CN1211191A

CN1211191A - 含生长因子的凝胶制剂

Info

Publication number: CN1211191A
Application number: CN96198773A
Authority: CN
Inventors: J·奇尼; A·芬克卢
Original assignee: Ethicon SAS
Current assignee: Johnson and Johnson Medical SAS; Ethicon Inc
Priority date: 1995-10-06
Filing date: 1996-09-24
Publication date: 1999-03-17
Anticipated expiration: 2016-09-24
Also published as: WO1997012601A3; JPH11512740A; NO981539L; NO981539D0; HUP9803002A2; HUP9803002A3; JP4001382B2; PL187174B1; KR19990064041A; CN1142791C; KR100444417B1; AU7370796A; DE69617723D1; DE69617723T2; US5705485A; HU223880B1; EP0859596A2; CA2234235C; EP0859596B1; PL326064A1

Abstract

提供了具有人类促有丝分裂和血管原性活性的多肽生长因子的凝胶制剂。该凝胶制剂能用于皮肤损伤,尤其眼睛前房的局部或切开性损伤的治疗。凝胶制剂还包括一个水溶性的,药剂或眼相容的聚合物材料来提供不同范围内的粘度,决定于所用胶。凝胶制剂提供了生长因子对伤患处的控释及延长了它们的接触时间。

Description

含生长因子的凝胶制剂

发明背景

本申请为提交于1995年8月31日的美国序列号520,798的部分延续，而后者为提交于1993年10月12日的美国序列号135,230的部分延续，而后者为提交于1992年11月10日的美国序列号974,013，现为美国专利号5,427,778的部分延续，而后者为现已放弃的提交于1991年5月20日的美国序列号703,584的部分延续，而后者为现已放弃的提交于1988年8月19日的美国序列号233,493的部分延续，而后者为现已放弃的提交于1987年9月18日的美国序列号098,816的部分延续。

本材料中，参考了各种文献，专利和专利申请。这些文献，专利及申请籍此完整地以文献插入本文以更完全地描述本领域技术熟练人员熟知的本文所述和权利要求的日期的本领域的现状。

本发明提供了具有人类促有丝分裂和血管原性(angiogenic)的多肽生长因子的凝胶制剂。

人类多肽生长因子为调节正常人体细胞生长的分子。已确认了许多人类多肽生长因子，它们的化学结构已进行了测定。包含在该类中的有：表皮生长因子(EGF)，酸性和碱性成纤维细胞生长因子(FGF)，血小板来源的生长因子(PDGF)，转化生长因子α(TGF-α)，转化生长因子β(TGF-β)，胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ)，和神经生长因子(NGF)。由于它们具有刺激细胞生长的能力，认为人类多肽生长因子可用于促进促进伤患愈合的过程。

迄今为止，还没有提供一个合适的用于治疗伤患的生长因子的给药系统。尤其，期望找到一个能控制生长因子向伤患处释放及粘附于或在伤患处保持相当长的时间以增加生长因子与伤患处的接触时间的给药系统。本发明提供了以包含生长因子的凝胶形式这样的给药系统。生物相容的凝胶材料可用于向伤患处给药，具有控释给药及为伤患处提供潮湿环境的优越性。

发明概述

本发明提供了向伤患处控释生长因子的水性凝胶制剂或粘稠溶液。具体所用制剂决定于期望应用的类型。可具有三种应用，即用于局部或切开性损伤治疗的凝胶，用于眼睛前房伤患处治疗的凝胶及低粘度的水制剂用于要求具有更高水含量的更流体的制剂的应用。

用于局部或切开性损伤治疗的水性凝胶制剂包含有效治疗量的具有人类促有丝分裂或血管原性活性的多肽生长因子。另外，该制剂含有水溶性的，可药用的聚合物材料以提供1,000到12,000,000cps范围内的粘度。粘度的测量通常在室温或升温下测定。用于眼睛前房伤患处治疗的水性凝胶制剂包括水溶性与眼睛相容的聚合物材料以提供室温下1,000到100,000cps范围内的粘度。低粘度的水性制剂包括水溶性的可药用的或与眼睛相容的聚合物材料以提供室温下1到5,000cps范围内的粘度。低粘稠的制剂优选用于眼睛伤疾的治疗。而也可用于其它类型伤患的治疗，特别是用于浸湿置于伤口上的绷带时。

本发明的凝胶制剂具有粘附于伤口和适于不规则机体或伤口外形的优点。该凝胶可直接用于伤患处或与适应性多孔或微孔底物，例如以包衣的形式一道用于伤患处。进一步凝胶还具有高含水量(可保持伤口润湿)，吸收伤口渗出物，方便的对患处应用和通过洗涤方便地除去的优越性。凝胶用于伤患处时有凉感，因而可增加病人的舒适感和对制剂的接受性，尤其是对于敏感的伤患处。

本发明的凝胶制剂生长因子向伤患处控释给药的系统。控释给药是指药物在长达24小时或更多的时间内以足够维持治疗的水平释放。已有报道生长因子在伤患处长的接触时间为获得显著增快的伤口愈合速度所必需。本发明的凝胶制剂增加了生长因子在伤患处的接触时间并提供了持续释放的剂量形式。这是一个重要的优点，因为它允许较低频率地对患处给药，从而较少地干扰患处及其细胞组分，特别是在有丝分裂的不同期。

发明详述

依赖于凝胶的用途，本发明的水性凝胶具有不同的粘度。粘度是液体抵抗流动的一个度量法。定义为切应力对剪切速率的比值。切应力就是在施加外力的影响下，液体对流动的抵抗，即体内分子对外施力的抵抗。切应力定义为力与所施面积的比率。当切力作用于液体，假设层状流体，液体的各层以不同的速度流动。各层流动的相对速度仅为剪切速率的一个因素。另一个是距离，或切力平面间的间隙。因此，剪切速率定义为凝胶粘度对间隙的比。粘度的量纲为达因/秒每平方厘米。这些量纲称做泊。本文所涉及的粘度的量纲，除特别标明，均为厘泊(cps)，通过Brookfield粘度计测得。除特别标明，所有粘度值均为室温下，如22-25℃。

本文所涉及的多肽生长因子为具有人类促有丝分裂或血管原性活性，选自包含EGF，酸性FGF，碱性FGF,PDGF,TGF-α,TGF-β，血管生成素，NGF,IGF-Ⅰ,IGF-Ⅱ或其混合物的组。计划可使用这些生长因子的生物活性片段或化学合成的衍生物，而不用整个的天然存在的分子。除促有丝分裂活性外，EGF,FGF家族，TGF家族和血管生成素报道有血管原性活性。生长因子优选通过重组DNA技术制备。

本文所用人类EGF指具有Urdea,M.S.等提出的，美国国家科学院院刊，80:7461-7465(1983)多肽序列或其基本部分的EGF。人类EGF还指天然存在的任何人类EGF变种如γ-尿抑胃素，表皮生长因子，人类表皮生长因子及其它可从天然资源分离，通过DNA重组技术产生或化学合成的生长因子。

