JP2002542769A - Ｉｌ−１８により媒介される疾病の治療において有用な組み換えｉｌ−１８アンタゴニスト - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 高アフィニティー中和ｍＡｂ由来のキメラ、ヒト化および他のＩＬ−１８ ｍＡｂ、それを含有する医薬組成物、治療および診断方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 一般的には、本発明は、ＩＬ−１８により媒介される症状の治療および診断に
おいて有用な抗体および改変抗体、より詳細には、ｍＡｂ、Ｆａｂ、キメラおよ
びヒト化抗体の分野に関する。

【０００２】発明の背景 ヒトインターロイキン−１８は最近同定されたサイトカインであり、生物学的
に不活性な１９３個のアミノ酸の前駆体蛋白として合成される（Ushio et al., J. Immunol. 156:4274, 1996）。例えば、カスパーゼ−１またはカスパーゼ−４
による前駆体蛋白の開裂により１５６個のアミノ酸の成熟蛋白が遊離され（Gu e
t al., Science 275:206, 1997; Ghayur et al., Nature 386:619, 1997）、そ
れはＴ細胞増殖の共刺激、ＮＫ細胞の細胞毒性促進、Ｔ細胞およびＮＫ細胞によ
るＩＦＮ−γ産生の誘導、ならびにＴヘルパータイプ１（Ｔｈ１）分化能促進を
包含する生物学的活性を示す（Okamura et al., Nature 378:88, 1995; Ushio e
t al., J. Immunol. 156:4274, 1996; Micallef et al., Eur. J. Immunol. 26:
1647, 1996; Kohno et al., J. Immunol. 158:1541, 1997; Zhang et al., Infe ct. Immunol . 65:3594, 1997; Robinson et al., Immunity 7:571, 1997）。さ
らに、ＩＬ−１８は、ＩＬ−８、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびプロス
タグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）を包含するヒト単球前炎症メディエイタの有効な
インデューサーである（Ushio, S. et al., J. Immunol. 156:4274-4279, 1996;
Puren, A.J. et al., J. Clin. Invest. 10:711-721, 1997; Podolin et al., J. Immunol . 1999年投稿）。

【０００３】 以前クローン化されたＩＬ−１受容体−関連蛋白（ＩＬ−１Ｒｒｐ）（Parnet
et al., J. Biol. Chem. 271:3967, 1996）は、最近になってＩＬ−１８受容体
の１のサブユニットとして同定された（Ｋｄ＝１８ｎＭ）（Torigoe et al., J. Biol. Chem . 272:25737, 1997）。ＩＬ−１８受容体の第２のサブユニットはＩ
Ｌ−１受容体アクセサリー蛋白に対して相同性を有し、ＡｃＰＬと呼ばれている
（アクセサリー蛋白様）。ＩＬ−１ＲｒｐおよびＡｃＰＬの両方の発現は、ＩＬ
−１８により誘導されるＮＫ−κＢおよびＪＮＫの活性化に必要である（Born e
t al., J. Biol. Chem. 273:29445, 1998）。ＮＫ−κＢおよびＪＮＫのほかに
、ＩＬ−１８は、ＩＬ−1受容体結合キナーゼ（ＩＲＡＫ）、ｐ５６ｌｃｋ（Ｌ
ＣＫ）およびマイトジェン活性化蛋白キナーゼ（ＭＡＰＫ）を介してもシグナル
を伝達する（Micallef et al., Eur. J. Immunol. 26:1647, 1996; Matsumoto e
t al., Biophys Biochem. Res. Comm. 234:454, 1997; Tsuji-Takayama et al.,
Biochem. Biophys. Res. Comm. 237:126, 1997）。

【０００４】 ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２およびＴＮＦ−βのごとき炎症サイトカインを産生する
Ｔｈ１細胞（Mosmann et al., J. Immunol. 136:2348, 1986）は、多発性硬化症
（ＭＳ）、リューマチ性関節炎（ＲＡ）、Ｉ型またはインスリン依存性糖尿病（
ＩＤＤＭ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および乾癬を包含する多くの自己免疫疾患
の媒介に関与している（Mosmann and Sad, Immunol. Today 17:138, 1996）。よ
って、ＩＬ−１８のごときＴｈ−１促進サイトカインに対する拮抗は、疾病の発
症を抑制すると期待される。ＩＬ−１８特異的ｍＡｂはアンタゴニストとして使
用できるであろう。

【０００５】 自己免疫疾患の発症におけるＩＬ−１８の役割が示されている。したがって、
発症直前の非肥満性糖尿病（ＮＯＤ）マウスの膵臓および脾臓においてＩＬ−１
８の発現が有意に増強される（Rothe et al., J. Clin. Invest. 99:469, 1997
）。同様に、リューマチ性関節炎患者の滑液中のＩＬ−１８レベルが著しく増加
することが示された（Kawashima et al., Arthritis and Rheumatism 39:598, 1
996）。さらにそのうえ、ＩＬ−１８投与は、多発性硬化症のモデルであるＴｈ
−１により媒介される自己免疫疾患であるマウスの実験的なアレルギー性脳脊髄
炎（ＥＡＥ）の臨床的重篤性を増大させることが示されている。さらに、中和抗
−ラットＩＬ−１８抗血清は、メスのLewisラットにおいてＥＡＥの発症を防止
することが示されている（Wildbaum et al., J. Immunol. 161:6368, 1998）。
したがって、ＩＬ−１８は自己免疫性に対する新規治療薬の開発のための望まし
い標的である。

【０００６】 Taniguchi et al., J. Immunol. Methods 206:107には、７種のマウスおよび
６種のラットの抗−ヒトＩＬ−１８ｍＡｂが記載されており、それらは４つの異
なった抗原部位に結合する。マウスｍＡｂの１つ（＃１２５−２Ｈ）および６種
のラットｍＡｂは、ＩＬ−１８により誘導されるＫＧ−１細胞によるＩＦＮ−γ
産生を阻害し、ラットｍＡｂは＃１２５−２Ｈよりも１０倍低い中和活性を示す
。ウェスタンブロット分析により示されるように、３種のマウスｍＡｂは膜結合
ヒトＩＬ−１８と強くは能するが、ラットｍＡｂは反応しない。さらに、＃１２
５−２ＨおよびラットｍＡｂを用いる、ＩＬ−１８を検出するための酵素結合免
疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）が記載されている。このＥＬＩＳＡの検出限界は
１０ｐｇ／ｍｌである。

【０００７】 欧州特許出願ＥＰ０７１２９３１には、２種の抗−ヒトＩＬ−１８ｍＡｂ、Ｈ
１（ＩｇＧ１）およびＨ２（ＩｇＭ）が開示されている。ウェスタンブロット分
析により示されるように、両方のｍＡｂは膜結合ヒトＩＬ−１８と反応するが、
膜結合ヒトＩＬ−１２とは反応しない。Ｈ１はヒトＩＬ−１８を精製するための
免疫アフィニティークロマトグラフィープロトコルおよびヒトＩＬ−１８を測定
するためのＥＬＩＳＡに使用される。Ｈ２はヒトＩＬ−１８を測定するためのラ
ジオイムノアッセイに使用される。

【０００８】 中和ＩＬ−１８抗体はヒトにおける自己免疫疾患および関連徴候の緩和におい
て潜在的に有用である可能性がある。それゆえ、Ｔｈ１分化および増殖を抑制し
、かくして自己免疫疾患および関連徴候を抑制する、ヒトインターロイキン−１
８に対する中和モノクローナル抗体のごとき高アフィニティーＩＬ−１８アンタ
ゴニストに対する必要性が当該分野において存在する。

【０００９】発明の概要 第１の態様において、本発明は、ヒトインターロイキン−１８に特異的で、詳
細な説明に記載されたように約３．９ｘ１０^−１１Ｍと同等またはそれ未満の解
離定数により特徴づけられる結合アフィニティーを有するげっ歯類（例えば、ラ
ットおよびマウス）中和モノクローナル抗体を提供する。かかるモノクローナル
抗体の典型例はラットモノクローナル抗体２Ｃ１０ならびに１４Ｂ７および１３
Ｇ９のごときマウスモノクローナル抗体である。本発明のもう１つの態様は１９
５２２Ｃ１０（２）Ｆ２（１）Ａ１、１９５２１４Ｂ７（１）Ｈ１０および１８
７４１３Ｇ９（３）Ｆ１２のごときハイブリドーマである。

【００１０】 関連した態様において、本発明は、本発明のげっ歯類中和モノクローナル抗体
のＦｃ領域を欠失させることにより得られる、ヒトインターロイキン−１８に特
異的な中和ＦａｂフラグメントまたはそのＦ（ａｂ’）_２フラグメントを提供す
る。

【００１１】 さらにもう１つの関連態様において、本発明は、非ヒト中和モノクローナル抗
体（ｍＡｂ）由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、ヒトインターロイキン−
１８に特異的な改変抗体であって、ヒトインターロイキン−１８に対する約３．
９ｘ１０^−１１Ｍと同等またはそれ未満の解離定数およびそれをコードする核酸
分子により特徴づけられる改変抗体を提供する。改変抗体がヒト化抗体である場
合、非ヒト免疫グロブリン由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードする配列が
第１の免疫グロブリンパートナー中に挿入され、第１の免疫グロブリンパートナ
ーにおいて、その少なくとも１つ、好ましくはすべての相補性決定領域（ＣＤＲ
）が非ヒトモノクローナル抗体由来のＣＤＲにより置換されている。好ましくは
、第１の免疫グロブリンパートナーは第２の免疫グロブリンパートナーに作動可
能に連結され、第２の免疫グロブリンパートナーも同様に免疫グロブリン不変鎖
のすべてまたは一部を含んでいる。

