NO330391B1 - Immunoglobulin og isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region - Google Patents
Immunoglobulin og isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region Download PDFInfo
- Publication number
- NO330391B1 NO330391B1 NO20014524A NO20014524A NO330391B1 NO 330391 B1 NO330391 B1 NO 330391B1 NO 20014524 A NO20014524 A NO 20014524A NO 20014524 A NO20014524 A NO 20014524A NO 330391 B1 NO330391 B1 NO 330391B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antibody
- immunoglobulin
- human
- sequences
- cdr
- Prior art date
Links
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims description 60
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims description 60
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 title claims description 54
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 57
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 57
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 description 25
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 101000960954 Homo sapiens Interleukin-18 Proteins 0.000 description 18
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 18
- 102000043959 human IL18 Human genes 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 4
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 102100035010 Interleukin-18 receptor accessory protein Human genes 0.000 description 3
- 101710138729 Interleukin-18 receptor accessory protein Proteins 0.000 description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 3
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000006940 Interleukin-1 Receptor-Associated Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010072621 Interleukin-1 Receptor-Associated Kinases Proteins 0.000 description 2
- 108010028784 Interleukin-18 Receptor alpha Subunit Proteins 0.000 description 2
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100039340 Interleukin-18 receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010055717 JNK Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 2
- 102000019145 JUN kinase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- JPMIIZHYYWMHDT-UHFFFAOYSA-N octhilinone Chemical compound CCCCCCCCN1SC=CC1=O JPMIIZHYYWMHDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100025597 Caspase-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710090338 Caspase-4 Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N Diethylenetriamine Chemical compound NCCNCCN RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000829111 Human polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100026261 Metalloproteinase inhibitor 3 Human genes 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000007014 Retinitis pigmentosa Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 108010031429 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3 Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003172 anti-dna Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000013187 longer-term treatment Methods 0.000 description 1
- 150000002678 macrocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- -1 promoters Proteins 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
Description
OPPFINNELSESOMRÅDE
Foreliggende oppfinnelse vedrører immunoglobulin og isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region som kan være anvendelige i behandling av IL-18 medierte forstyrrelser generelt.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Human interleukin-18 er et nylig identifisert cytokin som er syntetisert som et biologisk inaktivt 193 aminosyrers forløperprotein (Ushio et al., J. Immunol. 156:4274, 1996). Spaltning avforløperproteinet, foreksempel med caspase-1 eller caspase-4, frigir det 156 aminosyrers modne protein (Gu et al., Science 275:206, 1997; Ghayur et al., Nature 386:619, 1997), som oppviser biologiske virkninger som inkluderer kostimuleringen av T-celleproliferasjon, forsterkningen av NK-celle-cytotoksisitet, induksjon av IFN-y-produksjon i T-celler og NK-celler og potenseringen av T-hjelper type 1 (Th1) differensiering (Okamura et al., Nature, 378:88, 1995; Ushio et al., J. Immunol. 156:4274, 1996; Micallef et al., Eur. J. Immunol. 26:1647, 1996; Kohno et al., J. Immunol. 158:1541, 1997; Zhang et al., Infect. Immunol. 65:3594, 1997; Robinson et al., Immunity 7:571, 1997). I tillegg er IL-18 en effektiv inducer av humane monocytt proinflammatoriske mediatorer, inklusivt IL-8, tumornekrosefaktor-a (TNF-a) og prostaglandin E2(PGE2) (Ushio, S. et al., J. Immunol 156:4274-4279, 1996; Puren, A.J. et al., J. Clin. Invest. 10:711-721, 1997; Podolin et al., J. Immunol. undertrykking, 1999).
Det tidligere klonede IL-1 reseptor-relaterte protein (IL-1Rrp) (Parnet et al., J. Biol. Chem. 271:3967, 1996) ble nylig identifisert som en subenhet av IL-18-reseptoren (Kd=18 nM) (Torigoe et al., J. Biol. Chem. 272:25737, 1997). En andre subenhet av IL-18-reseptoren oppviser homologi med IL-1 reseptor hjelperproteinet og har fått betegnelsen AcPL (for accessory protein-like). Ekspresjon av både IL-1 Rrp og AcPL fordres for IL-18-indusert NF-kB og JNK-aktivering (Born et al., J. Biol. Chem. 273:29445, 1998). I tillegg til NF-kB og JNK, signaliserer IL-18 gjennom IL-1 reseptor-assosiert kinase (IRAK), p561ck (LCK) og mitogen-aktivert proteinkinase (MAPK) (Micallef et al., Eur. J. Immunol. 26:1647, 1996; Matsumoto et al., Biophys. Biochem. Res. Comm. 234:454, 1997; Tsuji-Takayama et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 237:126, 1997).
Th1-cellene som produserer proinflammatoriske cytokiner, så som IFN-y, IL-2 og TNF-p (Mosmann et al., J. Immunol. 136:2348, 1986), har vært antatt implisert i mediering av mange autoimmunsykdommer, inklusivt multippel sklerose (MS), reumatoid artritt (RA), type 1, eller insulin-avhengig, diabetes (IDDM), inflammatorisk tarmsykdom (IBD) og psoriasis (Mosmann & Sad, Immunol. Today 17:138, 1996). Antagonisme av et Th1-fremmende cytokin som IL-18, vil derfor kunne forventes å inhibere sykdomsutvikling. IL-18-spesifikke mAbs ville kunne benyttes som en antagonist.
Hvilken rolle IL-18 har ved utviklingen av autoimmunsykdommer har vært vist. Det har således vært vist at IL-18-ekspresjon er signifikant forhøyet i pankreas og milt til NOD (nonobese diabetic) mus umiddelbart før sykdomsinntreden (Rothe et al., J. Clin. Invest. 99:469, 1997). Tilsvarende har IL-18-nivåer vært vist å være markert forhøyet i synovialvæsken til reumatoide artrittpasienter (Kawashima et al., Arthritis and Rheumatism 39:598, 1996). Det har dessuten vært vist at IL-18-administrering øker det kliniske alvor ved murin eksperimentell allergisk encefalomyelitt (EAE), en Th 1-mediert autoimmunsykdom som er en modell for multippel sklerose. I tillegg har det vært vist at nøytralisering av anti-rotte IL-18-antiserum forhindrer utviklingen av EAE i Lewis hunnrotter (Wildbaum et al., J. Immunol. 161:6368, 1998). IL-18 er følgelig et ønskelig mål for utviklingen av et nytt autoimmunitets-terapeutikum.
Taniguchi et al., J. Immunol. Methods 206:107, beskriver syv mus- og seks rotte-antihumane IL-18 mAbs, som binder til fire distinkte antigene seter. Ett av de murine mAbs (nr. 125-2H) og de seks rotte mAbs inhiberer IL-18-indusert IFN-y-produksjon i KG-1-celler, hvor rotte mAbs oppviser nøytraliserende virkninger ti ganger lavere enn de for nr. 125-2H. Som demonstrert gjennom western blott-analyse er tre av de murine mAbs, men ingen av rotte mAbs, sterkt reaktive overfor membranbundet human IL-18.1 tillegg beskrives en ELISA (enzyme-linked immuno-sorbent assay) for å påvise human IL-18, ved å benytte nr. 125-2H og et rotte mAb. Påvisningsgrensen for denne ELISA er 10 pg/mL.
Europeisk patentsøknad EP 0 712 931 omtaler to mus anti-humane IL-
18 mAbs, H1 (lgG1) og H2 (IgM). Som demonstrert ved western blott-analyse reagerer begge mAbs med membranbundet human IL-18, men ikke med membranbundet human IL-12. H1 benyttes i henhold til en immunaffinitets- kromatografimetode for å rense human IL-18, og i en ELISA for å måle human IL-18. H2 benyttes i en radioimmunoassay for å måle human IL-18.
Taniguchi M. et al. beskriver fremstilling av høyaffinitet nøytraliserende gnagerantistoffer mot humant IL-18.
Rekvig O.P. et al. beskriver molekylær analyse av anti-DNA antistoffer indusert av polyomavirus BK i BALB/c mus.
Bonilla F.A. et al. beskriver Vkgenbruk, idiotype ekspresjon og antigen binding.
EP 0528767 A1 beskriver humane /mus kimære og humaniserte monoklonale antistoffer som gjenkjenner difukosyl Lewis blodgruppe-antigenene Y-6 og B-7-2.
Jones S. E. et al. beskriver at ekspresjon av TIMP3 mRNA er forhøyet i netthinner påvirket av simplex retinitt pigmentosa.
EP 0974600 A2 beskriver et nøytraliserende gnager anti-IL-18 antistoff.
Nøytraliserende IL-18-antistoff kan eventuelt være egnet til å lindre autoimmunsykdommer og relaterte symptomer hos mennesker.
SAMMENFATNING AV OPPFINNELSEN
I henhold til et første aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse immunoglobulin, kjennetegnet ves at det omfatter en lettkjede
komplementaritetsbestemmende region (CDR), idet aminosyresekvensen derav er valgt fra gruppen: (a) SEKV ID NR: 4;
(b) SEKV ID NR: 6; og
(c) SEKV ID NR: 8.
og en tungkjede (CDR), idet aminosyresekvensen derav er valgt fra gruppen:
(a) SEKV ID NR: 12;
(b) SEKV ID NR: 14; og
(c) SEKV ID NR: 16.
I henhold til et relatert aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region (CDR), kjennetegnet ved at det er ifølge krav 1.
