NO340438B1 - Antistoffer som binder til human IGF-IR, hybridomcellelinjer og nukleinsyrer, farmasøytisk blanding omfattende samme, anvendelse av samme for fremstilling av farmasøytisk blanding, fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk preparat, og anvendelser derav - Google Patents
Antistoffer som binder til human IGF-IR, hybridomcellelinjer og nukleinsyrer, farmasøytisk blanding omfattende samme, anvendelse av samme for fremstilling av farmasøytisk blanding, fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk preparat, og anvendelser derav Download PDFInfo
- Publication number
- NO340438B1 NO340438B1 NO20161389A NO20161389A NO340438B1 NO 340438 B1 NO340438 B1 NO 340438B1 NO 20161389 A NO20161389 A NO 20161389A NO 20161389 A NO20161389 A NO 20161389A NO 340438 B1 NO340438 B1 NO 340438B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antibody
- igf
- amino acids
- cells
- seq
- Prior art date
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 24
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 22
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 18
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 30
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 172
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 87
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 19
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 12
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 6
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 6
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 description 165
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 165
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 48
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 37
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 34
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 33
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 29
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 29
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 29
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 25
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 24
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 24
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 24
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 24
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 18
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 15
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 15
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 13
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 10
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 10
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 9
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- -1 glutaraldehyde) Chemical class 0.000 description 9
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 6
- 239000012741 Laemmli sample buffer Substances 0.000 description 6
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 6
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 5
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 5
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 4
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 4
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 4
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 4
- NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N Meprobamate Chemical compound NC(=O)OCC(C)(CCC)COC(N)=O NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 4
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 4
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 238000003566 phosphorylation assay Methods 0.000 description 4
- DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N phosphotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 3
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010293 colony formation assay Methods 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 3
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 3
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 3
- 230000027405 negative regulation of phosphorylation Effects 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- LSBDFXRDZJMBSC-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetamide Chemical class NC(=O)CC1=CC=CC=C1 LSBDFXRDZJMBSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-(5-hydroxy-2,2-dimethylchromen-6-yl)propan-1-one Chemical compound OC1=C2C=CC(C)(C)OC2=CC=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 101000852815 Homo sapiens Insulin receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000480 WST assay Toxicity 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 2
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 2
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 2
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 108091005990 tyrosine-phosphorylated proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N (6-azaniumylidene-1,6-dimethoxyhexylidene)azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=N)CCCCC(=N)OC IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 2,2-diamino-1,4-bis(4-azidophenyl)-3-butylbutane-1,4-dione Chemical compound C=1C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=1C(=O)C(N)(N)C(CCCC)C(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-(4-isothiocyanatophenyl)propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C(C)CN(CC(O)=O)CC(N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1-methyl-7h-purine-6-thione Chemical compound S=C1N(C)C(N)=NC2=C1NC=N2 FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyacetamide Chemical class NC(=O)COC1=CC=CC=C1 AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2-[(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C1=NN=C1SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 5-fluorouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000669426 Aspergillus restrictus Ribonuclease mitogillin Proteins 0.000 description 1
- 101150078806 BCAT2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 102100026413 Branched-chain-amino-acid aminotransferase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100540120 Caenorhabditis elegans vab-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710158575 Cap-specific mRNA (nucleoside-2'-O-)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108700032819 Croton tiglium crotin II Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical class Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108010031792 IGF Type 2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 244000302512 Momordica charantia Species 0.000 description 1
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229910020700 Na3VO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 101100413173 Phytolacca americana PAP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 201000004283 Shwachman-Diamond syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 240000001866 Vernicia fordii Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 101150045355 akt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 108010001818 alpha-sarcin Proteins 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000001399 anti-metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011717 athymic nude mouse Methods 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N azocan-1-yl-(3,4,5-trimethoxyphenyl)methanone Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(C(=O)N2CCCCCCC2)=C1 WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003460 beta-lactamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229930188550 carminomycin Natural products 0.000 description 1
- XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N carminomycin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N 0.000 description 1
- XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N carminomycin I Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950001725 carubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229930191339 dianthin Natural products 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 108010028531 enomycin Proteins 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 1
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 102000047882 human INSR Human genes 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010621 modeccin Proteins 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000011234 negative regulation of signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 108010076042 phenomycin Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000012414 sterilization procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N toluene 2,6-diisocyanate Chemical compound CC1=C(N=C=O)C=CC=C1N=C=O RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 1
- 150000003327 trichothecene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår antistoffer mot insulinlignende vekstfaktor I-reseptor (IGF-IR), fremgangsmåter for fremstilling derav, farmasøytiske blandinger inneholdende nevnte antistoffer og anvendelser derav.
Insulinlignende vekstfaktor I-reseptor (IGF-IR, EC 2,7,112, CD 221 antigen) tilhører familien av transmembran proteintyrosinkinaser (LeRoith, D., et al., Endocrin. Rev. 16
(1995) 143-163; og Adams, T.E., et al., Cell. Mol. Life Sei. 57 (2000) 1050-1063). IGF-IR binder IGF-I med høy affinitet og initierer den fysiologiske responsen til denne liganden in vivo. IGF-IR binder også til IGF-II, imidlertid med noe lavere affinitet. Overekspresjon av IGF-IR fremmer den neoplastiske transformasjonen av celler og det finnes belegg for at IGF-IR er involvert i malign transformasjon av celler og er derfor et anvendelig mål for utviklingen av terapeutiske midler for behandling av kreft (Adams, T.E., et al., Cell. Mol. Life Sei. 57 (2000) 1050-1063).
Antistoffer mot IGF-IR er velkjente på området og undersøkt for deres antitumor-effekter in vitro og in vivo (Benini, S., et al., Clin. Cancer Res. 7 (2001) 1790-1797; Scotlandi, K., et al., Cancer Gene Ther. 9 (2002) 296-307; Scotlandi, K., et al., Int. J. Cancer 101 (2002) 11-16; Brunetti, A., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 165 (1989) 212-218; Prigent, S.A., et al., J. Biol. Chem. 265 (1990) 9970-9977; Li, S.L., et al., Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252; Pessino, A., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 162
(1989) 1236-1243; Surinya, K.H., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 16718-16725; Soos, M.A., et al., J. Biol. Chem., 267 (1992) 12955-12963; Soos, M.A., et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86 (1989) 5217-5221; 0'Brien, R.M., et al., EMBO J. 6 (1987) 4003-4010; Taylor, R, et al., Biochem. J. 242 (1987) 123-129; Soos, M.A., et al., Biochem. J. 235
(1986) 199-208; Li, S.L., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 196 (1993) 92-98; Delafontaine, P., et al., J. Mol. Cell Cardiol. 26 (1994) 1659-1673; Kull, F.C. Jr., et al. J. Biol. Chem. 258 (1983) 6561-6566; Morgan, D.O. og Roth, RA., Biochemistry 25 (1986) 1364-1371; Forsayeth, J.R, et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 84 (1987) 3448-3451; Schaefer, E.M., et al., J. Biol. Chem. 265 (1990) 13248-13253; Gustafson, T.A. og Rutter, W.J., J. Biol. Chem. 265 (1990) 18663-18667; Hoyne, P.A., et al, FEBS Lett. 469 (2000) 57-60; Tulloch, P.A., et al., J. Struct. Biol. 125 (1999) 11-18; Rohlik, Q.T., et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 149 (1987) 276-281; og Kalebic, T., et al., Cancer Res. 54 (1994) 5531-5534; Adams, T. E., et al., Cell. Mol. Life Sei. 57 (2000) 1050-1063; Dricu, A., et al., Glycobiology 9 (1999) 571-579; Kanter-Lewensohn, L, et al., Melanoma Res. 8 (1998) 389-397; Li, S.L., et al., Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252). Antistoffer mot IGF-IR er også beskrevet i mange andre ytterligere publikasjoner, f.eks. Arteaga, C.L., et al., Breast Cancer Res. Treatment 22 (1992) 101-106; og Hailey, J., et al., Mol. Cancer Ther. 1 (2002) 1349-1353.
Spesielt anvendes det monoklonale antistoffet mot IGF-IR betegnet ocIR3 i stor grad i undersøkelser med hensyn til å studere IGF-IR-medierte prosesser og IGF-I-medierte sykdommer slik som kreft. Alfa-IR-3 ble beskrevet av Kull, F.C., J. Biol. Chem. 258
(1983) 6561-6566.1 mellomtiden har det blitt publisert omtrent ett hundre publikasjoner som angår undersøkelse og terapeutisk anvendelse av ocIR3 med hensyn til dens antitumor-effekt, alene og sammen med cytostatiske midler slik som doxorubicin og vinkristin. ocIR3 er et murint monoklonalt antistoff som er kjent å hemme IGF-I-binding til IGF-reseptor men ikke IGF-II-binding til IGF-IR. Ved høye konsentrasjoner stimulerer ocIR3 tumorcelleproliferasjon og IGF-IR-fosforylering (Bergmann, U., et al., Cancer Res. 55
(1995) 2007-2011; Kato, H., et al., J. Biol. Chem. 268 (1993) 2655-2661). Det finnes andre antistoffer (f.eks. 1H7, Li, S.L., et al., Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252) som inhiberer IGF-II-binding til IGF-IR mer potent enn IGF-I-binding. En oppsummering av teknikkens stand med hensyn til antistoffer og deres egenskaper og karakteristika er beskrevet av Adams, T.E., et al., Cell Mol. Life Sei. 57 (2000) 1050-1063.
De fleste antistoffene beskrevet på området stammer fra mus. Slike antistoffer er, hvilket er velkjent på området, ikke anvendelige for behandling av humane pasienter uten ytterligere endringer som dannelse av kimærer eller humanisering. Med grunnlag i disse ulempene, er humane antistoffer klart foretrukket som terapeutiske midler ved behandling av humane pasienter. Humane antistoffer er velkjente på området (van Dijk, M. A. og van de Winkel, J.G, Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374). Basert på slik teknologi kan humane antistoffer mot mange forekjellige mål produseres. Eksempler på humane antistoffer mot IGF-IR er beskrevet i WO 02/053596.
WO 03/10008 A er relatert til humant, nøytraliserende , monoklonale antistoffer mot human insulinlignende vekstfaktor-reseptor-I (IGFR1). Antistoffene er nyttige for behandling eller forebygging av cancer i et individ. Også omfattet er fremgangsmåter for anvendelse og fremstilling av antistoffene ifølge oppfinnelsen.
Imidlertid er det fortsatt et behov for antistoffer mot IGF-IR med overbevisende fordeler for pasienter med behov for antitumorterapi. Den relevante nytten for pasienten er, i enkle ordelag, reduksjon av tumorvekst og en betydelig forlengelse av tiden før progresjon foranlediget av behandling med antitumormidlet.
Oppsummering av oppfinnelsen
Oppfinnelsen omfatter et antistoff som binder til IGF-IR og hemmer bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR,karakterisert vedat nevnte antistoff
a) er av IgGl -isotype,
b) oppviser en ratio av ICso-verdier for inhibering av bindingen av IGF-I til IGF-IR til inhiberingen av binding av IGF-II til IGF-IR på 1:3 til 3:1, c) inhiberer minst 80%, fortrinnsvis minst 90%, ved en konsentrasjon på 5 nM, IGF-IR-fosforylering i en cellulær fosforyleringsanalyse ved anvendelse av HT29-celler i et
medium inneholdende 0,5% varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS) sammenlignet
med en slik analyse uten nevnte antistoff og
d) oppviser ingen IGF-IR-stimulerende aktivitet målt som PKB-fosforylering ved en konsentrasjon på 10 uM i en cellulær fosforyleringsanalyse ved anvendelse av 3T3-celler under forutsetning av 400,000 til 600,000 molekyler IGF-IR pr. celle i et medium inneholdende 0,5% varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS) sammenlignet med en slik analyse uten nevnte antistoff.
Antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse oppviser nytte for pasienter med behov for antitumorterapi og gir reduksjon av tumorvekst og en betydelig forlengelse av tidsrommet før progresjon. Antistoffene ifølge oppfinnelsen har nye og oppfinneriske egenskaper som fører til en nytte for en pasient som lider av en sykdom forbundet med en IGF-deregulering, spesielt en tumorsykdom. Antistoffene ifølge oppfinnelsen erkarakterisertved de ovennevnte egenskapene. Egenskapene er derfor spesielt spesifikk binding til IGF-IR, inhiberer bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR ved den ovennevnte ratio, er av IgGl-isotype og aktiverer ikke IGF-IR-signalering selv ikke i IGF-IR-overuttrykkende celler ved en 200 ganger konsentrasjon av dens ICso-verdi. Antistoffer som ikke har noen "IGF-I-etterlignende aktivitet" tilveiebringer en stor fordel ved anvendelse som et terapeutisk middel.
Foretrukket induserer et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse i tillegg celledød på 20% eller flere celler av en fremstilling av IGF-IR-uttrykkende celler etter 24 timer ved en konsentrasjon av nevnte antistoff på 100 nM ved ADCC.
Foretrukket induserer, i tillegg, antistoffene ifølge oppfinnelsen celledød på 20%, eller flere, celler fra en fremstilling av IGF-IR-uttrykkende celler etter 4 timer ved en antistoffkonsentrasjon på 100 nM ved CDC.
Foretrukket inhiberer, i en konsentrasjon på 5 nM, antistoffene ifølge oppfinnelsen fullstendig IGF-I-mediert signaltransduksjon av IGF-IR i tumorceller.
Oppfinnelsen omfatter også nukleinsyrer. De kodede polypeptidene er i stand til å settes sammen med den respektive andre antistoffkjeden definert nedenfor: a) en antistoff tung kjede omfattende som CDR'er CDR1 (aa 31-35), CDR2 (aa 50-66) og CDR3 (aa 99-107) ifølge SEKV ID NRl eller 3; b) en antistoff lett kjede omfattende som CDRer CDR1 (aa 24-34), CDR2 (aa 50-56) og CDR3 (aa 89-98) ifølge SEKV ID NR2 eller 4.
Antistoffet er foretrukket et monoklonalt antistoff og, i tillegg, et kimært antistoff (human konstant kjede), et humanisert antistoff og spesielt foretrukket et humant antistoff.
Antistoffet binder til IGF-IR human (EC 2,7,1,112, SwissProt P08069) i konkurranse med antistoff 18.
Antistoffet er viderekarakterisert veden affinitet på IO"<8>M (Kd) eller mindre, fortrinnsvis på ca. IO"9 til 10"13M.
Antistoffet oppviser foretrukket ingen detekterbar konsentrasjonsavhengig inhibering av insulinbinding til insulinreseptoren.
Foretrukket tilveiebringer foreliggende oppfinnelse antistoffer omfattende som komplementaritetsbestemmende regioner (CDR'er) med de følgende sekvensene: a) en antistoff tung kjede omfattende som CDR'er CDR1 (aa 31-35), CDR2 (aa 50-66) og CDR3 (aa 99-107) ifølge SEKV ID NRl eller 3; b) en antistoff lett kjede omfattende som CDRer CDR1 (aa 24-34), CDR2 (aa 50-56) og CDR3 (aa 89-98) ifølge SEKV ID NR2 eller 4.
Antistoffet er foretrukket av IgGl-type og tilveiebringer derfor Clq komplement-binding og induserer CDC. Antistoffet er viderekarakterisert vedevnen til å binde IgGFc-reseptor og til å indusere ADCC.
Antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse forlenger betraktelig tidsrommet før progresjon i relevante xenograft tumor-modeller sammenlignet med vehikkel-behandlede dyr og reduserer tumorvekst. Antistoffet hemmer bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR in vitro og in vivo, foretrukket på en omtrentlig lik måte for IGF-I og IGF-II.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre hybridom-cellelinjer som produserer slike antagonistiske monoklonale antistoffer i henhold til oppfinnelsen.
De foretrukne hybridom-cellelinjene ifølge oppfinnelsen, <IGF-1R> HUMAB Klon 18 (antistoff 18) og <IGF-1R> HUMAB Klon 22 (antistoff 22), ble deponert ved Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Tyskland.
Antistoffene som kan oppnås fra nevnte cellelinjer er foretrukne utførelsesformer ifølge oppfinnelsen.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre nukleinsyrer som koder for slike antistoffer, ekspresjonsvektorer inneholdende nevnte nukleinsyrer og vertsceller for rekombinant fremstilling av slike antistoffer.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre fremgangmåter for rekombinant fremstilling av slike antistoffer.
Foreliggende beskrivelse tilveiebringer videre fremgangsmåter for behandling av kreft, omfattende å administrere til en pasient diagnostisert med kreft (og som derfor har behov for en antitumorterapi) en effektiv mengde av et antagonistisk antistoff mot IGF-IR ifølge oppfinnelsen som definert i kravene. Antistoffet kan administreres alene, i en farmasøytisk blanding eller alternativt i kombinasjon med en cytotoksisk behandling slik som stråleterapi eller et cytotoksisk middel eller et prodrug derav.
Oppfinnelsen omfatter videre anvendelse av et antistoff ifølge oppfinnelsen for kreftbehandling og for fremstilling av en farmasøytisk blanding ifølge oppfinnelsen. I tillegg omfatter oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av en farmasøytisk blanding ifølge oppfinnelsen.
Foreliggende oppfinnelse omfatter videre en farmasøytisk blanding inneholdende et antistoff ifølge oppfinnelsen med en farmasøytisk effektiv mengde, eventuelt sammen med en buffer og/eller en adjuvans anvendelig for formulering av antistoffer for farmasøytiske formål.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre farmasøytiske blandinger omfattende slike antistoffer i en farmasøytisk akseptabel bærer. I én utførelsesform kan den farmasøytiske blandingen omfattes i en artikkel for fremstilling eller kit.
Oppfinnelsen omfatter videre en vektor inneholdende en nukleinsyre ifølge oppfinnelsen, som er i stand til å uttrykke nevnte nukleinsyre i en prokaryot eller eukaryot vertscelle.
Oppfinnelsen omfatter videre en prokaryot eller eukaryot vertscelle omfattende en vektor i henhold til oppfinnelsen.
Foreliggende oppfinnelse omfatter videre en fremgangsmåte for fremstilling av et rekombinant humant antistoff ifølge oppfinnelsen,karakterisert vedå uttrykke en nukleinsyre ifølge oppfinnelsen i en prokaryot eller eukaryot vertscelle og utvinne nevnte antistoff fra nevnte celle. Oppfinnelsen omfatter videre antistoffet som kan oppnås ved en slik rekombinant metode.
Oppfinnelsen omfatter videre en fremgangsmåte for seleksjon av et antistoff mot IGF-IR fra en rekke antistoffer mot IGF-IRkarakterisert vedat det utføres en cellulær fosforyleringsanalyse som anvender 3T3-celler under forutsetning av 400,000 til 600,000 molekyler IGF-IR pr. celle i et medium inneholdende 0,5% varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS) med nevnte antistoffer, og nevnte antistoff, som ikke oppviser noen IGF-IR-stimulerende aktivitet målt som PKB-fosforylering i en konsentrasjon på 10 uM sammenlignet med en slik analyse uten nevnte antistoff selekteres. Foretrukket har antistoffet én eller flere av ovennevnte ytterligere egenskapene.