【００１２】 関連態様において、本発明は、ヒトインターロイキン−１８に対する約３．９
ｘ１０^−１１Ｍと同等またはそれ未満の解離定数およびかかるＣＤＲをコードす
る核酸分子により特徴づけられる、非ヒト中和モノクローナル抗体（ｍＡｂ）由
来のＣＤＲを提供する。

【００１３】 さらにもう１つの態様において、ヒト重鎖および軽鎖不変領域ならびに非ヒト
中和モノクローナル抗体由来の重鎖および軽鎖可変領域を含むキメラ抗体であっ
て、ヒトインターロイキン−１８に対する約３．９ｘ１０^−１１Ｍと同等または
それ未満の解離定数により特徴づけられるキメラ抗体が提供される。

【００１４】 さらにもう１つの態様において、本発明は、１（またはそれ以上）の上記改変
抗体および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【００１５】 さらなる態様において、本発明は、ヒトに有効量の本発明の医薬組成物を提供
することによる、ヒトにおける過剰なＴｈ１産生に関連した症状、例えば自己免
疫疾患を治療する方法を提供する。

【００１６】 さらにもう１つの態様において、本発明は、非ヒト中和モノクローナル抗体（
ｍＡｂ）に由来し、ヒトインターロイキン−１８に対する約３．９ｘ１０^−１１ Ｍと同等またはそれ未満の解離定数により特徴づけられる改変抗体（例えば、加
工抗体、ＣＤＲ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）_２フラグメント、またはそれらのアナ
ログ）の組み換え製造方法、ならびにその製造において有用な成分を提供する。
これらの成分としては、上記のものをコードする単離核酸配列、組み換えプラス
ミドでトランスフェクションされた宿主細胞（好ましくは、哺乳動物細胞）中で
その発現を指令しうる選択された調節配列の制御下にある核酸配列を含む組み換
えプラスミド等がある。該製造方法は、改変抗体、好ましくはヒト化抗体が該細
胞中で発現されるような条件下で本発明のトランスフェクションされた宿主細胞
系を培養し、次いで、発現生成物をそれより単離することを含む。

【００１７】 本発明はさらにもう１つの態様において、患者から生物学的液体試料を得て、
ＩＬ−１８／抗体（モノクローナルまたは改変）複合体が形成される条件下で本
発明の抗体および改変抗体をかかる試料と接触させ、該ＩＬ−１８／抗体複合体
の存在または不存在を検知することを特徴とする、過剰なＴｈ１産生に関連した
症状の診断方法に関する。 本発明の他の態様および利点はさらに詳細な説明およびその好ましい具体例に
おいて記載される。

【００１８】発明の詳細な説明 本発明は、ラットモノクローナル抗体２Ｃ１０、マウスモノクローナル抗体１
３Ｇ９およびラットモノクローナル抗体１４Ｂ７において示されるような、ヒト
ＩＬ−１８結合特異性、中和活性、およびＩＬ−１８に対する高アフィニティー
により特徴づけられる種々の抗体、改変抗体およびそれらのフラグメントを提供
する。本発明の抗体は、新規中和抗体を得るための慣用的なハイブリドーマ法に
より調製された。これらの生成物は、ＩＬ−１８により媒介される疾病、例えば
、多発性硬化症（ＭＳ）リューマチ性関節炎（ＲＡ）、１型またはインスリン依
存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、および乾癬を包含する自己
免疫疾患を治療するための治療組成物および医薬組成物において有用である（Mo
smann and Sad, Immunol. Today 17:138, 1996）。これらの生成物は、ヒトにお
ける内在性ＩＬ−１８レベルまたは活性化細胞からex vivoにおいて放出された
ＩＬ−１８を測定（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））するこ
とによる、ＩＬ−１８により媒介される症状の診断においても有用である。

【００１９】 Ｉ．定義 「改変抗体（altered antibody）」は、改変された免疫グロブリンコーディン
グ領域によりコードされる蛋白をいい、選択された宿主細胞における発現により
得られるものであってもよい。かかる改変抗体は加工抗体（例えば、キメラまた
はヒト化抗体）または免疫グロブリン不変領域の全部または一部を欠くフラグメ
ント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ）_２等である。 「改変免疫グロブリンコーディング領域」は、本発明の改変抗体をコードする
核酸配列をいう。改変抗体がＣＤＲを移植した抗体またはヒト化抗抗体である場
合、非ヒト免疫グロブリン由来の相補性決定猟奇（ＣＤＲ）をコードする配列が
、ヒト可変フレームワーク配列を含む第１の免疫グロブリンパートナー中に挿入
される。第１の免疫グロブリンパートナーは第２の免疫グロブリンパートナーに
作動可能に連結されてもよい。 「第１の免疫グロブリンパートナー」は、元の（あるいは天然に存在する）Ｃ
ＤＲコーディング領域がドナー抗体のＣＤＲコーディング領域により置換されて
いるヒトフレームワークまたはヒト免疫グロブリン可変領域をコードする核酸配
列をいう。ヒト可変領域は免疫グロブリン重鎖、軽鎖（または両方の鎖）、それ
らのアナログまたは機能的フラグメントであってもよい。抗体（免疫グロブリン
）の可変領域中に存在するかかるＣＤＲ領域を、当該分野で知られた方法により
決定することができる。例えば、Kabat et al. (Sequences of Proteins of Imm unological Interest , 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Servic
es, National Institutes of Health (1987))にはＣＤＲ配置の規則が開示され
ている。さらに、ＣＤＲ領域／構造を同定するための有用なコンピュータープロ
グラムが知られている。 「中和抗体」は、特異的受容体へのヒトＩＬ−１８の結合を妨げることにより
、あるいはその受容体を介するＩＬ−１８のシグナリングを阻害することにより
ＩＬ−１８活性を阻害する抗体をいう。ＩＬ−１８中和アッセイにて測定される
ＩＬ−１８活性阻害において９０％有効、好ましくは９５％有効、最も好ましく
は１００％有効である場合にｍＡｂは中和的である。例えば、実施例１および表
１参照。 用語「高アフィニティー」は、光学的バイオセンサー分析により測定した場合
に、３．９ｘ１０^−１１Ｍに等しいかまたはそれ未満のヒトＩＬ−１８に対する
Ｋ_ｄにより特徴づけられる結合アフィニティーを有する抗体をいう。 「ヒトＩＬ−１８に対する結合特異性」は、マウスまたは他のＩＬ−１８より
もヒトＩＬ−１８に対する高いアフィニティーを意味する。 「第２の免疫グロブリンパートナー」は、第１の免疫グロブリンパートナーが
インフレームであるいは所望の慣用的なリンカー配列を用いることにより融合さ
れている（すなわち、作動するように連結されている）蛋白またはペプチドをコ
ードするもう１つのヌクレオチド配列をいう。好ましくは、それは免疫グロブリ
ン遺伝子である。第２の免疫グロブリンパートナーは、興味ある同じ（すなわち
、相同的−第１および第２の改変抗体が同じ源に由来する）または付加的な（す
なわち、異種）抗体の不変領域全体をコードする核酸配列を含んでいてもよい。
それは免疫グロブリン重鎖または軽鎖（または単一ポリペプチドの部分としての
両方の鎖）であってもよい。第２の免疫グロブリンパートナーは特定の免疫グロ
ブリンクラスまたはイソタイプには限定されない。さらに、第２の免疫グロブリ
ンパートナーは、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）_２中に見られるような免疫グロブリン
不変領域の部分（すなわち、適当なヒト不変領域またはフレームワーク領域の別
個の部分）を含んでいてもよい。かかる第２の免疫グロブリンパートナーは、例
えば、ファージディスプレイライブラリーの一部として宿主細胞外表面上に露出
した膜内在性蛋白をコードする配列、または分析もしくは診断的検出のための蛋
白、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ等をコー
ドする配列を含んでいてもよい。 用語Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆｄ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）_２はそれらの標準的な意味で
使用される（例えば、Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold
Spring Harbor Laboratory, (1988)参照）。