Andre aspekter og fordeler ved foreliggende oppfinnelse er beskrevet ytterligere i den detaljerte beskrivelse og de foretrukne utførelsesformer derav.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE
Fig. 1 [SEKV. ID. NR:1 og 2] illustrerer den lette kjedes variable region for rotte-antistoffet 2C10. Fig. 1 innbefatter sekvensdata for begge kjeder. De innrammede områdene indikerer CDR [SEKV. ID. NR:3-8]. Det uthevede området indikerer den degenererte primersekvens. Fig. 2 [SEKV. ID. NR:9 og 10] illustrerer den tunge kjedes variable region for rotte-antistoffet 2C10. Fig. 2 innbefatter sekvensdata for begge kjeder. De innrammede områdene indikerer CDR [SEKV. ID. NR:11-16]. Det uthevede området indikerer den degenererte primersekvens. Fig. 3 [SEKV. ID. NR:17 og 18] illustrerer den lette kjedes variable region for det murine antistoff 13G9. Fig. 3 inkluderer sekvensdata for begge kjeder. De innrammede områdene indikerer CDR [SEKV. ID. NR.19-24]. Det uthevede området indikerer den degenererte primersekvens. Fig. 4 [SEKV. ID. NR:25 og 26] illustrerer den tunge kjedes variable region for det murine antistoff 13G9. Fig. 4 inkluderer sekvensdata for begge kjeder. De innrammede områdene indikerer CDR [SEKV. ID. NR:27-32]. Det uthevede området indikerer den degenererte primersekvens. Fig. 5 [SEKV. ID. NR:33 og 34] illustrerer den lette kjedes variable region for rotte-antistoffet 14B7. Fig. 5 inkluderer sekvensdata for begge kjeder. De innrammede områdene indikerer CDR [SEKV. ID. NR:35-40]. Det uthevede området indikerer den degenererte primersekvens. Fig. 6 [SEKV. ID. NR:41 og 42] illustrerer den tunge kjedes variable region for rotte-antistoffet 14B7. Fig. 6 inkluderer sekvensdata for begge kjeder. De innrammede områdene indikerer CDR [SEKV. ID. NR:43-48]. Det uthevede området indikerer den degenererte primersekvens.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer følgelig immunoglobulin som omfatter en lettkjede komplementaritetsbestemmende region (CDR), idet aminosyresekvensen derav er valgt fra gruppen: (a) SEKV ID NR: 4;
(b) SEKV ID NR: 6; og
(c) SEKV ID NR: 8.
og en tungkjede (CDR), idet aminosyresekvensen derav er valgt fra gruppen:
(a) SEKV ID NR: 12;
(b) SEKV ID NR: 14; og
(c) SEKV ID NR: 16.
Det er videre beskrevet isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region (CDR) ifølge krav 1.
Antistoffene heri kan bli fremstillet ved konvensjonell hybridomteknikk for å utvikle nye nøytraliserende antistoffer. Disse produktene kan anvendes i terapeutiske og farmasøytiske blandinger for behandling av IL-18-medierte forstyrrelser, f.eks. autoimmunsykdommer, inklusivt multippel sklerose (MS), reumatoid artritt (RA), type 1, eller insulin-avhengig, diabetes (IDDM), inflammatorisk tarmsykdom (IBD) og psoriasis (Mosmann & Sad, Immunol. Today 17:138, 1996). Disse produktene er også egnet ved diagnostisering av IL-18-medierte tilstander ved måling (ELISA) av endogene IL-18-nivåer i mennesker eller IL-18 frigitt ex wVofra aktiverte celler.
I. Definisjoner
«Endret antistoff» står for et protein som kodes av en endret immunglobulin-kodende region, som kan oppnås ved ekspresjon i en valgt vertscelle. Slike endrede antistoffer er manipulerte antistoffer (f.eks. kimære eller humaniserte antistoffer) eller antistoff-fragmenter som mangler hele eller en del av et immunglobulins konstante region, f.eks. Fv, Fab eller F(ab')2og lignende.
«Endret immunglobulin-kodende region» refererer til en nukleinsyresekvens som koder for et endret antistoff. Når det endrede antistoff er et CDR-podet eller humanisert antistoff, er de sekvensene som koder for de hypervariable områdene (CDR) fra et ikke-humant immunglobulin, innskutt i en første immunglobulinpartner
som omfatter humane variable rammeverksekvenser. Eventuelt kobles den første immunglobulinpartner operativt til en andre immunglobulinpartner.
«Første immunglobulinpartner» refererer seg til en nukleinsyresekvens som koder for et humant rammeverk eller en human immunglobulin variabel region, hvori de native (eller naturlig forekommende) CDR-kodende regioner er erstattet med de CDR-kodende regioner av et donor-antistoff. Den humane variable region kan være et immunglobulin tung kjede, en lett kjede (eller begge kjedene), en analog eller funksjonelle fragmenter derav. Slike CDR-regioner, lokalisert innenfor den variable region av antistoffer (immunglobuliner) kan bestemmes etter kjente fremgangsmåter. For eksempel omtaler Kabat et al., (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4. utg. U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)) regler for lokalisering av CDR. I tillegg er det kjent dataprogrammer som er egnet for identifisering av CDR-regioner/strukturer.
«Nøytralisering» refererer seg til et antistoff som inhiberer IL-18-aktivitet ved å forhindre bindingen av human IL-18 til dets spesifikke reseptor eller ved å inhibere signaliseringen av IL-18 gjennom dets reseptor dersom binding skulle inntre. Et mAb nøytraliserer dersom det er 90% effektivt, fortrinnsvis 95% effektivt og mest fore-trukket 100% effektivt, til å inhibere IL-18-aktivitet målt gjennom IL-18-nøytralisasjonstesten, se Eksempel 1 og Tabell I.
Betegnelsen «høyaffinitet» refererer til et antistoff som har en bindingsaffinitet som kjennetegnes av en Kdsom er lik eller mindre enn 3,9 x 10"<11>M for human IL-18, bestemt ved optisk biosensor-analyse (se Eksempel 2 og Tabell I).
Med «bindingsspesifisitet for human IL-18» menes en høyere affinitet for human IL-18 enn for murint eller annet IL-18.
«Andre immunglobulinpartner» refererer seg til en annen nukleotidsekvens som koder for et protein eller peptid som den første immunglobulinpartner er fusjonert med i ramme eller ved hjelp av en eventuelt konvensjonell linkersekvens (dvs. operativt koblet). Fortrinnsvis er det et immunglobulingen. Den andre immunglobulinpartner kan omfatte en nukleinsyresekvens som koder for hele den konstante region for samme (dvs. homolog - de første og andre endrede antistoffer er avledet fra samme kilde) eller et ytterligere (dvs. heterologt) antistoff av interesse. Det kan være en immunglobulin tung kjede eller lett kjede (eller begge kjedene som del av et enkelt polypeptid). Den andre immunglobulinpartner kan utgjøre del av et immunglobulins konstante region, slik som det finnes i en Fab eller F(ab')2(dvs. en
diskret del av en passende human konstant region eller rammeverkregion). En slik andre immunglobulinpartner kan også omfatte en sekvens som koder for vesentlig membranprotein eksponert på den ytre overflate av en vertscelle, f.eks. som del av et fag-displaybibliotek, eller en sekvens som koder for et protein for analytisk eller diagnostisk påvisning, f.eks. pepperrot-peroksydase, p-galaktosidase, etc.
Betegnelsene Fv, Fc, Fd, Fab eller F(ab')2benyttes med deres vanlige betydninger (se f.eks. Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)).
I denne sammenheng beskriver et «manipulert antistoff» en type endret antistoff, dvs. et full-lengdes syntetisk antistoff (f.eks. et kimært eller humanisert antistoff i motsetning til et antistoff-fragment) hvor en del av den lette og/eller tunge kjedes variable domene av et valgt akseptor-antistoff er erstattet med analoge deler fra ett eller flere donor-antistoffer som har spesifisitet for den valgte epitop. For eksempel kan slike molekyler inkludere antistoffer som kjennetegnes ved en humanisert tung kjede assosiert med en umodifisert lett kjede (eller kimær lett kjede) eller vice versa. Manipulerte antistoffer kan også være kjennetegnet ved endring av de nukleinsyresekvenser som koder for rammeverkregionene av akseptor-antistoffets lette og/eller tunge variable domene, for å bibeholde donor-antistoff bindingsspesifisitet. Disse antistoffene kan omfatte erstatning av én eller flere CDR (fortrinnsvis alle) fra akseptor-antistoffet med CDR fra et her beskrevet donor-antistoff.
Et «kimært antistoff» refererer seg til en type manipulert antistoff som inneholder en naturlig forekommende variabel region (lett kjede og tunge kjeder) avledet fra et donor-antistoff forbundet med lett og tung kjede konstante regioner avledet fra et akseptor-antistoff.
Et «humanisert antistoff» refererer seg til en type manipulert antistoff som har dets CDR avledet fra et ikke-humant donor-immunglobulin hvor de øvrige immunglobulin-avledede deler av molekylet er avledet fra ett (eller flere) humane immunglobuliner. I tillegg kan rammeverk-understøttende rester være endret for å opprettholde bindingsaffinitet (se f.eks. Queen et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)).