本申请所用的EGF包括通过公认的生物试验如美国专利号4,717,717中所描述的EGF受体结合试验测定，具有与天然的人类EGF多肽所显示活性类似的生物活性和具有Carpenter等在“表皮生长因子，其受体及相关蛋白”试验细胞研究，164:1-10(1986)中所讨论的保守氨基酸残基和共有二硫键位置的类型的多肽。因此，EGF包括通过重组DNA技术产生的EGF，从鼠颌下腺中分离的鼠EGF，大鼠EGF，及天然的人类表皮生长因子，后者可从人尿中分离到，和前述任一的生物活性衍生物和相关多肽，包括通过蛋白水解酶加工转化为活性的表皮生长因子的前体。

PDGF是血清中主要的有丝分裂原，促进间充质起源的细胞，如成纤维细胞，神经胶质细胞及体外平滑肌细胞的增殖。氨基酸序列数据表明PDGF包括两个不同的，但同源的多肽链组成，即A-链和B-链。已发现这两个链为PDGF-AA,PDGF-B和PDGF-AB的二聚体。已测定了PDGF的A链和B链的氨基酸序列，B链的氨基酸序列由Johnsson,A等提出，1984,EMBO杂志，3:921-928。本文所用“rhPDGF-B”短语意指通过重组DNA技术产生的PDGF人类BB同二聚体。

本发明所用多肽生长因子的有效伤患治疗量可在约0.01到1000微克/毫升的范围内。优选生长因子浓度约1-500微克/毫升，更优选1-100微克/毫升。本发明的凝胶能够使多肽生长因子持续释放。

本发明的凝胶形成材料可以是能够形成粘稠水溶液的水溶性聚合物或非水溶性，水可溶胀的聚合物(如胶原)，其亦可形成粘稠溶液。可溶胀的聚合物是能够吸水而不是溶解于水的聚合物。本文所述交联形态的聚合物也可不是水溶性的，而是水可溶胀的。因此，交联形态的聚合物属于本发明的范畴。交联涉及共价键合的聚合物链和双功能基试剂如戊二醛。本领域技术熟练人员可以理解为使其水溶，一定的聚合物还可用于盐或部分中和的形式。例如透明质酸优选用透明质酸钠以提供合适的水溶性。

用于局部或切开性损伤治疗的水溶性凝胶制剂中的聚合物可选自包括乙烯聚合物，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，寡糖，蛋白，聚乙烯氧化物，聚丙烯酰胺聚合物及其衍生物或盐的组。可以理解聚乙烯氧化物包括聚乙二醇。用于治疗眼睛前房伤患的凝胶制剂中的聚合物可以是相同的，除了不优选使用聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物或聚乙烯氧化物。另外，用于眼睛前房，优选可生物降解的聚合物，即能降解成可从眼睛前房流出或代谢无害的组分。用于眼伤治疗的低粘度，水性制剂中，形成凝胶的聚合物可与用于局部和切开性损伤治疗的相同，除不优选使用聚乙烯氧化物。

本发明有用的乙烯聚合物(也称为取代的聚乙烯)可选自包括聚丙烯酸，聚甲基丙烯酸，聚乙烯吡咯烷酮及聚乙烯醇的组。本发明中有用的寡糖可选自包括纤维素或纤维素衍生物，葡糖胺多聚糖，琼脂糖，果胶，藻酸，右旋糖酐，淀粉及脱乙酰壳多糖的组。优选水溶性更好的α-直链淀粉。葡糖胺多聚糖可选自包括透明质酸，软骨素(chondroitin)，软骨素-4-硫酸酯，软骨素-6-硫酸酯，硫酸皮肤素，硫酸角质素，硫酸肝素和肝素的组。葡糖胺多聚糖可与其它凝胶形成聚合物结合使用用来增强对伤患处的治疗。本发明的蛋白可选自包括胶原，明胶，和纤连蛋白的组。聚丙烯酰胺聚合物可是聚丙烯或聚甲丙烯酰胺聚合物。优选生物相容的聚丙烯酰胺聚合物。

用于局部和切开性损伤治疗的凝胶制剂的粘度可在室温下1,000到12,000,000cps的范围内。优选粘度范围为1000-2,000,000。更优选的粘度范围为1000-500,000。最优选的粘度范围为1000-150,000cps。本发明的局部凝胶制剂可含重量0.1-5％的分子量约450,000-4,000,000的羧甲基纤维素(CMC)或羧甲基纤维素钠(NaCMC)。一个优选方案中，含重量1.5-4％的分子量约450,000-4,000,000的CMC。CMC凝胶的PH值应在4.5-8的范围内，优选在5-7的范围内。

另一个方案中，本发明的用于局部和切开性损伤治疗的凝胶制剂可包含占重量15-60％的平均分子量约500-50,000的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物。优选方案中，嵌段共聚物占重量的15-40％，分子量在1,000-15,000的范围内。本发明所用嵌段共聚物通常为Pluronics。优选PluronicsF88和F127。

进一步的方案中，本发明的用于局部和切开性损伤治疗的凝胶制剂可包含占重量0.5-10％的分子量在500,000-8,000,000范围内的透明质酸。优选方案中，含占重量1.5-6.0％的分子量大于1,000,000的透明质酸。

聚丙烯酰胺聚合物可用于各种伤患的治疗，尤其是眼睛前房伤患的治疗。可吸收的丙烯酰胺聚合物如聚丙烯酰胺，是目前用于眼睛治疗中的载体系统，如透明质酸的很好的取代物。丙烯酰胺聚合物的分子量可在1-13,000,000范围内，优选约4-6,000,000。凝胶中聚丙烯酰胺聚合物的重量百分比可为2-5％，优选3.5-4.5％。取代的聚丙烯酰胺聚合物，如甲基或烷基取代的聚合物也属于本发明的范畴。

用于眼睛前房的丙烯酰胺凝胶给药系统具有以下特征：给药基质溶解或降解的任何产物均无毒及不妨碍小梁网工作；凝胶为视觉透明的；及凝胶可留在眼睛前房而不带来任何临床副反应，如无法接受的眼压升高。

对本领域技术熟练人员很明显所需粘度可通过改变制剂中聚合物的分子量和百分比浓度实现。例如，低粘度的凝胶制剂可利用低分子量的聚合物或低百分比浓度或两者的结合实现。高粘度的胶可用较高分子重量和较高百分比浓度实现。中等粘度可通过类似改变分子量和百分比浓度实现。

需要比局部和切开性损伤用凝胶更低粘度的凝胶制剂，即用于治疗眼睛前房伤患的制剂和用于眼睛伤患治疗的低粘度溶液中，可改变聚合物的百分比浓度和分子量来实现所需粘度。例如，在眼睛前房应用中，凝胶可包括占重量1-20％，分子量在80,000-240,000范围内的纤维素聚合物。优选浓度范围为1-3％。眼睛前房应用的另一个方案中，可包括浓度为0.5-5％的分子量为500,000-8,000,000的透明质酸。优选透明质酸的浓度为0.5-2.0％，分子重量为2,000,000-4,000,000。用于眼睛前房的优选粘度范围为1000-100,000cps。

