NMR; d (CD3OD1 rotamery), 8,22 (0,33H, s), 7,79 (0,66H, s), 4,89 (1H, s), 3,87 (1H, m), 3,5 (1H, m), 3,19 (3H, s,), 2,93 (3H, s), 2,82 (0,66H, m), 2,65 (0,33H, m), 1,89 (2H, m), 1,56 (5H, m), 1,24 (2H, m) i 0,98 (9H, s). 13C-NMR; a (CD3OD, rotamery), 176,0, 56,7, 53,2, 51,1, 42,7, 39,2, 36,5, 36,4, 32,0, 27,4, 26,4 i 26,2. IR (odbiciowa) Vmax 3318, 2953, 1663, 1628, 1529, 1367, 1229, 1142, 1087, 877 cm-1. LRMS: +ve jon 364 [M+Na], -ve jon 340 [M-H].
P r zyk ł a d 20 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]oktanowego
Diastereoizomer A. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,40 (0,4H, s), 7,83 (0,6H, s), 6,88 (0,4H, d, J=8,9 Hz), 6,68 (0,6H, d, J = 9,2 Hz), 4,90 (1H, m), 4,05 (0,4H, m), 3,81 (0,6H, m), 3,50 (1H, m), 3,16 (1,2H, s), 3,15 (1,8H, s), 2,97 (1,2H, s), 2,96 (1,8H, s), 2,86 (0,6H, m), 2,69 (0,4H, m), 1,59-1,25 (10H, m), 1,14-0,95 (9H, m) i 0,89-0,77 (3H, m). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 175,2, 172,9, 171,6, 171,4,
54,9, 54,5, 54,3, 52,0, 48,4, 46,1, 45,7, 45,1, 44,7, 39,7, 38,5, 38,4, 35,8, 35,6, 35,6, 31,7, 31,5, 30,2, 30,1, 29,1, 29,1, 27,0, 26,4, 22,4 i 14,0. LRMS: +ve jon380 [M+Na], 358 [M+H], -vejon 356 [M-H].
P r zyk ł a d 21 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]nonanowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A. Brązowe ciało stałe. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,30 (0,4H, s), 8,41 (0,6H, s), 7,83 (0,4H, s), 6,66 (0,4H, d, J=8,9 Hz), 6,52 (0,6H, d, J=9,7 Hz), 4,92-4,84 (1H, m), 4,063,97 (0,4H, m), 3,87-3,77 (0,6H, m), 3,63-3,45 (1H, m), 3,16 (1,2H, s), 3,14 (1,8H, s), 2,98 (1,2H, s), 2,96 (1,8H, s), 2,86-2,74 (0,6H, m), 2,66-2,63 (0,4H, m), 1,95-1,25 (12H, m), 1,00-0,95 (9H, m), i 0,900,84 (3H, m). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 175,5, 172,8, 171,4, 162,2, 156,1, 55,1, 54,5, 51,3, 50,8, 48,4, 46,3, 44,9, 38,4, 38,4, 35,8, 35,7, 33,9, 31,7, 30,3, 30,2, 29,4, 29,0, 27,1, 26,5, 26,5, 24,9, 22,6 i 14,0. LRMS: +ve jon 394 [M+Na], 372 [M+H], -ve jon 370 [M-H].
Przykład 22 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]dekanowego
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. LRMS: -ve jon 408 [M+Na], 386 [M+H], -ve jon 384 [M-H]
Przykład 23 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)-
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,31 (0,4H, s), 8,40 (0,4H, s), 8,17 (0,6H, s), 6,77 (0,4H, d, J=7,5. Hz), 6,60 (0,6H, d, J=8,0 Hz), 4,89 (1H, m), 4,04 (0,4H, m), 3,83 (0,6H, m), 3,52 (1H, m), 3,16 (1,2H, s), 3,15 (1,8H, s), 2,98 (1,2H, s), 2,96 (1,8H, s), 2,70 (1H, m), 1,58-1,14 (5H, m), 1,00-0,95 (9H, m) i 0,87-0,84 (6H, m). 13C-NMR; d(CDCl3, rotamery), 172,9, 171,5,
162,2, 156,3, 55,1, 54,6, 51,4, 48,5, 46,4, 45,0, 38,5, 38,4, 36,2, 35,9, 35,6, 29,7, 28,1, 28,0, 27,9, 26,7, 26,6, 26,5 i 22,4. LRMS: +ve jon 366 [M+Na], 344 [M+H], -vejon 342 [M-H].
Przykład 24 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]propanowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A: 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,41 (0,55H, s), 7,81 (0,45H, s), 6,67 (0,45H, d, J=8,4 Hz), 6,51 (0,45H, d, J=7,2 Hz), 4,88 (0,45H, d, J=9,4 Hz), 4,66 (0,55H, d, J=7,7 Hz), 3,76 (1H, m), 3,55 (0,55H, dd, J=14,3, 9,8 Hz), 3,44 (0,45H, dd, J=14,2, 5,3 Hz), 3,21 (1,65H, s), 3,14 (1,35H, s), 2,99 (1,65H, s), 2,97 (1,35H, s), 2,81 (1H, m), 1,21 (1,65H, d, J=6,7 Hz), 1,19 (1,35H, d, J=6,8 Hz), 1,01 (4,95H, s) i 0,98 (4,05H, s). LRMS: +ve jon 310[M+Na], -ve jon 286 [M-H].
Diastereoizomer B: 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,47 (0,4H, szer. s), 8,41 (0,4H, s), 7,86 (0,6H, s), 6,96 (0,4H, szer. s), 6,74 (0,6H, d, J=7,3Hz), 4,91 (1H, m), 3,99 (0,4H, dd, J=14,2, 7,6 Hz), 3,83 (0,6H, dd, J=13,8, 9,0 Hz), 3,50 (1H, m). 3,16 (1,2H, s), 3,15 (1,8H, s), 2,97 (3H, s), 2,90 (1H, m), 1,21 (1,2H, d, J=6,8 Hz), 1,15 (1,8H, d, J=6,5 Hz), 0,99 (3,6H, s) i 0,95 (5,4H, s). LRMS: +ve jon 310 [M+Na], -ve jon 286 [M-H].
Przykła d 25 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-metylomasłowego
Diastereoizomer A: 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,33 (0,4H, s), 8,38 (0,4H, s), 7,81 (0,6H, s), 6,86 (0,4H, szer. s), 6,58 (0,6H, d, J=8,6 Hz), 4,90 (1H, m), 4,06 (0,4H, dd, J=14,7, 7,3Hz), 3,91 (0,6H, dd, J=13,8, 10,6 Hz), 3,17 (1,2H, s), 3,15 (1,8H, s), 2,98 (1,2H, s), 2,96 (1,8H, s), 2,62 (0,6H, m), 2,48 (0,4H, m), 1,90 (1H, m), 1,09-0,86 (15H, m). LRMS: +ve jon 338 (M+Na), -vejon 314 (M-H).
Przykła d 26 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionylopropionowego
Diastereoizomer A. Bezbarwna, szklista substancja. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 9,33 (0,3H, szer. s), 8,95 (0,7H, szer. s), 8,43 (0,3H, szer. s), 7,83 (0,7H, szer. s), 7,27-7,10 (5H, m), 6,65 (0,3H, szer s), 6,45 (0,7H, szer. d, J=8,2 Hz), 4,80-4,70 (1H, m), 4,22-4,10 (0,3H, m), 3,89 (0,7H, dd, J=13,7, 9,6Hz), 3,63-3,47 (1H, m), 3,20-2,69 (3H, m), 3,04(3H, szer. s), 2,86 (3H, szer. s), i 0,87 (9H, szer. s). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 137,9, 137,7, 128,8, 128,5, 126,6, 54,9, 54,5, 51,3, 48,3, 47,3, 46,6,
38,3, 38,2, 36,2, 36,1, 35,8, 35,7, 35,6, 35,5 i 26,4. LRMS: +ve jon 386 (M+Na), -vejon 362 (M-H).
PL 194 240 B1
P r zyk ł a d 27 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-formylohydroksyamino)metylo]-3-(4-metoksyfenylo)propionowego
Diastereoizomer A: LRMS: +ve jon 416 (M+Na), -vejon 392 (M-H).
Związki z przykładów 28-31 wytwarza się sposobem opisanym w przykładzie 13, metoda II, stosując w etapie E odpowiedni amid albo ester benzylowy aminokwasu zamiast N,N-dimetyloamidu tert-leucyny.
P rzyk ł a d 28
Kwas 2S-{2R-[formylohydroksyamino)metylo]heksanoiloamino}-3-fenylopropionowy
Biała piana. 1H-NMR; d (CD3OD, rotamery), 8,11 (0,35H, s), 7,80 (0,65H, s), 7,31-7,16 (5H, m), 4,68 (1H, dd, J=8,7, 5,5Hz), 3,58 (1H, m), 3,39 (1H, m), 3,19 (1H, m), 2,98 (1H, m), 2,76 (1H, m), 1,55-1,26 (6H, m) i 0,90-0,85 (3H, m). 13C-NMR; d (CD3OD, rotamery), 176,1, 175,7, 174,7, 174,5, 138,6, 138,5, 130,3, 129,5, 129,4, 127,7, 55,0, 53,3, 49,8, 45,4, 38,4, 38,3, 31,0, 30,8, 30,1, 23,7 i 14,2. IR (odbiciowa) Vmax 2932, 2359, 1727, 1660, 1551, 1454, 1381, 1221, 882, 701 cm-1. LRMS: +ve jon 359 [M+Na], -vejon 335 (M-H).
P rzyk ł a d 29
Kwas 2S-{2R-[formylohydroksyamino)metylo]-heksanoiloamino}-3,3-dimetylomasłowy
Biała piana. 1H-NMR; a (CD3OD, rotamery), 8,25 (0,3H, s), 7,82 (0,7H, s), 4,31 (1H, s), 3,833,29 (2H, m), 3,10-2,89 (1H, m), 1,54-1,33 (6H, m), 1,03 (3H, s), 1,01 (6H, s) i 0,92-0,87 (3H, m).
PL 194 240 B1 13C-NMR; d (CD3OD, rotamery), 174,9, 172,9, 61,0, 52,4, 44,2, 44,0, 33,6, 30,1, 29,1, 26,2, 22,6 i 13,1. IR (odbiciowa) Vmax 2959, 2359, 1644, 1537, 1371, 1218, 881 i 704 cm-1. LRMS: +ve jon 325 (M+Na), -ve jon 301 (M-H).
Przykład 30 {1-[(2S-hydroksymetylopirolidyno-1-karbamoilo]-2,2-dimetylopropylo}amid kwasu 2S-[2Rformylohydroksyamino)metylo]heksanowego
J=8,2 Hz), 4,39 (0,6H, d, J = 8,4 Hz), 4,12 (1H, m), 3,91-3,37 (6H, szer. m), 2,93 (0,6H, m), 2,78 (0,4H, m), 1,93 (5H, m), 1,45 (2H, m), 1,39 (3H, m), 0,97 (3H, szer. s), 0,95 (3H, szer. s), i 0,89 (3H, t, J = 6,7 Hz). 13C-NMR; d(CDCl3, rotamery), 174,8, 172,9, 65,3, 65,1, 59,6, 59,5, 55,9, 55,7, 51,9, 47,8, 44,7, 44,0, 31,5, 30,5, 29,3, 28,7, 28,1, 27,3, 23,8, 22,0, 21,2, 18,7, 18,3, 17,6, 14,7 i 13,3. LRMS: +ve jon 394 (M+Na), 372 (M+H), -ve jon 370 (M-H).
Przykład 31 {1-[(2-hydroksyetylo)metylokarbamoilo]-2,2-dimetylopropylo}amid kwasu 2S-[2R-(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Biała piana. 1H-NMR; d (CD3OD, rotamery), 8,25 (0,25H, s), 8,03 (0,125H, s), 7,82 (0,625H, s), 4,88 (1H, m), 3,83-3,54 (4H, szer. m), 3,41 (2H, m), 3,25 (2H, s), 2,96 (2H, s i m), 1,49 (2H, m), 1,23 (4H, m), 1,00 (6H, s), 0,99 (3H, s), i 0,88 (3H, m). 13C-NMR; d (CD3OD, rotamery), 173,6, 164,4, 61,1, 61,0, 56,9, 56,5, 54,2, 53,9, 52,2, 41,8, 38,9, 36,9, 36,3, 35,3, 31,6, 30,8, 27,5, 24,1 i 14,7. LRMS: +ve jon 382 [M+Na], -vejon 358 [M-H].