Betegnelsen «donor-antistoff» refererer seg til et antistoff (monoklonalt eller rekombinant) som bidrar til nukleinsyresekvensene av dets variable regioner, CDR eller andre funksjonelle fragmenter eller analoger derav, til en første immunglobulin partner, for å gi det endrede immunglobulins kodende region og resultere i uttrykt endret antistoff med den antigene spesifisitet og nøytraliserende aktivitet som er karakteristisk for donor-antistoffet. Et donor-antistoff kan være et ikke-humant nøytraliserende monoklonalt antistoff (dvs. rotte) betegnet 2C10. Antistoffet 2C10 er definert som et høyaffinitets, humant-IL-18 spesifikt (dvs. gjenkjenner ikke murint IL-18) nøytraliserende antistoff av isotype lgGi.Ksom har den variable lette kjede DNA og aminosyresekvensene henholdsvis SEKV. ID. NR:1 og 2, den variable tunge kjede DNA og aminosyresekvensene ifølge SEKV. ID. NR:9 og 10 på en egnet murin IgG konstant region.
Betegnelsen «akseptor-antistoff» refererer seg til et antistoff (monoklonalt eller rekombinant) heterologt til donor-antistoffet, som bidrar med alle (eller en hvilken som helst del, men fortrinnsvis alle) de nukleinsyresekvenser som koder for dets tunge og/eller lette kjedes rammeverkregioner og/eller dets tunge og/eller lette kjedes konstante regioner, til den første immunglobulinpartner. Fortrinnsvis er et humant antistoff akseptor-antistoffet.
«CDR» er definert som et antistoffs hypervariable region-aminosyresekvenser, som er de hypervariable regioner av immunglobulin tunge og lette kjeder. Se f.eks. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4. utg. U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987). Det foreligger tre tunge kjede og tre lett kjede CDR (eller CDR-regioner) i den variable del av et immunglobulin. «CDR» refererer seg således her til alle tre tunge kjede CDR, eller alle tre lette kjede CDR (eller eventuelt både alle tunge og alle lette kjede CDR).
CDR utgjør størstedelen av kontaktrester for bindingen av antistoff til antigenet eller epitopen. CDR av interesse i denne sammenheng er avledet fra donor-antistoffets variable tunge og lette kjedesekvenser og innbefatter analoger av de naturlig forekommende CDR, analoger som også deler eller bibeholder den samme antigenbindingsspesifisitet og/eller nøytraliserende evne som det donor-antistoff som de er avledet fra.
Med deling av den antigenbindende spesifisitet eller nøytraliserende evne, menes for eksempel at selv om mAb 2C10 kan karakteriseres ved en viss grad av antigenaffinitet, kan en CDR som kodes av en nukleinsyresekvens av 2C10 i en passende strukturell omgivelse, ha en lavere, eller høyere, affinitet. Det forventes at CDR av 2C10 i slike omgivelser like fullt vil gjenkjenne de samme epitoper som 2C10. Eksempler på lett kjede CDR av 2C10 er
SEKV. ID. NR:3;
SEKV. ID. NR:5;
SEKV. ID. NR:7;
og eksempler på tung kjede CDR av 2C10 er
SEKV. ID. NR:11;
SEKV. ID. NR:13;
og SEKV ID. NR:15.
Et «funksjonelt fragment» er en partiell tung eller lett kjede variabel sekvens (f.eks. mindre delesjoner i amino- eller karboksyenden av immunglobulinets variable region) som opprettholder den samme antigenbindende spesifisitet og/eller nøytraliserende evne som det antistoff som fragmentet er avledet fra.
En «analog» er en aminosyresekvens som er modifisert ved minst én aminosyre, hvor nevnte modifikasjon kan være kjemisk eller en substitusjon eller en omleiring av noen få aminosyrer (dvs. ikke mer enn 10), og hvor modifikasjonen lar aminosyresekvensen bibeholde de biologiske kjennetegn, f.eks. antigenspesifisitet og høyaffinitet, til den umodifiserte sekvens. For eksempel kan det konstrueres (nøytrale) mutasjoner, via substitusjoner, når det opprettes visse endonuklease-restriksjonsseter inn i eller omkring CDR-kodende regioner.
Analoger kan også fremstå som allele variasjoner. En «allel variasjon eller modifikasjon» er en endring i den nukleinsyresekvens som koder for aminosyre- eller peptidsekvensene ifølge oppfinnelsen. Slike variasjoner eller modifikasjoner kan skyldes degenerertheten i den genetiske kode eller med hensikt være manipulert for å gi ønskede karakteristika. Disse variasjonene eller modifikasjonene kan eventuelt resultere i endringer i en hvilken som helst kodet aminosyresekvens.
Betegnelsen «effektormidler» refererer seg til bærermolekyler som ikke er protein og som endrede antistoffer, og/eller naturlige eller syntetiske lette eller tunge kjeder av donor-antistoffet, eller andre fragmenter av donor-antistoffet, kan være assosiert til på konvensjonell måte. Slike ikke-proteinbærere kan omfatte konvensjonelle bærere benyttet innen det diagnostiske felt, f.eks. polystyren eller andre plastkuler, polysakkarider, f.eks. som benyttet i BIAcore [Pharmacia] systemet, eller andre ikke-proteinsubstanser egnet på det medisinske felt og som trygt kan administreres til mennesker og dyr. Andre effektormidler kan innbefatte en makrocyklus, for gelatering av et tungmetallatom eller radioisotoper. Slike effektor midler, f.eks. polyetylenglykol, kan også egne seg til å øke halveringstiden av de endrede antistoffene.
II. Høyaffinitet IL-18 monoklonale antistoffer
For bruk ved konstrueringen av antistoffene kan endrede antistoffer og fragmenter, en art utenom mennesket (for eksempel storfe, sau, ape, høns, gnager (f.eks. mus og rotte) etc.) benyttes til å utvikle et ønsket immunglobulin etter presentasjon for humant IL-18 eller en peptidepitop fra dette. Konvensjonelle hybridomteknikker benyttes for å oppnå en hybridomcellelinje som utskiller et ikke-humant mAb til IL-18. Slike hybridomer underkastes deretter screening med henblikk på binding ved å benytte IL-18 belagt i 96-brønns plater, som beskrevet under avsnittet Eksempler, eller alternativt med biotinylert IL-18 bundet til en plate dekket med streptavidin.
Et eksempel på et høyaffinitet, nøytraliserende mAb er mAb 2C10, et rotte-antistoff som kan benyttes for utviklingen av et kimært eller humanisert antistoff, mer detaljert beskrevet i eksempler nedenfor. Dette 2C10 mAb kjennetegnes ved en antigenbindende sepsifisitet for humant IL-18 på ca. Kd3,9 x 10"<11>M. Dette mAb kjennetegnes ved å være isotype IgGi.K.
Et annet donor-antistoff er det murine mAb 13G9. Dette mAb kjennetegnes ved å være isotype IgGi.K. Dette mAb har en dissosiasjonskonstant for IL-18 på 12 x 10"<9>M.
Nok et annet donor-antistoff er rotte mAb 14B7. Dette mAb kjennetegnes ved å ha en dissosiasjonskonstant for IL-18 på ca. 1,5 x 10"<10>M. 14B7 kjennetegnes også ved å være isotype IgGiK-
Passende høyaffinitet IL-18-antistoffer som kjennetegnes ved en dissosiasjonskonstant som er lik eller mindre enn ca. 3,9 x 10"<11>M for humant IL-18 og tilsvarende anti-IL-18 CDR kan benyttes.
III. Antistoff-fragmenter
Fab-fragmenter eller F(ab')2-fragmenter avledet fra mAbs rettet mot humant IL-18 er anvendelige som beskyttelsesmidler in vivo mot IL-18 og Th1-medierte tilstander, eller in vitro som del av et IL-18 diagnostisk middel. Et Fab-fragment inneholder hele den lette kjede og den aminoterminale del av den tunge kjede; og et F(ab')2-fragment er det fragment som dannes av to Fab-fragmenter bundet med disulfidbindinger. mAbs 13G9, 2C10, 14B7 og andre IL-18-bindende antistoffer med lignende høy affinitet, utgjør en kilde av Fab-fragmenter og F(ab')2-fragmenter som kan oppnås på konvensjonell måte, f.eks. spaltning av mAb med de riktige proteolytiske enzymene, papain og/eller pepsin, eller ved rekombinante metoder. Disse Fab- og F(ab')2-fragmentene er i seg selv anvendelige som terapeutiske profylaktiske eller diagnostiske midler og som donorer av sekvenser som innbefatter de variable regionene og CDR-sekvensene som er egnet til dannelse av de rekombinante eller humaniserte antistoff.
Fab- og F(ab')2-fragmentene kan konstrueres via et kombinatorisk fag-bibliotek (se f.eks. Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12:433-455 (1994)) eller via immunglobulin-kjede-stokking (se f.eks. Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783
(1992), hvor Fd eller Vh immunglobulinet fra et valgt antistoff (f.eks. 13G9) får binde seg med et repertoar av lett kjede immunglobuliner, Vl(eller VK) under dannelse av nye Fab. Omvendt kan lett kjede immunglobulinet fra et valgt antistoff få binde seg med et repertoar av tung kjede immunglobuliner, Vh (eller Fd) for å danne nye Fab.
IV. An ti-IL-18 aminosyre- og nukleotidsekvenser av interesse
mAb 2C10 eller andre ovenfor beskrevne antistoffer, kan bidra med sekvenser som f.eks. variable tung- og/eller lett kjede peptidsekvenser, rammeverksekvenser, CDR-sekvenser, funksjonelle fragmenter og analoger derav, og de nukleinsyresekvenser som koder for disse, som er egnet til utvikling og oppnåelse av forskjellige endrede antistoffer som kjennetegnes ved donor-antistoffets antigenbindende spesifisitet.