【００２０】 「加工抗体（engineered antibody）」は、選択されたアクセプター抗体の軽
鎖および／または重鎖可変ドメインの一部分が、選択されたエピトープに対して
特異性を有する１またはそれ以上のドナー抗体由来の類似部分により置換されて
いる１のタイプの改変抗体、すなわち、全長合成抗体をいう（例えば、抗体フラ
グメントに対立するものとしてのキメラまたはヒト化抗体）。例えば、かかる分
子は、未修飾軽鎖（またはキメラ軽鎖）に結合したヒト化重鎖（あるいはその逆
）により特徴づけられる抗体を包含する。加工抗体は、ドナー抗体の結合特異性
を保持するようなアクセプター抗体軽鎖および／または重鎖可変領域ドメインフ
レームワーク領域をコードする核酸配列の改変によっても特徴づけることができ
る。これらの抗体は、アクセプター抗体由来の１またはそれ以上（好ましくは、
すべて）のＣＤＲの、本明細書記載のドナー抗体由来のＣＤＲでの置換を含んで
いてもよい。 「キメラ抗体」は、アクセプター抗体由来の軽鎖および重鎖不変領域に結合し
たドナー抗体由来の天然に存在する可変領域（軽鎖および重鎖）を含む加工抗体
の１タイプをいう。 「ヒト化抗体」は、非ヒトドナー免疫グロブリン由来のＣＤＲを有する１のタ
イプの加工抗体をいい、分子の残りの免疫グロブリン由来の部分は１（またはそ
れ以上）のヒト免疫グロブリンである。さらに、フレームワーク支持残基が結合
アフィニティーを保持するように改変されていてもよい（see, e.g., Queen et
al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio /Technology, 9:421 (1991)）。 用語「ドナー抗体」は、その可変領域、ＣＤＲ、または他の機能的フラグメン
トもしくはそれらのアナログの核酸配列を第１の免疫グロブリンパートナーに与
える抗体（モノクローナルまたは組み換え型）をいい、その結果、改変された免
疫グロブリンコーディング領域が提供され、発現された改変抗体はドナー抗体に
特徴的な抗原特異性および中和活性を有する。本発明における使用に適した１の
ドナー抗体は、２Ｃ１０と命名された非ヒト中和モノクローナル抗体（すなわち
ラット）である。抗体２Ｃ１０は、高アフィニティー、ヒトＩＬ−１８特異的（
すなわち、マウスＩＬ−１８を認識しない）であり、適当なマウスＩｇＧ不変領
域上の配列番号：１および２の可変軽鎖ＤＮＡおよびアミノ酸配列、配列番号：
９および１０の可変重鎖ＤＮＡおよびアミノ酸配列をそれぞれ有するイソタイプ
ＩｇＧ_１Ｋの中和抗体として定義される。 用語「アクセプター抗体」は、その重鎖および／または軽鎖フレームワーク領
域ならびに／あるいはその重鎖および／または軽鎖不変領域をコードする核酸配
列のすべて（またはいずれかの部分、しかしすべての部分が好ましい）を第１の
免疫グロブリンパートナーに与える、ドナー抗体とは異種の抗体（モノクローナ
ルまたは組み換え型）をいう。好ましくは、ヒト抗体がアクセプター抗体である
。 「ＣＤＲ」は免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である抗体の相補性
決定領域アミノ酸配列と定義される。例えば、Kabat et al., Sequences of Pro teins of Immunological Interest , 4th Ed., U.S. Department of Health and
Human Services, National Institutes of Health (1987)参照。免疫グロブリン
の可変部分には３本の重鎖および３本の軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）がある
。よって、「ＣＤＲ」は３本の重鎖ＣＤＲすべて、または３本の軽鎖ＣＤＲすべ
て（あるいは適当な場合にはすべての重鎖およびすべての軽鎖ＣＤＲ）をいう。 ＣＤＲは抗原またはエピトープへの抗体の結合のための接触残基の大部分を提
供する。本発明において興味あるＣＤＲはドナー抗体可変重鎖および軽鎖配列に
由来するものであり、天然に存在するＣＤＲのアナログを包含し、また該アナロ
グは、それが由来したドナー抗体と同じ抗原結合特異性および／または中和能を
共有または保持している。 「抗原特異性または中和能を共有」とは、例えば、ｍＡｂ ２Ｃ１０は一定レ
ベルの抗原アフィニティーにより特徴付けられるが、適当な構造環境中において
２Ｃ１０の核酸配列によりコードされるＣＤＲがより低いまたはより高いアフィ
ニティーを有していてもよいことを意味する。それにもかかわらず、かかる環境
において２Ｃ１０のＣＤＲが２Ｃ１０が認識するのと同じエピトープを認識する
と考えられる。２Ｃ１０の典型的な軽鎖ＣＤＲは 配列番号：３ 配列番号：５ 配列番号：７ を包含し、 ２Ｃ１０の典型的な重鎖は 配列番号：１１ 配列番号：１３ および配列番号：１５ を包含する。

【００２１】 「機能的フラグメント」は、そのフラグメントが由来した抗体と同じ抗原結合
特異性および／または中和能を保持する部分的な重鎖または軽鎖可変配列（例え
ば、免疫グロブリン可変領域のアミノまたはカルボキシ末端における小さい欠失
物）である。 「アナログ」は、少なくとも１個のアミノ酸により修飾されたアミノ酸配列で
あり、該修飾は化学的なもの、あるいは数個（すなわち、１０個未満）のアミノ
酸の置換もしくは転位であってもよく、修飾は、未修飾配列の生物学的特性、例
えば、抗原特異性および高アフィニティーをアミノ酸配列に保持させるものであ
る。例えば、特定のエンドヌクレアーゼ制限部位をＣＤＲコーディング領域中ま
たはその付近に作成する場合に、置換により（サイレント）変異を構築すること
ができる。 アナログは対立遺伝子変異として生じるものであってもよい。「対立遺伝子変
異または修飾」は、本発明のアミノ酸またはペプチド配列をコードする核酸配列
中の変化である。かかる変異または修飾は遺伝学的コードの縮重によるものであ
ってもよく、あるいは所望特性を発揮するように慎重に加工されたものであって
もよい。これらの変異または修飾はコードされるアミノ酸配列の変化を生じさせ
るものであってもよく、そうでなくてもよい。 用語「エフェクター剤」は、改変抗体、および／またはドナー抗体の天然もし
くは合成の軽鎖または重鎖あるいはドナー抗体の他のフラグメントが慣用的な手
段により結合される非蛋白担体分子をいう。かかる非蛋白担体は、診断分野で使
用される慣用的担体、例えば、ポリスチレンまたは他のプラスチックビーズ、例
えば、ＢＩＡｃｏｒｅ［Pharmacia］システムに使用されるような多糖類を包含
し、あるいは医学分野で使用され、ヒトおよび動物に投与しても安全な他の非蛋
白物質を包含する。他のエフェクター剤は、重金属原子をキレートする大員環、
またはラジオアイソトープを包含する。かかるエフェクター剤、例えば、ポリエ
チレングリコールは、改変抗体の半減期を伸ばすことにおいても有用でありうる
。

【００２２】 ＩＩ．高アフィニティーＩＬ−１８モノクローナル抗体 本発明の抗体、改変抗体およびフラグメントの構築において使用するために、
非ヒト種（例えば、ウシ、ヒツジ、サル、ニワトリ、げっ歯類（例えば、マウス
およびラット））を用いて、ネイティブなヒトＩＬ−１８またはそれに由来する
ペプチドエピトープに対する所望免疫グロブリンを得る。慣用的なハイブリドー
マ法を用いて、ＩＬ−１８に対する非ヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマ細胞
系を得る。次いで、実施例セクションに記載されたようにして９６ウェルプレー
トに被覆したＩＬ−１８を用いて、あるいはストレプトアビジン被覆プレートに
結合したビオチン化ＩＬ−１８を用いて、かかるハイブリドーマを結合に関して
スクリーニングする。 本発明の１の典型的な高アフィニティー中和ｍＡｂは、下記実施例においてさ
らに詳細に説明する、キメラまたはヒト化抗体の生成に使用できるラット抗体ｍ
Ａｂ ２Ｃ１０である。２Ｃ１０ ｍＡｂは、約３．９ｘ１０^−１１ＭのＫ_ｄで
あるヒトＩＬ−１８に対する抗原結合特異性により特徴づけられる。

【００２３】 もう１つの望ましいドナー抗体はマウスｍＡｂ １３Ｇ９である。このｍＡｂ
はイソタイプＩｇＧ_１Ｋであることにより特徴づけられる。当該ｍＡｂのＩＬ−
１８に対する解離定数は約１２ｘ１０^−９Ｍである。 さらにもう１つの望ましいドナー抗体はラットｍＡｂ １４Ｂ７である。この
ｍＡｂのＩＬ−１８に対する解離定数は約１．５ｘ１０^−１０Ｍである。１４Ｂ
７はイソタイプＩｇＧ_１Ｋであることによっても特徴づけられる。

【００２４】 本発明は、１３Ｇ９、２Ｃ１０、１４Ｂ７、またはそれらの超可変（すなわち
、ＣＤＲ）配列の使用には限定されない。ヒトＩＬ−１８に対する約３．９ｘ１
０^−１１Ｍに等しいかまたはそれ未満の解離定数により特徴づけられる他のいず
れの高アフィニティーＩＬ−１８抗体ならびに対応抗−ＩＬ−１８ ＣＤＲをそ
れらに代えて使用してもよい。以下の説明において、ドナー抗体が１３Ｇ９、２
Ｃ１０、１４Ｂ７であると同定される場合、この称呼は例示のためのものであり
、説明を簡単にするためだけのものである。

【００２５】 ＩＩＩ．抗体フラグメント 本発明は、ヒトＩＬ−１８に対して指向されたｍＡｂ由来のＦａｂフラグメン
トまたはＦ（ａｂ’）_２フラグメントも包含する。これらのフラグメントはイン
ビボにおけるＩＬ−１８およびＴｈ−１により媒介される症状に対する防御剤と
して、あるいはインビトロにおいてＩＬ−１８診断薬の一部として有用である。
Ｆａｂフラグメントは軽鎖全体および重鎖のアミノ末端部分を含み、Ｆ（ａｂ’
）_２フラグメントはジスルフィド結合により結合した２つのＦａｂフラグメント
により形成されるフラグメントである。ｍＡｂ １３Ｇ９、２Ｃ１０、１４Ｂ７
、および他の類似の高アフィニティーＩＬ−１８結合抗体は、Ｆａｂフラグメン
トおよびＦ（ａｂ’）_２フラグメントの源を提供し、それらは慣用的手段、例え
ば、適当な蛋白分解酵素パパインおよび／またはペプシンを用いたｍＡｂの開裂
により、あるいは組み換え法により得ることができる。これらのＦａｂおよびＦ
（ａｂ’）_２はそれ自体、治療薬、予防薬または診断薬として、ならびに本明細
書記載の組み換えまたはヒト化抗体の生成において有用な可変領域およびＣＤＲ
配列を包含する配列のドナーとして有用である。

【００２６】 ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２フラグメントを、コンビナトリアルファージライ
ブラリー（例えば、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12:433-455 (1994)参
照）または免疫グロブリンチェインシャフリング（例えば、Marks et al., Bio/ Technology , 10:779-783 (1992)参照、出典明示により両方の文献を本明細書に
一体化させる）により構築することができ、それらの方法において、選択された
抗体（例えば、１３Ｇ９）由来のＦ_ｄまたはｖ_Ｈ免疫グロブリンが軽鎖免疫グロ
ブリンのレパートリー、ｖ_Ｌ（またはｖ_Ｋ）に結合されて、新規Ｆａｂが得られ
る。逆に、選択された抗体由来の軽鎖免疫グロブリンを重鎖免疫グロブリンのレ
パートリー、ｖ_Ｈ（またはＦ_ｄ）に結合させて、新規Ｆａｂを得てもよい。

