KR19990064041A

KR19990064041A - 성장 인자를 함유하는 겔 제형

Info

Publication number: KR19990064041A
Application number: KR1019980702519A
Authority: KR
Inventors: 존 시니; 에이미 핀케너
Original assignee: 굿윈 매튜 에스.; 에티콘, 인코포레이티드
Priority date: 1995-10-06
Filing date: 1996-09-24
Publication date: 1999-07-26
Also published as: WO1997012601A3; JPH11512740A; NO981539L; NO981539D0; CN1211191A; HUP9803002A2; HUP9803002A3; JP4001382B2; PL187174B1; CN1142791C; KR100444417B1; AU7370796A; DE69617723D1; DE69617723T2; US5705485A; HU223880B1; EP0859596A2; CA2234235C; EP0859596B1; PL326064A1

Abstract

본 발명에서는 사람 유사분열성 또는 맥관형성 활성을 지닌 폴리펩티드 성장 인자를 함유하는 겔 제형이 제공된다. 이러한 겔 제형은 피부의 상처, 특히 눈의 전방 챔버에서의 국소 또는 절개성 상처를 치유하는데 유용하다. 당해 겔 제형은 또한 겔 적용에 의해 결정된 각종 범위 내의 점도를 제공하기 위한 수용성의 약제학적으로 또는 안과적으로 적합한 중합체성 물질을 포함한다. 당해 겔 제형은 성장 인자가 상처 부위로 방출되는 것을 조절해 주고 이와 접촉되는 시간을 연장시켜 준다.

Description

성장 인자를 함유하는 겔 제형

본 출원은 1987년 9월 18일자로 출원된 미국 특허원 제098,816호(현재 포기됨)의 부분 연속 출원인, 1988년 8월 19일자로 출원된 미국 특허원 제233,493호(현재 포기됨)의 부분 연속 출원인, 1991년 5월 20일자로 출원된 미국 특허원 제703,584호(현재 포기됨)의 부분 연속 출원인, 1992년 11월 10일자로 출원된 미국 특허원 제974,013호(현재 미국 특허 제5,427,778호)의 부분 연속 출원인, 1993년 10월 12일자로 출원된 미국 특허원 제135,230호의 부분 연속 출원인, 1995년 8월 30일자로 출원된 미국 특허원 제520,798호의 부분 연속 출원이다.

본 명세서 전반에 걸쳐, 각종 공보, 특허 및 특허원이 인용 참조된다. 당해 분야의 숙련인에게 현재 공지된 바와 같은, 본원에 기술되고 청구된 본 발명의 최신 기술을 보다 상세히 기술하기 위하여 상기 공보, 특허 및 특허원의 명세서가 본 명세서 내에 참조문헌으로 삽입된다.

본 발명은 사람 유사분열성 또는 맥관형성 활성을 지닌 폴리펩티드 성장 인자를 함유하는 겔 제형에 관한 것이다.

사람 폴리펩티드 성장 인자는 정상의 사람 세포의 성장을 조절하는 분자이다. 수 많은 사람 폴리펩티드 성장 인자가 동정되었으며 이들의 화학 구조가 밝혀졌다. 이러한 그룹에 속하는 성장 인자는 다음과 같다: 표피성 성장 인자(EGF), 산성 및 염기성 섬유아세포 성장 인자(FGF), 혈소판 유도된 성장 인자(PDGF), 전환성 성장 인자-알파(TGF-알파), 전환성 성장 인자-베타(TGF-베타), 인슐린-유사 성장 인자(IGF-Ⅰ 및 IGF-Ⅱ) 및 신경 성장 인자(NGF). 이들의 세포 성장 자극 능력으로 인해, 사람 폴리펩티드 성장 인자는 상처 치유 과정을 자극하는데 유용한 것으로 기술되어 왔다.

지금까지는, 상처를 치유하는데 사용하기 위한, 어떠한 성장 인자에도 적합한 운반 시스템이 밝혀진 바가 없다. 특히, 성장 인자가 상처 부위로 방출되는 것을 조절하여 이러한 상처 부위에서 장시간 동안 부착되거나 유지되도록 하여 성장 인자가 상처 부위에 접촉되는 시간을 증대시키는 운반 시스템을 갖는 것이 바람직하다. 본 발명은 성장 인자를 함유하는 겔 형태의 상기와 같은 운반 시스템을 제공해 준다. 생적합성 겔 물질을 사용하여 특정 성장 인자가 상처 부위로 운반되어 조절된 방식의 운반 시스템의 잇점과 상처 부위에 습한 환경을 제공해줄 수 있다.

발명의 요약

본 발명은 성장 인자를 상처 부위로 조절된 방식으로 운반하기 위한 수성 겔 제형 또는 점성 용액를 제공해준다. 이용된 정확한 제형은 목적하는 적용 분야에 따라서 결정될 것이다. 3가지 상이한 적용 분야, 즉 국소 또는 절개성 상처 치유용 겔, 눈의 전방 챔버에서의 상처 치유용 및 저점도 겔, 수분 함량이 보다 높은 유체 제형을 필요로 하는 용도용의 수성 제형이 고려된다.

국소 또는 절개성 상처 치유용의 수성 겔 제형은 유사분열성 또는 맥관형성 활성을 지닌, 상처 치유에 유효한 양의 폴리펩티드 성장 인자를 포함한다. 부가적으로, 이러한 제형은 1,000 내지 12,000,000cps 범위 내의 점도를 제공하기 위한 수용성의 약제학적으로 허용되는 중합체성 물질을 함유한다. 점도는 일반적으로 실온 또는 승온하에서 측정한다. 눈의 전방 챔버의 상처를 치유하는데 사용하기 위한 수성 겔 제형은 실온에서 1,000 내지 100,000cps 범위 내의 점도를 제공하기 위한 수용성의 안과적으로 적합한 중합체성 물질을 포함한다. 저점도의 수성 제형은 실온에서 1 내지 5,000cps 범위 내의 점도를 제공하기 위한 수용성의 약제학적으로 또는 안과적으로 적합한 중합체성 물질을 포함한다. 저점도 제형에 사용하는데 바람직한 것은 안과용 상처 치유용이다. 그러나, 이를 특히 상처 부위를 덮고 있는 붕대를 침지시키기 위해 사용되는 경우에는 다른 유형의 상처 치유용으로 사용할 수도 있다.

본 발명의 겔 제형은 상처 부위에 부착되어 불규칙한 신체 부위 또는 상처 윤곽과 일치되도록 하는 잇점을 지니고 있다. 이러한 겔은 상처 부위에 직접적으로 적용되거나, 예를 들면, 피막 형태의 적절한 다공성 또는 미세다공성 기재와 함께 상처 부위에 적용될 수 있다. 이러한 겔은 수분 함량이 높고(상처를 축축하게 유지시킴), 상처 배출물을 흡수하는 능력이 있고, 상처 부위에 적용하기가 용이하며 세척에 의해 제거가 용이하다는 추가의 잇점을 지니고 있다. 상기 겔은 상처 부위에 적용될 때 차가는 느낌을 주기 때문에 환자에게 편안감을 부여해주고 특히 민감한 상처에 제형이 잘 허용되도록 해준다.

본 발명의 겔 제형은 또한 상처 부위에 성장 인자를 조절된 방식으로 운반하는 시스템을 제공해준다. 조절된 방식이란 24시간 이상의 장시간에 걸쳐 치료학적 수준을 유지하기에 충분하도록 약물을 방출하는 것을 지칭한다. 성장 인자가 상처 부위에 접촉하는 시간이 길어지는 것은 상처 치유 속도를 상당히 증가시키는데 필요한 것으로 보고된 바 있다. 본 발명의 겔 제형은 성장 인자가 상처 부위에 접촉하는 시간을 증가시켜 지속적인 방출 투여 형태를 제공해준다. 이러한 것은, 이로써 제형이 상처 부위에 적용되는 횟수가 줄어들게 됨으로써 상처 및 특히 상이한 단계의 유사분열시 이의 세포성 성분에 대한 장해를 줄일 수 있기 때문에 중요한 잇점이 된다.

발명의 상세한 설명

본 발명의 수성 겔은 이러한 겔의 용도에 따라서 상이한 점도를 가질 수 있다. 점도는 특정 유체의 유동에 대한 저항의 측정치이다. 이는 전단 속도에 대한 전단 응력의 비율로서 정의된다. 전단 응력은 가압하에서의 유체의 유동에 대한 저항, 즉 외압을 거부하는 신체 내에서의 분자 저항이다. 전단 응력은 전단된 면적에 대한 힘의 비율로서 정의된다. 액체가 전된되는 경우, 적층류을 고려하면, 이러한 유체 층은 상이한 속도로 이동된다. 층들 간의 상이한 이동 속도는 전단 속도에 있어서의 단지 하나의 인자일 뿐이다. 다른 인자는 전단면 간의 거리 내지는 클리어런스(clearance)이다. 따라서, 전단 속도는 클리어런스에 대한 겔의 점도비로서 정의된다. 점도는 1㎠당 dynes/sec의 치수이다. 이러한 치수는 포이즈로서 지칭된다. 본원에서 지칭된 점도 치수는 달리 언급되지 않는 한은 브룩필드(Brookfield) 점도계를 이용하여 측정된 센티포이즈(cps)이다. 모든 점도값은 달리 언급하지 않는 한은 실온, 예를 들면, 22 내지 25℃에서이다.

본원에서 지칭된 폴리펩티드 성장 인자는 EGF, 산성 FGF, 염기성 FGF, PDGF, TGF-알파, TGF-베타, 안지오게닌, NGF, IGF-Ⅰ, IGF-Ⅱ 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹 중에서 선택된, 사람 유사분열성 또는 맥관형성 활성을 지닌 것이다. 완전한 천연의 분자 대신 이들 성장 인자의 생물학적으로 활성인 단편 또는 화학적으로 합성된 유도체를 사용할 수도 있다. 유사분열성 활성 이외에도, EGF, FGF, TGF 및 안지오게닌은 맥관형성 활성을 지니는 것으로 보고된다. 재조합 DNA 기술에 의해 이들 성장 인자를 제조하는 것이 바람직하다.

