PL189091B1 - Sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, zastosowanie tTG sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów i doustny środek farmaceutyczny - Google Patents
Sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, zastosowanie tTG sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów i doustny środek farmaceutycznyInfo
- Publication number
- PL189091B1 PL189091B1 PL97331203A PL33120397A PL189091B1 PL 189091 B1 PL189091 B1 PL 189091B1 PL 97331203 A PL97331203 A PL 97331203A PL 33120397 A PL33120397 A PL 33120397A PL 189091 B1 PL189091 B1 PL 189091B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ttg
- sprue
- treatment
- antibodies
- celiac disease
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 title claims abstract description 26
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 6
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims abstract description 94
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 31
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 28
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 16
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 14
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 10
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 235000006171 gluten free diet Nutrition 0.000 description 8
- 235000020884 gluten-free diet Nutrition 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 6
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 6
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 5
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 4
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 101000666171 Homo sapiens Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 3
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 3
- BQCIDUSAKPWEOX-UHFFFAOYSA-N 1,1-Difluoroethene Chemical compound FC(F)=C BQCIDUSAKPWEOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 2
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007924 IgA Deficiency Diseases 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 description 2
- 206010039915 Selective IgA immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 201000007156 immunoglobulin alpha deficiency Diseases 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 229920000131 polyvinylidene Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 2
- 208000029138 selective IgA deficiency disease Diseases 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- OEANUJAFZLQYOD-CXAZCLJRSA-N (2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5r,6r)-5-acetamido-3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methoxyoxan-4-yl]oxy-4,5-dihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](OC)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC)[C@H](C(O)=O)O1 OEANUJAFZLQYOD-CXAZCLJRSA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol monoethoxylate Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCO)C=C1 JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGZLYKUHYXFIIO-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-2h-tetrazole Chemical compound [O-][N+](=O)C=1N=NNN=1 ZGZLYKUHYXFIIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012468 Dermatitis herpetiformis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010062713 Haemorrhagic diathesis Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000009890 Osteonectin Human genes 0.000 description 1
- 108010077077 Osteonectin Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102100026918 Phospholipase A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N Putrescine Natural products NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000024799 Thyroid disease Diseases 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 235000010716 Vigna mungo Nutrition 0.000 description 1
- 240000001417 Vigna umbellata Species 0.000 description 1
- 235000011453 Vigna umbellata Nutrition 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- GNNALEGJVYVIIH-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydrochloride Chemical compound Cl.NC1=CC=CC=C1N GNNALEGJVYVIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005392 carboxamide group Chemical group NC(=O)* 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N cystine group Chemical group C([C@@H](C(=O)O)N)SSC[C@@H](C(=O)O)N LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 108010003914 endoproteinase Asp-N Proteins 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001466 metabolic labeling Methods 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021510 thyroid gland disease Diseases 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/104—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12N9/1044—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
Abstract
1. Sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, znamienny tym, ze wykrywa sie przeciwciala przeciw transglutaminazie tkankowej (tTG) z plynów ustrojo- wych za pomoca reakcji immunologicznej z transglutaminaza tkankow a (tTG) sekwencjami immunoreaktywnymi lub ich analogami przy czym reakcje im m unologiczna prowadzi sie w wykluczeniem skrawków tkanek zwierzecych lub ludzkich. 7. Zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów do diagnozo- wania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, z wykluczeniem skrawków tkanek zwierze- cych lub ludzkich. 8 . Doustny srodek farmaceutyczny przeznaczony do leczenia sprue lub celiakii zawie- rajacy czynnik aktywny oraz farmaceutycznie dopuszczalne substancje pomocnicze, zna- mienny tym, ze jako czynnik aktywny zawiera tTG, sekwencje immunoreaktywne lub ich analogi oraz, ewentualnie, farmaceutycznie dozwolone substancje pomocnicze. 9. Zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów do wytwarza- nia doustnych srodków farmaceutycznych do leczenia sprue lub celiakii. PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów i doustny środek farmaceutyczny.
Szczegółowo wynalazek dotyczy detekcji przeciwciał z płynów ustrojowych za pomocą reakcji immunologicznej z transglutaminazą tkankową (tTG), jej strukturami antygenowmi, sekwencjami immunoreaktywnymi lub analogami, jak również związkami zawierającymi tTG, ich strukturami antygenowymi, sekwencjami immunoreaktywnymi lub analogami. Sposobu tego można użyć w diagnozowaniu i kontroli leczenia tych chorób, które związane są z reakcją odpornościową na tTG, środki zawierające tTQ ich struktury antygenowe, sekwencje immunoreaktywne lub analogi.
Zgodnie z tym, przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie tTG i wspomnianych substancji w diagnostyce i kontroli leczenia, korzystnie w diagnostyce i kontroli leczenia chorób połączonych z przewlekłym stanem zapalnym lub chorób autoimmunizacyjnych, a szczególnie korzystnie w diagnostyce i kontroli leczenia sprue lub celiakii.
Przedmiotem wynalazku jest także doustny środek farmaceutyczny, który zawiera tTG, związki zawierające tTG, ich struktury antygenowe, ich sekwencje immunoreaktywne lub ich analogi jako substancję aktywną i którego można uzyć do leczenia chorób związanych z reak189 091 cją odpornościową na te substancje, ponieważ dzięki doustnemu podaniu wspomnianych związków uzyskuje się tolerancję immunologiczną.
Wynalazek niniejszy oparty jest na spostrzeżeniu, że transglutaminaza tkankowa (tTG, EC 2.3.2.13) jest autoantygenem sprue lub celiakii, co dało twórcom wynalazku opracowanie metody detekcji przeciwciał przeciw tTG i związkom zawierającym tTG.
Zatem, przedmiotem wynalazku jest sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, polegający na tym, że wykrywa się przeciwciała przeciw transglutaminazie tkankowej (tTG) z płynów ustrojowych za pomocą reakcji immunologicznej z transglutaminazą tkankową (tTG), sekwencjami immunoreaktywnymi lub ich analogami, przy czym reakcję immunologiczną prowadzi się w wykluczeniem skrawków tkanek zwierzęcych lub ludzkich.
Korzystnie wykrywaniu poddaje się ludzkie przeciwciało IgA i/lub IgG. Rónież korzystnie tGT jest pochodzenia ludzkiego, zwierzęcego, syntetycznego lub rekombinantowego.
W bardziej korzystnym wykonaniu sposobu według wynalazku detekcję przeprowadza się z zastosowaniem znanego testu immunologicznego, korzystnie z bezpośrednim lub pośrednim sprzęganiem partnerów reakcji z dobrze wykrywalną substancją znakującą.
Najbardziej korzystnie w sposobie według wynalazku wykrywanie przeprowadza się w fazie stałej. Wykrywanie przeprowadza się korzystnie z zastosowaniem techniki ELISA, RIA lub testu immunfluorescencyjnego.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów do diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, z wykluczeniem skrawków tkanek zwierzęcych lub ludzkich.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest doustny środek farmaceutyczny przeznaczony do leczenia sprue lub celiakii zawierający czynnik aktywny oraz farmaceutycznie dopuszczalne substancje pomocnicze, charakteryzujący się tym, że jako czynnik aktywny zawiera tTG, sekwencje immunoreaktywne lub ich analogi oraz, ewentualnie, farmaceutycznie dozwolone substancje pomocnicze.
Następnym przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów do wytwarzania doustnych środków farmaceutycznych do leczenia sprue lub celiakii.
Celiakia jest chorobą błony śluzowej jelita cienkiego, przy czym pierwsze jej objawy występują przeważnie w późnym okresie wieku niemowlęcego i wieku przedszkolnym. Gdy odpowiedni obraz kliniczny choroby wytępuje dopiero u osób dorosłych, wtedy określa się go jako sprue rodzimą. Oba te pojęcia oznaczają zatem tę samą chorobę. Sprue towarzyszą zapalne zmiany błony śluzowej i spowodowane tym uogólnione złe wchłanianie. Sprue reaguje najczęściej morfologicznie i klinicznie na leczenie dietą bezglutenową.
Jako czynniki powodujące rozwój choroby rozpoznano gluteny pszenicy, jęczmienia, żyta i częściowo owsa, podczas gdy gluteny pochodzące z roślin o dalszym pokrewieństwie filogenetycznym, takich jak kukurydza, ryż i soja nie są w tym przypadku czynnikami chorobotwórczymi. Spośród glutenów, rolę czynnika chorobotwórczego przypisuje się rozpuszczalnym w alkoholach prolaminom, a zwłaszcza a-gliadynie.
Sprue występuje więc przede wszystkim w tych krajach, w których ważnym źródłem pożywienia jest pszenica (Europa, USA, Australia). Częstość występowania tej choroby wynosi: w Danii 0,14 na 1000 noworodków i, odpowiednio, w Hiszpanii 0,7/1000, we Włoszech 1/1000, w Niemczech 0,45/1000 i w Szwecji 2,42/1000.
Jednakże, nowsze badania wykazują, że podkliniczny przejaw choroby, to znaczy morfologiczna zmiana błony śluzowej bez poważnych objawów, występuje o wiele częściej niż dotychczas przypuszczano. I tak, na przykład badania przeprowadzone w tym zakresie we Włoszech w roku 1994 wykazały częstość występowania choroby wynoszącą 3,28 na 1000 dzieci w wieku szkolnym. Ryzyko sprue utajonej u krewnych pierwszego stopnia pacjentów chorych na sprue wynosi prawie 50%.
Towarzysząc przeważnie utajonej sprue występuje w pełni rozwinięte opryszczkowate zapalenie skóry (dermatitis herpetiformis), w przypadku którego obserwuje się obecność charakterystycznych podnaskórkowych pęcherzyków z ziarnistymi złogami IgA w wierzchołkach brodawek skóry. Biopsje jelita cieńkiego wykazują nieregularnie, bardziej lub mniej silnie uszkodzoną błonę śluzową.
