PL187174B1 - Kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu i jej zastosowanie - Google Patents

Kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu i jej zastosowanie

Info

Publication number
PL187174B1
PL187174B1 PL96326064A PL32606496A PL187174B1 PL 187174 B1 PL187174 B1 PL 187174B1 PL 96326064 A PL96326064 A PL 96326064A PL 32606496 A PL32606496 A PL 32606496A PL 187174 B1 PL187174 B1 PL 187174B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
composition
gel
pdgf
wound
cmc
Prior art date
Application number
PL96326064A
Other languages
English (en)
Other versions
PL326064A1 (en
Inventor
John Cini
Amy Finkenaur
Original Assignee
Ethicon Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ethicon Inc filed Critical Ethicon Inc
Publication of PL326064A1 publication Critical patent/PL326064A1/xx
Publication of PL187174B1 publication Critical patent/PL187174B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Colloid Chemistry (AREA)

Abstract

1. Kompozycja farmaceutyczna zawierajaca czynnik wzrostu, farmaceutycznie ak- ceptowalny polimer, znamienna tym, ze zawiera a) efektywna do gojenia rany ilosc po- chodzacego z plytek krwi czynnika wzrostu (PDGF); b) dopuszczalny farmaceutycznie polimer celulozowy; i c) dopuszczalne farmaceutycznie naladowane dodatnio substancje chemiczne wybrane z grupy skladajacej sie z lizyny, argininy, histydyny, protaminy, alaniny, metioniny, proliny, seryny, asparaginy, cysteiny, aminoguanidyny, cynku i magnezu, gdzie kompozycje stanowi wodny zel o lepkosci z przedzialu od 1000 mPa ·s do 500000 mPa ·s w temperaturze pokojowej. 9. Zastosowanie kompozycji zdefiniowanej w zastrz. 1, do wytwarzania leku do go- jenia rany u pacjenta. PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu i jej zastosowanie do gojenia ran.
Niniejsze zgłoszenie patentowe stanowi w części kontynuację zgłoszenia U.S. Serial No. 520,798, które wpłynęło 30 sierpnia 1995, i które jest kontynuacją zgłoszenia U.S. Serial No. 135,230, które wpłynęło 12 października 1993, które jest w części kontynuacją zgłoszenia
U.S. Serial No. 974,013, które wpłynęło 10 listopada 1992, obecnie patentu Stanów Zjednoczonych U.S. Patent No. 5,427,778, który jest kontynuacją zgłoszenia U.S. Serial No. 703,584, które wpłynęło 20 maja 1991, obecnie odwołanego, który jest kontynuacją zgłoszenia U.S. Serial No. 233,493, które wpłynęło 19 sierpnia 1988, obecnie odwołanego, które jest w części kontynuacją U.S. 098,816, które wpłynęło 18 września 1987 obecnie odwołanego.
W trakcie niniejszego ujawnienia jako odnośniki podane będą różne publikacje, patenty i zgłoszenia patentowe. Ujawnienie w całości tych publikacji, patentów i zgłoszeń patentowych włączono jako odnośniki do niniejszego zgłoszenia celem pełnego opisu stanu wiedzy znanego specjalistom tej dziedziny w chwili opisywania zastrzeżonego tutaj wynalazku.
Najbliższy stan techniki wynalazku ujawnia również opis patentowy według publikacji WO 93/04691 i europejski opis patentowy EP 031220. Opis według WO 93/04691 ujawnia kompozycję do leczenia ran obejmującą co najmniej jeden związek stymulujący wzrost komórki np. niesteroidalny korzystnie naturalny anaboliczny hormon lub transformujący czynnik wzrostu. Według opisu patentowego EP 031220 kompozycja zawiera polipeptydowe czynniki wzrostu wykazujące aktywność mitogenną lub angiogenną, zwłaszcza zawiera naskórkowy czynnik wzrostu (EGF). Natomiast wynalazek według niniejszego zgłoszenia dotyczy, zwłaszcza kompozycji opartej na pochodzącym z płytek krwi czynniku wzrostu (PDGF).
Niniejszy wynalazek zapewnia kompozycje w postaci form żelowych zawierających polipeptydowe czynniki wzrostu wykazujące aktywność mitogenną lub angiogenną.
Ludzkie polipeptydowe czynniki wzrostu są cząsteczkami, które regulują wzrost normalnych ludzkich komórek. Wiele ludzkich polipeptydowych czynnników wzrostu zidentyfikowano i ustalono ich budowę chemiczną. Należącymi do tej grupy są: naskórkowy czynnik wzrostu (epidermal growth factor (EFG)), czynnik wzrostu kwaśnych i zasadowych fibroplastów (acidic and basic fibroplast growth factor (FFG)), pochodzący płytek krwi czynnik wzrostu (platelet derived growth factor (PDGF)), transformujący czynnik wzrostu-alfa (transforming growth factor-alpha (TGF-alfa)), transformujący czynnik wzrostu-beta (transforming growth factor-beta (TGF-beta)), insulinopodobne czynniki wzrostu (insulin-like growths factors (IGF-I i IGF-II), i nerwowy czynnik wzrostu (nerve growth factor (NGF)). Z uwagi na zdolność stymulowania wzrostu komórek ludzkie polipeptydowe czynniki wzrostu opisano jako substancje przydatne w stymulowaniu procesu gojenia ran.
Jak dotychczas nie opracowano korzystnego systemu dostarczania żadnego czynnika wzrostu, który możnaby stosować w leczeniu ran. W szczególności, korzystne byłoby posiadanie systemu dostarczającego, który kontrolowałby uwalnianie czynnika wzrostu i przylegałby lub utrzymywał się na ranie przez dłuższy czas co wydłużyłoby czas kontaktu czynnika wzrostu z raną. Niniejszy wynalazek dostarcza takich systemów dostarczających w formie żeli zawierających czynnki wzrostu. Aby doprowadzać czynnik wzrostu do rany stosuje się biologicznie dostosowane materiały żelowe czego zaletą jest uzyskanie kontrolowanego profilu dostarczania czynnika wzrostu i zapewnienie wilgotnego środowiska na ranie.
Według wynalazku kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu, farmaceutycznie akceptowalny polimer, charakteryzuje się tym, że zawiera a) efektywną do gojenia rany ilość pochodzącego z płytek krwi czynnika wzrostu (PDGF); b) dopuszczalny farmaceu4
187 174 tycznie polimer celulozowy; i c) dopuszczalne farmaceutycznie naładowane dodatnio substancje chemiczne wybrane z grupy składającej się z lizyny, argininy, histydyny, protaminy, alaniny, metioniny, proliny, seryny, asparaginy, cysteiny, aminoguanidyny, cynku i magnezu, gdzie kompozycję stanowi wodny żel o lepkości z przedziału od 1000 mPa-s do 500000 mPa-s w temperaturze pokojowej.
Kompozycja według wynalazku korzystnie zawiera dopuszczalny farmaceutycznie polimer celulozowy, którego stężenie wynosi od około 1,5% (wag./wag.) do około 3,0% (wag./wag.) i którego ciężar cząsteczkowy wynosi od około 450000 do około 4000000; i dopuszczalne farmaceutycznie naładowane dodatnio substancje chemiczne występujące w stężeniu od około 0,1% (wag./wag.) do około 3,0% (wag./wag.).
PDGF korzystnie stanowi homodimer PDGF-B.
Stężenie PDGF w kompozycji zawiera się korzystnie w przedziale od około 1,0 μ/gram do około 1000 μ/gram.
Natomiast polimer celulozowy w kompozycji według wynalazku korzystnie wybrany jest z grupy składającej się z karboksymetylocelulozy, hydroksypropylometylocelulozy i metylocelulozy.
Kompozycja według wynalazku korzystnie zawiera się w przedziale 50000-150000 mPa-s.
Jako dodatkowy środek kompozycja zawiera środek konserwujący wybrany z grupy składającej się z metyloparabenu, propyloparabenu i m-krezolu.
Kompozycja w korzystnym wykonaniu wynalazku zawiera a) efektywną do gojenia rany ilość ludzkiego PDGF-B homodimeru; b) karboksymetylocelulozę (CMC); i c) lizynę, przy czym jej lepkość zawiera się korzystnie w przedziale od 1000 do 150000 cps.
W kolejnym korzystnym wykonaniu wynalazku kompozycja składa się z (g/l. OOg żelu): 0,01 g rhPDGF-B; 2,40 g soli sodowej karboksymetylocelulozy; 0,81 g chlorku sodu; 0,157 g trójhydratu octanu sodu; 0,0065 g lodowatego kwasu octowego; 0,162 g metyloparabenu; 0,018 g propyloparabenu; 0,09 g m-krezolu; 0,5 g chlorowodorku L-lizyny; i 100 g wody do iniekcji i posiada lepkość z przedziału od około 20000 do około 200000 cps w temperaturze 37°C, a korzystniej składa się z (mg/g żelu): 0,1 g rhPDGF-B; 23,103 g soli sodowej karbokymetylocelulozy; 7,784 g chlorku sodu; 1,5llg trójhydratu octanu sodu; 0,0624 g lodowatego kwasu octowego; 4,813 g chlorowodorku L-lizyny; i 962,63 g wody, i posiada lepkość z przedziału od około 1000 do około 15000 mPa-s w temperaturze 37°C.
Kolejnym aspektem wynalazku jest zastosowanie kompozycji według wynalazku do wytwarzania leku do gojenia ran u pacjenta.
Niniejszy wynalazek dostarcza wodnych form żelowych lub gęstych, lepkich roztworów do kontrolowanego dostarczania czynników wzrostu do zranionego miejsca. Dokładna forma, która ma być stosowana zależy od oczekiwanego typu użycia. Uważa się, że trzy różne rodzaje zastosowań są wskazane, głównie żele do gojenia ran powierzchniowych lub ciętych, żele do gojenia ran w przedniej komorze oka i mniej lepkie, wodne formy do takich zastosowań, które wymagają bardziej płynnej formy z większą ilością wody.
Wodne formy żelowe do gojenia ran powierzchniowych lub ciętych zawierają efektywną do gojenia rany ilość ludzkiego polipeptydowego czynnika wzrostu posiadającego aktywność mitogenną i angiogenną. Ponadto formy te zawierają rozpuszczalny w wodzie dopuszczalny farmaceutycznie materiał polimeryczny nadający lepkość z przedziału 1000 do 12000000 cps. Pomiarów lepkości dokonuje się zazwyczaj albo w temperaturze pokojowej albo w temperaturach podwyższonych. Wodna forma żelowa do gojenia ran w przedniej komorze oka zawiera rozpuszczalny w wodzie, dostosowany do leczenia oczu, materiał polimeryczny nadający lepkość z przedziału 1,000 do 100,000 mPa-s w temperaturze pokojowej. Forma wodna o niskiej lepkości zawiera, dostosowany do zastosowania w farmacji lub w ofbalmologii, materiał polimeryczny nadający lepkość z przedziału 1 do 5000 mPa-s w temperaturze pokojowej. Preferowanym zastosowaniem formy o niskiej lepkości jest gojenie ran oka. Niemniej jednak można je również stosować do leczenia innych ran, zwłaszcza gdy ranę otoczy się namoczonym w formy bandażem.
Formy żelowe według niniejszego wynalazku wykazują korzystne właściwości przylegania do rany i dopasowywania się do nieregularnych kształtów ciała lub rany. Żele podawać
187 174 można bezpośrednio na zranione miejsce lub w połączeniu z miękkim (ustępliwym) porowatym lub mikroporowatym materiałem, na przykład w formie podawanego na zranione miejsce powleczenia. Dalszymi zaletami żeli jest ich wysoka zawartość wody (utrzymująca wilgoć przy ranie), zdolność absorbowania wysięku z rany, łatwość pokrywania rany i usunięcia przez przemywanie. Przy podaniu na ranę żele stwarzają uczucie chłodu zapewniając większy komfort pacjentowi i akceptowanie takiej formy podawania, zwłaszcza przy bolesnych (czułych) ranach.
Formy żelowe według niniejszego wynalazku stanowią również system dostarczania czynników wzrostu do zranionego miejsca w sposób kontrolowany. Kontrolowane dostarczanie oznacza takie uwalnianie leku, które utrzymuje dostateczny poziom terapeutyczny leku w długim czasie, do 24 godzin lub dłużej. Donoszono, że aby osiągnąć wzrost szybkości gojenia się rany należy wydłużyć czas kontaktu czynników wzrostu ze zranionym miejscem. Niniejsze formy żelowe wydłużają czas kontaktu czynnika wzrostu ze zranionym miejscem i w ten sposób stanowią formy o przedłużonym uwalnianiu dawki. Stanowi to ważną zaletę gdyż pozwala na rzadsze podawanie formy na ranę, rzadsze zakłócenia jej składników komórkowych, zwłaszcza w różnych fazach mitozy.