본원에서 사용된 바와 같은 사람 EGF는 문헌[참조: Urdea, M.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 80:7461-7465(1983)]에 나타낸 폴리펩티드 서열 또는 이의 실질적인 어떠한 부분도 갖는 EGF를 지칭한다. 사람 EGF는 또한 감마-우로가스트론, 표피성 성장 인자, 사람 표피성 성장 인자 등의 천연의 사람 EGF 변이체를 지칭하며 기타 성장 인자가 천연 공급원으로부터 분리될 수 있으며, 이는 재조합 DNA 기술을 이용하여 제조하거나 화학적 합성에 의해 제조된다.

본원에서 사용된 바와 같은 EGF는 미국 특허 제4,717,717호에 기술된 EGF 수용체 결합 검정과 같은 인지된 생검정에서 측정된 바와 같이 천연의 사람 EGF 폴리펩티드가 나타내는 것과 유사한 생물학적 활성을 지니고 문헌[참조: Carpenter et al., "Epidermal Growth Factor, its receptor, and related protein", Experimental Cell Research, 164:1-10(1986)]에 기술된 바와 같이, 특정의 보존된 아미노산 잔기와 공통된 디설파이드 결합 위치를 갖는 폴리펩티드 부류를 포함한다. 따라서, EGF는 재조합 DNA 기술에 의해 제조된 EGF; 마우스의 하악선으로부터 분리된 마우스 EGF; 랫트 EGF; 사람의 뇨로부터 분리될 수 있는 천연의 사람 표피성 성장 인자; 및 단백질 분해 과정에 의해 동일 반응계 내에서 활성의 표피성 성장 인자로 형질전환되는 전구체를 포함하여 전술한 성장 인자의 생활성 유도체 및 이와 관련된 폴리펩티드를 포함한다.

PDGF는 섬유아세포, 신경교 세포 및 평활근 세포와 같은 시험관내에서 간엽적으로 유도된 세포의 증식을 촉진시키는 혈청 내에서의 주요한 유사분열물질이다. 아미노산 서열 데이터는 PDGF가 2개의 상이하지만 동종의 폴리펩티드 쇄, 즉 A-쇄와 B-쇄로 구성된다는 것을 나타내었다. 이들 2개의 쇄는 PDGF-AA, PDGF-B 및 PDGF-AB의 이량체인 것으로 밝혀졌다. PDGF의 A 및 B쇄에 대한 아미노산 서열이 결정되었는데, B쇄에 대한 아미노산 서열은 문헌[참조: Johnsson, A, et al., 1984, EMBO J., 3:921-928]에 제시되어 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "rhPDGF-B"는 제조합 DNA 기술에 의해 제조된 PDGF의 사람 B-B 단독이량체를 의미한다.

본 발명에서 사용하기에 유효한 폴리펩티드 성장 인자의 상처 치유량은 약 0.01 내지 약 1,000mg/ml의 범위 내일 수 있다. 성장 인자 농도는 바람직하게는 약 1 내지 500mg/ml, 더욱 바람직하게는 1 내지 100mg/ml이다. 본 발명의 겔은 폴리펩티드 성장 인자의 방출을 서서히 유지시킬 수 있다.

본 발명의 겔 형성 물질은 점성의 용액을 형성할 수도 있는, 점성의 수용액 또는 비-수용성의 수 팽윤성 중합체(예: 콜라겐)를 형성시킬 수 있는 수용성의 중합체일 수 있다. 팽윤성 중합체는 물에 용해되기 보다는 물을 흡수하는 중합체이다. 본원에서 기술된 가교결합된 형태의 중합체는 수용성이 아닐 수도 있지만 수 팽윤성일 수 있다. 따라서, 가교결합된 형태의 중합체는 본 발명의 범위 내에 속한다. 가교결합이란 글루타르알데히드와 같은 이작용성 시약과 함께 공유적으로 결합하는 중합체 쇄를 지칭한다. 또한, 특정 중합체가 수용성이 되도록 하기 위하여 부분적으로 중화되거나 염 형태로 사용될 수 있다는 것을 당해 분야의 숙련인은 인지해야 한다. 예를 들면, 하이알루론산을 나트륨 하이알루로네이트로서 사용하여 적합한 수용성을 제공하는 것이 바람직하다.

국소 또는 절개성 상처 치유용 수성 겔 제형에서는, 상기 중합체가 비닐 중합체, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리삭카라이드, 단백질, 폴리(에틸렌 옥사이드), 아크릴아미드 중합체 및 이들의 유도체 또는 염으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 폴리(에틸렌 옥사이드)로는 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다는 것을 인지해야 한다. 눈의 전방 챔버 내에서의 상처를 치유하는데 사용하기 위한 겔 제형에서는, 중합체가 동일할 수 있지만 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 폴리(에틸렌 옥사이드)를 사용하는 것은 바람직하지 않다. 또한, 전방 챔버에 사용하기 위해서는, 중합체가 생분해성, 즉 전방 챔버로부터 배출되거나 이 안에서 대사되는 무해한 구성분으로 분해될 수 있는 것이 바람직하다. 안과적 상처 치유에 사용하기 위한 저점도의 수성 제형에서는, 겔 형성 중합체가 국소 또는 절개성 상처 치유용에서와 동일하지만, 폴리(에틸렌 옥사이드)를 사용하는 것은 바람직하지 않다.

본 발명에서 유용한 비닐 중합체(또한 치환된 폴리에틸렌으로서 공지됨)는 폴리아크릴산, 폴리메타크릴산, 폴리비닐 피롤리돈 및 폴리비닐 알콜로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 본 발명에서 유용한 폴리삭카라이드는 셀룰로즈 또는 셀룰로즈 유도체, 글리코사미노글리칸, 한천, 펙틴, 알긴산, 덱스트란, 전분 및 키토산으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 보다 수용성인 α-아밀로즈가 바람직하다. 글리코사미노글리칸은 하이알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 더마탄 설페이트, 케라탄 설페이트, 헤파린 설페이트 및 헤파린으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 기타 어떠한 겔 형성 중합체와 함께 글리코사미노글리칸을 사용하여 상처 치유를 증진시킬 수 있다. 본 발명에서 유용한 단백질은 콜라겐, 젤라틴 및 피브로넥틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 아크릴아미드 중합체는 폴리아크릴아미드 또는 폴리메타크릴아미드 중합체일 수 있다. 생적합성 폴리아크릴아미드 중합체가 바람직하다.

국소 또는 절개성 상처 치유용 겔 제형에서는, 점도가 실온에서 1,000 내지 12,000,000cps 범위 내일 수 있다. 바람직한 점도 범위는 1,000 내지 2,000,000이다. 더욱 바람직한 점도 범위는 1,000 내지 500,000cps이다. 가장 바람직한 점도 범위는 1,000 내지 150,000cps이다. 본 발명의 한 양태에서는, 국소용 겔 제형은 분자량이 약 450,000 내지 4,000,000인 카복시메틸셀룰로즈(CMC) 또는 나트륨 카복시메틸셀룰로즈(NaCMC)를 0.1 내지 5중량% 포함한다. 바람직한 양태에서는, CMC가 1.5 내지 4중량%로 존재하고 이의 분자량은 450,000 내지 4,000,000이다. CMC 겔의 pH는 4.5 내지 8의 범위 내이어야 하고 더욱 바람직하게는 5 내지 7의 범위내이다.

또 다른 양태에서는, 본 발명의 국소 및 절개용 겔은 평균 분자량이 약 500 내지 50,000인 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체를 15 내지 60중량% 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서는, 이러한 블록 공중합체가 15 내지 40중량%로 존재하고 이의 분자량은 1,000 내지 15,000의 범위 내이다. 본 발명에 사용된 블록 공중합체는 플루로닉(Pluronics)으로서 통상 공지되어 있다. 바람직한 플루로닉은 플루로닉 F88 및 F127이다.

추가의 양태에서는, 본 발명의 국소 및 절개용 겔은 분자량이 500,000 내지 8,000,000의 범위인 하이알루론산을 0.5 내지 10중량% 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서는, 이러한 하이알루론산이 1.5 내지 6.0중량%로 존재하고 이의 분자량은 1,000,000을 초과한다.

아크릴아미드 중합체는 모든 유형의 상처 치유, 특히 눈의 전방 챔버(anterior chamber)내에서의 상처 치유에 유용할 수 있다. 폴라아크릴아미드와 같은 흡수 가능한 아크릴아미드 중합체가 하아알루론산과 같은 안과용으로 사용된 본 발명의 담체 시스템에 대한 우수한 대체물일 수 있다. 폴리아크릴아미드 중합체의 분자량은 1 내지 13백만(million), 바람직하게는 약 4 내지 6백만의 범위일 수 있다. 당해 겔 중에서의 아크릴아미드 중합체의 중량%는 2 내지 5%, 바람직하게는 3.5 내지 4.5%일 수 있다. 메틸 및 알킬 치환된 중합체와 같은 치환된 아크릴아미드 중합체도 또한 본 발명의 범위 내에 속한다.

눈의 전방 챔버에서 사용하기 위한 아크릴아미드 겔 운반 시스템은 다음과 같은 특징을 갖는다: 운반 매트릭스의 어떠한 해리 또는 분해 생성물도 독성이 아니며 주상 그물 구조를 방해하지 않으며; 이러한 겔은 광학적으로 투명하고; 상기 겔은 허용될 수 없는 수준의 안압 증가와 같은 불리한 임상 효과를 야기시키지 않으면서 눈의 전방 챔버 내에 잔존할 수 있다.

당해 분야의 숙련인의 제형 중의 중합체의 %농도와 분자량을 변화시킴으로써 목적하는 점도 범위를 달성할 수 있다는 것을 용이하게 인지할 것이다. 예를 들면, 저점도의 겔은 저분자량 중합체 또는 보다 낮은 %농도, 또는 이들 둘다를 조합하여 사용함으로써 달성할 수 있다. 고점도 겔은 보다 고분자량 중합체와 보다 높은 %농도를 사용함으로써 달성할 수 있다. 중간 점도는 분자량과 %농도를 이에 맞게 변화시킴으로써 달성할 수 있다.