低粘度溶液可包括重量0.1-2.0％的分子量约100,000-4,000,000的聚丙烯酸。优选方案中，聚合物为0.05-0.5％。另一方案中，稀粘度溶液可包括重量2-40％，平均分子量500-500,000的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物。优选，浓度为2-20％，分子量约1,000-15,000。或者，稀粘度溶液可包括1-20％的纤维素聚合物，分子量约80-240,000。优选浓度在1-10％的范围内。进一步的方案中，稀溶液可包括重量0.5-5.0％，分子量约500,000-8,000,000的透明质酸。优选浓度为0.5-2.0％，分子量为1,000,000-6,000,000。如果稀粘度溶液将用作滴眼剂，优选粘度在1-1000cps范围内。如果用作其它，如浸泡绷带，那么1.0-5,000范围内的任何浓度均可。

用于本发明凝胶的纤维素聚合物能够稳定多肽生长因子使其在水溶液中不丧失生物活性。用于稳定EGF使其不丧失生物活性的纤维素聚合物在美国专利号4,717,717中描述。本发明所用的纤维素聚合物为水溶的醚化的纤维素聚合物，如纤维素，羟烷基纤维素及烷基羟烷基纤维素，例如甲基纤维素，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素。优选甲基纤维素和羟烷基纤维素的衍生物如羧甲基纤维素，羟丙基纤维素，羟乙基纤维素羟丙基甲基纤维素。

PDGF纤维素聚合物凝胶制剂的稳定性可通过在制剂中加入带电荷的化学物质如带电荷的氨基酸或金属离子增加。可用的合适的氨基酸包括赖氨酸，精氨酸，组氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，丙氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，丝氨酸，天冬酰胺和色氨酸。也可用氨基胍和鱼精蛋白。凝胶制剂中可用的合适的金属离子包括锌和镁。氨基酸可以游离酸或其盐如盐酸盐应用。本文所用“稳定性”是指防止凝胶中PDGF有丝分裂活性的丧失或凝胶中释放的PDGF蛋白的量增加。这样一来本发明提供了可用于治疗伤患的的PDGF凝胶制剂。

CMC凝胶中PDGF稳定性的增加可通过减小PDGF间的电荷相互作用或通过加入竞争的正或负电荷的对抗离子来减小与CMC的缩短尾部间的相互作用完成。在制备中加入制剂防腐剂或通过如，过滤或在高达1巴的压力下应用约122℃的温度加热数分钟将制剂灭菌是优越的。

可用本发明的凝胶制剂包被吸收纱布的纤维，形成可附于伤患处的治疗绷带。优选低粘度制剂用于本应用。伤患处治疗绷带优选通过用含具有有丝分裂活性的多肽生长因子的水性凝胶溶液浸泡纱布。然后就可将绷带用于伤患处使纱布的包被纤维与伤患处接触，促进细胞生长以增加伤口愈合的速度。

本发明的凝胶可用于滴眼剂，眼部冲洗溶液，用于伤口恢复的软膏等。用本发明的组合物可治疗的损伤为意外或医疗伤害导致的上皮损伤如眼伤，由角膜溃疡，放射性角膜切开术，角膜移植，上角膜透镜移植术和其它外科手术诱导的眼中的伤患所导致；及皮伤如烧伤，切开性损伤，皮肤移植中供体位点的伤患和溃疡(皮肤，decubitis，静脉停滞和糖尿病)。本文所用眼部伤患治疗包括前房伤患治疗和结膜下的伤患治疗。本发明的凝胶还可用于治疗内部切开性损伤及内部伤患如胃溃疡。

凝胶用于内部或切开性损伤治疗的应用中，优选形成凝胶的聚合物可降解。天然存在的聚合物通常可降解。如胶原，葡糖胺多聚糖，明胶和淀粉。纤维素不能降解。合成的聚合物如乙烯聚合物不可降解。本文所描述的生物可降解度为本领域技术熟练人员熟知。

以下列出的实施例用于阐明本发明。本发明不为这些实施例局限，只被后附的权利要求书限定。

实施例1

羧甲基纤维素凝胶

羧甲基纤维素(CMC或NaCMC)凝胶按照本发明制备。羧甲基纤维素钠优选药品级的CMC(NaCMC)7H3SFPH。在350升Fryma混合容器中将下述成份加入226.2千克80℃的注射用水(WFI)中：1946.3克氯化钠及1203.5克L-赖氨酸盐酸盐。混合物搅拌10分钟。打开内部匀浆器(约2850转/分)，5分钟内加入5776.8克NaCMC。10分钟后关闭匀浆器。混合物以44转/分搅拌，冷至25℃。温度达到25℃时，混合物在-0.8巴下排空。然后在122℃将混合物灭菌20分钟。

灭菌后，将混合物冷至25℃，与下列组分一起混合：11.721升WFI,377.9克三水合乙酸钠及15.6克乙酸。这些组分通过灭菌滤器过滤无菌地加入凝胶中。混合物搅拌30分钟。rhPDGF-B(25克)在2500毫升WFI中的溶液通过过滤无菌地搅拌下加入凝胶。然后以250毫升WFI轻洗。混合凝胶2小时，然后无菌地转移至不锈钢传输容器中。凝胶转移至封口器封入封口的容器中。37℃下测定该胶具有2883cps的粘度。

实施例2

羧甲基纤维素凝胶

羧甲基纤维素凝胶按以下方法制备：

向1900克加热至70-80℃的高纯水中加入3.24克羟苯甲酸甲酯和0.36克羟苯甲酸丙酯搅拌直到视觉观察溶解。羟苯甲酸酯溶解后，加入3.14克乙酸钠和8.086克氯化钠，取走热源。溶解后，将溶液冷至15-30℃。向冷却的溶液中加入136微升乙酸和1.73毫升间苯甲醚。充分搅拌后，测定缓冲液的PH(PH=5.63)，加水至最终体积(2升)。缓冲液的最终PH为5.60。向1升聚碳酸酯瓶中的585.6克缓冲液中加入3.0克L-赖氨酸盐酸盐，混合物搅拌直至视觉溶解。用设在1300转/分的Lightning Labmaster混合器，将14.4克Aqualon CMC，级别7H3SFPH30秒钟内通过一改造的漏斗加入缓冲液中，凝胶共混合90分钟，得到2.4％的CMC凝胶。

凝胶通过基于rhPDGF-B药物溶液光密度(OD@280纳米)的计算以100微克/克rhPDGF-B/gm的胶制成制剂，如下：用注射器向2.4％CMC凝胶中加入6克rhPDGF-B药物(OD=10.0毫克/毫升)，将药物加入凝胶的几个不同位置。手动混合凝胶数分钟，Heidolph混合器在0.2微米-滤过的氮气下300转/分混合1小时。将凝胶在滚轴上低速滚动1小时。然后将rhPDGF-B/CMC凝胶包装入15克容量的Teledyne层状试管(约10克/管)，试管以Kalix热封。总产量为55管。