Nukleinsyresekvensene heri som koder for variabel lett kjede og tung kjede peptidsekvensene er også egnet for mutagen innføring av spesifikke endringer i de nukleinsyresekvensene som koder for CDR eller rammeverkregioner, og for inkorporering av den resulterende modifiserte sekvens eller
fusjonsnukleinsyresekvens i et plasmid for ekspresjon.
Ved å ta hensyn til den genetiske kodes degenererthet, kan det konstrueres forskjellige kodende sekvenser som koder for den variable tunge og lette kjedes aminosyresekvenser, og CDR-sekvenser så vel som funksjonelle fragmenter og analoger derav som har antigenspesifisiteten av donor-antistoffet tilfelles. De isolerte nukleinsyresekvensene som koder for den variable kjedes peptidsekvenser eller CDR, kan benyttes til å fremstille endrede antistoffer, f.eks. kimære eller humaniserte antistoffer, eller andre manipulerte antistoffer, når de operativt kombineres med en andre immunglobulinpartner.
Egnede DNA-sekvenser omfatter de sekvensene som hybridiserer under stringente hybridiseringsbetingelser [se T. Maniatis et al., Molecular Cloning (A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Laboratory (1982), side 387 til 389] til DNA-sekvensene. Et eksempel på en slik stringent hybridiseringsbetingelse er hybridisering ved 4XSSC ved 65°C, etterfulgt av vask i 0.1XSSC ved 65°C i 1 time. Et annet eksempel på stringente hybridiseringsbetingelser er 50% formamid, 4XSSC ved 42°C. Fortrinnsvis er disse hybridiserende DNA-sekvensene minst 18 nukleotider langt, dvs. omtrent størrelsen av en CDR.
V. Endrede immunglobulinmolekyler og endrede antistoffer
Endrede immunglobulinmolekyler kan kode for endrede antistoffer som omfatter manipulerte antistoffer, så som kimære antistoffer og humaniserte antistoffer. En endret immunglobulin-kodende region inneholder CDR-kodende regioner som koder for peptider med antigenspesifisiteten til et IL-18-antistoff, fortrinnsvis et høyaffinitets-antistoff, innskutt i en første immunglobulinpartner (et humant rammeverk eller human immunglobulin variabel region).
Den første immunglobulinpartner er operativt koblet til en andre immunglobulinpartner. Den andre immunglobulinpartner er definert ovenfor og kan innbefatte en sekvens som koder for en andre antistoff reg ion av interesse, for eksempel en Fc-region. De andre immunglobulinpartnere kan også omfatte sekvenser som koder for et annet immunglobulin som den lette eller tunge kjedes konstante region er fusjonert til i ramme eller ved hjelp av en linkersekvens. Manipulerte antistoffer rettet mot funksjonelle fragmenter eller analoger av IL-18 kan konstrueres for å frembringe forbedret binding med det samme antistoff.
Den andre immunglobulinpartneren kan også være forbundet med de ovenfor angitte effektormidler, inklusivt bærermolekyler som ikke er proteiner, som den andre immunglobulinpartner operativt kan kobles til på konvensjonell måte.
Fusjon eller sammenkobling mellom de andre immunglobulinpartnere, f.eks. antistoffsekvensene, og effektormidlet kan skje på en hvilken som helst egnet måte, f.eks. ved konvensjonell kovalent binding eller ionebinding, proteinfusjoner eller hetero-bifunksjonelle kryssbindende midler, f.eks. karbodiimid, glutaraldehyd og lignende. Slike teknikker er kjent på området og beskrevet i vanlige kjemi- og biokjemilitteratur. Dessuten kan det inn i den endrede immunglobulins kodende region også konstrueres konvensjonelle linkersekvenser som ganske enkelt sørger for et ønsket mellomrom mellom den andre immunglobulinpartner og effektormidlet. Konstruksjonen av slike linkere er velkjent for fagmannen.
I tillegg kan signalsekvenser for molekylene modifiseres for å øke ekspresjon.
Et eksempel på et endret antistoff inneholder en variabel tung og/eller lett kjede peptid- eller proteinsekvens som har antigenspesifisiteten av mAb 2C10, f.eks. Vh- og Vi_-kjedene.
Den andre immunglobulinpartner kan også være operativt koblet til et ikke-immunglobulinpeptid, protein eller fragment derav, som er heterologt til den CDR-inneholdende sekvens, som for eksempel har antigenspesifisiteten til rotte 2C10. Det resulterende protein kan oppvise både anti-IL-18-antigenspesifisitet og karakteristika ved ikke-immunglobulinet etter ekspresjon. Disse fusjonspartner-karakteristika kan være f.eks. et funksjonelt kjennetegn, så som et annet bindings- eller reseptor-domene, eller et annet terapeutisk kjennetegn dersom fusjonspartneren selv er et terapeutisk protein, eller ytterligere antigene karakteristika.
Når den andre immunglobulinpartner er avledet fra et antistoff som er for-skjellig fra donor-antistoffet, f.eks. en hvilken som helst isotype eller klasse av immunglobulin-rammeverk eller konstante regioner, resulterer dette i et manipulert antistoff. Manipulerte antistoffer kan omfatte immunglobulin (lg) konstante regioner og variable rammeverkregioner fra én kilde, f.eks. akseptor-antistoffet, og én eller flere (fortrinnsvis alle) CDR fra donor-antistoffet, f.eks. det her beskrevne anti-IL-18-antistoff. Dessuten kan det foretas endringer, f.eks. delesjoner, substitusjoner eller addisjoner av rammeverkregionen av akseptor mAb lett og/eller tung kjedes variable domene på nukleinsyre- eller aminosyrenivået, eller kan donor-CDR-regionene fremstilles for å opprettholde donor-antistoff-antigenets bindingspesifisitet.
Heterologe rammeverk og konstante regioner kan velges fra humane immunglobulinklasser og isotyper, så som IgG (subtypene 1 til og med 4), IgM, IgA og IgE. Akseptor-antistoffet behøver imidlertid ikke å omfatte bare humane immunglobulinproteinsekvenser. Det kan for eksempel konstrueres et gen hvor en DNA-sekvens som koder for en del av en human immunglobulinkjede, er fusjonert til en DNA-sekvens som koder for en ikke-immunglobulin-aminosyresekvens, som f.eks. et polypeptid-effektor- eller rapportørmolekyl.
Ett eksempel på et særlig ønskelig humanisert antistoff vil inneholde CDR av 2C10 innskutt i rammeverkregionene til en valgt human antistoffsekvens. For nøytralisering av humaniserte antistoffer innføres én, to eller fortrinnsvis tre, CDR fra de IL-18-antistoff tung kjede og/eller lett kjedes variable regioner i rammeverkregionene av den valgte humane antistoffsekvens, som erstatter de native CDR av sistnevnte antistoff.
I et humanisert antistoff er de variable domenene i både humane tunge og lette kjeder fortrinnsvis konstruert med én eller flere CDR-erstatninger. Det er mulig å benytte alle seks CDR eller forskjellige kombinasjoner av færre enn de seks CDR. Fortrinnsvis er alle seks CDR erstattet. Det er mulig å erstatte CDR bare i den humane tunge kjede ved som lett kjede å benytte den umodifiserte lette kjede fra det humane akseptor-antistoff. Som ytterligere alternativ kan en forlikelig lett kjede velges fra et annet humant antistoff ved å søke i de konvensjonelle antistoff-databasene. Resten av det manipulerte antistoff kan være avledet fra et hvilket som helst egnet humant akseptor-immunglobulin.
Det manipulerte humaniserte antistoff har således fortrinnsvis strukturen til et naturlig humant antistoff eller et fragment derav, og er i besittelse av kombinasjonen av egenskaper som fordres for effektiv terapeutisk anvendelse, f.eks. behandling av IL-18-medierte inflammatoriske humansykdommer eller for diagnostiske anvendelser.
Som et annet eksempel kan et manipulert antistoff inneholde CDR av den variable lette kjede region av 2C10 og CDR av den variable tunge kjede region av 13G9. Det resulterende humaniserte antistoff bør kjennetegnes ved den samme antigenbindingsspesifisitet og høye affinitet som mAb 2C10.
Det vil for fagmannen være klart at et manipulert antistoff kan modifiseres videre ved endringer i aminosyrer i det variable domenet uten nødvendigvis å påvirke spesifisiteten og den høye affinitet av donor-antistoffet (dvs. en analog). Det forutsettes at aminosyrer i tung og lett kjede kan erstattes av andre aminosyrer enten i det variable domenes rammeverk eller CDR eller begge deler. I tillegg kan den konstante region endres for å forbedre eller svekke selektive egenskaper ved molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse, for eksempel dimerisering, binding til Fc-reseptorer eller evnen til å binde og aktivere komplement (se f.eks. Angal et al., Mol. Immunol. 30:105-108 (1993), Xu er al., J. Biol. Chem. 269:3469-3474 (1994), Winter et al., EP 307.434-B).
Et endret antistoff som er et kimært antistoff, adskiller seg fra de ovenfor beskrevne humaniserte antistoffer ved å tilveiebringe hele det ikke-humane donor-antistoffs tung og lett kjede variable regioner, inklusivt rammeverkregioner, sammen med humane immunglobulin konstante regioner for begge kjeder. Det forventes at kimære antistoffer som beholder ytterligere ikke-humane sekvenser i forhold til de humaniserte antistoffer, kan utløse en signifikant immunrespons i mennesker.