Foreliggende oppfinnelse omfatter videre en fremgangsmåte for fremstilling av en farmasøytisk blandingkarakterisert vedå selektere et antistoff mot IGF-IR fra en rekke antistoffer mot IGF-IR ved å gjennomføre en cellulær fosforyleringsanalyse ved anvendelse av 3 T3-celler under forutsetning av 400,000 til 600,000 molekyler IGF-IR pr. celle i et medium inneholdende 0,5% varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS) med nevnte antistoffer og selektere nevnte antistoff som ikke oppviser noen IGF-IR-stimulerende aktivitet målt som PKB-fosforylering i en konsentrasjon på 10 uM sammenlignet med en slik analyse uten nevnte antistoff, produsere nevnte antistoff ved hjelp av rekombinant ekspresjon, utvinne nevnte antistoff og kombinere nevnte antistoff med en farmasøytisk akseptabel buffer og/eller adjuvans. Foretrukket har antistoffet én eller flere av ovennevnte ytterligere egenskaper.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Betegnelsen "antistoff omfatter de forskjellige formene av antistoffer som hele antistoffer, antistoff-fragmenter, humane antistoffer, humaniserte antistoffer og genetisk konstruerte antistoffer så lenge de karakteristiske egenskapene i henhold til oppfinnelsen er beholdt.
" Antistoff-fragmenter" omfatter en andel av et fullengde antistoff, generelt i det minste den antigenbindende delen eller den variable regionen derav. Eksempler på antistoff-fragmenter omfatter dimerer, enkeltkjede antistoffmolekyler, immuntoksiner og multispesifikke antistoffer dannet fra antistoff-fragmenter. I tillegg omfatter antistoff-fragmenter enkeltkjede-polypeptider som har egenskapene til en VH-kjede, dvs. er i stand til å settes sammen med en VL-kjede eller til en VL-kjede som binder til IGF-IR, dvs. i stand til settes sammen med en VH-kjede til en funksjonell antigenbindende grop og derved tilveiebringe egenskapen til å inhibere bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR.
"Antistoffragmenter" omfatter også slike fragmenter som i seg selv ikke er i stand til å tilveiebringe effektor-funksjoner (ADCC/CDC) men tiveiebringer denne funksjonen på en måte i henhold til oppfinnelsen etter at de er kombinert med passende antistoff konstant(e) domene(r).
Betegnelsene "monoklonalt antistoff eller "monoklonal antistoff-blanding" som anvendt heri refererer til en fremstilling av antistoffmolekyler av en enkelt aminosyre-sammensetning. Følgelig angir betegnelsen "humant monoklonalt antistoff antistoffer som oppviser en enkelt bindingsspesifisitet som har variabel og konstant region avledet fra human kjønnscelle immunglobulin-sekvenser. I én utførelsesform er de humane monoklonale antistoffene produsert av et hybridom som omfatter en B-celle oppnådd fra et transgent ikke-humant dyr, f.eks. en transgen mus, som har et genom omfattende et humant tung kjede transgen og et lett human kjede transgen fusjonert til en immortalisert celle.
Betegnelsen "kimært antistoff angir et monoklonalt antistoff omfattende en variabel region, dvs. bindende region, fra én kilde eller art og minst en del av en konstant region avledet fra en ulik kilde eller art, vanligvis fremstilt ved rekombinant DNA-teknikker. Kimære antistoffer omfattende en murin variabel region og en human konstant region er spesielt foretrukket. Slik murine/humane kimære antistoffer er produktet av uttrykte immunglobulingener omfattende DNA-segmenter som koder for murine immunglobulin variable regioner og DNA-segmenter som koder for humane immunglobulin konstante regioner. Andre former for "kimære antistoffer" omfattet av foreliggende oppfinnelse er de hvor klassen eller underklassen er modifisert eller endret fra den for det opprinnelige antistoffet. Slik "kimære" antistoffer refereres også til som "antistoffer som har gjennomgått klasseswitch". Fremgangsmåter for fremstilling av kimære antistoffer omfatter konvensjonelle rekombinant DNA og gentransfeksjonsteknikker som nå er velkjente på området. Se, f.eks. Morrison, S.L., et al., Proe. Nati. Acad Sei. USA 81 (1984) 6851-6855; US-patenter nr. 5,202,238 og 5,204,244.
Betegnelsen "humanisert antistoff angir antistoffer hvor struktur ("framework") eller "komplementaritetsbestemmende regioner" (CDR) er modifisert slik at de omfatter CDRen fra et immunglobulin av ulik spesifisitet sammenlignet med den fra opphavs-immunglobulinet. I en foretrukket utførelsesform er en murin CDR bundet til struktur ("framework")-regionen fra et humant antistoff for å fremstille det "humaniserte antistoffet". Se, f.eks. Riechmann, L., et al, Nature 332 (1988) 323-327; og Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270. Spesielt foretrukne CDR'er svarer til de som representerer sekvenser som gjenkjenner antigenene angitt ovenfor for kimære og bifunksjonelle antistoffer.
Betegnelsen "humant antistoff, som anvendt heri, skal omfatte antistoffer som har variable og konstante regioner avledet fra human kjønnscelle immunglobulin-sekvenser. Den variable tunge kjeden er fortrinnsvis avledet fra kjønnscelle-sekvens DP-50 (GenBank L06618) og den variable lette kjeden er foretrukket avledet fra kjønnscelle-sekvens L6 (GenBank X01668). De konstante regionene av antistoffet er konstante regioner av human IgGl-type. Slik regioner kan være allotypiske og er beskrevet av, f.eks. Johnson, G. og Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218 og databasereferansene deri og er anvendelige så lenge egenskapene til induksjon av ADCC og foretrukket CDC ifølge oppfinnelsen bibeholdes.
Betegnelsen "rekombinant humant antistoff, som anvendt heri, skal omfatte alle humane antistoffer som fremstilles, uttrykkes, dannes eller isoleres ved rekombinante metoder, slik som antistoffer isolert fra en vertscelle slik som en SP2-0, NS0 eller CHO-celle eller fra et dyr (f.eks. en mus) som er transgent for humane immunglobulingener eller antistoffer uttrykt ved anvendelse av en rekombinant ekspresjonsvektor transfektert inn i en vertscelle. Slike rekombinante humane antistoffer har variable og konstante regioner avledet fra human kjønnscelle immunglobulin-sekvenser i en rearrangert form. De rekombinante humane antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse har blitt underlagt in vivo somatisk hypermutasjon. Følgelig er aminosyresekvensene av VH og VL-regionene av de rekombinante antistoffene sekvenser som, selv om de er avledet fra og relatert til human kjønnscelle VH og VL-sekvenser, ikke naturlig kan eksistere inne i det humane antistoff kjønnscelle-repertoiret in vivo.
Som anvendt her, angir "binding" antistoffbinding til IGF-IR med en affinitet på ca. IO"<13>til IO"8 M (KD), fortrinnsvis på ca. IO"<13>til IO"9 M.
Betegnelsen "nukleinsyremolekyl", som anvendt heri, skal omfatte DNA-molekyler og RNA-molekyler. Et nukleinsyremolekyl kan være enkelttrådet eller dobbelttrådet, men er foretrukket dobbeltrådet DNA.
De "konstante domenene" er ikke involvert direkte i binding av antistoffet til et antigen men er involvert i effektor-funksj onene (ADCC, komplementbinding og CDC). Det konstante domenet av et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse er av IgGl-typen. Humane konstante domener som har disse karakteristika er beskrevet i detalj av Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) og av Briiggemann, M., et al., J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361; Love, T.W., et al., Methods Enzymol. 178 (1989) 515-527. Eksempler er vist i SEKV ID NR: 5 til 8. Andre anvendelige og foretrukne konstante domener er de konstante domenene av antistoffene som kan oppnås fra hybridom-cellelinjene deponert ved DSMZ for foreliggende oppfinnelse. De konstante domenene anvendelige i oppfinnelsen tilveiebringer komplementbinding. ADCC og eventuelt CDC tilveiebringes ved kombinasjonen av variable og konstante domener.
Den "variable regionen" (variabel region av en lett kjede (VL), variabel region av en tung kjede (VH)) som anvendt heri angir hver av paret av lette og tunge kjeder som er involvert direkte i binding av antistoffet til antigenet. Domenene av variable humane lette og tunge kjeder har samme generelle struktur og hvert domene omfatter fire struktur ("framework")
(FR)-regioner hvis sekvenser i stor grad er konservert, forbundet av tre "hypervariable regioner" (eller komplementaritetsbestemmende regioner, CDR'er). Struktur
("framework")-regionene inntar en P-sheet-konformasjon og CDRer kan danne løkker som forbinder P-sheet-strukturen. CDR'ene i hver kjede holdes i sine tredimensjonale strukturer av struktur ("framework")-regioner og danner sammen med CDR'ene fra den andre kjeden det antigenbindende setet. Antistoffets tung og lett kjede CDR3-regioner har en spesielt
viktig funksjon i bindingspesifisiteten/affiniteten av antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse og tilveiebringer derfor en ytterligere hensikt ifølge oppfinnelsen.
Betegnelsene "hypervariabel region" eller "antigenbindende del av et antistoff når anvendt heri refererer til aminosyrerestene av et antistoff som er ansvarlig for antigenbinding. Den hypervariable regionen omfatter aminosyrerester fra de "komplementaritetsbestemmende regionene" eller "CDR'er". "Struktur" ("framework") eller "FR"-regioner er de variabel domene-regionene andre enn de hypervariable region-restene som definert heri. Derfor omfatter de lette og tunge kjedene av et antistoff fra N- til C-terminus domenene FRI, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 og FR4. Spesielt er CDR3 fra den tunge kjeden den regionen som bidrar mest til antigenbinding. CDR og FR-regionene bestemmes i henhold til standard-definisjonen ifølge Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.
(1991)) og/eller disse restene fra en "hypervariabel løkke".
Betegnelsen "binding til IGF-IR" som anvendt heri betyr bindingen av antistoffet til IGF-IR i en in vitro-analyse, fortrinnsvis i en bindingsanalyse hvor antistoffet er bundet til en overflate og binding av IGF-IR måles ved Surface Plasmon Resonance (SPR). Binding betyr en bindingsaffinitet (Kd) på IO"<8>M eller mindre, fortrinnsvis IO"<13>til IO"9 M.
Binding til IGF-IR kan undersøkes ved en BIAcore-analyse (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sverige). Affiniteten av bindingen er definert ved betegnelsene ka (hastighetskonstanten for assosiering av antistoffet fra antistoffet/antigenkomplekset), kd (dissosiasjonskonstant) og Kd(kd/ka). Antistoffene ifølge oppfinnelsen oppviser en Kdpå IO"<10>M eller mindre.
Bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR inhiberes også av antistoffene ifølge oppfinnelsen. Inhiberingen måles som IC50i en analyse for binding av IGF-I/IGF-II til IGF-IR på tumorceller. En slik analyse er beskrevet i Eksempel 7.1 en slik analyse blir mengden av radioaktivt merket IGF-I eller IGF-II eller IGF-IR-bindende fragmenter derav bundet til IGF-IR tilveiebrakt på overflaten av nevnte tumorceller (f.eks. HT29), målt uten og med økende konsentrasjoner av antistoffet. ICso-verdiene for antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse for bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR er ikke mer enn 2 nM og ratioen av ICso-verdiene for binding av IGF-I/IGF-II til IGF-IR er ca. 1:3 til 3:1. IC50-verdier måles som gjennomsnitt eller medianverdier av minst tre uavhengige målinger. Enkelte ICso-verdier kan være utenfor området.
Betegnelsen "inhibere bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR" som anvendt heri refererer til å inhibere bindingen av I<125->merket IGF-I eller IGF-II til IGF-IR presentert på overflaten av HT29 (ATCC HTB-38)-tumorceller i en in vitro-analyse. Inhiberende betyr en IC50-verdi på 2 nM eller lavere.
Betegnelsen "IGF-IR-uttrykkende celler" angir slike celler som overuttrykker IGF-I-reseptor til omtrent minst 20,000 reseptorer/celle. Slike celler er for eksempel tumorcellelinjer slik som NCIH322M eller HT29 eller en cellelinje (f.eks. 3T3 ATCC CRL1658) som overuttrykker IGF-IR etter transfeksjon med en ekspresjonsvektor for IGF-IR. Mengden av reseptorer pr. celle måles i henhold til Lammers et al EMBO J, 8 (1989) 1369-1375
Betegnelsen "hemming av IGF-IR-fosforylering" refererer til en cellulær fosforyleringsanalyse ved anvendelse av 3T3-celler under forutsetning av 400,000 til 600,000 molekyler IGF-IR pr. celle i et medium inneholdende 0,5% varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS) sammenlignet med en slik analyse uten nevnte antistoff. Fosforylering detekteres ved Western blotting ved anvendelse av et antistoff spesifikt for tyrosinfosforylerte proteiner. En slik analyse er beskrevet i Eksempel 11. Varmeinaktivering av FCS utføres ved kort-tids oppvarming til 56°C for inaktivering av komplementsystemet.
Betegnelsen "hemming av PKB-fosforylering" refererer til en cellulær fosforyleringsanalyse ved anvendelse av 3T3-celler under forutsetning av 400,000 til 600,000 molekyler IGF-IR pr. celle i et medium inneholdende 0,5% varmeinaktivert føtalt kalveserum (FCS) sammenlignet med en slik analyse uten nevnte antistoff. Fosforylering detekteres ved Western blotting ved anvendelse av et antistoff spesifikt for PKB fosforylert ved serin 473 i PKkB (Akt 1, Swiss Prot Acc. nr. P31749). En slik analyse er beskrevet i Eksempel 11.
Betegnelsen "antistoff-avhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC)" refererer til lysering av humane tumor-målceller ved et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse i nærvær av effektorceller. ADCC måles foretrukket ved behandling av en fremstilling av IGF-IR- uttrykkende celler med et antistoff ifølge oppfinnelsen i nærvær av effektorceller slik som ferske isolerte PBMC eller rensede effektorceller fra buffy coats, som monocytter eller NK-celler. ADCC er funnet hvis antistoffet induserer, ved en konsentrasjon på 100 nM, lysering (celledød) av 20% eller mer av tumorcellene etter 24 timer. Dersom ADCC er funnet å være mer uttalt ved 4 timer enn ved 24 timer, utføres målinger ved 4 timer. Analysen utføres foretrukket med<51>Cr eller Eu-merkede tumorceller og måling av spesifikt frigjort<51>Cr eller Eu. Kontroller omfatter inkubering av tumor-målcellene med effektorceller men uten antistoffet.
Betegnelsen "komplementavhengig cytotoksisitet (CDC)" refererer til lysering av humane tumor-målceller ved antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse i nærvær av komplement. CDC måles foretrukket ved behandling av en fremstilling av IGF-IR-uttrykkende celler med et antistoff ifølge oppfinnelsen i nærvær av komplement. CDC er funnet hvis antistoffet induserer, ved en konsentrasjon på 100 nM, lysering (celledød) av 20% eller mer av tumorcellene etter 4 timer. Analysen utføres foretrukket med<51>Cr eller Eu-merkede tumorceller og måling av frigjort51 Cr eller Eu. Kontroller omfatter inkubering av tumor-målcellene med komplement men uten antistoffet.
Betegnelsen "fullstendig hemming av IGF-I-mediert signaltransduksjon" angir hemming av IGF-I-mediert fosforylering av IGF-IR. For en slik analyse stimuleres IGF-IR-uttrykkende celler, fortrinnsvis H322M-celler, med IGF-I og behandles med et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse (en antistoffkonsentrasjon på 5 nM eller høyere er anvendelig). Deretter utføres en SDS PAGE og fosforylering av IGF-IR måles ved Western blotting-analyse med et antistoff spesifikt for fosforylert tyrosin. Fullstendig hemming av signaltransduksjonen finnes hvis det ved Western blot ikke åpenlyst kan detekteres noe band som angir fosforylert IGF-IR.
Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse oppviser en binding til den samme epitopen av IGF-IR som antistoff 18 eller er hemmet med hensyn til binding til IGF-IR på grunn av sterisk hindring av binding ved antistoff 18. Hemming av binding kan detekteres ved en SPR-analyse ved anvendelse av immobilisert antistoff 18 og IGF-IR i en konsentrasjon på 20-50 nM og antistoffet som skal detekteres i en konsentrasjon på 100 nM. En signalreduksjon på 50% eller mer viser at antistoffet konkurrerer med antistoff 18. En slik analyse kan utføres på samme måte ved anvendelse av antistoff 22 som et immobilisert antistoff.
Betegnelsen "epitop" betyr en proteindeterminant som er i stand til å binde spesifikt til et antistoff. Epitoper består vanligvis av kjemisk aktive overflategrupper av molekyler slik som aminosyrer eller sukker-sidekjeder og har vanligvis spesifikke tredimensjonale strukturelle karakteristika, så vel som spesifikke ladningsegenskaper. Konformasjonelle og ikke-konformasjonelle epitoper kjennetegnes ved at bindingen til førstnevnte men ikke til sistnevnte går tapt i nærvær av denaturerende løsningsmidler.
Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter, i tillegg, slike antistoffer som har "konservative sekvensmodifikasjoner", nukleotid- og aminosyresekvensmodifikasjoner som ikke påvirker eller endrer ovennevnte karakteristika for antistoffet ifølge oppfinnelsen. Modifikasjoner kan innføres ved standard teknikker kjent på området, slik som seterettet mutagenese og PCR-mediert mutagenese. Konservative aminosyresubstitusjoner omfatter slike hvor aminosyreresten erstattes med en aminosyrerest som har en lignende sidekjede. Familier av aminosyrerester som har lignende sidekjeder er definert på området. Disse familiene omfatter aminosyrer med basiske sidekjeder (f.eks. lysin, arginin, histidin), sure sidekjeder (f.eks. asparaginsyre, glutaminsyre), uladede polare sidekjeder (f.eks. glysin, asparagin, glutamin, serin, treonin, tyrosin, cystein, tryptofan), ikke-polare sidekjeder (f.eks. alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, metionin), beta-forgrenede sidekjeder (f.eks. treonin, valin, isoleucin) og aromatiske sidekjeder (f.eks. tyrosin, fenylalanin, tryptofan, histidin). Følgelig kan en predikert ikke-essensiell aminosyrerest i et humant anti-IGF-IR antistoff foretrukket erstattes med en annen aminosyrerest fra samme familie av sidekjeder.
Aminosyresubstitusjoner kan utføres ved mutagenese basert på molekylær modellering som beskrevet av Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327 og Queen, C, et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86 (1989)10029-10033.
I en foretrukket utførelsesform ifølge foreliggende oppfinnelse karakteriseres antistoffene ifølge oppfinnelsen ytterligere ved én eller flere av trekkene valgt fra gruppen valgt fra bindingsparametrene ka, kd og Kd, binding til den samme epitopen som antistoffene 18 og 22 binder til, ICso-verdiene for hemming av binding av IGF-I og IGF-II til IGF-IR på tumorceller og ICso-verdiene for hemming av fosforylering av IGF-IR etter stimulering av IGF-I i tumorceller. Hemming av fosforylering av IGF-IR fører til hemming av fosforylering av elementer nedstrøms slik som PKB, nedregulering av IGF-IR i tumorceller og påvirkning av den tredimensjonale veksten av tumorceller in vitro. Antistoffene karakteriseres ytterligere foretrukket ved deres farmakokinetiske og farmakodynamiske verdier og kryss-reaktiviteten for andre arter.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen hemmer IGF-IR-fosforylering av tyrosin og foretrukket også PKB-fosforylering av tyrosin i lik grad.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen nedregulerer foretrukket IGF-IR protein-nivået i tumorceller og i tumorer, f.eks. xenograft tumorer.
Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse hemmer foretrukket den tredimensjonale veksten av tumorceller i en analyse av kolonidannelse, så vel som proliferasjon av IGF-IR-uttrykkende celler (f.eks. NTH 3T3-celler).
Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse hemmer foretrukket ikke binding av insulin til insulinreseptor i en bindings konkurranse-analyse på insulinreseptor-overuttrykkene 3T3-celler ved anvendelse av antistoffet i en konsentrasjon på 200 nmol/1.
Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles foretrukket ved rekombinante metoder. Slike metoder er tidligere kjent i stor utstrekning på området og omfatter proteinekspresjon i prokaryote og eukaryote celler med påfølgende isolering av antistoff-polypeptidet og vanligvis rensning til en farmasøytisk akseptabel renhet. For proteinekspresjonen, inserteres nukleinsyrer som koder for lette og tunge kjeder eller fragmenter derav i ekspresjonsvektorer ved standardmetoder. Ekspresjon utføres i egnede prokaryote eller eukaryote vertsceller som CHO-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, HEK293-celler, COS-celler, gjær eller E.coli-celler og antistoffet utvinnes fra cellene (supernatant eller celler etter lysering).
Rekombinant fremstilling av antistoffer er velkjent på området og beskrevet, for eksempel
i oversiktsartiklene ifølge Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202; Geisse,
S., et al, Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282; Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol. 16 (2000) 151-161; Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880.
Antistoffene kan være til stede i hele celler, i et cellelysat eller i en delvis renset eller hovedsakelig ren form. Rensning utføres for å eliminere andre cellulære komponenter eller andre forurensninger, f.eks. andre cellulære nukleinsyrer eller proteiner, ved standardteknikker, omfattende alkalisk/SDS-behandling, CsCl-"banding", kolonnekromatografi, agarose gel-elektroforese og andre velkjente på området. Se Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987).
Ekspresjon i NSO-celler er beskrevet av, f.eks. Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32
(2000) 109-123; og Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270. Transient ekspresjon er beskrevet av, f.eks. Durocher, Y., et al., Nucl. Acids Res. 30 (2002) E9. Kloning av variable domener er beskrevet av Orlandi, R, et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86 (1989) 3833-3837; Carter, P., et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 89 (1992) 4285-4289; og Norderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87. Et foretrukket transient ekspresjonssystem (HEK 293) er beskrevet av Schlaeger, E.-J. og Christensen, K, i Cytotechnology 30 (1999) 71-83 og av Schlaeger, E.-J., i J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199.
Kontrollsekvenser som er egnet for prokaryote celler omfatter, for eksempel, en promoter, eventuelt en operatorsekvens og et ribosombindingssete. Eukaryote celler er kjent å anvende promotere, enhancere og polyadenyleringssignaler.
Nukleinsyre er "operabelt bundet" når den er anbrakt i en funksjonell forbindelse med en annen nukleinsyresekvens. For eksempel er DNA for en presekvens eller sekretorisk leder operabelt bundet til DNA for et polypeptid hvis det uttrykkes som et preprotein som tar del i sekresjonen av polypeptidet; en promoter eller enhancer er operabelt bundet til en kodende sekvens hvis den påvirker transkripsjonen av sekvensen; eller et ribosombindingssete er operabelt bundet til en kodende sekvens hvis det er posisjonert slik at det letter translasjon. Generelt betyr "operabelt bundet" at DNA-sekvensene som er forbundet er påfølgende og, i tilfellet av en sekretorisk leder, påfølgende og i leseramme. Enhancere behøver imidlertid ikke å være påfølgende. Binding fullføres ved ligering ved passende restriksjonsseter. Hvis slike seter ikke eksisterer, anvendes syntetiske oligonukleotid-adaptere eller linkere i henhold til konvensjonell praksis.
De monoklonale antistoffene separeres hensiktsmessig fra dyrkningsmediet ved konvensjonelle immunglobulin rensningsmetoder slik som for eksempel protein A-Sepharose, hydroksylapatitt-kromatografi, gel-elektroforese, dialyse eller affinitetskromatografi. DNA og RNA som koder for de monoklonale antistoffene isoleres og sekvenseres enkelt ved anvendelse av konvensjonelle metoder. Hybridom-cellene kan tjene som en kilde for slikt DNA og RNA. Når det først er isolert, kan DNA inserteres i ekspresjonsvektorer, som deretter transfekteres inn i vertsceller slik som HEK 293-celler, CHO-celler eller myelomceller som ellers ikke på produserer immunglobulinprotein, for å oppnå syntese av rekombinante monoklonale antistoffer i vertscellene.
Aminosyresekvensvarianter av humant IGF-IR-antistoff fremstilles ved å innføre passende nukleotidendringer inn i antistoff-DNA'et eller ved peptidsyntese. Slike modifikasjoner kan imidlertid utføres kun i et svært begrenset område, f.eks. som beskrevet ovenfor. For eksempel endrer ikke modifikasjonene de ovennevnte antistoff-karakteristika slik som IgG-isotypen og epitop-binding, men kan forbedre utbyttet av den rekombinante produksjonen, proteinstabiliteten eller lette rensingen.
Hvilken som helst cysteinrest som ikke er involvert i å opprettholde riktig konformasjon av anti-IGF-IR-antistoffet kan også substitueres, generelt med serin, for å forbedre den oksydative stabiliteten av molekylet og forhindre abnorm kryssbinding. Omvendt kan cysteinbinding(er) tilføyes til antistoffet for å forbedre dets stabilitet (spesielt hvor antistoffet er et antistoffragment slik som et Fv-fragment).
En annen type aminosyrevariant av antistoffet endrer antistoffets opprinnelige glykosyleringsmønster. Med endring menes å deletere én eller flere karbohydratgrupper funnet i antistoffet og/eller tilføye ett eller flere glykosyleringsseter som ikke er til stede i antistoffet. Glykosylering av antistoffer er typisk N-bundet. N-bundet refererer til bindingen av karbohydratgruppen til sidekjeden av en asparaginrest. Tripeptidsekvensene asparagin-X-serin og asparagin-X-treonin, hvor X er hvilken som helst aminosyre bortsett fra prolin, er gjenkjennelsessekvensene for enzymatisk binding av karbohydratgruppen til asparagin-sidekjeden. Følgelig skaper tilstedeværelsen av hvilket som helst av disse tripeptidsekvensene i et polypeptid et potensielt glykosyleringssete. Tilføyelser av glykosyleringsseter til antistoffet oppnås hensiktsmessig ved å endre aminosyresekvensen slik at det inneholder én eller flere av de ovenfor beskrevne tripeptidsekvensene (for N-bundne glykosyleringsseter).
Nukleinsyremolekyler som koder for aminosyresekvensvarianter av anti-IGF-IR-antistoff fremstilles ved en rekke metoder kjent på området. Disse metodene omfatter isolering fra en naturlig kilde (i tilfellet av naturlig forekommende aminosyresekvensvarianter) eller fremstilling ved oligonukleotid-mediert (eller seterettet) mutagenese, PCR-mutagenese og kassett-mutagenese av en tidligere fremstilt variant eller en ikke-variant utgave av humanisert anti-IGF-IR-antistoff.
Oppfinnelsen angår også immunokonjugater omfattende antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse konjugert til et cytotoksisk middel slik som et kjemoterapeutisk middel, toksin (f.eks. et enzymatisk aktivt toksin av bakteriell, sopp, plante eller animalsk opprinnelse eller fragmenter derav), en radioaktiv isotop (dvs. et radiokonjugat) eller et prodrug av et cytotoksisk middel. Midler anvendelige i dannelsen av slike immunokonjugater er beskrevet ovenfor. Enzymatisk aktive toksiner og fragmenter derav som kan anvendes omfatter difteri A-kjede, ikke-bindende aktive fragmenter av difteritoksin, eksotoksin A-kjede (fra Pseudomonas aeruginosa), ricin A-kjede, abrin A-kjede, modeccin A-kjede, alpha-sarcin, Aleuritesfordii-proteiner, dianthin-proteiner, Phytolaca americana-proteiner (PAPI, PAPII og PAP-S), momordica charantia-inhibitor, curcin, crotin, sapaonaria officinalis-inhibitor, gelonin, mitogellin, restrictocin, fenomycin, enomycin og trikotecenene.
Konjugater av antistoffet og cytotoksisk middel er fremstilt ved anvendelse av en rekke bifunksjonelle protein-koblingsmidler slik som N-succinimidyl-3-(2-pyridylditiol)propionat (SPDP), iminotiolan (DET), bifunksjonelle derivater av imidoestere; (slik som dimetyladipimidat-HCL), aktive estere (slik som disuccinimidylsuberat), aldehyder (slik som glutaraldehyd), bis-azido-forbindelser (slik som bis (p-azidobenzoyl)heksandiamin), bis-diazonium-derivater (slik som bis-(p-diazoniumbenzoyl)-etylendiatnin), diisocyanater (slik som tolyen-2,6-diisocyanat) og bis-aktive fluorforbindelser (slik som l,5-difluor-2,4-dinitrobenzen). For eksempel kan et ricin-immuntoksin fremstilles som beskrevet i Vitetta, E.S., et al., Science 238 (1987) 1098-1104). Karbon- 14-merket l-isotiocyanatobenzyl-3-metyldietylen-triaminpentaeddiksyre (MX-DTPA) er et eksempel på et chelaterende middel for konjugering av radionukleotid til antistoffet. Se WO 94/11026.
En annen type kovalent modifikasjon omfatter kjemisk eller enzymatisk binding av glykosider til antistoffet. Disse metodene er fordelaktige i at de ikke krever produksjon av antistoffet i en vertscelle som har glykosylerings-evne med hensyn til N- eller O-bundet glykosylering. Avhengig av koblingsmetoden anvendt, kan sukkeret være bundet til (a) arginin og histidin, (b) frie karboksylgrupper, (c) frie sulfhydrylgrupper slik som de fra cystein, (d) frie hydroksylgrupper slik som de fra serin, treonin eller hydroksyprolin, (e) aromatiske rester slik som de fra fenylalanin, tyrosin eller tryptofan eller (f) amidgruppen fra glutamin. Disse metodene er beskrevet i WO 87/05330 og i Aplin, J.D. og Wriston, J.C. Jr., CRC Crit. Rev. Biochem. (1981) 259-306.
Fjerning av hvilke som helst karbohydratgrupper til stede på antistoffet kan gjennomføres kjemisk eller enzymatisk. Kjemisk deglykosylering krever eksponering av antistoffet for forbindelsen trifluormetansulfonsyre eller en ekvivalent forbindelse. Denne behandlingen fører til kløyving av det meste eller alt sukkeret bortsett fra det forbindende sukkeret (N-acetylglukosamin eller N-acetylgalaktosamin), mens det etterlater antistoffet intakt. Kjemisk deglykosylering er beskrevet av Sojahr, H.T. og Bahl, O.P., Arch. Biochem. Biophys. 259 (1987) 52-57 og av Edge, A.S., et al. Anal. Biochem. 118 (1981) 131-137. Enzymatisk kløyving av karbohydratgrupper på antistoffer kan oppnås ved anvendelse av en rekke endo- og ekso-glykosidaser som beskrevet av Thotakura, N.R og Bahl, O.P., Meth. Enzymol. 138 (1987) 350-359.
En annen type kovalent modifikasjon av antistoffet omfatter binding av antistoffet til én av en rekke ikke-proteinholdige polymerer, f.eks., polyetylenglykol, polypropylenglykol eller polyoksyalkylener, på den måten som er vist i US-patenter nr. 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 eller 4,179,337.
Ved enda et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen isolerte B-celler fra et transgent ikke-humant dyr, f.eks. en transgen mus, som uttrykker de humane anti IGF-IR-antistoffene ifølge oppfinnelsen. Foretrukket oppnås de isolerte B-cellene fra et transgent ikke-humant dyr, f.eks. en transgen mus, som er immunisert med en renset eller anriket fremstilling av IGF-IR-antigen og/eller celler som uttrykker IGF-IR. Foretrukket har det transgene ikke-humane dyret, f.eks. en transgen mus, et genom omfattende et humant tung kjede transgen og et humant lett kjede transgen som koder for hele eller en del av et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. De isolerte B-cellene blir deretter immortalisert for å tilveiebringe en kilde (f.eks. et hybridom) av humane anti-IGF-IR-antistoffer. Følgelig tilveiebringer foreliggende oppfinnelse også et hybridom som er i stand til å produsere humane monoklonale antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse. I én utførelsesform omfatter hybridomet en B-celle oppnådd fra et transgent ikke-humant dyr, f.eks. en transgen mus som har et genom omfattende et humant tung kjede transgen og et humant lett kjede transgen som koder for hele eller en del av et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse, fusjonert til en immortalisert celle.
I en bestemt utførelsesform er det transgene ikke-humane dyret en transgen mus som har et genom som omfatter et humant tung kjede transgen og et humant lett kjede transgen som koder for hele eller en del av et antistoff ifølge foreliggende oppfinnelse. Det transgene ikke-humane dyret kan være immunisert med et renset eller anriket fremstilling av IGF-IR-antigen og/eller celler som uttrykker IGF-IR. Foretrukket er det transgene ikke-humane dyret, f.eks. den transgene musen, i stand til å produsere IgGl-isotyper av humane monoklonale antistoffer mot IGF-IR.
De humane monoklonale antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved å immunisere et transgent ikke-humant dyr, f.eks. en transgen mus, som har et genom som omfatter et humant tung kjede transgen og et humant lett kjede transgen som koder for hele eller en del av et antistoff ifølge oppfinnelsen, med en renset eller anriket fremstilling av IGF-IR antigen og/eller celler som uttrykker IGF-IR. B-celler (f.eks. milt B-celler) fra dyret blir deretter oppnådd og fusjonert med myelomceller for å danne udødelige hybridomceller som utskiller humane monoklonale antistoffer mot IGF-IR.
I en foretrukket utførelsesform kan humane monoklonale antistoffer rettet mot IGF-IR fremstilles ved anvendelse av transgene mus som bærer deler av det humane immunsystemet heller enn systemet fra mus. Disse transgene musene, referert til heri som "HuMAb"-mus, inneholder et humant immunglobulingen minilocus som koder for ikke-rearrangerte humane immunglobulingener som omfatter tung (u og y) og k lett kjede (konstant region-gener), sammen med målrettede mutasjoner som inaktiverer de endogene u og k kjede-loci (Lonberg, N., et al., Nature 368 (1994) 856-859). Følgelig oppviser musene redusert ekspresjon av mus IgM eller K, og som respons på immunisering gjennomgår de innførte humane tung og lett kjede transgenene klasse-switching og somatisk mutasjon for å danne høyaffinitets humane IgG monoklonale antistoffer (Lonberg, N., et al., Nature 368 (1994) 856-859; gjennomgått i Lonberg, N., Handbook of Experimental Pharmacology 113 (1994) 49-101; Lonberg, N. og Huszar, D., Intern. Rev. Immunol. 25 (1995) 65-93; og Harding, F. og Lonberg, N., Ann. N. Acad. Sei 764 (1995) 536-546). Fremstilling av HuMAb-mus er beskrevet i Taylor, L., et al., Nucleic Acids Research 20 (1992) 6287-6295; Chen, J., et al., International Immunology 5 (1993) 647-656; Tuaillon, N, et al., Proe. Nati. Acad. Sei USA 90 (1993) 3720-3724; Choi, T.K., et al., Nature Genetics 4 (1993) 117-123; Chen, J., et al., EMBO J. 12 (1993) 821-830; Tuaillon, N., et al., Immunol. 152 (1994) 2912-2920; Lonberg, N, et al., Nature 368
(1994) 856-859; Lonberg, N., Handbook of Experimental Pharmacology 113 (1994) 49-101; Taylor, L., et al., Int. Immunol. 6 (1994) 579-591; Lonberg, N. og Huszar, D., Intern. Rev. Immunol. 25 (1995) 65-93; Harding, F. og Lonberg, N, Ann. N. Acad. Sei 764
(1995) 536-546; Fishwild, D.M., et al, Nat. Biotechnol. 14 (1996) 845-851. Se videre US-patenternr. 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; 5,545,807; 5,770,429; WO 98/24884; WO 94/25585; WO 93/1227; WO 92/22645; og WO 92/03918.
For å fremstille fullstendige humane monoklonale antistoffer mot IGF-IR, kan HuMAb-mus immuniseres med en renset eller anriket fremstilling av IGF-IR-antigen og/eller celler som uttrykker IGF-IR i henhold til den generelle metoden, som beskrevet av Lonberg, N., et al., Nature 368 (1994) 856-859; Fishwild, D.M., et al., Nat. Biotechnol. 14 (1996) 845-851 og WO 98/24884. Foretrukket vil musene være 6-16 uker gamle ved den første immuniseringen. For eksempel kan en renset eller anriket fremstilling av oppløselig IGF-IR-antigen (f.eks. renset fra IGF-IR-uttrykkende celler) anvendes for å immunisere HuMAb-musene intraperitonealt. I tilfelle immuniseringer ved anvendelse av en renset eller anriket fremstilling av IGF-IR-antigen ikke resulterer i antistoffer, kan mus også immuniseres med celler som uttrykker IGF-IR, f.eks. en tumorcellelinje, for å fremme immunresponser. Samlet erfaring med forskjellige antigener har vist at de HuMAb transgene musene responderer best når de initielt immuniseres intraperitonealt (i.p.) med antigen i complete Freund's adjuvans, etterfulgt av i.p. immuniseringer hver andre uke (for eksempel opptil totalt 6) med antigen i incomplete Freund's adjuvans. Immunresponsen kan overvåkes under immuniseringsprotokollen med plasmaprøver oppnådd ved retroorbitale blødninger. Plasmaet kan screenes ved ELISA og mus med tilstrekkelig titere av anti-IGF-IR humant immunglobulin kan anvendes for immortalisering av korresponderene B-celler. Mus kan boostes intravenøst med antigen 3 til 4 dager før avlivning og fjerning av milten og lymfeknutene. Det er forventet at det kan være nødvendig å utføre 2-3 fusjoner for hvert antigen. Mange mus vil immuniseres for hvert antigen. For eksempel kan totalt tolv HuMAb-mus fra HCo7 og HCol2-stammene immuniseres.
HCo7-musene har en JKD-forstyrrelse i sine endogen lett kjede (kappa)-gener (som beskrevet i Chen, J., et al., EMBO J. 12 (1993) 821-830), en CMD- forstyrrelse i sine endogen tung kjede-gener (som beskrevet i Eksempel 1 i WO 01/14424), et KCo5 humant kappa lett kjede transgen (som beskrevet i Fishwild, D.M., et al., Nat. Biotechnol. 14
(1996) 845-851) og et HCo7 human tung kjede transgen (som beskrevet i US-patent nr. 5,770,429).
HCol2-musene har en JKD-fortyrrelse i sine endogen lett kjede (kappa)-gener (som beskrevet i Chen, J., et al., EMBO J. 12 (1993) 821-830), en CMD-forstyrrelse i sine endogene tung kjede-gener (som beskrevet i Eksempel 1 i WO 01/14424), et KCo5 human kappa lett kjede transgen (som beskrevet i Fishwild, D.M., et al., Nat. Biotechnol. 14
(1996) 845-851) og et HCol2 human tung kjede transgen (som beskrevet i Eksempel 2 i WO 01/14424).