Związki z przykładów 32 do 59 wytwarza się sposobem opisanym w przykładzie 7, metoda II, zamiast N,N-dimetyloamidu tert-leucyny w etapie E stosuje się odpowiednią aminę, amid/ester benzylowy aminokwasu. Wniektórych przypadkach w etapie E stosuje się HOAt, a usunięcie grupy zabezpieczającej przez uwodornienie (etap G) prowadzi się w warunkach katalizy z przeniesieniem fazowym (cykloheksan, pallad na węglu w etanolu).
Przykład 32 (1R-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 330 [M+H], -ve jon328 [M-H]
Przykła d 33 (1S-dimetylokarbamoilo-2S-metylobutylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Przykła d 34 (1S-dimetylokarbamoilo-2-metoksy-2-metylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Z racemicznej b-hydroksymetylowaliny. Diastereoizomer A. Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 368 [M+Na], 346 [M+H], -ve jon 344 [M-H]. Diastereoizomer B: LRMS: +ve jon 368 [M+Na], 346 [M+H], -vejon 344 [M-H].
Przykła d 35 (1S-dimetylokarbamoilo-2-hydroksy-2-metylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 354 [M+Na], -ve jon 330 [M-H].
PL 194 240 B1
P r zyk ł a d 36
[2-(4-chlorofenylo)-1S-dimetylokarbamoiloetylo]amid kwasu 2R-(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 330 (M+H), -vejon 328 (M-H)
P r zyk ł a d 37
[1S-dimetylokarbamoilo-2-(4-hydroksyfenylo)etylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 402 [M+Na], 380 [M+H]
P r zyk ł a d 38 (1S-dimetylokarbamoilo-2-naftalen-2-yloetylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 440 (M+H), -vejon 412 (M-H)
PL 194 240 B1
P r zyk ł a d 39 (2-cykloheksylo-1S-dimetylokarbamoiloetylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Biała piana. LRMS: +ve jon 329 (M+Na), 370 (M+H).
P r zyk ł a d 40 (1 S-dimetylokarbamoilofenylometylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
P r zyk ł a d 41 dimetyloamid kwasu 2-{2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanoilo}-1,2,3,4-tetrahydroizochinolino-3S-karboksylowego
LRMS: +ve jon 398 (M+H), -ve jon 374 (M-H)
P r zyk ł a d 42 (4-amino-1S-dimetylokarbamoilobutylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 345 (M+H), -vejon 343 (M-H)
Przykład 43 (1S-dimetylokarbamoilo-2-hydroksyetylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Bezbarwny olej. LRMS: +ve jon 326 (M+Na), -vejon 302 (M-H) Przykład 44
N-hydroksy-N-[2R-(4-metylopiperazyno-1-karbonylo)heksylo]formamid
Przykład 45
N-hydroksy-N-[2R-(morfolino-4-karbonylo)heksylo]formamid
LRMS: +ve jon 281 (M+Na), 259 (M+H), -ve jon 257 (M-H)
PL 194 240 B1
P rzyk ł a d 46
N-hydroksy-N-[2R-(2S-hydroksymetylopirolidyno-1-karbonylo)heksylo]formamid
P rzyk ł a d 47 (1S-hydroksymetylo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 289 (M+H), -ve jon 287 (M-H)
P rzyk ł a d 48 (1S-metoksymetylo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 303 (M+H), -ve jon 301 (M-H)
P rzyk ł a d 49
[1S-(4-benzylopiperydyno-1-karbonylo)-2,2-dimetylopropylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
LRMS: -vejon 458 (M-H)
Przykład 50
[1S-(4-benzylofenetylokarbamoilo)-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)-
LRMS: +ve jon 496 (M+H), -ve jon 494 (M-H)
Przykła d 51
[2,2-dimetylo-1S-(pirolidyno-1-karbonylo)propylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 356 (M+H), -ve jon 354 (M-H)
Przykła d 52 (2,2-dimetylo-1S-(morfolino-4-karbonylo)propylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
LRMS: +ve jon 372 (M+H), -ve jon 370 (M-H)
Przykła d 53 (2,2-dimetylo-1S-(4-metylopiperazyno-1-karbonylo)propylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: + ve jon 385 (M+H), -vejon 383 (M-H)
Przykła d 54
[2,2-dimetylo-1S-(4-metylopiperydyno-1-karbonylo)propylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 384 (M+H), -ve jon 382 (M-H]
Przykła d 55 (1S-cykloheksylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 398 (M+H), -ve jon 396 (M-H)
PL 194 240 B1
P r zyk ł a d 56
[1S-(4-acetylopiperydyno-1-karbonylo)-2,2-dimetylopropylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 412 (M+H), -ve jon 410 (M-H)
P r zyk ł a d 57 ester metylowy kwasu 1-(2S-{2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanoiloamino}-3,3-dimetylobutyrylo)piperydyno-4-karboksylowego
LRMS: +ve jon 442 (M+H), -ve jon 440 (M-H)
P r zyk ł a d 58
[2,2-dimetylo-1S-(oktahydrochinolino-1-karbonylo)propylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
LRMS: +ve jon 424 (M+H), -ve jon 422 (M-H)
P r zyk ł a d 59
[1S-(3,4-dihydro-2H-chinolino-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
PL 194 240 B1
LRMS: -vejon 416 (M-H)
P r zyk ł a d 60
2S-{3-etylosulfonylometylo-2R-[(formylohydroksyamino)metylo]propionyloamino}-3,3,N,Ntetrametylobutyramid
Sposób syntezy tytułowego związku przedstawiony jest na schemacie 4 i dokładnie opisany poniżej
PL 194 240 B1
Odczynniki i warunki: A. 3-lito-4-benzylo-oksazolidyn-2-on, THF, -78°C; B. LiN(SiMe3)2, THF, -78°C, po czym AcCl; C. HCl.H2NOBzl, NaOAc, wodny roztwór etanolu; D. NaCNHBH3, AcOH, temperatura pokojowa; E. HCOBt, THF; F. LiOH, wodny roztwórTHF, 0°C; G. H-Tle-NMe2, HOAt, EDC, DMF; H. H2, Pd/C, Me-OH, po czym rozdział izomerów (HPLC).
Etap A: kwas 2-etylosulfanylometyloakrylowy
Mieszaninę kwasu malonowego (5,2 g, 50 mmoli), paraformaldehydu (3,3 g, 110 mmola), dicykloheksyloaminy (9,95 ml, 50mmoli) i etanotiolu (4,06 ml, 55 mmoli) w dioksanie (120 ml) ogrzewa się w temperaturze 70°C przez 2 godziny. Rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszcza się w octanie etylu i roztwór ekstrahuje się nasyconym wodnym roztworem wodorowęglanu sodu (4x20 ml). Połączone warstwy wodne przemywa się octanem etylu(20 ml), po czym zakwasza 1M kwasem solnym. Otrzymaną zawiesinę ekstrahuje się do dichlorometanu i roztwór suszy się nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, po czym otrzymuje się tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (3,76 g, 52%).
1H-NMR; d (CDCl3), 9,89 (1H, szer. s), 6,35 (1H, s), 5,77 (1H, s), 3,39 (2H, s), 2,49 (2H, dd, J=7,4, 14,5Hz) i 1,25 (3H, t, J=5,2 Hz).
Etap B: 4S-benzylo-3-(2-etylosulfanylometyloakryloilo)-5,5-dimetylo-oksazolidyn-2-on
Kwas 2-etylosulfanylometylo-akrylowy (3,76 g, 25,8 mmola) rozpuszcza się w suchym THF (15ml) i schładza do temperatury -78°C w atmosferze argonu. Z szybkością, przy której temperatura pozostaje poniżej -60°C dodaje się trietyloaminę (4,6 ml, 33,5 mmola) i chlorek piwaloilu (3,17 ml, 25,8mmola). Mieszaninę miesza się w temperaturze -78°C przez 30 minut, ogrzewa się do temperatury pokojowej przez 2 godziny i ostatecznie ponownie schładza do -78°C.
W oddzielnej kolbie 4-S-benzylo-5,5-dimetylo-oksazolidyn-2-on rozpuszcza się w suchym THF (75 ml)i schładza do temperatury -78°C w atmosferze argonu. Powoli dodaje się n-butylolit (2,4M roztwór w heksanie, 12,9 ml, 30,9 mmoli) i mieszaninę miesza się przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Otrzymany anion przenosi się rurką do pierwszego naczynia reakcyjnego. Mieszaninę pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez noc w tej temperaturze. Reakcję zatrzymuje się nasyconym wodorowęglanem potasu (20 ml), po czym rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozdziela się pomiędzy octan etylu i wodę. Warstwę organiczną przemywa się kolejno nasyconym wodorowęglanem sodu, 1M kwasem solnym i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i zatęża pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszcza się metodą szybkiej chromatografii (silikażel, 20% octan etylu wheksanie) i otrzymuje się tytułowy związek w postaci żółtego oleju(6,5 g, 76%).
PL 194 240 B1 1H-NMR; 8 (CDCl3), 7,29 (5H, m), 5,58 (1H, s), 5,49 (1H, s), 4,54 (1H, dd, J=3,9, 9,7 Hz), 3,52 (2H, dd, J=15,8, 3,1 Hz), 3,38 (1H, dd, J=3,9, 14,5Hz), 2,84 (1H, dd, J=4,6, 14,3 Hz), 2,52 (2H, dd, J=7,2, 14,6 Hz), 1,42 (3H, 5), 1,29 (3H, s) i 1,22 (3H, t, J=7,5 Hz). LRMS: +ve jon 356 (M+Na), 334 (M+H).
Etap C: 4S-benzylo-3-[2R-tert-butoksyaminometylo)-3-etylosulfanylometylopropionylo]-5,5dimetylooksazolidyn-2-on
4S-benzylo-3-(2-etylosulfanylometyloakryloilo)-5,5-dimetylooksazolidyn-2-on (2,1 g, 6,3 mmola) rozpuszcza się w etanolu (10 ml) i dodaje chlorowodorek O-tert-butylohydroksyloaminy (0,95 g, 7,56mmola), po czym trietyloaminę (1,1 ml, 7,87 mmola). Mieszaninę miesza się w temperaturze 30°C przez noc. Rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza w octanie etylu. Organiczny roztwór przemywa się kolejno 1M kwasem solnym, nasyconym wodorowęglanem sodu i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się tytułowy związek w postaci bladożółtego oleju (2,42 g, 91%; wg HPLC pojedynczy diastereoizomer).
1H-NMR; d (CDCl3),7,30 (5H, m), 5,09 (1H, szer. s), 4,54 (1H, dd, J=3,5, 9,9Hz), 4,33 (1H, m), 3,19 (2H, m), 3,08 (1H, dd, J=5,4, 11,8 Hz), 2,80 (3H, m), 2,56 (2H, dd, J=7,4, 14,7Hz), 1,41 (3H, 5), 1,36 (3H, s), 1,23 (3H, t, J=7,3 Hz) i 1,13 (9H, s). LRMS: +ve jon 423 (M+H).
Etap D: kwas 2R-tert-butoksyamino-metylo)-3-etylosulfanylometylopropionowy
Roztwór 4S-benzylo-3-[2R-tert-butoksyamino-metylo)-3-etylosulfanylometylopropionylo]-5,5-dimetylooksazolidyn-2-onu (2,42 g, 5,72 mmola) w THF (40ml) schładza się do temperatury 0°C i dodaje roztwór wodorotlenku litu (288 mg, 6,86 mmola) w wodzie (10 ml). Mieszaninę pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej, po czym miesza przez 5 godzin. Rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozdziela się pomiędzy wodę i octan etylu. Warstwę wodną usuwa się, a warstwę octanu etylu przemywa kolejno wodą i nasyconym wodorowęglanem sodu. Połączone warstwy wodne przemywa sięoctanem etylu (20 ml), po czym zakwasza 1M kwasem solnym. Otrzymaną emulsję ekstrahuje się do dichlorometanu (3x20 ml), a połączone ekstrakty organiczne suszy się nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, po czym otrzymuje się tytułowy związekw postaci bezbarwnego oleju (0,68 g, 50%). 1H-NMR; d (CDCl3), 8,03 (2H, szer. s), 3,21 (2H, d, J=6,1 Hz), 2,89 (2H, m), 2,75 (1H, m), 2,57 (2H, dd, J=7,4, 14,8 Hz), 1,26 (3H, t, J=7,4 Hz) i 1,18 (9H, s).LRMS: +ve jon 236 [M+H], -vejon 234 [M-H].