189 091
Obserwuje się występowanie dalszego ustalonego związku między sprue a cukrzycą insulinozależną, schorzeniami tarczycy jak również selektywnym niedoborem IgA.
Obok licznych klinicznych działań ubocznych występujących w przypadku sprue, takich jak na przykład niedokrwistość, którą między innymi przypisuje się złemu wchłanianiu witaminy B12 i brakowi witaminy K, czym należy tłumaczyć zwiększoną skłonność do krwawień, szczególną rolę odgrywa tu silnie podwyższone ryzyko utworzenia się w przewodzie żołądkowo-jelitowym złośliwego guza. U prawie 15% chorych na sprue, najczęściej w wieku powyżej 50 lat, dochodzi do rozwoju schorzeń na tle nowotworowym, z czego około 50% są to chłoniaki jelit z rozplemem limfocytów T, a dalsze 25% są to guzy przełyku, części ustnej gardła i jelita cienkiego.
Leczenie sprue polega na ścisłym przestrzeganiu, przez całe życie, diety bezglutenowej, z tym, że wykluczone być muszą nie tylko zawierające gluten produkty z pszenicy, ale także produkty wytworzone z żyta, jęczmienia i owsa. Oznacza to dla chorych ograniczenia obciążające tak pod względem przyzwyczajeń kulinarnych, jak i z punktu widzenia uwarunkowań społecznych.
Gdy tylko sprue zostaje na podstawie prawidłowej diagnozy leczona we właściwym czasie, wtedy prognoza stanu chorego jest dobra. Jednakże, zaistniałych komplikacji często nie da się całkowicie odwrócić. Natomiast, gdy choroba nie zostanie rozpoznana i leczona, wtedy może dojść, w wyniku złego wchłaniania, do zaistnienia poważnych objawów chorobowych. W końcu, powstaje podwyższone ryzyko rozwinięcia się chłoniaka jelit, jak również innych nowotworów przewodu żołądkowo-jelitowego.
Dla diagnostyki sprue i kontroli jej przebiegu w warunkach diety bezglutenowej „złotą walutę” stanowi obecnie biopsja jelita cienkiego. Jednakże, coraz bardziej zyskują na znaczeniu także inne, ale tym razem nieinwazyjne sposoby diagnozowania, oparte na markerach immunologicznych. Ponieważ w surowicach chorych na sprue występują przeciwciała klasy IgA i IgG które z jednej strony skierowane są przeciw gliadynie, a z drugiej przeciw autoantygenowi śródmięsnej (szczególnej postaci tkanki łącznej), która zawiera między innymi kolagen I, kolagen III i kolagen IV, włókna sprężyste, białka niekolagenowe, takie jak na przykład fibronektyna i proteoglikan, surowice te można poddać testom przeprowadzonym techniką ELISA na obecność przeciwciał IgG i IgA przeciw gliadynie, a także opartym na immunofluorescencji pośredniej badaniom na obecność przeciwciał IgG i IgA przeciw śródmięsnej. Podczas gdy przeciwciała przeciw gliadynie nie są w wystarczającym stopniu swoiste względem sprue, to jeśli chodzi o aktywność przeciwciał IgA przeciw śródmięsnej doniesiono o wysokiej ich czułości i swoistości (97-100%). Jednakże dla przeprowadzenia badania metodą immunofluorescencji potrzebne są wycinki przełyku naczelnych. Obecnie przeprowadza się doświadczenia nad wykrywaniem przeciwciał przeciw śródmięsnej na materiale pępowinowym.
W przypadku dokonania diagnozy we właściwym czasie i przy konsekwentym przestrzeganiu diety bezglutenowej, omawiane schorzenie może utrzymywać się w stanie remisji, dzięki czemu ulega zmniejszeniu do normalnego poziomu podwyższone ryzyko utworzenia się guza złośliwego u chorego. Toteż, rzeczą o wielkiej doniosłości jest opracowanie odpowiedniego testu na sprue. Ponieważ krąg osób cierpiących na utajoną sprue również należy do grupy ryzyka, wszystkie osoby brane w tym przypadku pod uwagę (a przede wszystkim krewni pierwszego stopnia), w ostateczności wszystkie dzieci w wieku szkolnym, tak jak się to rozważa we Włoszech, powinny być objęte badaniami z zastosowaniem czułego, swoistego, łatwego w wykonaniu i taniego testu.
Jednakże program badania skriningowego w dużej skali rozbija się o następuje problemy:
- inwazyjne biopsje jelita cienkiego u osób nie wykazujących objawów wykonywane są w sposób nieprzewidywany i wymagający zbyt dużych nakładów,
- detekcja techniką ELISA obecności przeciwciał przeciw gliadynie ma niewielką przydatność z powodu małej swoistości,
- detekcja przeciwciał klasy IgA przeciw śródmięsnej metodą immunofluorescencyjną opartą na wykorzystaniu przełyku naczelnych jest zbyt kosztowna jak na metodę skriningu w skali masowej. Poza tym, ocena kliniczna jest w tym przypadku subiektywna i nie umożliwia wychwycenia chorych na sprue z niedoborem IgA (2% ogółu chorych).
189 091
Tak więc, jak dotychczas nie istnieje żaden test dający się wykonać w sposób nieinwazyjny, swoisty, ilościowy, szybki, łatwy i niedrogi, który umożliwiałby detekcję i kontrolowanie leczenia sprue/celiakii.
Problem ten rozwiązany został przez niniejszy wynalazek. W oparciu o niespodziewane rozpoznanie, że transglutaminaza tkankowa (tTG. EC 2.3.2.13) jest autoantygenem sprue opracowano sposób immunodetekcji przeciwciał przeciw tTG i związkom zawierającym tTG z płynów ustrojowych, zwłaszcza z surowicy, zgodnie z zastrzeżeniami 1-6, dzięki czemu stało się możliwe diagnozowanie nie tylko sprue lub celiaklii, ale także tych wszystkich chorób, które związane są w reakcją odpornościową na tTG, związki zawierające tTG ich struktury antygenowe, immunoreaktywne sekwencje lub analogi.
Transglutaminaza tkankowa należy do grupy transglutaminaz. Transglutaminazy (TGn) (EC 2.3.2.13) są enzymami katalizującymi zależnie od C2+ przeniesienie grupy acylowej, przy czym jako donory grup acylowych działają grupy karboksyamidowe związanych z peptydem reszt glutaminowych. Jako akceptory grup acylowych służą pierwotnie związane z białkiem reszty lizynowe, tak więc transfer ten prowadzi do powstania wiązania lizyny typu G-ty-glutamyl-). Specyficzność substratowa TGn w odniesieniu do donorów grup acylowych jest bardzo wysoka (zależność od sekwencji aminokwasów), podczas gdy do dyspozycji stoi nadzwyczaj szerokie spektrum akceptorów. Powstałe tak kowalencyjne wiązania peptydowe są bardzo stabilne i odporne na działanie proteaz, z czego wynika bardzo duża odporność usieciowanych białek na wpływy chemiczne, enzymatyczne lub fizyczne.
Z szeroko rozpowszechnionym występowaniem różnych TGn w rozmaitych narządach, tkankach, osoczu i śródmiąższowych płynach ustrojowych koreluje także występowanie modyfikowanych przez transglutaminazę białek w skrzepach krwi, na błonach komórkowych, w warstwie zrogowacialej naskórka, we włosach, paznokciach i w macierzy pozakomórkowej. [C. S. Greenberg i wsp., FASEB J„ 5, 3071-3077 (1991)].
Opisane transglutaminazy można rozróżnić na podstawie ich właściwości fizycznych, umiejscowienia w organizmie i ich struktury pierwszorzędowej.
Transglutaminaza tkankowa (tTG) nazywana jest także transglutaminazą komórkową, erytrocytową, śródbłonkową, cytoplazmatyczną, wątrobową lub typu II. Jest to monomer o masie cząsteczkowej mieszczącej się w zakresie od 75 do 85 kJDa.
Całkowita sekwencja aminokwasów zawierająca 687 reszt wywodzi się z cDNA. Na poziomie białka występuje 84%-owa homologia między enzymem ludzkim a enzymem z makrofagów mysich, jak również 81%-owa homologia między enzymem ludzkim a enzymem ze świnki morskiej. Międzygatunkowe wymiany nukleotydów często nie mają wpływu na sekwencję aminokwasów. Centrum aktywne jest bardzo konserwatywne, z mocno wyrażoną homologią białek między tymi trzema gatunkami (na 51 reszt identycznych jest 49) oraz wysokim stopniem homologii białek (75%) w stosunku do podjednostki a czynnika XIII [porównaj: V. Gentile i wsp., J. Biol. Chem., 266, 478-483 (1991); C. S. Greenberg i wsp., FASEB J„ 5, 3071-3077 (1991)].
Nie ma tu ani peptydu sygnałowego, ani glikozylacji, a oprócz licznych reszt cystyny nie istnieją tu wcale mostki disulfidowe. Wyniki hybrydyzacji fluorescencyjnej pozwalają zlokalizować gen ludzkiej transglutaminazy tkankowej na chromosomie 20ql2 [V. Gentile i wsp., Genomics, 20, 295-297 (1994)]. Aczkolwiek mechanizm uruchomienia enzymu nie jest jeszcze całkowicie jasny, istnieją jednoznaczne dowody na to, że wewnątrzkomórkowa, powszechnie występująca tTG przejmuje ważne zadania w macierzy pozakomórkowej (EZM). Do tego, stężenie Ca2ł niezbędne dla zaistnienia aktywności tTG jest wewnątrzkomórkowo trudno osiągalne w warunkach fizjologicznych, podczas gdy w przestrzeni pozakomórkowej istnieje wystarczająco wysokie stężenie Ca2+ [V. Gentile i wsp., J. Cell. Biol.. 119, 463-474 (1992)].