Lymfocyttene fra mus kan isoleres og fusjoneres med en mus myelom cellelinje ved anvendelse av PEG basert på standardmetoder for å fremstille hybridomer. De resulterende hybridomene screenes deretter for produksjon av antigen-spesifikke antistoffer. For eksempel fusjoneres enkeltcelle-suspensjoner av milt og lymfeknute-avledede lymfocytter fra immuniserte mus til en sjettedel av antallet SP 2/0 ikke-sekreterende mus myelomceller (ATCC, CRL 1581) med 50% PEG. Celler plates ut ved omtrent 2 x 10<5>i flatbunnet mikrotiterplate, etterfulgt av omtrent to ukers inkubering i selektivt medium.
Individuelle brønner screenes deretter ved ELISA for humane anti-IGF-IR monoklonale IgM og IgG-antistoffer. Straks omfattende hybridomvekst oppstår, analyseres mediet, vanligvis etter 10-14 dager. Hybridomene som utkiller antistoff plates ut på nytt, screenes igjen og dersom de fortsatt er positive for human IgG, anti-IGF-IR monoklonale antistoffer, kan de subklones minst to ganger ved begrensende fortynning. De stabile subklonene dyrkes deretter in vitro for å produsere antistoff i vevskulturmedium for karakterisering.
Fordi CDR-sekvenser er ansvarlige for antistoff-antigen-interaksjoner, er det mulig å uttrykke rekombinante antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse ved å konstruere ekspresjonsvektorer som omfatter CDR-sekvensene ifølge oppfinnelsen til struktur ("framework")-sekvenser fra et ulikt humant antistoff (se f.eks. Riechmann, L., et al., Nature 332 (1998) 323-327; Jones, P., et al., Nature 321 (1986) 522-525; og Queen, C, et al., Proe. Nati. Acad. Se. U.S.A. 86 (1989)10029-10033). Slike struktur ("framework")-sekvenser kan oppnås fra offentlige DNA-databaser som omfatter humane kjønnscelle antistoff-gensekvenser. Disse kjønnscelle-sekvensene vil skille seg fra modne antistoff-gensekvenser fordi de ikke vil omfatte fullstendig sammensatte variable gener, som dannes ved V(D)J-sammenføyning under modning av B-celler. Gensekvenser fra kjønnsceller vil også skille seg fra sekvensene av et høyaffinitets sekundært repertoir-antistoff individuelt jevnt over den variable regionen.
Oppfinnelsen omfatter foretrukket et nukleinsyrefragment som koder for et polypeptid som binder til IGF-IR, hvorved nevnte polypeptid hemmer bindingen av IGF-I og IGF-II til IGF-IR, valgt fra gruppen bestående av a) en antistoff tung kjede omfattende som CDR'er CDR1 (aa 31-35), CDR2 (aa 50-66) og CDR3 (aa 99-107) ifølge SEKV ID NRl eller 3; b) en antistoff lett kjede omfattende som CDR'er CDR1 (aa 24-34), CDR2 (aa 50-56) og CDR3 (aa 89-98) ifølge SEKV ID NR2 eller 4.
De rekonstruerte tung og lett kjede variable regionene settes sammen med sekvenser for promoter, translasjons initiering, konstant region, 3' utranslatert, polyadenylering og transkripsjonsterminering for å danne ekspresjonsvektorkonstruksjoner. Tung og lett kjede ekspresjonskonstruksj onene kan settes sammen til en enkelt vektor, ko-transfekteres, transfekteres serielt eller transfekteres hver for seg inn i vertsceller som deretter fusjoneres for å danne en enkelt vertscelle som uttrykker begge kjedene.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer følgelig en fremgangsmåte for fremstilling av et rekombinant humant antistoff ifølge oppfinnelsen,karakterisert vedå uttrykke en nukleinsyre som koder for a) en antistoff tung kjede omfattende som CDR'er CDR1 (aa 31-35), CDR2 (aa 50-66) og CDR3 (aa 99-107) ifølge SEKV ID NRl eller 3; b) en antistoff lett kjede omfattende som CDR'er CDR1 (aa 24-34), CDR2 (aa 50-56) og CDR3 (aa 89-98) ifølge SEKV ID NR2 eller 4.
Oppfinnelsen omfatter videre anvendelse av et antistoff ifølge oppfinnelsen for diagnose av IGF-IR in vitro, foretrukket ved en immunologisk analyse for bestemmelse av bindingen mellom IGF-IR i en prøve og antistoffet ifølge oppfinnelsen.
I et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en blanding, f.eks. en farmasøytisk blanding, inneholdende ett eller en kombinasjon av humane monoklonale antistoffer eller den antigenbindende delen derav, ifølge foreliggende oppfinnelse, formulert sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer.
Farmasøytiske blandinger ifølge oppfinnelsen kan også administreres i kombinasjonsterapi, dvs. kombinert med andre midler. For eksempel kan kombinasjonsterapien omfatte en blanding ifølge foreliggende oppfinnelse med minst ett antitumormiddel eller annen konvensjonell behandling.
Et "kjemoterapeutisk middel" er en kjemisk forbindelse anvendelig ved behandling av kreft. Eksempler på kjemoterapeutiske midler omfatter Adriamycin, Doxorubicin, 5-fluoruracil, cytosin arabinosid ("Ara-C"), cyklofosfamid, tiotepa, Taxotere (docetaxel), busulfan, gemcitabin, Cytoxin, Taksol, metotreksat, cisplatin, melfalan, vinblastin, Bleomycin, etoposid, ifosfamid, mitomycin C, mitoksantron, vincreistin, vinorelbin, karboplatin, teniposid, daunomycin, carminomycin, aminopterin, daktinomycin, mitomyciner, esperamiciner (se US-patent nr. 4,675,187), melphalan og annen relatert "nitrogensennep".
Betegnelsen "cytotoksisk middel" som anvendt heri angir en substans som hemmer eller forhindrer funksjonen av celler og/eller forårsaker destruksjon av celler. Betegnelsen er ment å omfatte radioaktive isotoper, kjemoterapeutiske midler og toksiner slik som enzymatisk aktive toksiner av bakteriell sopp, plante eller animalsk opprinnelse eller fragmenter derav.
Betegnelsen "prodrug" som anvendt i denne søknaden refererer til en forløper eller derivat-form av en farmasøytisk aktiv substans som er mindre cytotoksisk for tumorceller sammenlignet med opphavs-medikamentet og kan bli enzymatisk aktivert eller omdannet til den mer aktive opphavs-formen. Se, f.eks. Wilman, "Prodrug in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, s. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) og Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), s. 247-267, Humana Press (1985). Prodrugs ifølge foreliggende beskrivelse omfatter fosfat-inneholdende prodrugs, tiofosfat-inneholdende prodrugs, sulfat-inneholdende prodrugs, peptid-inneholdende prodrugs, D-aminosyre-modifiserte prodrugs, glykosylerte prodrugs, P-laktam ring prodrugs, eventuelt substituerte fenoksyacetamid-inneholdende prodrugs eller eventuelt substituerte fenylacetamid-inneholdende prodrugs, 5-fluorcytosin og andre 5-fluoruridin prodrugs som kan omdannes til det mer aktive cytotoksiske frie medikamentet. Eksempler på cytotoksiske medikamenter som kan derivatiseres til en prodrug-form for anvendelse ved foreliggende beskrivelse omfatter de kjemoterapeutiske midlene beskrevet ovenfor.
Som anvendt heri omfatter "farmasøytisk akseptabel bærer" hvilket som helst og alle løsningsmidler, dispersjonsmedia, belegg, antibakterielle og antifungale midler, isotoniske og absorpsjonsforsinkende midler som er fysiologisk kompatible. Foretrukket er bæreren egnet for intravenøs, intramuskulær, subkutan, parenteral, spinal eller epidermal administrering (f.eks. ved injeksjon eller infusjon).
Et "farmasøytisk akseptabelt salt" angir et salt som bibeholder den ønskede biologiske aktiviteten av antistoffet og ikke meddeler noen uønskede toksikologiske effekter (se f.eks. Berge, S.M., et al., J. Pharm. Sei. 66 (1977) 1-19). Slike salter er omfattet i oppfinnelsen. Eksempler på slike salter omfatter syreaddisjonssalter og baseaddisjonssalter. Syreaddisjonssalter omfatter de avledet fra ikke-toksiske uorganiske syrer, slik som saltsyresalter.
En blanding ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres ved en rekke metoder kjent på området. Som det vil forstås av fagfolk, vil administrasjonsruten og/eller -metoden variere avhengig av de ønskede resultatene.
For å administrere en forbindelse ifølge oppfinnelsen ved bestemte administreringsmetoder, kan det være nødvendig å overtrekke forbindelsen med eller administrere forbindelsen sammen med et materiale for å forhindre dens inaktivering. For eksempel kan forbindelsen administreres til et individ i en passende bærer, for eksempel liposomer eller et fortynningsmiddel. Farmasøytisk akseptable fortynningsmidler omfatter saltløsning og vandig bufferløsninger.
Farmasøytisk akseptable bærere omfatter sterile vandige løsninger eller dispersjoner og sterile pulvere for ekstemporert fremstilling av sterile injiserbare løsninger eller dispersjon. Anvendelse av slike media og midler for farmasøytisk aktive substanser er kjent på området.
Frasene "parenteral administrering" og "administrert parenteralt" som anvendt heri betyr administreringsmetoder forskjellig fra enteral og topisk administrering, vanligvis ved injeksjon og omfatter, uten begrensning, intravenøs, intramuskulær, intraarteriell, intratekal, intrakapsulær, intraorbital, intrakardiell, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subkutan, subcuticular, intraartikulær, subkapsulær, subaraknoidal, intraspinal, epidural og intrasternal injeksjon og infusjon.
Disse blandingene kan også inneholde adjuvantia slik som konserveringsmidler, fuktemidler, emulgeringsmidler og dispergeringsmidler. Forhindring av tilstedeværelse av mikroorganismer kan sikres både ved steriliseringsprosedyrer, supra og ved innbefatning av forskjellige antibakterielle og antifungale midler, for eksempel paraben, klorbutanol, fenol, sorbinsyre. Det kan også være ønskelig å inkludere isotoniske midler, slik som sukker, natriumklorid i blandingene. I tillegg kan forlenget absorpsjon av den injiserbare farmasøytiske formen bevirkes ved inklusjon av midler som forsinker absorpsjon slik som aluminiummonostearat og gelatin.
Uansett administrasjonsrute som velges, formuleres forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, som kan anvendes i en egnet hydratisert form og/eller de farmasøytiske blandingene ifølge foreliggende oppfinnelse, til farmasøytisk akseptable doseringsformer ved konvensjonelle metoder kjent for fagfolk på området.
Aktuelle dosenivåer av de aktive bestanddelene i de farmasøytiske blandingene ifølge foreliggende oppfinnelse kan varieres for å oppnå en mengde av den aktive bestanddelen som er effektiv for å oppnå den ønskede terapeutiske responsen for en bestemt pasient, blanding og administreringsmetode, uten å være toksisk for pasienten. De valgte dosenivåene vil avhenge av en rekke farmakokinetiske faktorer omfattende aktiviteten av de bestemte blandingene ifølge foreliggende oppfinnelse som anvendes, administrasjonsruten, tid for administrering, utskillingshastigheten for den bestemte forbindelsen som anvendes, varigheten av behandlingen, andre medikamenter, forbindelser og/eller materialer anvendt i kombinasjon med de bestemte blandingene som anvendes, alder, kjønn, vekt, tilstand, generell helse og tidligere medisinsk historie for pasienten som behandles og lignede faktorer velkjent innen medisin.
Blandingen må være steril og flytende i den grad at blandingen kan leveres med sprøyte. I tillegg til vann, kan bæreren være en isotonisk bufret saltoppløsning.
Riktig fluiditet kan opprettholdes, for eksempel, ved anvendelse av belegg slik som lecitin, ved opprettholdelse av nødvendig partikkelstørrelse i tilfellet av dispersjon og ved anvendelse av surfaktanter. I mange tilfeller er det foretrukket å inkludere isotone midler, for eksempel sukker, polyalkoholer slik som mannitol eller sorbitol og natriumklorid i blandingen.
De følgende eksemplene, referansene, sekvenslistene og figurene er gitt for å bidra til forståelsen av foreliggende oppfinnelse, for hvilken det sanne omfanget er vist i de tilhørende patentkravene.
Beskrivelse av sekvensenlisten
SEKV ID NR: 1-4 Nukleotid og amino-sekvenser av lett og tung variabel region-domener av antistoffene 18 og 22
SEKV ID NR: 5 og 6 Nukleotid og amino-sekvenser av human konstant region-domene Beskrivelse av figurene
Figur 1 IGF-IR overflateekspresjon i cellekultur med lav og høy tetthet. Figur 2 WST-analyse (NCI H322M-celler) for hemming av proliferasjon i 3D-kultur. Figur 3 Kolonidannelse-analyse for hemming av proliferasjon i 3D-kultur
(mikroskopi bilde).
Figur 4 Kolonidannelse-analyse for hemming av proliferasjon i 3D-kultur
(kvantifisering), ktr = kontroll; Cl 18 = antistoff 18.
Figur 5 Hemning av I<125->IGF-I-binding til HT29-celler ved antistoffene 18 og
22 (IC5o-verdier).
Figur 6 Hemning av I<125->IGF-II-binding til HT29-celler ved antistoff 18. Figur 7 Hemning av I<125->IGF-II-binding til HT29-celler ved antistoff aIR3. Figur 8 Blokkering av IGF-I-indusert fosforylering av både IGF-IR og
Akt/PkB.
Figur 9 Ingen hemming av I<125->insulinbinding til 3T3-IR-celler ved anti-hlGF-lR-antistoffer. (MAKS w/o Ab: maksimal binding av I<125->insulin;
MIN: minimal binding etter konkurranse med 1 uM insulin)
Figur 10 Ingen stimulerende aktiviteter av AKI 8 på IGF-IR-overuttrykkende 3T3-celler. Figur 11 Ingen stimulerende aktiviteter av AK 18 på humane tumorceller
(HT29).
Figur 12 Nedregulering av IGF-IR eksponert på H322N-celleoverflate ved
antistoff 18 in vitro.
Figur 13 Behandling med AKI 8, primært tumorvolum
Figur 14 Behandling med AKI 8 med eller uten gemcitabin Figur 15 Behandling med AKI 8, primært tumorvolum
Eksempel 1
Fremstilling av en hybridom-cellelinje som produserer anti-IGF-IR-antistoffer Dyrking av hybridomer
Fremstilte HuMAb-hybridomer ble dyrket i Hybridoma Express Medium (PAA Laboratories GmbH, Østerrike) supplert med 2 mM L-glutamin (BioWhittaker) og 4% Origen Cloning Factor (Igen, Frankrike) ved 37°C og 5% CO2.
Immuniseringsmetode for transgene mus
Ti HCo7 transgene mus (4 hanner og 6 hunner), stamme GG2201 (Medarex, San José, CA, USA) ble vekselvis immunisert med lxl 06 NIH 3 T3-celler, transfektert med en ekspresjonsvektor for IGF-IR og 20 ug løselig ekstracellulært domene av IGF-IR. Seks immuniseringer ble utført totalt, tre intraperitoneale (TP) immuniseringer med de IGF-IR-uttrykkende cellene og tre subkutane (SC) immuniseringer ved basen av halen med det rekombinante proteinet. For den første immuniseringen ble 100 ul lxl06 NIH 3T3 IGF-IR-celler blandet med 100 ul complete Freunds' adjuvant (CFA; Difco Laboratories, Detroit, USA). For alle andre immuniseringer ble 100 ul celler i PBS anvendt eller rekombinant protein ble blandet med 100 ul incomplete Freunds' adjuvant (ICFA; Difco).
Antigenspesifikk ELISA
Anti-IGF-IR-titere i sera fra immuniserte mus ble bestemt ved antigenspesifikk ELISA. IGF-IR løselig ekstracellulært domene i en konsentrasjon på 1 ug/ml i PBS ble belagt over natten ved 4°C eller i to timer ved 37°C, på 96-brønners plater. Deretter ble brønnene blokkert med PBSTC (PBS supplert med 0,05% Tween<®->20 og 2% kyllingserum (Gibco BRL)) i 1 time (t) ved romtemperatur. Sera fra første tapping ble fortynnet 1/50 i PBSTC, sera fra alle andre tappinger ble på forhånd fortynnet 1/100 i PBSTC og seriefortynnet opptil 1/6400. Fortynnede sera ble tilsatt til brønnene og inkubert i 1 time ved 37°C. Forhåndstappet serum ble anvendt som negativ kontroll. 200 ng/ml geit anti-human IGF-IR (100 ug/ml) ble anvendt som positiv kontroll. Deretter ble plater vasket to ganger med PBST og inkubert med pepperrot peroksydase (HRP)-konjugert rotte anti-human IgG F(ab')2(DAKO), fortynnet 1/2000 i PBSTC i 1 time ved 37°C. Brønner ble vasket to ganger med PBST og analyser ble utviklet med nyfremstilt ABTS<®->løsning (1 mg/ml)
(ABTS: 2,2'-azino-bis-(3-etylbenztiazolin-6-sulfonsyre) i 30 minutter ved romtemperatur (RT) i mørke. Absorbans ble målt ved 405 nm.
FACS-analyse
I tillegg til bestemmelse ved antigenspesifikk ELISA, ble anti-IGF-IR-titere i sera fra immuniserte mus også bestemt ved FACS-analyser. NTH 3T3 IGF-IR-celler og de ikke-transfekterte NTH 3T3 IGF-IR-cellene ble inkubert med fortynnede sera i 30 minutter ved 4°C. Forhåndstappet serum ble anvendt som negativ kontroll. Initiert ble 200 ng/ml geit anti-human IGF-IR anvendt som positiv kontroll. Celler ble vasket tre ganger i PBS supplert med 1% bovint serumalbumin og 0,01% azid. Deretter ble celler inkubert med fluoresceinisotiocyanat (FITC)-konjugerte antigenbindende fragmenter (F(ab')2-fragmenter) fra rotte anti-human human IgG fortynnet 1/100 i FACS -buffer, i 30 minutter ved 4°C. Celler ble vasket to ganger i FACS-buffer og prøver ble analysert på en FACSCalibur (Becton Dickinson, Erembodegem-Aalst, Belgia).
Boosting av mus
Når serumtitere av anti-IGF-IR ble funnet å være tilfredsstillende, ble mus i tillegg boostet to ganger med 15 ug IGF-IR ekstracellulært domene i 200 ul PBS intravenøst (i.v.) 4 og 3 dager før fusjon.
Fremstilling av hybridom
Mus ble avlivet og milten og lymfeknuter som flankerer abdominal aorta og vena cava ble oppsamlet. Fusjon av splenocytter og lymfeknuteceller med fusjonspartneren SP 2,0-celler ble utført i henhold til standard operasjonsmetoder.