Etap E: roztwór 2S-[2R-(tert-butoksyaminometylo)-3-etylosulfanylometylopropionyloamino}3,3,N,N-tetrametylobutyramid
Kwas 2-R-tert-butoksyaminometylo)-3-etylosulfanylometylopropionowy (340 mg, 1,44 mola) rozpuszcza się w DMF (10 ml) idodaje się N,N-dimetyloamid tert-leucyny (272 mg, 1,73 mmola), HOAt (19,6 mg, 0,14 mmola) i EDC (331 mg, 1,73 mmola). Mieszaninę miesza się przez noc w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozpuszcza się w dichlorometanie. Roztwór organiczny przemywa się kolejno 1M kwasem solnym, 1M węglanem sodu i solanką, suszy się nad bezwodnym siarczanem magnezu i odsącza. Przesącz zatęża się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się żądany produkt w postaci bezbarwnego oleju (440mg, 82%).
1H-NMR; d (CDCl3), 6,87 (1H, d, J=9,0 Hz), 5,11 (1H, szer. s), 4,93 (1H, d, J=9,3 Hz), 3,15 (3H, s), 3,11 (1H, m), 2,95 (3H, s), 2,79 (3H, m), 2,54 (3H, s), 1,22 (3H, t, J=7,6 Hz), 1,18 (9H, s) i1,01 (9H, s). LRMS: +ve jon 398 [M+Na], 376 [M+1].
Etap F: 2S-{2R-[(tert-butoksyformyloamino)-metylo]-3-etylosulfanylometylopropionyloamino}3,3,N,N-tetrametylobutyramid
Roztwór 2S-[2R-(tert-butoksyaminometylo)-3-etylosulfanylometylopropionyloamino}-3,3,N,N-tetrametylobutyramidu (220 mg, 0,58 mmola) w dichlorometanie (5 ml) schładza się do temperatury 0°C i traktuje bezwodnikiem mrówkowo-octowym (0,1 ml). Mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny, po czym odparowuje się rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszcza się metodą szybkiej chromatografii (silikażel, 50% octan etylu w heksanie jako eluent) i otrzymuje się tytułowy związek w postaci bezbarwnego oleju (120 mg, 52%).
1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,31 (1H, szer. s), 6,56 (1H, d, J=9,1 Hz), 4,94 (0,33H, d, J=9,4 Hz), 4,88 (0,67H, d, J=9,2 Hz), 4,08 (0,67H, szer. m), 3,83 (1,34H, szer. m), 3,13 (3H, s),2,95 (3H, s), 2,80 (2H, m), 2,61 (1H, dd, J=6,8, 14,0 Hz), 2,49 (2H, dd, J=7,4, 14,7 Hz), 1,29 (9H, s), 1,25 (3H, t, J=7,2 Hz) i 0,99 (9H, s). LRMS: +ve jon 426 [M+Na], 404 [M+H].
Etap G: 2S-{3-etylosulfanylometylo-2R-[(formylohydroksyamino)metylo]propionyloamino}-3,3,N,N-tetrametylobutyramid
PL 194 240 B1
Roztwór 2S-[2R-[(tert-butoksyformyloamino)-metylo]-3-etylosulfanylometylopropionyloamino}3,3,N,N-tetrametylobutyramidu (120 mg, 0,3 mmola) w deuterochloroformie (1 ml) traktuje się TFA (4ml) i pozostawia w temperaturze 4°C na noc. Rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a resztkowy TFA usuwa się w destylacji azeotropowej z toluenem. Pozostałość oczyszcza się metodą preparatywnej HPLC i otrzymuje się tytułowy związek w postaci bezbarwnego oleju (40 gm, 38%; wg HPLC mieszanina diastereoizomerów 7:2).
1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,40 (0,33H, s), 7,87 (0,67H, s), 7,24 (0,33H, d, J=9,3 Hz), 6,98 (0,67H, d, J=9,3 Hz), 4,91 (0,67H, d, J = 9,3 Hz), 4,90 (0,33H, d, J=9,3 Hz), 4,07 (0,33H, dd, J=7,5, 14,5 Hz), 3,86 (0,67H, dd, J=8,8, 14,2 Hz), 3,75 (0,67H, m), 3,68 (0,33H, m), 3,16 (1H, s), 3,15 (2H, s), 3,05 (1H, m), 2,96 (3H, s), 2,77 (1H, m), 2,66 (1H, m), 2,52 (2H, dd, J=7,4, 14,8Hz), 1,22 (3H, t, J=7,3 Hz), 0,99 (3H, s) i 0,96 (6H, s). 13C-NMR; d(CDCl3, rotamery), 173,3, 171,6, 171,2, 55,2, 54,8, 51,1, 48,5, 45,2, 44,4, 38,5, 38,4, 35,9, 35,8, 35,7, 31,7, 31,4, 26,7, 26,6, 26,5 i 14,6 LRMS: +ve jon 370 [M+Na], 348 [M+H], -ve jon 346 [M-H].
Związek z przykładu 61 wytwarza się podobnym sposobem, stosując w etapie A piperydynę zamiast etanotiolu.
P rzyk ł a d 61
2-{2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-piperydyn-1-ylopropionyloamino}-3,3,N,N-tetrametylobutyramid
Białe ciało stałe (wg HPLC mieszanina diastereoizomerów 4:1). 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,29 (1H, s), 7,95 (1H, szer. s), 4,87 (1H, d, J=9,1 Hz), 4,02 (1H, dd, J=5,0, 14,6 Hz), 3,56 (1H, dd, J=8,2, 14,6 Hz), 3,14 (3H, s), 2,96 (3H, s), 2,89 (1H, m), 2,69 (1H, m), 2,52 (5H, m), 1,65 (4H, m), 1,49 (2H, m) i 0,99 (9H, s). 13C-NMR; d(CDCl3), 172,2, 171,3, 60,4, 55,0, 54,9, 48,6, 42,4, 38,8, 36,2, 36,1, 27,0, 25,6i 24,3. LRMS: +ve jon 371 [M+H], -ve jon 369 [M-H].
Związki z przykładów 62 do 65 wytwarza się sposobem opisanym w przykładzie 7, metoda II, stosując w etapie B O-tert-butylohydroksyloaminę w miejsce O-benzylohydroksyloaminy i w etapie E odpowiednią aminę lub amid/ester benzylowy aminokwasu zamiast N,N-dimetyloamidu tert-leucyny. Końcowe usunięcie grupy zabezpieczającej przeprowadza się metodą hydrolizy kwasowej za pomocą TFA (patrz przykład 60, powyżej).
P rzyk ł a d 62 (1R-dimetylokarbamoilo-2-metylo-2-metylosulfanylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksy-
Bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,4 (0,5H, s), 7,85 (0,5H, s), 7,11 (0,5H, d, J=9,1 Hz), 6,93 (0,5H, d, J=9,1 Hz), 5,15 (1H, d, J=9,4 Hz), 3,90 (0,5H, m), 3,73 (0,5H, m), 3,64 (0,5H,
PL 194 240 B1 d, J=14,3 Hz), 3,48 (0,5H, dd, J=14,0, 3,9 Hz), 3,22 (3H, s), 2,97 (3H, s), 2,83 (0,5H, m), 2,70 (0,5H, m), 2,07 (1,5H, s), 2,04 (1,5H, s), 1,58 (1H, m), 1,36 (4H, m), 1,32 (3H, s), 1,28 (3H, s) i 0,86 (3H, t, J= 6,6Hz). 13C-NMR; d(CDCl3, rotamery), 175,4, 173,5, 170,8, 63,6, 53,2, 53,1, 52,5, 49,5, 47,5, 46,1, 44,9, 41,6, 37,5, 36,5, 36,4, 35,4, 30,2, 29,8, 28,0, 14,3, 12,0 i 11,9. LRMS: +ve jon 362 [M+H], -ve jon 360 [M-H].
Przykła d 63 (2-benzylosulfanylo-1R-dimetylokarbamoilo-2-metylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksy-
Biała piana. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,37 (0,33H, s), 7,81 (0,66H, s), 7,31 (5H, m), 7,06 (0,33H, d, J=8,8 Hz), 6,89 (0,66H, d, J=9,3 Hz), 5,20 (1H, d, J=9,3 Hz), 3,94 (0,33H, dd, J=8,3 14,6 Hz), 3,78 (2,66H, m), 3,61 (0,33H, dd. J=3,5, 14,4 Hz), 3,42 (0,66H, dd, J=5,1, 14,9 Hz), 3,21 (3H, s), 3,03 (3H, s), 2,82 (0,66H, m), 2,69 (0,33H, m), 1,61 (1H, m), 1,42 (1H, m), 1,37 (3H, s), 1,32 (3H, s), 1,26 (4H, m) i 0,86 (3H, t, J=6,6 Hz). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 175,3, 173,5, 171,0, 138,1, 137,4, 129,5, 129,3, 129,1, 129,0, 128,9, 127,6, 127,4, 55,9, 53,7, 52,5, 51,2, 49,6, 49,5, 46,1, 44,9, 39,0, 38,6, 36,6, 36,4, 33,9, 33,7, 30,3, 30,1, 29,7, 26,7, 26,1, 25,7, 25,5, 24,2, 22,9 i 14,3. LRMS: +ve jon 460 [M+Na], 438 [M+H], -ve jon 436 [M-H].
P r zy k ł a d 64
[2-benzylosulfanylo-2-metylo-1R-(morfolino-4-karbonylo)propylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Biała piana. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,44 (0,5H, s), 8,37 (0,5H, s), 7,30 (5H, m), 6,88 (0,5H, d, J=8,3 Hz), 6,78 (0,5H, d, J=9,2 Hz), 5,12 (1H, d, J=9,5 Hz), 3,91 (1H, dd, J=8,2, 14,6 Hz), 3,78 (10H, m), 3,45 (1H, dd, J=4,5, 14,2 Hz), 2,80 (0,5H, m), 2,64 (0,5H, m), 1,61 (1H, m), 1,41 (1H, m), 1,36 (3H, s), 1,33 (3H, s), 1,29 (4H, m) i 0,87 (3H, t, J=6,8 Hz). 13C-NMR; d (CDCl3, rotamery), 175,5, 173,4, 169,4, 137,8, 129,5, 129,3, 129,1, 129,0, 127,8, 127,5, 67,1, 67,0, 53,3, 53,2, 51,99, 49,6, 49,5, 49,2, 47,9, 46,5, 45,0, 43,2, 43,0, 34,0, 30,3, 30,2, 29,7, 26,8, 26,5, 25,9, 25,8, 22,9 i 14,3. LRMS: +vejon 502 [M+Na], 480 [M+H], -ve jon 478 [M-H].
PL 194 240 B1
P r zyk ł a d 65
[2-benzylosulfanylo-2-metylo-1R (albo S)-(4-metylopiperydyno-1-karbonylo)propylo]amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heksanowego
Diastereoizomer A. Białe ciało stałe. LRMS: +ve jon 514 [M+Na], 492 [M+H], -vejon 490 [M-H]. Diastereoizomer B. Bezbarwna żywica, LRMS: +ve jon 514 [M+Na], 492 [M+H], -ve jon 490 [M-H]. Związki z przykładów 66 do 68 wywarza się sposobem opisanym w przykładzie 7, metoda II, stosując w etapie A odpowiedni kwas malonowy zamiast kwasu butylomalonowego i w etapie C O-tert-butylohydroksyloaminę zamiast O-benzylohydroksyloaminy. Końcowe usunięcie grupy zabezpieczające prowadzi się w procesie hydrolizy kwaśnej za pomocą TFA (patrz przykład 60, powyżej).