【００２７】 ＩＶ．興味ある抗−ＩＬ−１８アミノ酸および核酸配列 上記ｍＡｂ ２Ｃ１０または他の抗体は、可変重鎖および／または軽鎖ペプチ
ド配列、フレ−ムワーク配列、ＣＤＲ配列、それらの機能的フラグメントおよび
アナログ、ならびにそれらをコードする核酸配列のごとき配列を与え、ドナー抗
体の抗原結合特異性により特徴づけられる種々の改変抗体の設計および取得にお
いて有用である。 一例として、本発明は、ＩＬ−１８ ｍＡｂ ２Ｃ１０由来の可変軽鎖および可
変重鎖配列ならびにそれらに由来する配列を提供する。

【００２８】 可変軽鎖および重鎖ペプチド配列をコードする、本発明の核酸配列、またはそ
のフラグメントもまた、ＣＤＲ、フレームワーク領域をコードする核酸配列中の
特異的変化の突然変異による誘導に、そして得られた修飾または融合核酸配列を
発現用プラスミド中に導入することに有用である。

【００２９】 遺伝学的コードの縮重を考慮して、ドナー抗体の抗原特異性を共有している本
発明の可変重鎖および軽鎖アミノ酸配列およびＣＤＲ配列ならびにそれらの機能
的フラグメントおよびアナログをコードする種々のコーディング配列を構築する
ことができる。第２の免疫グロブリンパートナーに作動するように結合される場
合、可変鎖ペプチド配列またはＣＤＲをコードする本発明の単離核酸配列、また
はそのフラグメントを用いて、本発明の改変抗体、例えば、キメラまたはヒト化
抗体、あるいは他の加工抗体を製造することができる。

【００３０】 本明細書記載の改変抗体および抗体の部分をコードする単離核酸配列のほかに
、他のかかる核酸配列が本発明に包含され、例えば、ネイティブなＣＤＲコーデ
ィング配列に相補的な配列またはＣＤＲコーディング領域付近の修飾ヒトフレー
ムワーク領域に相捕的な配列がある。有用なＤＮＡ配列としては、ストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件下［T. Maniatis et al, Molecular Cloning (A Laboratory Manual 参照］でＤＮＡ配列にハイブリダイゼーションする配列
等がある。１のかかるストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例は、
４ＸＳＳＣ、６５℃でのハイブリダイゼーション、次いで、０．１ＸＳＳＣ、６
５℃で１時間洗浄である。別の典型的なストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件は、５０％ホルムアミド、４ＸＳＳＣ、４２℃におけるものである。好
ましくは、これらのハイブリダイゼーションするＤＮＡ配列は少なくとも約１８
ヌクレオチドの長さであり、すなわち、ほぼＣＤＲのサイズである。

【００３１】 Ｖ．改変免疫グロブリン分子および改変抗体 改変免疫グロブリン分子は、キメラ抗体およびヒト化抗体のごとき加工抗体を
包含する改変抗体をコードしうる。所望の改変免疫グロブリンコーディング領域
は、ＩＬ−１８抗体、好ましくは本発明により提供されるような高アフィニティ
ー抗体の抗原特異性を有するペプチドをコードするＣＤＲコーディング領域であ
って、第１の免疫グロブリンパートナー（ヒトフレームワークまたはヒト免疫グ
ロブリン可変領域）中に挿入されたＣＤＲコーディング領域を含む。 好ましくは、第１の免疫グロブリンパートナーは第２の免疫グロブリンパート
ナーに作動するように連結される。第２の免疫グロブリンパートナーは上で定義
されたものであり、興味ある第２の抗体領域、例えば、Ｆｃ領域をコードする配
列を含んでもよい。第２の免疫グロブリンパートナーは、軽鎖および重鎖不変領
域がインフレームであるいはリンカー配列を用いることにより融合されている別
の免疫グロブリンをコードする配列を含んでもよい。ＩＬ−１８の機能的フラグ
メントまたはアナログに指向された加工抗体を、同じ抗体との結合促進を誘導す
るように設計してもよい。 第２の免疫グロブリンパートナーを、非蛋白担体分子を包含する上記のエフェ
クター剤と結合させてもよく、慣用的手段により、エフェクター剤に第２の免疫
グロブリンパートナーを作動するように連結することができる。 第２の免疫グロブリンパートナー、例えば抗体配列と、エフェクター剤との間
の融合または連結は、いずれかの適当な手段、例えば慣用的な共有結合またはイ
オン結合、あるいはヘテロ−二官能基架橋、例えばカルボジイミド、グルタルア
ルデヒド等によるものであってもよい。かかる方法は当該分野において知られて
おり、慣用的な化学および生化学の教科書に記載されている。 さらに、第２の免疫グロブリンパートナーとエフェクター剤との間に所望のス
ペースを提供するだけの慣用的なリンカー配列を、改変免疫グロブリンコーディ
ング領域中に構築してもよい。かかるリンカーの設計は当業者によく知られてい
る。 さらに、本発明の分子のためのシグナル配列を修飾して発現を促進してもよい
。

【００３２】 典型的な改変抗体は、ｍＡｂ ２Ｃ１０の抗原特異性を有する可変重鎖および
／または軽鎖ペプチドまたは蛋白配列、例えば、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ鎖を含む。さら
にもう１つの本発明の望ましい改変抗体は、ラット抗体分子２Ｃ１０の重鎖およ
び／または軽鎖の可変領域の少なくとも１つの、好ましくはすべてのＣＤＲを含
むアミノ酸配列により特徴づけられ、残りの配列はヒト起源のものであるか、ま
たはその機能的フラグメントもしくはアナログである。

【００３３】 さらなる具体例において、本発明の加工抗体は、それにさらなる剤が結合され
ていてもよい。例えば、組み換えＤＮＡ法の手順を用いて、完全抗体分子のＦｃ
フラグメントまたはＣＨ２ ＣＨ３ドメインが酵素または他の検出可能な分子（
すなわち、ポリペプチドエフェクターまたはレポーター分子）により置換されて
いる本発明の加工抗体を得てもよい。

【００３４】 例えばラット２Ｃ１０の抗原特異性を有する、ＣＤＲ含有配列とは異種の非免
疫グロブリンペプチド、蛋白またはそれらのフラグメントに、第２の免疫グロブ
リンパートナーを作動するように連結してもよい。発現されて得られる蛋白は、
抗−ＩＬ−１８抗原特異性および非免疫グロブリンの特性を示す可能性がある。
その融合パートナー特性は、例えば、別の結合ドメインまたは受容体ドメインの
ごとき機能的特性、あるいは融合パートナーがそれ自体治療蛋白である場合には
治療特性、あるいは付加的な抗原特性であってもよい。

【００３５】 本発明のもう１つの望ましい蛋白は、全長の重鎖および軽鎖を有する完全抗体
分子、あるいはＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２フラグメントのごときそれらの別個
のフラグメント、重鎖ダイマー、あるいはＦ_ｖのごときそれらの最小組み換えフ
ラグメント、あるいは１本鎖抗体（ＳＣＡ）、あるいは選択ドナーｍＡｂ、例え
ばｍＡｂ ２Ｃ１０と同じ特異性を有する他のいずれかの分子を含みうる。かか
る蛋白は改変抗体の形態で使用でき、あるいはその未融合形態で使用できる。

【００３６】 第２の免疫グロブリンパートナーがドナー抗体とは異なる抗体、例えばいずれ
かのイソタイプまたはクラスの免疫グロブリンフレームワークまたは不変領域に
由来する場合はいつでも、加工抗体が得られる。加工抗体は、１の起源、例えば
アクセプター抗体起源の免疫グロブリン（Ｉｇ）不変領域および可変フレームワ
ーク領域、およびドナー抗体、例えば本明細書記載の抗−ＩＬ−１８抗体に由来
する１またはそれ以上（好ましくはすべて）のＣＤＲを含みうる。さらに、改変
、例えばアクセプターｍＡｂ軽鎖および／または重鎖可変ドメインフレームワー
ク領域の核酸またはアミノ酸レベルでの欠失、置換、または付加を行って、ドナ
ー抗体の抗原結合特異性を保持させてもよい。

【００３７】 ＩＬ−１８ ｍＡｂの可変重鎖および／または軽鎖の一方（または両方）（所
望により説明したように修飾してもよい）あるいは１またはそれ以上の下記重鎖
または軽鎖ＣＤＲを用いるようにかかる加工抗体を設計する。加工抗体は中和的
であると考えられ、すなわち、望ましくはそれらはＩＬ−１８の受容体への結合
をブロックし、さらにＩＬ−１８依存性細胞の増殖をブロックまたは防止すると
考えられる。 かかる加工抗体は、選択されたヒト免疫グロブリンまたはサブタイプのフレー
ムワーク領域を含むヒト化抗体、あるいはＩＬ−１８抗体の機能的フラグメント
に融合したヒト重鎖および軽鎖不変領域を含むキメラ抗体を包含しうる。適当な
ヒト（または他の動物）のアクセプター抗体は、ドナー抗体のヌクレオチドおよ
びアミノ酸配列に対する相同性により、慣用的なデータベース、例えばＫＡＢＡ
Ｔ（登録商標）データベース、Los Alamosデータベース、およびSwiss Protein
データベースから選択されるものであってもよい。ドナー抗体のフレームワーク
領域に対する相同性（アミノ酸による）により特徴づけられるヒト抗体は、ドナ
ーＣＤＲの挿入のための重鎖不変領域および／または重鎖可変フレームワーク領
域を提供することに適する。軽鎖不変または可変フレームワーク領域を与えうる
適当なアクセプター抗体を同様の方法で選択してもよい。アクセプター抗体の重
鎖および軽鎖は同じアクセプター抗体に由来することは必要ないことに注意すべ
きである。