Wyniki wielu badań dowodzą, że ma się tu do czynienia z asocjacją tTG z fibronektyną, białkiem EZM. Poza fibronektyną zidentyfikować w tym przypadku można występujące w EZM cząsteczki nidogenu, N-terminalnego peptydu III prokolagenu, kolagenu V i kolagenu XI, osteonektyny, glikoproteiny zasocjowanej z mikrofibrylami, dermatanu o dużej masie cząsteczkowej, siarczanu proteoglikanu i lektyny galektyny 3 jako specyficznych substratów dla tTG
Wskazówki dotyczące ważnej roli tTG w gojeniu się ran wynikają między innymi z rezultatów badań fluorescencyjnych przeprowadzonych na hodowanych komórkach WI38 (za6
189 091 rodkowe fibroblasty płucne), które w normalnych warunkach nie wykazują żadnej aktywności tTG, ale które jednak, po sztucznie spowodowanym zranieniu, odkładają enzym ten pozakomórkowo. Po możliwie biernym wyjściu enzymu z uszkodzonych komórek, następuje przede wszystkim niekowalencyjne wiązanie się jego z EZM, zwłaszcza z fibronektyną i kolagnenami włókienkowymi. Tam enzym jest w ciągu kilku godzin katalitycznie aktywny [H. F. Upchurch i wsp., J. Cell. Physiol., 149, 375-382 (1991)]. Na modelu szczurzym wykazano, również po sztucznym zranieniu, trwającą przez 5 dni podwyższoną aktywność tTG [J. M. Bowness i wsp., Biochim Biophys. Acta, 967, 234 240 (1980)]. Także w warunkach prowadzenia inkubacji lizatów ludzkich erytrocytów z osoczem można zademonstrować silne powinowactwo uwolnionej tTG do fibronektyny [L. Lorand i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 1057-1059 (1988)]. Wszystkie te wyniki wskazują na to, że tTG związana z EZM przejmuje główną rolę we wczesnej fazie gojenia się rany, a zwłaszcza współdziała z czynnikiem VIHa w stabilizowaniu fibryny i przez poprzeczne sieciowanie białek pozakomórkowych tworzy warstwę ochronną oraz stabilne, przylegające podłoże koło uszkodzonych komórek. Jak dotychczas, nie stwierdzono u kręgowców istnienia żadnych enzymów, zdolnych do rozszczepiania niezwykle stabilnych poprzecznych usieciowań skatalizowanych przez tTG.
Właśnie w oparciu o rozpoznanie, że tTG stanowi autoantygen sprue, przedmiotem wynalazku jest także użycie tTG, związków zawierających tTG, ich struktur antygenowych, sekwencji immunoreaktywnych lub analogów w diagnostyce i kontroli leczenia schorzeń związanych z reakcją immunologiczną przeciw tym związkom. Zwłaszcza diagnozować można w tym przypadku choroby połączone z ostrym stanem zapalnym, takie jak na przykład zapalenie płuc, zapalenie kłębuszkowe nerek, zapalenie wirusowe wątroby albo choroby połączone z przewlekłym stanem zapalnym, takie jak na przykład choroba Crohna, zapalenie okrężńicy wrzodziejące albo choroby autoimmunizacyjne, takie jak na przykład autoimmunizacyjne zapalenie wątroby, zespół Sjoegrena, ziarnica Wegnera, zapalenie stawów reumatoidalne oraz samoistne zwłóknienie narządów, takie jak zwłóknienie płuc.
Omawiany sposób wykrywania nadaje się specjalnie w diagnostyce i kontroli leczenia sprue. Ponieważ test taki można przeprowadzić szybko i tanio, umożliwia on efektywny skrining ludności pod względem obecności przeciwciał przeciw tTG.
Zastosowana sposobem według wynalazku tTG może pochodzić od ludzi i zwierząt, a także może być produktem syntetycznym lub rekombinantowym. Również mogą to być związki zawierające tTG, które dodatkowo mogą wywodzić się ze źródeł skombinowanych (na przykład zwierzęca tTG związana z peptydem syntetycznym).
Przez stosowane w niniejszym opisie określenie „związki zawierające tTG” rozumie się chemiczne połączenia tTG z białkami oraz ich analogi.
Przez stosowane w niniejszym opisie określenie „analogi tTG” lub „analogi związków zawierających tTG” rozumie się wszelkie struktury antygenowe, które wchodzą w reakcję immunologiczną z przeciwciałami przeciw tTG lub związkom zawierającym tTG, na przykład peptydy syntetyczne.
Przez stosowane w niniejszym opisie określenie „sekwencje immunoreaktywne” rozumie się fragmenty tTG lub związków zawierających tTG, wytworzone na drodze proteolizy, syntezy lub metodami inżynierii genetycznej, a także ich warianty otrzymane za pomocą wymiany aminokwasów.
Immunodetekcji według wynalazku dokonuje się z wykorzystaniem znanych sposobów postępowania. I tak, na przykład, do detekcji przeciwciał u chorych można użyć jakiegokolwiek dowolnego bezpośredniego (na przykład stosując „sensorchip”) lub pośredniego sposobu wykrywania przeciwciał.
W przypadku sposobu bezpośredniego, związanie się wykrywanego przeciwciała z antygenem ustala się poprzez zmianę właściwości chemicznych lub fizycznych, wobec czego nie ma potrzeby stosowania następnego etapu detekcji z użyciem znakowanych partnerów wiązania.
Korzystnie, detekcja przeciwciał przeciw tTG sposobem według wynalazku odbywa się w teście immunologicznym, korzystnie w teście immunologicznym fazy stałej z bezpośrednim lub pośrednim sprzęganiem jednego z partnerów reakcji z dobrze nadającą się do detekcji substancją znakującą. Szczególnie korzystnie można dokonać detekcji wykorzystując technikę
189 091
ELISA, RIA i test immunofluorescencyjny. Specjaliści w tej dziedzinie techniki dobrze znają sposoby realizacji tych metod detekcji.
I tak, na przykład w teście ELISA antygen, w omawianym przypadku na przykład tTG, zostaje związany bezpośrednio lub pośrednio z nośnikiem, na przykład z polistyrenem. Po inkubacji z poddawanymi detekcji przeciwciałami, na przykład z surowicy chorych, stwierdza się obecność związanych z antygenem przeciwciał bezpośrednio lub pośrednio, z użyciem substancji sprzęzonych z enzymem. Substancjami tymi mogą być przeciwciała, fragmenty przeciwciał lub ligandy o wysokim powinowactwie, na przykład awidyna, która wiąże się z markerem biotyny. Jako enzymy wchodzą tu w grę, na przykład, peroksydaza, fosfataza alkaliczna, β-galaktozydaza, ureaza lub oksydaza glukozowa. Za pomocą wprowadzenia chromogennego substratu można oznaczyć ilościowo związane enzymy, a przez to na przykład związane przeciwciała przeciw tTG.
Także w przypadku metody radioimmunologicznej antygen, na przykład tTG, zostaje związany bezpośrednio lub pośrednio z nośnikiem, na przykład polistyrenem. Po inkubacji z poddawanymi detekcji przeciwciałami, na przykład z surowicy chorych, stwierdza się obecność związanych z antygenem przeciwciał z użyciem substancji niosącej marker radioaktywny, na przykład 125J. Substancjami tymi mogą być przeciwciała, fragmenty przeciwciał lub ligandy o wysokim powinowactwie, na przykład awidyna, która wiąże się z markerem biotyny. Związaną radioaktywność można skwantyfikować przy użyciu odpowiedniego przyrządu pomiarowego.
Według tej samej zasady wykrywa się związane z antygenem przeciwciała w teście immunofluorescencyjnym z udziałem substancji niosących marker fluorescencyjny, na przykład izotiocyjanian fluoresceiny (FITC). Substancjami tymi mogą być przeciwciała, fragmenty przeciwciał lub ligandy o wysokim powinowactwie, na przykład awidyna, która wiąże się z markerem biotyny. Ilość związaną z barwnikiem fluorescencyjnym można skwantyfikować przy użyciu odpowiedniego przyrządu pomiarowego.
Według wynalazku jest także możliwa detekcja przeciwciał chorego w teście aglutynacyjnym lub w teście z zastosowaniem chromatografii żelowej. Także i te metody detekcji są znane specjaliście w tej dziedzinie techniki. I tak, w przypadku testu z zastosowaniem chromatografii żelowej wprowadza się w sąsiadujące ze sobą i blisko siebie leżące zagłębienia płytek z agarem lub agarozą roztwory antygenu, względnie przeciwciała. W omawianym przypadku, roztworem antygenu może być roztwór tTG, a roztworem przeciwciała surowica krwi. Substancje te dyfundują ze swych zagłębień i wychodząc z nich tworzą gradienty stężenia. Gdy zachodzące na siebie stężenia anygenu i przeciwciała w żelu znajdują się w zakresie określonych stosunków ilościowych i roztwór przeciwciała zawiera przeciwciało przeciw antygenowi, w żelu tworzą się widoczne straty.
W przypadku testu aglutynacyjnego, niosące antygen (na przykład tTG) cząstki (na przykład lateksu lub polistyrenu) zostają poprzecznie usieciowane przez przeciwciało, na przykład z surowicy. Utworzone agregaty można poddać detekcji z zastosowaniem na przykład turbidymetrii.
Według wynalazku, szczególnie korzystnie przeprowadza się detekcję z zastosowaniem techniki ELISA swoistej względem IgA lub IgG w surowicy chorych cierpiących na sprue. Okazało się przy tym, że nowo opracowana w oparciu o tTG metoda detekcji techniką ELISA w zastosowaniu do wykrywania przeciwciał klasy IgA w surowicy chorych na sprue, z uwagi na swą wysoką czułość i swoistość wspaniale nadaje się do diagnozowania i kontroli leczenia sprue. Staje się do wyraźnie widoczne także w przypadku kontroli przebiegu choroby u pacjentów potraktowanych tym lekiem (spadek wartości miana w trakcie terapii). Porównanie danych uzyskanych w sposobie według wynalazku z użyciem techniki ELISA z wyliczeniami w metodzie immunofluorescencyjnej, trzeciej z rzędu (detekcja IgA przeciw śródmięsnej) wykazuje dobrą zgodność wyników. Rozbieżności występują przede wszystkim w przypadku nizszych mian przeciwciał i odpowiedzialnością za to obarcza się obowiązującą dotychczas jako „złota waluta” pośrednią immunofluorescencję. Jest to między innymi uwarunkowane subiektywizmem oceny i występowaniem niespecyficznych reakcji towarzyszących, zachodzących w tej metodzie z dotychczasowego stanu techniki. Odpowiadający temu sposób detekcji oparty na udziale przeciwciał należących do innych klas, pokazany przykładowo na
189 091 zastosowaniu przeciwciał klasy IgG, nadaje się do wykrywania chorych na sprue z niedoborem IgA, jak również do badania innych chorób, związanych z reakcją odpornościową na tTG.
Dalsze polepszenie sposobu detekcji polega na zastosowaniu w układzie testowym oczyszczonej tTG ze świnek morskich, ludzkich tTQ otrzymanych proteolitycznie lub metodami inżynierii genetycznej immunoreaktywnych sekwencji lub analogów, jak również immunogennych tTG-peptydów. W przykładzie 3.3 opisano wykorzystanie techniki ELISA w diagnostyce i kontroli przebiegu innych chorób, związanych z reakcją odpornościową na tTG
Przedmiotem wynalazku jest doustny środek farmaceutyczny, przeznaczony do leczenia chorób, które związane są z reakcją odpornościową na tTG, ich struktury antygenowe, sekwencje immunoreaktywne lub analogi. Korzystnie, doustną postacią stosowania leku jest tabletka lub kapsułka. Przy tym, dzięki podawaniu tTG, środków zawierających tTG, ich struktur antygenowych, sekwencji immunoreaktywnych lub analogów, powstaje tolerancja doustna. Tolerancję doustną uzyskuje się z jednej strony w wyniku doustnego wprowadzania autoantygenu, a z drugiej dzięki istnieniu tak zwanego „efektu Bystandera”: jak długo nie jest rozpoznany autoantygen wywołujący chorobę w terapii prowadzonej drogą doustną użyć można (w niektórych przypadkach) innego antygenu, wchodzącego w narządzie docelowym w kontakt z systemem odpornościowym. Antygen ten jest wtedy zdolny do miejscowej stymulacji swoistych względem antygenu supresorowych komórek T, a przez to do stłumienia układowej odpowiedzi immunologicznej. Dopiero przy wyższych dawkach antygenu ulega wzbudzeniu anergia auroreaktywnych komórek T.
Tolerancja doustna stanowi praktyczną metodę leczenia rozmaitych chorób autoimmunizacyjnych.
Korzystnie, środek farmaceutyczny według wynalazku służy do leczenia sprue, ale także można go stosować w leczeniu innych schorzeń jelit połączonych z przewlekłym stanem zapalnym i autoimmunizacyjnych stanów zapalnych wątroby.
tTQ związki zawierające tTG, ich struktury antygenowe, sekwencje immunoreaktywne i analogi stosuje się w dawce wynoszącej 0,01-100 mg/kg masy ciała.
Środek farmaceutyczne według wynalazku może, ewentualnie, zawierać farmaceutycznie dozwolone substancje pomocnicze, takie jak na przykład zazwyczaj używane w farmacji stosowanej środki wypełniające, środki poślizgowe, środki rozsadzające, środki wiążące lub środki antyadhezyjne. Udział ilościowy farmaceutycznych środków pomocniczych może wahać się, w zależności od pożądanej zawartości substancji aktywnej, w szerokich granicach i mieści się w zakresie od 0,1 do 20% wag.
Korzyści odnoszone z niniejszego wynalazku polegają zwłaszcza na możliwości stosowania nieinwazyjnego, wysoce swoistego testu diagnostycznego ukierunkowanego na czynnik i bezpośrednio związanego z chorobą, przeznaczonego do diagnostyki sprue i do kontroli leczenia. Ponadto, wielka korzyść wynikająca z opracowanych testów polega na możliwości przeprowadzania ich szybko, łatwo i tanio oraz na możliwości ich standaryzacji między różnymi laboratoriami. Omawiany test umożliwi więc dokonywanie w sposób efektywny skriningu ludności pod względem obecności przeciwciał przeciw tTG.
Oprócz tego, możliwość ilościowego wyrażania danych uzyskiwanych w tym teście przewyższa pod względem obiektywizmu właściwą dla metody immunofluorescencyjnej ocenę subiektywną. Poza tym, w metodzie immunofluorescencyjnej dokonywanie oceny ilościowej (przede wszystkim przy niższych wartościach miana) utrudniają niespecyficzne reakcje towarzyszące. Dzięki wprowadzeniu do systemu testowego swoistych autoantygenów można w najwyższym stopniu wyeliminować niespecyficzne reakcje występujące w przypadku immunofluorescencji prowadzonej z udziałem preparatów przełyku naczelnych, względnie pępowin.
Ponieważ omawiany test można zastosować zarówno dla przeciwciał klasy IgA jak i dla innych klas przeciwciał, objęci nim mogą być także chorzy na sprue z nieoborem IgA. Detekcja oparta na przeciwciałach przeciw tTG nadaje się również do wykrywania, do badania i do kontroli leczenia chorób związanych z odpowiedzią odpornościową na tTG
Następnie, istnieje możliwość, na zasadzie identyfikacji tTG jako autoantygenu sprue, użycia tTG [jako takiej w całości lub jej immunoreaktywnego epitopu (utworzonych proteolitycznie lub metodami inżynierii genetycznej sekwencji, analogów lub syntetycznych pepty189 091 dów)] do doustnie przeprowadzanej terapii sprue jak również innych schorzeń, znanych z dawania odpowiedzi odpornościowej na tTG.
Wynalazek został zilustrowany następującymi przykładami.
Przykład 1
Wyodrębnianie i charakterystyka autoantygenów
1.1. Immunofluorescencja, barwienie APAAP
Barwienie przeprowadzono z udziałem rozmaitych linii komórkowych, utrwalonych w 100% metanolu w ciągu 2 minut w temperaturze -20°.
W przypadku detekcji dokonywanej metodą immunofluorescencyjną, preparaty inkubowano w obecności surowicy chorych na sprue lub kontrolnych, po czym przemyto, a następnie poddano detekcji przy użyciu króliczej przeciwludzkiej IgA znakowanej TRITC [Schuppan i in., J. Biol. Chem., 265, 8823-8832 (1990)].
Znakowania APAAP dokonano po inkubowaniu komórek z surowicami chorych na sprue, przemyciu i następującej potem detekcji, przy użyciu kompleksu APAAP [J. L. Cordell i in., J. Histochem, Cytochem., 32, 219-229 (1984)].
W tych warunkach, HT1080 (komórki ludzkiego włókniakomięsaka), WI38 (fibroplasty płucne ludzkich zarodków) i Hepl i HepG2 (komórki raka wątroby) dawały z surowicami pacjentów jednoznacznie pozytywne sygnały cytoplazmatyczne, podczas gdy surowice normalne, a także obróbka wstępna przy użyciu IgA, nie wykazywały żadnego znakowania. Fibroblasty napletka ludzkiego, komórki ludzkiego mięsaka prążkowanokomórkowego (RD), szczurze komórki Ito, szczurze komórki hepatomy Morrisa i psie komórki MDCK reagowały tylko bardzo słabo albo też ich reakcja była negatywna.
1.2. Metaboliczne znakowanie komórek i immunoprecypitacja autoantygenu
Charakteryzację i wyodrębnianie autoantygenu przeprowadzono z zatosowaniem komórek HT1080.
Komórki hodowano w podłożu Eagle'a modyfikowanym według Dulbecco (DMEM, Gibco) z L-alanino-L-glutaminą, 10% płodową surowicą cielęcą (FKS, Gibco), 100 jedn/ml penicyliny i 100 μ/ml streptomycyny (Seromed), w temperaturze 37°C, w atmosferze 8% CO2. W ceiu metabolicznego oznakowania, komórki przeniesiono na płytki do hodowli o średnicy 5 cm2 i przy osiągnięciu ~90% zlania się utrzymywano w ciągu 2 godzin w podłożu nie zawierającym metioniny i FKS, po czym podłoże to wymieniono na 3 ml podłoża nie zawierającego FKS, a zawierającego 35S-metioninę (0,2 m Ci, Expre35S35S, NEN-Dupont). Po zakończeniu 16-20-godzinnej inkubacji usunięto supematant. Komórki przepłukano buforem fosforanowym (PBS, Seromed) i poddano lizie w 3 ml buforu do lizy [50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0,5% Triton Χ-100, 0,5% niejonowego detergentu IGEPAL CA-630 (Sigma), Proteaseinhibitor Complete® (Boehringer), pH 7,5]. W końcu, przeprowadzono z udziałem podłoża, a także produktu lizy komórek, immunoprecypitację przy użyciu aktywowanej CNBr Sepharose 4B (Pharmacia).