K-ELISA
For å bestemme hvorvidt hybridomer som ble dannet ved fusjonen produserer humane antistoffer, ble det utført en k-ELISA. ELISA-plater ble belagt med rotte anti-human IgG K-lett kjede-antistoff (DAKO) fortynnet 1/10000 i PBS ved inkubering over natten ved 4°C. Etter kassering av brønnene, ble plater blokkert ved inkubering med PBSTC i 1 time ved romtemperatur. Deretter ble brønner inkubert med hybridom kultur-supernatant, 1/2-fortynnet i PBSTC. Dyrkningsmedium 1/2-fortynnet i PBSTC ble anvendt som negativ kontroll, K-lett positivt mus serum 1/100-fortynnet i PBSTC fungerte som positiv kontroll. Deretter ble brønner vasket tre ganger og ble inkubert med HRP-konjugert rotte anti-human IgG F(ab')2(DAKO), fortynnet 1/2000 i PBSTC i 1 time ved 37°C. Brønner ble vasket tre ganger og analyser ble utviklet med nyfremstilt ABTS<®->løsning (1 mg/ml) i 30 minutter ved romtemperatur (RT) i mørke. Absorbans ble målt ved 405 nm i en ELIS A-plateleser.
De monoklonale antistoffene 18 og 22 ble fremstilt.
Eksempel 2
Bestemmelse av affiniteten for anti-IGF-IR-antistoffer mot IGF-IR
Instrument: BIACORE<®>3000
Chip: CM5
Kobling: amin kobling
Buffer: HBS (HEPES, NaCl), pH 7,4, 25°C
For affinitetsmålinger har anti human FCy-antistoffer (fra kanin) blitt koblet til chip-overflaten for presentasjon av antistoffet mot IGF-IR. IGF-IR ekstracellulært domene ble tilsatt i forskjellige konsentrasjoner i løsning. Assosiering ble målt ved en IGF-IR-injeksjon på 3 minutter; dissosiering ble målt ved vasking av chip-overflaten med buffer i 5 minutter. Affinitetsdataene for antistoffene 18 og 22 er vist i Tabell 1.
Eksempel 3
Tredimensjonal vekst av tumorceller og overekspresjon av IGF-I-reseptor ved celle-celle-kontakt (3D-kultur)
Materialer og Metoder:
NCI H322M-celler ble dyrket i RPMI-media på glass cover slides av optisk kvalitet enten ved lav tetthet eller superkonfluens for å undersøke effektene på IGF-IR overflateekspresjon. Parellellt ble H322M xenograft vev isolert fra kontrollgruppen (ubehandlede mus) "sjokkfrosset" i isopentan og kryosnitt ble kuttet med 5um tykkelse. Immunfluorescens-merking ble utført ved anvendelse av et mus-anti IGF-IR monoklonalt antistoff (ocIR3, 5 ug/ml) eller et antistoff ifølge oppfinnelsen, fulgt av et geit anti-mus-antistoff eller et geit anti-mus antistoff merket med Cy3 (Amersham Biosciences, GB) eller Alexa Fluor<®>488 (Molecular Probes, Inc., USA). Prøver ble avbildet i et Leica SP2 konfocalt mikroskop eller analysert ved FACS.
Resultater:
Når H322M-celler dyrket ved høy tetthet ble avbildet ved konfocal mikroskopi var det tydelig at IGF-IR samlet seg spesifikt ved setene for celle-celle-kontakt. Ved sammenligning med H322M-celler dyrket in vivo, dvs. xenograft vev, var det en påfallende likhet med tett pakkede in vitro-kulturer med hensyn til organiseringen av overflate IGF-I-reseptorer.
Oppreguleringen av overflate IGF-I-reseptor i super-konfluente kulturer av H322M-celler ble også kvantifisert ved FACS. IGF-I-reseptor overflateekspresjon økte mer enn 10 ganger når celler ble dyrket under betingelser med høy tetthet sammenlignet med lav tetthet uten betydelig celle-celle-kontakter.
Andre tumorceller slik som HT29, MDA231 og MCF-7 viste en lignende atferd, hvilket indikerer at oppregulering av IGF-I-reseptorer på celleoverflaten etter etablering av celle-celle kontakt-seter ikke er et unikt trekk for H322M-celler men synes å være en generell egenskap for en mer vevslignende organisering som også er funnet in vivo (Fig. 1).
Eksempel 4
Veksthemming av H322M-tumorceller som uttrykker IGF-IR i 3D-kultur under behandling med antistoff 18 (WST-analyse)
H322M-celler ble dyrket i RPMI1640/0,5% FCS-media i poly-HEMA (poly(2-hydroksyetylmetakrylat))-belagte skåler for å forhindre adheranse til plastoverflaten.
Under disse betingelsene danner H322M-celler tette sfæroider som vokser tredimensjonalt (en egenskap som betegnes forankrings-uavhengighet). Disse sfæroidene ligner svært mye på den tredimensjonale strukturen ("histoarchitecture") og organiseringen av faste tumorer in situ. Sfæroide kulturer ble inkubert i 5 dager i nærvær av økende mengder av antistoffer fra 0-240 nM. WST omdannelses-analysen ble anvendt for å måle hemming av vekst. Når sfæroide H322M-kulturer ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av antistoff 18 (1-240 nM) kunne det observeres en doseavhengig hemming av vekst (Fig. 2).
Eksempel 5
Veksthemning av H322M-tumorceller som uttrykker IGF-IR i 3D kultur
(kolonidannelse-analyse)
H322M-celler ble dyrket i RPMI1640/10% NCS-media i poly-HEMA-belagte skåler for å forhindre adheranse til plastoverflaten. Under disse betingelsene danner H322M-celler tette sfæroider som vokser tredimensjonalt (en egenskap som betegnes forankrings - uavhengighet). Disse sfæroidene representerer den tredimensjonale strukturen og organiseringen av faste tumorer in situ. Sfæroide kulturer ble inkubert i 5-10 dager i nærvær av økende mengder av antistoffer fra 0-7,5ug/ml. <HBV> monoklonalt antistoff ble anvendt som neg. kontroll. Kolonier ble avbildet i et invertert mikroskop (Zeiss Axiovert) ved anvendelse av fasekontrast og tellet ved anvendelse av et automatisert avbildningssystem (MetaMorf). Når sfæroide H322M-kulturer ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner (0,5-7,5ug/ml) av antistoff 18, kunne det observeres en doseavhengig hemming av vekst, mens kontrollantistoffet <HBV> hadde liten eller ingen effekt. Både antallet og størrelsen av kolonier ble lydelig redusert i kulturer behandlet med 7,5ug/ml antistoff 18 (Fig. 3).
Kvantitativ analyse av kolonier større enn lOOum i diameter viste at antall kolonier ble redusert ca. 66% i kulturer behandlet med 0,5 ug/ml antistoff 18 (Fig. 4).
Eksempel 6
Hemming av IGF-I og IGF-II-binding til tumorceller som uttrykker IGF-IR
For å bestemme evnen til antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse til å blokkere binding av ligandene IGF-I og IGF-II til IGF-I-reseptoren (IGF-IR), ble det utført konkurranseforsøk med radioaktivt merkede ligandpeptider.
Humane tumorceller (HT29, NCIH322M, 0,5 til 1 x 10<5>/ml) ble platet ut i RPMI1640-medium (PAA, Kat. nr. El5-039) supplert med 2 mM L-Glutamin, lx ikke-essensielle aminosyrer (Gibco, Kat. nr. 11140-035), 1 mM natriumpyruvat (Gibco, Kat. nr. 11360-039) og 10% varmeinaktivert FCS (PAA, Kat. nr. Al 5-771). Seks flasker i T175-formatet ble inokulert med 20 ml celler i det respektive mediet for hvert forsøk og dyrket i to dager ved 37°C og 5% CO2for å oppnå konfluente celle-monolag.
For å oppsamle individuelle celler, ble 2 ml lx Trypsin/EDTA (Gibco, Kat. nr. 25300-054) pr. T175-kolbe tilsatt og løsrivelse av celler overvåket med et Zeiss Axiovert25-mikroskop. Cellene ble oppsamlet og medium med 10% FCS som beskrevet tidligere ble tilsatt til et totalt volum på 50 ml. Celler ble reisolert ved sentrifugering i 10 minutter ved 1000 rpm (Heraeus sepatech, Omnifuge 2,0 RS) og resuspendert i 50 ml bindingsbuffer (120 mM NaCl, 5 mM KC1, 1,2 mM MgS04, 1 mM EDTA, 10 mM D(+)glukose, 15 mM NaAc, 100 mM Hepes pH 7,6, 1% BSA). Celler ble talt, reisolert ved sentrifugering og justert med bindingsbuffer til 1 x IO<6>celler/ml.
I12<5->merkede IGF-I og IGF-U-peptider (Amersham, -2000 Ci/mmol, Kat. nr. IMI 72 og IM238), solubilisert i 0,1% CH3COOH, ble fortynnet i bindingsbuffer til en endelig aktivitet på 4 x 105 tellinger/(minutt x ml). 75 ul antistoff ved de spesifiserte konsentrasjonene sammen med 25 ul forhåndsfortynnet I<125->merket IGF-I eller IGF-II-peptid ble tilsatt til 200 ul av cellesuspensjon og inkubert i 3,5 timer ved 4°C. Celler ble reisolert ved sentrifugering i 5 minutter ved 2000 rpm (Eppendorf, 5415C) og supernatanten fjernet. Etter vasking to ganger i 1 ml bindingsbuffer, ble celler resuspendert i 1 ml bindingsbuffer og overført til scintillasjonsrør. Mengden av radioaktivt peptid bundet til celleoverflatereseptorene ble målt i en scintillasjonsteller.
De resulterende ICso-kurvene som viser antistoffets evne til å hemme binding av IGF-I og IGF-II-peptid til IGF-I-reseptoren er vist i Figurene 5 og 6. Den gjennomsnittlige IC50-verdien for antistoff 18 er 0,3 nM. Resultatene for antistoff ocIR3 er vist i Fig. 7. Ingen detekterbar hemming av IGF-II-binding kunne observeres.
Eksempel 7
Antistoff-konkurranseforsøk for IGF-IR-binding
For en epitop-kartlegging ("mapping") av anti-IGF-IR monoklonale antistoffer ble det valgt et lignende format som for affinitetsmåling (Eksempel 2), men IGF-IR ble pre-inkubert i minst 0,5 time ved RT med antistoffet i løsning. Denne blandingen ble injisert og IGF-IR-binding (eller hemming) ble detektert. Dette forsøket tillater måling av den resiproke hemmende aktiviteten av monoklonale antistoffer for IGF-IR-binding. Det ble funnet at antistoffene ifølge oppfinnelsen konkurrerer om binding til IGF-IR med aXR3, et antistoff som er kjent å binde til aa 217-274 (Gustafson, T.A. og Rutter, W.J., J. Biol. Chem. 265 (1990) 18663-18667).
Eksempel 8
Inhibering av IGF-I-mediert fosforylering av IGF-IR og Akt/pkB
For å bestemme evnen til antistoffet ifølge oppfinnelsen til å hemme aktivering og fosforylering av IGF-I-reseptoren (IGF-IR), ble konkurranseforsøk utført med IGF-I-peptid og påfølgende Western blotting-analyse med antistoffer spesifikke for fosforylert tyrosin.
Humane tumorceller (HT29, NCIH322M, 5 x 10<4>/ml) ble platet ut i RPMI 1640-medium (PAA, Kat. nr. El 5-039) supplert med 2 mM L-Glutamin, lx ikke-essensielle aminosyrer (Gibco, Kat. nr. 11140-035), 1 mM natriumpyruvat (Gibco, Kat. nr. 11360-039) og 0,5% varmeinaktivert FCS (PAA, Kat. nr. A15-771). For bestemmelse av ICso-verdier, ble 12-brønners plater inokulert med 1 ml celler i det respektive mediet for hvert forsøk og dyrket i to dager ved 37°C og 5% C02.
Etter 48 timers dyrkning med lav serum-medium, ble mediet forsiktig fjernet og erstattet av forskjellige konsentrasjoner av antistoff fortynnet i det respektive mediet. Etter 5 minutters inkubering ved 37°C og 5% CO2ble IGF-I-peptid tilsatt i en endelig konsentrasjon på 2 nM og celler ble igjen inkubert i 10 minutter under betingelsene nevnt ovenfor. Mediet ble forsiktig fjernet ved aspirering og 100 ul kald lysis-buffer ble tilsatt pr. brønn (50mM Hepes pH 7,2,150 mM NaCl, ImM EGTA, 10% glyserol, 1% Triton<®->X100, lOOmM NaF, 10 mM Na4P2C>7, Complete<®>proteaseinhibitor). Cellene ble løsnet ved anvendelse av en celleskraper (Corning, Kat. nr. 3010) og innholdet i brønnene overført til Eppendorf reaksjonsrør. Cellefragmenter ble fjernet ved sentrifugering i 10 minutter ved 13000 rpm og 4°C og halvparten av supernatanten ble tilsatt til 2x Laemmli prøve-buffer i en 1:1 (volum/volum)-ratio. For immunpresipitering av IGF-IR, gjennomgikk den gjenværende supernatanten fra cellelysater et rensende spinn (10 minutter ved 13000 rpm og 4°C) like før 1 ul av et polyklonalt antistoff mot IGF-IRI3 (C-20, Santa Cruz Biotechnologies) eller et murint monoklonalt antistoff (IgGl) som gjenkjenner en epitop innenfor aminosyrene 440-586 av det ekstracellulære domenet (a-kjede) av den humane IGF Type 1-Reseptor ble tilsatt (mAb 24-55, GroPep). Etter 2 timers inkubering ved 4°C i et roterende Eppendorf reaksjonsrør, ble 25 ul Protein G Sepharose<®->kuler (Amersham Biosciences, Kat. nr. 17- 0618-01) tilsatt etterfulgt av et andre inkuberingstrinn på 1 time ved 4°C. Kulene med bundne antistoff-protein-komplekser ble isolert ved sentrifugering (1 minutt ved 2000 rpm og 4°C) og vasket tre ganger med vaskebuffer (lysis-buffer med kun 0,1% Triton<®->X100). Etter koking av kulene i Laemmli prøve-buffer, ble cellulære proteiner separert ved SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran (PROTRAN<®>BA 85, Schleicher&Schuell) ved semi-tørr Western blotting.
Et fosfotyrosin-spesifikt antistoff (Upstate, klon 4 G10, Kat. nr. 05-321) ble anvendt for å bestemme fosforylerings-status for immunrenset IGF-IR. For deteksjon av fosforylert Akt/pkB ble det anvendt et antistoff med spesifisitet for fosforylert Ser473 (Cell Signaling, Kat. nr. 9271).
Den observerte blokkeringen av IGF-I-indusert fosforylering av både IGF-IR og Akt/pkB er vist i Fig. 8.
Eksempel 9
Induksjon av antistoffmediert nedregulering av IGF-IR in vitro
For å detektere effekter av antistoffet ifølge oppfinnelsen på mengden av IGF-I-reseptor (IGF-IR) i tumorceller, ble tidsforløp-eksperimenter og påfølgende western blotting-analyse med IGF-IR-spesifikke antistoffer utført.
Humane tumorceller (HT29, 5 x IO<4>celler/ml) i RPMI 1640-medium (PAA, Kat. nr. El 5-039) supplert med 2 mM L-Glutamin, lx ikke-essensielle aminosyrer (Gibco, Kat. nr.l 1140-035), 1 mM natriumpyruvat (Gibco, Kat. nr. 11360-039) og 10% varmeinaktivert FCS (PAA, Kat. nr. Al 5-771). For hver inkuberingsperiode ble én 12-brønners plate inokulert med 1 ml celler i det respektive mediet for hvert forsøk og dyrket i 24 timer ved 37°C og 5% C02.
Mediet ble forsiktig fjernet og erstattet av forskjellige konsentrasjoner av antistoff fortynnet i det respektive mediet. I to kontroll-brønner, ble medium erstattet av enten medium uten antistoff eller medium med et kontroll-antistoff (AB-1, Oncogene, Kat. nr. GRU). Celler ble inkubert ved 37°C og 5% C02og individuelle plater ble tatt ut for videre prosessering etter 15 minutter, 24 timer og 48 timer.
Mediet ble forsiktig fjernet ved aspirering og 100 ul kald lysis-buffer ble tilsatt pr. brønn (50mM Hepes pH 7,2, 150 mM NaCl, ImM EGTA, 10% glyserol, 1% Triton<®->X100, lOOmM NaF, 10 mM Na^O?, Complete<®>proteaseinhibitor). Cellene ble løsnet ved anvendelse av en celleskraper (Corning, Kat. nr. 3010) og innholdene i brønnene overført til Eppendorf reaksjonsrør. Cellefragmenter ble fjernet ved sentrifugering i 10 minutter ved 13000 rpm og 4°C og supernatanten ble tilsatt til 2x Laemmli prøve-buffer i en ratio på 1:1 (volum/volum). Cellulære proteiner ble separert ved SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran (PROTRAN<®>BA 85, Schleicher&Schuell, Kat. nr. 10 401196) by semi-tørr western blotting.
Et antistoff spesifikt for IGF-IR (C-20, Santa Cruz Biotechnologies, Kat. nr. sc-713) ble anvendt for å bestemme proteinnivåer av IGF-IR.
Nedregulering av IGF-IR indusert av antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse etter mindre enn 24 timer etter tilsetning av antistoffet ble observert.
Eksempel 10
Hemming av insulinbinding til 3 T3-celler som uttrykker human insulinreseptor
For å bestemme hvorvidt antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse også blokkerer binding av insulin til insulinreseptoren ( JR), ble konkurranseforsøk utført med et radioaktivt merket ligand-peptid. 3 T3-celler (lx 10<5>/ml) som rekombinant uttrykker høye antall (>10<5>) human IR ble platet ut i MEM Dulbecco medium (DMEM) med høy glukose (PAA, Kat. nr. El5-009) supplert med 2mM L-Glutamin (Gibco, Kat. nr. 25030-024) og 10% varmeinaktivert FCS (PAA, Kat. nr. Al 5-771). Seks flasker i T175-formatet ble inokulert med 20 ml celler i det respektive mediet for hvert forsøk og dyrket i to dager ved 37°C og 5% CO2for å oppnå konfluente celle-monolag.
For å oppsamle individuelle celler, ble 2 ml lx Trypsin/EDTA (Gibco, Kat. nr. 25300-054) pr. T175-kolbe tilsatt og løsning av celler overvåket med et mikroskop. Cellene ble oppsamlet og medium med 10% FCS som beskrevet tidligere ble tilsatt til et totalt volum på 50 ml. Celler ble reisolert ved sentrifugering i 10 minutter ved 1000 rpm og resuspendert i 50 ml bindingsbuffer (120 mM NaCl, 5 mM KC1, 1,2 mM MgS04, 1 mM EDTA, 10 mM D(+)glukose, 15 mM NaAc, 100 mM Hepes pH 7,6, 1% BSA). Celler ble tellet, reisolert ved sentrifugering og justert med bindingsbuffer til 1 x IO<6>celler/ml.
I12<5->merket insulin-peptid (Amersham, Kat. nr. IMI 66, -2000 Ci/mmol), solubilisert i 0,1% CH3COOH, ble fortynnet i bindingsbuffer til en endelig aktivitet på 4* 105 tellinger/(minutt<*>ml). 75 ul antistoff sammen med 25 ul forhåndsfortynnet I<125->merket insulin-peptid ble tilsatt til 200 ul cellesuspensjon (endelig antistoffkonsentrasjon 200 nM) og inkubert i 3,5 timer ved 4°C. Celler ble reisolert ved sentrifugering i 5 minutter ved 2000 rpm og supernatant ble fjernet. Etter vasking to ganger i 1 ml bindingsbuffer, ble celler resuspendert i 1 ml bindingsbuffer og overført til scintillasjonsrør. Mengden av radioaktivt peptid bundet til celleoverflatereseptorene ble målt ved en scintillasjonsteller. Resultatene viser at antistoffet ifølge oppfinnelsen ikke interfererer med binding av insulin-ligand til insulinreseptoren (Fig. 9).