【００３８】 望ましくは、異種フレームワークおよび不変領域をヒト免疫グロブリンクラス
およびイソタイプから、例えばＩｇＧ（サブタイプ１から４まで）、ＩｇＭ、Ｉ
ｇＡ、およびＩｇＥから選択する。しかしながら、アクセプター抗体はヒト免疫
グロブリン蛋白配列だけを含む必要はない。例えば、ヒト免疫グロブリン鎖の一
部をコードするＤＮＡ配列がポリペプチドエフェクターまたはレポーター分子の
ごとき非免疫グロブリンアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列に融合されている
遺伝子を構築してもよい。 特に望ましいヒト化抗体の一例は、選択されたヒト抗体配列のフレームワーク
領域上に挿入された２Ｃ１０のＣＤＲを含むであろう。中和ヒト化抗体に関して
は、ＩＬ−１８抗体の重鎖および／または軽鎖可変領域由来の１、２または好ま
しくは３個のＣＤＲが選択ヒト抗体配列のフレームワーク領域中に挿入され、選
択ヒト抗体のネイティブなＣＤＲに置き換わる。

【００３９】 好ましくは、ヒト化抗体において、ヒト重鎖および軽鎖両方における可変ドメ
インが、１またはそれ以上のＣＤＲ置換により加工されている。６個すべてのＣ
ＤＲ、または６個未満のＣＤＲの種々の組み合わせを使用することが可能である
。好ましくは、６個すべてのＣＤＲが置換される。ヒトアクセプター抗体由来の
未修飾軽鎖を軽鎖として使用して、ヒト重鎖中のＣＤＲのみを置換することが可
能である。さらに別法として、慣用的な抗体データベースを用いることにより適
合する軽鎖を別のヒト抗体から選択してもよい。加工抗体の残りの部分はいずれ
の適当なアクセプターヒト免疫グロブリンに由来するものであってもよい。

【００４０】 よって、好ましくは加工ヒト化抗体は本来のヒト抗体またはそのフラグメント
の構造を有し、有効な治療用途、例えば、ヒトにおけるＩＬ−１８により媒介さ
れる炎症性疾患の治療、あるいは診断用途に必要な特性の組み合わせを有する。

【００４１】 もう１つの例として、加工抗体は２Ｃ１０の可変軽鎖領域のＣＤＲおよび１３
Ｇ９の可変重鎖領域のＣＤＲを含んでいてもよい。得られる抗体はｍＡｂ２Ｃ１
０と同じ抗原結合特異性および高アフィニティーにより特徴づけられるはずであ
る。

【００４２】 ドナー抗体の特異性および高アフィニティーに影響することなく可変ドメイン
のアミノ酸を変化させることにより加工抗体をさらに修飾できることが当業者に
より理解されるであろう（すなわち、アナログ）。重鎖および軽鎖アミノ酸を、
可変ドメインフレームワークまたはＣＤＲあるいはそれらの両方において他のア
ミノ酸により置換できると考えられる。

【００４３】 さらに、不変領域を改変して本発明の分子の選択特性を向上または低下させて
もよい。例えば、ダイマー化、Ｆｃ受容体への結合、あるいは補体結合または活
性化能（例えば、Angal et al., Mol. Immunol, 30:105-108 (1993), Xu et al.
, J. Biol. Chem, 269:3469-3474 (1994), Winter et al., EP 307,434-B参照）
。

【００４４】 キメラ抗体である改変抗体は、両鎖に関してヒト免疫グロブリン不変領域に結
合した、フレームワーク領域を包含する非ヒトドナー抗体重鎖および軽鎖可変領
域の全体を提供することにより、上記ヒト化抗体とは異なる。本発明のヒト化抗
体とは異なる付加的な非ヒト配列を保持するキメラ抗体はヒトにおいて有意な免
疫応答を誘発する可能性がある。 かかる抗体は、後で説明するようにＩＬ−１８により媒介される疾病の予防お
よび治療において有用である可能性がある。

【００４５】 ＶＩ．改変抗体および加工抗体の製造 好ましくは、以下のプロセスに従って、ｍＡｂ ２Ｃ１０または他の適当なド
ナーｍＡｂの可変軽鎖および／または重鎖配列およびＣＤＲ、ならびにそれらを
コードする核酸配列を、本発明の改変抗体、好ましくはヒト化抗体の構築に使用
する。同じまたは類似の方法を用いて本発明の他の具体例を得てもよい。 選択されたドナーｍＡｂ、例えばラット抗体２Ｃ１０を産生するハイブリドー
マを慣用的にクローニングし、当業者に知られた方法、例えばSambrook et al.,
(Molecular Cloning (A Laboratory Manual), 2nd edition, Cold Spring Harb
or Laboratory (1989)に記載された方法により、その重鎖および軽鎖可変領域の
ＤＮＡを得る。ドナーｍＡｂの結合特異性を保持させるのに必要な、少なくとも
ＣＤＲコーディング領域を含む２Ｃ１０の可変重鎖および軽鎖領域、ならびにア
クセプターｍＡｂの軽鎖および／または重鎖可変ドメインフレームワークのそれ
らの部分、ならびにヒト免疫グロブリン由来の抗体鎖の残りの免疫グロブリン由
来部分を、ポリヌクレオチドプライマーおよび逆転写酵素を用いて得ることがで
きる。既知データベースを用い、他の抗体と比較することによりＣＤＲコーディ
ング領域を同定する。 次いで、ラット／ヒトキメラ抗体を調製し、結合能に関してアッセイしてもよ
い。かかるキメラ抗体は、両鎖に関してヒトＩｇ不変領域に結合した非ヒトドナ
ー抗体Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域全体を含む。

【００４６】 ヒト化抗体はキメラ抗体由来のものであってもよく、あるいは好ましくは、重
鎖および軽鎖由来のドナーｍＡｂＣＤＲコーディング領域を選択重鎖および軽鎖
フレームワーク中に適当に挿入することにより合成される。別法として、標準的
な突然変異法を用いて本発明のヒト化抗体を調製してもよい。かくして得られた
ヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域およびドナーｍＡｂのＣＤＲコーディン
グ領域を含む。次いで、フレームワーク残基を処理してもよい。得られたヒト化
抗体を組み換え宿主細胞、例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯまたはミエローマ細胞におい
て発現させることができる。この方法を他の適当なＩＬ−１８特異的中和高アフ
ィニティー非ヒト抗体に使用して、他のヒト化抗体を調製してもよい。

【００４７】 これらのコーディング配列を、宿主細胞における複製および発現ならびに／あ
るいは宿主細胞からの分泌を制御しうる慣用的な調節制御配列に作動するように
連結された改変抗体のものと置きかえることにより、慣用的な発現ベクターまた
は組み換えプラスミドを製造することができる。調節配列は、プロモーター配列
、例えば、ＣＭＶプロモーター、および他の既知抗体由来であってもよいシグナ
ル配列を包含する。同様に、相捕的な抗体軽鎖または重鎖をコードするＤＮＡ配
列を有する第２の発現ベクターを製造することができる。好ましくは、各ポリペ
プチド鎖が機能的に発現されることが可能であるかぎり、この第２の発現ベクタ
ーは、コーディング配列および選択可能マーカーに関する以外は第１の発現ベク
ターと同じである。別法として、改変抗体の重鎖および軽鎖コーディング配列が
単一ベクター上にあってもよい。

【００４８】 選択宿主細胞を、慣用的方法により、第１および第２のベクターで同時トラン
スフェクションして、組み換えまたは合成軽鎖および重鎖の両方を含む本発明の
トランスフェクションされた宿主細胞を得る。次いで、慣用的方法によりトラン
スフェクションされた細胞を培養して、本発明の加工抗体を得る。両方の組み換
え重鎖および／または軽鎖の結合を含むヒト化抗体を、ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡ
のごとき適当なアッセイにより培養物からスクリーニングする。同様の慣用的方
法を用いて本発明の他の改変抗体および分子を構築してもよい。

【００４９】 本発明の方法および構築物の構築に使用されるクローニングおよびサブクロー
ニング工程に適したベクターは当業者により選択されうる。例えば、慣用的なｐ
ＵＣシリーズのクローニングベクターを用いてもよい。使用される１のベクター
はｐＵＣ１９であり、Amersham（Buckinghamshire）またはPharmacia（Uppsala,
Sweden）のごときサプライハウス（supply houses）から市販されている。さら
に、容易に複製可能なベクターは豊富なクローニング部位および選択可能遺伝子
（例えば、抗生物質耐性）を有し、容易に取り扱いでき、クローニングに使用で
きる。よって、クローニングベクターの選択は本発明の制限因子ではない。 同様に、本発明の加工抗体の発現に使用するベクターはいずれかの慣用的ベク
ターから当業者により選択されうる。またベクターは、選択された宿主細胞中で
の異種ＤＮＡの複製および発現を指令する選択された調節配列（ＣＭＶプロモー
ターのごとき）を含む。これらのベクターは、加工抗体または改変免疫グロブリ
ンコーディング領域をコードする上記ＤＮＡ配列を含む。さらに、ベクターは、
操作容易のために所望制限部位を挿入することにより修飾された選択免疫グロブ
リン配列を含んでいてもよい。

【００５０】 異種ＤＮＡ配列、例えば、哺乳動物ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺
伝子の発現を増幅するのに適した遺伝子により、発現ベクターを特徴づけてもよ
い。他の好ましいベクター配列は、ウシ成長ホルモン（ＧＢＨ）およびベータグ
ロブリンプロモーター配列（betaglopro）に由来するようなポリＡシグナル配列
を包含する。本発明において有用な発現ベクターを、当業者によく知られた方法
により合成してもよい。 かかるベクターの成分、例えば、レプリコン、選択遺伝子、エンハンサー、プ
ロモーター、シグナル配列等を、市販または天然ソースから得てもよく、あるい
は選択宿主における組み換えＤＮＡ産物の発現および／または分泌を起こさせる
際に使用する既知方法により合成してもよい。哺乳動物、細菌、昆虫、酵母およ
び真菌用の当該分野にて知られている他の適当な発現ベクターを、この目的のた
めに選択してもよい。

