NO329422B1

NO329422B1 - Kondensasjonsderivater av tiocolchicin og baccatin som antitumormidler, farmasoytiske sammensetninger inneholdende dem og anvendelse derav

Info

Publication number: NO329422B1
Application number: NO20024353A
Authority: NO
Inventors: Ezio Bombardelli; Alessandro Pontiroli
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 2000-03-17
Filing date: 2002-09-12
Publication date: 2010-10-18
Also published as: IT1319168B1; NO20024353L; US6683109B2; ITMI20000553A1; WO2001068089A1; US20030073734A1; JP2003526665A; CA2403168A1; HK1051973A1; SK286849B6; KR100766161B1; CA2403168C; AU5037701A; CN1204886C; AU2001250377B2; RU2002124523A; PL357376A1; HUP0300198A2; NO20024353D0; HUP0300198A3

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører N-deacetyl-tiocolchicin og 10-deacetyl-baccatin III derivater med formelen (I)

hvori:

5 - n er et heltall fra 0 til 8;

R er en rest med formel a), b), c), d) eller e):

hvori:

Ri og R2, som kan være like eller forskjellige, er hydrogen eller en gruppe med formelen:

n er fortrinnsvis et heltall fra 1 til 7, mer foretrukket 1.

I tillegg til forbindelser med formel (I) som antitumor-midler vedrører foreliggende oppfinnelse også farmasøytiske sammensetninger inneholdende dem og anvendelse av forbindelsene.

Colchiciner og tiocolchiciner er kjente antiblastiske forbindelser som er i stand til å destabilisere mikrorør gjennom interaksjon med tubulin.

Fra M.L. Gelmi, et al., N-Deacetyl-N-aminoacylcolchicine Derivates: Synthesis and Biological Evaluation on MDR-Positive and MDR-Negative Human Cancer Cell Lines, J. Med. Chem., vol. 42, no. 25, (1999-11-25), side 5272-5276, er det kjent fremstilling av nye N-deacetyl-N-(N-trifluor-acetylaminoacyl)tiocolchicinderivater fra korresponderende N-deacetyltiocolchicin og N-triflouracetylaminosyrer. Videre er det fra WO 9701570 Al kjent nye colchicin-forbindelser mens US 4533675 A beskriver N-karbamater av colchicin- og tiocolchicinforbindelser.

Colchicin anvendes for tiden i terapien av gikt og beslek-tede inflammatoriske tilstander, men dens anvendelse er begrenset til de akutte faser på grunn av dens høye gastrointestinale toksisitet.

Flere colchicin- eller tiocolchicinderivater har blitt stu-dert, i lys av en mulig anvendelse derav som antitumormedikamenter, men forskernes anstrengelser har frem til i dag vært mislykkede på grunn av den ofte svært begrensede terapeutiske indeks til slike forbindelser.

Bare ett colchicinderivat, demecolcin, har blitt anvendt tidligere i klinikk for behandlingen av leukemier, men med dårlig suksess.

Taxan-derivaters (paclitaxel og derivater) antiproliferative aktivitet er forbundet med evnen til irreversibel binding til alfa- og beta-formene av tubulin i mikrorøret også. Oksetan- og fenylgruppene på isoserinsidekjeden viste seg å være essensielle med hensyn på aktivitet: baccatin, som mangler isoserinkjeden, har faktisk i alt vesentlig

ingen antiproliferativ aktivitet, i motsetning til paclitaxel og andre Ci3-estere av isoserin, som kan danne bin-dinger med to forskjellige steder av mikrorøret og for-hindre depolymerisasjon og således stanse aktiviteten av den mitotiske spindel.

Det er nå overraskende blitt funnet at forbindelsene med

i formelen (I) har antiproliferativ aktivitet, selv om de mangler affinitet til tubulin, både i mikrorørassembler-ings- og disassembleringstrinnene.

Aktiviteten av forbindelsene med formelen (I) skyldes

derfor en uventet virkningsmekanisme som ikke kan vises fra i den nåværende kunnskap i antitubulin-legemiddelfeltet.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har kraftig antimitotisk aktivitet og er karakterisert ved fordelaktig terapeutisk indeks som gjør dem egnet for den terapeutiske behandling

av forskjellige former av tumorer, samt for degenerativ

i revmatoid artritt, en sykdom karakterisert ved usedvanlig stor proliferasjon og abnormal migrering av leukocytter.

Forbindelser (I) har cytotoksisitet sammenlignbar med den til de mest effektive antitumormedikamenter, selv om de har

et bemerkelsesverdig bredere virkningsspektrum, spesielt

i mot celler resistente for kjente legemidler.