Eksempel 11
Ingen stimulering av IGF-IR og Akt/PKB-fosforylering
For å utelukke IGF-IR-stimulerende aktiviteter av antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse, ble fosforylering av IGF-IR bestemt i fravær av IGF-I-ligand men i nærvær av antistoffet ifølge oppfinnelsen og et referanseantistoff (ocIR3, Oncogene, Tyskland). Dette ble utført ved en western blotting-analyse med fosforylerings-status spesifikke antistoffer. 3T3-celler (ATCC CRL 1658) transfektert med IGF-IR (5<*>10<4>celler/ml, Pietrzkowski, Z., et al., Cell Growth Differ. 4 (1992) 199-205) ble platet ut i MEM Dulbecco medium (DMEM) med høy glukose (PAA, Kat. nr. El 5-009) supplert med 2mM L-Glutamin (Gibco, Kat. nr. 25030-024) og 0,5% varmeinaktivert FCS (PAA, Kat. nr. Al 5-771) eller humane tumorceller (HT29, NCIH322M, 5<*>10<4>/ml) i RPMI 1640-medium (PAA, Kat. nr. El 5-039) supplert med 2 mM L-Glutamin, lx ikke-essensielle aminosyrer (Gibco, Kat. nr. 11140-035), 1 mM natriumpyruvat (Gibco, Kat. nr. 11360-039) og 0,5% varmeinaktivert FCS (PAA, Kat. nr. Al 5-771). For bestemmelse av ICso-verdier, ble 12-brønners plater inokulert med 1 ml celler i det respektive mediet for hvert forsøk og dyrket i to dager ved 37°C og 5% C02.
Etter 48 timers dyrkning med lav serum-medium, ble mediet forsiktig fjernet og erstattet av forskjellige konsentrasjoner av antistoff fortynnet i det respektive mediet. Celler ble inkubert i 15 minutter under betingelsene nevnt ovenfor. Mediet ble forsiktig fjernet ved aspirering og 100 ul kald lysis-buffer ble tilsatt pr. brønn (50mM Hepes pH 7,2, 150 mM NaCl, ImM EGTA, 10% glyserol, 1% Triton-XlOO, lOOmM NaF, 10 mM Na^Oy, Complete™ proteaseinhibitor). Cellene ble løsnet ved anvendelse av en celleskraper (Corning, Kat. nr. 3010) og innholdet i brønnene overført til Eppendorf-reaksjonsrør. Cellefragmenter ble fjernet ved sentrifugering i 10 minutter ved 13000 rpm og 4°C (Eppendorf centrifuge 5415R) og halvparten av supernatanten ble tilsatt til 2x Laemmli prøve-buffer i en ratio på 1:1 (volum/volum). For immunpresipitering av IGF-IR, gjennomgikk den gjenværende supernatanten fra cellelysater et rensende spinn (10 minutter ved 13000 rpm og 4°C) like før 1 ul av et antistoff mot IGF-IR ble tilsatt (C-20, Santa Cruz Biotechnologies, Kat. nr. sc-713 eller mAb 24-55, GroPep, Kat. nr. MADl). Etter 2 timers inkubering ved 4°C i et roterende Eppendorf reaksjonsrør, ble 25 ul Protein G Sepharose™-kuler (Amersham Biosciences, Kat. nr. 17-0618-01) tilsatt fulgt av et andre inkuberingstrinn på 1 time ved 4°C. Kulene med bundne antistoff-protein-komplekser ble isolert ved sentrifugering (1 minutt ved 2000 rpm og 4°C) og vasket tre ganger med vaskebuffer (lysis-buffer med kun 0,1% Triton-X100). Etter koking av kulene i Laemmli prøve-buffer, ble cellulære proteiner separert ved SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran (PROTRAN BA 85, Schleicher&Schuell, Kat. nr. 10 401196) ved semi-tørr western blotting.
Et fosfotyrosin-spesifikt antistoff (Upstate klon 4 G10, Kat nr. 05-321, som gjenkjenner tyrosin-fosforylerte proteiner) ble anvendt for å bestemme fosforyleringsstatus for immunrenset IGF-IR. For deteksjon av fosforylert Akt/PKB ble det anvendt et antistoff mot Aktl med spesifisitet for fosforylert Ser473 (Cell Signalling, Kat. nr. 9271).
Det ble observert at Akt/PKB-kinasen nedstrøm i signaloverføringsbanen for IGF-IR ble betydelig aktivert ved referanse-antistoffet ved konsentrasjoner høyere enn 5 nM men ikke ved antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse ved konsentrasjoner opptil 10,000 nM. Resultatene er vist i Figurene 10 og 11 (HM=lav serum medium med 0,5% FCS, HM+IGFI=lav serum medium med 0,5% FCS og 10 nM hIGF-I).
Eksempel 12
Induksjon av reseptor-nedregulering i H322M xenograft-modeller
Tumorer ble indusert i nakne mus og behandlet én gang med forskjellige konsentrasjoner av antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse. 24 timer etter behandling ble tumorene ekstrahert og homogenisert under flytende nitrogen. Kald lysis-buffer ble tilsatt (50mM Hepes pH 7,2, 150 mMNaCl, ImMEGTA, 10% glyserol, 1% Triton-XlOO, lOOmMNaF, 1 mM Na3V04, 10 mM Na4P2C>7, Complete™ proteaseinhibitor, ImM PMSF) i en buffer-volum til tumor-vekt-ratio på 3:1 og grundig blandet med det opptinte tumor-homogenatet. Etter solubilisering av vevet i 15 minutter på is, ble uløselige fragmenter fjernet ved sentrifugering i 10 minutter ved 13000 rpm og 4°C (Eppendorf centrifuge 5415R). Proteinkonsentrasjonen av prøvene ble bestemt med Mikro BCA™ Reagents (Pierce) og lysis-buffer ble tilsatt for å justere like konsentrasjoner. Del av supernatanten ble tilsatt til 2x Laemmli prøve-buffer i en ratio på 1:1 (volum/volum). Cellulære proteiner ble separert ved SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran (PROTRAN BA 85, Schleicher&Schuell, Kat. nr. 10 401196) ved semi-tørr western blotting. Et IGF-IR-spesifikt antistoff (C-20, Santa Cruz Biotechnologies, Kat. nr. sc-713) ble anvendt for å detektere IGF-IR.
Etter behandling med antistoffet ifølge oppfinnelsen, observerte vi en konsentrasjonsavhengig reduksjon av IGF-IR-nivåer med en beregnet EC50 på 0,6 mg/kg (Figur 12).
Eksempel 13
Clqbindings-ELISA
Innføring
For å bestemme evnen for antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse til å binde Clq ble det anvendt en ELISA-metode. Clq er del av det adaptive immunsystemet og trigger, etter binding til immunkomplekser, den sekvensielle aktiveringen av mange zymogener. Enzymene bevirker i sin tur kløyving av C3 -molekyler, hvilket kan føre til oppstart av inflammatoriske reaksjoner, opsonisering av fremmede eller abnorme partikler og lysering av cellemembraner.
I prinsippet belegges ELISA-platen med konsentrasjons-spektre av antistoffet, til hvilket human Clq tilsettes. Clq-binding detekteres av et antistoff rettet mot human Clq etterfulgt av et peroksydase-merket konjugat.
Materialer og metoder
Antistoff 18, 8 og 23 og kontroll-antistoffer ble testet i konsentrasjoner på 10, 5, 1 og 0,5 ug/ml. Tabell 1 viser spesifisitetene av prøvene som ble testet. Som en negativ kontroll ble det anvendt et humant IgG4 (CLB, stock 0,5 ug/ml), som binder Clq svært svakt. Human IgGl ble inkorporert som positiv kontroll. Human Clq-stamløsning med en konsentrasjon på 2 ug/ml ble anvendt. For deteksjon av Clq ble det anvendt et kanin-antistoff rettet mot Clq (Dako) og et anti-kanin IgG-antistoff, konjugert til pepperrot peroksydase (Sigma).
Beregninger og kurvetilpasning
Beregninger angående maksimal binding (Bmaks) av HuMAb testet ble bestemt ved anvendelse av ikke-lineær regresjon kurvetilpasning (ett sete binding) ved anvendelse av Graphpad Prism-programvare.
Resultater
Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse oppviser doseavhengig binding av humant Clq-protein. Den optiske tettheten ved 405 nm (OD 405 nm) ble plottet mot konsentrasjonene av HuMAb og kurvene ble tilpasset ved anvendelse av ikke-lineær regresjon. Beste tilpasnings ("best fit")-verdier for maksimal binding (Bmaks) er listet opp i Tabell 2, i likhet med korrelasjonskoeffisienten av kurven (R2) og standardavviket for hver verdi. Den laveste korrelasjonskoeffisienten hadde en verdi på 0,950 (IgG4). Med en maksimal binding på 0,279, oppviser human IgG4 (negativ kontroll) minimum binding av Clq. Positive kontroller IgGl og IgG3 binder begge Clq, som vist ved en maksimal binding på 1,729 og 2,223, henholdsvis.
Korrelasjonskoeffisienten (R2) og standardavviket er også listet opp.
Sammenlignet med Clq-bindingen av human IgG4 (negativ kontroll, med en O.D. på 0,279), er alle de testede antistoffenet i like stor grad i stand til å binde Clq.
Eksempel 14
Bestemmelse av antistoffmedierte effektorfunksjoner ved anti-IGF-IR HuMAbs
For å bestemme kapasiteten for de dannede HuMAb-antistoffene til å fremkalle immun effektor-mekanismer, ble det utført komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) og antistoff-avhengig celle-cytotoksisitet (ADCC)-undersøkelser.
For å undersøke CDC (National Cancer Institute, lunge adenokarsinom-cellelinje), ble H322M, H460 og NIH 3T3-celler (2-6 x IO<6>) merket med 100 uCi<51>Cr i 45-120 minutter (Amersham Pharmacia Biotech, UK, Kat CJS11). Etter merking ble cellene vasket to ganger med 40 ml PBS og spunnet i 3 minutter ved 1500 rpm. Cellene ble deretter platet ut med 5,000 pr. brønn i en rundbunnet plate, i et volum på 50 ul. Antistoffer ble tilsatt til en endelig konsentrasjon i området fra 25-0,1 ug/ml i et volum på 50 ul celledyrkningsmedium til 50 ul cellesuspensjon og inkubert i 30-60 minutter. Etter inkubering ble overskudd av antistoff fjernet ved vasking to ganger med PBS. 100 ul aktivt eller inaktivt (30 minutter ved 56°C) samlet humant serum, eller serum fra marsvin, kanin eller nakne mus fortynnet mellom 1/3-1/30 ble tilsatt og cellene ble inkubert i 3 timer, hvoretter cellene ble spunnet ned ved 1500 rpm i 3 minutter. 100 ul av supernatanten ble høstet, overført til polypropylenrør og tellet i en y-counter.
For å undersøke virkningene av antistoffene i ADCC, ble H322M, H460 og NIH 3T3 eller andre passende IGF-IR-uttrykkende celler (2-6 x IO<6>) merket med 100 uCi<51>Cr i 45-120 minutter (Amersham Pharmacia Biotech, UK, Kat CJS11), vasket to ganger med 40 ml PBS og spunnet i 3 minutter ved 1500 rpm. Cellene ble platet ut med 5,000 pr. brønn i en rundbunnet plate, i et volum på 50 ul. HuMAb-antistoffer ble tilsatt til en endelig konsentrasjon i området fra 25-0,1 ug/ml i et volum på 50 ul celledyrkningsmedium til 50 ul cellesuspensjon og inkubert i 15 minutter. Deretter ble 50 ul effektorceller, nyisolerte PBMC eller rensede effektorceller fra buffycoats, tilsatt ved en E:T-ratio i området fra 100:1 til 5:1. Platene ble sentrifugert i 2 minutter ved 500-700 rpm og inkubert over natten ved 37°C. Etter inkubering ble cellene spunnet ned i 3 minutter ved 1500 rpm og 100 ul supernatant ble høstet, overført til polypropylenrør og tellet i en y-counter.
Omfatning av cellelysis ved CDC eller ADCC er uttrykt som % av maksimal frigjøring av radioaktivitet fra målcellene lysert ved detergent korrigert for spontan frigjøring av radioaktivitet fra de respektive målcellene.
Eksempel 15
Veksthemning av H322M-tumorer
Virkningene av antistoff 18 in vivo ble undersøkt ved å indusere tumorer i atymiske nakne mus i henhold til etablerte metoder. Humane H322M NSCLC-celler ble injisert sammen med Matrigel subkutant inn i 6-7 uker gamle atymiske nu mus (nu/nu). I den hensikt ble 5 x IO<6>H322M-celler konsentrert i lOOul dyrkningsmedium og blandet med 100 ul Matrigel. 200ul av denne blandingen ble injisert inn i de høyre flankene hos musen. Tumorvolum ble beregnet ved å måle tumordiametere med Vernier skyvelær to ganger pr. uke i henhold til formelen først publisert av Geran et al. ("Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and other biological systems", Cancer Chemother. Rep. 11,301, 1972) hvor tumorvolum [mg] = (lengde x (bredde)<2>). Antistoff ble administrert intraperitonealt (i.p.) ved 10 ml/ kg. Behandling ble startet med fordoblede doser av antistoffet administrert i fordoblede volumer. Tumorer ble indusert i nakne mus som beskrevet ovenfor. Etter at tumorer hadde vokst til et gjennomsnittlig volum på 160 mg, ble mus behandlet intraperitonealt seks ganger én gang pr. uke med 6, 0,6 og 0,06 mg/kg antistoff som påfølgende doser ved å starte med 12, 1,2 og 0,12 mg/kg som loading dose gitt én gang den første dagen for behandling. Figur 13 illustrerer tumorvolumer målt under behandling inntil dag 67, da dyrene ble avlivet og forsøket ble avsluttet. Forsøket viser at blokkering av IGF-IR-aksen ved rhu anti-IGF-IR mAb 18 resulterer i antitumoral effektivitet når administrert som et enkelt agens ved 6 og 0,6 mg/kg. I motsetning hadde 0,06 mg/kg ikke noen effekt på tumorvekst.
I tillegg ble antistoff 18 testet i kombinasjon med gemcitabin i samme modell. Tumorer ble indusert som beskrevet ovenfor og behandling ble initiert når tumorer var etablert og hadde vokst til gjennomsnittlig 170mm<3>i alle gruppene. Antistoff ble administrert én gang pr. uke i.p. ved 6 og 0,6 mg/kg og i kombinasjon med 62 mg/kg gemcitabin ved 0,6 mg. Gemcitabin ble administrert i én syklus dvs. hver tredje dag, totalt fire ganger. Igjen ble behandling oppstartet ved administrering av fordoblede doser av antistoffet. Figur 14 viser tumorstørrelsen i relasjon til de forskjellige behandlingene over tid. Forsøket viste at behandling med antistoff 18 administrert én gang hver syvende dag hemmer tumorvekst alene og forøker effektiviteten av gemcitabin, en kjent antimetabolsk forbindelse.
Eksempel 16
Veksthemming av 3T3-tu morer
Tumorer ble indusert i nakne mus hovedsakelig som beskrevet i Eksempel 15 bortsett fra at murine 3T3-fibroblaster som overuttrykker den humane IGF-IR ble anvendt. Mus med etablerte tumorer på omtrent 180 mg ble behandlet intraperitonealt én gang ukentlig syv ganger med 18, 6 eller 0,6 mg/kg av antistoff 18. Igjen ble behandling startet med doblede doser av antistoff gitt som loading dose (36,12 og 1,2 mg/kg). Forsøket viser at ved behandling med antistoffet, kan tumorvekst forsinkes ved administrering ved 18 og 6 mg/kg én gang ukentlig (Figur 15).
Liste over referanser
Adams, T.E., et al., Cell. Mol. Life Sei. 57 (2000) 1050-1063
Aplin, J.D. og Wriston, J.C. Jr., CRC Crit. Rev. Biochem. (1981) 259-306 Arteaga, C.L., et al., Breast Cancer Res. Treatment 22 (1992) 101-106 Ausubel, F., et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing og
Wiley Interscience, New York (1987)
Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73 (2001) 261-270
Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32 (2000) 109-123
Benini, S., et al., Clin. Cancer Res. 7 (2001) 1790-1797
Berge, S.M., et al, J. Pharm. Sei. 66 (1977) 1-19
Bergmann, U., et al., Cancer Res. 55 (1995) 2007-2011
Briiggemann, M., et al, J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361
Brunetti, A., et al, Biochem. Biophys. Res. Commun. 165 (1989) 212-218 Carter, P., et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 89 (1992) 4285-4289
Chen, J., et al., EMBO J. 12 (1993) 821-830
Chen, J., et al., International Immunology 5 (1993) 647-656 Delafontaine, P., et al., J. Mol. Cell Cardiol. 26 (1994) 1659-1673
Dricu, A., et al., Glycobiology 9 (1999) 571-579
Durocher, Y., et al., Nucl. Acids Res. 30 (2002) E9
Edge, A.S., et al. Anal. Biochem. 118 (1981) 131-137
Fishwild, D.M., et al., Nat. Biotechnol. 14 (1996) 845-851
Forsayeth, J.R, et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 84 (1987) 3448-3451 Geisse, S., et al., Protein Expr. Purif. 8 (1996) 271-282
Gustafson, T.A. og Rutter, W.J., J. Biol. Chem. 265 (1990) 18663-18667 Hailey, J., et al., Mol. Cancer Ther. 1 (2002) 1349-1353
Harding, F. og Lonberg, N., Ann. N. Acad. Sei 764 (1995) 536-546 Hoyne, P.A., et al., FEBS Lett. 469 (2000) 57-60
Johnson, G. og Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218
Jones, P., et al., Nature 321 (1986) 522-525
Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health
Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) Kalebic, T., et al., Cancer Res. 54 (1994) 5531-5534
Kanter-Lewensohn, L., et al., Melanoma Res. 8 (1998) 389-397
Kato, H, et al., J. Biol. Chem. 268 (1993) 2655-2661
Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol. 16 (2000) 151-161
Kull, F.C. Jr., et al. J. Biol. Chem. 258 (1983) 6561-6566
LeRoith, D., et al, Endocrin. Rev. 16 (1995) 143-163
Li, S.L., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 196 (1993) 92-98
Li, S.L., et al., Cancer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252
Lonberg, N. og Huszar, D., Intern. Rev. Immunol. 25 (1995) 65-93 Lonberg, N., et al., Nature 368 (1994) 856-859
Lonberg, N., Handbook of Experimental Pharmacology 113 (1994) 49-101 Love, T.W., et al., Methods Enzymol. 178 (1989) 515-527
Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17 (1999) 183-202
Morgan, D.O. og Roth, RA., Biochemistry 25 (1986) 1364-1371 Morrison, S.L., et al., Proe. Nati. Acad Sei. USA 81 (1984) 6851-6855 Neuberger, M.S., et al, Nature 314 (1985) 268-270
Norderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204 (1997) 77-87
0'Brien, R.M., et al., EMBO J. 6 (1987) 4003-4010
Orlandi, R, et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86 (1989) 3833-3837 Pessino, A., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 162 (1989) 1236-1243 Pietrzkowski, Z., et al., Cell Growth Differ 4 (1992) 199-205
Prigent, S.A., et al., J. Biol. Chem. 265 (1990) 9970-9977
Queen, C, et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86 (1989)10029-10033 Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327
Rohlik, Q.T., et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 149 (1987) 276-281 Schaefer, E.M., et al., J. Biol. Chem. 265 (1990) 13248-13253
Schlaeger, E.-J. og Christensen, K., Cytotechnology 30 (1999) 71-83 Schlaeger, E.-J., J. Immunol. Methods 194 (1996) 191-199
Scotlandi, K., et al., Cancer Gene Ther. 9 (2002) 296-307
Scotlandi, K., et al., Int. J. Cancer 101 (2002) 11-16
Sojahr, H.T. og Bahl, O.P., Arch. Biochem. Biophys. 259 (1987) 52-57 Soos, M.A., et al., Biochem. J. 235 (1986) 199-208
Soos, M.A., et al., J. Biol. Chem. 267 (1992) 12955-12963
Soos, M.A., et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86 (1989) 5217-5221
Stella et al., "Prodrug: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug
Delivery, Borchardt et al., (ed.), s 247-267, Humana Press (1985) Surinya, K.H., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 16718-16725
Taylor, L., et al., Int. Immunol. 6 (1994) 579-591 Choi, T.K., et al., Nature Genetics 4
(1993) 117-123
Taylor, L., et al., Nucleic Acids Research 20 (1992) 6287-6295
Taylor, R, et al., Biochem. J. 242 (1987) 123-129
Thotakura, N.R og Bahl, O.P., Meth. Enzymol. 138 (1987) 350-359 Tuaillon, N., et al., Immunol. 152 (1994) 2912-2920
Tuaillon, N., et al., Proe. Nati. Acad. Sei USA 90 (1993) 3720-3724
Tulloch, P.A., et al., J. Struct. Biol. 125 (1999) 11-18 US-patentnr. 4,179,337
US-patentnr. 4,301,144
US-patent nr. 4,487,603
US-patent nr. 4,496,689
US-patentnr. 4,640,835
US-patentnr. 4,670,417
US-patentnr. 4,675,187
US-patentnr. 4,791,192
US-patentnr. 5,202,238
US-patent nr. 5,204,244
US-patent nr. 5,545,806
US-patent nr. 5,545,807
US-patent nr. 5,569,825
US-patentnr. 5,625,126
US-patent nr. 5,633,425
US-patentnr. 5,661,016
US-patent nr. 5,770,429
US-patent nr. 5,789,650
US-patentnr. 5,814,318
US-patent nr. 5,874,299
US-patent nr. 5,877,397
van Dijk, M.A. og van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374 Vitetta, E.S., et al., Science 238 (1987) 1098-1104 Werner, R.G., Drug Res. 48 (1998) 870-880 Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, s.