【００５１】 また本発明は、加工抗体のコーディング配列または改変免疫グロブリン分子の
コーディング配列を含む組み換えプラスミドでトランスフェクションされた細胞
系を包含する。宿主細胞これらのクローニングベクターのクローニングおよび他
の操作に有用な宿主細胞も慣用的なものである。しかしながら、最も望ましくは
、Ｅ．ｃｏｌｉの種々の株に由来する細胞を、本発明の改変抗体の構築における
クローニングベクターの複製および他の工程に使用する。 本発明の加工抗体または改変抗体の発現に適した宿主細胞は、好ましくは、Ｃ
ＨＯ、ＣＯＳ、線維芽細胞（例えば、３Ｔ３）、および骨髄細胞系のごとき哺乳
動物細胞であり、より好ましくはＣＨＯまたは骨髄細胞系である。ヒト細胞を用
いてもよく、かくして、ヒトの糖鎖付加パターンで分子を修飾することができる
。別法として、他の真核細胞系を用いてもよい。適当な哺乳動物細胞および形質
転換、培養、増幅、スクリーニングおよび生成物の製造および精製のための方法
の選択は当該分野において知られている。例えば、上で引用したSambrookらの文
献参照。 細菌細胞が本発明の組み換えＦａｂの発現に適した宿主細胞であるとわかるか
もしれない（例えば、Pluckthun, A., Immunol. Rev., 130:151-188 (1992)参照
）。しかしながら、細菌細胞にて発現された蛋白が変性し、あるいは非適切に折
り畳まれており、あるいは糖鎖付加されていない形態である傾向があるので、細
菌細胞において生成した組み換えＦａｂを抗原結合能の保持に関してスクリーニ
ングされなければならないであろう。細菌細胞により発現された分子が正しく折
り畳まれた形態であるならば、その細菌細胞は望ましい宿主であろう。例えば、
発現に使用される種々のＥ．ｃｏｌｉ株がバイオテクノロジーの分野において宿
主細胞としてよく知られている。種々のＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ、他の枯草菌等の株もこの方法に使用してもよい。 所望ならば、当業者に知られた酵母細胞株宿主細胞として使用可能であり、さ
らにならびに昆虫細胞、例えば、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａおよびＬｅｐｉｄｏｐｔ
ｅｒａならびにウイルス発現系も使用可能である。例えば、Miller et al., Gen etic Engineering , 8:277-298, Plenum Press (1986)およびその中で引用された
文献参照。 本発明のベクターを構築することのできる一般的方法、本発明の宿主細胞を得
るために必要なトランスフェクション方法、およびかかる宿主細胞から本発明の
改変抗体を得るのに必要な方法はすべて慣用的な方法である。同様に、製造され
た場合、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフ
ィー、ゲル電気泳動等を包含する当該分野の標準的方法によって本発明の改変抗
体を細胞培養内容物から精製してもよい。かかる方法は当該分野の技術に包含さ
れ、本発明を制限するものではない。

【００５２】 ヒト化抗体の発現のためのもう１つの方法は、米国特許第４８７３３１６号に
記載されたようなトランスジェニック動物における発現を用いるものであっても
よい。この方法は、遺伝子導入により哺乳動物中に導入された場合にメスの動物
に所望組み換え蛋白を乳中に産生させる、動物のカゼインプロモーターを用いる
発現系に関連している。 所望方法により発現されたならば、適当なアッセイを用いて加工抗体をインビ
トロにおいて活性について試験する。現在慣用的となっているＥＬＩＳＡアッセ
イフォーマットを用いてＩＬ−１８への加工抗体の定性的および定量的結合を評
価する。さらに他のインビトロでのアッセイを用いて、ヒトでの臨床研究を行う
前に中和能を確かめて、通常のクリアランス機構にかかわらず体内で加工抗体が
維持されることを評価してもよい。

【００５３】 ヒト化抗体の製造に関して説明した一般的方法の後に、当業者は、本明細書記
載の他のドナーＩＬ−１８抗体、可変領域配列およびＣＤＲペプチドからヒト化
抗体を構築してもよい。加工抗体のレシピエントにより「自己」であると潜在的
に認識される可変領域フレームワークを用いて加工抗体を得ることができる。可
変領域フレームワークに対する小さな修飾を行って、レシピエントに対する免疫
原性を有意に増大させずに抗原結合を大幅に増強させることができる。かかる加
工抗体はＩＬ−１８により媒介される症状を効果的に治療しうる。かかる抗体は
かかる症状の診断にも有用でありうる。

【００５４】 ＶＩＩ．治療的／予防的使用 本発明は、本明細書記載の１またはそれ以上の加工抗体または改変抗体を包含
する有効量の抗体またはそれらのフラグメントを投与することを特徴とする、Ｍ
Ｓのごとき自己免疫関連徴候を有するヒトを治療する方法にも関する。 本発明の分子の使用により誘導される治療的応答は、ヒトＩＬ−１８への結合
、その結果としてのＴｈ１刺激のブロックにより生じる。よって、本発明の分子
は、治療用途に適した調合物および処方中にある場合、ＭＳ、ＲＡ、ＩＤＤＭ、
ＩＢＤおよび乾癬（これらに限らない）のごとき自己免疫疾患を有するヒトにと
り非常に望ましい。

【００５５】 本発明の治療薬は、２日ないし６ヶ月、あるいは適当期間の自己免疫症状の治
療にとり望ましいものであると考えられる。例えば、ＭＳ等の治療の場合には長
期の治療が望ましい。治療薬の用量および投与期間はヒト循環系における本発明
の分子の相対的持続時間に関連し、治療すべき症状および患者の一般的健康状態
に応じて当業者により調節されうる。 本発明の治療薬の投与モードは、薬剤を宿主にデリバリーするいすれの適当な
経路であってもよい。本発明の改変抗体、抗体、加工抗体、およびそれらのフラ
グメント、ならびに医薬組成物は、特に非経口投与、すなわち、皮下、筋肉内、
静脈内、または鼻腔内投与に有用である。

【００５６】 医薬上許容される担体中の有効成分としての有効量の本発明の加工（例えば、
ヒト化）抗体を含む医薬組成物として本発明の治療薬を調合してもよい。本発明
の予防薬において、好ましくは生理学的ｐＨに緩衝化された加工抗体を含む水性
懸濁液または溶液であって、容易に注射可能なものが好ましい。通常には、非経
口投与用組成物は、医薬上許容される担体、好ましくは水性担体に溶解された本
発明の加工抗体の溶液またはそのカクテルを含む。種々の水性担体を用いること
ができ、例えば、０．４％セイライン、０．３％グリシン等がある。これらの溶
液は滅菌されており、通常には、粒子状物質を含まない。慣用的な、よく知られ
た滅菌方法（例えば、濾過）によりこれらの溶液を滅菌してもよい。組成物はｐ
Ｈ調節剤および緩衝剤等のごとき生理学的条件に近づけるのに必要な医薬上許容
される補助的物質を含んでいてもよい。かかる医薬処方中の本発明の抗体の濃度
は様々であり、すなわち、約０．５％未満から、通常には約１％または少なくと
も約１％ないし１５または２０％（重量％）であり、選択された個々の投与モー
ドに応じて、主に液体の体積、粘度等に基づいて選択されよう。

【００５７】 よって、筋肉内注射用の本発明の医薬組成物を、１ｍＬの滅菌緩衝化水、およ
び約１ｎｇないし約１００ｍｇ、例えば、約５０ｎｇないし約３０ｍｇあるいは
より好ましくは５ｍｇないし約２５ｍｇの本発明の加工抗体を含むように調製す
ることができる。同様に、静脈輸液用の本発明の医薬組成物を、約２５０ｍｌの
リンゲル溶液、および約１ないし約３０ｍｇ、好ましくは５ｍｇないし約２５０
ｍｇの本発明の加工抗体を含むように調製することができる。非経口的に投与可
能な組成物を調製するための実際の方法は当業者によく知られているかあるいは
明らかであろうし、例えば、Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed.,
Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvaniaにおいてより詳細に記載され
ている。

【００５８】 本発明の治療薬は、医薬調合物中にある場合には１回分の剤形として提供され
るのが好ましい。適当な治療上有効量は当業者により容易に決定されうる。ヒト
または他の動物における炎症性疾患を有効に治療するためには、体重７０ｋｇあ
たり約０．１ｍｇないし約２０ｍｇの本発明の蛋白または抗体である１回分の用
量を非経口的に、好ましくはｉ．ｖ．（静脈内）またはｉ．ｍ．（筋肉内）投与
すべきである。必要ならば、疾病期間中に医師により適宜選択される適当な時間
間隔をおいてかかる用量を繰り返し投与してもよい。

【００５９】 本発明の改変抗体および加工抗体を、例えば、ＩＬ−１８により媒介される疾
病の決定あるいはかかる疾病の治療進行を追跡するための診断法において使用し
てもよい。血清、血漿または他の適当な組織中のＩＬ−１８レベルまたは培養中
のヒト細胞による放出を測定するためのＥＬＩＳＡおよび慣用的アッセイフォー
マット用に、診断試薬としてこれらの改変抗体を慣用的に標識してもよい。改変
抗体が使用されるアッセイの性質は慣用的なものであり、本発明を制限するもの
ではない。