Wodne żele według niniejszego wynalazku wykazują różne lepkości w zależności od oczekiwanego sposobu jego stosowania. Lepkość jest miarą oporu cieczy do płynięcia. Jest ona zdefiniowana jako stosunek naprężenia stycznego do wielkości siły stycznej. Naprężenie styczne oznacza opór cieczy do płynięcia (przesuwania się) pod wpływem przyłożonej siły t.j. opór w ciele przeciw sile zewnętrznej. Naprężenie styczne definiuje się jako stosunek siły do przesuwanych powierzchni. Gdy ciecz przesuwa się, zakładając przepływ laminamy, warstwy cieczy przesuwają się z różnymi szybkościami. Względna szybkość przesuwania się warstw jest tylko jednym czynnikiem składającym się na wielkość naprężenia. Innym jest odległość lub odstęp między przesuwanymi płaszczyznami. Lepkość wyraża się w dynach/sek na centymetr kwadratowy. Jednostka taka nosi nazwę puaza. Podawanymi tutaj wielkościami lepkości są centipuazy (cps) mierzone w wiskozymetrze Brookfielda. Wszystkie lepkości podane są dla temperatury pokojowej np. 22-25°C, jeśli nie zaznaczono inaczej .
Omawiane tutaj polipeptydowe czynniki wzrostu posiadają aktywność mitogenną i angiogenną i wybrane są z grupy obejmującej EGF, kwasowy-FGF, zasadowy-FGF, PDGF, TGF-alfa, TGF-beta, angiogenina, NGF, IGF-I, iGF-1I lub ich mieszaniny. Uważa się, że zamiast całych naturalnie występujących cząsteczek można stosować ich biologicznie aktywne fragmenty lub ich syntetyczne pochodne chemiczne. Obok aktywności mitogennej dla czynników EGF, obu FGF, obu TGF i angiogeniny donoszono o aktywności angiogennej. Korzystne jest, że czynnik wzrostu można wytworzyć technikami rekombinacji DNA.
Stosowany tutaj termin EGF oznacza EGF posiadający sekwencje polipetydu, lub jej dowolny duży fragment, podaną przez Urdea, M.S. i in., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 80:7461-7465(1983). Ludzki EGF również oznacza każdy naturalnie występujący wariant ludzkiego EGF taki jak gamma-urogastron. Naskórkowy czynnik wzrostu, ludzki naskórkowy czynnik wzrostu i inne czynniki wzrostu izoluje się ze źródeł naturalnych, wytwarza technikami rekombinacji DNA lub otrzymuje na drodze syntezy chemicznej.
Stosowany w niniejszym zgłoszeniu termin EGF oznacza klasę polipeptydów wykazujących podobną do naturalnego ludzkiego polipeptydu EGF aktywność biologiczną, jak to zmierzono w ustalonych badaniach takich jak wiązanie z receptorem EGF opisane w patencie Stanów Zjednoczonych U.S. Patent No. 4,717,717 i które posiadają pewne stałe reszty aminokwasowe i wspólne rozmieszczenie mostków disiarczkowych, jak to przedyskutowano w pracy Carpenter i in., „Epidermal Growth Factor, its receptor, and related proteins”, Experimental Cell Research, 164:1-10(1986). Tak więc EGF obejmuje EGF wytwarzany technikami rekombinacji DNA, mysi EGF izolowany z podszczekowego gruczołu myszy, szczurzy EGF i naturalny ludzki naskórkowy czynnik wzrostu, który można izolować z ludzkiego moczu, oraz bioaktywne pochodne i pokrewne polipeptydy wyżej wymienionych czynników w tym prekursory, które ulegają in situ transformacji w ludzki naskórkowy czynnik wzrostu w procesie proteolitycznym.
187 174
PDGF jest głównym mitogenem w plazmie, który sprzyja proliferacji mezenchymalnych (pierwotnych) komórek takich jak fibroplasty, komórek glejowych i komórek mięśni gładkich in vitro. Dane odnośnie sekwencji aminokwasów wskazują, że PDGF składa się z dwóch różnych, lecz homologicznych, łańcuchów polipeptydowych: łańcucha A i łańcucha B. Stwierdzono, że te dwa łańcuchy są dinerami PDGF-Aa, PDGF-BB i PDGF-AB. Sekwencja łańcuchów A i B PFGF została ustalona i sekwencję łańcucha B podano w pracy Johnsson i in.,1984, EMBO J.,3:921-928. Stosowany tutaj skrót „rhPGGF-B” będzie oznaczał ludzki B-B homodimer czynnika PDGF wytwarzany technikami rekombinacji DNA.
Efektywna do gojenia rany ilość polipeptydowego czynnika wzrostu do zastosowania według niniejszego wynalazku zawiera się w przedziale od około 0,01 do około 1000 mikrogramów/mL. Korzystnym jest jeśli stężenie czynnika wzrostu wynosi około 1-500 mikrogramów/mL, a bardziej korzystnie 1-100 mikrogramów/mL. Żele według niniejszego wynalazku zdolne są do przedłużonego uwalniania polipeptydowego czynnika wzrostu.
Materiałami żelującymi według niniejszego wynalazku są rozpuszczalne w wodzie polimery zdolne do tworzenia lepkich roztworów wodnych lub nierozpuszczalne w wodzie lecz pęczniejące w wodzie polimery (np. kolagen), które również tworzą lepkie roztwory. Polimery pęczniejące to takie, które raczej absorbują wodę niż rozpuszczają się w niej. Poprzecznie ucieciowane formy polimerów opisane tutaj nie rozpuszczają się w wodzie lecz ulegają w niej spęcznianiu. Dlatego też poprzecznie ucieciowane formy polimerów wchodzą w zakres niniejszego wynalazku. Ucieciowanie poprzeczne oznacza kowalencyjne wiązanie łańcuchów polimeru za pomocą dwufunkcyjnego reagentu takiego jak aldehyd glutarowy. Dla znawców dziedziny zrozumiałym jest również, że pewne polimery można stosować w formie soli lub częściowo zobojętnione aby stały się rozpuszczalne w wodzie. Przykładowo korzystne jest stosowanie kwasu hialuronowego w formie hialluronianu sodowego przez co uzyskuje się odpowiednią rozpuszczalność w wodzie.
W formach wodnego żelu stosowanych przy gojeniu powierzchniowym lub ran ciętych polimerami są polimery wybrane z grupy polimerów winylowych, kopolimerów polioksyetyleno-polioksypropylenowych, polisacharydów, białek, poli(tlenku etylenu), polimerów akryloamidowych i ich pochodnych lub soli. Należy rozumieć, że poli(tlenek etylenu) obejmuje glikol polietylenowy. W formach żelowych stosowanych przy gojeniu ran w przedniej komorze oka można stosować te same polimery za wyjątkiem tego iż nie jest korzystne użycie kopolimerów polioksyetyleno-polioksypropylenowych lub poli(tlenku etylenu). W przypadku zastosowań do przedniej komory oka korzystne jest aby polimer ulegał biologicznej degradacji t.j. aby ulegał rozpadowi do nieszkodliwych składników, które byłyby wypłukiwane lub wciągane w metabolizm w przedniej komorze. W formach wodnych o niskiej lepkości stosowanych przy gojeniu się ran oka polimery tworzące żel mogą być takie same jak przy zastosowaniach powierzchniowych lub przy gojeniu ran ciętych za wyjątkiem tego iż nie jest korzystne stosowanie poli(tlenku etylenu).
Polimery winylowe (znane również jako podstawione polietyleny) przydatne w niniejszym wynalazku wybrane są z grupy obejmującej kwas poliakrylowy, kwas polimetakrylowy, poliwinylopirolidon i alkohol poliwinylowy. Przydatnymi w niniejszym wynalazku polisacharydy wybrane są z grupy obejmującej celulozę lub pochodne celulozy, glukozaminoglukany, agar, pektynę, kwas alginowy, dekstran, skrobię i chitozan. Preferowanym polisacharydem jest, rozpuszczalna w wodzie, α-amyloza. Glukozaminoglukany wybrane są z grupy obejmującej kwas hialuronowy, chondroitynę, 4-siarczan chondroityny, 6-siarczan chondroityny, siarczan dermatanu, siarczan keratyny, siarczan heparyny i heparynę. Glukozaminoglukany stosuje się aby zwiększyć łatwość gojenia się ran w kombinacji z innymi wytwarzającymi żele polimerami. Przydatnymi w niniejszym wynalazku białkami są białka wybrane z grupy złożonej z kolagenu, żelatyny i fibronektyny. Polimerami akryloamidowymi są polimery poliakryloamidowe lub polimetakryloamidowe. Preferowane jest używanie nadających się do zastosowań biologicznych polimerów poliakryloamidowych.
W formach żelowych stosowanych przy gojeniu ran powierzchniowych lub ciętych lepkość polimerów zawiera się w zakresie 1000-12000000 cps w temperaturze pokojowej. Korzystną wartością lepkości jest przedział 1000-2000000, a jeszcze korzystniejszym przedział
187 174
1000-500000 cps. Najkorzystniej gdy lepkość wynosi od 1000 do 150000 cps. W jednym z rozwiązań według niniejszego wynalazku forma żelowa do nakładania powierzchniowego zawiera 0,1-5% wagowo karboksymetylocelulozy (CMC) lub soli sodowej karboksymetylocelulozy (NaCMC) o ciężarze cząsteczkowym około 450000-4000000. W preferowanym rozwiązaniu zawartość CMC wynosi 1,5-4% wagowo i jej ciężar cząsteczkowy wynosi 450000-4000000. Wartość pH żelu CMC powinna wynosić od 4,5 do 8, bardziej korzystnie od 5 do 7.
W innym rozwiązaniu żel do nakładania powierzchniowego i na rany cięte zawiera 15-60% wagowo kopolimeru blokowego polioksyetyleno-polioksypropylenowego o średnim ciężarze cząsteczkowym wynoszącym około 500-50000. W preferowanym rozwiązaniu blokowy kopolimer obecny jest w ilości 15-40% wagowo i posiada ciężar cząsteczkowy z przedziału 1000-15000. Kopolimery blokowe według niniejszego wynalazku znane są powszechnie pod nazwą Pluronics. Preferowanym kopolimerem typy Pluronics jest Pluronic F88 i F127.
W dalszym rozwiązaniu żel do nakładania powierzchniowego i na rany cięte zawiera 0,5-10% wagowo kwasu hialuronowego o ciężarze cząsteczkowym z przedziału 500000 do 8000000. W preferowanym rozwiązaniu kwas hialuronowy obecny jest w ilości 1,5-6% wagowo i jego ciężar cząsteczkowy jest większy od 1000000.
Polimery akryloamidowe można stosować przy gojeniu się wszelkich rodzajów ran, a zwłaszcza ran przedniej komory oka. Absorbujący się polimer akryloamidowy, taki jak poliakryloamid, może z powodzeniem zastąpić obecnie stosowane w leczeniach oczu systemy nośnikowe takie jak kwas hialuronowy. Ciężar cząsteczkowy polimeru akryloamidowego może wynosić od 1 do 13 milionów, korzystnie od 4 do 6 milionów. Procentowa zawartość polimeru akryloamidowego w żelu wynosi 2-5%, korzystnie 3,5-4,5%. W zakres niniejszego wynalazku wchodzą również podstawione polimery akryloamidowe takie jak polimery podstawione grupą metylową i alkilową.
Systemy dostarczania oparte na żelu akryloamidowym, do zastosowania w przedniej komorze oka, mają następującą charakterystykę: żaden produkt rozpuszczania lub degradacji matrycy systemu nie może być toksyczny i nie może zatykać beleczkowatych oczek (ang. trabecular mesh work), żel musi być optycznie przezroczysty i żel może pozostawać w przedniej komorze oka jeśli nie powoduje niekorzystnych efektów klinicznych takich jak niedopuszczalny wzrost ciśnienia oczu.
Dla specjalistów w dziedzinie oczywistym jest, że żądany przedział lepkości osiągnąć można zmieniając ciężar cząsteczkowy i zawartość procentową polimeru w formie. Na przykład, żel o niskiej lepkości sporządza się stosując polimer o niskim ciężarze cząsteczkowym lub przygotowując żel o niskiej zawartości procentowej polimeru, lub też kombinując obie te zmiany. Zel o wysokiej lepkości uzyskuje się biorąc polimer o wysokim ciężarze cząsteczkowym i wysokiej zawartości procentowej polimeru. Przejściowe lepkości osiąga się zmieniając zgodnie z powyższym ciężar cząsteczkowy i stężenie procentowe polimeru.