국소 및 절개용 겔 보다 낮은 점도를 필요로 하는 겔 제형, 즉 눈의 전방 챔버의 상처를 치유하는데 사용하기 위한 제형 및 안과용 상처 치유용 저점도 용액에 있어서는, 중합체의 %농도와 이의 분자량이 목적하는 점도를 달성하도록 다양할 수 있다. 예를 들면, 전방 챔버에서 사용하는 경우, 이러한 겔은 분자량 범위가 80,000 내지 240,000인 셀룰로즈 중합체를 1 내지 20중량% 포함할 수 있다. 바람직한 농도 범위는 1 내지 3%이다. 전방 챔버에 사용하기 위한 또 다른 양태에서는, 상기 겔이 분자량이 500,000 내지 8,000,000인 하이알루론산을 0.5 내지 5중량%의 농도로 포함할 수 있다. 하이알루론산이 0.5 내지 2.0중량%의 농도로 존재하고 이의 분자량이 2,000,000 내지 4,000,000인 것이 바람직하다. 전방 챔버용으로 바람직한 점도 범위는 1000 내지 100,000cps이다.

저점도 용액은 분자량이 약 100,000 내지 4,000,000인 폴라아크릴산을 0.1 내지 2.0중량% 포함한다. 바람직한 양태에서는, 이러한 중합체는 0.05 내지 0.5중량%의 양으로 존재한다. 또 다른 양태에서는 이러한 묽은 점성 용액은 평균 분자량이 500 내지 500,000인 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체를 2 내지 40중량% 포함할 수 있다. 바람직하게는 농도는 2 내지 20%이고 분자량은 1,000 내지 15,000이다. 또 다르게는, 이와 같은 묽은 점성 용액은 분자량이 약 80 내지 240,000인 셀룰로즈 중합체를 1 내지 20% 포함할 수 있다. 이러한 농도 범위가 1 내지 10%인 것이 바람직하다. 추가의 양태에서는, 상기 묽은 점성 용액은 분자량이 약 500,000 내지 8,000,000인 하이알루론산을 0.5 내지 5.0중량% 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 농도는 0.5 내지 2.0%이고 분자량은 1,000,000 내지 6,000,000이다. 이러한 묽은 점성 용액이 안약으로서 사용되어야만 하는 경우에는, 점도가 1 내지 1,000cps 범위인 것이 바람직하다. 다른 용도, 예를 들면, 붕대를 침지시키는 용도로 사용되는 경우에는, 1.0 내지 5,000 범위의 어떠한 점도도 적합할 것이다.

본 발명의 겔에 사용된 셀룰로즈 중합체는 수용액 중에서 생물학적 활성의 상실에 대하여 폴리펩티드 성장 인자를 안정화시킬 수 있다. 샐물학적 활성의 상실에 대하여 EGF를 안정화시키기 위해 셀룰로즈 중합체를 사용하는 것은 미국 특허 제4,717,717호에 기술되어 있다. 본 발명에 사용되는 셀룰로즈 중합체는 알킬 셀룰로즈, 하이드록시알킬 셀룰로즈 및 알킬하이드록시알킬 셀룰로즈, 예를 들면, 메틸 셀룰로즈, 하이드록시에틸 셀룰로즈, 카복시메틸 셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈 및 하이드록시프로필 셀룰로즈 등의, 수용성의 에테르화 셀룰로즈 중합체이다. 카복시메틸 셀룰로즈, 하이드록시프로필 셀룰로즈, 하이드록시에틸 셀룰로즈 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈 등의 하이드록시알킬 셀룰로즈, 및 메틸 셀룰로즈가 바람직하다.

PDGF 셀룰로즈 중합체 겔 제형의 안정성은 이러한 제형 내에 하전된 아미노산 또는 금속 이온과 같은 하전된 화학적 물질을 포함시킴으로써 상당히 증가시킬 수 있다. 이용될 수 있는 적합한 아미노산으로는 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 알라닌, 메티오닌, 프롤린, 세린, 아스파라긴 및 시스테인이 있다. 아미노구아니딘 및 프로타민이 사용될 수도 있다. 당해 겔 제형에 사용될 수 있는 적합한 금속 이온으로는 아연과 마그네슘이 있다. 상기 아미노산은 유리산으로서 또는 하이드로클로라이드 염과 같은 염으로서 사용될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 "안정성"이란 겔 내에서의 PDGF의 유사분열성 활성의 상실을 방지시키거나 겔로부터 방출되는 PDGF 단백질의 양을 증가시키는 것을 지칭한다. 그 자체로서 본 발명은 상처를 치료하는데 유용한 PDGF 겔 제형을 제공한다.

CMC 겔에서의 PDGF 안정성의 증가는 PDGF 간의 하전 상호작용을 최소화하거나 또는 경쟁하는 양성적 또는 음성적으로 하전된 역이온을 가함으로써 CMC의 환원성 말단과의 상호작용을 최소화함으로써 성취할 수 있다. 제조시 상기 제형에 방부제를 가하거나 또는, 예를 들면, 약 122℃의 온도에서 약 1바(bar) 이하의 가압하에 수 분 동안 가열하거나 여과시킴으로써 살균시키는 것이 유리하다.

본 발명의 겔 제형을 사용하여 가아제 드레싱 섬유를 도포함으로써 상처 위에 놓여질 있는 상처 치유용 붕대를 형성할 수 있다. 저점도 제형이 이러한 용도에 바람직하다. 이러한 상처 치유용 붕대는 가아제 드레싱을 유사분열성 활성을 지닌 사람 폴리펩티드 성장 인자를 함유하는 수성 겔 용액으로 침지시킴으로써 제조할 수 있다. 이어서, 상기 붕대를 상처 부위에 적용하여 가아제의 도포된 섬유가 상처와 접촉되게 하고 세포 성장을 자극하여 상처 치유 속도를 증대시킬 수 있다.

본 발명의 겔은 안약 제형, 안과용 세척 용액, 상처 치유용 연고 등에 유용하다. 본 발명의 조성물을 사용하여 치유할 수 있는 상처는 각막 궤양, 방사선각막 절개술, 각막 이식, 에피케라토파키아(epikeratophakia), 및 기타 눈 수술로 인한 상처로부터 발생되는 안과적 상처와 같은 상피성 손상을 야기시키는 우연의 또는 의과적 손상; 및 화상, 절개상, 피부 이식으로 인한 공여자 부위의 상처 및 궤양(피부, 욕창, 정맥 울혈 및 당뇨) 등의 피부 상처로부터 유발되는 상처이다. 본원에서 사용된 바와 같은 안과적 상처 치유로는 전방 챔버 상처 치유 뿐만 아니라 결막하의 상처 치유가 있다. 본 발명의 겔은 또한 내부 절개를 치유할 뿐만 아니라 위궤양과 같은 내부 상처를 치유하는데 사용될 수도 있다.

당해 겔을 내부 또는 절개성 상처에 적용하는 경우에서는, 겔 형성 중합체가 생분해성인 것이 바람직하다. 천연의 중합체가 일반적으로 생분해성이다. 이들의 예로는 콜라겐, 글리코사미노글리칸, 젤라틴 및 전분이 있다. 셀룰로즈 물질은 생분해성이 아니다. 비닐 중합체와 같은 합성 중합체도 생분해성이 아니다. 본원에서 기술된 중합체의 생분해성은 당해 분야의 숙련인에게 널리 공지되어 있다.

실시예

다음 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 제시된 것이다. 본 발명은 이들 실시예에 의해 제한되지 않고 단지 첨부된 청구의 범위에 의해서만 제한된다.

실시예 1

카복시메틸셀룰로즈 겔

본 발명에 따라서 카복시메틸셀룰로즈(CMC 또는 NaCMC) 겔을 제조한다. 바람직한 등급의 나트륨 카복시메틸셀룰로즈는 약제학적 등급의 CMC(NaCMC) 7H3SFPH로서 지칭되는 것이다. 다음 성분을 80℃에서 주사용수(WFI) 226.2kg에 가한다: 350L 들이 프리마 혼합 용기(Fryma mixing vessel) 중의 염화나트륨 1946.3g 및 L-라이신 하이드로클로라이드 1203.5g. 이 혼합물을 10분 동안 교반시킨다. 내부 균질화기를 작동시키면서(약 2850rpm), NaCMC 5776.8g을 5분 이내에 가한다. 균질화기를 10분 후에 끈다. 혼합물을 44rpm으로 교반시키고 25℃로 냉각시킨다. 온도가 25℃에 도달하면, 혼합물을 -0.8바로 탈기시킨다. 이어서, 상기 혼합물을 122℃에서 20분 동안 살균시킨다.

이와 같이 살균시킨 후, 이 혼합물을 25℃로 냉각시키고 다음 성분들을 함께 혼합한다: WFI 11.712L, 나트륨 아세테이트 트리하이드레이트 377.9g 및 아세트산 15.6g. 이들 성분을 멸균 필터를 통하여 여과시킴으로써 무균적으로 겔에 가한다. 혼합물을 30분 동안 교반시킨다. WFI 2500mL 중의 rhPDGF-B(25g) 용액을 혼합 여과시킴으로써 겔에 무균적으로 가한다. 이어서 WFI 250mL로 세정한다. 이 겔을 2시간 동안 혼합한 다음 스텐레스 강 수송 용기에 무균적으로 옮긴다. 이 겔을 충전 기기에 옮기고 형태-충전-밀봉 컨테이너에 충전시킨다. 37℃에서 측정된 당해 겔의 점도는 2883cps이다.