【００６０】 よって、本発明の１の具体例は、患者における過剰なＴｈ１ Ｔ細胞の産生に
関連した自己免疫疾患および他の症状の診断の助けとなる方法に関するものであ
り、該方法は、該患者から得た試料（血漿または組織）中のヒトＩＬ−１８量を
決定し、次いで、該決定された量を正常集団におけるヒトＩＬ−１８平均量と比
較し、そのことにより、患者の試料中の有意に上昇したＩＬ−１８量の存在が過
剰なＴｈ１ Ｔ細胞集団に関連した自己免疫疾患および他の症状を示すことを特
徴とする。

【００６１】 本明細書記載の抗体、改変抗体またはそれらのフラグメントを保存のために凍
結乾燥させ、使用前に適当な担体で復元することができる。この方法は、慣用的
な免疫グロブリンに関して有効であることが示されており、当該分野で知られた
凍結乾燥および復元方法を用いることができる。

【００６２】 下記実施例は、典型的な加工抗体の構築および適当なベクターおよび宿主細胞
におけるその発現を包含する本発明の種々の態様を説明するものであり、本発明
の範囲を限定するものと解してはならない。すべてのアミノ酸は慣用的な３文字
または１文字コードにより示される。すべての必用な制限酵素、プラスミド、お
よび他の試薬ならびに材料は、特記しないかぎり、市販ソースから得た。すべて
の一般的クローニングおよび他の組み換えＤＮＡ法は上で引用したT. Maniatis
らの文献あるいはその第２版（eds. Sambrook et al., (1989)、同じ出版社によ
る（「Sambrook」らという））において行われたものと同じであった。

【００６３】実施例１−ＩＬ−１８に対するｍＡｂの製造 Ａ．モノクローナル抗体の生成 マウス（Ｂａｌｂ／ｃおよびＣ５７ＢＬ／６のＦ１雑種）またはラット（Spra
gue Dawley）を、アジュバント中の３０μｇの組み換えＩＬ−１８で免疫し、４
週間後にアジュバント中の３０μｇのＩＬ−１８で免疫した。Ｌ−１８に対する
良好な血清抗体力価に基づいて、さらに１０−３０μｇのＩＬ−１８で動物を免
疫した（セイライン中、腹腔内注射）。最後の免疫から３日後に脾臓切除を行っ
た。マウスまたはラットの脾臓細胞を用いて、標準的方法（Zola, H.Ed., Monoc
lonal Antibodies, CRC Press Inc. 1987）によりハイブリドーマを調製した。
限界希釈法により陽性ハイブリドーマをクローン化した。 Ｂ．ｍＡｂの生成 それぞれ製造者の指示を用いてProsepA（Bio Processing, Consett, UK）クロ
マトグラフィーによりｍＡｂを精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによれば、ｍＡｂは
９５％よりも高い純度であった。 Ｃ．Ｍａｂのイソタイピング 市販キット（Zymed, Amersham）を用いてすべてのラットおよびマウスのｍＡ
ｂのイソタイプを調べたところ、ＩｇＧ１カッパであることがわかった。

【００６４】実施例２−アッセイ Ａ．ＩＬ−１８のビオチン化 Molecular Probes Inc.から購入したキットを用いてビオチン化試薬の割合を
１０：１としてＩＬ−１８をビオチン化した。ビオチン化はＩＬ−１８の生物学
的活性に影響しなかった。 Ｂ．ハイブリドーマスクリーニングアッセイ ４℃において９６ウェルプレートをストレプトアビジン（ＰＢＳ中２μｇ／ｍ
ｌ，１００μｌ／ウェル）で一晩被覆した。次いで、溶液を吸引し、室温におい
てＴＢＳバッファー（50mM Tris, 150 mM NaCl, 0.02% Kathon, pH 7.4）中の２
５０μｌ／ウェルの１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で非特異的結合部位を５
−６０分ブロックした。この工程およびその後の工程を行った後、洗浄バッファ
ー（10 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.05% Tween 20, 0.02% Kathon, pH 7.4）でプ
レートを４回洗浄した。アッセイバッファー（ＴＢＳバッファー中 0.5% BSA, 0
.05% ウシガンマグロブリン, 0.01% Tween 40, 20μMジエチレントリアミン五酢
酸 in TBS buffer）中のビオチンＩＬ−１８（１００ｎｇ／ｍｌ）１００μｌを
各ウェルに添加し、振盪インキュベーター中でプレートを室温にて３０分インキ
ュベーションした。５０μｌのハイブリドーマ培地を各ウェルに添加し、次いで
、５０μｌのアッセイバッファーを添加し、振盪インキュベーター中、室温で６
０分インキュベーションした。その後、アッセイバッファー中の０．５μｇ／ｍ
ｌ Ｅｕ^３＋標識抗−マウスまたは抗−ラット抗体１００μｌを各ウェルに添加
した。最後に、２００μｌ／ウェルのエンハンサー（Wallac）を添加し、室温で
５分間インキュベーションし、時間とともに変化する蛍光を測定した。１００Ｋ
よりも大きいカウントを有するハイブリドーマを２４ウェルプレートにて増殖さ
せた。 Ｃ．イムノアッセイ 得られた抗−ＩＬ−１８ Ｍａｂの特異性を調べるために、上記のごとく９６
ウェルプレートを被覆し、ブロックし、ビオチンＩＬ−１８とともにインキュベ
ーションした。その後のすべてのインキュベーションを室温において振盪インキ
ュベーターで行った。ウェルを洗浄後、５０μｌのＩＬ−１８（３μｇ／ｍｌ）
またはアッセイバッファーおよび５０μｌのＭａｂを添加し、６０分インキュベ
ーションした。ウェルを洗浄後、アッセイバッファー中０．５μｇ／ｍｌ Ｅｕ
^３＋標識抗−マウスまたは抗−ラット抗体１００μｌを６０分間添加し、ウェル
を洗浄し、次いで、１００μｌ／ウェルののエンハンサー（Wallac）を添加し、
室温で５分間インキュベーションし、時間とともに変化する蛍光を測定した。す
べての陽性ハイブリドーマはＩＬ−１８での結合置換を示した。 Ｄ．中和アッセイ Ficol-Paque（Pharmacia）グラジエントを用いて健康なドナーからＰＢＭＣを
単離し、９６ウェル中、ＩＬ−１８（５ｎｇ／ｍｌ）および／またはＭａｂの存
在下において、１μｇ／ｍｌのＣｏｎＡ（Sigma）を含有する１０％ ＤＭＥＭ／
Ｆ１２培地中にて培養した。３７℃、空気中５％ ＣＯ_２、湿度９０％にて１８
時間培養後、２５μｌの培地を除去し、インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）濃
度をイムノアッセイにより測定した。３つの実験の平均値から得た結果を表Ｉに
まとめる。 Ｅ．モノクローナル抗体のアフィニティー測定 ３０μｌ／分の流速を用いてＢＩＡｃｏｒｅ光学的バイオセンサー（Pharmaci
a Biosensor, Uppsala, Sweden）にて精製ｍＡｂのアフィニティーを測定した。
すでに説明されている関係（Karlsson et al, J. Immunol. Meth., 145:229-240
(1991)）（出典明示により本明細書に一体化させる）を用いて反応論的データ
を評価した。ｍＡｂ（HBS バッファー, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.01% Twee
n-20, pH 7.4で希釈）をウサギ抗−マウスＩｇＧ Ｆｃまたはヤギ抗−ラットＩ
ｇＧ Ｆｃ表面に注入し、次いで、バッファーを流し、ＲＵを記録した。次いで
、ＩＬ−１８（ＨＢＳバッファーで希釈）を１８０秒間注入し、その後バッファ
ーを５００秒間流し、ＲＵを記録した。０．１Ｍリン酸を注入することによりセ
ンサーチップ表面を再生した。ＢＩＡｃｏｒｅソフトウェアを用いて結合速度（
Ｋａｓｓ）および解離速度（Ｋｄｉｓｓ）を計算し、これらをまとめて、ｍＡｂ
１３Ｇ９について１２ｘ１０^−９Ｍ、ｍＡｂ ２Ｃ１０について３．９ｘ１０^{− １１} Ｍ、そしてｍＡｂ １４Ｂ７について１．５ｘ１０^−１０Ｍの平衡定数（Ｋ
_Ｄ）を計算した。表Ｉ参照。 Ｆ．モノクローナル抗体のエピトープ分析 精製Ｍａｂのエピトープ分析をＢＩＡｃｏｒｅにて測定した。１０μｌ／分の
流速を用いて、第１の抗体（ＨＢＳで希釈）をウサギ抗−マウスＩｇＧ Ｆｃま
たはヤギ抗−ラットＩｇＧ Ｆｃ表面に注入し、次いで、ＩＬ−１８を２４０秒
間注入、ブロッキングＭａｂを４８秒間注入、そして第２のＭａｂを２４０秒間
注入した。０．１Ｍリン酸を注入することにより表面を再生し、各注入後にＲＵ
を記録した。Ｍａｂ １３Ｇ９、２Ｃ１０および１４Ｂ７は類似または重複した
エピトープを有することがわかった。表Ｉ ヒトＩＬ−１８と反応するｍＡｂのアフィニティーおよび中和活性 mAb Kd (pM)a 中和 IC50 (nM)b 2C10 (ラット) 39 0.1 14B7 (ラット) 150 0.2 13G9 (マウス) 12000 3.0 a 光学的バイオセンサー(BIAcore)分析により決定(25℃) b 5ng/mlヒトIL-18に応答したPBMCのIFNガンマ産生に対する阻害(nMで示す)