P r zyk ł a d 66 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]pent-4-enowego
Pojedynczy diastereoizomer. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,40 (0,25H, s), 7,84 (0,75H, s), 7,05 (0,35H, d, J=9,0Hz), 6,74 (0,65H, d, J=9,3Hz), 5,70 (1H, m), 5,03-5,24 (2H, m), 4,88 (1H, dd, J=9,4, 6,7Hz), 3,98 (0,5H, m), 3,81 (0,5H, m), 3,55 (1H, m), 3,14 (3H, s), 2,97 (1,3H, s), 2,96 (1 ,7H, s), 2,75-2,92 (1H, m), 2,16-2,50 (2H, m), 0,98 (4.SH, s) i 0,94 (4,5H, s). LRMS: +ve jon 336 [M+Na], -ve jon 312 [M-H].
P r zyk ł a d 67 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heks-5-enowego
PL 194 240 B1
Diastereoizomer A: bezbarwny olej, 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,42 (0,45H, s), 7,84 (0,55H, s), 6,78 (0,45H, d, J=8,4Hz), 6,60 (0,55H, d, J=9,3Hz), 5,74 (1H, m), 5,03 (2H, m), 4,88 (1H, m), 4,14 (0,4H, m), 3,81 (0,6H, m), 3,55 (1H, m), 3,16 (1H, s), 3,15 (2H, s), 2,98 (1H, s), 2,97 (2H, s), 2,85 (0,7H, m), 2,68 (0,3H, m), 2,07 (2H, m), 1,73 (1,6H, m), 1,50 (0,4H, m), 0,99 (4H, s) i 0,95 (5H, s). LRMS: +ve jon 350 [M+Na], -ve jon 326 [M-H].
Diastereoizomer B: bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,41 (0,5H, s), 7,75 (0,5H, s), 6,58 (0,5H, d, J=9,1 Hz), 6,36 (0,5H, d, J=9,1 Hz), 5,75 (1H, m), 5,01 (2H, m), 4,86 (0,5H, d, J=9,5Hz), 4,64 (0,5H, d, J=7,5Hz), 3,42-3,82 (2H, m), 3,22 (1,5H, s), 3,07 (1,5H, s), 2,99 (3H, s), 2,87 (0,5H, m), 2,66 (0,5H, m), 2,13 (2H, m), 1,81 (1H, m), 1,49 (1H, m), 1,02 (4,5H, s) i 1,00 (4,5H, s). LRMS: +ve jon 350 [M+Na], -vejon 326 [M-H].
Przykła d 68 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[(formylohydroksyamino)metylo]heks-5-ynowego
Diastereoizomer A: bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,39 (0,4H, s), 7,87 (0,6H, s), 7,20 (0,4H, d, J=8,4Hz), 6,94 (0,6H, d, J=9,3Hz), 4,90 (1H, m), 3,66-4,14 (2H, m), 3,16 (2H, s), 3,14 (2H, s), 2,96 (3H, s), 2,88 (1H, m), 2,41 (2H, m), 1,77 (3H, m), 1,00 (3,5H, s) i 0,96 (5.SH, s). LRMS: +ve jon 348 [M+Na], -vejon 324 [M-H].
Diastereoizomer B: bezbarwny olej. 1H-NMR; d (CDCl3, rotamery), 8,37 (0,5H, s), 7,81 (0,5H, s), 6,87 (1H, m), 4,91 (0,5H, d, J=9,4Hz), 4,79 (0,5H, d, J=8,2Hz), 3,76 (1,5H, m), 3,63 (0,5H, m), 3,19 (1,5H, s), 3,14 (1,5H, s), 2,98 (3H, s), 2,85 (1H, s), 2,41 (2H, m), 1,77 (3H, m), 1,03 (4,5H, s) i 1,01 (4,5H, s). LRMS: +ve jon 348 [M+Na], -ve jon 324 [M-H].
P r z y k ł a d 69 (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[1R (albo S)-(formylohydroksyamino)etylo]-heksanowego
Tytułowy związek wytwarza się sposobem przedstawionym na schemacie 5 i dokładnie opisanym poniżej:
PL 194 240 B1
Odczynniki i warunki: A. (CHO)n, EtSH, dicykloheksyloamina, dioksan, 70°C, 2 godziny; B. tBuCOCl, Et3N, po czym 3-lito-4-benzylo-5,5-dimetylo-oksazolidyn-2-on; C. HCl.H2NOtBu, Et3N, o/n; D. LiOH, wodny roztwór THF, 0°C; H-t-LeuNMe2, HOAt, EDC, DMF; F. HCOAc, CH2Cl2; G. TFA, CDCl3.
Etap A: 4-benzylo-3-heksanoilooksazolidyn-2-on
4S-benzylooksazolidyn-2-on (14,5 g, 81,7 mmola) rozpuszcza się w suchym THF (75 ml) w atmosferze argonu. Roztwór schładza się w łaźni lodowej i powoli dodaje n-butylolit (1,6M roztwór wheksanie, 56 ml, 89,2 mmola). Sól litu krystalizuje z roztworu w postaci osadu, po czym roztwór pozostawia się na noc do ogrzania do temperatury pokojowej. Otrzymaną pomarańczową zawiesinę schładza się ponownie w łaźni lodowej, po czym dodaje się zimny roztwór chlorku heksanoilu (10,4 ml, 72,3 mmola) w suchym THF (50 ml).
PL 194 240 B1
Mieszaninę pozostawia się do ocieplenia do temperatury pokojowej, po czym miesza przez 3godziny. Reakcję przerywa się 1M roztworem węglanu sodu (5 ml), po czym rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozdziela się pomiędzy 1M węglan sodu (100 ml) ioctan etylu (150 ml). Warstwę organiczną usuwa się, a warstwę wodną przemywa się octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemywa się kolejno wodą, 1M węglanem sodu i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz zatęża się i otrzymuje pomarańczowy olej. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii otrzymuje się tytułowy związek w postaci żółtego oleju (10,21 g, 50%). 1H-NMR; d (CDCl3), 7,38-7,24 (3H, m), 7,24-7,16 (2H, m), 4,68 (1H, m), 4,244,12 (2H, m), 3,30 (1H, dd, J=13,4, 3,2 Hz), 3,02-2,86 (2H, m), 2,77 (1H, dd, J=13,4, 9,6 Hz), 1,771,63 (2H, m), 1,44-1,30 (4H, m) i 0,92 (3 H, szer. t, J=6,9 Hz).
Etap B: 1-(4S-benzylo-2-oksooksazolidyn-3-ylo)-2R-butylobutano-1,3-dion
4-benzylo-3-heksanoilooksazolidyn-2-on (10,2 g, 37,1 mmola) rozpuszcza się w THF (150 ml) w atmosferze argonu i schładza się do temperatury -78°C. Przez rurkęw ciągu paru minut dodaje się heksametylodisilazydek litu (1M roztwór w THF, 41 ml, 41 mmoli) i otrzymany zielony roztwór miesza się w temperaturze -78°C przez 2 godziny. Następnie dodaje się powoli chlorek acetylu (3,3 ml, 46,3mmola) i mieszaninę reakcyjną miesza przez 3,5 godziny. W celu przerwania reakcji dodaje się szybko roztwór kwasu cytrynowego (3,0 g, 14 mmoli) w wodzie (15 ml). Rozpuszczalnikusuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość rozdziela się pomiędzy octan etylu i wodę, przemywa solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz zatęża się i otrzymuje tytułowy związek w postaci żółtego oleju (12,11 g, zawiera resztkowy rozpuszczalnik), który stosuje się bez dalszego oczyszczania w etapie C. 1H-NMR; d (CDCl3),7,37-7,21 (5H, m), 4,68 (1H, m), 4,53 (1H, dd, J=9,6, 3,7 Hz), 4,23-4,13 (2H, m), 3,43 (1H, dd, J=13,5, 3,3Hz), 2,75 (1H, dd, J=13,5, 9,9Hz), 2,33 (3H, s), 2,03 (1H, m), 1,77 (1H, m), 1,46-1,26 (4H, m) i 0,98-0,86 (3H, m).
Etap C: 3-(O-benzylooksym) 1-(4S-benzylo-2-okso-oksazolidyn-3-ylo)-2R-butylobutano-1,3dionu
Do roztworu 1-(4S-benzylo-2-okso-oksazolidyn-3-ylo)-2R-butylobutano-1,3-dionu (12,11 g, 38,15 mmola)w wodzie (10 ml) i etanolu (90 ml) dodaje się octan sodu (3,75 g, 45,78 mmola) i chlorowodorek O-benzylohydroksyloaminy (7,31 g, 45,78 mmola). Otrzymaną zawiesinę miesza się przez noc wtemperaturze pokojowej. Produkt (7,3 g, 45% pojedynczy izomer oksymu) krystalizuje wprost z mieszaniny reakcyjnej, więc odsącza się go, przemywa układem woda-etanol (1:1) i suszy pod próżnią. Zługów pokrystalicznych wprocesie ekstrakcji kwasowo-zasadowej i chromatografii kolumnowej otrzymuje się kolejną porcję substancji (5,31 g, 33%, mieszanina izomerów oksymu) w postaci żółtego oleju. 1H-NMR; d (CDCl3, główny izomer oksymu), 7,34-7,20 (8H, m), 7,12-7,07 (2H, m), 5,14-5,02 (2H, m), 4,53 (1H, m), 4,13 (1H, dd, J=9,4, 4,0 Hz), 4,04 (1H, szer. t, J=8,4 Hz), 3,91 (1H, dd, J=9,0, 2,7Hz), 3,16 (1H, dd, J=13,4, 2,9Hz), 2,09 (3H, s), 1,97 (1H, m), 1,75 (1H, dd, J=13,4, 10,8Hz), 1,67 (1H, m), 1,45-1,22 (4H, m) i 0,91 (3H, szer. t, J = 6,9 Hz).
Etap D: 4S-benzylo-3-[2R-(1R (albo S)-benzyloksyaminoetylo)heksanoilo]oksazolidyn-2-on
Mieszaninę oksymów z etapu C (5,31 g, 12,5 mmola) rozpuszcza się w kwasie octowym (30 ml), schładza w łaźni lodowo-wodnej, po czym dodaje w jednej porcji cyjanoborowodorek sodu (0,8 g, 12,5mmola). Mieszaninę reakcyjną pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez noc. Kwas octowy usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość poddaje destylacji azeotropowej z toluenem. Otrzymany olej rozpuszcza się w octanie etylu, przemywa wodą, 1M węglanem sodu i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu i przesącza. Przesącz odparowuje się i otrzymuje bladożółty olej, który oczyszcza się metodą szybkiej chromatografii (silikażel, 10% do 25% octan etylu w heksanie jako eluent). Wydajność 3,43 g, 64%.
1H-NMR; d (CDCl3, mieszanina a-diastereoizomerów), 7,36-7,17 (10H, m), 5,80 (0,45H, szer. s), 5,55 (0,55H, szer. d, J=8,9 Hz), 4,72-4,59 (3H, m), 4,20-4,05 (2H, m), 3,97 (0,45H, m), 3,82 (0,55H, m), 3,47-3,22 (2H, m), 2,45 (1H, m), 1,90-1,48 (2H, m), 1,40-1,14 (7H, m) i 0,95-0,84 (3H, m).
Etap E: N-[2R-(4S-benzylo-2-okso-oksazolidyno-3-karbonylo)-1R (albo S)-metylo-heksylo]-Nbenzyloksyformamid
4S-benzylo-3-[2R-(1R (albo S)-benzyloksyaminoetylo)heksanoilo]oksazolidyn-2-on (3,08 g, 7,3mmola) rozpuszcza się w suchym THF i traktuje się N-formylobenzotriazolem (1,60 g, 10,9 mmola). Mieszaninę reakcyjną miesza się przez 4 godziny w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostały olej rozdziela się pomiędzy dichlorometan (40ml) i 1M roztwór wodorotlenku sodu (30ml). Warstwę organiczną usuwa się, przemywa wodorotlenkiem sodu, po czym solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuPL 194 240 B1 je. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii (silikażel, 20% do 50% octan etylu w heksanie) otrzymuje się tytułowy związek w postaci bladożółtego oleju (2,50 g, 76%). 1H-NMR; d (CDCl3, mieszanina a-diastereoizomerów i rotamerów), 8,22 (1H, szer. m), 7,54-7,13 (10H, m), 5,22-3,92 (7H, szer. m), 3,30 (1H, m), 2,48 (1H, szer. m), 1,85-1,13 (9H, szer. m) i 0,93-0,83 (3H, m).