실시예 2

카복시메틸셀룰로즈 겔

카복시메틸셀룰로즈 겔을 다음 방법에 따라서 제조한다:

70 내지 80℃로 가열된 고정제 수(high purity water) 1900g에 메틸파라벤 3.24g과 폴리릴파라벤 0.36g을 가하고 육안으로 검사하여 용해될 때까지 교반시킨다. 파라벤을 용해시킨 후, 나트륨 아세테이트 3.14g과 염화나트륨 8.086을 가하고 열원(heat source)을 제거한다. 화학물질을 제거한 후, 용액을 15 내지 30℃로 냉각시킨다. 이와 같이 냉각된 용액에 아세트산 136㎕과 m-크레졸 1.74㎖을 가한다. 충분히 혼합한 후, 완충액의 pH를 측정하고(pH=5.63) 물을 이용하여 완충액이 약 2L의 최종 용량이 되게 한다. 완충액의 최종 pH는 5.60이다. 1L 들이 폴라카보네이트 병속의 완충 용액 585.6g에 L-라이신 모노하이드로클로라이드 3.0g을 가하고 이 혼합물을 가시적으로 용해될 때까지 교반시킨다. 1300RPM으로 맞춰진 라이팅 랩마스터(Lighting Labmaster) 혼합기를 사용하여, 아쿠알론(Aqualon) CMC(등급 7H3SFPH)를 30초 이내에 변형 깔대기를 이용하여 상기 완충 용액에 가하고 이 겔을 총 90분 동안 혼합하여 2.4%의 CMC 겔을 수득한다.

이 겔을 rhPDGF-B 약물 용액의 광밀도(OD @280nm)를 사용하여 계산된 바와 같은 질량을 기준으로 하여 100㎍/g rhPDGF-B/겔g으로 다음과 같이 제형화한다: 2.4% CMC 겔에 rhPDGF-B 약물(OD=10.0mg/ml) 6g을 주사기를 이용하여 상기 약물을 여러 위치에서 겔에 주입하면서 가한다. 이 겔을 수분 동안 수동으로 혼합하고 하이돌프(Heidolph) 혼합기에서 0.2㎛-여과된 질소하에 1시간 동안 300RPM으로 혼합한다. 이어서, 상기 겔을 롤러 밀 상에서 저속으로 1시간 동안 롤링시킨다. 이어서, rhPDGF-B/CMC 겔을 15g 용량의 텔레다인 적층 튜브에 패키징한 다음(약 10g/튜브) 이러한 튜브를 칼릭스 가열 밀봉기를 이용하여 밀봉시킨다. 총 수득량은 55튜브이다.

실시예 3

카복시메틸셀룰로즈 겔

본 발명에 따라서 카복시메틸셀룰로즈(CMC 또는 NaCMC) 겔을 제조한다. 바람직한 등급의 나트륨 카복시메틸셀룰로즈는 약제학적 등급의 CMC(NaCMC) 7H3SFPH로서 지칭되는 것이다. 메틸파라벤 48.6g과 프로필파라벤 5.4g을 50L 들이 프리마 혼합 용기 중의 물 28.4kg에 가하고 80℃로 가열한 다음 1시간 동안 유지시킨다. 이 혼합물을 30℃로 냉각시키고 16rpm하의 앵커 모터를 사용하여 다음 성분들을 가한다: 나트륨 아세테이트 47.1g, 염화나트륨 242.6g, L-라이신 하이드로클로라이드 150g 및 빙초산 2.0g. 앵커 모터를 끄고 용해기 디스크를 1300 내지 1600rpm으로 설정하고 CMC 분말 720g을 1분 미만 동안 액체 교반기에 가한다. CMC를 가한 후, 앵커 모터를 작동시키고 이로써 생성된 혼합물을 1시간 동안 혼합한다. 용해기 디스크를 6분 후에 끈다.

1시간 동안 혼합한 후, 이 혼합물을 122℃에서 20분 동안 살균시킨다. 이러한 살균 후, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고 m-크레졸 27g을 가하고 이로써 생성된 혼합물을 1시간 동안 혼합한다. 무균적 방법으로 상기와 같이 살균된 겔에 PDGF를 가한다. 이어서, 이로써 생성된 겔을 1시간 동안 교반시킨다. 37℃에서 측정된 당해 겔의 점도는 8200cps이다.

실시예 4

카복시메틸셀룰로즈 겔

본 발명에 따라서 카복시메틸셀룰로즈(CMC 또는 NaCMC) 겔을 제조한다. 약제학적 등급의 나트륨 카복시메틸셀룰로즈(7H3SFPH)가 본 제조에 사용된다. 350L 들이 터보 유화제 혼합 용기에 정제수 247.4kg을 가한다. 내부 균질화기를 최대 설정치(1400rpm)로 사용하여 다음 성분들을 혼합 용기에 가한다: 메틸파라벤 405g 및 프로필파라벤 45g. 이 혼합물을 5분 동안 균질화시킨 다음 온도를 60℃로 상승시키면서 16rpm으로 교반시킨다. 온도가 60℃에 도달하게 되면 용액을 1시간 동안 교반시킨다. 이 용액을 30℃로 냉각시킨다. 이어서, 이러한 용액에 다음 성분들을 가한다. 염화나트륨 2020g, 나트륨 아세테이트 트리하이드레이트 392g, L-라이신 하이드로클로라이드 1250g, 아세트산 16.25g 및 m-크레졸 225g. 이 혼합물을 15분 동안 교반시킨다. 상기 용액을 600L 들이 보유 탱크에 옮기고 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 6000g을 플래쉬블렌드 균질화기의 호퍼에 가한다. 이러한 플래쉬블렌드 균질화기를 통하여 상기 액체를 터보 유화제 내로 다시 펌핑시키고 CMC를 상기 액체 완충 용액에 가한다.

이로써 형성된 겔을 2시간 동안 교반시킨다. 물 2631g 중의 rhPDGF-B 26.05g의 용액을 상기 겔에 가한 다음 물 100g으로 세정한다. 이어서, 상기 겔을 2시간 동안 혼합한다. 혼합 용기를 탈기시키고 질소 기체를 이용하여 진공을 깨트린다.

이어서, 상기 겔을 15g 튜브에 채운다. 37℃에서 측정된 당해 겔의 최종 점도는 75812cps이다.

실시예 5

폴리아크릴산 겔

본 발명에 따라서 폴리아크릴산 겔(카보폴)을 제조한다. 바람직한 등급의 폴리아크릴산은 0.02내지 1.5% 농도의 카보폴 934P 및 940으로서 지칭된다. 보다 고농도의 폴리아크릴산일수록 EGF의 방출 속도를 저하시킨다. 폴리아크릴산의 점도는 일반적으로 pH 6 내지 10, 바람직하게는 pH 6.5 내지 7.5에서 안정하다.

다음 성분들을 4L 비이커에서 배합한다: 물 3500ml 중에서 메틸파라벤 6.3g, 프로필파라벤 0.7g 및 만니톨 177.5g. 이 용액을 고체가 용해될 때까지 패들형 혼합기를 사용하여 혼합한다. 폴리아크릴산(17.5g, 카보폴 940, BF Goodrich)를 40메쉬 스크린을 통하여 이를 1,000rpm으로 혼합하면서 상기 용액 내로 시이빙한다. 이로써 폴리아크릴산 입자가 분산되어 팽윤된다. 10% 용액 중의 고체 NaOH 7.6g을 가함으로써 상기 용액을 pH 7.0으로 중화시킨다. 이 겔의 900g 분획을 배취로부터 제거하고 오토클레이브하여 살균성 겔을 제공한다. 나머지 과정을 100급 면적에서 수행한다. 1.18mg/ml의 EGF의 스톡 용액(12ml)을 0.22마이크로미터 여과기를 통하여 살균 튜브내로 여과시키고 이러한 여과기를 물 5ml 분량으로 동일한 튜브 내로 세척한다. 이 튜브이 내용물을 주사기를 통해 상기 겔에 가한다. 이 겔을 패들형 혼합기를 사용하여 철저하게 혼합하여 EGF를 균질하게 분산시킨다. 이 겔을 오토클레이브 가압 용기에 놓아 둔다. 질소를 사용하여 상기 겔이 상기 가압 용기로부터 유동하여 살균 튜빙 조각을 통하여 10ml 주사기 내로 흘러들어가게 한다. 샘플을 대상으로 하여 활성에 대해 알아보면 EGF 15.6㎍/ml을 함유하는 것으로 나타났다. 이 샘플은 10g 샘플 내에 미생물이 존재하지 않았다. 이로써 제조된 겔의 점도 범위는 약 490,000 내지 약 520,000cps이다. 이러한 겔 제형을 피그 및 기니아 피그의 부분적으로 피부 절개된 모델에서 사용하면 상기 겔은 이들 동물에서 상처 치유 속도를 증진시키는 것으로 나타났다.

실시예 6

플루로닉 겔 제형

폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체(플루로닉)는 국소용 약물 운반 시스템에 사용하는데 상당히 유효한데, 이는 이들이 역 열적 겔화 행위를 나타내고 우수한 약물 방출 특징을 가질 뿐만 아니라 독성이 낮기 때문이다. 저분자량의 플루로닉 폴리올은 수중에서 어떠한 농도에서도 겔을 형성하지 않는다. 플루로닉 F-68은 실온에서 50 내지 60%의 최대 농도에서 겔을 형성한다. 플루로닉 F-88은 실온에서 40%에서 겔을 형성하고 플루로닉 F-108은 30% 농도에서 겔을 형성한다. 플루오닉 F-127은 25℃에서 수중 20% 농도에서만 겔을 형성한다. 플루로닉 겔 F-68, F-88, F-108 및 F-127은 화상 및 기타 공여자 부위 투여형으로 EGF를 조절된 방식으로 운반하는데 사용할 수 있다. 이러한 겔을 등장성이어야 하여 pH가 6 내지 8의 범위인 것이 바람직하며 더욱 바람직하게는 6.5 내지 7.5의 범위이다.

플루로닉 겔의 흥미로운 특성은 이들이 온도와 중합체 농도의 함수로서 겔을 형성할 수 있다는 것이다. 플루로닉 용액이 가온됨에 따라 겔이 형성된다. 따라서, 이러한 겔은 실온에서 저점도 수용액이지만, 인체내에 접촉되어 체온에 의해 가온되는 경우에는, 점도가 증가하여 상기 용액이 겔로 된다. EGF를 수성 상태의 플루로닉과 배합하여 상처 부위에 적용한다. 이때, 상처 부위로 방출된 EGF의 속도를 효과적으로 감소시키는 겔화가 발생된다. 이로써 EGF와 상처 부위의 표피 간의 접촉시간이 길어지게 된다. 이 겔을 액체로서 적용하거나 드레싱과 함께(액체 중에 침지된) 적용하여 기계적 지지대를 제공할 수 있다. 플루로닉 겔을 사용하는 경우의 잇점은 이들 겔의 살균을 위해 여과 방법을 이용할 수 있다는 것과 상처 부위가 EGF와 장시간 접촉된다는 것이다.