实施例3

羧甲基纤维素凝胶

羧甲基纤维素(CMC或NaCMC)凝胶按照本发明制备。羧甲基纤维素钠优选药品级的CMC(NaCMC)7H3SFPH。将48.6克羟苯甲酸甲酯和5.4克羟苯甲酸丙酯加入50升Fryma混合容器中的28.4千克水中，加热至80℃，保持1小时。混合物冷至30℃，在16转/分下加入下列组分：47.1克乙酸钠，242.6克氯化钠和150克L-赖氨酸盐酸盐及2.0克冰乙酸。关闭锚发动机，溶解瓶定在1300和1600转/分间，在不足1分钟内加入720克CMC粉末。然后开启锚发动机，所得混合物混合1小时。6分钟后关闭溶解瓶。

混合1小时后，122℃将混合物灭菌20分钟。灭菌后，冷至室温。加入27克间苯甲醚，所得混合物再混合1小时。用无菌技术将PDGF加入灭菌的胶中。所得凝胶搅拌1小时。37℃下测定该胶具有8200cps的粘度。

实施例4

羧甲基纤维素凝胶

羧甲基纤维素(CMC或NaCMC)凝胶按照本发明制备。药品级的羧甲基纤维素钠(7H3SFPH)用于本制剂。向350升的Turbo Emulsifier混合器中加入247.4千克纯化的水。内部的匀浆器在最高设置(1400转/分)，向混合器中加入下列成份：405克羟苯甲酸甲酯和45克羟苯甲酸丙酯。混合物匀浆5分钟，然后在16转/分下搅拌，温度升至60℃。温度升至60℃后，溶液搅拌1小时。冷至30℃。下列组分加入该溶液：2020克氯化钠，392克三水合乙酸钠，1250克L-赖氨酸盐酸盐，16.25克乙酸和225克间苯甲醚。所得混合物搅拌15分钟。溶液转移至600升的容器池中，将6000克羧甲基纤维素钠加入Flashblend匀浆器的漏斗中。液体通过Flashblend匀浆器抽回Turbo Emulsifier混合器中，CMC加入缓冲液中。

所形成的凝胶搅拌2小时。向其中加入26.05克rhPDGF-B在2631克水中的溶液，然后以100克水轻洗。然后混合凝胶2小时。抽空混合容器，以氮气中断真空。

然后将胶灌入15克试管中。得到37℃测量的，75812cps的最终粘度。

实施例5

聚丙烯酸凝胶

聚丙烯酸凝胶(Carbopol)按照本发明制备。优选聚丙烯酸的级别为浓度为0.02-1.5％的称为Carbopol934P和940的。更高浓度的聚丙烯酸降低EGF的释放速度。聚丙烯酸的粘度在PH6-10，优选6.5-7.5的范围内通常很稳定。

在4升的烧杯中将下列组分混合：6.3克羟苯甲酸甲酯，0.7克羟苯甲酸丙酯和177.5克甘露糖醇在3500毫升水中。溶液在桨状混合器下混合直至固体溶解。聚丙烯酸(17.5克，Carbopol940,BF Goodrich)通过40目过筛，加入正在1000转/分下混合的溶液中。这样分散和溶胀了聚丙烯酸微粒。加入7.6克固体NaOH的10％溶液中和至PH7.0。从该胶中取走900克的部分，高压灭菌，得到无菌胶。该方法的剩余部分在class100区进行。1.18毫克/毫升(12毫升)的EGF储备液滤过0.22微米的滤膜，进入无菌试管，以5毫升水洗滤膜，滤入同一试管。用注射器将试管内容物加入凝胶中。以浆状混合器充分混合凝胶形成均相分散的EGF。凝胶置于高压灭菌的容器中。用氮气将凝胶从压力容器中压出，通过无菌管进入10毫升的注射器中。检测样品的活性，表明每毫升EGF含15.6微生物，10克的样品不含微生物。制备的凝胶粘度在约490,000至约520,000cps的范围内。将该凝胶制剂用于猪和荷兰猪的部分厚皮肤切开性损伤模型，凝胶显示了这些动物中伤口愈合加速和较好的质量。

实施例6

Pluronic凝胶制剂

聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(Pluronic)由于它们表现相反的热蚀凝行为，而且它们具有良好的药物释放特征和低毒性，在局部给药系统中具有很大的潜力。低分子量的Pluronic共聚物在水中任何浓度下均不形成凝胶。Pluronic F-68室温下形成凝胶的最低浓度为50-60％。浓度为40％的Pluronic F-68室温下形成凝胶，室温下Pluronic F-108在浓度为30％形成凝胶。Pluronic F-127在水中25℃浓度仅为20％就形成凝胶。Pluronic F-68,F-88,F-108,F-127可用作用于烧伤和其它供体位点控释给予EGF的药物剂型。凝胶应是等渗的，优选PH值在6-8的范围内，更优选在6.5-7.5。

Pluronic凝胶的一个有趣的性质就是它们能够作为温度和聚合物浓度的功能而成胶。当Pluronic溶液加热时就形成了凝胶。因此，室温下凝胶为低粘度的水溶液，当与人体接触为人体温加热时，粘度增加，溶液成胶。EGF可在溶液状态下与Pluronic结合，用于伤患处。在这点上，有效降低EGF向伤患处释放的蚀凝会发生。使EGF和伤患处上皮接触时间延长。凝胶可以液态应用或与敷料(浸透于液态中)联合使用以提供机械支持。Pluronic凝胶的使用优越性包括这些胶可通过过滤的方法灭菌及伤患处可与EGF长时间接触。

含EGF的Pluronic F-127的制备通过将下列混合：1.8克一水磷酸钠，5.48克七水磷酸二钠和46.9克甘露糖醇于1,000毫升蒸馏水中混合。PH调至7.0，溶液冷至4℃。Pluronic F-127在浆状混合器混合下逐渐加入该冷却溶液中。混合溶液30分钟，4℃下放置过夜。水溶液中的EGF可在制备凝胶前加入溶液或在PluronicF-127溶解于溶液中后混合。为得到100毫克/毫升浓度的EGF，将1.812毫升EGF溶液(1.38毫克/毫升)加入23.188克20％Pluronic F-127胶中。溶液极似液态。溶液的粘度随着其加热至35℃增加，如表1所示。

表1

温度℃ 粘度(cps,0.5rpm)

0-16 未检测到

18 4,000

19 250,000

21 500,000

28 655,000

30 685,000

37 650,000

还制备了粘度为1,000,000和12,000,000的Pluronic制剂。测定了制剂的释放动力学(11.5×106cps)，注意到85％的EGF在1小时内由制剂中释放出来。

实施例7

HPMC凝胶制剂

制备了许多HPMC凝胶制剂。凝胶由非常低分子量到高分子量的HPMC制得。优选分子量范围在80,000-240,000。非常低分子量的聚合物(Methocel E15LV)，需要多至10-20％的HPMC来形成凝胶。非常高分子量的聚合物(Methocel K100M)，形成凝胶只需要1-3％的溶液。以不同等级和不同浓度制备凝胶以研究释放动力学。每个胶的PH均调至7.2。EGF的释放速率与可溶性胶的粘度成比例。

在1,500毫升烧杯中加入0.83克一水磷酸钠，7.24克七水磷酸二钠，6.22克NaCl和用于冲洗的500毫升无菌水。将混合物磁力搅拌使固体溶解，调PH至7.2。搅拌下将溶液加热至80℃，通过40目筛将30.0克HPMC(Methocel K100M；Dow)加入。取走热源，再搅拌10分钟。剩余的500克水以冰的形式加入。随着混合物越来越粘稠，手动进行搅拌。冷至室温然后冷至4℃过夜。取出130克的部分，浆状混合器作用下与13.4毫升1.12毫克/毫升EGF的无菌溶液混合得到浓度为104毫克/毫升的EGF。

所制备的凝胶具有室温下54,000-950,000cps的粘度。EGF从所制备的不同HPMC凝胶制剂中的释放列于表2。

表2

样品 Brookfield粘度(CPS) EGF的释放25℃ 37℃2085-91-1 E4M 4％ 112×10³ 102×10³ 75％in 5小时2085-92-2 E4M 5％ 274×10³ 300×10³ 75％in 5小时2085-92-2 E4M 6％ 652×10³ 946×10³ 50％in 5小时2085-91-2 E4M 4％ 112×10³ 286×10³ 75％in 5小时2085-93 K15M 3％ 102×10³ 70×10³ 75％in 5小时2085-91-3 E4M 4％ 92×10³ 54×10³ 75％in 5小时

实施例8

透明质酸凝胶制剂

透明质酸(HA)是具有重复的包括N-乙酰葡糖胺和葡糖醛酸二糖单元的直链结构的粘多糖之一。HA存在于自然界，微生物及人和其它动物的皮肤和结缔组织中。依来源，制备方法和检测方法不同，HA的分子量在50,000-8,000,000范围内。高粘度的HA溶液具有润滑性和很好的增加水分效应。在关节处的滑液中，眼球的玻璃体内，脐带，皮肤，血管和软骨中均发现有HA。可能由于其良好的保持水分的能力和与蛋白连接的亲合力，它作为润滑剂和震动吸收试剂应用尤其好。在人体内应用很安全。因此，可用于内部伤患处的治疗如关节或眼睛前房的治疗。1％的透明质酸钠溶液(分子量4,000,000；MedChem)与EGF制成制剂得到浓度为100毫克/毫升。1％HA溶液的粘度为44,000cps。根据本发明制备的HA/EGF制剂已证明可刺激眼睛前房的内皮再愈合。

实施例9

EGF由药物剂型中释放的动力学

评价了各种剂型在体外扩散细胞系统中持续释放EGF的有效性，测定了T₂₅和T₅₀的值。EGF的释放是其从胶中扩散和凝胶基质溶解的结果。将这两个过程作为EGF在体内可生物利用的可能机制，HPMC凝胶具有持续释放EGF的最高值，T₂₅和T₅₀值分别为1.2和5.9。结果表明聚合物的分子结构在延长T值中比聚合物浓度更重要。在放置条件下研究的无盐基质(蒸馏水)中制备的胶产生低T值。这可能是无盐凝胶较快的溶解和较的粘度结合的结果。因此，本发明的凝胶优选非无盐的。预测本发明凝胶的T值可通过聚合物的修饰提高，如引入疏水性或亲水性侧链，离子对基团，金属离子，交联剂，EGF的亲合基团来控制EGF由所得产品形式中的释放。

表3总结了EGF由药物剂型中释放的动力学。表中HPMC后的不同字母代表聚合物中取代的百分数。例如，K=2208或22％甲基化和8％羟丙基取代；F=2906；及E=2910。字母后的数值(即K后的数值100)指水中2％的溶液的粘度，单位为千cps。AQ指无盐溶液中制备的凝胶。所有其它的凝胶在磷酸缓冲液(PBS)中，PH约7.0制备。T值单位为小时。

表3由剂量形式释放EGF的动力学数据总结粘度聚合物 CDS T₂₅ T₅₀HPMC K100M(mw 240,000) 1％ - 0.0854 1.000

2％ 287×10³ 0.4687 1.9172

3.5％ 116×10⁶ 1.2270 5.8528

4.0％ - 0.8536 4.1386

5.0％ 3.07×10⁶ 0.8807 3.5808HPMC K-15M(mw 120,000) 3％ 122×10³ 0.857 2.0635

4AQ％ 331×10³ 0.2727 1.6900HPMC K-4M(mw 86,000) 4％ 96×10³ 1.0476 2.6349HPMC F-4M(mw 86,000) 4％ 122×10³ 0.7619 1.8730HPMC E-4M(mw 86,000) 4％ 128×10³ 1.0159 2.2657

5％ 312×20³ 0.8615 1.8462HPMC E-4M(mw 86,000) 5AQ％ 240×10³ 0.3211 1.6044

6AQ％ 680×10³ 0.6944 3.0040Carbopol 934P(mw 3×10⁶) 0.5％ 494×10³ 0.2727 0.7300Pluronic F-127(mw 12,000) 20％ 1.1×10⁶ 0.1936 0.3548

实施例10

聚丙烯酰胺凝胶制剂

聚丙烯酰胺/EGF凝胶制剂用聚丙烯酰胺Cyanamer N-300和Cyanamer N-300 LMW(两者均可由美国Cyanamid买到)制备。CyanamerN-300的分子量为约5-6百万，Cyanamer N-300 LMW的分子量约13百万。

将聚丙烯酰胺聚合物加入预先混合的盐溶液中制备下列组成的聚丙烯酰胺凝胶。这些凝胶然后用于测定EGF的释放。

表4组分重量％浓度

2085-140A 2085-140BCyanamer N-300 4.0 -Cyanamer N-300 LMW - 4.0氯化钠 0.049 0.049氯化钾 0.075 0.075氯化钙 0.048 0.048氯化镁 0.080 0.080乙酸钠 0.890 0.890无水枸椽酸钠 0.170 0.170无菌水 94.688 94.688粘度，cps. 552×10³ 132×10³

向1.809克Cyanamer N-300(2085-140A)聚丙烯酰胺中加入72.4毫升的¹²⁵I-EGF和EGF的混合物，在两个3升注射器中混合。将300-400毫克的该胶放于Franz扩散细胞的供体位点。在预定的时间间隔，在γ计数器上对接收缓冲液的50毫升等份计数。接收缓冲液含3.5毫升PBS，包括0.4％BSA(牛血清白蛋白)0.02％叠氮钠。类似地，向1.11克Cyanamer N-300 LMW(2085-140B)聚丙烯酰胺中加入44.5毫升的¹²⁵I-EGF和EGF的混合物，测定EGF的释放。