Etap F: kwas 2R-[1R (albo S)-(benzyloksyformyloamino)etylo]heksanowy
N-[2R-(4S-benzylo-2-oksooksazolidyno-3-karbonylo)-1R (albo S)-metyloheksylo]-N-benzyloksyformamid (1,50 g, 3,31 mmola) rozpuszcza się w THF (25 ml) i wodzie (5 ml), po czym roztwór schładza się w łaźni lodowo-wodnej. Dodaje się roztwór nadtlenku wodoru (27% wag., 13,26 mmola), po czym natychmiast wodorotlenek litu (167 mg, 3,98 mmola). Mieszaninę pozostawia się do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza przez następne 3 godziny. Roztwór ponownie schładza się i dodaje azotyn sodu (0,92 g, 13,3 mmola). Po 10 minutach większość rozpuszczalnika usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymuje się białą pastę, którą rozdziela się pomiędzy octan etylu (25 ml) i 1M węglan sodu (30 ml). Warstwę organiczną przemywa się roztworem węglanu sodu i połączone ekstrakty wodne łączy się i przemywa octanem etylu. Warstwę wodną schładza się i zakwasza 1M kwasem solnym, po czym przemywa się dwukrotnie octanem etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemywa się solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, w wyniku czego otrzymuje się tytułowy związek w postaci zielonego oleju (839 mg, 86%).
1H-NMR; d (CDCl3, mieszanina a-diastereoizomerów i rotamerów), 8,40-7,64 (2H, szer. m), 7,48-7,27 (5H, m), 5,23-4,80 (2H, m), 4,16 (1H, szer. m), 2,79 (1H, m), 1,67-1,47 (2H, m), 1,47-1,18 (7H, m) i 0,95-0,82 (3H, m).
Etap G: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[1R (albo S)-(benzyloksyformyloamino)etylo]heksanowego
Kwas 2R-[1R (albo S)-(benzyloksyformyloamino)etylo]heksanowy (839 mg, 2,86 mmola), N,N-dimetyloamid tert-leucyny (498 mg, 3,15 mmola) i EDC (658 mg, 3,43 mmola) rozpuszcza się razem wDMF (15 ml) i dodaje katalityczną ilość HOAt (60 mg). Roztwór miesza się przez kilka dni w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostały olej rozdziela się pomiędzy octan etylu i 1M kwas solny (75 ml). Warstwę organiczną przemywa się kolejno 1M kwasem solnym, 1M węglanem sodu i solanką, suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu, przesącza i odparowuje, po czym otrzymuje się żółtą pianę (1,08g, 82%). 1H-NMR; d (CDCl3, mieszanina a-diastereoizomerów i rotamerów), 8,13 (1H, szer. m), 7,52-7,31 (5H, m), 6,28 (1H, szer. m), 5,36-4,67 (3H, szer. m), 4,09 (1H, szer. m), 3,14 (3H, s), 2,95 (1,2H, s), 2,93 (1,8H, s), 2,48 (1H, szer. m), 1,61-1,04 (9H, m), 0,99 (3,6H, s), 0,95 (5,4H, s) i 0,89-0,75 (3H, m).
Etap H: (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[1R (albo S)-(formylohydroksyamino)etylo]heksanowego (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R-[1R (albo S)-(benzyloksyformyloamino)etylo]heksanowego (200 mg, 0,46 mmola) rozpuszcza się w metanolu (15 ml) i umieszcza watmosferze argonu. Dodaje się zawiesinę 10% palladu na węglu drzewnym (20 mg) w octanie etylu i mieszaninę miesza się w atmosferze wodoru przez 3 godziny. Katalizator odsącza się, a przesącz odparowuje, po czym otrzymuje się bezbarwny olej (163 mg, ilościowo). Metodą preparatywnej HPLC rozdziela się dwa diastereoizomeryczne produkty.
Diastereoizomer A (27 mg): 1H-NMR; d (CDCl3, głównie jeden rotamer), 8,67 (0,9H, szer. s), 8,33 (0,1H, szer. s), 7,92 (1H, s), 6,74 (0,1H, szer. m), 6,54 (0,9H, d, J=9,4 Hz), 4,93 (0,9H, d, J=9,4 Hz), 4,64 (0,1H, szer. m), 3,89 (1H, q d, J=6,6, 2,6Hz), 3,16 (3H, s), 2,96 (3H, s), 2,62-2,48 (1H, m), 1,52-1,06 (6H, m), 1,35 (3H, d, J=6,6 Hz), 1,00 (9H, s) i 0,82 (3H, t, J=6,9Hz). 13C-NMR; d (CDCl3), 173,0, 171,3, 57,2, 54,4, 50,4, 38,4, 35,6, 29,9, 29,1, 26,6, 22,5, 17,2 i 13,9. LRMS: +ve jon 366 [M+Na], -vejon 342 [M-H].
Diastereoizomer B (42 mg): 1H-NMR; d (CDCl3, mieszanina rotamerów), 9,15 (0,6H, s), 8,60 (0,4H, szer. s), 8,42 (0,6H, s), 7,84 (0,4H, s), 6,83 (0,6H, d, J=9,2 Hz), 6,55 (0,4H, d, J=9,4Hz), 4,91 (0,6H, d, J=9,2 Hz), 4,89 (0,4H, d, J=9,4 Hz), 4,69 (0,6H, q d, J=7,0, 4,3Hz), 3,92 (0,4H, dq, J=9,1, 6,8Hz), 3,15 (3H, s), 2,97 (1,8H, s), 2,95 (1,2H, s), 2,59 (0,4H, td, J=9,8, 4,3 Hz), 2,39 (0,6H, td, J=7,4, 4,3 Hz), 1,92-1,07 (6H, m), 1,37 (1,2H, d, J=6,8 Hz), 1,31 (1,8H, d, J=7,0 Hz), 1,01 (5,4H, s), 0,96 (3,6H, s), 0,85 (1,8H, t, J=7,2 Hz) i 0,83 (1,2H, t, J=7,2 Hz).
13C-NMR; d (CDCl3, mieszanina rotamerów), 175,7, 173,2, 171,3, 170,7, 56,7, 55,0, 54,4, 53,2, 50,8, 49,9, 38,3, 35,7, 35,6, 35,5, 35,4, 30,3, 29,5, 29,3, 26,5, 26,4, 22,5, 22,4, 16,0, 15,4 i 13,8. LRMS: +ve jon 366 [M+Na], -vejon 342 [M-H].
PL 194 240 B1
P r zyk ł a d 70
N-cykloheksylo-2-{2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionyloamino}-3,3-dimetylobutyramid
Wyjściowe roztwory 1M amoniaku w metanolu (1 ml, 1mmol) i 1M trimetyloacetaldehydu w metanolu (1 ml, 1 mmol) miesza się we wrzącej tubie i pozostawia na 1 godzinę. Dodaje się 1M roztwór izocyjanku cykloheksylu w metanolu (1 ml, 1 mmol), po czym 0,5M kwas 2RS-[(benzyloksyformyloamino)metylo]heksanowy w metanolu (2 ml, 1 mmol). Mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez 2 dni. Rozpuszczalnik usuwa się stosując urządzenie Savant Speedvac i mieszaninę reakcyjną krystalizuje się z układu octan etylu-heksan i otrzymuje się 2-{2[(benzyloksyformyloamino)metylo]-3-fenylopropionyloamino}-N-cykloheksylo-3,3-dimetylobutyramid w postaci białego ciała stałego (93 mg, 18%), z którego usuwa się grupę zabezpieczającą na drodze katalitycznego uwodornienia z przeniesieniem fazowym (gazowy wodór, 10% pallad na węglu drzewnym, metanol-octan etylu) i otrzymuje się tytułowy związek (75 mg, 99%) w postaci białego ciała stałego. LRMS: +ve jon 440 [M+Na], 418 [M+H], -vejon 416 [M-H].
Związki z przykładów 71 do 77 wytwarza się w podobny sposób w reakcji kondensacji 4-składnikowej U-gi, jak opisano powyżej. Wszystkie produkty otrzymuje się z >85% czystością, jak stwierdzono analizą HPLC
P r zyk ł a d 71
Cykloheksyloamid kwasu 2-{2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionyloamino}-3,3heksanowego
Białe ciało stałe (90 mg). 1H-NMR; d (CD3OD), 7,82 (1H, s), 7,29-7,08 (5H, m), 4,20 (1H, d, J=5,0 Hz), 3,89 (1H, m), 3,19 (1H, m), 2,95-2,67 (2H, m), 1,88-1,58 (5H, szer. m), 1,44-1,05 (9H, szer. m) i 0,89 (9H, s). LRMS: +ve jon 468 [M+Na], 446 [M+H], -vejon 444 [M-H].
P r zyk ł a d 72
Fenylometyloamid kwasu 2-{2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionyloamino}-3,3-heksanowego
PL 194 240 B1
Białe ciało stałe (77 mg). 1H-NMR; d (CD3OD), 7,82 (1H, s), 7,35-7,11 (10H, m), 4,38-4,19 (3H, m), 3,85 (1H, m), 3,52 (1H, m), 2,97-2,63 (3H, m), 1,37-1,11 (4H, m) i 0,93-0,78 (9H, m). LRMS: +ve jon 476 [M+Na], 454 [M+H].
P rzyk ł a d 73 tert-butyloamid kwasu 2-{2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionyloamino}-3,3-heksanowego
Białe ciało stałe (47 mg). 1H-NMR; d (CD3OD), 7,82 (1H, s), 7,45 (1H, m), 7,30-7,09 (5H, m), 4,12 (1H, d, J=7,2 Hz), 3,89 (1H, m), 3,41 (1H, m), 3,15 (1H, m), 2,97-2,68 (2H, m), 1,28 (9H, s) i 0,92 (9H, s). LRMS: +ve jon 414 [M+Na], 392 [M+H], -ve jon 390 [M-H].
P rzyk ł a d 74 (1,1,3,3-tetrametylo)butyroamid kwasu 2-{2[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionyloamino}-3,3-heksanowego
Białe ciało stałe (65 mg). 1H-NMR; d (CD3OD), 7,79 (1H, s), 7,42-7,21 (1H, m), 7,20-7,10 (5H,m), 4,23(1H, d, J=9,1 Hz), 3,86 (1H, m), 3,51(1H, m), 3,23(1H, m), 3,00-2,56 (2H, m), 1,50-1,15 (12H, m) i 1,02-0,83 (18H, m). LRMS: +ve jon 498[M+Na], 476 [M+H], -ve jon 474 [M-H].
P rzyk ł a d 75
N-(cykloheksylocykloheksylokarbamoilometylo)-2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionamid
PL 194 240 B1
Białe ciało stałe (98 mg). 1H-NMR; d (CD3OD), 7,38-7,08 (5H, m), 4,01 (1H, m), 3,81 (1H, m),
3,68-3,35 (2H, m), 3,15 (1H, m), 2,98-2,65 (2H, m), 1,88-1,49 (10H, brm) i 1,45-0,83 (11 H, szer. m). LRMS: +ve jon 466 [M+Na], 444 [M+H], -ve jon 442 [M-H].
P r zyk ł a d 76
N-(cykloheksylofenylometylokarbamoilometylo)-2-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-fenylopropionamid
Białe ciało stałe (34 mg). 1H-NMR; d (CD3OD), 7,35-7,10 (10H, m), 4,44-4,23 (2H, m), 4,05 (1H, m), 3,87-3,35 (2H, m), 3,09 (1H, m), 2,85-2,72 (2H, m), 1,65-1,46 (4H, m), 1,38-0,93 (5H, szer. m) i 0,75-0,51 (2H, szer. m). LRMS: +ve jon 474 [M + Na], -ve jon 450 [M-H].
P r zyk ł a d 77
N-[cykloheksylo-(1,1,3,3-tetrametylobutylokarbamoilo)metylo]-2-[(formylohydroksyamino)metylo]3-fenylopropionamid
Białe ciało stałe (51 mg).
1H-NMR; d (CD3OD), 7,80 (1H, s), 7,36-7,10 (5H, m), 4,05 (1H, m), 3,85 (1H, m), 3,49 (1H, m),
3,15 (1H, m), 2,91 (1H, m), 2,68 (1H, m), 1,90 (1H, m), 1,80-1,48 (7H, m), 1,40-1,12 (10H, m) i 1,080,83 (10H, m). LRMS: +ve jon 496 [M+Na], 474 [M+H], -vejon 472 [M-H].
PL 194 240 B1
Przykład biologiczny A
Wykazanie przeciwbakteryjnego działania związku 1(przykład 1) i związku 2 (przykład 13) a). Minimalne stężenie hamujące (MIC) inhibitorów względem E. coli, szczep DH5a (genotyp Ff80d/acZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 deoR recA1 endA1 hsdR17 (rk -, mk+)phoA supE44λ thi-1 gyrA96 relA1) uzyskany z GibcoBRL Life Technologies, Enterobacter cloacae (American Type Culture Collection numer 13047), Klebsiella pneumoniae (American Type Culture Collection numer 13883) lub Staphylococcus capitis (American Type Culture Collection numer 35661) określono w następujący sposób. Wyjściowe roztwory testowanego związku (związki 1i 2 odpowiednio z przykładów 1i 13 (w obu przypadkach izomer A)) i zwykłych antybiotyków laboratoryjnych, karbenicyliny (Sigma, nr katalogowy C3416), kanamycyny (Sigma, nr katalogowy K4000) i chloramfenikolu (Sigma, nr katalogowyC1919) wytwarza się rozcieńczając każdy związek w dimetylosulfotlenku do stężenia 10 mM. W celu wyznaczenia minimalnego stężenia hamującego sporządza się dwie serie rozcieńczeń w pożywce 2xYT (trypton 16 g/l, ekstrakt drożdży 10 g/l, chlorek sodu 5 g/l, uzyskana z BLO 101 Inc, 1070 Joshua Way, Vista, CA92083, USA) w celu otrzymania 0,05 ml środowiska zawierającego związek na studzienkę. Posiew przygotowuje się z hodowli wzrastających przez noc na pożywce 2xYT w temperaturze 37°C. Gęstość studzienek przystosowano do absorbancji przy 660 nm (A660)=0,1;optyczna gęstość -standaryzowane preparaty rozcieńczono 1:1000 w pożywce 2xYT; w każdej studzience wysiano 0,05 ml rozcieńczonych bakterii. Płytki do mikromiareczkowania inkubowano w 37°C przez 18 godzin w nawilżanym inkubatorze. Wartość MIC (mM) zarejestrowano dla najniższego stężenia leku, przy którym został zahamowany wzrost w sposób zauważalny.
Tabela 1
MIC mM
karbenicylina chloramfenikol kanamycyna związek 1 związek 2
E. Coli DH5a 25 3,12 12,5 12,5 6,25
Staphylococcus capitis <1,56 6,25 <1,56 100 25
Enterobacter cloacae >200 25 50 50 25
Klebsiella pneumoniae 200 12,5 25 25 12,5
b) Minimalne stężenie hamujące (MIC) inhibitorów względem Mycobacterium ranae (American Type Culture Collection numer 110), Pseudomonas aeruginosa (American Type Culture Collection numer 9027), Klebsiella pneumoniae (American Type Culture Collection numer 10031), Helicobacter pylori (American Type Culture Collection numer 43504), klinicznych izolatów aminoglikozydo-i erytromycynoopornych Streptococcus pneumoniae i metycylinoopornych (MR) Staphylococcus aureus (American Type Culture Collection numer 33591) określono w następujący sposób. Wyjściowe roztwory testowanych związków 1i 2 (w obu przypadkach izomer A) i zwykłych antybiotyków laboratoryjnych, gentamycyny (G), ampicyliny (A) i erytromycyny (E) wytwarza się przez rozpuszczenie każdego związku w sulfotlenku dimetylu do stężenia 10 mg/ml. Zastosowano metody jak w punkcie a), z tym, że dla Mycobacterium ranae zastosowano środowisko pożywki Brain Heart Infasion(GIBCO) i inkubowano w 37°C przez 48 godzin, a dla Staphylococcus aureus (MR), Klebsiella pneumoniae i Pseudomonas aeruginosa zastosowano pożywkę Nutrien Broth (DIFCO) i inkubowano w 37°C przez 20 godzin, dla Helicobacter pylori zastosowano agar Columbia(OXOID) zawierający 7% krwi owcy i inkubowano w 35°C przez 72 godziny, a dla Streptococcus pneumoniae zastosowano typową pożywkę sojową (DIFCO) zawierającą 7% osocza cielęcia i inkubowano w 37°C przez 48 godzin. Wartość MIC (mg/ml) zarejestrowano dla najniższego stężenia leku, przy którym w sposób zauważalny został zahamowany wzrost.
Dodatnia próbka kontrolna nośnika (1% DMSO, brak związku testowanego) spowodowała wzrost wszystkich drobnoustrojów.
Ujemna próba ślepa (brak drobnoustrojów + związek testowany) wykazała brak wzrostu drobnoustrojów.
PL 194 240 B1
Tabel a 2
MIC mg/ml
związek 1 związek 2 antybiotyki
G A E
M. ranae 0,78 0,2 0,2 nd nd
S. aureus (MR) 3,13 1,56 0,78 nd nd
K. pneumoniae 0,2 0,1 0,39 nd nd
P. aeruginosa 12,5 12,5 0,78 100 nd
H. Pylori 0,1 0,1 0,78 0,1 nd
S. pneumoniae 50 12,5 100 3,13 100
nd= nieokreślone
W innym eksperymencie minimalne stężenie hamujące związków 1 i z przykładu 13 (związek 3) względem bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych określono stosując Metodę Mikrorozcieńczeń Pożywki zgodnie z zatwierdzoną normą National Committee for Clinical Laboratory Standards (Methods for dilution antimicrobial suspectibility tests for bacteria that grow aerobically-Fourth Edition ISBN 1-56238-309-4).
Aktywność względem bakterii Gram-dodatnich
szczep bakterii mic mg/ml
związek 3 związek 1 wankomycyna
Staphylococcus aureus ATCC 29231 MSSA 8 32 0,25
Staphylococcus aureus ATCC 25923 MSSA 16 16 0,5
Staphylococcus aureus ATCC 6538 MSSA 4 8 0,5
Staphylococcus epidermidis ATCC 1228 4 8 0,5
Staphylococcus epidermidis ATCC 27626 2 8 0,5
Enterococcus faecalis ATCC 29212 32 32 1
Enterococcus faecalis (wankomycynooporny) 8 128 >128
Micrococcus luteus ATCC 9341 0,5 0,5 0,25
Aktywność względem bakterii Gram-ujemnych
szczep bakterii MIC mg/ml
związek 3 związek 1 cyprofloksacyna
E. coli ATCC 25922 4 4 <0,125
E. coli ATCC 12014 4 4 <0,125
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 128 >128 <0,125
Enterobacter cloacae ATCC 13047 32 32 <0,125
Morganella morganii ATCC 36030 >128 128 <0,125
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 16 16 <0,125
PL 194 240 B1
Aktywności związku 3 i produktu z przykładu 14 (związek 4) względem izolatów klinicznych wieloopornych Enterococcus faecalis ocenione metodą stosowaną do uzyskania poprzednich wyników, podano w poniższej tabeli i porównano z wynikami uzyskanymi tą samą metodą dla znanych środków przeciwbakteryjnych:
Aktywność względem izolatu klinicznego wieloopornego Enterococcus faecalis:
szczep bakterii MIC mg/ml
zw3 zw4 ampi -cylina cefta- zydym imipenem erytro- mycyna cyproflo- ksacyna wanko- mycyna
Enterococcus faecalis ATCC 29212 32 8 0,5 128 1 2 0,5 1
Enterococcus faecalis szczep wankomycynooporny 8 4 >128 >128 >128 >128 >128 >128
P rzyk ł a d bi ol o gi c zn y B
i) Klonowanie genu PDF Escherichia coli
Gen PDF E. coli sklonowano w pET24a(+) (oznaczony jako pET24-PDF) i zastosowano do transformacji komórek BL21 DE3 z Novagen Inc. (Madison, Wisconsin). Klony selekcjonowano w temperaturze 37°C na płytkach z agarem YT (8 g/l trypton, 5 g/l ekstrakt z drożdży, NaCl 5 g/l, agar 15 g/l) dodatkowo uzupełnionych 30 mg/ml kanamycyny.
ii) Wyrażanie PDF ml całonocnej kultury komórek BL21 DE3 zawierających pET24-PDF zastosowano do zakażenia 500 ml pożywki 2xYT (16 g/l trypton, 10 g/l ekstrakt z drożdży, NaCl 5 g/l) zawierającej 30 mg/ml kanamycyny w 2 litrowej kolbie z przegrodą i hodowano w temperaturze 37°C wytrząsając do uzyskania OD600 0,6. Hodowlę indukowano dostosowując środowisko do stężenia 1,0 mM izopropylo-b-Dtiogalaktopiranozydu (IPTG). Indukcję prowadzono przez kolejne 3 godziny w temperaturze 37°C, komórki zebrano przez odwirowanie i osad komórek przemyto 250 ml solanki buforowanej fosforanem (PBS) i przechowywano w temperaturze -70°C.
iii) Wytworzenie rozpuszczalnej frakcji białka
Komórki z 1 litra hodowli ponownie zawieszono w12x25 ml oziębionej solanki buforowanej fosforanem. Zawiesinę komórek na lodzie poddano działaniu ultradźwięków, stosując urządzenie MSE Soniprep 150 nastawione na średnią sondę, przy amplitudzie 20-25 mikronów w pulsach 6x20 sekund. Otrzymaną zawiesinę sklarowano przez odwirowanie przy 20000xg przez 15 minut. Ciecz znad osadu poddano dalszemu oczyszczaniu w celu otrzymania enzymu.
iv) Oczyszczanie PDF
Lizat E. coli z 11 hodowli w PBS dostosowano do 2M siarczanu amonu. 15 ml kolumnę z fenylosefarozą zrównoważono za pomocą PBS/2M siarczan amonu w temperaturze 4°C. Lizat umieszczono na kolumnie i przemyto równoważącym buforem. Kolumnę eluowano zmniejszając stężenie siarczanu amonu z 2 M do 0 M przez 10 objętości kolumny. Zebrano 5 ml frakcje, które zanalizowano metodą SDS-PAGE. Frakcje zawierające głównie 20 kDA PDF zebrano razem. Połączone frakcje zatężono do objętości 5 ml stosując membranę odcinającą 3kDa. Następnie frakcję naniesiono na kolumnę Superdex 75 (chromatografia ekskluzyjna) zrównoważoną PBS. Stężoną frakcję PDF eluowano z szybkością 1 ml/min w temperaturze 4°C, zebrano frakcje po 5 ml, które zanalizowano metodą SDS-PAGE. Najczystsze frakcje połączono i przechowywano w temperaturze -70°C.
v) Test na PDF in vitro
Test przeprowadzono na pojedynczej płytce z 96 studzienkami w końcowej objętości 100 ml, zawierającej:
- 20 ml PDF (4 mg/ml)
- 20 ml 100 mM Hepes pH 7,0 + 1M KCl + 0,05% Brij
- 10 ml seryjnego rozcieńczenia związku testowanego w 20% DMSO
- 50 ml formylo-Met-Ala-Ser (8 mM)
Próbkę inkubowano w 37°C przez 30 minut. Wolne grupy aminowe zdeformylowanego (MetAla-Ser) produktu wykryto stosując fluoreskaminę, dodając:
- 50 ml 0,2M boranu pH 9,5
PL 194 240 B1
-50 ml fluoreskaminy (150 mg/ml w suchym dioksanie.
Fluorescencję zmierzono stosując czytnik płytek SLT Fluostar przy długości fali wzbudzenia 390nM i długości fali emisji 485 nM. Zwykłymi reakcjami kontrolnymi są: reakcjabez hamowania, owyniku hamowania 0 i reakcja bez enzymu i bez inhibitora traktowana jako 100% hamowania. Daneopracowano na podstawie przekształcenia jednostek fluorescencji na % hamowania, i wykreślono stężenia inhibitora w funkcji % hamowania. Dane dopasowano do sigmoidalnej funkcji y = A+((B-A)/(1+((C/x)D))), gdzie A oznacza zerowe hamowanie, B oznacza 100% hamowanie, a C oznaczaIC50.D oznacza nachylenie. Wartość IC50przedstawia stężenie inhibitora (nM) wymagane do zmniejszenia aktywności enzymu o 50%.
Związki według wynalazku hamują bakteryjną PDF in vitro. Ponadto, aktynonina (Sigma nr kat.
A-6671)również hamuje bakteryjną PDF in vitro.
Przykład biologiczny C
Wykazanie, że związek 2 hamuje PDF in vivo
1.Blokowanie reakcji transformylacji tRNAi-Met wywołuje oporność na związek 2 (diastereoizomer/izomer A)
Trimetoprim jest specyficznym inhibitorem reduktazy dihydrofolianowej, tak więc zmniejsza ilość pochodnych tetrahydrofolianowych (THF), włącznie z tetrahydrofolianem formylu (fTHF), będącym substratem formylotransferazy metionylo-tRNA (EC 2.1.2.9). Jeżeli wszystkie najważniejsze metabolity, których biosynteza wymaga pochodnych THF, na przykład pantotenian, metionina, glicyna, nukleotydy purynowe i tymidyna podawane są z zewnątrz w postaci związków prekursorowych w kompletnym środowisku zawierającym tymidynę, wówczas bakterie wzrastające w kompletnym środowisku ztymidyną (0,3 mM) i trimetoprimem (100 (mg/ml) mogą syntetyzować wszystkie składniki chemiczne normalnych komórek poza f-Met-tRNAi (Baumstark iwsp., J. Bacteriol. 129: 457-471, 1977). Stosowana w zamian nieformylowana Met-tRNAi powoduje, że tworzą się polipeptydy pozbawione grupy formylowej na N-końcu, niezależnie od działania deformylazy. Jak przewidywano, komórki DH5a hodowane w środowisku LB(trypton 10 g/l, ekstrakt z drożdży 5 g/l, NaCl 10 g/l, pH 7,5) wzbogaconym w trimetoprim i tymidynę wykazują oporność na związek 2 (diastereoizomer A). Wykazanie, że komórki, które ulegają zwykłemu procesowi formylowania na wytworzonych przez ekspresję białkach są hamowane przez związek 2A, podczas gdy nieformylowane białka, wytworzone przez komórki wyhodowane w powyższych warunkach nie są hamowane przez związek 2A dowodzi, że związek 2A zapewne działa przezhamowaniereakcji deformylacji prowadzonej przez PDF.
Tabela 3
warunki hodowli najmniejsze stężenie powodujące hamowanie mM
LB 15
LB trimetoprim (100 mg/ml), tymidyna (0,3 mM) >200
2. Traktowanie bakterii związkiem 2A prowadzi do nagromadzenia N-końcowo zablokowanych białek
Jeżeli związki według wynalazku w rzeczywistości są inhibitorami PDF in vivo, wówczas skutkiem działania na bakterie związkiem 2 (przykład 2, diastereoizomer A) będzie nagromadzenie N-formylo-metioniny na N-końcach nowo zsyntetyzowanych białek. Białka takiebędą N-końcowo zablokowane i nie będzie można ich zastosować jako substratów w N-końcowym sekwencjonowaniu metodą degradacji Edmana.
W celu przetestowania tej hipotezy pożądane białko wytwarzano przez ekspresję w obecności i w nieobecności testowanego związku. Białko wyizolowano, oczyszczono, po czym poddano sekwencjonowaniu na drodze degradacji Edmana metodami znanymi w chemii organicznej.
Komórki bakterii transformowane wektorem ekspresyjnym umożliwiającym wyrażenie ludzkiej, małej podjednostki regulacyjnej kalpainy, hodowano do OD600 0,6, po czym poddano je działaniu IPTG w celu wywołaniaekspresji heterologicznego białka w obecności 200 mM związku 2A, w obecności 240 mM karbenicyliny albo w obecności próbki kontrolnej zawierającej nośnik przez 2,5 godziny. Ekstrakty białkowe oddzielono przez SDS-PAGE, podjednostkę kalpainy wyeluowano, a sekwencję białka określono metodą degradacji Edmana stosując automatyczny sekwenser białek ABI. Badaniu
PL 194 240 B1 poddano jednakowe ilości białka. Stwierdzono, że wydajność białka traktowanego związkiem 2A była znacząco obniżona do 85% w porównaniu do próbek traktowanych nośnikiem i karbenicyliną.
Małą podjednostkę regulacyjną kalpainy sklonowano z informacyjnego RNA uzyskanego z biopsji guza żołądka, stosując zestaw izolacyjny mRNA InVitrogen Micro Fast Track™ wersja 2,2 (nrkatalogowy K1520-02). Kopię DNA z tego mRNA zsyntetyzowano stosując układ syntetyzujący cDNA Promega Riboclone™ M-MLV-RT(H-), Notl (Promega, nr katalogowy C1660) zgodnie z instrukcją producenta. Dwa startery oligonukleotydowe do stosowania w reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) zostały zsyntetyzowane przez Applied Biosystems Inc., Custom Services, na podstawie opublikowanej sekwencji małej podjednostki kalpainy (EMBL Accession number X04106).
Następnie fragment kalpainy Hindlll/XhoI wklonowano do wektora ekspresyjnego pET24d(+) z Novagen Inc, Madison, W1, USA, trawionego HindIII i XhoI, stosując zwykłe procedury. Do transformacji kompetentnych komórek DH5a (Life Technologies, Inc, Grand Island, NY, USA, nr katalogowy 18265-017) zastosowano mieszaninę do ligacji. Kolonie selekcjonowano po hodowaniu przez noc w temperaturze 37°C na płytkach YT z zawartością 30 mg/ml kanamycyny. DNA plazmidowy wytworzono stosując zestaw Promega Plus SV miniprep, a klony z wstawką kalpainy zidentyfikowano zwykłymi metodami. Sekwencję DNA potwierdzono stosując sekwencjonowanie cykliczne w urządzeniu PE Applied Biosystem, tak jak opisano powyżej.
Gen E. coli sklonowany w pET24d(+) (oznaczony jako pET24-PDF) zastosowano do transformowania komórek BL21 DE3 z Novagen Inc, (Madison Wisconsin). Klony selekcjonowano w 37°C na płytkach z agarem YT 8 g/l trypton, 5 g/l ekstrakt drożdży, NaCl 5 g/l, agar 15 g/l) wzbogaconym 30 mg/ml kanamycyny.

Claims (2)

  1. w których
    R2 oznacza n-butyl, benzyl lub cyklopentylometyl,
    R4 oznacza tert-butyl, izobutyl, benzyl lub metyl,
    R5 oznacza atom wodoru lub metyl, a R6 oznacza metyl, lub
    R5 i R6, razem z atomem azotu, do którego są przyłączone, tworzą ewentualnie podstawiony nasycony pierścieńheterocykliczny o 3 do 8 atomach węgla, albo jej farmaceutycznie lub weterynaryjnie dopuszczalnychsoli, do wytwarzania kompozycji przeciwbakteryjnej.
  2. 2. Pochodna amidowa N-formylohydroksyloaminy, którą jest (1S-dimetylokarbamoilo-2,2-dimetylopropylo)amid kwasu 2R (albo S)-[(formylohydroksyamino)metylo]-3-cyklopentylopropionowego, i jej farmaceutycznie lub weterynaryjnie dopuszczalne sole.
PL99342296A 1998-02-07 1999-02-05 Zastosowanie pochodnych N-formylohydroksyloaminy i amidowa pochodna N-formylohydroksyloaminy PL194240B1 (pl)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9802549.7A GB9802549D0 (en) 1998-02-07 1998-02-07 Antibacterial agents
GBGB9806300.1A GB9806300D0 (en) 1998-03-24 1998-03-24 Antibacterial agents
GBGB9810463.1A GB9810463D0 (en) 1998-05-16 1998-05-16 Antibacterial agents
GBGB9828318.7A GB9828318D0 (en) 1998-12-22 1998-12-22 Antibacterial agents
PCT/GB1999/000386 WO1999039704A1 (en) 1998-02-07 1999-02-05 Antibacterial agents

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL342296A1 PL342296A1 (en) 2001-06-04
PL194240B1 true PL194240B1 (pl) 2007-05-31

Family

ID=27451747

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL99342296A PL194240B1 (pl) 1998-02-07 1999-02-05 Zastosowanie pochodnych N-formylohydroksyloaminy i amidowa pochodna N-formylohydroksyloaminy

Country Status (21)

Country Link
US (4) US6423690B1 (pl)
EP (1) EP1052984B1 (pl)
JP (1) JP2002502815A (pl)
KR (1) KR100600518B1 (pl)
CN (1) CN1298299A (pl)
AT (1) ATE266394T1 (pl)
AU (1) AU749699B2 (pl)
BR (1) BR9907689A (pl)
CA (1) CA2320476A1 (pl)
DE (1) DE69917221T2 (pl)
DK (1) DK1052984T3 (pl)
ES (1) ES2221359T3 (pl)
GB (1) GB2349884A (pl)
HU (1) HUP0102901A3 (pl)
IL (1) IL137312A (pl)
NO (1) NO20003969L (pl)
NZ (1) NZ505675A (pl)
PL (1) PL194240B1 (pl)
PT (1) PT1052984E (pl)
TR (1) TR200002311T2 (pl)
WO (1) WO1999039704A1 (pl)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999039704A1 (en) * 1998-02-07 1999-08-12 British Biotech Pharmaceuticals Limited Antibacterial agents
GB9810464D0 (en) * 1998-05-16 1998-07-15 British Biotech Pharm Hydroxamic acid derivatives
GB9907055D0 (en) 1999-03-29 1999-05-19 British Biotech Pharm Antibacterial agents
EP1169031A1 (en) 1999-04-09 2002-01-09 British Biotech Pharmaceuticals Limited Antimicrobial agents
DE69924887T2 (de) * 1999-08-10 2006-03-09 Vernalis (Oxford) Ltd., Abington Antibakterielle mittel
MXPA02001394A (es) * 1999-08-10 2002-08-12 British Biotech Pharm Agentes antibacterianos.
JP4576649B2 (ja) * 1999-10-29 2010-11-10 東ソー株式会社 新規オキサゾリジノン誘導体及びその用途
CA2393825A1 (en) * 1999-12-17 2001-06-21 Versicor, Inc. Novel succinate compounds, compositions and methods of use and preparation
AR029916A1 (es) * 2000-05-05 2003-07-23 Smithkline Beecham Corp N-formil-n-hidroxi-ariloxi alquilaminas y metodos para tratar infecciones bacterianas
AR028075A1 (es) * 2000-05-05 2003-04-23 Smithkline Beecham Corp Inhibidores de la peptido-desformilasa
AU2002230385A1 (en) * 2000-09-25 2002-04-15 Questcor Pharmaceuticals, Inc. Peptide deformylase inhibitors
DE60111768T2 (de) 2000-11-23 2006-04-27 Vernalis (Oxford) Ltd., Abington N-formyl hydroxylamine derivate als inhibitoren der bakteriellen polypeptid deformylase zur behandlung von mikrobiellen infektionen
EP1363612A4 (en) * 2001-03-01 2006-01-18 Smithkline Beecham Corp PEPTIDE deformylase INHIBITORS
JP4220377B2 (ja) * 2001-04-05 2009-02-04 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ペプチドデホルミラーゼ阻害物質
US7018642B2 (en) 2001-04-27 2006-03-28 The Procter & Gamble Company Compounds, compositions, and methods for controlling biofilms
MXPA03010328A (es) * 2001-05-11 2004-02-17 Guilford Pharm Inc Acidos hidroxinamicos y acil hidroxaminasas como inhibidores de naaladasa.