EGF를 함유하는 플루로닉 F-127 겔을 1,000ml 증류수에서 혼합된 인산나트륨 모노하이드레이트 1.8g, 인산이나트륨 헵타하이드레이트 5.48g 및 만니톨 40.9g와 혼합함으로써 제조한다. pH를 7.0으로 조정하고 용액을 4℃로 냉각시킨다. 플루로닉 F-127(200g)(BASF)를 패들형 혼합기로 혼합시키면서 점차적으로 상기와 같이 냉각된 용액에 가한다. 이 용액을 약 30분 동안 혼합한 다음 4℃에서 밤새 놓아 둔다. 수용액 중의 EGF를 겔이 만들어지기 전에 상기 용액에 가할 수 있거나 플루로닉 F-127을 용액 중에 용해시킨 후에 혼합할 수도 있다. 10㎍/ml의 EGF 농도를 수득하기 위하여, EGF 용액 1.812ml(1.38mg/ml)을 20% 플루로닉 F-127 겔 23.188g에 가한다. 이러한 용액을 거의 액체와 같다. 이 용액의 점도는 다음 표 1에서 나타낸 바와 같이 이를 35℃로 가온함에 따라 증가되었다.

온도 ℃	점도(cps. 0.5rpm)
0 - 16	검출가능하지 않음
18	4,000
19	250,000
21	500,000
28	655,000
30	685,000
37	650,000

점도가 1,000,000 내지 12,000,000인 부가의 플루로닉 제형을 제조한다. 제형(11.5 x 106cps)의 방출 역학을 시험하면 EGF의 85%가 1시간 이내에 상기 제형으로부터 방출되었다.

실시예 7

HPMC 겔 제형

수개의 HPMC 겔을 제조한다. 이 겔은 매우 저분자량에서부터 고분자량 HPMC로 제조된다. 바람직하게는, 분자량 범위는 80,000 내지 240,000이다. 매우 저분자량 중합체(Methocel E15LV)을 사용하는 경우에는 10 내지 20% 정도로 높은 농도의 HPMC가 겔을 형성하는데 요구된다. 매우 고분자량 중합체(Methocel K100M)를 사용하는 경우에는 겔이 1 내지 3% 용액으로부터 만들어진다. 상이한 등급과 상이한 농도를 이용하여 겔을 만들어 방출 역학에 대해 연구한다. 각 겔에 대해 pH를 7.2로 조정한다. EGF 방출 속도는 가용성 겔의 점도에 비례한다.

1,500ml 비이커에 인산나트륨 모노하이드레이트 0.83g, 인산이나트륨 헵타하이드레이트 7.24g, NaCl 6.22g 및 세척용 살균수 500ml를 놓아 둔다. 이 혼합물을 자기적으로 혼합하여 고체를 용해시키고 pH를 7.2로 조정한다. 이 용액을 교반시키면서 80℃로 가열하고 HPMC(Methocel K100M;Dow) 30.0g을 40메쉬 시브를 통하여 가한다. 이를 가열로부터 빼낸 다음 10분 더 교반시킨다. 잔여수 500g을 얼음으로서 가한다. 혼합물이 더 점성이 됨에 따라 교반을 수동으로 수행한다. 이를 실온으로 냉각시킨 다음 밤새 4℃로 냉각시킨다. 130g 분획을 제거하고 패들형 혼합기를 사용하여 EGF의 1.12mg/ml 살균 용액 13.4ml와 혼합하여 104㎍/ml의 EGF 농도를 수득한다.

이로써 제조된 겔의 점도는 실온에서 54,000 내지 950,000cps이다. 제조된 각종 HPMC 겔 제형으로부터 EGF의 방출은 다음 표 2에 나타내었다.

샘플	브룩필드 점도(CPS)	EGF의 방출
샘플	25℃	EGF의 방출	37℃
2085-91-1 E4M 4%	112 x 10³	102 x 10³	5시간 내에 75%
2085-92-2 E4M 5%	274 x 10³	300 x 10³	5시간 내에 75%
2085-92-2 E4M 6%	652 x 10³	946 x 10³	5시간 내에 50%
2085-91-2 E4M 4%	112 x 10³	286 x 10³	5시간 내에 75%
2085-93 K15M 3%	102 x 10³	70 x 10³	5시간 내에 75%
2085-91-3 K4M 4%	92 x 10³	54 x 10³	5시간 내에 75%

실시예 8

하이알루론산 겔 제형

하이알루론산(HA)은 N-아세틸글루코사민과 글루쿠론산의 디삭카라이드의 반복 단위로 이루어진 직쇄 구조를 갖는 뮤코폴리삭카라이드 중의 하나이다. HA는 천연, 미생물, 및 사람 및 기타 동물의 피부, 연결 조직에서 발견된다. HA의 분자량은 공급원, 제조방법 및 측정 방법에 따라서 50,000 내지 8,000,000의 범위 내이다. 고도로 점성인 HA 용액은 윤활성과 탁월한 보습 효과를 지닌다. 이는 관절의 활액, 안구의 초자체, 제대, 피부, 혈관 및 연골에서 발견된다. 이는 윤활제 및 쇽 흡수제로서 상당히 잘 작용하는데, 이는 아마도 HA가 수분 보유 능력을 지니고 있고 이를 특정의 특이적 단백질에 연결하기 위한 친화도를 지니고 있기 때문인 것으로 여겨진다. 이는 인체내에서 내부적으로 사용하기에 매우 안전한 분자인 것으로 사료된다. 따라서, 관절의 치유와 같은 내부 상처 치유 또는 눈의 전방 챔버에서 사용될 수 있다. 나트륨 하이알루로네이트(분자량 4,000,000; MedChem) 1% 용액을 EGF로 제형화하여 100㎍/ml의 농도를 수득한다. 1% HA 용액의 점도는 44,000cps이다. 본 발명에 따라서 제조된 HA/EGF 제형은 눈의 전방 챔버에서 재표피화를 자극하는 것으로 입증되었다.

실시예 9

투여형으로부터 EGF의 방출 역학

시험관내 확산 세포 시스템에서 EGF의 방출을 유지시키는 각 투여형의 유효성을 평가하고 T₂₅및 T₅₀값을 결정한다. EGF가 겔로부터 확산되는 것과 겔 매트릭스의 용해의 결과로서 EGF가 방출된다. EGF가 생체내에서 생이용가능한 것으로 예상되는 기전으로서 이들 두가지 과정을 고려하면, HPMC 겔은 가장 높은 값에서 EGF의 방출을 지속하는데, 이때 T₂₅및 T₅₀값은 각각 1.2 및 5.9이다. 결과는 T값을 증가시키는데 있어서는 중합체의 농도보다는 중합체의 분자 구조가 더 중요하다는 것을 지시해준다. 염을 함유하고 있지 않은 매질(증류수)에서 만든 겔을 정치 조건하에 연구한 결과 낮은 T값을 나타내었다. 이는 용해가 보다 신속하게 이루어진다는 것과 염을 함유하지 않은 겔의 점도가 더 낮다는 것 모두가 조합되서 나타난 결과일 수 있다. 따라서, 본 발명의 겔이 염을 함유하는 것이 바람직하다. 이는 소수성 또는 친수성 측쇄, 이온쌍 그룹, 금속 이온, 가교결합제, EGF에 대한 친화 그룹을 도입하는 것과 같이 중합체를 변형시킴으로써 본 발명의 겔에 대한 T값을 증가시켜 EGF를 생성물 형태로부터 방출시키는 것을 조절할 수 있는 것으로 예상된다.

표 3은 투여형으로부터 EGF의 방출에 관한 역학 데이터를 요약한 것이다. 표 3을 참조하면, HPMC 다음의 상이한 문자는 중합체 내의치환율(%)을 지칭한다. 예를 들면, K=2208 또는 22% 메틸화되고 8% 하이드록시-프로필 치환된 것을 나타내고; F=2906; 및 E=2910. 상기 문자 다음의 숫자(즉, K 다음의 숫자 100)는 1000cps의 수중 2% 용액의 점도를 지칭한다. AQ는 염을 함유하지 않은 용액에서 제조된 겔을 지칭한다. 기타 모든 겔은 pH 약 7.0의 인산염 완충 식염수(PBS)에서 만든다. T값은 시간을 나타낸다.

투여형으로부터 EGF의 방출에 관한 역학적 데이터 요약

중합체		점도 (cps)	T₂₅	T₅₀
1%	-	0.0854	1.000
HPMC K100M(mw 240,000)	2%	287 x 10³	0.4687	1.9172
	3.5%	116 x 10⁶	1.2270	5.8528
	4.0%	-	0.8536	4.1386
	5.0%	3.07 x 10⁶	0.8807	3.5808
	HPMC K-15M(mw 120,000)	3%	122 x 10³	0.857	2.0635
4AQ%	HPMC K-15M(mw 120,000)	331 x 10³	0.2727	1.6900
HPMC K-4M(mw 86,000)	4%	96 x 10³	1.0476	2.6349
HPMC F-4M(mw 86,000)	4%	122 x 10³	0.7619	1.8730
HPMC E-4M(mw 86,000)	4%	128 x 10³	1.0169	2.2657
HPMC E-4M(mw 86,000)	5%	312 x 20³	0.8615	1.8462
HPMC E-4M(mw 86,000)	5AQ%	240 x 10³	0.3211	1.6044
HPMC E-4M(mw 86,000)	6AQ%	680 x 10³	0.6944	3.0040
카보폴 934P(mw 3x10⁶)	0.5%	494 x 10³	0.2727	0.7300
플루로닉 F-127(mw 12,000)	20%	1.1 x 10⁶	0.1936	0.3548

실시예 10

폴리아크릴아미드 겔 제형

폴리아크릴아미드 사아나머 N-300과 시아나머 N-300 LMW(둘다 American Cyanamid 제조)를 이용하여 폴리아크릴아미드/EGF 겔 제형을 제조한다. 시아나머 N-300의 분자량은 약 5 내지 6밀리온이고 시아나머 N-300 LMW의 분자량은 약 13밀리온이다.

폴리아크릴아미드 중합체를 예비혼합된 염 용액에 가함으로써 다음 조성을 갖는 폴리아크릴아미드 겔을 제조한다. 이어서, 이 겔을 EGF의 방출을 시험하는데 사용한다.

조성	농도 (중량%)
조성	2085-140A	2085-140B
시아나머 N-300	4.0	-
시아나머 N-300 LMW	-	4.0
염화나트륨	0.049	0.049
염화칼륨	0.075	0.075
염화칼슘	0.048	0.048
염화마그네슘	0.080	0.080
나트륨 아세테이트	0.890	0.890
나트륨 시트레이트 데하이드레이트	0.170	0.170
살균수	94.688	94.688
점도	552 x 10³	132 x 10³

시아나머 N-300(2085-140A)의 폴리아크릴아미드 겔 1.809g에¹²⁵I-EGF와 EGF의 혼합물 72.4㎕를 가하고 2개의 3ml 주사기에서 혼합한다. 이러한 겔의 300 내지 400㎍을 프란쯔(Franz) 확산 세포의 공여자 측에 놓아 둔다. 예정된 시간 간격으로, 수용 완충액의 50㎕ 분취량을 감마 계수기 위에서 계수한다. 수용 완충액은 0.4% BSA(소의 혈청 알부민)과 0.02% 나트륨 아지드를 함유하는 PBS 3.5㎕(pH 7.2)로 구성된다. 유사하게, 시아나머 N-300 LMW(2085-140B)의 폴리아크릴아미드 겔 1.11g에¹²⁵I-EGF와 EGF의 혼합물 44.5㎕를 가하고 EGF의 방출을 검사한다.

다음 제형을 갖는 또 다른 폴리아크릴아미드 겔(2085-138C)을 제조한다.

조성	2085-138C
시아나머 N-300	7.0g
티메로살	0.2g
살균수	192.8g
점도	258 x 10³
pH	7.54

2085-138C 겔을 사용하여 10㎍/ml의 EGF를 함유하는 겔을 제조한다. 2085-138C 겔 5g을 8ml 혈청 바이알에서 칭량하고 1mg/ml EGF(단백질 검정 1.41mg/ml) 50㎍을 가한다.

EGF를 상처 드레싱 위로 도포하고 바람직한 방출 특징을 획득한다. 상처 드레싱은 폴리아크릴아미드/한천(Geliperm, Geistlich-Pharma; Wolhusen, Switzerland)으로 만들어진 겔 필름이다. 이러한 드레싱을 EGF의 수용액으로 침지시킴으로써 상기 드레싱을 EGF로 도포한다. 약 70%의 EGF가 약 24시간 내에 상기 드레싱으로부터 방출되었다.

안정화된 PDGF 셀룰로즈 중합체 겔 제형

본 발명에 따라서 카복시메틸셀룰로즈(CMC) 겔을 제조한다. 이들 시험에 사용된 CMC는 농도가 2.4%이고 분자량이 약 900,000 내지 2,000,000달톤인 약제학적 등급의 나트륨 카복시메틸셀룰로즈(Aqualon Co., Wilmington, DE)이다. 이러한 CMC 겔을 rhPDGF-BB(Chrion Corporation, Emeryville, California)로 제형화한다. PDGF 셀룰로즈 중합체 겔 제형의 안정성은 이러한 제형 내에 하전된 아미노산 또는 금속 이온과 같은 하전된 화학물질을 포함시킴으로써 상당히 증가시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 본원에 사용된 바와 같은 "안정성"이란 겔 내서의 PDGF의 유사분열성 활성의 상실을 방지하거나 또는 겔로부터 방출되는 PDGF 단백질의 양이 증가하는 것을 지칭한다. 그 자체로서, 본 발명은 상처를 치료하는데 유용한 PDGF 겔 제형을 제공한다.

이러한 제형을 대상으로 하여 기니아 피그의 부분적으로 절개된 피부 모델에서 생체내 상처 치유 효능에 대해 시험한다.

기니아 피그의 부분적으로 걸개된 피부 상처 치유 모델에 있어서는, 피부절제기를 이용하여 기니아 피그당 2개의 부분적으로 절개된 피부 상처를 만든다. 3 x 1cm 상처(전형적으로 0.4 내지 0.8mm 깊이)를 처음 5일 간(0 내지 4일)은 0.3ml 겔로 1일 1회 치료하고 살균성 흡착 패드로 덮어둔다. 이러한 패드를 폐색성 드레싱으로 덮은 다음 매번 치료시 보호용 붕대로 감싼다. 7일째 되는 날에 조직학적인 평가를 위해 상처를 수거한다. 고모리 트리크롬-염색된 조직학적 슬라이드를 50X 배율로 컴퓨터 디지털화 면적계 위로 프로젝팅시킴으로써 과립화 조직 층의 평균 두께를 측정한다. 상처 층 내의 과립화 조직의 표준 길이의 면적을 추적하고 이를 상기 길이로 나눔으로써 두께를 수득한다. 각 상처에 대해 3개의 조직학적 분획을 측정하고 기니아 피그당 2가지 상처로부터의 측정치를 평균내어 상기 동물에 대한 1개의 값을 수득한다.

이러한 모델에서는 CMC 제형 중에서의 10 내지 300㎍/g의 농도의 PDGF는 상처의 과립화 조직층의 두께를 지속적으로 2 내지 3배(또는 그 이상) 증가시킨다. 과립화 조직은 상처 치유의 주요 성분인 새로이 형성된 연결 조직 및 맥관이다. 과립화 조직은 상처 부위를 물리적으로 채워주는 작용을 한다. 부가적으로, 과립화 조직은 표피가 상처 표면 전반에 걸쳐 재생되는데 필요한 충분한 혈액 공급을 제공해준다. 따라서, 과립화 조직은 상처를 치유하는데 필수적인 성분이다.

다음 표들은 1) CMC 겔에서의 PDGF의 효능, 2) 신선한 배취에서 PDGF 효능에 대한 라이신의 효과 부재(표 6), 3) 라이신 안정화된 제형의 30분 간(2 내지 8℃에서 저장됨)의 효능 보유(표 7) 및 4) 살균성의 보존되지 않은 CMC(라이신 함유) 제형에서 PDGF의 효능 보유(표 8)를 나타낸다.

기니아 피그 부분적으로 절개된 상처에서 과립화 조직 두께에 대한 PDGF 및 라이신의 효과

처리	과립화 조직 두께(mm)평균±S.E.M.	N (동물)
본래의 CMC	63.3±15.9	7
CMC 중의 PDGF(30㎍/g)	161.9±25.4 *	7
CMC+0.1% 라이신	64.4±8.9	7
CMC+0.1% 라이신 중의 PDGF(30㎍/g)	162.6±23.5 *	8
CMC+0.5% 라이신	59.9±5.6	8
CMC+0.5% 라이신 중의 PDGF(30㎍/g)	144.6±21.8 *	7
* 이의 비히클 대조군과는 상당히 상이한(p〈0.05)

상기 데이터는 CMC 겔 중의 재조합 사람 혈소판 유도된 성장 인자-BB가 실험중인 기니아 피그 상처에 있어서 과립화 조직의 양을 증가(여기서는 2.5배)시키는데 효능이 있다는 것을 보여준다. 상기 데이터는 또한 0.5% 이하의 라이신은 CMC 제형에서 PDGF의 효능에 영향을 끼치지 않는다는 것을 보여준다.

기니아 피그의 부분적으로 절개된 상처에서 과립화 조직 두께에 대한 라이신-안정화된 CMC에서 숙성된 PDGF의 효과 *

처리	과립화 조직 두께(mm)평균±S.E.M.	N (동물)
CMC *	81.4±15.5	6
CMC 중의 PDGF(30㎍/g) 30개월 배취	311.3±32.4 **	6
CMC 중의 PDGF(30㎍/g) 신선한 배취	217.3±22.3 **	6
* 모든 제형은 0.5% 라이신을 함유한다.** 비히클 대조군과는 상이함(p〈0.05)

상기 데이터는 0.5% 라이신을 함유하는 제형이 30개월 이상 동안 실험용 상처에서 과립화 조직 형성을 촉진시키는 효능을 보유하고 있다는 것을 나타낸다.

기니아 피그의 부분적으로 절개된 상처에서 과립화 조직 두께에 대한 살균성의 보존되지 않은 CMC 제형에서 PDGF의 효과 *

처리	과립화 조직 두께(mm)평균±S.E.M.	N (동물)
보존되지 않은 살균성 CMC **	150.1±48.5	4
보존되지 않은 살균성 CMC 중의PDGF(100㎍/g)	652.6±58.6***	4
보존된 살균성 CMC 중의 PDGF(100㎍/g)	635.1±73.5***	4
보존된 비-살균성 CMC 중의PDGF(100㎍/g)	752.2±79.5***	4
* 이러한 모델은 라이신 연구에서 보다도 상당히 더 깊은 상처를 이용하여 상이한 실험실에서 수행함으로써, 비히클 대조군 기선 과립화 조직 두께 측정치가 더 높다. 모든 제형은 0.5% 라이신을 함유한다.* 비히클 대조군과는 상이함(p〈0.05)

상기 데이터는 살균성의 보존되지 않은 PDGF/CMC(0.5% 라이신 함유)가 상처 부위에서 과립화 조직의 형성을 촉진시키는 효능을 지니고 있다는 것을 나타낸다.

하전된 화학물질이 PDGF/셀룰로즈 중합체 제형을 어떠한 기전으로 안정화시킬 수 있는지는 공지되어 있지 않다. 특정 이론에 얽매이지 않는 다면, 이러한 안정화 효과는 셀룰로즈 중합체의 환원성 말단 그룹에 대하여 하전된 물질에 의해 PDGF 라이신과의 경쟁으로부터 야기될 수 있고/있거나 가능하게는 셀룰로즈 중합체의 유리 카복실 그룹과 PDGF 라이신 간의 하전 상호작용을 감소시킴으로써 야기될 수 있다. PDGF와 셀룰로즈 중합체(예: CMC) 간의 하전 상호작용은 본 실험실에서 입증되었다. 양전하 및 음전하와 경쟁할 수 있는 하전된 화학물질은 PDGF와 셀룰로즈 중합체 간의 하전 상호작용을 감소시킴으로써 PDGF 안정성을 증가시킬 수 있다. 양성적으로 하전된 역이온을 대상으로 하여 이들이 CMC 겔로부터 PDGF의 회수를 증진시키는 능력에 대하여 시험한다.

PDGF-CMC 안정성에 관한 문제에 역점을 두기 위해서는 먼저, PDGF가 CMC의 존재하에서 어떻게 활성을 상실할 수 있는지에 대한 이해가 필요하다. 이러한 활성 상실에 대한 가능한 하나의 기전은 PDGF가 CMC에 흡착되어 이에 포획되는 것이다. 이러한 흡착 성질은 다수의 유리 카복실 그룹을 함유하는 음성적으로 하전된 CMC 매트릭스를 이용하여 고도로 양성적으로 하전된 PDGF-B 호모이량체(22개 아르기닌 잔기와 14개의 라이신 잔기를 함유함)를 포획하는 것을 포함한다. CMC 중에서의 PDGF에 관한 본 발명자들의 실험 결과, 상기와 같은 하전 상호작용을 상쇄하기 위한 역이온이 거의 또는 전혀 존재하지 않는 경우에는 유사분열성 활성이 상실되고 방출되는 단백질이 감소되는 것으로 나타났다.

CMC 겔에서의 PDGF 안정성의 증가는 PDGF 간의 하전 상호작용을 최소화하거나 또는 경쟁하는 양성적 또는 음성적으로 하전된 역이온을 가함으로써 CMC의 환원성 말단과의 상호작용을 최소화함으로써 성취할 수 있다. 하나의 양태에서는, 라이신(0.5%w/w)이 CMC에서의 PDGF의 안정성을 50% 이상 증가시켰다. PDGF-CMC 하전 상호작용 또는 CMC의 환원성 말단과의 상호작용을 감소시키거나 이와 경쟁할 수 있는 어떠한 화합물도 CMC에서의 PDGF 안정성을 증진시킬 수 있다. 본 제형에서의 하전된 화학물질은 초기에 염 형태로 제형에 첨가된다는 것을 인지해야 한다. 이어서 이러한 염은 겔의 수성 환경하에서 해리되어 각각의 하전된 화학물질을 생성시킨다. 본원에서 사용된 바와 같은 "하전된 화학물질"은 다음 물질의 약제학적으로 허용되는 것이다: 염화아연 및 염화마그네슘 등의 염; 모노/디에탄올아민, 푸마르산, 말산, 인산칼륨 및 나트륨 글루코네이트 등의 완충제; 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산, 글루탐산, 알라닌, 메티오닌, 프롤린, 세린, 아스파라긴, 시스테인 등의 아미노산; 아미노구아니딘 및 프로타민; 올레산 및 올레트 5 등의 이온성 계면활성제; 및 폴라아미노산 등의 합성 폴리-양이온성 또는 이온성 중합체. 본원에서 사용된 바와 같은 "약제학적으로 허용되는"이란 기술된 바와 같은 물질이 해로운 부작용, 예를 들면, 독성, 점막 또는 피부 조직의 수포 형성 또는 백색화를 야기시키지 않으면서 치료에 사용될 수 있거나 사람이나 기타 포유동물에 대해 사용될 수 있는 것을 의미한다.

다음에 제시된 실험에 덧붙여, 0.5% 아미노구아니딘 또한 셀룰로즈 중합체 겔로부터 PDGF를 회수하는 것을 개선시킨다. 아미노구아니딘은 이의 강력한 친핵성으로 인해 단백질의 비-효소적 당화를 억제하는데 있어서 라이신 보다 더 우수한 경쟁제이다.

본 발명은 셀룰로즈 중합체, 또는 효능있는 환원성 말단을 갖는 기타 어떠한 중합체; 및 라이신 또는 아미노구아니딘과 같은 약제학적으로 허용되는 친핵성 역이온을 함유하는 제형을 포괄한다.

실험 #1

사용된 샘플은 0.5시간 동안 유지된 CMC 플라스보와 혼합된 rhPDGF-B, 및 4℃에서 60일 동안 유지된 CMC 중의 rhPDGF-BB이다. 표 9는 PDGF 회수에 대한 Zn++ 농도의 효과를 나타낸다. 0일 샘플은 동일한 Zn++ 농도를 사용하는 경우 60일 샘플 보다 더 높은 회수율을 나타낸다. 이들 데이터는 PDGF가 CMC에 이온적으로 결합되어 시간에 따라 이러한 결합이 가능하게는 가교결합으로 되어 PDGF 방출에 더 많은 Zn++이 필요하게 된다는 것을 제시해준다.

PDGF 회수는 0.1% TFA와 함께 10 내지 70% 아세토니트릴 구배를 이용하여 C4 300Å 거대구 칼럼 상에서의 역상 HPLC로 측정한다.

%rhPDGF 회수

몰 농도, Zn	0일	60일
0.075	84	71
0.15	88	81
0.3	97	90

표 10은 CMC 겔로부터 PDGF의 회수에 대한 기타 하전된 화합물의 효과를 나타내며, 여기서는 PDGF의 60일 샘플 0.5g을 0.01% BSA(대조군으로서 사용됨)를 갖는 H₂O 10ml에 용해시키고 열거된 화합물을 각 샘플에 가한다.

샘플 회수	%PDGF
A 대조군	50
B 0.2M NaCl(모노+)	42
C 0.2M ZnCl₂(디++)	64
D 0.2M CaCl₂(디++)	63
E 0.2M MgCl₂(디++)	69
F 0.5% 라이신(+,쯔비터이온성)	64
G 0.5% 글리신(쯔비터이온성)	50

이들 데이터는 보다 더 양성적으로 하전된 Zn, Ca, Mg 및 라이신이 PDGF-CMC 하전 상호작용을 최소화시킬 수 있다는 것을 제시해준다. 이들 데이터는 또한 PDGF가 CMC 매트릭스 내에 포획될 수 있다는 것을 제시해준다.

실험 #2

이러한 셋트의 실험은 CMC에서의 PDGF 회수에 대한 각종 아미노산을 시험하도록 고안된다. 사용된 샘플은 CMC 1g당 PDGF 100㎍(pH 6.0), 완충제 13m NaCl + 아미노산 0.5%이다. 샘플을 폴리프로필렌 튜브내에서 2일 동안 46℃에서 배양한 다음 앞서 RP-HPLC에서와 같이 분석한다.

CMC에서의 PDGF의 회수에 대한 비극성 및 극성 아미노산의 효과에 관한 비교용 평가로부터의 데이터가 다음 표 11에 제시되어 있다. 보다 고도로 하전된 아미노산(라이신, 아스파르트산 및 글루탐산)을 함유한 제형이 PDGF를 보다 많이 회수하는 것으로 나타났다. 모든 아미노산은 pH 7.0 근처에서 쯔비터이온성이다. 따라서, 이들은 모두 R-그룹의 전하에 따라서 증진된 회수를 제공할 것이다. R-그룹이 보다 하전될수록(예를 들면, 라이신), 보다 우수한 안정화 효과가 제공된다.

PDGF에 대한 각종 부류의 아미노산의 효과

CMC 회수샘플	0 시간 대조군과 비교한회수율(%)
대조군, 0 시간	100.0
CMC+AA 부재	37.3
비극성 측쇄
글리신	43.4
알라닌	37.5
메티오닌	40.8
프롤린	40.2
전하를 띠지 않는 극성 측쇄
세린	48.7
아스파라긴	39.9
티로신	45.5
시스테인	42.0
하전된 극성 측쇄
라이신 pk9	64.0
아스파르트산 pk4	70.4
글루탐산 pk4	58.2

CMC에서의 PDGF 회수에 대한 각종의 기타 하전된 화합물의 효과를 또한 평가하고 그 데이터가 다음 표 12에 나타나 있다. 이들 실험에서는, CMC 1g 중에 PDGF 100㎍이 사용된다. 데이터는 NaCl 농도가 0M으로부터 1.13M으로 증가함에 따라 PDGF 회수율(%)이 32%에서 96%로 증가한다는 것을 보여준다. 0.1M Mg++은 94.8% 회수율을 제공해준다.

CMC에서의 PDGF 회수에 대한 각종 하전된 화합물의 효과

샘플	0 시간을 기준으로 한 회수율(%)
대조군, 0 시간	100.0
CMC+0.0M NaCl(물만)	32.1
CMC+0.0M NaCl(완충제만)	27.6
CMC+0.13M NaCl	65.9
CMC+0.33M NaCl	82.8
CMC+0.63M NaCl	90.7
CMC+0.94M NaCl	93.8
CMC+1.13M NaCl	96.8
CMC+0.0M NaCl+MgCl₂0.1M	94.8
CMC+0.13M NaCl+Gly 0.5%	76.7
CMC+0.13M NaCl+Lys 0.5%	85.5

실험 #3

라이신을 사용하는 경우 및 라이신을 사용하지 않는 경우 rhPDGF(30㎍/g)의 1개월 유사분열성 안정성이 표 13에 나타나 있다. 데이터는 섬유아세포 티미딘 흡수 방법을 이용하여 측정하고 측정된 rhPDGF의 함량으로 나타내었다. 데이터는 제형 내에 라이신이 존재하면 제형의 유사분열성 활성이 증가한다는 것을 보여주고 있다.

rhPDGF ㎍/g
Lys 존재하(n=10)	Lys 부재하(n=4)
25℃ 16.8 +/-4	31.2 +/-7
30℃ 10.4 +/-2	27.0 +/-0.5

rhPDGF-BB 셀룰로즈 중합체 제형

rhPDGF-BB를 함유하는 셀룰로즈 중합체 겔 제형을 일반적으로 허용된 제형 기술에 따라서 제형화한다. 일반적으로, 필요한 구성분의 적층 혼합물의 제조는 모두 요구된 바와 같다. "친밀한 혼합물"이란 조성물의 구성분이 실질적으로 균일하게 혼합되어 이들 성분 중의 어떠한 것도 국재화되지 않도록 하는 것을 의미한다.

본 발명의 조성물은 상처 치유 속도를 증가시키는데 충분한 양인 "상처 치유에 유효한 양"의 PDGF를 함유한다. 의학 분야에서 널리 공지된 바와 같이, 의학적 제제의 유효량은 사용된 특정 제제, 치료하고자 하는 질환 및 치료받고자 하는 대상체에 따라서 다양하다. 결과적으로, 치료제의 유효량은 각 제제에 대해 한정될 수가 없다. 따라서, PDGF의 상처 치유에 유효한 양은 본 발명의 조성물에 있어서 치료받는 대상체 내에서 또는 대상체의 신체상에서 목적하는 시간 동안 충분한 양의 PDGF를 제공해주는 양이며 이는 전형적으로 통상 사용되는 것보다 적다. 본 발명의 전형적인 조성물 1g은 PDGF를 약 1.0 내지 약 1000㎍ 함유할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 제형 1g당 PDGF를 약 1 내지 약 300㎍ 함유할 수 있다.

완충제, 방부제, 등장성 조정제, 산화방지제, 기타 중합체(예를 들면, 점도를 조절하기 위해 사용되거나 증점제로서 사용됨) 및 부형제와 같은 부가의 성분들을 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 이러한 기타 물질의 특정 예로는 인산염, 시트레이트 또는 보레이트 완충제; 티오머로살, 소르브산, 메틸파라벤 또는 프로필파라벤, m-크레졸 및 클로로부탄올 방부제; 등장성 조절을 위한 염화나트륨 및/또는 당; 폴리비닐 알콜, 폴리(아크릴산) 및 폴리비닐 피롤리돈 등의 중합체; 및 만니톨, 락토즈, 슈크로즈, 에틸렌 디아민 테트라아세트산 등의 부형제가 있다.

rhPDGF-BB를 함유하는 일반적인 셀룰로즈 중합체 겔 제형이 표 14에 제시되어 있다. 이러한 제형의 점도는 실온에서 1,000 내지 150,000cps의 범위 내이다.

성분	농도 범위
rhPDGF-BB	겔 1g당 1.0 내지 1,000mg
셀룰로즈 중합체	1.5 내지 3.0%(w/w)
하전된 화학물질	0.1 내지 3.0%(w/w)
방부제	0.15 내지 0.25%(w/w)

rhPDGF-B를 함유하는 특정 제형이 표 15, 16 및 17에 제시되어 있다.

성분	양	%(w/w)
정제수	100g	96.02
	정제수 100g당 양 g
메틸파라벤	0.1620g	0.16
프로필파라벤	0.0180g	0.02
나트륨 아세테이트 트리하이드레이트	0.1570g	0.15
라이신 하이드로클로라이드	0.5000g	0.48
염화나트륨	0.8086g	0.78
m-크레졸	0.0900g	0.09
빙초산	0.0065g	0.01
나트륨 카복시메틸셀룰로즈	2.4000g	2.30
	겔 100g당 양 g
rhPDGF-B(벌크 스톡 용액)	0.0036g

성분	양/배취 250kg	양/겔 g
아세트산	15.6g	0.06mg
염화나트륨	1946.3g	7.71mg
나트륨 아세테이트 트리하이드레이트	377.9g	1.51mg
L-라이신 모노하이드레이트	1203.5g	4.81mg
주사용수	240700.0g*	962.80mg
나트륨 CMC	5776.8g	23.11mg
rhPDGF-BB(벌크 약물)	25.0g	0.10mg
* 총 WFI는 액체 벌크 약물 중에 2500g 포함한다.

성분	g/겔 100g
rhPDGF-BB	0.01
나트륨 카복시메틸셀룰로즈	2.40
염화나트륨	0.8086
나트륨 아세테이트 트리하이드레이트	0.1570
빙초산	0.0065
메틸파라벤	0.1620
프로필파라벤	0.0180
m-크레졸	0.0900
L-라이신 하이드로클로라이드	0.5000
주사용 수	100.00
(g/겔 100g인 rhPDGF-B를 제외하고는 주사용수100g당 성분 g)

본 발명이 이의 특정의 바람직한 양태 및 실시예를 참조로 하여 본 명세서에 기술되었다. 당해 분야의 숙련인은 각종 변화가 나타날 수 있다는 것을 용이하게 인지할 것이다. 특히, 당해 분야의 숙련인은 각종 중합체의 분자량과 %농도를 변화시켜 목적하는 점도를 달성할 수 있다. 또한, 당해 분야의 숙련인은 본원에서 언급된 것 대신 상이한 중합체 또는 성장 인자를 대체할 수 있다. 당해 분야의 숙련인에게는 명백히 다양할 수 있기 때문에, 본 발명은 이에 제한되지 않고 다만 첨부되는 청구의 범위에 의해서만 제한된다.

Claims

상처 치유에 유효한 양의 혈소판 유도된 성장 인자(PDGF)(a),

약제학적으로 허용되는 셀룰로즈 중합체(b) 및

라이신, 아르기닌, 히스티딘, 프로타민, 알라닌, 메티오닌, 프롤린, 세린, 아스파라긴, 시스테인, 아미노구아니딘, 아연 및 마그네슘으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 약제학적으로 허용되는 하전된 화학물질(c)을 포함하는, 실온에서의 점도 범위가 약 1,000 내지 약 500,000cps인 수성 겔인 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, PDGF가 PDGF-B 단독이량체(homodimer)인 조성물.
제1항에 있어서, 셀룰로즈 중합체가 카복시메틸셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈 및 메틸 셀룰로즈로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제1항에 있어서, PDGF 농도 범위가 약 1.0㎍/g 내지 약 1,000㎍/g인 조성물.
제1항에 있어서, 셀룰로즈 중합체 농도가 약 1.5%(w/w) 내지 약 3.0%(w/w)이고 이의 분자량이 약 450,000 내지 약 4,000,000인 조성물.
제1항에 있어서, 하전된 화학물질의 농도 범위가 약 0.1%(w/w) 내지 약 3.0%(w/w)인 조성물.
제1항에 있어서, 점도 범위가 50,000 내지 150,000인 조성물.
제1항에 있어서, 방부제를 추가로 포함하는 조성물.
제8항에 있어서, 방부제가 메틸파라벤, 프로필파라벤 및 m-크레졸로 이루어진 그룹 중의 하나 이상으로부터 선택되는 조성물.
제1항에 따르는 조성물을 환자의 상처 부위와 접촉시킴을 포함하여, 환자의 상처를 치유하는 방법.
상처 치유에 유효한 양의 사람 PDGF-B 단독이량체(a),

카복시메틸셀룰로즈(CMC)(b) 및

라이신(c)을 포함하는, 실온에서의 점도 범위가 약 1,000 내지 약 500,000cps인 수성 겔인 약제학적 조성물.
제11항에 있어서, 셀룰로즈 중합체 농도가 약 1.5%(w/w) 내지 약 3.0%(w/w)이고 이의 분자량이 약 450,000 내지 약 4,000,000인 조성물.
제11항에 있어서, 라이신 농도 범위가 약 0.1%(w/w) 내지 약 3.0%(w/w)인 조성물.
제11항에 있어서, 점도 범위가 1,000 내지 150,000인 조성물.
제11항에 있어서, 방부제를 추가로 포함하는 조성물.
제15항에 있어서, 방부제가 메틸파라벤, 프로필파라벤 및 m-크레졸로 이루어진 그룹 중의 하나 이상으로부터 선택되는 조성물.
제11항에 따르는 조성물을 환자의 상처 부위와 접촉시킴을 포함하여, 환자의 상처를 치유하는 방법.
상처 치유에 유효한 양의 혈소판 유도된 성장 인자(PDGF)(a),

농도 범위가 약 1.5%(w/w) 내지 약 3.0%(w/w)이고 분자량 범위가 약 450,000 내지 약 4,000,000인 약제학적으로 허용되는 셀룰로즈 중합체(b) 및

농도 범위가 약 0.1%(w/w) 내지 약 3.0%(w/w)인, 양성적으로 하전된 아미노산, 양성적으로 하전된 폴리아미노산 및 양성적으로 하전된 금속 이온으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 약제학적으로 허용되고 양성적으로 하전된 화학물질(c)을 포함하는, 실온에서의 점도 범위가 약 1,000 내지 약 500,000cps인 수성 겔인 약제학적 조성물.
제18항에 있어서, 점도 범위가 1,000 내지 150,000인 조성물.
제18항에 있어서, 방부제를 추가로 포함하는 조성물.
제20항에 있어서, 방부제가 메틸파라벤, 프로필파라벤 및 m-크레졸로 이루어진 그룹 중의 하나 이상으로부터 선택되는 조성물.
제18항에 있어서, 하전된 화학물질이 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 프로타민, 알라닌, 메티오닌, 프롤린, 세린, 아스파라긴, 시스테인, 아미노구아니딘, 아연 및 마그네슘으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제15항에 있어서, 겔 100g당 rhPDGF-B 0.01g; 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 2.40g; 염화나트륨 0.81g; 나트륨 아세테이트 트리하이드레이트 0.157g; 빙초산 0.0065g; 메틸파라벤 0.162g; 프로필파라벤 0.018g; m-크레졸 0.09g; l-라이신 하이드로클로라이드 0.5g; 및 주사용 수 100g을 포함하고 실온에서의 점도 범위가 약 20,000 내지 약 200,000cps인 약제학적 조성물.
제11항에 있어서, 겔 1g당 rhPDGF-B 0.1g; 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 23.103g; 염화나트륨 7.784g; 나트륨 아세테이트 트리하이드레이트 1.511g; 빙초산 0.0624g; l-라이신 하이드로클로라이드 4.813g; 및 물 962.63g을 포함하고 37℃에서의 점도 범위가 약 1,000 내지 약 15,000cps인 약제학적 조성물.
제22항에 따르는 조성물을 환자의 상처 부위와 접촉시킴을 포함하여, 환자의 상처를 치유하는 방법.
제23항에 따르는 조성물을 환자의 상처 부위와 접촉시킴을 포함하여, 환자의 상처를 치유하는 방법.