Forbindelser (I) fremstilles ved å reagere N-deacetyl-tiocolchicin med dikarboksylsyre-reaktive derivater i tørre løsningsmidler under slike betingelser for å erholde et

N-monoacyleringsprodukt som deretter reageres med baccatin III-derivatet, eventuelt beskyttet i 7-, 13- eller 10-stil-lingene, avhengig av den ønskede forbindelse, i nærvær av et passende kondensasjonsmiddel slik som dicycloheksyl-karbodiimid. Alle beskyttelsesgrupper som eventuelt er til stede fjernes, og/eller hydroksygruppene på baccatin III-residuet acyleres selektivt for direkte å gi forbindelser (I) •

Når R i forbindelser (I) er en gruppe med formelen c), takket være reaktiviteten av hydroksygruppen i isoserinkjeden, kan reaksjonen utføres uten forutgående beskyttelse av de andre hydroksygrupper til stede på taxanforbindelsen.

Eksempler på passende dikarboksylsyre-reaktive derivater omfatter acylhalider, syreklorider, reaktive anhydrider eller estere.

Alternativt kan et taxanderivat også acyleres med en dikarboksylsyre, og det resulterende produkt kondenseres med N-deacetyl-tiocolchicin.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige i behandlingen av proliferative patologier og spesielt tumorer av forskjellig opprinnelse, revmatoid artritt eller andre degenerative patologier hvori antiproliferative og anti-inflammatoriske tiltak er indikert.

For dette formål vil forbindelser (I) administreres i form av farmasøytiske sammensetninger egnet for de orale, paren-terale, epikutane eller transdermale administrasjoner. Doseringen av forbindelser (I) vil strekke seg fra 1 til 100 mg/m<2> kroppsområde, avhengig av administrasjonsruten. Forbindelsene vil fortrinnsvis administreres oralt.

Eksempler på sammensetninger omfatter kapsler, tabletter, ampuller, kremer, løsninger, granulater.

Følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen i større detalj.

Eksempel 1

a) 100 mg deacetyltiocolchicin (0,268 mmol, molekylvekt 373 g/mol) løses i 5 ml tørr dioksan, tilsettes deretter 27

mg succinanhydrid (0,268 mmol, molekylvekt lOOg/mol) og

i reaksjonsblandingen varmes til 60 °C i 5 timer. TLC-kontroll: AcOEt/MeOH 4:1. Dioksan dampes av, og produktet anvendes uten rensing i den etterfølgende reaksjon. 130 mg produkt erholdes.

b) 126 mg av produktet fra trinn a) (0,268 mmol, molekylvekt 473 g/mol) løses i 8 ml tørr toluen. 187 mg 7-Tes-Baccatin (0,268 mmol, molekylvekt 700 g/mol)), 66 mg DCC (0,321 mmol, molekylvekt 206 g/mol) og 13 mg DMAP (0,1 mmol, molekylvekt 122 g/mol) tilsettes. Blandingen omrøres

ved romtemperatur i ca. 12 timer inntil startproduktene

i forsvinner. TLC-kontroll: AcOEt/MeOH 4:1. Blandingen filtreres gjennom Celite og inndampes til tørrhet. Råproduktet renses på en kolonne (silikagel) ved å anvende AcOEt/heksan 9:1 som eluent, for å erholde 120 mg av det beskyttede

kondensasjonsprodukt og 80 mg av det allerede 7-avbeskytt-ede produkt.

c) 120 mg av produktet fra trinn b) (0,103 mmol, molekylvekt 1155 g/mol) løses i 5 ml MeOH/AcCl (5 ml metanol og 35

^1 AcCl). Reaksjonen fullføres innen 15 minutter. Blandingen tilsettes bikarbonat og ekstraheres med AcOEt, for å

i erholde 100 mg av produktet med formelen (I), hvori n er 1

og R er et residu med formel a).

Eksempel 2

a) 100 mg 10-O-succinyl-7-Tes-baccatin III (molekylvekt

699 g/mol, 0,14 mmol) og 54 mg N-deacetyltiocolchicin

i (molekylvekt 373 g/mol, 0,14 mmol) løses i 5 ml tørr toluen tilsatt 2 ml metylenklorid. 31 mg DCC (molekylvekt 206 g/mol, 0,15 mmol) og 8,5 mg DMAP (molekylvekt 122 g/mol, 0,07 mmol) tilsettes ved romtemperatur. Etter én dag filt-

reres reaksjonen gjennom Celite, vaskes med toluen og dampes inn til tørrhet. Rensing på en flashkolonne (silikageleluent CH2C12 :MeOH=25:1) gir 70 mg produkt.