【００６５】実施例３−ＣＤＲ配列 遺伝子クローニングおよび配列分析 以下に簡単に説明する標準的な分子生物学的方法を用いて可変重鎖および軽鎖
遺伝子をハイブリドーマ細胞からクローン化した。製造者の指示に従ってＴＲＩ
ｚｏｌ試薬（Life Technologies Cat. # 15596-026）を用いてハイブリドーマ細
胞から全ＲＮＡを単離した。製造者（Boehringer Mannheim Cat. No. 1483-188
）の指示に従ってポリ−ｄＴオリゴヌクレオチドをプライミングに使用してＲＴ
−ＰＣＲを行ってＲＮＡを逆転写した。第１鎖ｃＤＮＡ合成後、３’不変領域特
異的プライマーおよび縮重５’プライマーを用いて重鎖および軽鎖Ｖ領域をＰＣ
Ｒ増幅した。すでに決定されている種々の重鎖または軽鎖領域のＮ末端アミノ酸
配列をコードするように縮重５’プライマー配列を設計した。各ＰＣＲ増幅によ
り複数クローンから全長配列を得て、並置比較してコンセンサスを得た。したが
って、重鎖および軽鎖両方のＤＮＡ配列の最初の１７塩基は得られたＰＣＲプラ
イマーであるが、翻訳蛋白配列はネイティブ（native）なものであった。 ハイブリドーマ抗体２Ｃ１０、１３Ｇ９、および１４Ｂ７のヌクレオチドおよ
び推定アミノ酸配列を図１−６に示す。各場合において、ＣＤＲおよびそれらを
コードするヌクレオチド配列をボックスで囲んだ。縮重プライマー配列は太字で
ある。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１（配列番号：１および２）は、ラット抗体２Ｃ１０の軽鎖可
変領域を示す。図１は両方の鎖に関する配列データを含む。箱に入れた領域はＣ
ＤＲ（配列番号：３−８）を示す。太字の領域は縮重プライマー配列を示す。

【図２】 図２（配列番号：９および１０）は、ラット抗体２Ｃ１０の重鎖
可変領域を示す。図２は両方の鎖に関する配列データを含む。箱に入れた領域は
ＣＤＲ（配列番号：１１−１６）を示す。太字の領域は縮重プライマー配列を示
す。

【図３】 図３（配列番号：１７および１８）は、マウス抗体１３Ｇ９の軽
鎖可変領域を示す。図３は両方の鎖に関する配列データを含む。箱に入れた領域
はＣＤＲ（配列番号：１９−２４）を示す。太字の領域は縮重プライマー配列を
示す。

【図４】 図４（配列番号：２５および２６）は、マウス抗体１３Ｇ９の重
鎖可変領域を示す。図４は両方の鎖に関する配列データを含む。箱に入れた領域
はＣＤＲ（配列番号：２７−３２）を示す。太字の領域は縮重プライマー配列を
示す。

【図５】 図５（配列番号：３３および３４）は、ラット抗体１４Ｂ７の軽
鎖可変領域を示す。図５は両方の鎖に関する配列データを含む。箱に入れた領域
はＣＤＲ（配列番号：３５−４０）を示す。太字の領域は縮重プライマー配列を
示す。

【図６】 図６（配列番号：４１および４２）は、ラット抗体１４Ｂ７の重
鎖可変領域を示す。図６は両方の鎖に関する配列データを含む。箱に入れた領域
はＣＤＲ（配列番号：４３−４８）を示す。太字の領域は縮重プライマー配列を
示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 19/02 Ａ６１Ｐ 25/00 25/00 37/00 37/00 Ｃ０７Ｋ 16/24 Ｃ０７Ｋ 16/24 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｐ Ｃ１２Ｎ 5/10 33/577 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 33/577 Ｃ１２Ｒ 1:91 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＣ (Ｃ１２Ｎ 5/10 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，Ｈ Ｒ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ ，ＹＵ，ＺＡ (71)出願人 スミスクライン ビーチャム パブリック リミテッド カンパニー ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ｐ．ｌ．ｃ． イギリス国 ティダブリュ８ ９ジーエ ス，ミドルセックス，ブレントフォード， グレート ウェスト ロード 980 (72)発明者 イェン・セン・ホ アメリカ合衆国19312ペンシルベニア州バ ーウィン、オールド・ステイト・ロード 362番 (72)発明者 スティーブン・ディ・ホームズ イギリス、シーエム19・５エイディ、エセ ックス、ハーロウ、ザ・ピナクルズ、コー ルドハーバー・ロード (72)発明者 アレキサンダー・エイチ・テイラー アメリカ合衆国19341ペンシルベニア州エ クストン、ウエストフィールド・ドライブ 522番 (72)発明者 シェリン・エス・アブデル−メガイド アメリカ合衆国19341ペンシルベニア州エ クストン、オータム・ドライブ236番 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA44 CA04 CA05 HA15 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA91X AB04 AB05 CA25 CA44 CA46 4C085 AA14 BB17 BB31 CC23 DD62 EE01 GG02 GG03 GG04 4H045 AA11 BA10 CA40 DA76 EA22 EA50 FA72

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒトインターロイキン−１８に特異的で、３．９ｘ１０^{−１ １} Ｍと同等またはそれ未満の解離定数により特徴づけられる結合アフィニティー
   を有するげっ歯類中和モノクローナル抗体。
2. 【請求項２】 ラットモノクローナル抗体である請求項１記載のモノクロー
   ナル抗体。
3. 【請求項３】 マウスモノクローナル抗体である請求項１記載のモノクロー
   ナル抗体。
4. 【請求項４】 配列番号：１の軽鎖アミノ酸配列および配列番号：９の重鎖
   アミノ酸配列を含む請求項２記載のモノクローナル抗体。
5. 【請求項５】 配列番号：１７の軽鎖アミノ酸配列および配列番号：２５の
   重鎖アミノ酸配列を含む請求項３記載のモノクローナル抗体。
6. 【請求項６】 配列番号：３３の軽鎖アミノ酸配列および配列番号：４１の
   重鎖アミノ酸配列を含む請求項２記載のモノクローナル抗体。
7. 【請求項７】 ２Ｃ１０、１４Ｂ７または１３Ｇ９の同定特性を有する請求
   項１記載のモノクローナル抗体。
8. 【請求項８】 請求項４のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
9. 【請求項９】 請求項５のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
10. 【請求項１０】 請求項６のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
    。
11. 【請求項１１】 細胞系１９５２２Ｃ１０（２）Ｆ２（１）Ａ１、１９５２
    １４Ｂ７（１）Ｈ１０および１８７４１３Ｇ９（３）Ｆ１２の同定特性を有する
    ハイブリドーマ。
12. 【請求項１２】 請求項１のモノクローナル抗体のＦｃ領域を欠失させるこ
    とにより得られる中和ＦａｂフラグメントまたはそのＦ（ａｂ’）_２フラグメン
    ト。
13. 【請求項１３】 重鎖および軽鎖を含む改変抗体であって、該重鎖および軽
    鎖のフレームワーク領域が少なくとも１の選択された抗体に由来し、該各鎖の相
    補性決定領域のアミノ酸配列が請求項１のモノクローナル抗体に由来するもので
    ある改変抗体。
14. 【請求項１４】 アミノ酸配列が下記のもの： (a)配列番号：３ (b)配列番号：５ (c)配列番号：７ (d)配列番号：１９ (e)配列番号：２１ (f)配列番号：２３ (g)配列番号：３５ (h)配列番号：３７ (i)配列番号：３９ からなる群より選択されるものである免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域（ＣＤ
    Ｒ）。
15. 【請求項１５】 アミノ酸配列が下記のもの： (a)配列番号：１１ (b)配列番号：１３ (c)配列番号：１５ (d)配列番号：２７ (e)配列番号：２９ (f)配列番号：３１ (g)配列番号：４３ (h)配列番号：４５ (i)配列番号：４７ からなる群より選択されるものである免疫グロブリン重鎖相補性決定領域（ＣＤ
    Ｒ）。
16. 【請求項１６】 請求項１４の免疫グロブリン相補性決定領域（ＣＤＲ）を
    コードする核酸分子。
17. 【請求項１７】 請求項１５の免疫グロブリン相補性決定領域（ＣＤＲ）を
    コードする核酸分子。
18. 【請求項１８】 請求項１３の改変抗体および医薬上許容される担体を含む
    医薬組成物。
19. 【請求項１９】 治療を要するヒトに有効量の請求項１３の改変抗体を投与
    する工程を含む、自己免疫疾患に関連した症状の治療方法。
20. 【請求項２０】 該疾病が多発性硬化症である請求項１９の方法。
21. 【請求項２１】 該疾病がリューマチ性関節炎またはタイプＩもしくはイン
    スリン依存性糖尿病である請求項１９の方法。
22. 【請求項２２】 該疾病が炎症性腸疾患である請求項１９の方法。
23. 【請求項２３】 該疾病が乾癬である請求項１９の方法。
24. 【請求項２４】 （ａ）請求項１３の改変抗体をコードする核酸配列 （ｂ）（ａ）に対して相補的な核酸配列；および （ｃ）ヒトインターロイキン−１８に対する特異性を有することにより特徴づけ
    られる蛋白をコードしている（ａ）または（ｂ）のフラグメントまたはアナログ
    からなる群より選択され、制限部位を含んでいてもよい単離核酸配列。
25. 【請求項２５】 患者から生物学的液体の試料を得て、ＩＬ−１８／モノク
    ローナル抗体複合体が生成しうる条件下において請求項１のモノクローナル抗体
    をかかる試料と接触させ、次いで、該ＩＬ−１８／モノクローナル抗体複合体の
    存在または不存在を検知することを特徴とする、ヒトにおけるヒトＩＬ−１８の
    存在または不存在を評価する方法。
26. 【請求項２６】 請求項２５の方法により患者の試料中のＩＬ−１８量を決
    定し、それを正常集団のヒトＩＬ−１８平均量と比較し、そのことにより患者に
    おけるヒトＩＬ−１８の有意に上昇した量の存在が自己免疫疾患を示すものであ
    ることを特徴とする自己免疫疾患の診断の助けとなる方法。