US6852882B2 (en) * 2001-06-05 2005-02-08 Smithkline Beecham Corporation Peptide deformylase inhibitors
WO2002102791A1 (en) 2001-06-15 2002-12-27 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Pyrrolidine bicyclic compounds
AR036053A1 (es) * 2001-06-15 2004-08-04 Versicor Inc Compuestos de n-formil-hidroxilamina, un proceso para su preparacion y composiciones farmaceuticas
GB0128943D0 (en) * 2001-12-04 2002-01-23 Novo Pharmaceuticals De Ltd Bacterial enzyme inhibitors
GB0208579D0 (en) * 2002-04-13 2002-05-22 British Biotech Pharm Antibacterial agents
UY27813A1 (es) * 2002-05-31 2003-12-31 Smithkline Beecham Corp Inhibidores de la peptido-desformilasa
AU2003257637A1 (en) * 2002-08-23 2004-03-11 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. Proline derivatives
MXPA05003089A (es) * 2002-09-19 2005-05-27 Novartis Ag Proceso para preparar intermediarios.
US7442793B2 (en) 2002-12-11 2008-10-28 Smithkline Beecham Corporation Peptide deformylase inhibitors
KR101145252B1 (ko) 2003-01-08 2012-05-24 유니버시티 오브 워싱톤 항균제
AU2004216178B2 (en) * 2003-02-21 2008-07-03 Novartis Ag Chemical process for the preparation of intermediates to obtain N-formyl hydroxylamine compounds
KR100527361B1 (ko) * 2003-04-01 2005-11-09 주식회사 프로메디텍 데포르밀라제 저해제, 이의 제조방법, 및 이를 포함하는조성물
TW200427458A (en) * 2003-04-02 2004-12-16 Novartis Ag Crystalline N-formyl hydroxylamine compounds
CA2526753A1 (en) * 2003-05-29 2004-12-23 Inhibitex, Inc. Sdr proteins from staphylococcus capitis and their use in preventing and treating infections
WO2005000835A1 (en) * 2003-06-26 2005-01-06 Novartis Ag Process for preparing intermediates useful to prepare certain antibacterial n-formyl hydroxylamines
KR100750328B1 (ko) * 2004-12-18 2007-08-20 한국생명공학연구원 곰팡이 Ｂｉｏｎｅｃｔｒａ ｂｙｓｓｉｃｏｌａ Ｆ120생산하는 새로운 펩타이드 디포밀레이즈 저해 물질과 그항균활성
KR100648133B1 (ko) * 2005-04-25 2006-11-23 일동제약주식회사 펩티드 데포르밀라제 저해제로서 신규의 히드록사믹 산유도체 및 그 제조방법
GT200600196A (es) 2005-05-23 2007-01-15 Compuestos n-formil de hidroxilamina
AU2006316552B2 (en) 2005-11-24 2012-06-07 Merck Serono Sa N-hydroxyamide derivatives and use thereof
WO2007067904A2 (en) * 2005-12-06 2007-06-14 Smithkline Beecham Corporation Peptide deformylase inhibitors
KR100878446B1 (ko) * 2007-06-07 2009-01-13 일동제약주식회사 신규 펩티드 데포르밀라제 저해제 화합물 및 그 제조방법
EP2662353A3 (en) 2007-06-12 2014-04-02 Achaogen, Inc. Antibacterial agents
CN101434570B (zh) * 2007-11-16 2011-02-02 上海医药工业研究院 吡咯烷衍生物及其制备方法和应用
PL3075401T3 (pl) 2007-11-29 2024-08-19 Inolex Investment Corporation Środek konserwujący dla kompozycji kosmetycznych, toaletowych i farmaceutycznych
WO2009105140A2 (en) 2007-12-11 2009-08-27 Viamet Pharmaceuticals, Inc. Metalloenzyme inhibitors using metal binding moieties in combination with targeting moieties
CA2735929C (en) * 2008-09-19 2013-12-17 Pfizer Inc. Hydroxamic acid derivatives useful as antibacterial agents
EP2512474B1 (en) 2009-12-16 2014-11-05 Pfizer Inc N-linked hydroxamic acid derivatives useful as antibacterial agents
CN102452998B (zh) * 2010-10-20 2014-12-10 天津药物研究院 N-甲酰羟胺类化合物及其制备方法和用途
ES2626457T3 (es) 2011-03-07 2017-07-25 Pfizer Inc. Derivados de fluoro-piridinona útiles como agentes antibacterianos
SG193458A1 (en) 2011-04-08 2013-10-30 Pfizer Imidazole, pyrazole, and triazole derivatives useful as antibacterial agents
KR20130140868A (ko) 2011-04-08 2013-12-24 화이자 인코포레이티드 항세균제로서 유용한 이속사졸 유도체
WO2013170165A1 (en) 2012-05-10 2013-11-14 Achaogen, Inc. Antibacterial agents
FR3098217B1 (fr) * 2019-07-05 2023-04-21 Pharmaleads N-Formylhydroxylamines en tant qu’inhibiteurs mixtes de l’aminopeptidase N (APN) et de la néprilysine (NEP)

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3166587A (en) 1963-07-29 1965-01-19 Olin Mathieson Alkanoyl, hydroxy-ureas
US3692787A (en) * 1970-02-16 1972-09-19 Burroughs Wellcome Co Substituted 2,4-diamino-5-benzyl pyrimidines
FR2518088B1 (fr) 1981-12-16 1987-11-27 Roques Bernard Nouveaux derives d'aminoacides, et leur application therapeutique
DE3320175A1 (de) * 1983-06-03 1984-12-06 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Aminosaeure- bzw. peptidderivate, verfahren zu deren herstellung und verwendung als arzneimittel
DK77487A (da) * 1986-03-11 1987-09-12 Hoffmann La Roche Hydroxylaminderivater
AU645515B2 (en) * 1989-08-01 1994-01-20 Rockefeller University, The Methods and compositions for ameliorating the symptoms of sepsis
GB9220845D0 (en) * 1992-10-03 1992-11-18 British Bio Technology Vasoactive peptide inhibition
GB9223904D0 (en) * 1992-11-13 1993-01-06 British Bio Technology Inhibition of cytokine production
US6037472A (en) * 1993-11-04 2000-03-14 Syntex (U.S.A.) Inc. Matrix metalloprotease inhibitors
WO1995032944A1 (en) * 1994-05-28 1995-12-07 British Biotech Pharmaceuticals Limited Succinyl hydroxamic acid, n-formyl-n-hydroxy amino carboxylic acid and succinic acid amide derivatives as metalloprotease inhibitors
WO1997038705A1 (en) * 1996-04-12 1997-10-23 Bristol-Myers Squibb Company N-formyl hydroxylamine containing compounds useful as ace inhibitors and/or nep inhibitors
EP0863152A3 (en) * 1997-02-10 2000-04-19 Smithkline Beecham Corporation Streptococcus pneumoniae Def1 protein
EP1019386A1 (en) 1997-02-26 2000-07-19 Glaxo Group Limited Reverse hydroxamate derivatives as metalloprotease inhibitors
US6586578B1 (en) * 1997-05-21 2003-07-01 Smithkline Beecham Corporation Defl
US5962666A (en) * 1997-09-16 1999-10-05 Smithkline Beecham Corporation Deformylase
WO1999039704A1 (en) * 1998-02-07 1999-08-12 British Biotech Pharmaceuticals Limited Antibacterial agents
GB9810464D0 (en) * 1998-05-16 1998-07-15 British Biotech Pharm Hydroxamic acid derivatives
DE69924887T2 (de) * 1999-08-10 2006-03-09 Vernalis (Oxford) Ltd., Abington Antibakterielle mittel

Also Published As

Publication number Publication date
IL137312A0 (en) 2001-07-24
CA2320476A1 (en) 1999-08-12
GB2349884A8 (en) 2000-11-20
EP1052984A1 (en) 2000-11-22
ES2221359T3 (es) 2004-12-16
GB2349884A (en) 2000-11-15
US20020165167A1 (en) 2002-11-07
HUP0102901A2 (hu) 2001-12-28
DE69917221T2 (de) 2005-05-04
US20050014702A1 (en) 2005-01-20
EP1052984B1 (en) 2004-05-12
WO1999039704A1 (en) 1999-08-12
NO20003969L (no) 2000-09-28
DE69917221D1 (de) 2004-06-17
GB0016855D0 (en) 2000-08-30
PT1052984E (pt) 2004-09-30
US6423690B1 (en) 2002-07-23
TR200002311T2 (tr) 2000-11-21
ATE266394T1 (de) 2004-05-15
AU749699B2 (en) 2002-07-04
AU2529299A (en) 1999-08-23
HUP0102901A3 (en) 2002-12-28
US7323448B2 (en) 2008-01-29
IL137312A (en) 2005-12-18
BR9907689A (pt) 2000-11-14
CN1298299A (zh) 2001-06-06
DK1052984T3 (da) 2004-09-20
PL342296A1 (en) 2001-06-04
KR100600518B1 (ko) 2006-07-13
KR20010040621A (ko) 2001-05-15
NZ505675A (en) 2002-11-26
NO20003969D0 (no) 2000-08-04
JP2002502815A (ja) 2002-01-29
US7148198B2 (en) 2006-12-12
US20060276409A1 (en) 2006-12-07
WO1999039704A8 (en) 2001-03-08
US6787522B2 (en) 2004-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL194240B1 (pl) Zastosowanie pochodnych N-formylohydroksyloaminy i amidowa pochodna N-formylohydroksyloaminy
AU2006251768B2 (en) Compounds, pharmaceutical compositions and methods for their use in treating metabolic disorders
UA121225C2 (uk) СПОЛУКИ ІЗОКСАЗОЛГІДРОКСАМОВОЇ КИСЛОТИ ЯК ІНГІБІТОРИ LpxC
AU2004277981A1 (en) Benzylether and benzylamino beta-secretase inhibitors for the treatment of Alzheimer&#39;s disease
KR20140023869A (ko) 하이드록삼산 유도체 및 세균 감염 치료에서의 이들의 사용
WO2014165075A1 (en) Antibacterial agents
WO2014160649A1 (en) Hydroxamic acid derivatives as lpxc inhibitors for the treatment of bacterial infections
CA2322838A1 (en) Thiadiazole compounds useful as inhibitors of cysteine activity dependent enzymes
MXPA04011767A (es) COMPUESTOS UTILES EN EL TRATAMIENTO DE áNTRAX E INHIBIDORES DEL FACTOR LETAL.
WO2015066413A1 (en) Oxazolidinone hydroxamic acid compounds for the treatment of bacterial infections
WO2001038561A1 (en) Methods of use of peptide deformylase inhibitors as novel antibacterial agents
EP1210330B1 (en) Antibacterial agents
JP4313678B2 (ja) ヒドロキサム酸誘導体およびそれを有効成分とするｍｍｐ阻害剤
Tamaki et al. MATLYSTATINS, NEW INHIBITORS OF TYPE IV COLLAGENASES FROM Actinomadura atramentaria IV. SYNTHESIS AND STRUCTURE-ACTIVITY RELATIONSHIPS OF MATLYSTATIN B AND ITS STEREOISOMERS
AU2002300119B2 (en) Antibacterial agents
RU2246941C2 (ru) Антибактериальные агенты
JPH11147873A (ja) 新規スルホンアミド誘導体及び医薬
Rodríguez-Alvarado et al. Design, organocatalytic synthesis, and bioactivity evaluation of enantiopure fluorinated LpxC inhibitors
RU2700924C2 (ru) N-сульфонилгомосеринлактоновые производные, способы их получения и применения
TWI788325B (zh) 作為Ｋｖ７鉀通道開放劑的醇衍生物
UA123790C2 (uk) Кристалічна форма (r)-4-(5-(циклопропілетиніл)ізоксазол-3-іл)-n-гідрокси-2-метил-2-(метилсульфоніл)бутанаміду як антибактеріального агента
CZ20002889A3 (cs) Sloučeniny s antibakteriálními účinky
KR100774728B1 (ko) 펩티드 데포르밀라제 저해제로서 신규의 엔-포르밀히드록실아민 유도체 및 그 제조방법
MXPA00007709A (en) Antibacterial agents
NZ521033A (en) N-alkylamide substituted hydroxamic acid derivatives useful as antibacterial agents