Slike antistoffer vil kunne være egnet til forhindring og behandling av IL-18-medierte forstyrrelser, som omtalt nedenfor.
VI. Fremstilling av endrede antistoffer og manipulerte antistoffer
Fortrinnsvis benyttes de variable lette og/eller tunge kjeders sekvenser og CDR av mAb 2C10 eller andre egnede donor-mAbs, og deres kodende nukleinsyresekvenser, ved konstruksjonen av endrede antistoffer, fortrinnsvis humaniserte antistoffer ifølge denne oppfinnelse, ved følgende prosess. Den samme eller lignende teknikker kan også benyttes for å frembringe andre utførelsesformer ifølge denne oppfinnelse.
Et hybridom som produserer et valgt donor mAb, f.eks. rotte-antistoffet 2C10, klones konvensjonelt, og DNA av dens tunge og lette kjedes variable regioner oppnås etter kjente teknikker, f.eks. teknikker beskrevet i Sambrook et al., (Molecular Cloning (A Laboratory Manual) 2. utg. Cold Spring Harbor Laboratory (1989)). De variable tunge og lette regioner av 2C10 som inneholder i det minste de CDR-kodende regioner og de deler av rammeverkregionene av akseptor mAb lette og/eller tunge variable domene som fordres for å opprettholde donor mAb bindingsspesifisitet, så vel som de øvrige immunglobulin-avledede deler av antistoffkjeden avledet fra et humant immunglobulin, kan oppnås ved å benytte polynukleotid-primere og revers transkriptase. De CDR-kodende regioner identifiseres ved å benytte en kjent database og ved sammenligning med andre antistoffer.
Et rotte/humant kimært antistoff kan deretter fremstilles og testes med henblikk på bindingsevne. Et slikt kimært antistoff inneholder hele de ikke-humane donor-antistoff VH- og VL-regioner forbundet med humane lg konstante regioner for begge kjeder.
Et humanisert antistoff kan avledes fra det kimære antistoff, eller fortrinnsvis, fremstilles syntetisk ved passende innføring av de donor mAb CDR-kodende regioner fra de tunge og lette kjeder i rammeverket av den valgte tunge og lette kjede. Alternativt kan et humanisert antistoff fremstilles ved å benytte vanlig mutageneseteknikk. Det resulterende humaniserte antistoff inneholder således humane rammeverkregioner og donor mAb CDR-kodende regioner. Det kan senere foretas manipulering av rammeverkrester. Det resulterende humaniserte antistoff kan uttrykkes i rekombinante vertsceller, f.eks. COS-, CHO- eller myelomceller. Andre humaniserte antistoffer kan fremstilles ved å benytte denne teknikk på andre egnede IL-18-spesifikke, nøytraliserende, høyaffinitets ikke-humane antistoffer.
En konvensjonell ekspresjonsvektor eller et rekombinant plasmid, kan fremstilles ved å anbringe disse kodende sekvensene for det endrede antistoff i operativ forbindelse med konvensjonelle regulatorkontrollsekvenser som er i stand til å kontrollere replikasjonen og ekspresjonen i, og/eller sekresjon fra, en vertscelle. Regulatorsekvenser inkluderer promotersekvenser, f.eks. CMV-promoter, og signalsekvenser, som kan være avledet fra andre kjente antistoffer. Tilsvarende kan det fremstilles en andre ekspresjonsvektor som har en DNA-sekvens som koder for et komplementært antistoffs lette eller tunge kjede. Fortrinnsvis er denne andre ekspresjonsvektor identisk med den første, bortsett fra i den utstrekning det angår de kodende sekvenser og selekterbare markører at det så langt som mulig sikres at hver polypeptidkjede uttrykkes funksjonelt. Alternativt kan de tunge og lette kjeders kodende sekvenser for det endrede antistoff befinne seg på en enkelt vektor.
En valgt vertscelle kotransfekteres etter konvensjonelle teknikker med både den første og andre vektor (eller ganske enkelt transfektert med en enkelt vektor) for å frembringe den transfekterte vertscelle som omfatter både de rekombinante eller syntetiske lette og tunge kjeder. Den transfekterte celle dyrkes deretter etter konvensjonelle teknikker for å produsere det manipulerte antistoff. Det humaniserte antistoff som inkluderer assosiasjonen av både den rekombinante tunge kjede og/eller lette kjede underkastes screening fra kulturen ved passende tester, så som ELISA eller RIA.
Egnede vektorer for klonings- og subkloningstrinnene benyttet i fremgangs-måtene og konstruksjonene av sammensetningene kan velges av fagmannen. For eksempel kan konvensjonelle pUC-serier av kloningsvektorer benyttes. En vektor som benyttes er pUC19, som er kommersielt tilgjengelig fra leverandører, som f.eks. Amersham (Buckinghamshire, UK) eller Pharmacia (Uppsala, Sverige). Dessuten kan enhver vektor som lett er i stand til replikere, har rikelig med kloningsseter og selekterbare gener (f.eks. antibiotikaresistens) og som er lett å håndtere, benyttes for kloning
Likeledes kan vektorene som benyttes for ekspresjon av de manipulerte antistoffene velges fra en hvilken som helst konvensjonell vektor. Vektorene inneholder også selekterte regulatorsekvenser (så som CMV-promotere) som styrer replikasjonen og ekspresjonen av heterologe DNA-sekvenser i valgte vertsceller. Disse vektorene inneholder de ovenfor beskrevne DNA-sekvenser som koder for det manipulerte antistoff eller den endrede immunglobulinkodende region. For lett manipulering kan vektorene dessuten inkorporere de valgte immunglobulinsekvenser som er modifisert ved insersjon av ønskede restriksjonsseter.
Ekspresjonsvektorene kan også kjennetegens ved gener egnet for amplifisering av ekspresjonen av de heterologe DNA-sekvensene, f.eks. pattedyr dihydrofolat-reduktasegenet (DHFR). Andre vektorsekvenser omfatter en poly A signalsekvens, f.eks. fra bovint veksthormon (BGH) og betaglobin-promotersekvensen (betaglopro). De ekspresjonsvektorer som her er anvendelige kan syntetiseres etter teknikker som er velkjent for fagmannen.
Slike vektorkomponenter, f.eks. replikoner, seleksjonsgener, enhancere, promotere, signalsekvenser og lignende, kan oppnås fra kommersielle eller naturlige kilder eller syntetiseres etter kjente fremgangsmåter for bruk ved dirigering av ekspresjonen og/eller sekresjonen av produktet av det rekombinante DNA i en valgt vert. Andre passende ekspresjonsvektorer, hvorav en rekke typer er kjent for ekspresjon i pattedyr, bakterier, insekter, gjær og sopp, kan også velges for dette formål
Bakterieceller kan vise seg egnet som vertsceller for ekspresjonen av de rekombinante Fabs (se f.eks. Pluckthun. A., Immunol. Rev., 130:151-188 (1992)). Som følge av den tendens proteiner uttrykt i bakterieceller har til å være i en ikke-utfoldet eller feilaktig utfoldet form, eller i en ikke-glykosylert form, må imidlertid enhver rekombinant Fab produsert i en bakteriecelle, måtte være gjenstand for screening på retensjon av antigenbindende evne. Dersom molekylet uttrykt av bakteriecellen hadde vært produsert i riktig foldet form, ville denne bakteriecelle vært en ønskelig vert. For eksempel er forskjellige stammer av E. coli som er benyttet for ekspresjon, velkjent som vertsceller innen bioteknologifeltet. Forskjellige stammer av B. subtilis, Streptomyces, andre basiller og lignende, kan også benyttes for denne metode.
Dersom det ønskes er kjente stammer av gjærceller også tilgjengelige som vertsceller, så vel som insektceller, f.eks. Drosophila og Lepidoptera og virale ekspresjonssystemer, se f.eks. Miller et al., Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986).
En annen metode for ekspresjon av de humaniserte antistoffene kan anvende ekspresjon i transgene dyr, som f.eks. beskrevet i US-patent 4.873.316. Dette vedrører et ekspresjonsystem som benytter dyrets kaseinpromoter, som når det transgent inkorporeres i et pattedyr, gjør det mulig for hunndyret å produsere det rekombinante protein i melken.
Etter at det manipulerte antistoff er uttrykt ved hjelp av den ønskede metode, undersøkes det på in vitro aktivitet ved bruk av en passende test. Konvensjonelle ELISA benyttes for å bestemme kvalitativ og kvantitativ binding av det manipulerte antistoff til IL-18. Andre in vitro tester kan også benyttes for å verifisere nøytraliserende effekt før etterfølgende humankliniske studier foretatt for å vurdere persistensen av det manipulerte antistoff i kroppen til tross for de vanlige utskillings-mekanismer.
VII. Terapeutiske/profylaktiske anvendelser
Det er mulig å behandle mennesker med autoimmunrelaterte symptomer, som f.eks. MS, med molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse. Den terapeutiske respons indusert ved anvendelsen av molekylene ifølge denne oppfinnelse frembringes gjennom bindingen til human IL-18 og derved påfølgende blokkering av Th1-stimulering. Molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse er når de foreligger i preparater og passende formuleringer for terapeutisk anvendelse, således i sterk grad ønsket av personer som lider av autoimmunsykdommer som, men ikke begrenset til, MS, RA, IDDM, IBD og psoriasis. De kan anvendes for behandling av autoimmunsykdommer fra ca. 2 dager til ca. 6 måneder eller etter behov. For eksempel kan mer langvarige behandlinger være ønskelige ved behandling av MS eller lignende. Doseringen og varigheten av behandling står i forhold til den relative holdbarhet av molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse i det humane kretsløp og kan reguleres av fagmannen ut fra hvilken tilstand som behandles og pasientens generelle helse.