W formach żelowych wymagających niższych lepkości niż formy do nakładania powierzchniowego i na rany cięte, głównie w formach stosowanych w przedniej komorze oka i w roztworach o niskiej lepkości stężenie polimeru i jego ciężar cząsteczkowy można zmieniać tak aby uzyskać żądaną lepkość. Na przykład, do zastosowań w przedniej komorze oka żel zawiera polimer celulozowy o zawartości 1-20% wagowo i posiada ciężar cząsteczkowy z przedziału 80000-240000. Preferowanym przedziałem stężeń jest zakres 1-3%. W innym rozwiązaniu do zastosowań w przedniej komorze oka żel zawiera kwas hialuronowy o stężeniu 0,5-5% wagowo, który posiada ciężar cząsteczkowy z przedziału 500000-8000000. Korzystne jest jeśli kwas hialuronowy obecny jest w stężeniu 0,5-2,0% i jego ciężar cząsteczkowy wynosi 2000000-4000000. Preferowanym przedziałem lepkości do zastosowań w przedniej komorze oka jest 1000-100000 mPa-s.
Roztwór o niskiej lepkości zawiera 0,1-2,0% wagowo kwasu poliakrylowego o ciężarze cząsteczkowym około 100000-4000000. W korzystnym rozwiązaniu zawartość polimeru wynosi 0,05-0,5%. W innym rozwiązaniu rozcieńczony lepki roztwór zawiera 2-40% wagowo kopolimeru poloksyetyleno-polioksypropylenowego o średnim ciężarze cząsteczkowym 500-500000. Korzystnie gdy stężenie wynosi 2-20% i ciężar cząsteczkowy 1000-15000. Alternatywnie, roztwór o niskiej lepkości zawiera polimer celulozowy w ilości 1 -20% o ciężarze cząsteczko8
187 174 wym około 80-240000. Korzystnym przedziałem stężeń jest 1-10%. W dalszym rozwiązaniu roztwór o niskiej lepkości zawiera kwas hialuronowy w ilości 0,5-5% o ciężarze cząsteczkowym około 500000-8000000. Korzystnie, stężenie wynosi 0,5-2,0% i ciężar cząsteczkowy 1000000-6000000. Jeśli roztwór o niskiej lepkości ma być stosowany jako krople do oczu, korzystne jest aby jego lepkość wynosiła 1-1000 mPa-s. Jeśli ma być stosowany inaczej, np. jako nasiąknięty opatrunek (bandaż) wówczas właściwą lepkością jest lepkość z przedziału 1,0-5000 mPa-s.
Polimery celulozowe stosowane w żelach według niniejszego wynalazku stabilizują polipeptydowe czynniki wzrostu zabezpieczając je przed utratą aktywności biologicznej w roztworze wodnym. Zabezpieczające użycie polimerów celulozowych przed utratą aktywności czynnika EGF opisano w patencie Stanów Zjednoczonych U.S. Patent No. 4,717,717. Użyte w niniejszym wynalazku polimery celulozowe są rozpuszczalnymi w wodzie eterowanymi polimerami celulozowymi takimi jak alkilocelulozy, hydroksyalkilocelulozy i alkilohydroksyalkilocelulozy, na przykład metyloceluloza, hydroksyetyloceluloza, karboksymetyloceluloza, hydroksypropyloceluloza. Preferowanymi pochodnymi są metyloceluloza i pochodne hydroksyalkilocelulozy takie jak, karboksymetyloceluloza, hydroksypropyloceluloza, hydroksyetyloceluloza i hydroksypropylometyloceluloza.
Stabilność formy żelowej z polimerem celulozowym zawierającej PDGF można wyraźnie zwiększyć dodając do niej naładowaną substancję chemiczną taką jak naładowany aminokwas lub jon metalu. Odpowiednimi aminokwasami, które można zastosować są lizyna, arginina, histydyna, kwas asparaginowy, kwas glutaminowy, alanina, metionina, prolina, seryna, asparagina i cysteina. Można również użyć aminoguanidynę i protaminę. Odpowiednimi do zastosowania w formach żelowych jonami metali są jony cynku i magnezu. Aminokwas stosuje się w formie wolnego kwasu lub jako sól, taka jak chlorowodorek. Stosowany tutaj termin „stabilność” oznacza zapobieganie utraty aktywności mitogennej PDGF w żelu lub zwiększenie ilości uwalnianego PDGF z żelu. W tym sensie niniejszy wynalazek dostarcza formy żelowej zawierającej PDGF przydatnej do leczenia ran.
Wzrost stabilności PDGF w CMC żelu osiąga się minimalizując oddziaływania ładunków pomiędzy PDGF lub minimalizując oddziaływania z redukującymi końcami CMC przez dodanie kompensujących, naładowanych dodatnio lub ujemnie, jonów przeciwnych. Korzystne jest dodanie środków konserwujących do formy podczas jej przygotowania lub sterylizowanie formy przez, przykładowo, filtrację lub też ogrzewanie formy w temperaturze około 122°C przez kilka minut pod ciśnieniem do około 100 kPa.
Formy żelowe według niniejszego wynalazku można stosować do powlekania włókien absorbującej gazy opatrunkowej tak aby uzyskać „bandaż do gojenia ran” umieszczany następnie na ranie. Do tego celu korzystne jest stosowanie formy o niskiej lepkości. Bandaż do gojenia ran przygotowuje się namaczając opatrunek z gazy w wodnym żelowym roztworze zawierającym polipeptydowy czynnik wzrostu wykazujący aktywność mitogenną. Następnie ranę pokrywa się bandażem tak aby powleczone włókna gazy miały kontakt z raną i stymulowały wzrost komórek przyśpieszając gojenie się rany.
Żele według niniejszego wynalazku są przydatne w formach jako krople do oczu, roztwory do przemywania oczu, maści na gojenie ran i tym podobnych.
Do ran, w których gojeniu można stosować formy według niniejszego wynalazku należą rany pochodzące z obrażeń wypadkowych lub zabiegów medycznych, które uszkodziły naskórek - jak rany oczu, pochodzące z owrzodzenia rogówki, radiacyjnego nacięcia rogówki, transplantacji rogówki, epikeratofakii i innych spowodownych przez operowanie ran oczu; rany na skórze takie jak oparzenia skóry, rany cięte, rany od strony donora przy transplantacji skóry, i wrzody (skórne, odleżynowe, od zastoju żyły, cukrzycowe). Jak wspomniano tutaj gojenie ran oka obejmuje rany przedniej komory oka jak również gojenie ran podspojówkowych. Żele według niniejszego wynalazku można stosować również w leczeniu ran ciętych wewnętrznych jak również wrzodów żołądka.
W tych przypadkach, gdy żel podaje się wewnętrznie lub na rany cięte korzystne jest aby polimery tworzące żel ulegały degradacji. Degradowalnymi są polimery naturalnie występujące. Przykładami są kolagen, glukozaminoglikany, żelatyna i skrobia. Polimery syntetycz187 174 ne takie jak polimery winylowe nie ulegają degradacji. Specjalistom tej dziedziny wiedzy biologiczna degradacja opisanych tutaj polimerów jest dobrze znana.
W celu zilustrowania przedmiotu wynalazku podano następujące przykłady. Nie należy uważać, że wynalazek ograniczony jest do tych przykładów; lecz tylko do załączonych zastrzeżeń.
Przykład 1
Żele oparte na karboksymetylocelulozie
Żele oparte na karboksymetylocelulozie (CMC lub NaCMC) przygotowano według niniejszego wynalazku. Preferowanym rodzajem soli sodowej karboksymetylocelulozy jest produkt opisywany jako karboksymetyloceluloza CMC(NaCMC)7H3SFPH o standarcie farmaceutycznym („pharmaceutical grade”). Do 226,2 kg wody do iniekcji (WFI) dodano w 350 L mieszalniku Fryma w temperaturze 80°C następujące składniki: 1946,3 g chlorku sodu i 1203,5 kg chlorowodorku L-lizyny. Całość mieszano przez 10 minut. Po włączeniu wewnętrznego homogenizatora (szybkość w przybliżeniu 2850 obrotów na minutę) dodano, w czasie krótszym od 5 minut, 5776,8 g NaCMC. Homogenizator wyłączono po 10 minutach. Mieszaninę mieszano z szybkością 44 obrotów/minutę i ochłodzono do temperatury 25°C. Gdy temperatura osiągnęła 25°C wyciągnięto próżnię do ok. 80 kPa. Mieszaninę następnie sterylizowano w temperaturze 122°C przez 20 minut.
Po wyjałowieniu mieszaninę ochłodzono do temperatury 25°C i zmieszano razem następujące składniki: 11,712 L wody (WFI), 377,9 g trójhydratu octanu sodu i 15,6 g kwasu octowego. Składniki te dodano w warunkach aseptycznych do żelu filtrując je przez filtr sterylizacyjny. Mieszaninę mieszano przez 30 minut. Następnie w warunkach aseptycznych dodano do żelu, filtrując i mieszając, roztwór rhPGGF-B (25 g) w 2500 mL wody (WFI). Z kolei przepłukano filtr 250 mL wody (WFI). Żel mieszano przez 2 godziny, a następnie przeniesiono go aseptycznie do naczynia transportującego ze stali nierdzewnej. Żel przeniesiono do odpowiedniego urządzenia do napełniania i napełniono nim, przeznaczone do form, pojemniki z zamknięciami. Żel posiadał lepkość 2883 mPa-s zmierzoną w temperaturze 37°C.
Przykład 2
Żele oparte na karboksymetylocelulozie
Żele oparte na karboksymetylocelulozie przygotowano według następującej procedury:
Do 1900 g wody o wysokiej czystości dodano w temperaturze 70-80°C 3,24 g metyloparabenu i 0,36 g propyloparabenu i całość mieszano do rozpuszczenia (obserwacja wzrokowa).
Po rozpuszczeniu parabenów dodano 3,14 g octanu sodu i 8,086 g chlorku sodu i odłączono źródło ogrzewania. Po rozpuszczeniu odczynników roztwór oziębiono do temperatury 15-30°C. Do oziębionego roztworu dodano 136 jil kwasu octowego i 1,74 mL m-krezolu. Po wystarczającym mieszaniu zmierzono pH uzyskanego buforu (pH=5,63) i rozcieńczono go wodą do całkowitej objętości (ok. 2L). Końcowa wartość pH buforu wynosiła 5,60. Do 585,6 g roztworu buforu umieszczonego w 1L butli z poliwęglanu dodano 3,0 g chlorowodorku L-lizyny i całość mieszano do rozpuszczenia (obserwacja wzrokowa). Do roztworu buforu dodano wciągu 30 sekund przez zmodyfikowany lejek, 14,4 g Aqualon CMC, grade 7H3SFPH, stosując mikser: Lighning Labmaster mixer set, przy szybkości 1300 rpm, i żel mieszano przez 90 minut (czas całkowity). Otrzymano żel o zawartości 2,4% CMC.
Przygotowano formę żelową o stężeniu łOOpg/g rhPDGF-B/gm żelu w oparciu o masę obliczoną według gęstości optycznej (OD@280 nm) roztworu substancji leczniczej rhPDGF-B w sposób następujący: do 2,4% CMC żelu dodano 6 g substancji leczniczej rhPDGF-B (OD=10,0 mg/mL) stosując strzykawkę i wprowadzając substancję leczniczą w różne miejsca żelu. Żel wytrząsano ręcznie przez kilka minut i później z użyciem miksera Heidolpha z szybkością 300 obrotów/minutę przez 1 godzinę w atmosferze fitrowanego (0,2 jim filtr) azotu. Następnie żel mieszano w młynie walcowym przez 1 godzinę z niewielką szybkością. Żel rhPDGF-B/CMC zapakowano do laminowanych tub o pojemności 15 g (około 10 g na tubę) i tuby zapieczętowano stosując urządzenie Kalix heat sealer. Całkowita wydajność 55 tubek.
187 174
Przykład 3
Żele oparte na karboksymetylocelulozie
Żele oparte na karboksymetylocelulozie (CMC lub NaCMC) przygotowano według niniejszego wynalazku. Preferowanym rodzajem soli sodowej karboksymetylocelulozy jest produkt opisywany jako karboksymetyloceluloza CMC(NaCMC)7H3SFPH o standardzie farmaceutycznym („pharmaceutical grade”). Do 28,4 kg wody w 50 L mieszalniku Fryma dodano 48,6 g metyloparabenu i 5,4 g propyloparabenu; całość ogrzano do temperatury 80°C i mieszaninę utrzymywano w niej przez 1 godzinę. Po oziębieniu do temperatury 30°C z uruchomionym silnikiem (anchor motor, szybkość 26 obrotów/minutę) dodawano następujące składniki: 47,1 g octanu sodu, 242,6 g chlorku sodu, 150 g chlorowodorku L-lizyny i 2,0 g lodowatego kwasu octowego. Po wyłączeniu silnika (anchor motor) ustawiono obroty dysku rozpuszczającego (dissolver disk) na wartość pomiędzy 1300 i 1600 obrotów/minutę, i dodano do wiru cieczy w czasie krótszym od 1 minuty 720 g sproszkowanej CMC. Po dodaniu CMC włączono silnik i otrzymaną mieszaninę mieszano przez 1 godzinę. Dysk rozpuszczający wyłączono po 6 minutach.
Po jednogodzinnym mieszaniu mieszaninę sterylizowano w temperaturze 122°C przez 20 minut, po czym oziębiono ją do temperatury pokojowej. Po dodaniu 27 g m-krezolu uzyskaną mieszaninę ponownie mieszano przez 1 godzinę. Do wyjałowionego żelu dodano aseptycznie PDGF i żel mieszano przez 1 godzinę. Zmierzona w temperaturze 37°C lepkość żelu wynosiła 8200 mPa • s.
Przykład 4
Żele oparte na karboksymetylocelulozie
Żele oparte na karboksymetylocelulozie (CMC lub NaCMC) przygotowano według niniejszego wynalazku. W tym przypadku do przygotowania żelu zastosowano sól sodową karboksymetylocelulozy (7H3sfPh) o standardzie farmaceutycznym („phar-maceutical grade”). Do emulsyfikatora typu L TurboEmulsifier o pojemności 350 L dodano 247,4 kg oczyszczonej wody. Z ustawionym na maksymalne obroty (1400 obroty/minutę) wewnętrznym homogenizatorem dodano do emulsyfikatora następujące składniki: 405 g metyloparabenu i 45 g propyloparabenu. Mieszaninę homogenizowano przez 5 minut, a następnie mieszano z szybkością 16 ot^iro^có^wrmin^u^tę podnosząc temperaturę do 60°C. Po osiągrnęciu temperatury 60°C mieszanie kontynuowano przez 1 godzinę. Roztwór oziębiono do temperatury 30°C. Do uzyskanego roztworu dodano następujące składniki: 2020 g chlorku sodu, 392 g trihydratu octanu sodu, 1250 g chlorowodorku 1-llzy-ny, 16,25 g kwasu octowego i 225 g m-krezolu. Uzyskaną mieszaninę mieszano 15 minut. Roztwór przeniesiono do 600 L zbiornika i 6000 g soli sodowej karboksymetylocelulozy dodano do podajnika w homogenizatorze Flashblenda. Ciecz przepompowano do Turboemulsyfikatora poprzez homogenizator Flashblenda i CMC dodano do ciekłego roztworu buforowego.
Tak wytworzony żel mieszano przez 2 godziny. Do żelu dodano 26,05 g rhPDGF-B w 631 g wody, przemywając następnie 100 g wody. Żel mieszano przez 2 godziny. Z mieszalnika usunięto powietrze wyciągając próżnię, a następnie likwidowano próżnię dodając azot (gaz).
Żelem napełniono 15 g rurki. Uzyskano produkt o lepkości 75812 mPa-s zmierzonej w temperaturze 37°C.
Przykład 5
Żele oparte na kwasie poliakrylowym
Żele poliakrylowe (Carbopol) przygotowano zgodnie z niniejszym wynalazkiem. Preferowanymi rodzajami kwasu poliakrylowego są takie jak Carbopol 934P i 940 w stężeniach 0,02-1,5%. Przy wyższych stężeniach kwasu poliakrylowego uwalnianie EGF jest wolniejsze. Lepkości kwasów poliakrylowch są zasadniczo trwałe pomiędzy pH 6-10, korzystnie w pH z zakresu 6,5-7,5.
W 4 L zlewce zmieszano następujące składniki: 6,3 g metyloparabenu, 0,7 g propyloparabenu i 177,5 g mannitolu w 3500 mL wody. Roztwór mieszano mieszadłem łopatkowym do rozpuszczenia związków stałych. Kwas poliakrylowy (17,5 g, Carbopol 940, BF Goodrich) przesiano przez ekran sitowy o rozmiarze 0,387mm do roztworu, który jednocześnie mieszano z szybkością 1000 obrotów/minutę. W ten sposób zdyspergowano i spęczniono cząstki kwasu
187 174 poliakrylowego. Roztwór zobojętniono do pH 7,0 dodając 7,6 g stałego NaOH w postaci 10% roztworu. Z szarży pobrano 900 g porcję żelu do autoklawu i sterylizowano ją otrzymując sterylny żel.
Pozostałą procedurę przeprowadzono w pomieszczeniu o obszarze 100. Roztwór podstawowy EGF o stężeniu 1,18 miligramów/mL (12 mL) przesączono przez filtr o rozmiarze 0,22 mikrometrów do sterylnej tuby i filtr przemyto 5 mL porcją wody dołączając wodę do tej samej tuby. Zawartość tuby dodano do żelu strzykawką. Żel mieszano dokładnie mieszadłem typu łopatkowego aby jednolicie zdyspergować EGF. Żel umieszczono w naczyniu ciśnieniowym poddanym autoklawowaniu. Do wydobycia żelu z naczynia ciśnieniowego zastosowano azot pod ciśnieniem; poprzez sterylny kawałek węża pobierano próbki żelu do 10 mL strzykawek. Próbki testowano na aktywność i wykazano, że zawierają one 15,6 mikrogramów EGF/mL. W 10 g próbce nie stwierdzono obecności mikroorganizmów. Lepkość przygotowanego żelu zawierała się w przedziale od około 490000 do około 520000 mPa-s. Tę formę żelową badano na świniach i świnkach morskich w modelu częściowego grubego nacinanie skóry i wykazano u tych zwierząt zwiększoną szybkość i jakość gojenia rany.
Przykład 6
Formy oparte na kopolimerach typu Pluronic
Blokowe kopolimery polioksyetyleno-polioksypropylenowe (Pluronic'sy) wykazują wielkie potencjalne możliwości stosowania jako systemy miejscowego (powierzchniowego) dostarczania leku gdyż posiadają właściwość odwracalnego termicznego żelowania i dobrą charakterystykę uwalniania leku, jak też niską toksyczność. Niskocząsteczkowe poliole Pluronic nie tworzą żeli w wodzie w żadnym stężeniu. Pluronic F-68 tworzy żel przy minimalnym stężeniu 50-60% w temperaturze pokojowej. Pluronic F-68 tworzy żel przy minimalnym stężeniu 50-60% w temperaturze pokojowej. Pluronic F-68 tworzy żel przy stężeniu 40% w temperaturze pokojowej, a Pluronic F-108 przy stężeniu 30%. Pluronic F-127 tworzy żel jedynie przy stężeniu 20% w wodzie w temperaturze 25°C. Żele typu Pluronic: F-68, F-88, F-108 i F-127 można stosować do kontrolowanego uwalniania EGF przy oparzeniach i do innych dawkowych form przeznaczonych do miejsc, z których pobrano przeszczep. Żel powinien być izotoniczny i korzystne jest aby pH było z przedziału 6-8, korzystniej z przedziału 6,5-7,5.
Interesującą właściwością żeli typu Pluronic jest ich zdolność do żelowania w funkcji temperatury i stężenia polimeru. Żele tworzą się podczas ogrzewania roztworu Pluronic. I tak, żelem jest roztwór wodny o niskiej lepkości w temperaturze pokojowej, lecz w chwili kontaktu z ciałem człowieka i ogrzaniu do temperatury ciała człowieka lepkość wzrasta i roztwór ulega żelowaniu. EGF można kombinować z Pluronic’iem w stanie ciekłym i podawać na ranę. W tym momencie wystąpi żelowanie, które efektywnie zmniejszy szybkość uwalniania eGf do rany. Zapewnia to przedłużony czas kontaktu EGF z nabłonkiem rany. Żel podaje się jako ciecz lub jako namoczony cieczą opatrunek stanowiący mechaniczny nośnik. Zaletami stosowania żeli Pluronic jest możliwość wykorzystania metod filtracyjnych do ich sterylizacji i fakt, że rana pozostaje w przedłużonym w kontakcie z EGF.
Żel Pluronic F-127 zawierający EGF przygotowuje się przez zmieszanie następujących składników: 1,8 g monohydratu fosforanu sodowego, 5,48 g siedmiohydratu fosforanu disodowego i 40,9 g mannitolu z 1000 mL destylowanej wody.
Po doprowadzeniu pH do 7,0 roztwór oziębia się do 4°C. Następnie, do oziębionego roztworu dodaje się stopniowo mieszając za pomocą mieszadła łopatkowego Pluronic F-127 (200 g) (BASF). Roztwór miesza się przez około 30 minut, a następnie umieszcza się go w temperaturze 4°C na noc. EGF w roztworze wodnym można dodawać do roztworu przed sporządzaniem żelu lub miesza się go po rozpuszczeniu Pluronic F-127 w roztworze. Aby uzyskać stężenie EGF 100 mikrogramów/mL, 1,812 mL roztworu EGF (1,38 mg/mL) dodaje się do 23,188 g 20% żelu Pluronic F-127. Otrzymuje się rzadki, ciekły roztwór. Lepkość roztworu wzrasta po podgrzaniu do temperatury 35°C, jak to widać w tabeli 1.
187 174
Tabela 1
Temperatura, °C Lepkość (cps, 0,5 obroty/minutę
0-16 nie do oznaczenia
18 4000
19 250000
21 500000
28 655000
30 685000
37 650000
Dodatkowe otrzymane formy tupu Pluronic posiadały lepkość od 1000000 do 12000000. Badania kinetyki uwalniania z formy (11,5 x 106 mPa-s) wskazały, że 85% EGF uwalniało się z formy w ciągu jednej godziny.
Przykład 7
Formy żelowe HPMC
Przygotowano kilka żeli HPMC. Żele te wykonano z HPMC o bardzo niskim, aż do HPMC o wysokim, ciężarze cząsteczkowym. Korzystny przedział ciężarów cząsteczkowych wynosi 80000-240000. Przy stosowaniu polimerów o bardzo niskim ciężarze cząsteczkowym (Methocel E15LV) potrzeba użyć aż 10-20% HPMC aby uzyskać formę żelu. Dla polimerów o wysokim ciężarze cząsteczkowym (Methocel K100M) żele powstają z roztworów 1-3%. Przygotowano żele różnych typów i z różnych stężeń aby, przebadać kinetykę uwalniania. Dla każdego żelu pH doprowadzono do wartości 7,2. Szybkość uwalniania EGF była proporcjonalna do lepkości rozpuszczonego żelu.
W zlewce o pojemności 1500 mL umieszczono 0,83 g monohydratu fosforanu sodowego, 7,24 g siedmiohydratu fosforanu disodowego, 6,22 g NaCl i 500 mL sterylnej wody do przepłukiwań (irygacji). Całość mieszano magnetycznie do rozpuszczenia związków stałych, po czym pH doprowadzono do wartości 7,2. Roztwór ogrzano z mieszaniem do temperatury 80°C, po czym dodano 30,0 g HPMC (Methocel K100M; Dow) przesianego przez sita o rozmierze 0,387 mm (40 mesh). Po przerwaniu ogrzewania miesznie kontynuowano jeszcze przez 10 minut. Dodano pozostałe 500 g wody (jako lód). Całość mieszano ręcznie; mieszanina staje się bardziej lepka. Pozostawiono ją do oziębienia do temperatury pokojowej, a następnie trzymano w temperaturze 4°C przez noc. Oddzielono porcję 130 g i mieszano ją z 13,4 mL sterylnego roztworu EGF (1,12 mg/mL) stosując mieszadło łopatkowe uzyskując stężenie EGF 104 mikrogramy/mL.
Otrzymane żele posiadały lepkości z przedziału od 54000 do 950000 mPa-s w temperaturze pokojowej. Szybkość uwalniania EGF z różnych form żelowych HPMC przedstawiono w tabeli 2.
Tabela 2
Próbka Lepkość (cps) w wiskozymetrze Brookfielda Uwalnianie EGF
25°C 37°C
2085-91-1 E4M 4% 112x103 102 x 103 75% w 5 godzin
2085-92-2 E4M 5% 274 x 103 300 x 103 75% w 5 godzin
2085-91-1 E4M 6% 652 x 103 946 x 103 50% w 5 godzin
2085-91-2 F4M 4% 112 x 103 286 x 103 75% w 5 godzin
2085-93 K15 M 3% 102 x 103 70 x 103 75%w 5 godzin
2085-91-3 K4M 4% 92 x 103 54 x 103 75% w 5 godzin
187 174
Przykład 8
Formy żelowe oparte na kwasie hialuronowym
Kwas hialuronowy (HA) jest jednym z mukopolisacharydów o strukturze łańcucha prostego i zbudowany jest z powtarzających się jednostek disacharydowych zawierających N-acetyloglukozoaminę i kwas glukuronowy. HA występuje w przyrodzie w mikroorganizmach i w skórze oraz w tkance łącznej u ludzi i nnych zwierząt. Ciężary cząsteczkowe HA są z zakresu 50000-8000000 w zależności od pochodzenia, metod wyodrębniania i metod jego wyznaczania. Roztwory HA o wysokiej lepkości wykazują właściwości smarujące i znakomity efekt nawilżający. HA występuje w płynie maziowym stawów, ciele szklistym gałki ocznej, pępowinie, skórze, naczyniach krwionośnych i chrząstce. Działa on równie dobrze jako substancja smarująca jak i jako czynnik amortyzujący wstrząsy prawdopodobnie z uwagi na zdolność zatrzymywania wody i jego wiązalność z pewnymi specyficznymi białkami. Uważa się, że jest to cząsteczka bardzo bezpieczna z punktu widzenia zastosowań wewnętrznych w ludzkim ciele. Z tego względu może być on stosowany w leczeniu uszkodzeń wewnętrznych takich jak gojenie stawów lub przedniej komory oka. Formę sporządzano mieszając 1% roztwór hialuronianu sodowego (ciężar cząsteczkowy 4000000; MedChem) i EGF uzyskując stężenie EGF 100 mikrogramów/mL. Lepkość 1% roztworu HA wynosi 44000 mPa-s. Zademonstrowano, że forma HA/EGF sporządzona według niniejszego wynalazku stymuluje odbudowę śródbłonka w przedniej komorze oka.
Przykład 9
Kinetyka uwalniania EGF z form o określonej dawce