375-382, 615th Meeting Belfast (1986) WO 01/14424
WO 02/053596
WO 87/05330
WO 92/03918
WO 92/22645
WO 93/1227
WO 94/11026
WO 94/25585
WO 98/24884
Claims (16)
1. Antistoff som binder til human IGF-IR,karakterisert veddet omfatter a) en antistoff tungkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 31-35, CDR2 av aminosyrene 50-66 og CDR3 av aminosyrene 99-107 ifølge SEKV ID NR:1 og en antistoff lettkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 24-34, CDR2 av aminosyrene 50-56 og CDR3 av aminosyrene 89-98 ifølge SEKV ID NR2, eller b) en antistoff tungkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 31-35, CDR2 av aminosyrene 50-66 og CDR3 av aminosyrene 99-107 ifølge SEKV ID NR:3 og en antistoff lettkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 24-34, CDR2 av aminosyrene 50-56 og CDR3 av aminosyrene 89-98 ifølge SEKV ID NR:4.
2. Antistoff ifølge krav 1, omfattende a) en antistoff tungkjede variabel region ifølge SEKV ID NR: 1 og en antistoff lettkjede variabel region ifølge SEKV ID NR2; eller b) en antistoff tungkjede variabel region ifølge SEKV ID NR:3 og en antistoff lettkjede variabel region ifølge SEKV ID NR:4.
3. Antistoff ifølge krav 1 eller 2,karakterisert vedat det er et humant eller humanisert antistoff.
4. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 3,karakterisert veden affinitet på omtrent IO"13til IO"9 M (Kd).
5. Antistoff ifølge krav 1, som kan oppnås fra hybridomcellelinje <IGF-1R> HUMAB Klon 18 (DSM ACC 2587) eller <IGF-1R> HUMAB Klon 22 (DSM ACC 2594).
6. Anvendelse av et antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 5 for fremstilling av en farmasøytisk blanding.
7. Farmasøytisk blandingkarakterisert vedat det inneholdender et antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 5.
8. Hybridomcellelinjer <IGF-1R> HUMAB Klon 18 (DSM ACC 2587) og <IGF-1R> HUMAB Klon 22 (DSM ACC 2594).
9. Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat omfattende et antistoff ifølge kravene 1 til 5.
10. Nukleinsyre som koder for en antistoffbinding til humant IGF-IR,karakterisertv e d at det omfatter a) en antistoff tungkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 31-35, CDR2 av aminosyrene 50-66 og CDR3 av aminosyrene 99-107 ifølge SEKV ID NR:1 og en antistoff lettkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 24-34, CDR2 av aminosyrene 50-56 og CDR3 av aminosyrene 89-98 ifølge SEKV ID NR2, eller b) en antistoff tungkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 31-35, CDR2 av aminosyrene 50-66 og CDR3 av aminosyrene 99-107 ifølge SEKV ID NR:3 og en antistoff lettkjede omfattende som CDR'er CDR1 av aminosyrene 24-34, CDR2 av aminosyrene 50-56 og CDR3 av aminosyrene 89-98 ifølge SEKV ID NR:4.
11. Nukleinsyre ifølge krav 10, som koder for et polypeptid som er i stand til å settes sammen med den respektive andre antistoffkjeden definert nedenfor, mens nevnte polypeptid er enten a) en antistoff tungkjede variable region ifølge SEKV ID NR: 1 eller 3; b) en antistoff lettkjede variabel region ifølge SEKV ID NR:2 eller 4,
og hvor SEKV ID NR: 1 og 2 kan settes sammen og SEKV ID NR: 3 og 4 kan settes sammen.
12. Ekspresjonsvektorkarakterisert vedat det omfatter en nukleinsyre ifølge krav 10 eller 11, som er i stand til å uttrykke nevnte nukleinsyre i en prokaryot vertscelle eller en CHO, NSO, SP210, HEK293, COS eller gjærvertscelle.
13. Prokaryot vertscelle eller en CHO, NSO, SP210, HEK293, COS eller gjærvertscelle omfattende vektoren ifølge krav 12.
14. Fremgangsmåte for fremstilling av et polypeptidbinding til humant IGF-IR,karakterisert vedat det uttrykker en nukleinsyre som koder for en antistoff tungkjede og en nukleinsyre som koder for en antistoff lettkjede ifølge krav 10 eller 11 i en prokaryot vertscelle eller en CHO, NSO, SP210, HEK293, COS eller gjærvertscelle og gjenvinning av nevnte polypeptid fra nevnte celle.
15. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 5 for anvendelse som et medikament for behandling av en pasient med behov for antitumorterapi.
16. Antistoff for anvendelse som medikament ifølge krav 15,karakterisert vedat antistoffet blir administrert i kombinasjon med et cytotoksisk middel, et prodrug derav eller cytotoksisk radioterapi.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP03015526 | 2003-07-10 | ||
PCT/EP2004/007562 WO2005005635A2 (en) | 2003-07-10 | 2004-07-09 | Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20161389A1 NO20161389A1 (no) | 2016-09-02 |
NO340438B1 true NO340438B1 (no) | 2017-04-24 |
Family
ID=33560758
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20056246A NO339935B1 (no) | 2003-07-10 | 2005-12-30 | Fremgangsmåte for seleksjonen av et antistoff mot IGF-IR |
NO20161389A NO340438B1 (no) | 2003-07-10 | 2016-09-02 | Antistoffer som binder til human IGF-IR, hybridomcellelinjer og nukleinsyrer, farmasøytisk blanding omfattende samme, anvendelse av samme for fremstilling av farmasøytisk blanding, fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk preparat, og anvendelser derav |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20056246A NO339935B1 (no) | 2003-07-10 | 2005-12-30 | Fremgangsmåte for seleksjonen av et antistoff mot IGF-IR |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US7579157B2 (no) |
EP (4) | EP2243835A3 (no) |
JP (2) | JP4276262B2 (no) |
KR (1) | KR100795745B1 (no) |
CN (1) | CN100453645C (no) |
AR (1) | AR046071A1 (no) |
AT (2) | ATE413454T1 (no) |
AU (3) | AU2004256215B2 (no) |
BR (1) | BRPI0412478B8 (no) |
CA (1) | CA2532173C (no) |
CO (1) | CO5640053A1 (no) |
CY (1) | CY1116227T1 (no) |
DE (2) | DE602004017614D1 (no) |
DK (3) | DK1646720T3 (no) |
ES (3) | ES2360454T3 (no) |
HK (1) | HK1094713A1 (no) |
IL (1) | IL172925A (no) |
MX (1) | MXPA06000270A (no) |
MY (1) | MY140209A (no) |
NO (2) | NO339935B1 (no) |
NZ (1) | NZ544455A (no) |
PL (3) | PL1646720T3 (no) |
PT (3) | PT1959014E (no) |
RU (2) | RU2363706C2 (no) |
SG (1) | SG129437A1 (no) |
SI (1) | SI2272873T1 (no) |
TW (1) | TWI290147B (no) |
WO (1) | WO2005005635A2 (no) |
ZA (1) | ZA200600181B (no) |
Families Citing this family (175)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ571508A (en) * | 2002-05-24 | 2010-05-28 | Schering Corp | Neutralizing human anti-IGFR antibody |
ES2527871T3 (es) * | 2003-05-01 | 2015-02-02 | Imclone Llc | Anticuerpos completamente humanos dirigidos contra el receptor del factor de crecimiento 1 similar a la insulina humana |
AR046071A1 (es) * | 2003-07-10 | 2005-11-23 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos |
US7326567B2 (en) | 2003-11-12 | 2008-02-05 | Schering Corporation | Plasmid system for multigene expression |
AR046639A1 (es) * | 2003-11-21 | 2005-12-14 | Schering Corp | Combinaciones terapeuticas de anticuerpo anti- igfr1 |
NZ552091A (en) | 2004-07-16 | 2009-09-25 | Pfizer Prod Inc | Combination treatment for non-hematologic malignancies using an anti-IGF-1R antibody |
WO2006060419A2 (en) * | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Schering Corporation | Biomarkers for pre-selection of patients for anti-igf1r therapy |
MY146381A (en) * | 2004-12-22 | 2012-08-15 | Amgen Inc | Compositions and methods relating relating to anti-igf-1 receptor antibodies |
BRPI0608777A2 (pt) * | 2005-04-15 | 2010-01-26 | Schering Corp | métodos para tratamento ou prevenção de cáncer, bem como uso de inibidores de igf1r na preparação de composições farmacêuticas |
AU2006259536A1 (en) * | 2005-06-15 | 2006-12-28 | Schering Corporation | Anti-IGF1R antibody formulations |
JP2009501141A (ja) | 2005-06-17 | 2009-01-15 | イムクローン システムズ インコーポレイテッド | 転移性骨癌の治療のための受容体アンタゴニスト |
WO2007000328A1 (en) * | 2005-06-27 | 2007-01-04 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P Angeletti Spa | Antibodies that bind to an epitope on insulin-like growth factor 1 receptor and uses thereof |
FR2888850B1 (fr) | 2005-07-22 | 2013-01-11 | Pf Medicament | Nouveaux anticorps anti-igf-ir et leurs applications |
AU2006303440B2 (en) | 2005-10-21 | 2011-09-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the recombinant expression of a polypeptide |
CN101341252B (zh) | 2005-10-28 | 2011-08-17 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 啮齿动物细胞中的蛋白质表达 |
JP5198289B2 (ja) * | 2006-02-03 | 2013-05-15 | イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 前立腺癌の治療用アジュバントとしてのigf−irアンタゴニスト |
KR101402592B1 (ko) * | 2006-03-06 | 2014-06-17 | 에스케이바이오팜 주식회사 | 피록시캄-무기물 복합체를 포함하는 경피투여 조성물 및이를 이용한 패치시스템 |
JP4902674B2 (ja) | 2006-03-09 | 2012-03-21 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 抗薬物抗体アッセイ法 |
EA200802061A1 (ru) * | 2006-03-28 | 2009-04-28 | Байоджен Айдек Эмэй Инк. | Антитело или его фрагмент, специфично связывающееся с рецептором 1 инсулиноподобного фактора роста (igf-r1) (варианты), композиция на его основе, полинуклеотид, кодирующий вариабельную область антитела (варианты), содержащие полинуклеотид композиция (варианты) и вектор, содержащая вектор клетка-хозяин (варианты), способ продуцирования антитела или его фрагмента (варианты) и способ лечения гиперпролиферативного заболевания у животного организма |
CN101410137A (zh) * | 2006-03-28 | 2009-04-15 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗-igf-1r人单克隆抗体制剂 |
US20080014203A1 (en) * | 2006-04-11 | 2008-01-17 | Silke Hansen | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
CN101460522B (zh) * | 2006-04-11 | 2014-07-23 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 糖基化抗体 |
US7846724B2 (en) | 2006-04-11 | 2010-12-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for selecting CHO cell for production of glycosylated antibodies |
WO2008031532A1 (en) | 2006-09-12 | 2008-03-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-drug antibody assay |
US8470332B2 (en) | 2006-11-22 | 2013-06-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR |
US20080226635A1 (en) * | 2006-12-22 | 2008-09-18 | Hans Koll | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
AR064464A1 (es) * | 2006-12-22 | 2009-04-01 | Genentech Inc | Anticuerpos anti - receptor del factor de crecimiento insulinico |
GB0702888D0 (en) * | 2007-02-14 | 2007-03-28 | Glaxo Group Ltd | Novel Antibodies |
CA2677901A1 (en) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the assessment of the inhibitory activity of antibodies against insulin-like growth factor i receptor |
ES2707551T3 (es) * | 2007-03-02 | 2019-04-04 | Amgen Inc | Métodos y composiciones para tratar enfermedades tumorales |
BRPI0809112A2 (pt) * | 2007-03-22 | 2014-08-26 | Imclone Llc | Formulações estáveis de anticorpos |
AU2008248780B2 (en) | 2007-05-02 | 2013-01-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for stabilizing a protein |
WO2008144345A2 (en) | 2007-05-17 | 2008-11-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Biomarkers and methods for determining sensitivity to insulin growth factor-1 receptor modulators |
PE20090368A1 (es) | 2007-06-19 | 2009-04-28 | Boehringer Ingelheim Int | Anticuerpos anti-igf |
JP5512514B2 (ja) * | 2007-06-29 | 2014-06-04 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 改善された免疫グロブリンの産生をもたらす重鎖変異体 |
CN101842117A (zh) * | 2007-08-28 | 2010-09-22 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 抗igf-1r抗体及其用途 |
JP2010538012A (ja) * | 2007-08-28 | 2010-12-09 | バイオジェン アイデック マサチューセッツ インコーポレイテッド | Igf−1rの複数のエピトープに結合する組成物 |
WO2009029795A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Amgen Inc. | Solid-state protein formulation |
CA2701032C (en) | 2007-09-27 | 2021-01-26 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
WO2009064838A1 (en) | 2007-11-15 | 2009-05-22 | Amgen, Inc. | Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stablised by antioxidants for parenteral administration |
US8227195B2 (en) | 2007-12-15 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Distinguishing assay |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
CA2709029A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-07-02 | Bianca Eser | Stability testing of antibodies |
MX2010008874A (es) | 2008-02-14 | 2010-09-22 | Bristol Myers Squibb Co | Terapeuticos dirigidos a base de proteinas manipuladas que se unen al receptor de factor de crecimiento epidermico. |
CN102099373A (zh) | 2008-05-22 | 2011-06-15 | 百时美施贵宝公司 | 基于纤连蛋白的多价支架结构域蛋白 |
KR20110047255A (ko) * | 2008-09-26 | 2011-05-06 | 로슈 글리카트 아게 | 이중특이적 항-egfr/항-igf-1r 항체 |
PE20120415A1 (es) | 2008-12-12 | 2012-05-09 | Boehringer Ingelheim Int | Anticuerpos anti-igf |
WO2010069858A1 (en) * | 2008-12-19 | 2010-06-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pharmaceutical composition |
CA2749354A1 (en) | 2009-03-30 | 2010-10-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A method for avoiding glass fogging |
US20100247484A1 (en) | 2009-03-31 | 2010-09-30 | Heinrich Barchet | Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3 |
EP2236139A1 (en) | 2009-03-31 | 2010-10-06 | F. Hoffmann-La Roche AG | Combination therapy of erlotinib with an anti-IGF-1R antibody, which does not inhibit binding of insulin to the insulin receptor |
WO2010112193A1 (en) | 2009-04-02 | 2010-10-07 | Roche Glycart Ag | Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments |
WO2010112194A1 (en) | 2009-04-02 | 2010-10-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antigen-binding polypeptides and multispecific antibodies comprising them |
PT2417156E (pt) | 2009-04-07 | 2015-04-29 | Roche Glycart Ag | Anticorpos trivalentes, biespecíficos |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
WO2010146059A2 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
SG179196A1 (en) | 2009-09-16 | 2012-04-27 | Genentech Inc | Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof |
EP2491397B1 (en) | 2009-10-19 | 2017-04-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | NON-CROSS-REACTIVE ANTI IgG ANTIBODIES |
US9662271B2 (en) | 2009-10-23 | 2017-05-30 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
AU2010311567B2 (en) | 2009-10-26 | 2015-03-26 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
EP2494070A2 (en) | 2009-10-30 | 2012-09-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for treating cancer in patients having igf-1r inhibitor resistance |
WO2011083391A2 (en) | 2010-01-05 | 2011-07-14 | Pfizer Inc. | Biomarkers for anti-igf-ir cancer therapy |
WO2011101328A2 (en) | 2010-02-18 | 2011-08-25 | Roche Glycart Ag | Treatment with a humanized igg class anti egfr antibody and an antibody against insulin like growth factor 1 receptor |
TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
CA2795549A1 (en) | 2010-04-29 | 2011-11-03 | Theradiag Sa | Methods for detecting antibodies |
EP2575935B2 (en) | 2010-06-07 | 2023-08-23 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
WO2011161119A1 (en) | 2010-06-22 | 2011-12-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof |
JP5913307B2 (ja) | 2010-07-12 | 2016-04-27 | コヴェックス・テクノロジーズ・アイルランド・リミテッド | 多機能性抗体複合体 |
CA2805564A1 (en) * | 2010-08-05 | 2012-02-09 | Stefan Jenewein | Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein |
CA3043423A1 (en) | 2010-08-17 | 2012-02-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-human igg1 antibody |
JP5758004B2 (ja) | 2010-08-24 | 2015-08-05 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | ジスルフィドによって安定化されたFv断片を含む二重特異性抗体 |
WO2012085111A1 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
US20140037642A1 (en) | 2011-02-02 | 2014-02-06 | Amgen Inc. | Methods and compositions relating to inhibition of igf-1r |
KR20130118941A (ko) | 2011-02-10 | 2013-10-30 | 로슈 글리카트 아게 | 면역치료법 |
CN103502271B (zh) | 2011-02-28 | 2016-10-26 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗原结合蛋白 |
CA2824824A1 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Monovalent antigen binding proteins |
CA2831100C (en) | 2011-03-31 | 2020-02-18 | Mark Dominis Holt | Vial adapter and system |
CA3021845C (en) | 2011-04-20 | 2022-03-29 | Amgen Inc. | Autoinjector apparatus |
AU2012244816B2 (en) | 2011-04-20 | 2015-12-10 | Roche Glycart Ag | Method and constructs for the pH dependent passage of the blood-brain-barrier |
WO2012146630A1 (en) | 2011-04-29 | 2012-11-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof |
MX2014002996A (es) | 2011-09-23 | 2014-05-28 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos anti - egfr/anti - igf-1r bisespecificos. |
EP2766497A1 (en) | 2011-10-13 | 2014-08-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for selecting and treating cancer in patients with igf-1r/ir inhibitors |
IL301153B2 (en) | 2011-10-14 | 2024-05-01 | Amgen Inc | Syringe and assembly method |
US9700619B2 (en) | 2011-11-11 | 2017-07-11 | Duke University | Combination drug therapy for the treatment of solid tumors |
MX2014009565A (es) | 2012-02-10 | 2014-11-10 | Genentech Inc | Anticuerpos monocatenarios y otros heteromultimeros. |
BR112014032193A2 (pt) | 2012-06-27 | 2017-06-27 | Hoffmann La Roche | métodos de produção de anticorpos biespecíficos e de determinação de combinação, anticorpo biespecífico, formulação e uso de anticorpo biespecífico |