制备了具有下述制剂的另一个聚丙烯酰胺凝胶(2085-138C)。

表5组分 2085-138CCyanamer N-300 7.0g乙基汞硫代水杨酸钠 0.2g无菌水 192.8g粘度 258×10³pH 7.54

利用2085-138C胶制备了含EGF10毫克/毫升的凝胶。将5克2085-138C胶称入8个血清瓶中，加入50毫克1毫克/毫升EGF(蛋白试验1.41毫克/毫升)。

将EGF包被于伤口敷料上，得到较好的释放特征。伤口敷料是由聚丙烯酰胺/琼脂糖(Geliperm,Geistlich-Oharma；Wolhusen，瑞士)构成的凝胶膜。通过EGF水溶液浸湿敷料，将敷料以EGF包被。24小时内约70％EGF从敷料中释放出来。

稳定的PDGF纤维素聚合物凝胶制剂

根据本发明制备羧甲基纤维素(CMC)。研究中所用的CMC为药物级的2.4％羧甲基纤维素钠(Aqualon Co.,Wilmington,DE)，分子量在900,000-2,000,000道尔顿范围内。CMC胶与rhPDGF-BB(Chiron公司，Emeryville,California)制成制剂。发现PDGF纤维素聚合物凝胶制剂的稳定性可通过在制剂中加入带电荷的化学物质，如带电荷的氨基酸或金属离子来得以增加。本文所用“稳定性”是指防止凝胶中PDGF有丝分裂活性的丧失或凝胶中释放的PDGF蛋白的量增加。这样一来本发明提供了可用于治疗伤患的的PDGF凝胶制剂。

测定了该制剂在荷兰猪部分厚皮肤切除性损伤模型中的体内伤口愈合效能。

在荷兰猪部分厚度皮肤切除性损伤模型中，用植皮刀在每个荷兰猪(每组4-8个动物)上制造两个部分厚皮肤度切除性损伤。前5天(0-4天)以0.3毫升胶每天处理3×1厘米伤口(典型的约0.4-0.8毫米深)一次，以无菌的吸收垫覆盖。垫覆盖以吸留的敷料，每次处理以保护性的绷带包扎。7天时采集伤患处进行组织学评价。通过将Gomori三铬-染色的组织切片投射在放大50倍的计算机化的数字面积计上测定肉芽组织的平均厚度。通过追踪伤患处肉芽组织的标准长度的面积除以长度得到厚度。每个伤口测量了三个组织区，将每个荷兰猪两处伤口所得值平均得到每个动物的值。

这一模型中，CMC制剂中10-300微克/克浓度的PDGF诱导2-3倍(或更大)伤患处肉芽组织厚度的增加。局部肉芽组织是新形成的结缔组织和血管，它们是伤口愈合的主要组成。肉芽组织物理上填入伤患处。另外，肉芽组织提供上皮长过受伤表面所需的丰富的血流。因此，肉芽组织是治疗伤患处的必要组成。

表显示1)CMC胶中PDGF的效能，2)赖氨酸效能的缺乏对新制备批中PDGF效能的影响(表6)，3)赖氨酸稳定的制剂效能保留30个月(存于2-8℃)(表7)。及4)在无菌的未(以赖氨酸)保存的CMC制剂中PDGF效能的保留(表8)。

表6PDGF和赖氨酸对荷兰猪部分厚度伤口中肉芽血织厚度的影响处理肉芽组织 N

厚度(毫米) (动物)

平均值±S.E.M原始CMC 63.3±15.9 7CMC中的PDGF(30微克/克) 161.9±25.4^* 7CMC+0.1％赖氨酸 64.4±8.9 7CMC中的PDGF(30微克/克)+0.1％赖氨酸 162.6±23.5^* 8CMC+0.5％赖氨酸 59.9±5.6 8CMC中的PDGF(30微克/克)+0.5％赖氨酸 144.6±21.8^* 7^*与赋形剂对照显著不同(p＜0.05)

数据表明CMC胶中的重组人类血小板生成生长因子-BB在增加试验荷兰猪伤患处的肉芽组织数目中有效(此处2.5倍)。数据还表明，高至0.5％的赖氨酸不影响CMC凝胶中PDGF的效能。

表7赖氨酸稳定的CMC中的PDGF对荷兰猪部分厚度伤口中肉芽组织厚度的影响处置肉芽组织 N厚度(毫米) (动物)平均值±S.E.MCMC^* 81.4±15.5 630月批CMC中的 311.3±32.4^** 6PDGF(30μg/g)新制批CMC中的 217.3±22.3^** 6PDGF(30μg/g)

^*含0.5％赖氨酸的所有制剂

^**与赋形剂对照组不同(p＜0.05)

这些包含0.5％赖氨酸的制剂保持其促进试验荷兰猪肉芽组织形成效能达至少30个月。

表8

无菌未防腐CMC制剂中的PDGF对荷兰猪部分厚度伤口中肉芽组织厚度的影响处理肉芽组织 N

厚度(毫米) (动物)

平均值±S.E.M无菌CMC^**未防腐 150.1±48.5 4无菌未防腐CMC中的 652.6±58.6^*** 4PDGF(100微克/克)无菌未防腐CMC中的 635.1±73.5^*** 4PDGF(100微克/克)无菌未防腐CMC中的 752.2±79.5^*** 4PDGF(100微克/克)

^*该模型在不同实验室中完成所用的伤口比在赖氨酸试验中用深，因而载体对照基成肉芽组织厚度更高。

^**含0.5％赖氨酸的所有制剂。

^***与赋形剂对照不同(p＜0.05)

这些数据表明无菌未防腐的PDGF/CMC(以0.5％赖氨酸)具有促进伤患处肉芽组织形成的效能。

带电荷的化学物质能够稳定PDGF/纤维素聚合物制剂的机制还不清楚。希望不局限于理论，稳定效应可能是由于带电荷的物质与PDGF赖氨酸竞争纤维素聚合物还原性末端而产生和/或通过降低纤维素聚合物的游离羧诺与PDGF赖氨酸间的电荷相互作用产生。我们实验室曾论证了PDGF和纤维素聚合物，如CMC间的电荷相互作用。能够竞争正和负电荷的带电荷的化学物质可降低PDGF与纤维素聚合物间的电荷相互作用，从而增加PDGF的稳定性。检测了阳性抗衡离子增加PDGF由CMC胶中回收的能力。

要回答PDGF-CMC稳定性的问题首先要求理解CMC存在下PDGF如何丧失活性的。活性丧失的一个可能的机制是PDGF在CMC中的吸附和截留。这一吸附的本质涉及高度正性的PDGF B二聚物(包含22个精氨酸和14个赖氨酸残基)与含大量游离羧基的负性CMC基质的截留。我们的研究表明在几乎或完全无对抗离子存在来与电荷相互作用相抵时，CMC中的PDGF的有丝分裂活性降低，且蛋白释放降低。

可通过加入竞争性正性或负性的对抗离子减小PDGF间的电荷相互作用或降低其与CMC还原性末端间的相互作用来增加CMC凝胶中的PDGF稳定性。在一个试验中，赖氨酸(0.5％w/w)增加CMC凝胶中PDGF的稳定性大于50％。能够降低或竞争PDGF-CMC电荷相互作用或其与CMC还原性末端间的相互作用的任何化合物均可增加CMC凝胶中的PDGF稳定性。应当理解本发明制剂中的带电荷的化学物质最初以盐的形式加入制剂中。然后盐在凝胶的水环境下解离产生带不同电茶的化学物质。本文所用术语“带电荷的化学物质”包括下述物质的可药用形式：盐，，如氯化锌和氯化镁；缓冲液，如单/二乙醇胺，富马酸，苹果酸，枸缘酸钾和葡糖酸钠；氨基酸，如赖氨酸，精氨酸，组氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，丙氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，丝氨酸，天冬酰胺，色氨酸；氨基胍和鱼精蛋白；离子表面活性剂，如油酸和oleth5；及合成的多阳离子或阴离子聚合物，如聚氨基酸。本文所用术语“可药用的”指所述物料可用于治疗人类或其它哺乳动物的治疗而不引起副作用，如毒性，黏膜或皮肤组织疱疹或白化。

除下所列试验，0.5％氨基胍亦能增加PDGF由纤维素聚合物凝胶中的回收。由于其较强的亲核性，氨基胍在防止蛋白的非酶性糖基化方面是一个较赖氨酸更好的竞争剂。

本发明旨在包括含纤维素聚合物，或其它有潜在还原性末端聚合物，及可药用的亲核性对抗离子，如赖氨酸或氨基胍的制剂。

试验#1

所用样品为与CMC安慰剂混合0.5小时的rhPDGF-B和4℃混合60天的CMC中的rhPDGF-BB。表9锌离子浓度对PDGF恢复的影响。同样的锌离子浓度混合0天的样品显示了较混合60天样品更高的恢复百分比。这些数据提示PDGF离子型地结合于CMC，而且随着时间，这种结合交联CMC，使PDGF释放需要更多的锌离子。

在300埃大孔C4反向HPLC柱上用含0.1％三氟乙酸的10-70％乙晴梯度测定PDGF的恢复。

表9

rhPDGF恢复％摩尔浓度，锌 0天时 60天时0.075 84 710.15 88 810.3 97 90

表10表明其它带电荷的化合物对CMC胶中PDGF恢复的影响。将0.5克混合60天的PDGF样品溶于10毫升含0.01％BSA(用作对照)的水中，将所列化合物加入各样品中。

表10样品％PDGF恢复A对照 50B 0.2M NaCl(mono+) 42C 0.2M ZnCl₂(di++) 64D 0.2M CaCl₂(di++) 63E 0.2M MgCl₂(di++) 69F 0.5％甘氨酸(+，赖氨酸) 64G 0.5甘氨酸(两性离子) 50

这些数据表明正电性更强的Zn,Ca,Mg及赖氨酸能够减小PDGF-CMC间的电荷相互作用。它们还提示，在CMC基质中，PDGF可能会缠绕或陷入。

试验#2

设计这组试验来检测不同的氨基酸对CMC中PDGF恢复的影响。所用样品为100微克PDGF/克CMC,PH6.0，缓冲液0.13MNaCl，加0.5％氨基酸。样品在聚丙烯试管中46℃孵育2天，然后如前在反向高效液相上分析。

表11列出了极性和非极性氨基酸对CMC中PDGF恢复的影响的相对评价数据。含更高电荷的氨基酸(赖氨酸，天冬氨酸和谷氨酸)具有最大的PDGF恢复。在PH7.0时，所有氨基酸均为两性离子。因此，依赖于R-基的电荷，它们将给出较高的恢复。R-基电荷越高，(如赖氨酸)，稳定效应越好。

表11不同类氨基酸对CMC中PDGF恢复的影响RECOVERY IN CMC

与零时对照组样品相比的恢复％对照，零时 100.0CMC+no AA 37.3非极性侧链甘氨酸 43.4丙氨酸 37.5蛋氨酸 40.8脯氨酸 40.2无电荷极性侧链丝氨酸 48.7天冬酰胺 39.9酪氨酸 45.5色氨酸 42.0离子型极性侧链赖氨酸pk9 64.0天冬氨酸pk4 70.4谷氨酸pk4 58.2

还评价了其它不同的带电荷化合物对CMC中PDGF恢复的影响，数据列于表12。这些试验中应用了100微克PDGF/克CMC。数据显示当NaCl浓度由0M升至1.13M,PDGF的恢复百分比由32％升至96％。0.1MMg++给出94.8％恢复。

表12不同的带电荷化合物对CMC中PDGF恢复的影响样品恢复百分比

以零时为基准对照，零时 100.0CMC+0.0M NaCl(仅用水配制) 32.1CMC+0.0M NaCl(仅用buffer配制) 27.6CMC+0.13M NaCl 65.9CMC+0.33M NaCl 82.8CMC+0.63M NaCl 90.7CMC+0.94M NaCl 93.8CMC+1.13M NaCl 96.8CMC+0.0M NaCl+MgCl₂ 0.1M 94.8CMC+0.13M NaCl+Gly 0.5％ 76.7CMC+0.13M NaCl+Lys 0.5％ 85.5试验#3

一个月的含赖氨酸和不含赖氨酸的rhPDGF(30微克/克)的促有丝分裂活性列于表13。利用成纤维细胞胸苷摄入方法测定数据，以所测rhPDGF的含量表示。数据表明制剂中赖氨酸的存在增强了制剂的促有丝分裂活性。

表13rhPDGFμg/g不含赖氨酸(n=10) 含赖氨酸(n=4)25℃ 16.8+/-4 31.2+/-730℃ 10.4+/-2 27.0+/-0.5

rhPDGF-BB纤维素聚合物制剂

含rhPDGF-BB的纤维素凝胶制剂可按照通常接受的制剂技术制备。通常，制备所需组分的内部混合物就是所有要求的。“内部混合物”意指组合物的成分全部均相混合，从而使无一组分处于表面。

本发明的组合物包括“伤口治疗有效量”的PDGF，即足够加快伤口愈合速度的量。如医学领域熟知的，药用制剂的有效量随所用特定试剂，将处理处的状况和处理的主体而不同。因此，每个治疗制剂的有效剂量无法特别确定。故PDGF的伤患处治疗有效剂量为本发明的组合物为所处理的机体上或内在所需时间内提供足够PDGF的量，常小于通常所用量。1克本发明的典型组合物含约1.0微克-1000微克的PDGF。优选本发明的组合物每克制剂含约1微克-300微克的PDGF。