b) 200 mg av produktet fra trinn a) (0,213 mmol) løses i 14 ml tørr toluen. 183 mg av oksazolidin-derivatet med

formelen:

i det følgende referert til som SHA-9, (0,426 mmol), 88 mg DCC (0,426 mmol) og 26 mg DMAP (0,213 mmol) tilsettes, og blandingen omrøres ved romtemperatur. TLC-kontroll: CH2CI2 :MeOH=25:1. Etter 4 timer filtreres reaksjonsblandingen gjennom Celite og renses ved kolonnekromatografi for å erholde 240 mg produkt. c) 160 mg av produktet fra trinn b) (0,12 mmol molekylvekt 1338) løses i 3,2 ml av en løsning erholdt ved å løse 70 ^1 AcCl i 10 ml MeOH. Etter en halv time tilsettes reaksjonsblandingen 5 % NaHC03, ekstraheres med CH2C12, tørkes, og løsningsmiddelet dampes av. Rensing ved flashkromatografi gir 97 mg av forbindelsen (I) hvori n er 1 og R er et residu med formel b).

Eksempel 3

70 mg paclitaxel (0,038 mmol, molekylvekt 1824) løses i 5 ml tørr dioksan. DCC (1,5 ekv.), DMAP (5 % i mol) og produktet fra eksempel la tilsettes. Blandingen omrøres ved 110 °C i 2 timer, deretter tilsettes ytterligere 10 mg av produktet fra eksempel la og 11 mg DCC. Etterpå etterlates reaksjonen ved romtemperatur i 48 timer, varmes deretter ved 110 °C i ytterligere 24 timer. Løsningsmiddelet dampes, og residuet renses ved flashkromatografi (AcOEt:MeOH=99:1)

for å erholde 21 mg av forbindelse (I) hvori n er 1 og R er i et residu med formel c).

Eksempel 4

a) En løsning av 7-succinyl, 10,13-di-Tes-baccatin III (390 mg, 0,479 mmol, molekylvekt 814) i 10 ml THF tilsettes

i en løsning av TBAF (IM i THF, 0,96 mmol) ved 0 °C. Blandingen etterlates i 1 H time ved 0 °C, deretter 2 timer ved romtemperatur. Etter det tilsettes 1 ekv. TBAF, og reaksjonen fortsetter inntil fullstendig eliminasjon av beskyttelsesgruppene. Reaksjonsblandingen tilsettes vann og

ekstraheres med AcOEt; den vandige fase surgjøres med IN

i HC1 og ekstraheres med AcOEt for å erholde 350 mg produkt.

b) Forbindelsen fra trinn a) (0,479 mmol) reageres med TIO-NH2 (0,479 mmol), DCC (1,5 ekv.) og DMAP (50 % mol) i

toluen-THF i én time. Reaksjonsblandingen filtreres gjennom

Celite og renses ved CC (CH2Cl2:MeOH=25:1) for å erholde forbindelse (I) hvori n er 1 og R er et residu med formel

d) .

Eksempel 5

200 mg av forbindelsen fra eksempel 4 (0,206 mmol) løses i

14 ml toluen - tørr THF. 177 mg SHA-9 (2 ekv.), 84 mg DCC

i (2 ekv.) og 26 mg DMAP (0,206 mmol) tilsettes til blandingen som omrøres ved romtemperatur. TLC-kontroll: CH2CI2 :MeOH=25:1. Etter 4 timer filtreres reaksjonsblandingen gjennom Celite og renses på en kromatografikolonne.

Det resulterende produkt løses i 4,8 ml av en løsning med 70 ^1 AcCl i 10 ml MeOH. Etter en halv time tilsettes reaksjonen 5 % NaHC03 og ekstraheres med CH2CI2. Ekstraktet tørkes, og løsningsmiddelet dampes av. Residuet renses ved flashkromatografi for å erholde 110 mg av forbindelse (I) hvori n er 1, R er et residu med formel e) hvori Ri og R2 er grupper med formel

Claims

1. Forbindelser med formel (I) hvori: n er et heltall fra 0 til 8; R er et residu med formel a), b) , c) , d) eller e) : hvori: Ri og R2, som kan være like eller forskjellige, er hydrogen eller en gruppe med formel:

2. Forbindelser ifølge krav 1, hvori n er et heltall fra 1 til 7.

3. Forbindelser ifølge krav 2, hvori n er 1.

4. Farmasøytiske sammensetninger inneholdende en forbindelse ifølge krav 1-3 i blanding med en passende bærer.

5. Anvendelse av forbindelsene ifølge krav 1 for frem-stillingen av medikamenter med antiproliferativ aktivitet.