Administrasjonsmåten av molekylene ifølge oppfinnelsen kan skje ad hvilken som helst egnet vei som avgir midlet til verten og er egnet for parenteral administrering, dvs. subkutant, intramuskulært, intravenøst eller intranasalt.
Molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for fremstilling av farmasøytiske blandinger inneholdende, som virkestoff, en effektiv mengde av det molekylener ifølge oppfinnelsen i en farmasøytisk akseptabel bærer. Det foretrekkes en vandig suspensjon eller løsning fortrinnsvis buffret til fysiologisk pH, i en form som er klar for injeksjon. En rekke vandige bærere kan benyttes, f.eks. 0,4% saltvann, 0,3% glycin og lignende. Disse løsningene er sterile og i alminnelighet fri for partikler. Løsningene kan steriliseres etter konvensjonelle velkjente steriliseringsteknikker (f.eks. filtrering). Blandingene kan inneholde farmasøytisk akseptable hjelpestoffer for å tilnærme fysiologiske betingelser, så som pH-justerende midler og buffere, etc. Konsentrasjonen av molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse kan variere betydelig, dvs. fra mindre enn ca. 0,5%, vanligvis minst ca. 1%, helt opp til 15 eller 20 vekt.%, og vil bli valgt hovedsakelig på basis av væskevolumer, viskositet, etc, alt etter den administrasjonsmåte som velges.
Molekylene som her beskrevet, kan lyofiliseres for oppbevaring og rekonstitueres i en egnet bærer før bruk. Denne teknikk har vist seg effektiv med konvensjonelle immunglobuliner, og tidligere kjente lyofiliserings- og rekonstitusjonsteknikker kan benyttes.
De etterfølgende eksempler illustrerer forskjellige aspekter ved denne oppfinnelse, inklusivt konstruksjonen av eksempler på manipulerte antistoffer og ekspresjon av disse i egnede vektorer og vertsceller. Alle aminosyrer er angitt med konvensjonell trebokstavs- eller enkeltbokstavs-kode. Alle nødvendige restriksjonsenzymer, plasmider og andre reagenser og materialer ble oppnådd fra kommersielle kilder om intet annet er angitt. All generell kloning og annen rekombinant metodikk var som foretatt i T. Maniatis er al., sitert ovenfor, eller den andre utgave derav (1989) red. Sambrook er al., av samme utgiver («Sambrook er al. »).
Eksempel 1 - Produksjon av mAbs mot IL-18
A. Monoklonal antistoffutvikling
Mus (F1-hybrider av Balb/c og C57BL/6) eller rotter (Sprague-Dawley) ble immunisert med 30 fag rekombinant IL-18 i adjuvans og 4 uker senere med 30 fag IL-18 i adjuvans. På grunnlag av et gunstig serum-antistoff-titer mot IL-18, fikk dyrene en ytterligere immunisering med 10-30 jag IL-18 (i.p. i saltvann). Tre dager etter den siste immunisering ble det foretatt en splenektomi. Mus- eller rotte-miltceller ble benyttet til å fremstille hybridomer etter standardprosedyrer (Zola, H. red., Monoclonal Antibodies, CRC Press Inc. 1987). Positive hybridomer ble klonet ved hjelp av den begrensende fortynningsmetoden.
B. Rensing av mAbs
mAbs ble renset ved ProsepA (Bio Processing, Consett, UK) kromatografi ved å benytte produsentens instruksjoner. mAbs var ifølge SDS-PAGE >95% rene.
C. Isotyping av mAbs
Alle rotte- og muse-mAbs ble isotypet ved hjelp av kommersielt tilgjengelige sett (Zymed, Amersham) og funnet å være lgG1 kappa.
Eksempel 2 - Målinger
A. Biotinylering av IL-18
IL-18 ble biotinylert ved å benytte et sett anskaffet fra Molecular Probes, Inc.
under bruk av et 10:1 forhold biotinyleringsreagens. Biotinylering hadde ingen effekt på den biologiske aktivitet av IL-18.
B. Hybridomscreeningstest
96-brønns plater ble dekket med streptavidin (2 jag/mL, 100 jaL/brønn i PBS) ved inkubering over natten ved 4°C. Løsningen ble deretter suget av, og uspesifikke bindingsseter ble blokkert med 250 jaL/brønn av 1% bovint serumalbumin (BSA) i TBS-buffer (50 mM Tris, 150 mM NaCI, 0,02% Kathon, pH 7,4) i 50-60 minutter ved romtemperatur. Etter dette og hvert av de påfølgende trinn, ble platen vasket 4 ganger i vaskebuffer (10 mM Tris, 150 mM NaCI, 0,05% Tween 20, 0,02% Kathon, pH 7,4). Hver brønn ble tilsatt 100^L biotin IL-18 (100 ng/mL) i testbuffer (0,5% BSA, 0,05% bovint gammaglobulin, 0,01% Tween 40, 20^M dietylentriamin-
pentaeddiksyre i TBS-buffer), og platene ble inkubert i 30 minutter ved romtemperatur i en risteinkubator. Til hver brønn ble det deretter tilsatt 50 \ iL hybridom-medium og 50 \ iL testbuffer, som ble inkubert i 60 minutter ved romtemperatur i en risteinkubator. Til hver brønn ble det deretter tilsatt 100 \ iL 0,5 ng/mL Eu<3+->merket anti-mus eller anti-rotte antistoff i testbuffer. Tilslutt ble 200^L/brønn enhancer (Wallac) tilsatt og inkubert i 5 minutter ved romtemperatur og tid-spaltet fluorescens målt. Hybridomer som hadde tellinger >100K ble ekspandert i 24-brønns plater.
C. Immunoassay
For å bestemme spesifisiteten av de utviklede anti-IL-18 mAbs ble 96-brønnsplater dekket, blokkert og inkubert med biotin IL-18 som ovenfor. Alle etterfølgende inkubasjoner ble foretatt i en risteinkubator ved romtemperatur. Etter vasking av brønnene ble 50 \ iL IL-18 (3 ng/mL) eller testbuffer og 50 \ iL mAb tilsatt og inkubert i 60 minutter. Etter vasking ble brønnene tilsatt 100 \ iL 0,5 ng/mL Eu<3+->merket anti-mus eller anti-rotte antistoff i testbuffer i 60 minutter, hvorpå brønnene ble vasket og deretter tilsatt 100^L/brønn enhancer (Wallac) og inkubert i 5 minutter ved romtemperatur og tid-spaltet fluorescens målt. Alle positive hybridomer viste fortrengning av binding med IL-18.
D. Nøytraliseringstest
PBMC fra friske donorer ble isolert ved hjelp av Ficoll-Paque (Pharmacia) gradient og dyrket i 96-brønnsplater i 10% FBS DMEM/F12-medium med 1 ng/mL ConA (Sigma) i nærvær av IL-18 (5 ng/mL) og/eller mAbs. Etter dyrking i 18 timer ved 37°C, 5% C02i luft, 90% fuktighet, ble 25^L medium tatt ut og interferon-gamma (IFNy) konsentrasjonen målt ved immunoassay. Resultatene oppnådd fra gjennomsnitt av tre forsøk, er sammenfattet i Tabell I.
E. Affinitetsmålinger av monoklonalt antistoff
Affiniteten av de rensede mAbs ble målt i BIAcore optisk biosensor (Pharmacia Biosensor, Uppsala, Sverige) ved å benytte en strømningshastighet på 30^L/minutt. Kinetiske data ble vurdert ved å benytte forhold som tidligere er beskrevet (Karlsson et al., J. Immunol. Meth., 145:229-240 (1991). mAb (fortynnet i HBS-buffer, 10 mM HEPES, 150 mM NaCI, 0,01%Tween-20, pH 7,4) ble injisert over en kanin anti-mus IgG Fc eller geit anti-rotte IgG Fc overflate, etterfulgt av bufferstrøm og registrering av RU. IL-18 (fortynnet i HBS-buffer) ble deretter injisert i 180 sekunder, etterfulgt av en bufferstrøm i 500 sekunder og registrering av RU. Overflaten av sensor-brikken ble regenerert med en injeksjon av 0,1 M fosforsyre. På-hastighetene (Kass) og av-hastighetene (Kdiss) av binding ble beregnet ved å benytte BIAcore programvare, og sammen førte disse til en beregnet likevektskonstant (KD) på 12 x 10"<9>M for mAb 13G9, 3,9 x 10"<11>M for mAb 2C10 og 1,5 x 10"<10>M for mAb 14B7. Se Tabell I.
F. Epitop-analyse av monoklonalt antistoff
Epitop-analysen av de rensede mAbs ble målt i BIAcore. Ved bruk av en strømningshastighet på 10^L/minutt ble det første mAb (fortynnet i HBS-buffer) injisert over en kanin anti-mus IgG Fc eller geit anti-rotte IgG Fc overflate, etterfulgt av en injeksjon av IL-18 i 240 sekunder, en injeksjon av blokkerende mAbs i 48 sekunder og en injeksjon av det andre mAb i 240 sekunder. Overflaten ble regenerert med en injeksjon av 0,1 M fosforsyre, og RU ble registrert etter hver injeksjon. Det ble funnet at mAbs 13G9, 2C10 og 14B7 har lignende eller over-lappende epitoper.
Eksempel 3 - CDR-sekvenser
Genkloning og sekvensanalyse
De variable tunge og lette genene ble klonet fra hybridomceller ved å benytte standard molekylærbiologiske metoder beskrevet i korthet som følger. Total RNA ble isolert fra hybridomcellene ved å benytte TRIzol reagens (Life Technologies Cat. No. 15596-026) i henhold til produsentens anvisning. RNA ble revers transkribert med et RT-PCR-sett i henhold til produsentens instruksjoner (Boehringer Mannheim Cat. No. 1483-188) ved å benytte et poly-dT oligonukleotid for priming. Etter førstekjede cDNA-syntese ble de tunge og lette V-regioner PCR-amplifisert ved å benytte 3'-konstant region spesifikke primere og degenererte 5'-primere. De degenererte 5'-primersekvensene ble konstruert slik at de kodet for de tidligere bestemte N-terminale aminosyresekvensene av de variable regioner av tung eller lett kjede. Full-lengde sekvenser fra multiple kloner ble oppnådd fra hver PCR-amplifikasjon og sammenligningsoppstillet for å gi konsensus. De første 17 basene av DNA-sekvensen for både de tunge og lette kjedene er PCR primer-generert, mens derimot den translaterte proteinsekvens er nativ.
Nukleotid- og de deduserte aminosyresekvensene for hybridom-antistoffene 2C10, 13G9 og 14B7, er vist i Figurene 1-6.1 hvert tilfelle er CDR og de nukleotidsekvenser som koder for disse, innrammet. De degenererte primersekvensene er satt med fete typer.
Claims (2)
1. Immunoglobulin,karakterisert vedat den omfatter en lettkjede komplementaritetsbestemmende region (CDR), idet aminosyresekvensen derav er valgt fra gruppen: (a) SEKV ID NR: 4; (b) SEKV ID NR: 6; og (c) SEKV ID NR: 8.
og en tungkjede (CDR), idet aminosyresekvensen derav er valgt fra gruppen: (a) SEKV ID NR: 12; (b) SEKV ID NR: 14; og (c) SEKV ID NR: 16.
2. Isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region (CDR),karakterisert vedat det er ifølge krav 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US12529999P | 1999-03-19 | 1999-03-19 | |
| PCT/US2000/007349 WO2000056771A1 (en) | 1999-03-19 | 2000-03-17 | Recombinant il-18 antagonists useful in treatment of il-18 mediated disorders |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20014524D0 NO20014524D0 (no) | 2001-09-18 |
| NO20014524L NO20014524L (no) | 2001-11-14 |
| NO330391B1 true NO330391B1 (no) | 2011-04-04 |
Family
ID=22419067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20014524A NO330391B1 (no) | 1999-03-19 | 2001-09-18 | Immunoglobulin og isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6706487B1 (no) |
| EP (2) | EP1961768A1 (no) |
| JP (1) | JP2002542769A (no) |
| KR (1) | KR100697120B1 (no) |
| CN (1) | CN1246335C (no) |
| AR (1) | AR022952A1 (no) |
| AT (1) | ATE402191T1 (no) |
| AU (1) | AU764622B2 (no) |
| BR (1) | BR0008688A (no) |
| CA (1) | CA2368965C (no) |
| CO (1) | CO5470287A1 (no) |
| CY (1) | CY1108387T1 (no) |
| CZ (1) | CZ303704B6 (no) |
| DE (1) | DE60039589D1 (no) |
| DK (1) | DK1163271T3 (no) |
| ES (1) | ES2308974T3 (no) |
| HK (1) | HK1043798B (no) |
| HU (1) | HU228931B1 (no) |
| IL (1) | IL144995A0 (no) |
| MY (1) | MY124219A (no) |
| NO (1) | NO330391B1 (no) |
| NZ (1) | NZ513699A (no) |
| PL (1) | PL202396B1 (no) |
| PT (1) | PT1163271E (no) |
| SI (1) | SI1163271T1 (no) |
| TR (3) | TR200202254T2 (no) |
| WO (1) | WO2000056771A1 (no) |
| ZA (1) | ZA200107639B (no) |
Families Citing this family (52)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5852266A (en) * | 1993-07-14 | 1998-12-22 | Hitachi, Ltd. | Vacuum circuit breaker as well as vacuum valve and electric contact used in same |
| US7704944B2 (en) | 1997-08-14 | 2010-04-27 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use for the treatment of sepsis |
| IL121860A0 (en) | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
| US7220717B2 (en) | 1997-08-14 | 2007-05-22 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use |
| CA2276216A1 (en) * | 1998-06-24 | 1999-12-24 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | An artificial peptide capable of neutralizing the biological activity of interleukin-18 |
| AR022952A1 (es) * | 1999-03-19 | 2002-09-04 | Smithkline Beecham Corp | ANTICUERPO MONOCLONAL DE ROEDOR ESPECIFICAMENTE NEUTRALIZANTE PARA LA INTERLEUQUINA-18 HUMANA , UN FRAGMENTO FAB NEUTRALIZANTE o FRAGMENTO F(AB')2, UNA REGION DE COMPLEMENTARIEDAD DE CADENA LIGERA DE INMONOGLOBULINA(CDR), UNA MOLECULA DE ACIDO NUCLEICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE, EL |
| US7229619B1 (en) | 2000-11-28 | 2007-06-12 | Medimmune, Inc. | Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment |
| US6656467B2 (en) * | 2000-01-27 | 2003-12-02 | Medimmune, Inc. | Ultra high affinity neutralizing antibodies |
| CN1461310B (zh) * | 2000-02-10 | 2013-06-12 | 雅培制药有限公司 | 结合人白介素-18的抗体及制备和使用方法 |
| PT1257292E (pt) * | 2000-02-21 | 2011-07-05 | Yeda Res & Dev | Utilização de inibidores de il-18 |
| AU2002224417A1 (en) * | 2000-10-18 | 2002-04-29 | Immunex Corporation | Methods for treating il-18 mediated disorders |
| US7179900B2 (en) | 2000-11-28 | 2007-02-20 | Medimmune, Inc. | Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment |
| AU2003218432A1 (en) * | 2002-03-26 | 2003-10-13 | Centocor, Inc. | Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses |
| US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
| WO2004040969A1 (ja) * | 2002-11-07 | 2004-05-21 | Kumamoto Technology & Industry Foundation | Ｇａｎｐ導入トランスジェニック哺乳動物及びその利用 |
| KR100988129B1 (ko) | 2003-04-30 | 2010-10-18 | 쥬리디컬 파운데이션 더 케모-세로-쎄라퓨틱 리서치 인스티튜트 | 인간 항인간 인터루킨-18 항체와 그 단편, 및 이들의이용방법 |
| US7968684B2 (en) * | 2003-11-12 | 2011-06-28 | Abbott Laboratories | IL-18 binding proteins |
| AU2011224023C1 (en) * | 2003-11-12 | 2013-08-29 | Abbvie Inc. | IL-18 binding proteins |
| US20050100965A1 (en) * | 2003-11-12 | 2005-05-12 | Tariq Ghayur | IL-18 binding proteins |
| US7141382B1 (en) | 2004-10-12 | 2006-11-28 | Parikh Chirag R | Methods for detection of IL-18 as an early marker for diagnosis of acute renal failure and predictor of mortality |
| PE20080036A1 (es) | 2005-10-21 | 2008-03-06 | Novartis Ag | Anticuerpos humanos para la interleucina-13 (il13) |
| GB0610438D0 (en) * | 2006-05-25 | 2006-07-05 | Glaxo Group Ltd | Immunoglobulins |
| AU2007267213B2 (en) | 2006-05-25 | 2012-03-29 | Glaxo Group Limited | Modified humanised anti-interleukin-18 antibodies |
| EP1997830A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | AIMM Therapeutics B.V. | RSV specific binding molecules and means for producing them |
| US8048420B2 (en) | 2007-06-12 | 2011-11-01 | Ac Immune S.A. | Monoclonal antibody |
| US8613923B2 (en) | 2007-06-12 | 2013-12-24 | Ac Immune S.A. | Monoclonal antibody |
| RS53174B (en) | 2007-10-05 | 2014-06-30 | Genentech Inc. | USE OF ANTIAMYLOID BETA ANTIBODY IN THE EVENT OF ANY DISEASE |
| CA2702880A1 (en) * | 2007-10-19 | 2009-04-23 | Immunas Pharma, Inc. | Antibody capable of specifically binding to a beta oligomer, and use thereof |
| US20100291071A1 (en) * | 2008-08-01 | 2010-11-18 | Immunas Pharma, Inc. | Antibody Specific Binding to A-Beta Oligomer and the Use |
| CN102936287B (zh) * | 2008-02-08 | 2015-09-09 | 伊缪纳斯制药株式会社 | 能够特异性结合Aβ寡聚体的抗体及其应用 |
| WO2009127046A1 (en) * | 2008-04-14 | 2009-10-22 | Proscan Rx Pharma Inc. | Prostate specific membrane antigen antibodies and antigen binding fragments |
| US9085614B2 (en) | 2008-08-01 | 2015-07-21 | Immunas Pharma, Inc. | Antibodies that specifically bind to Aβ oligomers and uses thereof |
| EP2326315A1 (en) * | 2008-08-18 | 2011-06-01 | Glaxo Group Limited | Treatment of an autoimmune disease using il-18 antagonists |
| WO2010040736A2 (en) * | 2008-10-07 | 2010-04-15 | Ablynx Nv | Amino acid sequences directed against il18 and/or the il-18 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and/or disorders associated with il-18 mediated signaling |
| US8168165B2 (en) | 2008-12-23 | 2012-05-01 | Abbott Laboratories | Alkylated interleukin-18 compositions |
| DK2419447T3 (en) | 2009-04-17 | 2017-09-25 | Immunas Pharma Inc | ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY BIND TO A BETA OLIGOMER AND USE THEREOF |
| EP2377583A1 (en) * | 2009-06-30 | 2011-10-19 | Gosen Co., Ltd. | Racket string, method for manufacturing same, and racket strung with same |
| DK2462162T3 (en) | 2009-08-06 | 2017-01-16 | Immunas Pharma Inc | Antibodies that specifically bind to A-beta oligomers and their use |
| DK2462161T3 (en) | 2009-08-06 | 2017-06-06 | Immunas Pharma Inc | Antibodies specifically binding to A-beta oligomers and their use |
| CN102741288B (zh) | 2009-08-29 | 2015-08-19 | Abbvie公司 | 治疗用dll4结合蛋白 |
| US8568726B2 (en) | 2009-10-06 | 2013-10-29 | Medimmune Limited | RSV specific binding molecule |
| MX2012009167A (es) * | 2010-02-09 | 2012-08-23 | Glaxo Group Ltd | Tratamiento de un trastorno metabolico. |
| EP2538965B1 (en) | 2010-02-25 | 2017-04-12 | Schepens Eye Research Institute | Therapeutic compositions for the treatment of dry eye disease |
| RU2016146198A (ru) * | 2010-03-02 | 2018-12-19 | Эббви Инк. | Терапевтические dll4-связывающие белки |
| WO2011150086A2 (en) * | 2010-05-25 | 2011-12-01 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Diagnosis and treatment of autoimmune disease |
| SG187173A1 (en) | 2010-07-30 | 2013-02-28 | Ac Immune Sa | Safe and functional humanized anti beta-amyloid antibody |
| BR112013015508B1 (pt) | 2010-12-20 | 2022-04-05 | Medimmune Limited | Molécula de anticorpo para il-18 humana, domínio vh isolado e domínio vl isolado, composição, uso de uma molécula de anticorpo ou do domínio vh isolado e do domínio vl isolado, molécula de ácido nucleico isolada, célula hospedeira procariótica recombinante, método para produzir um anticorpo, e método in vitro para medir il-18 em uma amostra de um indivíduo |
| JOP20200308A1 (ar) | 2012-09-07 | 2017-06-16 | Novartis Ag | جزيئات إرتباط il-18 |
| EP2924117B1 (en) | 2012-11-21 | 2019-08-14 | KM Biologics Co., Ltd. | Novel human antibody against il-18 |
| NZ733897A (en) * | 2015-03-05 | 2023-11-24 | Ab2 Bio Sa | Il-18 binding protein (il-18bp) and antibodies in inflammatory diseases |
| JP2023530489A (ja) * | 2020-06-18 | 2023-07-18 | ネクストキュア インコーポレイテッド | Ｆｌｒｔ３媒介性シグナル伝達を調節するための組成物及び方法 |
| WO2023286694A1 (ja) | 2021-07-13 | 2023-01-19 | 国立大学法人東海国立大学機構 | 炎症性腸疾患を治療するための医薬組成物 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0528767A1 (en) * | 1991-08-21 | 1993-02-24 | Sandoz Ltd. | Antibody derivatives |
| EP0974600A2 (en) * | 1998-06-24 | 2000-01-26 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Anti-interleukin-18 antibody |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU22545A1 (es) * | 1994-11-18 | 1999-03-31 | Centro Inmunologia Molecular | Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico |
| JP3101690B2 (ja) | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・２・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
| US4873316A (en) | 1987-06-23 | 1989-10-10 | Biogen, Inc. | Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals |
| GB9125979D0 (en) * | 1991-12-06 | 1992-02-05 | Wellcome Found | Antibody |
| TW581771B (en) | 1994-11-15 | 2004-04-01 | Hayashibara Biochem Lab | Recombinant production of a polypeptide for inducing interferon-gamma production, and monoclonal antibody against the polypeptide |
| IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
| FR2767697B1 (fr) | 1997-09-01 | 2000-05-05 | Boots Co Plc | Composition dermatologique permettant d'eviter l'apparition de symptomes d'hypersensibilite et d'intolerance cutanee |
| AR022952A1 (es) * | 1999-03-19 | 2002-09-04 | Smithkline Beecham Corp | ANTICUERPO MONOCLONAL DE ROEDOR ESPECIFICAMENTE NEUTRALIZANTE PARA LA INTERLEUQUINA-18 HUMANA , UN FRAGMENTO FAB NEUTRALIZANTE o FRAGMENTO F(AB')2, UNA REGION DE COMPLEMENTARIEDAD DE CADENA LIGERA DE INMONOGLOBULINA(CDR), UNA MOLECULA DE ACIDO NUCLEICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE, EL |
-
2000
- 2000-03-16 AR ARP000101168A patent/AR022952A1/es active IP Right Grant
- 2000-03-17 CA CA2368965A patent/CA2368965C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-17 AT AT00918152T patent/ATE402191T1/de active
- 2000-03-17 US US09/914,695 patent/US6706487B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-17 TR TR2002/02254T patent/TR200202254T2/xx unknown
- 2000-03-17 BR BR0008688-6A patent/BR0008688A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-03-17 TR TR2001/02733T patent/TR200102733T2/xx unknown
- 2000-03-17 DE DE60039589T patent/DE60039589D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-17 MY MYPI20001044A patent/MY124219A/en unknown
- 2000-03-17 CZ CZ20013362A patent/CZ303704B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-03-17 NZ NZ513699A patent/NZ513699A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-03-17 KR KR1020017011872A patent/KR100697120B1/ko active IP Right Grant
- 2000-03-17 SI SI200031002T patent/SI1163271T1/sl unknown
- 2000-03-17 PT PT00918152T patent/PT1163271E/pt unknown
- 2000-03-17 TR TR2002/02253T patent/TR200202253T2/xx unknown
- 2000-03-17 AU AU39016/00A patent/AU764622B2/en not_active Expired
- 2000-03-17 CO CO00019489A patent/CO5470287A1/es active IP Right Grant
- 2000-03-17 ES ES00918152T patent/ES2308974T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-17 JP JP2000606631A patent/JP2002542769A/ja active Pending
- 2000-03-17 HU HU0200502A patent/HU228931B1/hu unknown
- 2000-03-17 CN CNB008077703A patent/CN1246335C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-17 EP EP08157217A patent/EP1961768A1/en not_active Withdrawn
- 2000-03-17 PL PL350460A patent/PL202396B1/pl unknown
- 2000-03-17 DK DK00918152T patent/DK1163271T3/da active
- 2000-03-17 WO PCT/US2000/007349 patent/WO2000056771A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-17 EP EP00918152A patent/EP1163271B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-17 IL IL14499500A patent/IL144995A0/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-09-17 ZA ZA200107639A patent/ZA200107639B/en unknown
- 2001-09-18 NO NO20014524A patent/NO330391B1/no not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-05-21 HK HK02103813.7A patent/HK1043798B/zh not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-01-22 US US10/762,629 patent/US20040141964A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-09-30 CY CY20081101085T patent/CY1108387T1/el unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0528767A1 (en) * | 1991-08-21 | 1993-02-24 | Sandoz Ltd. | Antibody derivatives |
| EP0974600A2 (en) * | 1998-06-24 | 2000-01-26 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Anti-interleukin-18 antibody |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| -, Dated: 01.01.0001 * |
| BONILLA, F.A. et al., Dated: 01.01.0001 * |
| JONES, S. E. et al., Dated: 01.01.0001 * |
| REKVIG, O.P. et al., Dated: 01.01.0001 * |
| TANIGUCHI, M. et al., Dated: 01.01.0001 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO330391B1 (no) | Immunoglobulin og isolert nukleinsyremolekyl kodende for immunoglobulin komplementaritetsbestemmende region | |
| JP5177444B2 (ja) | Ｉｌ−５により媒介される疾病の治療に有用な組み換えｉｌ−５アンタゴニスト | |
| US7399837B2 (en) | Recombinant IL-5 antagonists useful in treatment of IL-5 mediated disorders | |
| JP4954104B2 (ja) | Ｉｌ−５介在障害を治療および診断するための改良方法 | |
| JP2008029355A (ja) | Ｉｌ−５により媒介される疾病の治療に有用な組み換えｉｌ−５アンタゴニスト | |
| CN112513090B (zh) | 结合人il-4r的抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
| JP2006333870A (ja) | Ｉｌ４により伝達される疾患の治療に有用な組み換え型ｉｌ４抗体 | |
| JP2021500856A (ja) | Ｉｌ−６ｒ抗体およびその抗原結合フラグメントならびに医薬としての使用 | |
| EP1272205A1 (en) | Sialoadhesin factor-2 antibodies | |
| MXPA01009514A (en) | Recombinant il-18 antagonists useful in treatment of il-18 mediated disorders |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| CHAD | Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften) |
Owner name: SMITHKLINE BEECHAM PLC, US |
|
| MK1K | Patent expired |