其它的成分如缓冲液，防腐剂，张力调节剂，抗氧化剂，其它聚合物(用来，如调节粘度或增充剂)及赋形剂也可用于本发明的组合物中。这些其它材料的例子包括磷酸盐，枸缘酸或硼酸缓冲液；硫柳汞，山梨酸，羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯，间苯甲酚和氯丁醇防腐剂；调节张力的氯化纳和/或糖；聚合物如聚乙烯醇，聚丙烯酸和聚聚乙烯吡咯烷酮；及赋形剂如甘露糖醇，乳糖，蔗糖，四乙酸乙二胺，等。

表14列出了含rhPDGF-BB的一般的纤维素聚合物凝胶制剂。这种制剂的粘度在室温下1000-150,000cps的范围内。

表14成份浓度范围RhPDGF-BB 1.0-1,000mg每克胶纤维素聚合物 1.5-3.0％(w/w)带电荷的化学物质 0.1-3.0％(w/w)防腐剂 0.15-0.25％(w/w)含rhPDGF-B的特殊制剂列子表15,16及17

表15成份量％(w/w)纯水 100g 96.02

量g/100g

纯水羟苯甲酸甲酯 0.1620g 0.16羟苯甲酸丙酯 0.0180g 0.02三水合乙酸钠 0.1570g 0.15赖氨酸盐酸盐 0.5000g 0.48氯化钠 0.8086g 0.78间苯甲酚 0.0900g 0.09冰乙酸 0.0065g 0.01羧甲基纤维素钠 2.4000g 2.30

量g/100g

胶rhPDGF-B(Bulk Stock sol’n 0.0036g

表16成份量/250kg批量量/g胶乙酸 15.6g 0.06mg氯化钠 1946.3g 7.70mg三水合乙酸钠 377.9g 1.51mgL-赖氨酸盐酸盐 1203.5g 4.81mg注射用水 240700.0g^* 962.80mg羧甲基纤维素钠 5776.8g 23.11mgrhPDGF-BB(bulk drug) 25.0g 0.10mg^*总WF1包括液体药物中的2500克。

表17成份 g/100g凝胶rhPDGF-BB 0.01羧甲基纤维素钠 2.40氯化钠 0.8086三水合乙酸钠 0.1570冰醋酸 0.0065羟苯甲酸甲酯 0.1620对羟苯甲酸丙酯 0.0180间甲苯酚 0.0900L-赖氨酸盐酸盐 0.5000注射用水 100.00

在此本发明的描述参考了一些优选的方案和实施例。很明显对本领域技术熟练人员本发明可能有很大的改变。尤其，本领域技术熟练人员能够改变分子量和不同聚合物的百分比以达到期望的粘度。本领域技术熟练人员还能够用不同的聚合物或生长因子代替本发明此处所列的。既然对本领域技术熟练人员来说有明显的变动，本发明不为此处所列所限制而只为权利要求书限定。

Claims

1．一种药物组合物，包括：

a)有效伤口治疗量的血小板生成生长因子(PDGF)；

b)可药用的纤维素聚合物；及

c)可药用的带电荷化学物质，选自包括赖氨酸，精氨酸，组氨酸，鱼精蛋白，丙氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，丝氨酸，天冬酰胺，色氨酸，氨基胍，锌和镁的组，其中组合物为粘度在室温下约1000-500,000cps范围内的水性凝胶。

2．权利要求1的组合物，其中PDGF为PDGF-B的同二聚体。

3．权利要求1的组合物，其中纤维素聚合物选自包括羧甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素的组。

4．权利要求1的组合物，其中PDGF的浓度在约1.0μ/克至约1,000μ/克的范围内。

5．权利要求1的组合物，其中纤维素聚合物的浓度约1.5％(W/W)至3％(W/W)，聚合物的分子量约450,000-4,000,000。

6．权利要求1的组合物，其中带电荷物质的浓度在约0.1％(W/W)至3.0％(W/W)的范围内。

7．权利要求1的组合物，其中粘度在50,000-150,000的范围内。

8．权利要求1的组合物，还包括一种防腐剂。

9．权利要求8的组合物，其中防腐剂选自包括羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯和间苯甲酚的组中的一种或多种。

10．用于治疗病人伤患处的方法，包括以权利要求1的组合物接触伤患处。

11．一种药物组合物，包括：

a)有效伤口治疗量的人类PDGF-B同二聚体；

b)羧甲基纤维素(CMC)；及

c)赖氨酸，其中组合物为室温下粘度在约1000-500,000cps范围内的水性凝胶。

12．权利要求11的组合物，其中纤维素聚合物的浓度约1.5％(W/W)至3.0％(W/W)，聚合物的分子量约450,000-4,000,000。

13．权利要求11的组合物，其中赖氨酸的浓度在约0.1％(W/W)至3.0％(W/W)的范围内。

14．权利要求11的组合物，其中粘度在1000-150,000的范围内。

15．权利要求11的组合物，还包括一种防腐剂。

16．权利要求15的组合物，其中防腐剂选自包括羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯和间苯甲酚的组中的一种或多种。

17．用于治疗病人伤患处的方法，包括以权利要求11的组合物接触伤患处。

18．一种药物组合物，包括：

a)有效伤口治疗量的血小板生成生长因子(PDGF)；

b)可药用的浓度在约1.5％(W/W)至3％(W/W)范围内，分子量为约450,000-4,000,000范围内的纤维素聚合物；及

c)可药用的带正电荷化学物质，选自包括带正电荷的氨基酸，带正电荷的聚氨基酸和带正电荷的金属离子的组，浓度在约0.1％(W/W)至3.0％(W/W)范围内，其中组合物为粘度在室温下约1000-500,000cps范围内的水性凝胶。

19．权利要求18的组合物，其中粘度在约1000-150,000cps范围内。

20．权利要求18的组合物，还包括一种防腐剂。

21．权利要求20的组合物，其中防腐剂选自包括羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯和间苯甲酚的组中的一种或多种。

22．权利要求18的制剂，其中带电荷化学物质，选自包括赖氨酸，精氨酸，组氨酸，鱼精蛋白，丙氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，丝氨酸，天冬酰胺，色氨酸，氨基胍，锌和镁的组。

23．权利要求15的药物组合物，包括(克/100克胶)0.01克rhPDGF-B；2.40克羧甲基纤维素钠；0.81克氯化钠；0.157克三水合乙酸钠；0.0065克冰乙酸；0.162克羟苯甲酸甲酯；0.018对羟苯甲酸丙酯；0.09克间苯甲酚；0.5克L-赖氨酸盐酸盐；及100克注射用水，37℃下粘度在约20,000至约200,000cps范围内。

24．权利要求11的药物组合物，包括(克/100克胶)0.1克rhPDGF-B；23.103克羧甲基纤维素钠；7.784克氯化钠；1.511克三水合乙酸钠；0.0624克冰乙酸；4.813克L-赖氨酸盐酸盐；及962.63克水，37℃下粘度在约1000至约15,000cps范围内。

25．治疗病人伤患处的方法，包括以权利要求22的组合物接触伤患处。

26．治疗病人伤患处的方法，包括以权利要求23的组合物接触伤患处。