Ustalono efektywność każdej z form o określonej dawce w przedłużonym uwalnianiu EGF w układzie dyfuzji komórek in vitro i wyznaczono wartości T25 i T50. EGF jest uwalniany w rezultacie dwóch procesów: dyfuzji EGF z żelu i rozpuszczania matrycy żelowej. Zakładając oba te procesy jako prawdopodobne mechanizmy, dzięki którym EGF jest biodostępny in vivo, żele typu HPMC przedłużają uwalnianie EGF z najwyższymi wartościami T25 i T50, odpowiednio, 1,2 i 5,9. Uzyskane wyniki wskazują, że struktura cząsteczkowa polimeru odgrywa ważniejszą rolę niż jego stężenie na wydłużanie wartości T. Żele sporządzone w środowisku bez soli (woda destylowana) i badane w stałych warunkach charakteryzują się niskimi wartościani T. Może to wynikać z nałożenia się efektu szybszego rozpuszczania i niskiej lepkości wolnych od soli żelów. Dlatego korzystne jest aby żele według niniejszego wynalazku nie były pozbawione soli. Wydaje się, że wartości T dla żeli według niniejszego wynalazku mogą wzrastać po zmodyfikowaniu polimeru poprzez wprowadzanie hydrofobowych lub hydrofitowych łańcuchów bocznych, grup będących parami jonowymi, jonów metali, czynników poprzecznie sieciujących, grup wykazujących powinowactwo do EGF; co wpłynęłoby na kontrolę uwalniania EGF z otrzymanych form produktu.
W tabeli 3 zestawiono dane kinetyczne odnośnie uwalniania EGF z form o określonej dawce. W tabeli tej, różne litery występujące po skrócie HPMC oznaczają procent podstawienia w polimerze. Przykładowo, K=2208 lub 22% metylowany i 8% hydroksypropylowany polimer; F=2906; i E=2910. Dane liczbowe występujące po literach (t.j. liczba 100 po literze K) oznacza lepkość 2% roztworu w wodzie wyrażoną w tysiącach cps. AQ oznacz żele sporządzone w roztworze bez soli. Wszystkie inne żele przygotowano w buforowanym roztworze soli kuchennej (PBS) przy wartości pH około 7,0. Wartości T podano w godzinach.
Tabela 3
Polimer Lepkość, mPa-s T25 T50
1 2 3 4 5
HPMC K100M 1% - 0,0854 1,000
(c.cz. 240,000) 2% 287 x 103 0,4687 1,9172
3,5% 116 x 106 1,2270 5,8528
4,0% - 0,8536 4,1386
5,0% 3,07 x 106 0,8807 3,5808
HPMC K-15M 3% 122 x 103 0,857 2,0635
(c.cz. 120,000) 4AQ% 331 x103 0,2727 1,6900
187 174
c.d. tabeli 3
1 2 3 4 5
HPMC K-4M (c.cz. 86,000) 4% 96 x 103 1,0476 2,6349
HPMC F-4M (c.cz. 86,000) 4% 122x 103 0,7619 1,8730
HPMC E-4M 4% 128x 103 1,0159 2,2657
(c.cz. 86,000) 5% 312 xl03 0,8615 1,8462
HPMC E-4M 5AQ% 240x103 0,3211 1,6044
(c.cz. 86,000) 6AQ% 680 x 103 0,6944 3,0040
Carbopol 934P (c.cz. 3 x 10ć) 0,5% 494 x 103 0,2727 0,7300
Pluronic F-127 (c.cz. 12000) 20% 1,1 xl06 0,1936 0,3548
Przykład 10
Poliakryloamidowe formy żelowe
Formy żelowe poliakryloamid/EGF otrzymano z poliakryloamidów Cyanamer N-300 i Cyanamer N-300 LMW (które są dostępne handlowo w firmie American Cyanamid). Ciężar cząsteczkowy Cyanameru N-300 wynosi około 5-6 milionów, a Cyanameru N-300 LMW około 13 milionów.
Następujące kompozycje żeli poliakryloamidowych otrzymano dodając polimer poliakryloamidowy do wstępnie przygotowanych przez zmieszanie roztworów soli. Żele te przetestowano następnie na uwalnianie EGF.
Tabela 4
Kompozycja Stężenie % (wagowo)
2085-140A 2085-140B
Cyanamer N-300 4,0 -
Cyanamer N-300 LMW -- 4,0
Chlorek sodu 0,049 0,049
Chlorek potasu 0,075 0,075
Chlorek wapnia 0,048 0,048
Chlorek magnezu 0,080 0,080
Octan sodu 0,890 0,890
Dwuhydrat cytrynianu sodu 0,170 0,170
Sterylna woda 94,688 94,688
Lepkość, mPa-s 552 x 103 132 x 103
Do 1,809 g żelu poliakryloamidowego Cyanamer N-300 (2085-140A) dodano 72,4 mikrolitry mieszaniny 125I-EGF i EGF i składniki mieszano w dwóch 3 milimetrowych strzykawkach. 300-400 miligramów tak przygotowanego żelu umieszczono w miejscu donorowym komórki dyfuzyjnej Franza. W określonych przedziałach czasu 50 mikrolitrowe próbki uzyskanego buforu pobierano i mierzono aktywność w liczniku gamma. Uzyskany bufor składał się z 3,5 mililitrów PBS o pH 7,2 zawierającego 0,4% BSA (bydlęcej albuminy surowicy) i 0,02%
187 174 azydku sodu. Podobnie do 1,11 g żelu poliakryloamidowego Cyanamer N-300 LMW(2085140B) dodano 44,5 mikrolitry mieszaniny 25I-EGF i EGF i badano uwalnianie EGF.
Otrzymano inny żel poliakryloamidowy (2085-138C) o następującej formie.
Tabela 5
Kompozycja 2085-138C
Cyanamer N-300 7,0 g
Thimerosal 0,2 g
Sterylna woda 192,8 g
Lepkość 258 x 103
pH 7,54
Żel 2085-138C użyto do sporządzenia żelu zawierającego EGF o stężeniu 10 mmikrogramów/mL. Odważono 5 gramów żelu 2085-138C do 8 mL naczynek na surowicę krwi i dodano 50 mikrogramów roztworu o zawartości 1 mg/mL EGF (pomiar zawartości białka 1,41 mg/mL).
Opatrunek na ranę pokryto EGF uzyskując korzystną charakterystykę uwalniania EGF. Opatrunkiem był film żelowy wykonany z poliakryloamidu na agarze (Geliperm, GeistlichPharma; Wolhusen, Szwajcaria). Opatrunek pokrywano EGF namaczając go w wodnym roztworze EGF. Z opatrunku około 70% EGF uwalniało się w ciągu 24 godzin.
Stabilizowana forma żelowa oparta na polimerze celulozowym zawierająca PDGF
Żele oparte na karboksymetylocelulozie (CMC) przygotowano według niniejszego wynalazku. Zastosowaną w tych badaniach karboksymetylocelulozą była sól sodowa karboksymetylocelulozy o standardzie farmaceutycznyn (Aqualon Co., Wilmington, DE; „pharmaceutical grade”) 0 stężeniu 2,4% i ciężarze cząsteczkowym z przedziału 900000-2000000 daltonów. Formy CMC żeli przygotowywano z rhPDGF-BB (Chiron Corporation, Emyryville, California). Stwierdzono, że stabilność formy żelowej z celulozowym polimerem zawierającej PGGF wyraźnie wzrasta po dodaniu do niej naładowanych chemicznych substancji takich jak naładowane aminokwasy lub jony metali. Stosowany tutaj termin „stabilność” oznacza zapobieganie utraty aktywności mitogennej PDGF w żelu lub zwiększenie ilości uwalnianego białka PDGF z żelu. W tym sensie niniejszy wynalazek dostarcza form żelowych zawierających PDGF przydatnych w leczeniu ran.
Formy testowano na efektywność gojenia ran na świnkach morskich w modelu częściowego grubego nacinanie skóry in vivo.
W tym modelu gojenia ran na świnkach morskich wykonuje się dwa nacięcia na świnkę (4-6 zwierząt na grupę) za pomocą dermatomu. Na rany o rozmiarach 3 x 1 cm (typowo o głębokości 0,4-0,8 mm) podawano raz dziennie przez pierwsze pięć dni (dni 0-4) 0,3 mL żelu i ranę przykrywano sterylnym tamponem absopcyjnym. Tampony otaczano opatrunkiem okluzyjnym i każdorazowo zawijano bandażem. Próbki z rany pobierano w dniu 7 na badania histologiczne. Mierzono średnią grubość warstwy zgranulowanej tkanki przez dokonanie projekcji histologicznych slajdów Gomori'ego (ang. Gomori's trichrome-stained histology slides) na skomputeryzowany planimetr cyfrowy o powiększeniu 50X. Grubość otrzymywano zaznaczając obszar o standardowej długości tkanki zgranulowanej na warstwie rany i dzieląc ją przez długość. Mierzono trzy sekcje histologiczne dla każdej rany, wyniki pomiarów z dwóch ran na świnkę morską uśredniano otrzymując pojedynczą wartość na zwierzę.
W modelu tym PDGF podany w stężeniu 10-300 pg/g CMC formy w sposób stały powodował 2-3-krotne (lub większe) zwiększenie grubości warstwy zgranulowanej tkanki na ranach. Zgranulowana tkanka stanowi nowo powstałą tkanką łączną i naczynia mające główne znaczenie w procesie gojenia rany. Dodatkowo, zgranulowana tkanka stanowi bogate źródło krwi niezbędnej aby naskórek wzrastał na powierzchni rany. Tak więc zgranulowana tkanka jest zasadniczym elementem niezbędnym w procesie gojenia rany.
187 174
Poniższe tabele pokazują: 1) efektywność PDGF na CMC żelu, 2) brak efektu dodawania lizyny na efektywność PDGF w świeżych szarżach (tabela 6), 3) utrzymywanie efektywności stabilizowanej lizyną formy przez 30 miesięcy (przy przechowywaniu w temperaturze 2-8°C) (tabela 7), i 4) utrzymywanie efektywności PDGF w sterylnych niezabezpieczanych formach CMC ( z lizyną) (tabela 8).
Tabela 6
Efekt PDGF i Lizyny na grubość zgranulowanej tkanki w częściowo zgranulowanych ranach świnki morskiej
Podawanie Grubość zgranulowanej tkanki (mm) Wart. średnia ± ochyl. stand. (S. E. M.) N (liczba zwierząt)
orginalne CMC 63,3 + 15,9 7
PDGF (30 pg/g) w CMC 161,9 ±25,4* 7
CMC + 0,1% lizyny 64,4 ± 8,9 7
PDGF (30 pg/g) w CMC)+ 0,1% lizyny 162,6 ± 23,5* 8
CMC + 0, 5% lizyny 59,9 ±5,6 8
PDGF (30(ig/g) w CMC)+ 0,5% lizyny 144,6 ±21,8* 7
* Zasadniczo różna od próbki kontrolnej (p<0,05)
Dane wskazują, że rekombinowany ludzki, pochodzący z płytek krwi, czynnik wzrostu-BB na CMC żelu zwiększa efektywnie ilość zgranulowanej tkanki na ranach w eksperymetalnych świnkach morskich (tutaj 2, ó-krotniee. Dane pokazują również, że dodanie lizyny w ilości do 0,5% nie wpływa na efektywność PDGf w CMC formie.
Tabela 7
Efekt starzenia się PDGF w stabilizowanej lizyną CMC formie na grubość zgranulowanej tkanki w częściowo zgranulowanych ranach świnki morskiej
Podawanie Grubość zgranulowanej tkanki (mm) Wart. Średnia ± ochyl. stand. (S. E. M.) N (liczba zwierząt)
CMC* 81,4 + 15,5 6
PDGF (30 pg/g) w CMC 313,3 ±32,4** 6
30-miesięczna szarża
PDGF (30 pg/g) w CM 217,3 ±22,3** 6
Świeża szarża
'wszystkie formy zawierały 0,5% lizyny różna od próbki kontrolnej (p<0,05)
Dane te pokazują, że forma zawierająca 0,5% lizyny utrzymuje efektywność wytwarzania zgranulowanej tkanki w eksperymentalnych ranach przez przynajmniej 30 miesięcy'.
Tabela 8
Efekt PDGF w sterylnych, niezabezpieczonych, formach CMC na grubość zgranulowanej tkanki w częściowo zgranulowanych ranach świnki morskiej
Podawanie Grubość zgranulowanej tkanki (mm) Wart. Średnia ± ochyl. stand. (S. E. M.) N (liczba zwierząt)
1 2 3
sterylne CMC** niezabezpieczone 150,1 +48,5 4
187 174
c.d. tabeli 8
1 2 3
PDGF 100 (ng/g) w sterylnym CMC niezabezpieczone 652,6 ± 58,6*** 4
PDGF (100 pg/g) w sterylnym CMC zabezpieczone 635,1 + 3,5*** 4
PDGF (100 (ig/g) w niesterylnym CMC zapieczone 752,2 ± 7955*** 4
'Te badania modelowe przeprowadzono w innym laboratorium dokonując zasadniczo głębszych nacięć niż przy bada niach z lizyną, tak więc linia podstawowa badań kontrolnych w pomiarach grubości zgranulowanej tkanki jest wyższa
Wszystkie formy zawierały 0,5% lizyny Różna od próbki kontrolnej (p<0,05)
Dane te pokazują, że sterylne (niezabezpieczone) formy PDGF/CMC (z 0,5% lizyny) wykazują efektywność wytwarzania zgranulowanej tkanki na ranach.
Nie jest znany mechanizm, według którego naładowane chemicznie substancje mogą stabilizować celulozowy polimer z PDGF. Można sądzić, nie siląc się na tworzenie teorii, że efekt stabilizujący wynika ze współzawodnictwa naładowanych cząstek z resztami lizyn z PDGF w redukowaniu grup końcowych polimeru celulozowego i/lub zmniejszaniu oddziaływań ładunków pomiędzy wolnymi grupami karboksylowymi polimeru celulozowego i resztami lizyn z PDGF. Istnienie oddziaływań ładunków pomiędzy PDGF i polimerami celulozowymi, takimi jak CMC, demonstrowano w naszych laboratoriach. Naładowane chemicznie substancje zdolne do współzawodniczenia z dodatnimi i ujemnymi ładunkami mogą zmniejszać oddziaływania ładunków pomiędzy PDGF i polimerem celulozowym zwiększając w ten sposób stabilność PDGF. Dodatnio naładowane przeciwjony testowano pod kątem zwiększania odzyskiwania PDGF z CMC żelu.
Stawiając pytanie odnośnie stabilności PDGF-CMC należy najpierw zrozumieć w jaki sposób PDGF traci aktywność w obecności CMC. Jednym z możliwych mechanizmów utraty tej aktywności jest adsorpcja i uwięzienie PDGF w CMC. Natura tej absorpcji polega na wyłapywniu silnie dodatnio naładowanego PDGF B homodimeru (zawierającego 22 reszty argininowe i 14 reszt lizynowych) z ujemnie naładowanej matrycy CMC, która zawiera dużą ilość wolnych grup karboksylowych. Nasze badania nad PDGF w CMC wskazują na utratę aktywności mitogennej i zmniejszenie uwalniania białka gdy brakuje, lub jest bardzo mało, jonów przeciwnych aby kompensować to oddziaływanie jonowe.
Wzrostowi stabilności PDGF na CMC może towarzyszyć minimalizowanie oddziaływań jonowych między PDGF lub minimalizowanie oddziaływań z redukującymi końcami CMC w wyniku dodania kompetencyjnych naładowanych dodatnio lub ujemnie przeciwjonów. W jednym eksperymencie lizyna (0,5% wag./wag.) zwiększała stabilność PDGF w CMC więcej niż o 50%. Każdy związek zdolny do redukowania lub współzawodniczenia w oddziaływaniu ładunków PDGF-CMC lub oddziaływaniu z redukującymi końcami w CMC może poprawiać stabilność PDGF w CMC. Zrozumiałe jest, że naładowane chemiczne substancje w prezentowanych formach dodawano początkowo do form w postaci soli. Sole te dysocjują następnie w środowisku wodnym dostarczając odpowiednio naładowanej substancji chemicznej. Stosowany tutaj termin „naładowane substancje chemiczne” obejmuje akceptowane farmaceutycznie wersje: soli, takich jak chlorek cynku i magnezu; bufory takie jak mono/dietanoloamina, kwas fumarowy, kwas maleinowy, cytrynian potasu i glukonian sodu; aminokwasy takie jak lizyna, arginina, histydyna, kwas asparaginowy, kwas glutaminowy, alanina, metionina, prolina, seryna, asparagina, cysteina; aminoguanidyna i protamina; jonowe środki powierzchniowo czynne takie jak kwas oleinowy i oleth 5; i syntetyczne polimery polikationowe i polianionowe takie jak poliaminokwasy. Stosowany tutaj termin „farmaceutycznie dopuszczalny” oznacza, że tak określony materiał można stosować w leczeniu ludzi i innych ssaków bez wywołania efektów chorobowych takich jak zatrucie, powstawanie pęcherzy, wybielanie śluzówki lub skóry.
18-7 174
Poza podanymi poniżej eksperymentami stwierdzono, że dodanie 0,5% aminoguanidyny również poprawia odzyskiwanie PDGF z żelu polimeru celulozowego. Aminoguanidyna, z uwagi na silną nukleofilowość, jest lepszą substancją współzawodniczącą niż lizyna w zapobieganiu nieenzymatycznemu glikozydowaniu białek.
Niniejszy wynalazek obejmuje formy zawierające polimery celulozowe, lub wszelkie inne polimery z potencjalnie redukującymi końcami, i akceptowane farmaceutycznie nukleofilowe jony przeciwne takie jak lizyna i aminoguanidyna.
Eksperyment Nr 1
Badanymi próbkami był rhPDGF-B zmieszany z CMC placebo po 0,5 godzinie, i rhPDGF-BB w CMC po 60 dniach przechowywania w temperaturze 4°C. W tabeli 9 przedstawiono wpływ stężenia jonów Zn+ na odzysk PDGF. Próbka z tego samego dnia wykazuje większy procent odzysku niż próbka 60-dniowa przy tym samym stężeniu Zn++. Dane te sugerują, że PDGF wiąże się jonowo z CMC i że, być może, z czasem wiązanie to poprzecznie sieciuje CMC tak, że konieczne jest większe stężenie Zn++ do uwalniania PDGF.
Odzysk PDGF mierzono metodą HPLC o odwróconych fazach na kolumnie C4 o rozmiarze ziarna 3 x 10‘8mm stosując do elucji 10-70% gradient acetonitrylu z 0,1% TFA (kwasu trifluorooctowego).
Tabela 9
% odzysku rhPDGF Molarność, Zn Próbka 0-dniowa Próbka 30-dniowa
0,075 84 71
0,150 88 81
0,300 97 90
Tabela 10 pokazuje wpływ innych naładowanych związków na odzysk PDGF z żelu CMC. 0,5 g próbki 60-dniowej PDGF rozpuszczono w 10 mL wody zawierającej 0,01% BSA (roztwór ten stosowano jako kontrolny) i do każdej próbki dodano wymienione związki.
Tabela 10
Próbka % odzysku PDGF
A kontrola 50
B 0,2M NaCl (mono+) 42
C 0,2M ZnCl2 (di++) 64
D 0,2M CaCl2 (di++) 63
E 0,2M MgCl2 (di*4) 69
F 0,5% lizyna (+, jon obojnaczy) 64
G 0,5% glicyna (jon obojnaczy) 50
Dane te sugerują, że naładowne bardziej dodatnio jony Zn, Ca, Mg i lizynowy mogą minimalizować PDGF-CMC oddziaływania jonowe. Sugerują one również, że PDGF może zostać uwikłany lub uwięziony w matrycach CMC.
Eksperyment Nr 2
Poniższy zestaw eksperymentów zaprojektowano aby ustalić wpływ różnych aminokwasów na odzysk PDGF z CMC. W badanych próbkach znajdowało się: 100 pg PDGF na gram CMC, pH 6,0, bufor 0,13m NaCl oraz 0,5% aminokwasu. Próbki inkubowano w tempe187 174 raturze 46°C przez dwa dni w tubach polipropylenowych, a następnie analizowano, tak jak poprzednio, metodą HPLC.
Dane z badań porównawczych wpływu niepolarnych i polarnych aminokwasów na odzysk PDGF z CMC zebrano w Tabeli 11. Formy zawierające silniej naładowane aminokwasy (lizynę, kwas asparaginowy i kwas glutaminowy) dają najwyższy odzysk PDGF. Wszystkie aminokwasy występują w formie jonów obojnaczych przy pH bliskiemu 7,0. Z tego też względu w zależności od ładunku grupy R będą zwiększać odzysk PDGF. Im silnie naładowana jest grupa R (np. w lizynie) tym lepszy jest efekt stabilizujący.
Tabela 11
Odzysk z CMC % odzysku w porównaniu do kontrolnego czasu 0
Próbki
Kontrola, czas 0 100,0
CMC bez aminokwasu 37,3
Niepolarne łańcuchy boczne
Glicyna 43,4
Alanina 37,5
Metionina 40,8
Prolina 40,2
Nienaładowane łańcuchy boczne
Seryna 48,7
Asparagina 39,9
Tyrozyna 45,5
Cysteina 42,0
Naładowane łańcuchy boczne
Lizyna pK 9 64,0
Kwas asparaginowy pK 4 70,4
Kwas glutaminowy pK 4 58,2
Badano również wpływ innych naładowanych związków na odzysk PDGF z CMC i dane przytoczono w Tabeli 12. W eksperymentach tych stosowano 100 pg PDGF w 1 gramie CMC. Uzyskane dane wskazują, że gdy stężenie NaCl wzrasta od 0 do 1,13 M to % odzysku PDGF wzrasta od 32% do 96%. Mg** w stężeniu 0,1 M daje 94,8% odzysku PDGF.
Tabela 12
Wpływ różnych naładowanych związków na odzysk PDGF z CMC
Próbki % odzysku w porównaniu do czasu 0
1 2
Kontrola, czas 0 100,0
CMC + 0,0M NaCl (tylko woda) 32,1
CMC + 0,0M NaCl (tylko bufor) 27,6
CMC + 0, 13MNaCl 65,9
CMC + 0,33M NaCl 82,8
18-7174
c.d. tabeli 12
1 2
CMC + 0,63M NaCl 90,7
CMC + 0,94M NaCl 93,8
CMC + 1,13M NaCl 96,8
CMC + 0,0M NaCl + 0,1M MgCl2 94,8
CMC + 0,13M NaCl + 0,5% Gly 76,7
CMC + 0,1M NaCl + 0,5% Lys 85,5
Eksperyment 3
W Tabeli 13 przytoczono dane odnośnie mitogennej stabilności jednomiesięcznych próbek rhPDGF (30 pg/g) z lizyną i bez lizyny. Dane te wyznaczono metodą określania pobierania tymidyny przez fibroplasty i przedstawione są jako zawartość mierzonego rhPDGF. Dane te wskazują, że obecność lizyny w formie zwiększa jej mitogenną aktywność.
Tabela 13
rhPDGF (ng/g)
bez Lizyny (n=10) z Lizyną (n=4)
25°C 16,8 ±4 31,2 + 7
30°C 10,4 ±2 27,0 ± 0,5
Celulozowe formy polimeryczne zawierające rhPDGF-BB
Celulozowe polimeryczne formy żelowe zawierające rhPDGF-BB przygotowano według ogólnie zaakceptowanych technik przyrządzania form. Generalnie, wszystko sprowadza się do przygotowania „dokładnej mieszaniny” (ang. „intimate mixture”) wszystkich wymaganych składników. Przez „dokładną mieszaninę” rozumie się to iż składniki są tak jednorodnie wymieszane, że nie da się zlokalizować żadnego składnika.
Kompozycje według niniejszego wynalazku zawierają „efektywną do gojenia rany ilość” PDGF t.j. ilość wystarczającą do zwiększania szybkości gojenia się rany. Jak dobrze wiadomo w dziedzinie sztuki medycznej efektywne ilości czynników medycznych zmieniają się w zależności od konkretnego stosowanego czynnika, leczonego schorzenia i pacjenta (leczonego objektu). Konsekwentnie, efektywna ilość czynników medycznych nie musi być dla każdego czynnika zdefiniowana. Tak więc, efektywna do gojenia rany ilość PDGF jest w kompozycji według niniejszego wynalazku taką ilością, która zapewnia dostarczenie do ciała pacjenta na przeciąg wymaganego okresu czasu dostatecznej ilości PDGF, i jest ona zazwyczaj niższa niż ilość zwykle stosowana. Jeden gram typowej kompozycji według mniejszego wynalazku zawiera około 1,0 pg do około 1000 pg PDGF. Korzystnie, kompozycja według niniejszego wynalazku zawiera od około 1 pg do około 300 pg PDGF na gram kompozycji.
Do kompozycji według niniejszego wynalazku można dodawać dodatkowe składniki takie jak bufory, środki konserwujące (zabezpieczające), czynniki ustalające toniczność, przeciwutleniacze, inne polimery (stosowane np. do ustalania właściwej lepkości lub jako wypełniacze) i rozczynniki. Przykładami, które ilustiruji^ą tego rodzaju dodatkowe materiały są bufory fosforanowe, cytrynianowe i boranowe; timerosal, kwas sorbowy, metyloparaben lub propyloparaben, m-krezol i chlorobutanol - jako środki konserwujące; chlorek sodu i/lub cukry do - ustalania toniczności; polimery takie jak alkohol poliwinylowy, kwas(poliakrylowy) i poliwinylopirolidon; i rozczynniki takie jak mannitol, laktoza, sukroza, kwas etylenodiaminotetraoctowy, i tym podobne.
187 174
W Tabeli 14 podano skład ogólny celulozowej polimerycznej formy żelowej zawierającej rhPDGF-BB. Lepkość takiej formy zawiera się w przedziale 1000-150000 mPa-s w temperaturze pokojowej.
Tabela 14
Składnik Przedział stężeń
rhPDGF-BB 1,0-1000 mg/gram żelu
polimer celulozowy 1,5-3,0% (wag./wag.)
naładowane substancje chemiczne 0,1-3% (wag./wag.)
środek (środki) konserwujące 0,15-0,25% (wag./wag.)
Skład konkretnych form zawierających rhPDGF-B przedstawiono w Tabelach 15, 16 i 17.
Tabela 15
Składnik Ilość % (wag./wag.)
Woda (oczyszczona) 100 g 96,02
Ilość g/100 g oczyszczonej wody
Metyloparaben 0,1620 g 0,16
Propyloparaben 0,0180 g 0,02
Trójhydrat octanu sodu 0,1570 g 0,15
Chlorowodorek lizyny 0,5000 g 0,48
Chlorek sodu 0,8086 g 0,78
m-Krezol 0,0900 g 0,09
Lodowaty kwas octowy 0,0065 g 0,01
Sól sodowa karboksymetylocelulozy 2,400 g 2,31
rhPDGF-B (roztwór podstawowy; duża ilość) 0,0036 g ilość g/100 g żelu
Tabela 16
Składnik Ilość/250 kg porcję Ilość/g żelu
Kwas octowy 15,6 g 0,06 mg
Chlorek sodu 1946,3 g 7,70 mg
Trójhydrat octanu sodu 377,9 g 1,51 mg
Monochlorowodorek L-lizyny 203,5 g 4,81 mg
Woda do iniekcji 240700,0 g* 962,80 mg
Sól sodowa CMC 5776,8 g 23,11 mg
rhPDGF-BB (duża porcja leku) 25,0 g 0,10 mg
'Całkowita ilość wody do iniekcji obejmuje 2500g w płynnej dużej porcji substancji leczniczej
187 174
Tabela 17
Składnik g/100 g żelu
rhPDGF-BB 0,01
Sól sodowa karboksymetylocelulozy 2,40
Chlorek sodu 0,8086
Trójhydrat octanu sodu 0,1570
Lodowaty kwas octowy 0,0065
Metyloparaben 0,1620
Propyloparaben 0,0180
m-Krezol 0,0900
Chlorowodorek L-lizyny 0,5000
Woda do iniekcji 100,00
(ilość składników wyrażono w g/100 g wody do iniekcji, za wyjątkiem rhPDGF-B, którego ilość podano w g/100g żelu).
Wynalazek opisano tutaj odnosząc go do pewnych preferowanych rozwiązań i przykładów. Jest zrozumiałe, że specjalistom w tej dziedzinie wiedzy mogą nasunąć się pewne oczywiste warianty. W szczególności, specjalista w dziedzinie może zmieniać ciężary cząsteczkowe i stężenia procentowe różnych polimerów aby uzyskać żądane lepkości. Specjalista w dziedzinie może również zamieniać różne polimery i czynniki wzrostu w miejsce cytowanych tutaj. Ponieważ oczywiste warianty nasuną się specjalistom w dziedzinie nie należy uważać, że wynalazek jest ograniczony do tego opisu lecz jedynie do następujących po nim zastrzeżeń.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.
Cena 4,00 zł.

Claims (18)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu, farmaceutycznie akceptowalny polimer, znamienna tym, że. zawiera a) efektywną do gojenia rany ilość pochodzącego z płytek krwi czynnika wzrostu (PDGF); b) dopuszczalny farmaceutycznie polimer celulozowy; i c) dopuszczalne farmaceutycznie naładowane dodatnio substancje chemiczne wybrane z grupy składającej się z lizyny, argininy, histydyny, protaminy, alaniny, metioniny, proliny, seryny, asparaginy, cysteiny, aminoguanidyny, cynku i magnezu, gdzie kompozycję stanowi wodny żel o lepkości z przedziału od 1000 mPa-s do 500000 mPa-s w temperaturze pokojowej.
  2. 2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera dopuszczalny farmaceutycznie polimer celulozowy, którego stężenie wynosi od około 1,5% (wag./wag.) do około 3,0% (wag./wag.) i którego ciężar cząsteczkowy wynosi od około 450000 do około 4000000; i dopuszczalne farmaceutycznie naładowane dodatnio substancje chemiczne występujące w stężeniu od około 0,1% (wag./wag.) do około 3,0% (wag./wag.).
  3. 3. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że PDGF jest homodimerem PDGF-B.
  4. 4. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że polimer celulozowy wybrany jest z grupy składającej się z karboksymetylocelulozy, hydroksypropylometylocelulozy i metylocelulozy.
  5. 5. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że stężenie PDGF zawiera się w przedziale od około 1,0 μ/gram do około 1000 μ/gram.
  6. 6. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że jej lepkość zawiera się w przedziale 50000-150000.
  7. 7. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera dodatkowo środek konserwujący.
  8. 8. Kompozycja według zastrz. 7, znamienna tym, że środek konserwujący, jeden lub więcej, wybrany jest z grupy składającej się z metyloparabenu, propyloparabenu i m-krezolu.
  9. 9. Zastosowanie kompozycji zdefiniowanej w zastrz. 1, do wytwarzania leku do gojenia rany u pacjenta.
  10. 10. Kompozycja według zastrz. 2, znamienna tym, że zawiera a) efektywną do gojenia rany ilość ludzkiego PDGF-B homodimeru; b) karboksymetylocelulozę (CMC); i c) lizynę.
  11. 11. Zastosowanie kompozycji zdefiniowanej w zastrz. 10, do wytwarzania leku do gojenia rany u pacjenta.
  12. 12. Kompozycja według zastrz. 1 albo 10, znamienna tym, że jej lepkość zawiera się w przedziale od 1000 do 150000.
  13. 13. Kompozycja według zastrz. 1 albo 10, znamienna tym, że zawiera dodatkowo środek konserwujący.
  14. 14. Kompozycja według zastrz. 13, znamienna tym, że środek konserwujący, jeden lub więcej, wybrany jest z grupy składającej się z metyloparabenu, propyloparabenu i m-krezolu.
  15. 15. Kompozycja według zastrz. 1 albo 10, znamienna tym, że składa się z (g/100 g żelu): 0,01 g rhPDGF-B; 2,40 g soli sodowej karboksymetylocelulozy; 0,81 g chlorku sodu; 0,157 g trójhydratu octanu sodu; 0,0065 g lodowatego kwasu octowego; 0,162 g metyloparabenu; 0,018 g propyloparabenu; 0,09 g m-krezolu; 0,5 g chlorowodorku L-lizyny; i 100 g wody do iniekcji i posiada lepkość z przedziału od około 20000 do około 200000 cps w temperaturze 37°C.
  16. 16. Kompozycja według zastrz. 10, znamienna tym, że składa się z (mg/g żelu): 0,1 g rhPDGF-B; 23,103g soli sodowej karboksymetylocelulozy; 7,784 g chlorku sodu; 1,511 g trójhydratu octanu sodu; 0,0624 g lodowatego kwasu octowego; 4,813 g chlorowodorku L-lizyny; i 962,63 g wody, i posiada lepkość z przedziału od około 1000 do około 15000 cps w temperaturze 37°C.
    187 174
  17. 17. Zastosowanie kompozycji zdefiniowanej w zastrz. 3, do wytwarzania leku do gojenia rany u pacjenta.
  18. 18. Zastosowanie kompozycji zdefiniowanej w zastrz. 15 do wytwarzania leku do gojenia rany u pacjenta.
PL96326064A 1995-10-06 1996-09-24 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu i jej zastosowanie PL187174B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/539,898 US5705485A (en) 1987-09-18 1995-10-06 Gel formulations containing growth factors
PCT/US1996/015288 WO1997012601A2 (en) 1995-10-06 1996-09-24 Gel formulations containing growth factors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL326064A1 PL326064A1 (en) 1998-08-17
PL187174B1 true PL187174B1 (pl) 2004-05-31

Family

ID=24153118

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL96326064A PL187174B1 (pl) 1995-10-06 1996-09-24 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu i jej zastosowanie

Country Status (19)

Country Link
US (1) US5705485A (pl)
EP (1) EP0859596B1 (pl)
JP (1) JP4001382B2 (pl)
KR (1) KR100444417B1 (pl)
CN (1) CN1142791C (pl)
AT (1) ATE209900T1 (pl)
AU (1) AU706806B2 (pl)
BR (1) BR9610790A (pl)
CA (1) CA2234235C (pl)
CZ (1) CZ294676B6 (pl)
DE (1) DE69617723T2 (pl)
DK (1) DK0859596T3 (pl)
ES (1) ES2167611T3 (pl)
HU (1) HU223880B1 (pl)
NO (1) NO981539L (pl)
PL (1) PL187174B1 (pl)
PT (1) PT859596E (pl)
WO (1) WO1997012601A2 (pl)
ZA (1) ZA968398B (pl)

Families Citing this family (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2202362C2 (ru) * 1998-03-07 2003-04-20 Даевунг Фармасьютикал Ко., Лтд. Композиция для местного применения, содержащая фактор роста эпидермиса человека
US20030147860A1 (en) * 2002-02-07 2003-08-07 Marchosky J. Alexander Compositions and methods for forming and strengthening bone
DK1107791T3 (da) * 1998-09-04 2007-09-03 Scios Inc Hydrogelpræparater til controlled release-administration af vækstfaktorer
US6057280A (en) 1998-11-19 2000-05-02 Huish Detergents, Inc. Compositions containing α-sulfofatty acid esters and methods of making and using the same
DE19925519A1 (de) 1999-06-04 2000-12-07 Lohmann Therapie Syst Lts Wundauflage zur gesteuerten Abgabe von Wirkstoff an Wunden und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2000078357A2 (en) * 1999-06-18 2000-12-28 The Collaborative Group, Ltd. Hyaluronic acid film and matrix for sustained gene transfer
US8188043B2 (en) * 1999-07-28 2012-05-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Nicotine in therapeutic angiogenesis and vasculogenesis
KR20020062301A (ko) 1999-11-09 2002-07-25 덴끼 가가꾸 고교 가부시키가이샤 수난용성화된 가용성 셀룰로오스 유도체의 용도 및 그제조방법
DE10048260A1 (de) * 2000-09-29 2002-04-11 Beiersdorf Ag Kosmetische oder dermatologische Zubereitungen mit einem Gehalt an Aminoguanidin und/oder dessen Derivaten und Strukturanaloga zur Hautaufhellung von Altersflecken und/oder zur Verhinderung der Hautbräunung, insbesondere der durch UV-Strahlung hervorgerufenen Hautbräunung
US6703039B2 (en) * 2000-12-06 2004-03-09 Bausch & Lomb Incorporated Reversible gelling system for ocular drug delivery
AU2002247007B2 (en) * 2001-01-26 2006-12-07 Genetix Pharmaceuticals, Inc. Use of compositions containing PDGF-BB for promoting angiogenesis
DE10140623A1 (de) * 2001-08-18 2003-03-06 Nawa Heilmittel Gmbh Pharmazeutisches Präparat zur Behandlung von Wunden
US6835536B2 (en) 2001-08-21 2004-12-28 Micrologix Biotech Inc. Antimicrobial cationic peptides and formulations thereof
US7037504B2 (en) * 2001-10-23 2006-05-02 Waratah Pharmaceuticals, Inc. Epidermal growth factor protein and gene, and methods of use therefor
US20080086792A1 (en) 2006-10-13 2008-04-17 Thomas Charles Kuracina Method and apparatus for diverting sweat, liquid, moisture or the like from an eye
US7303814B2 (en) 2002-02-21 2007-12-04 Encelle, Inc. Immobilized bioactive hydrogel matrices as surface coatings
US20030220632A1 (en) * 2002-05-23 2003-11-27 Wolfgang Strasser Method of using gel sheets for laser treatment
DK1545587T3 (da) * 2002-09-16 2011-05-09 Agennix Inc Lactoferrinsammensætninger og fremgangsmåder til behandling af diabetiske sår
EP1654002B2 (en) * 2003-08-07 2014-01-29 Allergan, Inc. Compositions for delivery of therapeutics into the eyes
WO2005060550A2 (en) 2003-12-11 2005-07-07 Teikoku Pharma Usa, Inc. Methods and compositions for treating skin wounds
CN100411615C (zh) * 2003-12-12 2008-08-20 上海第二医科大学附属瑞金医院 氨基胍对难愈创面的防治作用
WO2005077402A1 (en) * 2004-02-11 2005-08-25 Virchow Biotech Private Limited Honey based gel formulations
WO2006015302A1 (en) * 2004-07-29 2006-02-09 X-Sten, Corp. Spinal ligament modification devices
US9012506B2 (en) 2004-09-28 2015-04-21 Atrium Medical Corporation Cross-linked fatty acid-based biomaterials
US8795703B2 (en) 2004-09-28 2014-08-05 Atrium Medical Corporation Stand-alone film and methods for making the same
US9000040B2 (en) 2004-09-28 2015-04-07 Atrium Medical Corporation Cross-linked fatty acid-based biomaterials
MX2007015943A (es) * 2005-06-17 2008-03-07 Genentech Inc Curacion de heridas.
WO2007013100A1 (en) * 2005-07-26 2007-02-01 Virchow Biotech Private Limited Gel formulation comprising platelet derived growth factor
WO2007016684A2 (en) * 2005-07-29 2007-02-08 X-Sten, Corp. Tools for percutaneous spinal ligament decompression and device for supporting same
ATE495701T1 (de) * 2005-07-29 2011-02-15 Vertos Medical Inc Perkutane gewebeexzisionsvorrichtungen
FR2891149B1 (fr) * 2005-09-26 2007-11-30 Biodex Sarl Composition pharmaceutique a action cicatrisante comprenant un derive de dextrane soluble et un facteur de croissance derive des plaquettes.
US9278161B2 (en) * 2005-09-28 2016-03-08 Atrium Medical Corporation Tissue-separating fatty acid adhesion barrier
US9427423B2 (en) 2009-03-10 2016-08-30 Atrium Medical Corporation Fatty-acid based particles
US20070077302A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-05 Azaam Alli Methods for stabilizing ophthalmic compositions
DE102005055275A1 (de) * 2005-11-17 2007-05-24 Ursapharm Arzneimittel Gmbh & Co. Kg Phosphatfreie pharmazeutische Zusammensetzung sowie deren Verwendung
KR100687281B1 (ko) * 2005-11-30 2007-02-27 한국과학기술연구원 생리 활성 물질이 결합된 조직 재생용 주입형 온도 감응성플루로닉 유도체 하이드로겔 및 이의 제조 방법
KR100742313B1 (ko) * 2006-03-21 2007-07-24 퓨리메드 주식회사 신규한 혈소판 유래 성장 인자(ｐｄｇｆ) ｂ 폴리펩타이드및 이의 유전자
US7942830B2 (en) 2006-05-09 2011-05-17 Vertos Medical, Inc. Ipsilateral approach to minimally invasive ligament decompression procedure
KR100784134B1 (ko) * 2006-10-09 2007-12-12 주식회사 대웅 상피세포성장인자를 함유하는 안정한 구내염 치료용 액상조성물
RU2445950C2 (ru) * 2006-10-26 2012-03-27 Сэндзю Фармасьютикал Ко., Лтд. Жидкая водная глазная композиция
US8343536B2 (en) 2007-01-25 2013-01-01 Cook Biotech Incorporated Biofilm-inhibiting medical products
EP2114268A4 (en) * 2007-02-12 2010-03-03 Vertos Medical Inc TISSUE EXTRACTION DEVICES AND METHODS
US20090118709A1 (en) * 2007-11-06 2009-05-07 Vertos Medical, Inc. A Delaware Corporation Tissue Excision Tool, Kits and Methods of Using the Same
JP5582711B2 (ja) * 2008-09-25 2014-09-03 株式会社エー・アイ・システムプロダクト ローション状の塗薬
USD611146S1 (en) 2008-10-23 2010-03-02 Vertos Medical, Inc. Tissue modification device
USD621939S1 (en) 2008-10-23 2010-08-17 Vertos Medical, Inc. Tissue modification device
USD619252S1 (en) 2008-10-23 2010-07-06 Vertos Medical, Inc. Tissue modification device
USD619253S1 (en) 2008-10-23 2010-07-06 Vertos Medical, Inc. Tissue modification device
USD610259S1 (en) 2008-10-23 2010-02-16 Vertos Medical, Inc. Tissue modification device
US20110038910A1 (en) 2009-08-11 2011-02-17 Atrium Medical Corporation Anti-infective antimicrobial-containing biomaterials
CA2775317C (en) * 2009-09-22 2014-10-28 Vlife Sciences Technologies Pvt. Ltd. Topical formulation for diabetic foot ulcers
WO2012009707A2 (en) 2010-07-16 2012-01-19 Atrium Medical Corporation Composition and methods for altering the rate of hydrolysis of cured oil-based materials
EP2729219A4 (en) * 2011-07-06 2015-04-01 Orf Líftaekni Hf METHOD OF USING NON-VEGETABLE GROWTH FACTOR STABILIZED FOR SKIN CARE
BR112014010542A2 (pt) 2011-11-02 2017-04-18 Halscion Inc métodos e composições para tratamento de ferimento
US9867880B2 (en) 2012-06-13 2018-01-16 Atrium Medical Corporation Cured oil-hydrogel biomaterial compositions for controlled drug delivery
US9422497B2 (en) 2012-09-21 2016-08-23 Exxonmobil Research And Engineering Company Synthetic lubricant basestocks and methods of preparation thereof
BR112015023140A8 (pt) 2013-03-15 2018-01-23 Genentech Inc proteínas de fusão, método para a fabricação da proteína de fusão, composições, ácido nucleico,vetor, célula hospedeira, métodos de produção de uma proteína de fusão, de tratamento da doença inflamatória intestinal, de inibição da infecção microbiana, de tratamento da lesão renal, para acelerar ou melhorar a cicatrização, para a prevenção ou tratamento de uma condição cardiovascular, para tratamento da síndrome metabólica e para tratamento da endotoxemia.
WO2014152511A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 The Jackson Laboratory Methods for promoting wound healing and hair growth
US9675537B2 (en) 2014-06-30 2017-06-13 Johnson & Johnson Consumer Inc. Hair growth composition and method
CA2962954A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Samuel Lynch Compositions for treating wounds
WO2017035280A1 (en) * 2015-08-24 2017-03-02 Nugene, Inc. Skin damage healing aids and dressings
CA3015400A1 (en) * 2016-02-23 2017-08-31 Matripharm International Inc. Dual-rate release formulation with high drug loading
US20220088274A1 (en) * 2017-05-18 2022-03-24 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Targeted in Situ Therapeutic Delivery of Secreted Factors from Stem Cells for Treatment of Damaged Tissue
PE20212075A1 (es) 2018-01-26 2021-10-26 Genentech Inc PROTEINAS DE FUSION Fc IL-22 Y METODOS DE USO
PT3743088T (pt) 2018-01-26 2022-12-05 Hoffmann La Roche Composições il-22 fc e métodos de utilização
CN111757751A (zh) 2018-02-21 2020-10-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于使用IL-22 Fc融合蛋白的治疗的剂量方案
CN114601959A (zh) * 2020-11-23 2022-06-10 山东融元康医疗科技有限公司 一种医用皮肤护理敷料及其制备方法和应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1190361B (it) * 1985-05-30 1988-02-16 Zambon Spa Composizione farmaceutica in crema per uso dermale ed oftalmico
US4717717A (en) * 1986-11-05 1988-01-05 Ethicon, Inc. Stabilized compositions containing epidermal growth factor
NZ222413A (en) * 1986-11-05 1991-06-25 Ethicon Inc Compositions containing a polypeptide growth factor and a water-soluble cellulose polymer stabiliser
US5124316A (en) * 1986-11-14 1992-06-23 President And Fellows Of Harvard College Method for periodontal regeneration
NZ226171A (en) * 1987-09-18 1990-06-26 Ethicon Inc Gel formulation containing polypeptide growth factor
US5457093A (en) * 1987-09-18 1995-10-10 Ethicon, Inc. Gel formulations containing growth factors
WO1993000050A1 (en) * 1991-06-21 1993-01-07 Genetics Institute, Inc. Pharmaceutical formulations of osteogenic proteins
HUT67319A (en) * 1991-08-30 1995-03-28 Life Medical Sciences Inc Compositions for treating wounds
WO1993008825A1 (en) * 1991-11-04 1993-05-13 Zymogenetics, Inc. Pdgf gel formulation
JP3102655B2 (ja) * 1991-12-27 2000-10-23 住友製薬株式会社 超音波制御による薬物放出製剤

Also Published As

Publication number Publication date
HU223880B1 (hu) 2005-02-28
AU7370796A (en) 1997-04-28
DK0859596T3 (da) 2002-03-04
CA2234235C (en) 2002-05-14
NO981539L (no) 1998-06-02
CA2234235A1 (en) 1997-04-10
EP0859596B1 (en) 2001-12-05
KR100444417B1 (ko) 2004-11-03
DE69617723T2 (de) 2002-05-08
CZ102498A3 (cs) 1999-08-11
HUP9803002A3 (en) 2001-08-28
PL326064A1 (en) 1998-08-17
KR19990064041A (ko) 1999-07-26
ES2167611T3 (es) 2002-05-16
ZA968398B (en) 1998-04-06
NO981539D0 (no) 1998-04-03
WO1997012601A2 (en) 1997-04-10
BR9610790A (pt) 1999-07-13
JP4001382B2 (ja) 2007-10-31
HUP9803002A2 (hu) 1999-04-28
US5705485A (en) 1998-01-06
PT859596E (pt) 2002-05-31
CZ294676B6 (cs) 2005-02-16
AU706806B2 (en) 1999-06-24
CN1211191A (zh) 1999-03-17
DE69617723D1 (de) 2002-01-17
WO1997012601A3 (en) 1997-05-01
CN1142791C (zh) 2004-03-24
EP0859596A2 (en) 1998-08-26
JPH11512740A (ja) 1999-11-02
ATE209900T1 (de) 2001-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL187174B1 (pl) Kompozycja farmaceutyczna zawierająca czynnik wzrostu i jej zastosowanie
US5457093A (en) Gel formulations containing growth factors
US5427778A (en) Gel formulations containing growth factors and acrylamide polymer
EP0591392B1 (en) Pharmaceutical formulations of osteogenic proteins
JP3181912B2 (ja) 可逆ゲル化組成物および使用方法
EP0608313B1 (en) Formulations of blood clot-polymer matrix for delivery of osteogenic proteins
KR101708622B1 (ko) 주사용 바이오물질
EP0664699A1 (en) Hydrogel-based microsphere drug delivery systems
PT1107791E (pt) Composições de hidrogel para a administração com libertação controlada de factores de crescimento
WO1995007108A2 (en) Formulations for delivery of osteogenic proteins
US10293051B2 (en) FGF-18 formulation in xyloglucan gels

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20070924