Zaktywowania i wiązania na Sepharose dokonano zgodnie ze wskazówkami wytwórcy. Po spęcznianiu i przemywaniu w 1 mM HC1, pH 2,5, aktywowaną CNBr Sepharose inkubowano, w środowisku 0,1 M NaHCCb, 0,5 M NaCl, pH 8,3, w obecności króliczego przeciwciała skierowanego przeciw ludzkiej IgA (Dianova, 2,4 mg przeciwciała/ml Sepharose), przez noc, w temperaturze 4°C. Przeciwciała nie związane usunięto za pomocą odmycia buforem do wiązania, a miejsca nie zajęte odblokowano przez dodanie 1 M etanoloaminy, pH 9,0, w temperaturze pokojowej, w ciągu 2 godzin. Następnie Sepharose poddano trzykrotnie płukaniu przy użyciu kolejno (za każdym razem po 10 ml) 0,1 M octanem sodu, 0,5 M NaCF, pH 4,0 i 0,1 M Tris-HCl, pH 8,0. Następnie Sepharose inkubowano z surowicami chorych na sprue lub osób zdrowych (0,5 ml surowicy/ml Sepharose), w temperaturze 4°C, przez noc, w buforze do wiązania (50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM CaCL, 1 mM MgCL, pH 8,0). Nadmiar przeciwciał surowicy usunięto za pomocą trzykrotnego wypłukania buforem do wiązania.
ml porcje podłoża dla HT1080 lub produktu lizy metabolicznie znakowanych komórek (około 5 x 104 komórek) wstępnie inkubowano w ciągu 30 minut w temperaturze pokojowej z 50 μΐ Sepharose C14-B (Pharmacia), w celu usunięcia nieswoiście wiążących białek. Po odwirowaniu (10000 x g, 5 minut, 4°C), utworzone supematanty, każdy dodatkiem z 50 μΐ Sepharose, z którą uprzednio związano IgA chorych lub osób kontrolnych, inkubowano przez
189 091 noc, przy wstrząsaniu, w temperaturze 4°C. Następnie, każdy osad Sepharose zadano 3 razy 1 ml buforu do przemywania [10 mM Tris-HCl, 1% IGEpAL CS-630 (Sigma), 0,5% dezoksycholanu sodu, 0,1% siarczanu laurylosodowego, Complete® (Boehringer), pH 8,0], a po tym 1 ml 10 mM Tris-HCl, pH 8,0. Następnie, osady wprowadzono do buforu do prób z SDS i inkubowano w warunkach redukujących i nie redukujących i po rozdzieleniu na 10-12,5% żelu SDS-poliakryloamidowym [U. K. Lammli, Naturę, 227, 680-685 (1970)], poddano detekcji przeprowadzonej metodą autoradiograficzną (fig. 1).
W dalszych badaniach okazało się, że związane białko o dużej masie cząsteczkowej z podłoża stanowiło fibronektynę, która między innymi nieswoiście związała się z Sepharose.
Jednakże, zasocjowane z komórkami białko o 85 kDa mogło ulec wytrąceniu ze wszystkimi dotychczas użytymi 30 surowicami chorych na sprue, co nie było możliwe w przypadku 15 surowic kontrolnych, w tym surowic normalnych, surowic chorych na zapalenie okrężnicy wrzodziejące i na zespół Sjoegrena. Można było z tego wywnioskować, że białko to rzeczywiście stanowi autoantygen sprue.
Widocznym w badaniu audioradiograficznym pasmom 85 kDa odpowiadały przy barwieniu białek w żelu azotanem srebra [J. Heukeshoven i in., Electrophoresis, 6, 103-112 (1985)] ostre pasma białek.
1.3. Wyodrębnianie i oczyszczanie autoantygenów 85 kDa
W celu wyodrębnienia większych ilości autoantygenu hodowlę komórek HT1080 (około 109 komórek) przeprowadzono na ogółem 65 płytkach do hodowli (każda o powierzchni 175 cm2). Na krótko przed osiągnięciem zlania się wymieniono istniejące podłoże na podłoże nie zawierające FKS, po czym inkubację prowadzono dalej w ciągu 16-20 godzin w inkubatorze, w obecności CO2. Lizę lub immunoprecypitację przeprowadzono tak, jak to wyżej opisano. Osad Sepharose inkubowano w ogółem 4,5 ml buforu do prób z SDS, z 2% DL-ditiotreitolu (Sigma), w ciągu 5 minut, w temperaturze 95°C, w celu uwolnienia białek i w końcu poddano ponownemu badaniu w analitycznym żelu SDS-poliakryloamidowym.
W celu dalszego oczyszczenia autoantygenu, produkt immunoprecypitacji poddano rozdzielaniu metodą elekroforezy elucyjnej z użyciem Prep Celi (Model 491 BIO-RAD), jak następuje. Na krążku żelu o średnicy zewnętrznej wynoszącej 3 cm, złożonym z 6,5 cm żelu rozdzielającego (8% poliakryloamid, pH 8,8) i 1,5 cm żelu zbierającgo (4% poliakryloamid, pH 6,8), naniesiono 4,5 ml mieszaniny białek i poddano ją rozdziałowi elektroforetycznemu. Poszczególne białka zbierano w buforze do elucji (25 mM Tris-HCl, 0,1 M glicyny, 0,01% SDS, pH 8,3) we frakcjach po 1,2 ml (0,8 ml/min). Eluowane frakcje kontrolowano metodą SDS-PAGE i frakcje zawierające pożądane białko (około 15 ml) połączono ze sobą i przy pomocy ultrafiltracji (Amicon Centriprep-50 przy 1000 x g) zatężono do objętości wynoszącej około 1 ml.
1.4. Trawienie autoantygenu z udziałem proteazy
Spośród licznych przebadanych proteaz, za stosowną do wykorzystania do fragmentacji uznano endoproteinazę Asp-N (w gatunku „do sekwencjonowania”, Boehringer Mannheim), ponieważ umożliwiała ona uzyskiwanie w stopniu najdalej idącym wzorca rozszczepienia z uzyskiwaniem fragmentów dających się względnie dobrze rozdzielić. Stosunek stężenia enzym:substrat ustalono na 1:100 i trawienie prowadzono w ciągu 30 minut w temperaturze 37°C.
1.5. Przeniesienie na błonę PDVF
Po trawieniu oczyszczonego autoantygenu, fragmenty peptydów poddano rozdziałowi na preparatywnym żelu z 10% tricyny [H. Schagger i in., Anal. Biochem.. 166, 368-379 (1987)] (fig. 2), po czym dokonano przeniesienia, w temperaturze 4°C, metodą Semi-Dry-Fastblot, z zastosowaniem płyt elektrodowych zawierających grafit (Fastblot B32/33, Biometra) na błonę PVDF [poli(difluorek winilidenu), Immobilon, Milipore]. Na płytę anodową nałożono następujące warstwy:
1) bibuła filtracyjna, nasączona buforem anodowym 1 (300 mM Tris-HCl, 20% metanol, pH 10,4);
2) bibuła filtracyjna nasączona buforem anodowym 2 (30 mM Tris-HCl, 20% metanol, pH 10,4);
3) błona PVDF, aktywowana w metanolu i wstępnie zrównoważona w buforze anodowym 2;
189 091
4) żel tricynowy;
5) dwie bibuły filtracyjne, nasączone buforem katodowym (25 mM Tris-HCl, 40 mM kwas ε-amino-n-heksanowy, 20% metanol, pH 9,4);
6) płyta katodowa.
Przenoszenie prowadzono w ciągu 35 minut przy 180 mA. Następnie, błonę PVDF poddano barwieniu przy użyciu 0,1% Coomassie Blue Serva R-250, 50% metanol, w ciągu 5 minut, po czym odbarwiono przy użyciu 50% metanolu, 10% kwasu octowego, dokładnie przemyto wodą destylowaną i wysuszono na powietrzu. Charakterystyczne pasma strawionego autoantygenu, znajdujące się przy 10 kDa, 14 kDa, 16 kDa i 25 kDa starannie wycięto i poddano N-terminalnemu .sekwencjonowaniu.
1.6. Degradacja Erdmanna [według Edmana i Henschena w: n. B. Needleman: „Protein Sequence Determination”, Springer Verlag, Berlin, 232-279 (1975)].
SekBencjonoBanie przeprowadzone w Applied Biosystems 4778-Sequenatoa dało w wyniku trzy sekwencje aminokwasów, które porównano z Swiss-Prot 31 Datenbank (z PC-GENn Iotelligenetics). Na podstawie tego, przy nieznacznej tylko niezgodności, te trzy fragmenty można było jednoznacznie przyporządkować ludzkiej traosglutaminazie tkankowej (tTG, EC 2.3.2.13, γ-glutamylotranεfarazn glutaminylo-paptynoBn). Poniżej zamieszczono odnośne dane w kodzie jednoliterowym, przy czym X oznacza brak identyfikacji.
t-Transglutnmioaza: Fragment 10 kDa: t-Transglutaminaza: Fragment 14 kDa: t-Tranεglutaminnza: Fragment 16 kDa:
28' RnKLWRRGQPFW REKLWRRGQPF (S)
581 ’ ^I^Y^I^^NP^^ttlfflKG DEYLENP^EKKIO 438' DITHTYTCYPE DITLTYQYPi V))
Fragmentowi 24 kDa nie można było przyporządkować żadnej jednoznacznej sekwencji, ponieważ chodzi w tym przypadku o mieszaninę peptynów.
Przykład 2
Potwierdzenie, ze tranεglutaminnza tkankowa (tTG) jest nutonntygenam sprue
2.1. Immunoprecypitacja tTG świnki morskiej
Z uwzględnieniem dostępności pod względem handlowym oraz homologii sekwencji wynoszącej > 80% w stosunku do ludzkiej tTG, użyto tTG z wątroby świnki morskiej (Sigma), który to enzym wpierw poddano rozdziałowi metodą elektroforezy żelowej, w celu zbadania jej czystości. Swierdzono, że tTG, obok wielu innych białek, stanowiąc około 50% jest jednym z głównych pasm. Aczkolwiek ludzka tTG z 687 aminokwasami tylko nieznacznie różni się od białka świnki morskiej zawierającego 690 aminokwasów, to jednak oba te białka odznaczają się odróżniającym je bardzo zachowaniem się podczas migracji w żelu SDS-polinkayloamidoBym. Podczas gdy białko pochodzenia zwierzęcego pojawia się, jak można się było tego spodziewać, przy 75-80 kDa, białko ludzkie migruje wyraźnie wolniej i myląco wykazuje, jak to również opisano w literaturze, na przekór oczywiście brakującej N-glikozylacji, pozorną masę cząsteczkową wynoszącą 85 kDa [V. Gentile i in., J. Biol. Chem., 266, 478-483 (1991)].
Reaktywność ludzkiego autonntyciała z surowic chorych na sprue względem tTG świnki morskiej przebadano w teście immunoprecypitacji. W tym ceiu 4 pg tTG (Sigma) w 500 μΐ buforu do lizy, 0,5% albuminy surowicy bydlęcej ze sprzężoną z Sepharose 4B IgA chorych na sprue wytrząsano w temperaturze 4°C przez noc, po czym przemyto, gotowano w buforze do prób z SDS w warunkach redukujących i poddano wdziałowi w 10% żelu poliakryloamidowym (patrz: 4.1.2). Obsewuje się tu specyficzne wytrącenie się oczekiwanego pasma (Mr 80 kDa), ale nie zanieczyszczenia.
2.2. Potwierdzenie metodą Westerblottingu, ze tTG jest autonntygenem
Po dokonaniu rozdzielania 2 μ tTG świnki morskiej w SDS-żelu i przeniesieniu na nitrocelulozę, zablokowano otrzymany blot w temperaturze 4°C w PBS, 2% mleka odtłuszczonego w proszku, 0,3% Tween 20, pH 7,3 przez noc, po czym nastąpiła jednogodzinna iokubncjn z surowicą chorego na sprue (1/200) w tym samym buforze, a następnie trzykrotne przemycie i jednogodzinna inkubacja ze sprzężonymi z fosfatazą alkaliczną króliczymi przeciwciałami przeciw ludzkiej IgA (1/500). Bioty przemyto PBS, po czym rozwinięto z udziałem błękitu
189 091 nitrotetrazolowego i fosforanu 5-bromo-4-chloro-3-indolilu jako substratu [M. S. Blake i in., Anal Biochem., 136, 175-179 (1984)] .
Pasmo 75-80 kDa dało jednoznacznie pozytywny sygnał z surowicą chorego na sprue, co stanowi dalszy dowód na to, że surowice chorych na sprue zawierają przeciwciała klasy IgA przeciw tTG. Natomiast surowice kontrolne nie dawały żadnego sygnału.
2.3. Potwierdzenie metodą immunofluorescencji pośredniej, że tTG jest autoantygenem śródmięsnej
Do pośredniej detekcji przeciwciał IgA przeciw śródmięsnej w surowicach chorych na sprue lub stwierdzenia ich hamowania przez tTG użyto wycinków tkanki przełyku naczelnych (Euroimmun, Niemcy). Po wstępnej inkubacji 10 jal surowicy chorego, rozcieńczonej w stosunku 1/320 w PBS, z 0,5 lub 10 Hg tTG świnki morskiej (Sigma) lub 10 pg BSA (Sigma) wciągu godziny, w temperaturze pokojowej, nastąpiła inkubacja ze skrawkami przełyku w ciągu godziny w temperaturze pokojowej, w wilgotnej atmosferze. Do kontroli pozytywnej lub negatywnej posłużono się surowicą chorego na sprue (1/320) lub surowicami osób zdrowych (1/50). Po trzykrotnym przemyciu skrawków w PBS/0,2% BSA i wysuszeniu na powietrzu, przeprowadzono detekcję autoantygenów przy użyciu znakowanego TRITIC, skierowanego przeciw ludzkiej IgA króliczego przeciwciała (Dianova), w rozcieńczeniu w PBS 1/50, w ciągu godziny, w temperaturze pokojowej. Nadmiar przeciwciał usunięto za pomocą przemywania, kolejno: PBS/0,2% BSA, PBS i wodą destylowaną.
Surowica chorego na sprue wykazała wyraźne zabarwienie EZM przez przeciwciało klasy IgA, które była hamowane przez tTG dodawaną we wzrastającym stężeniu, ale nie przez wstępną inkubację z BSA. Kontrola zawierająca surowicę osób zdrowych nie wykazała żadnego zabarwienia skrawków przełyku.
Przykład 3
3.1. Rozwinięcie swoistej dla sprue techniki ELISA z udziałem przeciwciał IgA w celu zastosowania w diagnostyce i kontroli przebiegu sprue
Na polistyrenową mikropłytkę o 96 dołkach (Greiner Labortechnik) wprowadzono przy użyciu pipety w ilości po 1 (ig/dołek transglutaminazę świnki morskiej (Sigma T-5398) w 100 μΐ PBS, po czym płytki te inkubowano w ciągu 2 godzin w temperaturze 37°C przy lekkim ruchu obrotowym. Oddzielono nie związaną tTG przez wypłukanie 3 razy po 200 μΐ PBS, a wolne miejsca wiązania w dołkach blokowano 1% albuminą surowicy bydlęcej (Sigma) w 250 μΐ PBS, w temperaturze 4°C przez noc. Po przemyciu 3 razy po 200 il PBS/0,1% Tween-20, prowadzono inkubację z kolejnymi rozcieńczeniami surowicy w PBS/0,1% Tween-20 (100 μΐ) w ciągu godziny, w temperaturze pokojowej przy lekkim ruchu obrotowym, po czym dokonano przemycia 3 razy po 200 μΐ PBS/0,1% Tween-20, a następnie inkubacji ze sprzężonym z peroksydazą, skierowanym przeciw IgA króliczym przeciwciałem (Dianova) (1/400 w 100 μΐ PBS/01,% Tween-20) w ciągu godziny, w temperaturze pokojowej. Po trzykrotnym przemyciu PBS nastąpiła 30-minutowa inkubacja w temperaturze pokojowej, bez dostępu światła, z użytymi po 200 μΐ: 0,1 M buforem cytrynianowym, 17,6 mM H2O2 i 5,5 mM chlorowodorkiem o-fenylenodiaminy (Sigma), pH 4,2, a w końcu detekcja utworzonego barwnika w czytniku ELISA (MRX, Dynatech Laboratories) przy 450 nm.
Przebadano 20 surowic chorych na sprue przed i po terapii z dietą bezglutenową, to znaczy w aktywnej i mniej aktywnej fazie choroby. System testu okazał się wysoce czuły, z dobrą korelacją wartości w odniesieniu do aktywnej fazy sprue. Powodzenie leczenia polegającego na przestrzeganiu diety odzwierciedla się w obniżeniu poziomu przeciwciał IgA przeciw tTG Wielka swoistość przejawia się w niewielkiej wartości ekstynkcji (poziom tła) surowic kontrolnych osób zdrowych oraz chorych na zapalenie okrężnicy wrzodziejące, marskość wątroby, różne guzy, zespół Sjoergena i wiele innych (fig. 3).
3.2. Rozwinięcie techniki ELISA z udziałem przeciwciał innych klas, w celu zastosowania w diagnostyce i kontroli przebiegu sprue, na przykładzie przeciwciała IgG
Ponieważ u około 2% chorych na sprue występuje niedobór IgA, przebadano ich surowice pod względem wrażliwości i swoistości przeciwciał IgG przeciw tTG Przeprowadzenie testu techniką ELISA odbywało się tak, jak to opisano w p. 3.1, jedynie wymieniono sprzęzone z peroksydazą przeciwludzkie przeciwciało IgA (Dianova) na przeciwludzkie przeciwciało IgG
189 091 (Dianova). Wartości otrzymane dla chorych na sprue odpowiadały pod względem swoistości, zarówno przed dietą bezglutenową, jak i po niej, danym uzyskanym dla przeciwciała IgA.
W przypadku niektórych surowic kontrolnych otrzymano wartości nieco podwyższone, co odpowiada wcześniejszym wynikom odnoszącym się do zmniejszonej swoistości przeciwciał śródmięsnej stwierdzonej w teście immunofluorescencji pośredniej przeprowadzonym z udziałem przeciwciał klasy IgG (fig. 4).
3.3. Rozwinięcie techniki ELISA w cel u zastosowania wa diagnostyce i kontroli przeb iegu innych chorób, związanych z z reakcją odpornościową na tTG, na przykładzie przeciwciała IgG
Przeprowadzenie testu techniką ELICA odbywało się tak, jak to opisano w p. 3.2. Surowice pacjentów chorych na choroby połączone z przewlekłym stanem zapalnym lub na choroby autoimmunizaayjne [zapalenie okrężnicy wroodoięjącs (C.U.), choroba Crohna, ostre autoimudizacyjds zapalenie wątroby] wykazywały wartości od lekko podwyższonych do średnio podwyższonych.
Tak więc, dzięki zastosowaniu dla przeciwciał przeciw tTG na przykład testów ELICA swoistych względem IgG, możliwe jest diagnozowanie i kontrola leczenia pacjentów cierpiących na choroby związane z reakcją odpornościową na tTG.
Przykład 4
Nowa funkcja tradsglutamidazy tkankowej (tTG) w usieciowadiu poprzecznym gliadyny
Podczas gdy dzięki katalizowanej przez tTG reakcji do dyspozycji stoi szerokie spektrum rozmaitych akceptorów grupy acylowej, to w charakterze donorów grupy acylowej może fudkcjadawać jedynie niewiele cząsteczek. W eksperymencie przeprowadzonym in vitro można było wykazać wbudowanie, za pośrednictwem tTG, radioaktywnie znakowanej putrescydy w gliadynę, a tym samym ludkcjonawadis gliadyny jako donorowego substratu tTG.
W 160 ul buforu (0,1 M Tris-HCl, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2, pH 7,5) inkubowada 1 ng substratu (gliadyna lub białko kontrolne, takie jak albumina), 2 μ Ci [3H]-putrescyny i 1 pg tTG (ze świnki morskiej, Cigma), w ciągu 2 godzin, w temperaturze 37°C. Reakcję zatrzymano za pomocą dodania 100 1 50% kwasu trichloroactowego (TCA), po czym przeprowadzono wytrącanie białka, w temperaturze 4°C, przez noc. Po odwirowaniu, osady przemyto 10% tCa, rozpuszczono w buforze do prób z CDC i w części użyto do rozdziału metodą CDC-PAGE, a w części do zliczania metodą scyntylacyjną. Podczas gdy w przypadku próbek kontrolnych nie można było stwierdzić żadnego wbudowywania się putrssayny, gliadyna wykazała zarówno poprzez dane uzyskane w liczeniu metodą scyntylacyjną, jak i otrzymane metodą CDC-PAGE wyraźne wbudowanie [3H]-putrescydy w gliadynę, co dowodzi, że gliadyna stanowi doskonały substrat dla tTG
Ckróty stosowane w ninesjsoym opisie
AK przeciwciało
APAAP fosfataza oasadowa-adtyfosfataoa zasadowa
BCA albumina surowicy bydlęcej cm centymetr
DMEM podłoże Eagle'a modyfikowane według Dulbecco
EC Komisja Enzymów
ELICA enzymatyczny test immudoabsorecyjdy
EZM macierz pozakomórkowa
FKC płodowa surowica cielęca h godzina (godziny)
H202 nadtlenek wodoru
HLA antygen ludzkich limfocytów
IEL limfocyty śródbłodkawe
Ig immunoglobulina kDa kilodaltad
M molowy
Ma miliamesr
MHC główny układ zgodności tkankowej min minuta (minuty)
Mm milimolowy
189 091
| Mr | względna masa cząsteczkowa |
| μβ | mikrogram |
| μΐ | mikrolitr |
| PAGE | elektroforeza w zelu poliakryloamidowym |
| PBS | bufor fosforanowy |
| pLA2 | fosfolipaza A2 |
| PVDF | poli(difluorek winilidenu) |
| SDS | siarczan dodecylo-sodowy |
| TCA | kwas trichlorooctowy |
| TGF | transformujący czynnik wzrostu |
| Tris | tri shydroksymetyloaminometan |
| tTG | transglutaminaza tkankowa |
189 091
Fig. 1. Przedstawienie autoantygenów w analizie SDS-PAGE po immunoprecypitacji (IP).
a b c d
| RDa | W - |
| 94 67 | |
| 43 | ·# · |
| 30 | 9 ' |
| 21 | |
| 14 |
a: IP produktu lizy komórek z surowicą kontrolną b: IP podłoża z surowicą kontrolną c: IP produktu lizy komórek z surowicą chorego na sprue, przedstawienie autoantygenu według wynalazku d: IP podłoża z surowicą chorego na sprue
Fig. 2. Trawienie autoantygenu przy użyciu proteazy (endopeptydazy Asp-N).
-¼
-♦ —>
«Mb I» *
25icDa ł-!6W« 4-HkD* ł- HJ kDa a: autoantygen według wynalazku b: fragmenty uutaantggeuu po raaweeniu pooeeazą
189 091
Fig. 3 a. IgA-ELISA z udziałem surowic chorych na sprue przed i po diecie bezglutenowe] (rozcieńczenie surowicy
1/400)
ł I i i i i
Podpisy pod wykresem słupkowym (kolejno)
Sprue 1 przed
Sprue 1 po
Sprue 2 przed
Sprue 2 po itd.
Kontrola
189 091
Fig. 3 b. IgA-Elisa z udziałem surowic kontrolnych (rozcieńczenie surowic 1/200)
Podpisy pod wykresem słupkowym (kolejno): Lekka sprue
Zapalenie okrężnicy wrzodzejące 1 Zapalenie okrężnicy wrzodziejące 2 Rak żołądka 1
Rak żołądka 2
Wrzód trawienny żołądka
Zapalenie wątroby immunizacyjne
Rak wątroby 1
Rak wątroby 2
Rak krtani
Rak przełyku
Osteomioflbroza
Rak trzustki
Osoba zdrowa
189 091
Fig. 4. IgG-Elisa z udziałem surowic osób chorych przed i po diecie bezglutenowej (rozcieńczenie surowicy 1/400)
Podpisy pod wykresem słupkowym (kolejno):
Sprue 1 przed
Sprue 1 po
Sprue 2 przed
Sprue 2 po itd.
Kontrola
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.
Cena 4,00 zł
Claims (9)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, znamienny tym, ze wykrywa się przeciwciała przeciw transglutaminazie tkankowej (tTG) z płynów ustrojowych za pomocą reakcji immunologicznej z transglutaminazą tkankową (tTG) sekwencjami immunoreaktywnymi lub ich analogami przy czym reakcję immunologiczną prowadzi się w wykluczeniem skrawków tkanek zwierzęcych lub ludzkich.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze wykrywaniu poddaje się ludzkie przeciwciało IgA i/lub IgG.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamieny tym, że tGT jest pochodzenia ludzkiego, zwierzęcego, syntetycznego lub rekombinantowego.
- 4. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienny tym, ze detekcję przeprowadza się z zastosowaniem znanego testu immunologicznego, korzystnie z bezpośrednim lub pośrednim sprzęganiem partnerów reakcji z dobrze wykrywalną substancją znakującą.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że wykrywanie przeprowadza się w fazie stałej.
- 6. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że wykrywanie przeprowadza się z zastosowaniem techniki ELISA, RIA lub testu immunfluorescencyjnego.
- 7. Zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów do diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, z wykluczeniem skrawków tkanek zwierzęcych lub ludzkich.
- 8. Doustny środek farmaceutyczny przeznaczony do leczenia sprue lub celiakii zawierający czynnik aktywny oraz farmaceutycznie dopuszczalne substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako czynnik aktywny zawiera tTG, sekwencje immunoreaktywne lub ich analogi oraz, ewentualnie, farmaceutycznie dozwolone substancje pomocnicze.
- 9. Zastosowanie tTG, sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów do wytwarzania doustnych środków farmaceutycznych do leczenia sprue lub celiakii.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19630557A DE19630557C2 (de) | 1996-07-18 | 1996-07-18 | Verfahren zum Nachweis von Antikörpern aus Körperflüssigkeiten durch eine Immunreaktion mit Gewebe-Transglutaminase (tTG) sowie die Verwendung von tTG in Diagnose und Therapie |
| PCT/EP1997/003740 WO1998003872A2 (de) | 1996-07-18 | 1997-07-14 | IMMUNOLOGISCHES NACHWEISVERFAHREN VON ANTIKÖRPERN, DIE GEGEN GEWEBE-TRANSGLUTAMINASE (tTG) GERICHTET SIND, VERWENDUNG VON tTG ZUR DIAGNOSE UND THERAPIEKONTROLLE SOWIE ORALES PHARMAZEUTISCHES MITTEL ENTHALTEND tTG |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL331203A1 PL331203A1 (en) | 1999-07-05 |
| PL189091B1 true PL189091B1 (pl) | 2005-06-30 |
Family
ID=7801172
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97331203A PL189091B1 (pl) | 1996-07-18 | 1997-07-14 | Sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, zastosowanie tTG sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów i doustny środek farmaceutyczny |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6319726B1 (pl) |
| EP (1) | EP0912898B1 (pl) |
| CN (1) | CN1138146C (pl) |
| AT (1) | ATE210296T1 (pl) |
| AU (1) | AU718797B2 (pl) |
| BR (1) | BR9710500B1 (pl) |
| CA (1) | CA2260769C (pl) |
| CZ (1) | CZ291662B6 (pl) |
| DE (2) | DE19630557C2 (pl) |
| DK (1) | DK0912898T3 (pl) |
| ES (1) | ES2131038T3 (pl) |
| GR (1) | GR990300020T1 (pl) |
| HK (1) | HK1021025A1 (pl) |
| HU (1) | HU228479B1 (pl) |
| IL (1) | IL128042A (pl) |
| NO (1) | NO321466B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ333744A (pl) |
| PL (1) | PL189091B1 (pl) |
| PT (1) | PT912898E (pl) |
| SI (1) | SI9720044B (pl) |
| SK (1) | SK284410B6 (pl) |
| WO (1) | WO1998003872A2 (pl) |
Families Citing this family (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999056698A2 (en) * | 1998-05-06 | 1999-11-11 | Københavns Universitet | Treatment of celiac disease |
| DE60011622T2 (de) | 1999-06-28 | 2005-09-08 | Immundiagnostik Ag | Diagnose der glutensensibilitätsenteropathie und anderer autoimmunerkrangungen |
| US6703208B1 (en) | 1999-10-20 | 2004-03-09 | Immco Diagnostics | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease |
| WO2001029090A1 (en) * | 1999-10-20 | 2001-04-26 | Immco Diagnostics | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease |
| CU22968A1 (es) * | 2000-06-07 | 2004-07-14 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Procedimiento para la detección de anticuerpos anti transglutaminasa con utilidad en el diagnóstico de la enfermedad celíaca |
| GB0103024D0 (en) * | 2001-02-07 | 2001-03-21 | Rsr Ltd | Assay for Autoantibodies to tissue transglutaminase |
| FI20010868A0 (fi) | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Markku Maeki | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
| KR100488131B1 (ko) * | 2001-07-07 | 2005-05-06 | (주)푸드바이오테크 | 알레르기 진단용 단백질 칩과 알레르기 유발원의 검출방법 및 알레르기 유발 항체의 검출 방법 |
| GB0117870D0 (en) | 2001-07-21 | 2001-09-12 | Univ Nottingham Trent | Method of diagnosis and kit of parts therefor |
| US8143210B2 (en) * | 2002-02-14 | 2012-03-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for celiac sprue |
| US7320788B2 (en) * | 2002-02-14 | 2008-01-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for Celiac Sprue |
| DK1572127T4 (da) | 2002-02-14 | 2014-11-24 | Univ Leland Stanford Junior | Enzymbehandling af fødevarer til cøliaki |
| WO2003096979A2 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
| US7202216B2 (en) * | 2002-05-14 | 2007-04-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
| US7462688B2 (en) * | 2002-05-14 | 2008-12-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Peptides for diagnostic and therapeutic methods for celiac sprue |
| US7265093B2 (en) * | 2002-05-14 | 2007-09-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for Celiac Sprue |
| DK1563300T3 (da) * | 2002-11-20 | 2012-07-23 | Univ Leland Stanford Junior | Diagnostisk fremgangsmåde til cøliaki |
| US7579313B2 (en) * | 2003-11-18 | 2009-08-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Transglutaminase inhibitors and methods of use thereof |
| US7563864B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-07-21 | Celiac Sprue Research Foundation | Prolyl endopeptidase mediated destruction of T cell epitopes in whole gluten |
| US7534426B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-05-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Glutenase enzyme assays |
| US7628985B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-12-08 | The Board Of Regents Of The Leland Stanford Junior University | Therapeutic enzyme formulations and uses thereof in celiac sprue and/or dermatitis herpetoformis |
| US20080038760A1 (en) * | 2004-06-08 | 2008-02-14 | Method For Decting Anti-Transglutaminase Antibodies | Method for Detecting Anti-Transglutaminase Antibodies |
| ES2558309T3 (es) * | 2006-07-25 | 2016-02-03 | Augurix S.A. | Dispositivo de inmunocromatografía para el diagnóstico de enfermedades en una muestra |
| WO2008089756A2 (de) * | 2007-01-26 | 2008-07-31 | Ga Generic Assays Gmbh | Verfahren zum nachweis von antikörpern aus körperflüssigkeiten durch eine immunreaktion mit glykoprotein 2 (gp2) aus zymogenen granula des pankreas zur differentialdiagnose von entzündlichen darmerkrankungen und chronischer pankreatitis |
| EP2136833B1 (en) * | 2007-03-16 | 2019-05-01 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Combination enzyme therapy for digestion of dietary gluten |
| EP1978364B1 (en) | 2007-04-06 | 2011-06-01 | Zedira GmbH | Transglutaminase 6 as a diagnostic indicator of autoimmune diseases |
| HU0900199D0 (en) * | 2009-04-01 | 2009-06-29 | Debreceni Egyetem | Diagnosis of gluten-induced autoimmune diseases |
| FR2949782B1 (fr) | 2009-09-04 | 2015-10-16 | Isp Investments Inc | Peptide activateur de la transglutaminase et composition cosmetique ou pharmaceutique le contenant. |
| CA3191015A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, peptide arrays, and methods |
| DK2839290T3 (da) | 2012-04-17 | 2019-06-11 | Aeneas Gmbh & Co Kg | Fremgangsmåde til præsymptomatisk diagnose af cøliaki og glutensensitivitet |
| DE102012007510A1 (de) | 2012-04-17 | 2013-10-17 | Aesku.Diagnostics GmbH & Co. KG | Verfahren zur Präsymptomatischen Diagnostik von Zöliakie und Glutensensitivität |
| US10006909B2 (en) | 2012-09-28 | 2018-06-26 | Vibrant Holdings, Llc | Methods, systems, and arrays for biomolecular analysis |
| US10286376B2 (en) | 2012-11-14 | 2019-05-14 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, systems, and methods for array synthesis and biomolecular analysis |
| WO2014127328A2 (en) | 2013-02-15 | 2014-08-21 | Vibrant Holdings, Llc. | Methods and compositions for amplified electrochemiluminescence detection |
| CN104090102B (zh) * | 2014-06-13 | 2016-08-17 | 江南大学 | 冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶elisa检测方法 |
| NZ742911A (en) | 2014-09-10 | 2024-02-23 | Vibrant Holdings Llc | Peptide microarrays and novel biomarkers for celiac disease |
| US10538808B2 (en) | 2017-05-26 | 2020-01-21 | Vibrant Holdings, Llc | Photoactive compounds and methods for biomolecule detection and sequencing |
| CN110055235A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-07-26 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 用于转谷氨酰胺酶抗体检测的抗原及其制备方法、试剂盒及检测方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL155894B1 (en) * | 1987-12-23 | 1992-01-31 | Przed Zagraniczne W Polsce Pla | Test for assessing gluten-dependent enteropathies |
| DE3829524A1 (de) * | 1988-08-31 | 1990-03-01 | Behringwerke Ag | Verwendung von transglutaminasen als immunsuppressiva |
| DE19520480C2 (de) | 1995-06-03 | 1997-04-30 | Univ Leipzig | Immunochemisches Testmaterial und Enzymimmunoassay zur Diagnostik von Zöliakie und verwandten Eiweißintoleranzen |
| US5716794A (en) * | 1996-03-29 | 1998-02-10 | Xybernaut Corporation | Celiac antigen |
-
1996
- 1996-07-18 DE DE19630557A patent/DE19630557C2/de not_active Revoked
-
1997
- 1997-07-14 EP EP97939994A patent/EP0912898B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 CN CNB971965269A patent/CN1138146C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 WO PCT/EP1997/003740 patent/WO1998003872A2/de active IP Right Grant
- 1997-07-14 PL PL97331203A patent/PL189091B1/pl unknown
- 1997-07-14 DK DK97939994T patent/DK0912898T3/da active
- 1997-07-14 BR BRPI9710500-7A patent/BR9710500B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 SI SI9720044A patent/SI9720044B/sl unknown
- 1997-07-14 ES ES97939994T patent/ES2131038T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 SK SK67-99A patent/SK284410B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 HU HU0202779A patent/HU228479B1/hu unknown
- 1997-07-14 CA CA002260769A patent/CA2260769C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 PT PT97939994T patent/PT912898E/pt unknown
- 1997-07-14 DE DE59705683T patent/DE59705683D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 AT AT97939994T patent/ATE210296T1/de active
- 1997-07-14 AU AU42011/97A patent/AU718797B2/en not_active Expired
- 1997-07-14 CZ CZ1999117A patent/CZ291662B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 NZ NZ333744A patent/NZ333744A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 IL IL128042A patent/IL128042A/en not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-01-01 GR GR990300020T patent/GR990300020T1/el unknown
- 1999-01-13 US US09/229,716 patent/US6319726B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-01-15 NO NO19990190A patent/NO321466B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-12-22 HK HK99106049A patent/HK1021025A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-08-08 US US09/925,076 patent/US20020076834A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL189091B1 (pl) | Sposób diagnozowania lub kontroli leczenia sprue lub celiakii, zastosowanie tTG sekwencji immunoreaktywnych lub ich analogów i doustny środek farmaceutyczny | |
| Bresolin et al. | Fatal infantile cytochrome c oxidase deficiency: decrease of immunologically detectable enzyme in muscle | |
| Arentz-Hansen et al. | The intestinal T cell response to α-gliadin in adult celiac disease is focused on a single deamidated glutamine targeted by tissue transglutaminase | |
| Mackel et al. | Antibodies to collagen in scleroderma | |
| AU2010233926B2 (en) | Biomarkers, methods and kits for the diagnosis of Rheumatoid Arthritis | |
| Ligier et al. | A new antibody in rheumatoid arthritis targeting glycated IgG: IgM anti-IgG-AGE. | |
| Preisz et al. | Immunoglobulin, complement and epidermal transglutaminase deposition in the cutaneous vessels in dermatitis herpetiformis | |
| WO2023109384A1 (zh) | 去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物的应用 | |
| WO1998002744A1 (fr) | Medicaments pour le diagnostic de maladies auto-immunes | |
| EP2161284B1 (en) | Citrulinated fibrin-filaggrin chimeric polypeptide capable of detecting the antibodies generated in rheumatoid arthritis | |
| Dørum et al. | A quantitative analysis of transglutaminase 2-mediated deamidation of gluten peptides: implications for the T-cell response in celiac disease | |
| JP2006528361A (ja) | アルドラーゼを含む網膜血管疾患診断用組成物およびその診断方法 | |
| AU7276200A (en) | Detection of isomerised epitopes in autoimmune diseases | |
| Pelli et al. | Argininosuccinate lyase: a new autoantigen in liver disease | |
| JP2010252795A (ja) | 関節炎の診断および治療のためのグルコース−６−ホスフェートイソメラーゼおよびその抗体の使用、ならびに抗関節炎化合物の試験 | |
| Mamone et al. | Immunogenic peptides can be detected in whole gluten by transamidating highly susceptible glutamine residues: implication in the search for gluten-free cereals | |
| AU762471B2 (en) | Method for the diagnosis of rheumatoid arthritis | |
| Engineer et al. | Bovine gingival lysate: a novel substrate for rapid diagnosis of autoimmune vesiculo‐bullous diseases: A preliminary observation | |
| Abu Shehab et al. | Site specific phosphorylation of insulin-like growth factor binding protein-1 (IGFBP-1) for evaluating clinical relevancy in fetal growth restriction | |
| Cronin et al. | A significant step in the celiac puzzle | |
| EP1222210A1 (en) | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease | |
| WO1994018568A1 (en) | Methods for the diagnosis of diabetes and prediabetic conditions | |
| WO2019015814A1 (en) | USE OF CHITINASE-3 PROTEIN-1 (CHI3L1) AS AUTO-ANTIGEN IN AUTOIMMUNE DISORDERS OF THE DIGESTIVE SYSTEM | |
| WO2008084270A1 (en) | Hepatic marker proteins for insulin resistance | |
| AU6033794A (en) | Methods for the diagnosis of diabetes and prediabetic conditions |