WO2014001325A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof |
US8980259B2 (en) | 2012-07-20 | 2015-03-17 | Novartis Ag | Combination therapy |
JP6290209B2 (ja) | 2012-08-07 | 2018-03-07 | ロシュ グリクアート アーゲー | 低下した及び増加したエフェクター機能を有するように操作された2つの抗体を含む組成物。 |
US20150259430A1 (en) | 2012-11-05 | 2015-09-17 | Mab Discovery Gmbh | Method for the production of multispecific antibodies |
EP2727941A1 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-07 | MAB Discovery GmbH | Method for the production of multispecific antibodies |
EP4234694A3 (en) | 2012-11-21 | 2023-09-06 | Amgen Inc. | Drug delivery device |
US20140255413A1 (en) | 2013-03-07 | 2014-09-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination therapy for neoplasia treatment |
TWI580452B (zh) | 2013-03-15 | 2017-05-01 | 安美基公司 | 用於注射器之匣盒、注射器及使用包括自動注射器及匣盒之設備之方法 |
CN105377327B (zh) | 2013-03-22 | 2021-06-22 | 安姆根有限公司 | 注射器及装配方法 |
WO2014177460A1 (en) | 2013-04-29 | 2014-11-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use |
SG10201810481UA (en) | 2013-04-29 | 2018-12-28 | Hoffmann La Roche | Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases |
MX363403B (es) | 2013-07-04 | 2019-03-22 | Hoffmann La Roche | Inmumoensayo con interferencia suprimida para la deteccion de anticuerpos anti-farmacos en muestras de suero. |
JP6422956B2 (ja) | 2013-10-11 | 2018-11-14 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体 |
EP3060281B1 (en) | 2013-10-24 | 2019-01-30 | Amgen Inc. | Drug delivery system with temperature-sensitive control |
SG11201602876WA (en) | 2013-10-24 | 2016-05-30 | Amgen Inc | Injector and method of assembly |
EP3842455A1 (en) | 2014-01-15 | 2021-06-30 | F. Hoffmann-La Roche AG | Fc-region variants with improved protein a-binding |
WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
US10722655B2 (en) | 2014-05-07 | 2020-07-28 | Amgen Inc. | Autoinjector with shock reducing elements |
CN106470716B (zh) | 2014-06-03 | 2020-07-17 | 安姆根有限公司 | 可控制药物递送系统和使用方法 |
CA2957960C (en) | 2014-10-14 | 2023-08-22 | Amgen, Inc. | Drug injection device with visual and audible indicators |
JP6721590B2 (ja) | 2014-12-03 | 2020-07-15 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性抗体 |
EP3233159B1 (en) | 2014-12-19 | 2020-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
ES2898469T3 (es) | 2014-12-19 | 2022-03-07 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de medicamentos con sensor de proximidad |
JP6484345B2 (ja) | 2015-02-17 | 2019-03-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | 固定及び/または戻りが真空によって支援された薬物送達装置 |
US11806509B2 (en) | 2015-02-27 | 2023-11-07 | Amgen Inc. | Drug delivery device having a needle guard mechanism with a turnable threshold of resistance to needle guard movement |
WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
US11351308B2 (en) | 2015-12-09 | 2022-06-07 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling cap |
US11154661B2 (en) | 2016-01-06 | 2021-10-26 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
EP4035711A1 (en) | 2016-03-15 | 2022-08-03 | Amgen Inc. | Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices |
US11541168B2 (en) | 2016-04-29 | 2023-01-03 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
US11389588B2 (en) | 2016-05-02 | 2022-07-19 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
US10988284B2 (en) | 2016-05-13 | 2021-04-27 | Amgen Inc. | Vial sleeve assembly |
EP3458988B1 (en) | 2016-05-16 | 2023-10-18 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
EP3465124A1 (en) | 2016-06-03 | 2019-04-10 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
EP3478342A1 (en) | 2016-07-01 | 2019-05-08 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
US20190328965A1 (en) | 2016-08-17 | 2019-10-31 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
US20200261643A1 (en) | 2016-10-25 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | On-body injector |
AU2018210301A1 (en) | 2017-01-17 | 2019-08-01 | Amgen Inc. | Injection devices and related methods of use and assembly |
US11369736B2 (en) | 2017-02-17 | 2022-06-28 | Amgen Inc. | Cannula insertion and retraction mechanisms |
MX2019009625A (es) | 2017-02-17 | 2019-10-09 | Amgen Inc | Dispositivo de administracion de farmacos con trayectoria de flujo de fluido esteril y metodo relacionado de ensamblaje. |
WO2018165143A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-13 | Amgen Inc. | Drug delivery device with activation prevention feature |
EP3592402A1 (en) | 2017-03-07 | 2020-01-15 | Amgen Inc. | Needle insertion by overpressure |
MX2019010671A (es) | 2017-03-09 | 2019-10-21 | Amgen Inc | Mecanismo de insercion para dispositivo de administracion de farmacos. |
BR112019020053B1 (pt) | 2017-03-28 | 2023-10-10 | Amgen Inc | Máquina para acoplar uma haste de êmbolo a um conjunto de seringa e método de utilização da referida máquina |
AU2018280054B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-07-13 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
US11904143B2 (en) | 2017-06-08 | 2024-02-20 | Amgen Inc. | Torque driven drug delivery device |
CA3063920A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Amgen Inc. | Device activation impact/shock reduction |
US11395880B2 (en) | 2017-06-23 | 2022-07-26 | Amgen Inc. | Electronic drug delivery device |
MA49562A (fr) | 2017-07-14 | 2020-05-20 | Amgen Inc | Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion |
EP3655063A1 (en) | 2017-07-21 | 2020-05-27 | Amgen Inc. | Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly |
US11484648B2 (en) | 2017-07-25 | 2022-11-01 | Amgen Inc. | Drug delivery device with container access system and related method of assembly |
EP4085942A1 (en) | 2017-07-25 | 2022-11-09 | Amgen Inc. | Drug delivery device with gear module and related method of assembly |
MA49838A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Amgen Inc | Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre |
EP3668567A1 (en) | 2017-08-18 | 2020-06-24 | Amgen Inc. | Wearable injector with sterile adhesive patch |
US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
MA50611A (fr) | 2017-10-04 | 2020-08-12 | Amgen Inc | Adaptateur d'écoulement destiné à un dispositif d'administration de médicament |
WO2019070552A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE COMPRISING A LOCKOUT ASSEMBLY AND ASSOCIATED ASSEMBLY METHOD |
US11464903B2 (en) | 2017-10-09 | 2022-10-11 | Amgen Inc. | Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly |
EP3703778A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-09-09 | Amgen Inc. | System and approaches for sterilizing a drug delivery device |
US20200338271A1 (en) | 2017-11-06 | 2020-10-29 | Amgen Inc. | Fill-finish assemblies and related methods |
CA3079197A1 (en) | 2017-11-06 | 2019-05-09 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement and flow sensing |
CN116832271A (zh) | 2017-11-10 | 2023-10-03 | 安进公司 | 用于药物递送装置的柱塞 |
CN111263651B (zh) | 2017-11-16 | 2022-06-17 | 安进公司 | 具有停顿和终点检测的自动注射器 |
MX2020004996A (es) | 2017-11-16 | 2020-08-27 | Amgen Inc | Un mecanismo de pestillo de puerta para un dispositivo de administracion de farmacos. |
US11208489B2 (en) | 2018-01-24 | 2021-12-28 | Horizon Therapeutics Ireland Dac | Methods for the treatment of thyroid eye disease |
US11208490B2 (en) | 2018-03-05 | 2021-12-28 | Horizon Therapeutics Ireland Dac | Methods for the treatment of thyroid eye disease |
US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
US20210260279A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-08-26 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation |
WO2020023451A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Delivery devices for administering drugs |
MA53379A (fr) | 2018-07-24 | 2021-06-02 | Amgen Inc | Dispositifs d'administration pour l'administration de médicaments |
WO2020023336A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
US20210228797A1 (en) | 2018-07-31 | 2021-07-29 | Amgen Inc. | Fluid path assembly for a drug delivery device |
AU2019347710A1 (en) | 2018-09-24 | 2021-02-04 | Amgen Inc. | Interventional dosing systems and methods |
CA3110371A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
MA53815A (fr) | 2018-10-02 | 2022-01-05 | Amgen Inc | Systèmes d'injection pour administration de médicament avec transmission de force interne |
US20210338936A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-11-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device having dose indicator |
TW202031306A (zh) | 2018-10-15 | 2020-09-01 | 美商安進公司 | 用於藥物遞送裝置之平台組裝方法 |
US20200114082A1 (en) | 2018-10-15 | 2020-04-16 | Amgen Inc. | Drug delivery device having damping mechanism |
WO2020091981A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
WO2020091956A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
TWI831847B (zh) | 2018-11-01 | 2024-02-11 | 美商安進公司 | 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法 |
AU2020263289A1 (en) | 2019-04-24 | 2021-09-16 | Amgen Inc. | Syringe sterilization verification assemblies and methods |
US20220273887A1 (en) | 2019-08-23 | 2022-09-01 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
WO2021158823A1 (en) * | 2020-02-04 | 2021-08-12 | Hznp Limited | Methods for the treatment of scleroderma and related conditions |
EP4341161A1 (en) | 2021-05-21 | 2024-03-27 | Amgen Inc. | Method of optimizing a filling recipe for a drug container |
WO2023122714A2 (en) * | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Viridian Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treatment of thyroid eye disease |
WO2023133561A1 (en) | 2022-01-09 | 2023-07-13 | Kriya Therapeutics, Inc. | Vector constructs for delivery of nucleic acids encoding therapeutic anti-igf-1r antibodies and methods of using the same |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002053596A2 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Pfizer Inc. | Antibodies to insulin-like growth factor i receptor |
WO2003059951A2 (fr) * | 2002-01-18 | 2003-07-24 | Pierre Fabre Medicament | Anticorps anti-igf-ir et leurs applications |
WO2003100008A2 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-04 | Schering Corporation | Neutralizing human anti-igfr antibody |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
JPS6023084B2 (ja) | 1979-07-11 | 1985-06-05 | 味の素株式会社 | 代用血液 |
US4640835A (en) | 1981-10-30 | 1987-02-03 | Nippon Chemiphar Company, Ltd. | Plasminogen activator derivatives |
US4675187A (en) | 1983-05-16 | 1987-06-23 | Bristol-Myers Company | BBM-1675, a new antibiotic complex |
US4496689A (en) | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
EP0272253A4 (en) | 1986-03-07 | 1990-02-05 | Massachusetts Inst Technology | METHOD FOR IMPROVING GLYCOPROTE INSTABILITY. |
US4791192A (en) | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
US6300129B1 (en) | 1990-08-29 | 2001-10-09 | Genpharm International | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
ATE196606T1 (de) | 1992-11-13 | 2000-10-15 | Idec Pharma Corp | Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörpern, die gegen ein differenzierung-antigen gerichtet sind, dessen expression auf menschliche b lymphozyt beschränkt ist, für die behandlung von b-zell-lymphoma |
DE69408541T2 (de) | 1993-11-23 | 1998-08-06 | Genentech Inc | Kinaserezeptoraktivierungstest |
US6417330B1 (en) * | 1998-06-01 | 2002-07-09 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein variants |
DE60033530T2 (de) | 1999-08-24 | 2007-10-31 | Medarex Inc. | Humane antikörper gegen ctla-4 und deren verwendungen |
AR035885A1 (es) * | 2001-05-14 | 2004-07-21 | Novartis Ag | Derivados de 4-amino-5-fenil-7-ciclobutilpirrolo (2,3-d)pirimidina, un proceso para su preparacion, una composicion farmaceutica y el uso de dichos derivados para la preparacion de una composicion farmaceutica |
US7538195B2 (en) * | 2002-06-14 | 2009-05-26 | Immunogen Inc. | Anti-IGF-I receptor antibody |
KR20050109489A (ko) | 2003-02-13 | 2005-11-21 | 화이자 프로덕츠 인크. | 항-인슐린양 성장인자 i 수용체 항체의 용도 |
BRPI0408317A (pt) * | 2003-03-14 | 2006-03-07 | Pharmacia Corp | anticorpos do receptor de igf-i para o tratamento de cáncer |
ES2527871T3 (es) * | 2003-05-01 | 2015-02-02 | Imclone Llc | Anticuerpos completamente humanos dirigidos contra el receptor del factor de crecimiento 1 similar a la insulina humana |
AR046071A1 (es) * | 2003-07-10 | 2005-11-23 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos |
-
2004
- 2004-07-08 AR ARP040102423A patent/AR046071A1/es active IP Right Grant
- 2004-07-08 US US10/886,838 patent/US7579157B2/en active Active
- 2004-07-09 CN CNB200480019796XA patent/CN100453645C/zh active Active
- 2004-07-09 AU AU2004256215A patent/AU2004256215B2/en active Active
- 2004-07-09 AT AT04763146T patent/ATE413454T1/de active
- 2004-07-09 EP EP10167052A patent/EP2243835A3/en not_active Withdrawn
- 2004-07-09 PT PT08007731T patent/PT1959014E/pt unknown
- 2004-07-09 AT AT08007731T patent/ATE502959T1/de active
- 2004-07-09 CA CA2532173A patent/CA2532173C/en active Active
- 2004-07-09 NZ NZ544455A patent/NZ544455A/en active IP Right Revival
- 2004-07-09 EP EP08007731A patent/EP1959014B9/en active Active
- 2004-07-09 MX MXPA06000270A patent/MXPA06000270A/es active IP Right Grant
- 2004-07-09 DK DK04763146T patent/DK1646720T3/da active
- 2004-07-09 DE DE602004017614T patent/DE602004017614D1/de active Active
- 2004-07-09 ES ES08007731T patent/ES2360454T3/es active Active
- 2004-07-09 ES ES10180710.5T patent/ES2534638T3/es active Active
- 2004-07-09 RU RU2006103854/13A patent/RU2363706C2/ru active
- 2004-07-09 BR BRPI0412478A patent/BRPI0412478B8/pt active IP Right Grant
- 2004-07-09 PT PT101807105T patent/PT2272873E/pt unknown
- 2004-07-09 SG SG200700154A patent/SG129437A1/en unknown
- 2004-07-09 PL PL04763146T patent/PL1646720T3/pl unknown
- 2004-07-09 ES ES04763146T patent/ES2317020T3/es active Active
- 2004-07-09 KR KR1020067000673A patent/KR100795745B1/ko active IP Right Grant
- 2004-07-09 DE DE602004031988T patent/DE602004031988D1/de active Active
- 2004-07-09 JP JP2006518159A patent/JP4276262B2/ja active Active
- 2004-07-09 WO PCT/EP2004/007562 patent/WO2005005635A2/en active Application Filing
- 2004-07-09 PL PL08007731T patent/PL1959014T3/pl unknown
- 2004-07-09 DK DK08007731.6T patent/DK1959014T5/da active
- 2004-07-09 MY MYPI20042749A patent/MY140209A/en unknown
- 2004-07-09 SI SI200432234T patent/SI2272873T1/sl unknown
- 2004-07-09 EP EP04763146A patent/EP1646720B1/en active Active
- 2004-07-09 DK DK10180710.5T patent/DK2272873T3/en active
- 2004-07-09 PT PT04763146T patent/PT1646720E/pt unknown
- 2004-07-09 EP EP10180710.5A patent/EP2272873B1/en active Active
- 2004-07-09 PL PL10180710T patent/PL2272873T3/pl unknown
- 2004-07-12 TW TW093120782A patent/TWI290147B/zh active
-
2005
- 2005-12-29 IL IL172925A patent/IL172925A/en active IP Right Grant
- 2005-12-30 NO NO20056246A patent/NO339935B1/no unknown
-
2006
- 2006-01-09 ZA ZA200600181A patent/ZA200600181B/en unknown
- 2006-01-13 CO CO06002778A patent/CO5640053A1/es not_active Application Discontinuation
-
2007
- 2007-02-16 HK HK07101897.5A patent/HK1094713A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-10-09 US US11/869,250 patent/US7572897B2/en active Active
-
2008
- 2008-07-02 RU RU2008126743/13A patent/RU2008126743A/ru not_active Application Discontinuation
- 2008-07-03 AU AU2008202949A patent/AU2008202949B2/en active Active
- 2008-08-26 JP JP2008216555A patent/JP4464450B2/ja active Active
- 2008-08-29 AU AU2008207635A patent/AU2008207635B2/en active Active
-
2009
- 2009-07-17 US US12/504,717 patent/US20090275126A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-04-27 CY CY20151100386T patent/CY1116227T1/el unknown
-
2016
- 2016-09-02 NO NO20161389A patent/NO340438B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002053596A2 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Pfizer Inc. | Antibodies to insulin-like growth factor i receptor |
WO2003059951A2 (fr) * | 2002-01-18 | 2003-07-24 | Pierre Fabre Medicament | Anticorps anti-igf-ir et leurs applications |
WO2003100008A2 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-04 | Schering Corporation | Neutralizing human anti-igfr antibody |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Li SL. ET AL. Single-chain antibodies against human insulin-like growth factor I receptor: expression, purification, and effect on tumor growth. Cancer Immunol Immunother. 2000, vol. 49, no. 4-5, side 243-252. , Dated: 01.01.0001 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO340438B1 (no) | Antistoffer som binder til human IGF-IR, hybridomcellelinjer og nukleinsyrer, farmasøytisk blanding omfattende samme, anvendelse av samme for fremstilling av farmasøytisk blanding, fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk preparat, og anvendelser derav | |
JP4555385B2 (ja) | インスリン様成長因子i受容体に対する抗体及びその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |