NO328417B1 - Epotilonderivater samt deres syntese og anvendelse - Google Patents

Epotilonderivater samt deres syntese og anvendelse Download PDF

Info

Publication number
NO328417B1
NO328417B1 NO20006378A NO20006378A NO328417B1 NO 328417 B1 NO328417 B1 NO 328417B1 NO 20006378 A NO20006378 A NO 20006378A NO 20006378 A NO20006378 A NO 20006378A NO 328417 B1 NO328417 B1 NO 328417B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
formula
compound
equiv
absent
mmol
Prior art date
Application number
NO20006378A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20006378L (no
NO20006378D0 (no
Inventor
Kyriacos Costa Nicolaou
Nigel Paul King
Maurice Raymond Verschoyle Finlay
Yun He
Dionisios Vourloumis
Frank Roschangar
Antony Bigot
Hans Vallberg
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of NO20006378D0 publication Critical patent/NO20006378D0/no
Publication of NO20006378L publication Critical patent/NO20006378L/no
Publication of NO328417B1 publication Critical patent/NO328417B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D313/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Silicon Polymers (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører epotilonanaloger med sidekjedemodifikasjoner, fremgangsmåter for fremstilling av slike forbindelser, samt deres anvendelse ved fremstilling av farmasøytiske preparater for behandling av proliferative sykdommer.
Regi eringsretti gheter
Denne oppfinnelse ble gjort med regjeringsstøtte under Grant CA 46446 gitt av
National Institute of Health. Regjeringen i U.S. A. har visse rettigheter i oppfinnelsen.
Epotilonene (1-5) er naturlige substanser som fremviser cytotoksisitet selv mot paklitakselresistente tumorceller ved å fremme polymerisasjonen av a- og p-tubulinsubenheter og stabilisere de resulterende mikrotubulsammenstillinger. Epotiloner fortrenger paklitaksel (det aktive prinsipp i 'TAXOL") fra dets mikrotubulbindingssete og er rapportert å være mer potent enn paklitaksel hva angår stabiliseringen av mikrotubuler.
Det som trenges er analoger av epotilon A og B som fremviser overlegne farmakologiske egenskaper, særlig en eller flere av de følgende egenskaper: en forbedret terapeutisk indeks (f.eks. et større område av cytotoksiske doser mot f.eks. proliferative sykdommer uten toksisitet overfor normale celler), bedre farmakokinetiske egenskaper, bedre farmakodynamiske egenskaper, bedre oppløselighet i vann, bedre effektivitet mot tumortyper som er eller blir resistente overfor behandling med et eller flere andre kjemoterapeutika, bedre egenskaper for å lette fremstilling av preparater, f.eks. bedre oppløselighet i polare løsningsmidler, særlig løsningsmidler omfattende vann, forbedret stabilitet, grei fremstilling av forbindelsene som sådanne, forbedret inhibering av proliferasjon ved det cellulære nivå, høye nivåer av mikrotubulstabiliserende virkninger, og/eller spesifikke farmakologiske profiler.
WO 98/25929 omtaler epotilonanaloger samt fremgangsmåte for syntese av slike. Flere av analogene blir vist å ha overlegen cytotoksisk aktivitet ved å indusere polymerisering og stabilisering av mikrotubli.
Foreliggende oppfinnelse vedrører nye forbindelser som overraskende har en eller flere av de ovennevnte fordeler.
Et hovedaspekt ved oppfinnelsen vedrører en epotilonanalog forbindelse representert ved formel I
hvori
bølgebindingen indikerer at binding "a" er tilstede enten i cis- eller i transform;
(i) R2 er fraværende eller oksygen; "a" kan være enten en enkel eller dobbelt binding; "b" kan være enten fraværende eller en enkel binding; og "c" kan være enten
fraværende eller en enkel binding, med den betingelse at hvis R2 er oksygen så er"b" og "c" begge en enkel binding og "a" er en enkel binding; hvis R2 er fraværende så er "b" og "c" fraværende og "a" er en dobbelt binding; og hvis "a" er en dobbelt binding, så er R2, "b" og "c" fraværende;
R3 er et radikal valgt fra gruppen bestående av C1-C7 alkyl; særlig metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-heksyl; -CHNDH2; -C = CR; - CH2F; -CH2CI; -CH2-OH; -CHrO-CCrCe-alkyl), særlig -CH2-0-CH3; og -CH2-S-(Ci-Ce-alkyl), særlig -CH2-S-CH3;
R4 og R5 er uavhengig valgt fra hydrogen eller metyl eller en beskyttende gruppe, foretrukket hydrogen; og
Ri er et radikal valgt fra:
eller et salt derav hvor en saltdannende gruppe er tilstede.
De generelle betegnelser anvendt i det foregående og heretter har foretrukket innenfor fremstillingens sammenheng de følgende betydninger, med mindre annet er angitt: Betegnelsen "lavere" angir at det respektive radikal foretrukket har opp til og inklusiv 7, mer foretrukket opp til og inklusiv 4 karbonatomer.
Lavere alkyl kan være lineær eller forgrenet en eller flere ganger og har foretrukket opp til og inklusiv 7 og mer foretrukket opp til og inklusiv 4 karbonatomer. Foretrukket er lavere alkyl metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, tert-butyl eller videre n-pentyl eller n-heksyl.
En beskyttende gruppe er foretrukket en standard beskyttende gruppe. Hvis en eller flere andre funksjonelle grupper, f.eks. karboksy, hydroksy, amino eller merkapto er beskyttet eller behøver å bli beskyttet i en forbindelse med formel I, på grunn av at de ikke skal ta del i reaksjonen, er disse slike grupper som vanlig anvendes ved syntesen av peptidforbindelser, og også syntesen av cefalosporiner og penicilliner, så vel som nukleinsyrederivater og sukkere.
De beskyttende grupper kan allerede være tilstede i forløperen og skal beskytte de angjeldende funksjonelle grupper mot uønskede sekundære reaksjoner, som acyleringer, foretringer, forestringer, oksidasjoner, solvolyse og lignende reaksjoner. Det er en egen-skap ved beskyttende grupper at de lett lar seg fjerne, dvs. uten uønskede sekundære reaksjoner, typisk ved solvolyse, reduksjon, fotolyse eller også ved enzymaktivitet, f.eks. under betingelser analoge med fysiologiske betingelser, og at de ikke er tilstede i sluttproduktene. Spesialistene vet eller kan lett fastslå hvilke som helst beskyttende grupper er egnet med de reaksjoner som er nevnt i de foregående og i det følgende.
Beskyttelse av slike funksjonelle grupper ved slike beskyttende grupper, selve de beskyttende grupper, og deres fjernelsesreaksjoner er f.eks. beskrevet i standard referanseverk, som f.eks. J.F.W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London og New York, 1973, i T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, New York, 1981, i "The Peptides"; bind 3 (utgivere: E. Gross og J. Meienhofer), Academic Press, London og New York 1981, i "Methoden der organischen Chemie", Houben Weyl, 4. utgave, bind 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, i H.-D. Jakubke og H. Jescheit, "Aminosåuren, Peptide, Proteine", Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, og Basel 1982, og i Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate", Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Særlig foretrukne beskyttende grupper er hydroksybeskyttende grupper, som tert-butyldimetylsilyl eller trityl.
R4 og R5 er foretrukket hydrogen.
Bølgebindingen som begynner fra karbonatomet som bærer R3 betyr at binding "a" er tilstede i trans- eller foretrukket cis-form.
Salter er særlig de farmasøytisk tålbare salter av forbindelser med formel I.
Slike salter dannes f.eks. som syreaddisjonssalter, foretrukket med organiske eller uorganiske syrer, fra forbindelser med formel I med et basisk nitrogenatom, særlig de farmasøytisk tålbare salter. Egnede uorganiske syrer er f.eks. halogensyrer, som salt-syre, svovelsyre eller fosforsyre. Egnede organiske syrer er f.eks. karboksyl-, fosfon-, sulfon- eller sulfaminsyrer, f.eks. eddiksyre, propionsyre, okatansyre, dekansyre, dodekansyre, glykolsyre, melkesyre, fumarsyre, ravsyre, adipinsyre, pimelinsyre, korksyre, azelainsyre, eplesyre, vinsyre, sitronsyre, aminosyre, som glutaminsyre eller asparaginsyre, maleinsyre, hydroksymaleinsyre, metylmaleinsyre, cykloheksan-karboksylsyre, adamantankarboksylsyre, benzosyre, salicylsyre, 4-arninosalicylsyre, ftalsyre, fenyleddiksyre, mandelsyre, kanelsyre, metan- eller etansulfonsyre, 2-hydroksyetansulfonsyre, etan-l,2-disulfonsyre, benzensulfonsyre, 2-naftalensulfonsyre, 1,5-naftalendisulfonsyre, 2-, 3- eller 4-metylbenzensulfonsyre, metylsvovelsyre, etyl-svovelsyre, dodecylsvovelsyre, N-cykloheksylsulfaminsyre, N-metyl-, N-etyl- eller N-propyl-sulfaminsyre eller andre organiske protonsyrer, som f.eks. askorbinsyre.
For isolasjons- eller renseformål er det også mulig å anvende farmasøytisk ikke tålbare salter, f.eks. pikrater eller perklorater. For terapeutisk bruk, anvendes bare farmasøytisk tålbare salter eller frie forbindelser (hvor disse kan anvendes i form av farmasøytiske preparater) og disse er derfor foretrukket.
I betraktning av det nære slektskap mellom de nye forbindelser i fri form og forbindelser i form av deres salter, inklusive de salter som kan anvendes som utgangsforbindelser, f.eks. ved rensing eller identifikasjon av de nye forbindelser, skal enhver henvis-ning til de frie forbindelser i det foregående og i det følgende forstås som refererende også til de tilsvarende salter, alt etter behov og hensiktsmessighet.
Betegnelsen "omtrent" i forbindelse med tallangivelser, f.eks. "omtrent 2 ganger molart overskudd" eller lignende, skal foretrukket angi at den angitte tallverdi kan avvike fra det gitte tall med opp til ±10%, mer foretrukket med opp til ±3%, mest foretrukket er tallverdien nøyaktig som angitt.
Særlig foretrukket er enten en fri forbindelse med formel I, eller et salt derav.
Bioaktivitet: Forbindelsen eller forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes for behandling av en proliferativ sykdom, særlig en cancer, særlig cancere i lungen, særlig ikke-småcellet lungecarcinoma, prostatacancer, tarmcancer, f. eks. kolorektale cancere, epidermoide tumorer, som hode- og/eller halstumorer, eller brystcancer, eller andre cancere som blærecancere, pancreas- eller hjernemelanomer, inklusiv spesielt behandling av cancere som er multimedikamentresistente (f.eks. på grunn av uttrykking av p-glykoprotein = P-gp) og/eller motstandsdyktige overfor behandling med paklitaksel (feks. i form av "TAXOL").
Biologisk evaluering:
Evnen av forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelse til å blokkere depolymerisa-sjonen av mikrotubuli kan vises ved den følgende prøve: Mikrotubulprøver gjennomføres ved å følge litteraturprosedyrer og evaluere syntetiserte forbindelser på deres evne til å danne og stabilisere mikrotubuler. Cytotoksisitetsundersøkelser gjennomføres også.
Forbindelsene med formel I testes på deres virkning på tubulinsammenstilling ved bruk av renset tubulin med en prøve utviklet for å forsterke forskjeller mellom forbindelser som er mer aktive enn "Taxol". Forbindelser med formel I rinnes å ha et høyt nivå av cytotoksisk og tubulinpolymerisasjonsaktivitet, sammenlignet med epotiloner A og B (Lin et al., Cancer Chemother. Pharmacol. 38,136-140 (1996); Rogan et al., Science 244, 994-996 (1984)).
Kolorimetrisk filtreringsforsøk
Mikrotubulprotein (0,25 ml av 1 mg/ml) anbringes i et prøverør og 2,5 ul av testforbindelsen tilsettes. Prøven blandes og inkuberes ved 37°C i 30 minutter. Prøven (150 ul) overføres til en brønn i en 96-brønners Millipore Multiscreen Durapore hydrofil 0,22 um porestørrelsesifltreringsplate som på forhånd var blitt vasket med 200 ul MEM buffer under vakuum. Brønnen vaskes så med 200 ul MEM-buffer. For å farge proteinet inneholdt på platen tilsettes 50 ul oppløsning av amido svart [0,1% naftol blåsvart (Sigma)/45% metanol/10% eddiksyre] til filteret i 2 minutter og deretter utøves vakuum på nytt. To tilsetninger av 200 ul amido svart avfargingsoppløsning (90% metanol/2% eddiksyre) tilsettes for å fjerne ubundet fargestoff. Signalet kvantiteres ved hjelp av metoden til Schaffner og Weissmann et al., Anal. Biochem. 56:502-514,1973 som følger: 200 ul elueringsoppløsning (25 mM NaOH-0,05 mm EDTA-50% etanol) tilsettes brønnen og oppløsningen blandes med en pipette etter 5 minutter. Etter en 10 minutters inkubasjon ved romtemperatur, overføres 150 ul av elueringsoppløsningen til brønnen i en 96 brønners plate og absorbans måles på en Molecular Devices Microplater Reader.
Cytoksisitetsforsøkmed 1A9,1A9PTX10 (a-tubulinmutant), og 1A9PTX22 (a-tubulinmutant) cellelinjer kan vise den cytotoksiske aktivitet av forbindelsene med formel 1.1 likhet med de naturlig forekommende epotiloner 1 og 2, viser forbindelser med formel I signifikant aktivitet mot de endrede a-tublinuttrykkende cellelinjer 1A9PTX10 og 1A9PTX22. For forbindelser med formel I, finnes de foretrukne IC50-verdier (den konsentrasjon hvor halvmaksimal vekstinhibering av tumorceller finnes i sammenligning med en kontroll uten tilsatt inhibitor med formel I) kan ligge i området fra 1 til 1 000 nM, foretrukket 1 til 200 nM.
Evnen til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse for å inhibere tumorvekst kan vises ved hjelp av de følgende forsøk med de følgende cellelinjer:
Kolorimetrisk cvtotoksisitetsprøve for anticancermedikamentscreening
Den anvendte kolorimetriske cytotoksisitetsprøve er tilpasset fra Skehan et al. ( Journal of National Cancer Inst. 82:1107-1112,19901). Prosedyren tilveiebringer en hurtig, følsom og billig metode for å måle det cellulære proteininnhold av adhesjons- og suspensjonskulturer i 96 brønners mikrotiterplater. Metoden er egnet for National Cancer Institute's sykdomsoirenterte in vitro
anticancermedikamentpåvisningsscreening.
Spesielt, blir kulturer fiksert med trikloreddiksyre farget i 30 minutter med 0,4%
(vekt/volum) svovelrodamin B (SRB) oppløst i 1% eddiksyre. Ubundet fargestoff fjernes ved fire vaskinger med 1% eddiksyre og proteinbundet fargestoff ekstraheres med 10 mM ubuffret Tris-base [tris(hydroksymetyl)aminometan] for bestemmelse av optisk densitet i en datamaskingrensesnitt, 96 brønners mikrotiterplateleser. SRB-prøve-resultatene er lineære med antallet av celler og med verdier for cellulært protein målt
ved både Lowry og Bradford analyser ved densiteter i området fra knapp subkonfluens til flerlags suprakonfluens. Signal-til-støyforholdet ved 564 nm er omtrent 1,5 med 1 000 celler pr. brønn.
SRB-prøven tilveiebringer et kalorimetrisk sluttpunkt som er ikke-destruktivt, varig stabilt og synlig for det nakne øyet. Den tilveiebringer et følsomt mål på medikament-indusert cytotoksisitet. SRB-fluorescerer sterkt med lasereksitasjon ved 488 nm og kan måles kvantitativt ved enkeltcellenivå ved statisk fluorescenscytometri (Skehan et al.
( Journal of National Cancer Inst. 82:1107-1112,19901)).
Alternativt, kan effektiviteten av forbindelsene med formel I som inhibitorer for mikrotublidepolymerisasjon demonstreres som følger: Stamløsninger av testforbindelsene fremstilles i DMSO og lagres ved -20°C. Mikrotubuliprotein oppnås fra svinehjerne ved to sykluser med temperaturavhengig depolymerisasjon/polymerisasjon, som beskrevet (se Weingarten et al., Biochemistry 1974:13:5529-37). Arbeidsstamløsninger avmikrotubulprotein (dvs. tubulin pluss mikrotubuliassosierte proteiner) lagres ved -70°C. Graden av mikrotubuliprotein-polymerisasjon indusert av en testforbindelse måles essensielt som kjent fra litteraturen (se Lin et al., Cancer Chem. Pharm. 1996; 38:136-140). Kort sagt, blir 5 ul stamopp-løsning av testforbindelsen forhåndsblandet i tyve ganger så stor som den ønskede endelige konsentrasjon med 45 ul vann ved romtemperatur og blandingen anbringes så på is. En delmengde av arbeidsstamløsningen av svinehjernemikrotubuliprotein tines hurtig og fortynnes så til 2 mg/ml med iskald 2xMEM buffer (200 ml MES, 2 mM EGTA, 2 mM MgCl2, pH 6,7) (MES = 2-morfolinoetansulfonsyre, EGTA = etylenglykol-bis-(2-(2-aminoetyl)-tetraeddiksyre). Polymerisasjonsreaksjonen settes så i gang ved nlsetning av hver gang 50 ul fortynnet mikrotubuliprotein til testforbindelsen, etterfulgt av inkubasjon av prøven i et vannbad ved romtemperatur. Deretter anbringes reaksjonsblandingene i en Eppendorf mikrosentrifuge og inkuberes i ytterligere 15 minutter ved romtemperatur. Prøvene blir så sentrifugert i 20 minutter ved 14 000 opm. ved romtemperatur for separering av polymerisert fra ikke-polymerisert mikrotubuliprotein. Som indirekte mål på tubulinpolymerisasjonen bestemmes proteinkonsentra-sjonen av supernatanten (som inneholder resten av det upolymeriserte, oppløselige mikrotubuliprotein) ifølge Lowry-metoden (DC Assay Kit, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), og den optiske densitet (OD) av fargereaksjonen bestemmes ved 750 nm med et spektrometer (SpectraMax 340, Molecular Devices, Synnyvale, CA). Forskjell-ene i OD-verdiene mellom prøver behandlet med en testforbindelse og bærerbehandlede kontroller sammenlignes med de tilsvarende for testinkubasjoner som inneholder 25 uM epotilon B (positive kontroller). Den polymerisasjonsgrad som induseres ved en testforbindelse uttrykkes i forhold til de positive kontroller (100%). Ved sammenligning av flere konsentrasjoner kan EC50 (den konsentrasjon hvor 50% av den maksimale polymerisasjon finnes) bestemmes. For forbindelser med formel I ligger EC50-verdiene foretrukket i området 1 til 200, foretrukket 1 til 50 uM. Induksjonen av tubulinpolymerisasjon av testforbindelsen med formel I i 5 uM konsentrasjon som prosentandel i sammenligning med 25 uM epotilon B ligger foretrukket i området 50 til 100%, særlig 80 til 100%.
Effektiviteten mot tumorceller kan også vises på den følgende måte:
Stamoppløsninger av testforbindelsen med formel I (10 mM) i DMSO fremstilles og lagres ved -20°C. Human KB-31 og (multimedikamentresistent, P-gp 170 overuttrykkende) KB-8511 epidermoide carcinomceller er fra Dr. M. Baker, Rosswell Park Memorial Institute (Buffalo, NY, USA) (for beskrivelse se også Akiyama et al., Somat. Cell. Mol. Genetics 11,117-126 (1985) og Fojo A., et al., Cancer Res. 45, 3002-3007
(1985)-KB-31 ogKB-8511 er begge derivater av KB-cellelinj en (American Type Culture Collection) og er humane epidermoide carcinomceller. KB-31-celler kan dyrkes i monolag ved bruk av kalveserum (M.A. Bioproducts), L-glutamin (Flow), penicillin (50 enheter/ml) og streptomycin (50 ug/ml) (Flow); de vil da vokse med en fordoblings-takt på omtrent 22 timer, og den relative effektivitet ved å plate dem ut ligger ved omtrent 60%. KB-8511 er en variant avledet fra KB-31-cellelinjen som er blitt oppnådd ved behandlingssykluser med colchicin, og den viser en omtrent 40 gangers relativ resistens mot colchicin i sammenligning med KB-31-celler. Cellene inkuberes ved 37°C i en inkubator med 5% volum/volum CO2 og en 80% relativ atmosfærisk fuktighet i MEM alfa-medium som inneholder ribonukleosider og desoksyribonukleosider (Gibco BRL), komplementert med 10 RJ penicillin, 10 ug/ml streptomycin og 5% fetalt kalveserum. Cellene fordeles i en mengde på 1,5 x IO<3> celler/brønn i 96 brønners mikrotiterplater og inkuberes over natten. Seriefortynninger av testforbindelsene i dyrkingsmedium tilsettes ved dag 1. Platene inkuberes så i en ytterligere periode på 4 dager hvoretter cellene fikseres ved bruk av 3,3% volum/volum glutaraldehyd, vasket med vann og farges til slutt med 0,05% vekt/volum metylenblått. Etter fornyet vasking elueres fargingen med 3% HC1 og den optiske densititet ved 665 nm måles med en SpectraMax 340 (Molcular Devices, Sunnyvale, CA). IC50-verdier bestemmes ved matematisk tilpassing av data til kurver ved bruk av SoftPro2.0-programmet (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) og formelen [(OD-behandlet)-(OD-utgang)]/[(OD-kontroll)-(OD-utgang)]xl00.
IC50 defineres som den konsentrasjon av en testforbindelse ved slutten av inkubasjons-perioden som fører til 50% av antallet celler i sammenligning med kontroller uten testforbindelse (konsentrasjon ved halvmaksimal inhibisjon av cellevekst). Forbindelser med formel I viser her foretrukket en IC50-verdi i området fra 0,lxl0"<9> til 500x10"<9> M, foretrukket mellom 0,1 og 60 nM.
Sammenlignende testing kan også foretas med andre tumorcellelinjer, som A459 (lunge; ATCC CCL 185), NCIH460 (lunge), Colo 205 (kolon; ATCC nr. CCL 222) (HCT-15
(kolon; ATCC CCL 225 - ATCC = American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA)), HCT-116 (kolon), Dul45 (prostata; ATCC nr. HTB 81; se også Cancer Res. 37, 4049-58 [1978]), PC-3M (prostata - hormonufølsomt derivat oppnådd fra Dr. I.J. Fidler (MD Anderson Cancer Center, Houston, TX, USA) og avledet fra PC-3 som er en cellelinje som kan fås fra ATCC (ATCC CRL 14353)), MCF-7 (bryst; ATCC HTB 22) eller MCF-7/ADR (bryst, multimedikamentresisten; for beskrivelse se Blobe, G.C., et al., J. Biol. Chem. (1983), 658-664; cellelinjen er høyresistent (360- til 2400-ganger) overfor doksorubicin og vinkaalkaloider sammenlignet over MDR-7 "vildtype" celler)), hvor lignende resultater oppnås i likhet som med KB-31 og KB-8511 celler. Forbindelser med formel I viser foretrukket her en IC50 i området fra 0,lxl0"<9> til 500xl0"<9> M, foretrukket mellom 0,1 og 60 nM.
Basert på disse egenskaper, er forbindelsene med formel I (dvs. også deres salter) egnet for behandling av proliferative sykdommer, som særlig tumorsykdommer, inklusiv også metastase hvor denne forekommer, f.eks. av faste tumorer, som lungetumor, brysttumor, kolorektal cancer, prostatacancer, melanom, hjernetumor, pankreastumor, hode- og halstumor, blærecancer, neuroblastom, faryngial tumor, eller også behandling av proliferative sykdommer i blodceller, som leukemi; eller videre for behandling av andre sykdommer som responderer til behandling med mikrotubulidepolymeriasasjons-inhibitorer, som psoriasis. Forbindelsene med formel I eller salter derav er også egnet for å dekke medisinske implantater (nyttig ved profylakse av restenose) (se WO 99/16416, prioritet fra 29. september 1997).
In vivo aktivitet av en forbindelse ifølge oppfinnelsen kan også påvises ved hjelp av den følgende dyremodell: Hunn- eller hannmus (hårløse) BALB/c nu/ nu holdes under sterile betingelser (10 til 12 mus pr. type III bur) med fri adgang til føde og vann. Musevekt mellom 20 og 25 g ved tidspunktet for tumorimplantasjon. Tumorer etableres ved subkutan injeksjon av celler
(minimum 2x10<6> celler i 100 ul PBS eller medium) i bærermus (4-8 mus pr. cellelinje). De resulterende tumorer serieinkuberes i minimum tre påfølgende transplantasjoner før begynnelsen av behandlingen. Tumorfragmenter (omtrent 25 mg) implanteres s.c. i den venstre side av dyrene med en "trokar" nål størrelse 13 mens musene er eksponert for anestesti med "Forene" (Abbot, Sveits).
Tumorvekst og kroppsvekter overvåkes en eller to ganger i uken. Alle behandlinger tilføres intravenøst (i.v.) og initieres når et midlere tumorvolum på omtrent 100 til 250 mm3 er oppnådd, avhengig av tumortypen. Tumorvolum bestemmes ved bruk av formel (LxDx7i)/6 (se Cancer Chemother. Pharmacol. 24:148-154, [1989]). Behandlinger med epotiloner med formel I varierer dosen og hyppigheten for tilførselen. Sammenlignings-midler tilføres ifølge tidligere bestemte optiske behandlingsmønstere. I tillegg til å presentere endringer i tumorvolum under forløpet av behandlingen uttrykkes anti-tumoraktivitet som T/C% (midlere økning i tumorvolum av behandlede dyr dividert med den midlere økning i tumorvolum av kontrolldyr multiplisert med 100). Tumor-regressjon (%) representerer det minste midlere tumorvolum sammenlignet med det midlere tumorvolum ved begynnelsen av behandlingen, ifølge formelen regressjon (%) = (1 - Vslutt/Vstart) x 100 (Vslutt = endelig midlere tumorvolum, Vstart = midlere tumorvolum ved start av behandlingen.
Med denne modellen kan den inhiberende virkning av en forbindelse ifølge oppfinnelsen på veksten, f.eks. av tumorer avledet fra de følgende cellelinjer testes: Den humane kolorektale adenocarcinomcellelinje HCT-15 (ATCC CCL 225) er fra American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA), og cellene dyrkes in vitro som anbefalt av leverandøren. HCT-15 er en epiteliallignende cellelinje (Cancer Res., 39:1020-25 [1979]) som er multimedikamentresistent grunnet overuttrykking av P-glykoprotein (P-gp, gpl70, MDR-1; Anticancer Res., 11:1309-12 [1991]; J. Biol. Chem. 264:18031-40 [1989]); Int. J.Cancer 1991; 49:696-703 [1991]) og glutationavhengige resistensmekanismer (Int. J. Cancer 1991; 49:688-95 [1991]). Colo 205-cellelinjen er også en human koloncarcinomcellelinje (ATCC nr. CCL 222; se også Cancer Res. 38, 1345-55 [1978]) som ble isolert fra bukhulevæsken av en pasient, viser epiteliallignende morfologi og betraktes generelt som medikamentsensitiv. En human androgenuav-hengig prostatacancercellelinje anvendes for å etablere subkutane og ortotopiske modeller i mus. Den humane metastatiske pstatacarcinom PC-3M oppnås fra Dr. I.J. Fidler (MD Anderson Cancer Center, Houston, TX, USA) og dyrkes i Ham's F12K medier supplert med 7% v/v FBS. PC-3M-cellelinjen er resultatet av isolasjon fra levermetasase frembragt i hårløse mus etter intramiltinjeksjon av PC-3-celler [ATCC CRL 1435; American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA)], og de kan vokse i Eagle's MEM supplert med 10% fetaltbovint serum, natriumpyruvat, ikke-essensielle aminosyrer, L-glutamin, en dobbelt vitaminoppløsning (Gibco Laboratories, Long Island, N.Y.) og penicillin-streptomycin (Flow Laboratories, Rockville, MD). PC-3M-cellelinjen er hormoninsensitiv (dvs. at den vokser i fravær av androgener). PC-3-cellelinjen er androgenreseptornegativ, og likeledes antageligvis den avledede PC-3M-cellelinje. PC-3 er en cellelinje som kan fås fra ATCC (ATCC CRL 1435) og tilsvarer en grad IV prostatisk adenocarcinom isolert fra en 62 år gammel hvit mann; cellene fremviste lav sur fosfatase- og testosteron-5-a-reduktaseaktivitet. Cellene er nær triploide med et modalt antall på 62 kromosomer. Ingen normale Y-kromosomer kan påvises ved hjelp av Q-båndanalyse. Human lungeadenocarcinom A549 (ATCC CCL 185; isolert som eksplantatkultur fra lungecarcinomvev fra en 58 år gammel hvit mann); viser epitelial morfologi og kan syntetisere lecitin med en høy prosentandel av avmett-ede fettsyrer ved utnyttelse av cytidindifosfocholinsynteseveien; et subtelosentrisk markørkromosom som involverer kromosom 6 og den lange arm av kromosom 1 finnes i alle metastaser. Den humane brystcarcinom ZR-75-1 (ATCC CRL 1500; isolert fra ondartet bukhulevæskeeffusjon av en 63 år gammel hvit kvinne med infiltrerende duktal carcinom); har brystkjertelepitelial opprinnelse; cellene har reseptorer for østrogen og andre steroide hormoner og har et hypertripoloid kromosomtall. Den humane epidermale (munn) carcinomcellelinje KB-8511 (en P-gp overuttrykkende cellelinje avledet fra den epidermoide (munn) KB-31 carcinomcellelinje) er oppnådd fra Dr. R.M. Baker, Roswell Park Memorial Institute (Buffalo, N.Y., USA) (for beskrivelse se Akiyama et al., Somat. Cell. Mol. Genetics IT, 117-126 (1985) og Fojo A., et al., Cancer Res. 45, 3002-3307 (1985)) og dyrkes som tidligere beskrevet (Meyer, T., et al., Int. J. Cancer, 43, 851-856 (1989)). KB-8511-celler, i likhet med KB-31 er avledet fra KB-cellelinjen (ATCC) og de er humane epidermale carcinomceller; KB-31-celler kan dyrkes i monolag ved bruk av Dulbecco's modifisert Eagle's medium (DMEM) med 10% fetalt kalveserum (M.A. Bioproducts), L-glutamin (Flow), penicillin (50 enheter/ml) og streptomycin (50 mg/ml (Flow); de vokser da med en dubleringstid på 22 timer og deres relative utplatingseffektivitet er omtrent 60%. KB-8511 er en cellelinje avledet fra KB-31-cellelinjen ved bruk av colchicinbehandlingssykluser, den viser omtrent 40 gangers relativ resistens mot colchicin når den sammenlignes med KB-31-celler; den kan dyrkes under de samme betingelser som KB-31.<*>
Op<p>løseli<g>het: Vannoppløseligheten bestemmes f.eks. som følger: forbindelsene med formel I eller saltene derav, omrøres med vann ved romtemperatur inntil det ikke lenger oppløses ytterligere forbindelse (omtrent 1 time). De funnede oppløseligheter er foretrukket mellom 0,01 og 1 vekt-%.
Innenfor gruppene av foretrukne forbindelser med formel I nevnt i det følgende, kan definisjoner av substituenter fra de generelle definisjoner nevnt tidligere anvendes med god grunn, f.eks. for å erstatte mer generelle definisjoner med mer spesifikke definisjoner eller spesielt med definisjoner karakterisert som foretrukket.
Oppfinnelsen vedrører foretrukket også en forbindelse med formel I, hvori
R2 er fraværende eller oksygen; "a" er enten en enkelt eller dobbelt binding; "b" er enten fraværende eller en enkelt binding; og "c" er enten fraværende eller en enkelt binding, med den betingelse at hvis R2 er oksygen, så er"b" og "c" begge en enkelt binding og "a" er en enkelt binding; hvis R2 er fraværende så er"b" og "c" fraværende og "a" er en dobbelt binding; og hvis "a" er en dobbelt binding, så er R2, "b" og "c" fraværende;
R3 er et radikal valgt fra gruppen bestående av C1-C7 alkyl, særlig metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-heksyl; -CH=CH2; -C = C; -CH2F; - CH2C1; -CH2-OH; -CH2-0-(CrC6-alkyl), særlig -CH2-0-CH3; og -CH2-S-(d-C6-alkyl), særlig -CH2-S-CH3;
R4 og R5 er uavhengig valgt fra hydrogen eller metyl eller en beskyttende gruppe, særlig hydrogen; og
Ri er et radikal valgt fra
eller et salt derav hvor en eller flere saltdannende grupper er tilstede.
Oppfinnelsen vedrører også mest spesifikt en forbindelse med formel Id hvori A er metyltio og D er hydrogen, fluor, hydroksy eller metyl, særlig hydrogen.
Oppfinnelsen vedrører også mest spesifikt en forbindelse med formel le
hvori A er metyltio og D er hydrogen, fluor, hydroksy eller metyl.
Oppfinnelsen vedrører mest spesifikt forbindelser med formel I gitt i eksemplene, eller farmasøytisk tålbare salter derav, hvor en eller flere saltdannende grupper er tilstede.
Mest foretrukket vedrører oppfinnelsen en forbindelse valgt fra gruppen bestående av forbindelser med de følgende formeler:
eller et farmasøytisk tålbart salt derav hvis en eller flere saltdannende grupper er tilstede.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan syntetiseres ved bruk av metoder i analogi ved metoder som er kjent på området, foretrukket ved hjelp av en fremgangsmåte karakterisert ved
a) omsetning av et jodid med formel II,
hvor R.2, R.3, R4, R5, a, b og c og bølgebindingen har betydningene gitt under formel I, med en tinnforbindelse med formel III,
hvori Ri har betydningene gitt under formel I og R er C1-C7 alkyl, særlig metyl eller n-butyl, eller
b) omsetning av en tinnforbindelse med formel IV,
hvori R2, R3, R4, R5, a, b og c og bølgebindingen har betydningene gitt under formel I,
med et jodid med formel V,
hvori Ri har betydningene gitt under formel I;
og, hvis ønsket, omdannes en oppnådd forbindelse med formel I til en annen forbindelse med formel I, en oppnådd fri forbindelse med formel I omdannes til et salt av en forbindelse med formel I, og/eller et oppnådd salt av forbindelse med formel I omdannes til en fri forbindelse med formel I eller til et annet salt av en forbindelse med
formel I, og/eller en stereoisomer blanding av forbindelser med formel I separeres til de tilsvarende isomerer.
Detaljert beskrivelse av de foretrukne prosessbetingelser:
I alle utgangsmaterialer, er om nødvendig, funksjonelle grupper som ikke skal delta i reaksjonen beskyttet av beskyttende grupper, særlig standard beskyttende grupper. De beskyttende grupper, deres innføring og deres avspaltning er kjent og de er f.eks. beskrevet i de standard referanser som er nevnt tidligere.
Reaksjon a): Foretrukket finner reaksjonen (en (foretrukket forbedret) stille kobling) sted under standardbetingelser; mer foretrukket, foregår reaksjonen (i) i et passende løsningsmiddel, f.eks. toluen, ved forhøyet temperatur, særlig omtrent 90 til omtrent 100°C, foretrukket med et overskudd av tinnforbindelsen med formel III, foretrukket i en 1,1-3-, f.eks. 1,5- til 2-gangers molart overskudd; og en katalytisk mengde, foretrukket omtrent 1 til 30%, foretrukket 5 til 10% Pd(PPh3)4; eller (ii) i et passende løsningsmiddel, f.eks. dimetylformamid (DMF), ved temperaturer fra 10 til 40°C, særlig 25°C, foretrukket med et overskudd av tinnforbindelsen med formel III, foretrukket i et 1,1- til 3-, f.eks. 1,5- til 2,3-gangers molart overskudd i nærvær av en katalytisk mengde, foretrukket 10 til 15%, særlig 20 til 30%, av Pd(MeCN)2Cl2.
Alternative betingelser for denne kobling omfatter også bruk av de følgende reagenser og/eller betingelser:
(iii) kobber 2-tiofenkarboksylat, N-metyl-2-pyrrolidon.
(iv) PdCl2(MeCN)2 (kat.), DMF, 50-150°C (med eller uten tilsetning av tertiær base). (v) Pd(PPh3)4/Cul (kat.), DMF, 50-150°C (med eller uten tilsetning av tertiær base).
Reaksjon b): Reaksjonen (en forbedret stille kobling) foregår foretrukket under standard betingelser; mer foretrukket foregår reaksjonen i et passende løsningsmiddel, særlig DMF, ved temperaturer fra 5 til 100°C, foretrukket fra 80 til 85°C, foretrukket med et overskudd av jodidet med formel V, i nærvær av en katalytisk mengde AsPh3, foretrukket omtrent 0,4 ekv., Cul, foretrukket 0,1 ekv., og PdCl2(MeCN)2, foretrukket omtrent 0,2 ekv..
Særlig foretrukket er reaksjonsbetingelsene nevnt i eksemplene.
Omdannelse av forbindelser/ salter:
Forbindelser med formel I kan omdannes til forskjellige forbindelser med formel I ved hjelp av standard eller nye metoder.
For eksempel, kan en forbindelse med formel I hvori R2 er fraværende, b og c er fraværende og a er en dobbelt binding, og de andre enheter er som beskrevet for forbindelser med formel I, omdannes til det tilsvarende epoksid hvori R2 er O og b og c er tilstede mens a er en enkelt binding. Foretrukket foregår epoksidasjonen i nærvær av (+)-dietyl-D-tartrat ((+)-DET) (foretrukket omtrent 0,5 ekv.), Ti(i-PrO)4 (foretrukket omtrent 0,5 ekv.), tert-butylhydroperoksid (foretrukket omtrent 2,2 ekv.) og en molekylsikt, særlig 4 Å molekylsikter, i et passende løsningsmiddel, f.eks. metylenklorid og eventuelt et alkan, som f.eks. dekan, ved lave temperaturer, foretrukket -78 til 0°C, særlig omtrent - 40°C;
eller i nærvær av hydrogenperoksid (foretrukket omtrent 30 ekv.), acetonitril (foretrukket omtrent 60 ekv.), en base, særlig KHCO3 (foretrukket omtrent 10 ekv.) i et passende løsningsmiddel, f.eks. en alkohol, foretrukket metanol, med foretrukne temperaturer mellom 10 og 40°C, f.eks. ved omtrent 25°C.
En forbindelse med formel I, hvori R3 er hydroksymetyl kan omdannes til en forbindelse med formel I, hvori R3 er fluormetyl, f.eks. ved behandling med DAST (foretrukket 1,05 til 1,4 ekv.) i et passende løsningsmiddel, f.eks. metylenklorid, ved lave temperaturer, foretrukket -95 til 0°C, særlig ved omtrent -78°C. DAST er dietylaminosvovel-trifluorid.
En forbindelse med formel I, hvori R3 er jodmetyl kan omdannes til en forbindelse med formel I, hvori R3 er metyl, f.eks. ved behandling med cyanborhydrid (foretrukket omtrent 10 ekv.), i HMPA (heksametylfosforsyretriamid) ved forhøyede temperaturer, feks. ved 40 til 45°C.
Andre omdannelser kan foretas i samsvar med kjente prosedyrer, f.eks. dem som er angitt i PCT patentansøkning WO 98/25929.
Salter av en forbindelse med formel I med en saltdannende gruppe kan fremstilles på en i og for seg kjent måte. Syreaddisjonssalter av forbindelser med formel I kan således oppnås ved behandling med en syre eller med et passende anionbytterreagens.
Salter kan vanlig omdannes til fri forbindelser, f.eks. ved behandling med egnede basiske midler, f.eks. med alkalimetallkarbonater, alkalimetallhydrogenkarbonater, eller alkalimetallhydroksider, typisk kaliumkarbonat eller natriumhydroksid.
De resulterende fri forbindelser kan om ønsket omdannes til forskjellige salter som beskrevet for dannelsen av salter fra de fri forbindelser.
Stereoisomere blandinger, f.eks. blandinger av diastereomerer, kan separeres i deres tilsvarende isomerer på en i og for seg kjent måte ved hjelp av passende separasjons-metoder. Diastereomere blandinger kan f.eks. separeres til deres individuelle diastereomerer ved hjelp av fraksjonert krystallisasjon, kromatografi, løsningsmiddelfordeling, og lignende prosedyrer. Denne separasjon kan foregår enten i nivå med en utgangsforbindelse eller i selve forbindelsen med formel I. Enantiomerer kan separeres ved dannelse av diastereomere salter, f.eks. ved saltdannelse med en enantiomerren chiral syre, eller ved hjelp av kromatografi, f.eks. ved hjelp av HPLC, ved bruk av kromato-grafiske substrater med chirale ligander.
Utganesmaterialer:
Utgangsmaterialer og utgangsforbindelser er kjent på området, kan fås i handelen, og/eller kan fremstilles i samsvar med metoder kjent på området i analogi dermed.
Forbindelser med formel II og forbindelser med formel III kan f.eks. syntetiseres som beskrevet i PCT patentansøkning WO 98/25929, eller som beskrevet eller i analogi med metodene i eksemplene.
Forbindelser med formel IV kan fås ved reaksjon av de respektive forbindelser med formel II, f.eks. ved reaksjon av en forbindelse med formel II med (R)6Sn2, hvori R er lavere alkyl, særlig metyl eller n-butyl, i nærvær av en passende nitrogenbase, f.eks. Hunig's base, og i nærvær av katalytisk mengde (foretrukket omtrent 0,1 ekv.) Pd(PPti3)4, i et passende løsningsmiddel, f.eks. toluen, ved forhøyede temperaturer, f.eks. 30 til 90°C, særlig 80 til 85°C.
Jodider med formel V er kjente og kan oppnås ved hjelp av prosedyrer angitt i litteraturen, eller de kan fås i handelen. For eksempel kan 2-jod-6-metylpyridin oppnås ifølge Klei, E.; Teuben, J.H., J. Organomet. Chem. 1981,214,53-64; 2-jod-5-metylpyridin ifølge Talik, T.; Talilk, Z. Rocz. Chem. 1968,42,2061-76; og 2-jod-4-metylpyridin ifølge Talik, T.; Talik, Z. Rocz. Chem. 1968,42,2061-76, Yamamoto, Y.; Yanagi, A. Heterocycles 1981, 16,1161-4 eller Katritzky, A.R.; Eweiss, N.F.; Nie, P.-L. JCS, Perkin Trans 1 1979,433-5. De tilsvarende hydroksymetylsubstituerte forbindelser med formel V kan f.eks. fås ved oksidasjon av metylgruppene i jodidene nevnt i det foregående med SiC>2 og etterfølgende reduksjon (f.eks. med NaBFU eller DIBALH) av aldehydet eller ved oksidasjon av metylgruppen til å danne syren (f.eks. med KMnCvO og etterfølgende reduksjon av esteren, f.eks. med DIBAL.
Foretrukket, kan nye eller også kjente utgangsmaterialer og utgangsforbindelser fremstilles i samsvar med eller i analogi med metodene beskrevet i eksemplene, hvor mengdene, temperaturene og lignende ved de respektive reaksjoner kan modifiseres, f.eks. ved variasjon i området ±99%, foretrukket ±25%, og andre passende løsningsmidler og reagenser kan anvendes.
Farmasø<y>tiske preparater:
Den foreliggende opprinnelse vedrører også anvendelse av en forbindelse med formel I for fremstilling av et farmasøytisk preparat for bruk mot en proliferativ sykdom som definert i det foregående; eller vedrører et farmasøytisk preparat for behandling av den nevnte proliferative sykdom omfattende en forbindelse ifølge oppfinnelsen og en farmasøytisk tålbar bærer.
Forbindelsene med formel I benevnes i det følgende som "aktiv bestanddel".
Oppfinnelsen vedrører også farmasøytiske preparater omfattende en aktiv bestanddel som definert i det foregående, for behandling av en proliferativ sykdom, særlig som definert i det foregående, og vedrører også fremstilling av farmasøytiske preparater for den nevnte behandling.
Det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse er foretrukket egnet for tilførsel til et varmblodig individ, særlig et menneske, for behandling av en proliferativ sykdom som definert i det foregående, omfattende en mengde av en aktiv bestanddel, effektiv for behandlingen av den nevnte proliferative sykdom, sammen med minst en farmasøytisk tålbar bærer. De farmasøytiske preparater ifølge oppfinnelsen er preparater for enteral, som nasal, rektal eller oral, eller foretrukket parenteral, som f.eks. intra-muskulær eller intravenøs tilførsel til et varmblodig individ (menneske eller dyr), som omfatter en effektiv dose av den farmakologisk aktive bestanddel, alene eller sammen med en signifikant mengde av en farmasøytisk tålbar bærer. Dosen av aktiv bestanddel avhenger av spesies av det varmblodige dyr, kroppsvekten, alderen og den individuelle tilstand, individuelle farmakokinetiske data, sykdommens som skal behandles og til-førselsmåten, foretrukket er dosen en av de foretrukne doser som definert i det følgende, akkomoduert på passende måte hvor pediatrisk behandling er tilsiktet.
De farmasøytiske preparater omfatter fra omtrent 0,00002 til omtrent 95%, særlig (f.eks. i tilfellet av inmsjonsfortynninger ferdig for bruk) på 0,0001 til 0,02%, eller (f.eks. i tilfellet av infusjonskonsentratet) fra omtrent 0,1% til omtrent 95%, foretrukket fra omtrent 20% til omtrent 90% aktiv bestanddel (vekt/vekt, i hvert tilfelle). Farmasøytiske preparater ifølge opprinnelsen kan f.eks. foreligge i enhetsdoseform, som i form av ampuller, hetteglass, stikkpiller, dragéer, tabletter eller kapsler.
De farmasøytiske preparater ifølge den foreliggende oppfinnelse fremstilles på en måte som er kjent i og for seg, f.eks. ved hjelp av konvensjonelle prosesser med oppløsning, frysetørking, blanding, granulering eller sammenmiksing.
Oppløsninger av den aktive bestanddel, og også suspensjoner, og særlig isotoniske vandige løsninger eller suspensjoner, anvendes foretrukket, idet det f.eks. i tilfellet med frysetørkede preparater som omfatter den aktive bestanddel enten alene eller sammen med en farmasøytisk tålbar bærer, f.eks. mannitol, for slike oppløsninger eller suspensjoner er mulig å produsere disse før bruken. De farmasøytiske blandinger kan sterili-seres og/eller kan omfatte konsistensmidler, f.eks. konserveringsmidler, stabiliserings-midler, fukte- og/eller emulgeringsmidler, oppløseliggj ørende midler, salter for å regulere det osmotiske trykk og/eller buffere, og fremstilles på en i og for seg kjent måte, f.eks. ved hjelp av konvensjonelle prosesser med oppløsning eller frysetørking. De nevnte oppløsninger eller suspensjoner kan omfatte viskositetsøkende substanser, som natriumkarboksymetylcellulose, karboksymetylcellulose, dekstran, polyvinyl-pyrrolidon eller gelatin.
Suspensjoner i olje omfatter som oljekomponent de vegetabilske, syntetiske eller halvsyntetiske oljer som er vanlige for injeksjonsformål. Som slike kan spesielt nevnes flytende fettsyreestere som inneholder som syrekomponent en langkjedet fettsyre med fra 8 til 22, særlig fra 12 til 22 karbonatomer, f.eks. laurinsyre, tridecylsyre, myristin-syre, pentadecylsyre, palmitinsyre, margarinsyre, stearinsyre, arachidinsyre, behensyre eller tilsvarende umettede syrer, f.eks. oleinsyre, elaidinsyre, erucinsyre, brasidinsyre, eller linolsyre, om ønsket med tilsetning av antioksidanter, f.eks. vitamin E, betakaroten eller 3,5-di-tert-butyl-4-hydroksytoluen. Alkoholkomponenten i disse fettsyreestere har et maksimum på 6 karbonatomer og er en mono- eller polyhydroksyalkohol, f.eks. en mono-, di- eller tri-hydroksyalkohol, f.eks. metanol, etanol, propanol, butanol eller pentanol eller isomerene derav, men særlig glykol og glyserol.
Preparatene for injeksjon eller infusjon fremstilles på vanlig måte under sterile betingelser og det samme gjelder også innføringen av preparatene i ampuller eller hetteglass og forsegling av beholderne.
Foretrukket er et infusjonspreparat omfattende en aktiv bestanddel og et farmasøytisk tålbart organisk løsningsmiddel.
Det farmasøytisk tålbare organiske løsningsmiddel som anvendes i et preparat ifølge oppfinnelsen kan velges fra hvilket som helst slikt organisk løsningsmiddel som er kjent på området. Foretrukket velges løsningsmidlet fra alkohol, f.eks. absolutt etanol eller etanol/vannblandinger, mer foretrukket 70% etanol, polyetylenglykol 300, polyetylenglykol 400, polypropylenglykol eller N-metylpyrrolidon, mest foretrukket polypropylenglykol eller 70% etanol eller polyetylenglykol 300.
Den aktive bestanddel kan foretrukket foreligge i preparatet i en konsentrasjon på omtrent 0,01 til omtrent 100 mg/ml, mer foretrukket fra omtrent 0,1 til omtrent 100 mg/ml, enda mer foretrukket fra omtrent 1 til omtrent 10 mg/ml (særlig i infusjons-konsentrater).
Den aktive bestanddel kan anvendes som rene substanser eller som en blanding med en ytterligere aktiv bestanddel. Når den anvendes i sine rene form er det foretrukket å anvende en konsentrasjon av aktiv bestanddel på fra 0,01 til 100, mer foretrukket fra 0,05 til 50, enda mer foretrukket fra 1 til 10 mg/ml (dette tall refererer spesielt til et infusjonskonsentrat som før behandling fortynnes tilsvarende, se nedenfor).
Slike preparater lagres på passende måte i hetteglass (flerporsjonsglass) eller ampuller, typisk fremstilles hetteglassene eller ampullene fra glass, f.eks. borsilikatglass eller sodakalkglass. Hetteglassene eller ampullene kan ha et hvilket som helst volum som er vanlig på området, og foretrukket har de en størrelse tilstrekkelig til å romme 0,5 til 5 ml preparat. Preparatet er stabilt i lagringsperioder på opp til 12 til 24 måneder ved temperaturer på minst 2 til 8°C.
Preparatene må fortynnes i et vandig medium egnet for intravenøs tilførsel før preparatet med den aktive bestanddel kan tilføres en pasient.
Infusjonsoppløsningen må foretrukket ha det samme eller hovedsakelig det samme osmotiske trykk som kroppsfluid. Følgelig, inneholder det vandige medium foretrukket et isotonisk middel som har den virkning at det gjør det osmotiske trykk av infusjons-oppløsningen det samme eller hovedsakelig det samme som for kroppsfluidet.
Det isotoniske middel kan velges fra hvilke som helst av de midler som er kjent på området, f.eks. mannitol, dekstrose, glukose og natriumklorid. Foretrukket er det isotoniske middel glukose eller natriumklorid. Det isotoniske midler kan anvendes i mengder som gir infusjonsoppløsningen det samme eller hovedsakelig det samme osmotiske trykk som kroppsfluid. De nøyaktige mengder som behøves kan bestemmes ved hjelp av rutineforsøk og vil avhenge av sammensetningen av infusjonsoppløsningen og arten av det isotoniske middel. Utvelgelse av et spesielt isotonisk middel gjøres ut fra hensyn til egenskapene av det aktive middel.
Konsentrasjonen av isotonisk middel i det vandige medium vil avhenge av arten av det spesielle anvendte isotoniske middel. Når glukose anvendes, anvendes den foretrukket i en konsentrasjon på fra 1 til 5% vekt/volum, mer foretrukket 5% vekt/volum. Når det isotoniske middel er natriumklorid, anvendes det foretrukket i mengder på opp til 1% vekt/volum, spesielt 0,9% vekt/volum.
Infusjonspreparatet kan fortynnes med det vandige medium. Mengden av vandig medium som anvendes som et fortynningsmiddel velges i samsvar med den ønskede konsentrasjon av aktiv bestanddel i infusjonsoppløsningen. Foretrukket fremstilles infusjonsoppløsningen ved å blande et hetteglass eller en ampulle av infusjonskonsentrat nevnt i det foregående med et vandig medium og innstille volumet opp til mellom 20 ml og 200 ml, foretrukket mellom omtrent 50 og omtrent 100 ml, med det vandige medium.
Infusjonsoppløsninger kan inneholde andre konsistensmidler vanlig anvendt i preparater som skal tilføres intravenøst. Konsistensmidler inkluderer antioksidanter. Infusjonsopp-løsninger kan fremstilles ved å blande en ampulle eller hetteglass av preparatet med det vandige medium, f.eks. en 5% vekt/volum glukoseoppløsning i WFI eller spesielt 0,9% natriumkloirdoppløsning i en passende beholder, f.eks. en infusjonspose eller flaske. Infusjonsoppløsningen, når den først er dannet, anvendes foretrukket med en gang eller i løpet av en kort tid etter tildannelse, f.eks. innen 6 timer. Beholdere for å oppbevare infusjonsoppløsninger kan velges fra hvilken som helst konvensjonell beholder som er ikke-reaktiv med infusjonsoppløsningen. Glassbeholdere fremstilt fra de glasstyper som er nevnt i det foregående er egnet selv om det kan være foretrukket å anvende plast-beholdere, f.eks. infusjonsplastposer.
Doseformer kan passende tilføres intravenøst i en dose på fra 0,01 mg opp til 100 mg/m<2> aktiv bestanddel, foretrukket fra 0,1 til 20 mg/m<2> aktiv bestanddel. Den nøyaktige dose som trengs og varigheten for tilførselen vil avhenge av hvor alvorlig tilstanden er, pasientens tilstand og tilførselstakten. Dosen kan tilføres daglig eller foretrukket med mellomrom på noen dager eller uker, f.eks. hver uke eller hver tre uker. Etter som dosen kan tilføres intravenøst, kan den mottatte dose og blodkonsentrasjonen bestemmes nøyaktig på basis av kjente in vivo og in vivo metoder.
Farmasøytiske preparater for oral tilførsel kan oppnås ved å kombinere den aktive bestanddel med faste bærere, om ønsket med granulering av en resulterende blanding, og behandle blandingen, om ønsket eller nødvendig, etter tilsetningen av passende konsistensmidler, til tabletter, dragerte kjerner eller kapsler. Det er også mulig at preparatene kan innlemmes i plastbærere som tillater at de aktive bestanddeler diffunderes eller frigis i målte mengder.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes alene eller i kombinasjon med andre farmasøytisk aktive substanser, f.eks. med andre kjemoterapeutiske midler, som klassiske cytostatika. I tilfellet av kombinasjoner med et annet kjemoterapeutisk middel, fremstilles en bestemt kombinasjon av to eller flere komponenter eller to eller flere uavhengige preparater (f.eks. i et sett med deler) som beskrevet i det foregående, eller de andre kjemoterapeutiske midler anvendes i standard preparater som selges og vil være kjent for den fagkyndige på området, og forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelse og hvilket som helst annet kjemoterapeutisk middel tilføres med et intervall som tillater en felles, ytterligere eller foretrukket synergistisk virkning for tumor-behandling.
Utgangsmaterialer:
Eksempel 1: Total syntese av epotilon E og beslektede sidekiedemodifiserte analoger via en Stille koblingsbasert strategi
Den første totalsyntese av epotilon E (3) utføres ved hjelp av en strategi hvori nøkkeltrinnet er en Stille kobling (Stille et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1986, 25, 508-524; Farina et al., J. Org. React. 1997, 50,1-65) mellom vinyljodid 7 og tiazol-enheten (8h, skjema 2a). Makrolaktonkjernefragmentet 7, som fremstilles via ringslutt-ende olefinmetatesis (RCM), anvendes deretter for å tilveiebringe grei og fleksibel adkomst til en rekke forskjellige sidekjedemodifiserte epotilonanaloger (9) for biologisk evaluering (skjema 2b). RCM-reaksjonen anvendt for å gi adkomst til 7 tilveiebringer også /rawj-makrolaktonet (11, skjema 2b) som tjener som en alternativ utgangsemne for Stille koblingsprosessen og gir en ytterligere rekke av analoger 10.
- Skjema 2:
a) Retrosyntetisk analyse og strategi for den totale syntese av epotilon E
Den kjemiske syntese av de nødvendige vinyljodider 7 og 11 er skissert i PCT patentansøkning WO 98/25929.
Stannankoblingspartnerne anvendt i Stille-reaksjonen er vist i skjema 3.
Stille-kobling: Prosedyre A: 2,0 ekv. av 8, 5-10 mol-% Pd(PPh3)4, toluen, 90-100°C, 15-40 minutter, 39-88%; prosedyre B: 2,0-2,2 ekv. av 8,20-30 mol-% Pd(MeCN)2Cl2, DMF, 25°C, 12-33 timer, 49-94%.
Koblingspartnerne 8b fremstilles fra lett tilgjengelig 2,4-dibromtiazol (20) via monobromider 21 som skissert i skjema 4.
Fremstilling av A) stannaner 8b. Reagenser og betingelser: (b) 3,0 ekv. av NaSMe, EtOH, 25°C, 2 timer, 92%; (d) 13 ekv. NaOH, EtOH, 25°C, 30 timer, 91%; (e) 13 ekv. NaOH, MeOH, 25°C, 16 timer, 82%; (f) 5-10 ekv. av Me3SnSnMe3, 5-10 mol-% av Pd(PPh3)4, toluen, 80-100°C, 0,5-3 timer, 81-100%; (g) 1,1 ekv. avw-BuLi, 1,2 ekv. av w-Bu3SnCl, -78 til 25°C, 30 minutter, 98%.
Sulfid 21b oppnås i 92% utbytte ved å erstatte 2-bromsubstiruenten i 20 med tiometylenheten ved bruk av natriumtiometoksid (EtOH, 25°C). Bromider (21b) blir så omdannet til de ønskede trimetylstannaner (8b) med heksametylditinn under palladium-katalyserte betingelser [Pd(PPh3)4, toluen, 80-100°C].
Med de nødvendige komponenter for hånden, undersøkes de kritiske Stille-koblinger. To alternative sett av reaksjonsbetingelser viser seg tilstrekkelig (skjema 3). Prosedyre A innebærer oppvarming av en toluenoppløsning av det ønskede vinyljodid (7 eller 11) med det angjeldende stannan 8 i nærvær av katalytiske mengder av Pd(PPh3)4 ved 80-100°C i mellom 15 og 40 minutter. Denne protokoll anvendes for å koble stannanen 8b.
Den totale syntese fullføres ved epoksidasjon med in situ generert metylperoksykarb-oksimidsyre (H202, KHC03, MeCN, MeOH, 25°C; Chaudhuri et al., J.J. Org. Chem. 1982,47, 5196-5198) som gir epotilon E (3) (66% basert på 50% omdannelse), som fremviser fysiske karakteristikker (<[>H NMR, [<x]d) identiske med den som er publisert på området.
Stille-koblingsmetoden blir så utvidet til å tilveiebringe lett adgang til en rekke forskjellige sidekjedemodifiserte analoger av epotilon B (2), både ved C-26 og sidekjeden. Retrosyntetisk analyse av epotilonanaloger som har disse dobbeltmodifika-sjoner er vist i skjema 6b og krever fremstilling av det avgjørende vinyljodidkjerne-fragment 24. En makrolaktonisasjonsstrategi lignende den som ble anvendt i syntesen av epotilon B og en rekke forskjellige epotilonanaloger anses å være mest egnet for denne oppgave.
Illustrasjon av en retrosyntetisk analyse av epotilonanaloger med modifiserte C26 og sidekj edeenheter.
Syntesen begynner fra vinyljodidet 13 (skjema 7) anvendt ved fremstilling av epotilon E og beslektede analoger (skjema 3).
Stereoselektiv syntese av aldehyd 35. Reagenser og betingelser: (a) 1,7 ekv. TBSC1,28 ekv. imidazol, DMF, 0 til 25°C, 7 timer, 84%; (b) i. 1,0 mol-% Os04,1,1 ekv. NMO, THF: t-BuOH:H20 (5:5:1), 0 til 25°C, 13 timer, 89%; ii. 6,0 ekv. Nal04, MeOH:H20 (2:1), 0°C, 30 minutter, 92%; (c) 2,4 ekv., 27, benzen, refluks, 1,2 timer, 98%; (d) 3,0 ekv. DIB AL, THF, -78°C, 2,5 timer, 100%, (e) 1,4 ekv. TrCl, 1,7 ekv. 4-DMAP, DMF, 80°C, 21 timer, 95%; (f) 1,4 ekv. 9-BBN, THF, 0°C, 9 timer; deretter 3N vandig NaOH og 30% H202,0°C, 1 time, 95%; (g) 2,6 ekv. I2, 5,0 ekv. imidazol, 2,5 ekv. Ph3P, Et20:MeCN (3:1), 0°C, 45 minutter, 97%; (h) 1,3 ekv. av SAMP-hydrazonet av propionaldehyd, 1,4 ekv. av LD A, THF, 0°C, 16 timer; deretter 100°C og tilsetning av 1,0 ekv. 32 i THF, -100 til -20°C, 20 timer, 71%; (i) 2,5 ekv. MMPP, MeOH:fosfat-bufferpH 7 (1:1), 0°C, 3,5 timer, 89%; (j) 3,0 ekv. DIB AL, toluen, -78°C, 1 time, 88%. 9-BBN = 9-borabicyklo[3.3.1]nonan; DL3AL = diisobutylalurniniumhydrid; 4-DMAP = 4-dimetylaminopyridin; LD A = litiumdiisopropylamid; NMO = 4-metylmorfolin N-oksid; SAMP = (S)-(-)-l-amino-2-(metoksymetyl)pyrrolidin; MMPP = monoperoksy-ftalsyre, magnesiumsalt.
Beskyttelse av den allyliske hydroksylgruppe (TBSC1, imidazol, DMF, 0 til 25°C) gir silyleter 25 (84%) som omdannes til aldehyd 26 ved hjelp av en totrinns dihydroksy-lasjon-glykolspaltningssekvens (Os04, NMO, THF/f-BuOH/H20, 0 til 25°C; deretter NaI04, MeOH/H20, 0°C, 82% for to trinn). En stereokontrollert Wittig-reaksjon med det stabiliserte ylid 27 (benzen, refluks; Marshall et al., J. Org. Chem. 1986, 51,1735-1741; Bestmann et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1965,4,645-660) gir ester 28 som en enkelt geometrisk isomer i 98% utbytte. Reduksjon av den siste forbindelse (DIBAL, THF, -78°C) gir alkohol 29, som beskyttes som trifenylmetyl (trityl) derivatet 30 (TrCl, 4-DMAP, DMF, 70°C, 95%).
Opparbeidelse av det terminale olefin oppnås så ved selektiv hydroboreringsoksidasjon til å gi alkohol 31 (9-BBN, THF, 0°C; deretter NaOH, H202, 0°C) som omdannes videre til dijodid 32 (I2, imidazol, Ph3P, 0°C) i 92% totalt utbytte. Innføring av C8-stereo-senteret oppnås da ved bruk av en Ender's alkylasjonsprotokoll (SAMP hydrazon av propionaldehyd, LDA, THF, 0°C; deretter -100°C og tilsetning av 32 i THF; Enders et al., Asymmetric Synthesis 1984; Morrison, J.D., Ed.; Academic Press, Orlando, bind 3, s. 275-339; Prof. Enders takkes for en generøs gave av SAMP) som resulterer i dannelse av SAMP hydrazon 33 i 71% utbytte. Omdannelse til nitril 34 (MMPP, MeOH/fosfatbuffer pH 7,0, 0°C, 89%) og etterfølgende reduksjon (DIBAL, toluen, -78°C) gir det ønskede aldehyd 35 i 88% utbytte.
Omdannelsen av aldehydet 35 i den ønskede epotilonmakrocykliske kjerne 24 er oppsummert i skjema 8.
Stereoselektiv syntese av vinyljodid 24. Reagenser og betingelser: (a) 1,45 ekv. LD A, THF, -78°C, deretter 1,4 ekv. 36 i THF, -78°C, 1,5 timer, deretter; -40°C, 0,5 timer; deretter 1,0 ekv. av 35 i THF ved -78°C (66% kombinert utbytte, ca. 1,5:1 forhold av 37:38); (b) 3,2 ekv. TBSOTf, 4,3 ekv. 2,6-lutidin, CH2C12, -20 til 0°C, 2,5 timer, 90%; (c) HF-pyr. i pyridin, THF, 0°C, 3 timer, 84%; (d) 2,0 ekv. av (C0C1)2,4,0 ekv. av DMSO, 6,0 ekv. av Et3N, CH2C12, -78 til 0°C, 1,5 timer, 98%; (e) 5,0 ekv. av NaC102, 75 ekv. 2-metyl-2-buten, 2,5 ekv. NaH2P4, f-BuOH:H20 (4,5:1), 25°C, 40 minutter, 100%; (f) 6,0 ekv. av TBAF, THF, 0 til 25°C, 19 timer, 95%; (g) 6,0 ekv. av Et3N, 2,4 ekv. av 2,4,6-triklorbenzoylklorid, THF, 0°C, 1,5 timer, deretter tilsetning til en oppløs-ning av 2,2 ekv. 4-DMAP i toluen (0,005 M basert på 43), 75°C, 2,5 timer, 84%; (h) 25% v/v HF-pyr. i THF, 0 til 25°C, 15 timer, 86%. TBAF = terra w-butylarnmonium-fluorid.
Aldolreaksjon av keton 36, tidligere anvendt ved syntesen av epotilon B og beslektede analoger (LDA, THF, -78 til -40°C) og aldehyd 35, gir alkoholer 37 og 38 i 66% totalt utbytte, med beskjeden selektivitet til den ønskede 6R,7S diastereoisomer (37). Separasjon og silylasjon (TBSOTf, 2,6-lutidin, CH2C12, -20 til 0°C) av det korrekte aldolprodukt 37 gir tris-silyleter 39 i 90% utbytte. Selektiv fjernelse av den primære silyleterbeskyttende gruppe (HF*pyr. i pyridin/THF, 0°C) gir alkohol 40 (84%) som oksideres til syren 42 via aldehyd 41 ved hjelp av en totrinns prosedyre [Swern; deretter NaC102,2-metyl-2-buten, NaH2P04, /-BuOH/H20,25°C, 98% for to trinn). Fjernelse av den Cl 5 silikonbeskyttende gruppe (TBAF, THF, 0 til 25°C) gir hydroksysyren 43
(95%) og legger grunnlaget for makrolaktonisasjonsprosessen. Dette nøkkeltrinn oppnås under Yamaguchi-betingelser (2,4,6-triklorbenzoylklorid, Et3N, THF; deretter tilsetning til en oppløsning av 4-DMAP i toluen, 0,005M, 75°C; Innanaga et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 1979, 52,1989; Mulzer et al., Synthesis 1992,215-228; Nicolaou et al., Chem. Eur. J. 1996,2, 847-868) til å gi den beskyttede epotilonkjerne 44 i 84% utbytte. Total av-beskyttelse (HF-pyr., THF, 0 til 25°C, 86%) fullfører syntesen av nøkkelvinyljodid-mellomproduktforbindelsen 24.
Medmellomproduktforbindelsen 24 forhånden, anvendes så Stille's kokblingsprotokoll for å tilknytte den ønskede heterocykliske enhet.
Kjemien beskrevet i dette eksempel beror på en Stille-koblingsmetode for å konstruere en serie epotilonanaloger med diversitet ved sidekjeden eller både ved sidekjeden og C26-setet fra en felles makrocyklisk utgangsforbindelse.
Eksempel 2: Formler for forbindelser ifølge oppfinnelsen
Eksempel 3: Biologiske resultater
I samsvar med metodene beskrevet i det foregående (inhibering av tubulindepolymerisasjon ved hjelp av en forbindelse med formel I måles ved bruk av svinehjememikrotubuli, ved sammenligning med 25 uM epotilon B; cellulære forsøk er analoge med dem som er beskrevet i det foregående for KB-31-celler).
Eksempel 4: Ytterligere forbindelser med formel I
I analogi med metodene beskrevet i det foregående og i det følgende, fremstilles forbindelser som faller under formel I og som har de følgende formler:
Svnteseprotokoller
Generelt: Alle reaksjoner gjennomføres under en argonatmosfære med tørre, nydestillerte løsningsmidler under vannfrie betingelser, med mindre annet er angitt. Tetrahydrofuran (THF) og dietyleter (eter) er destillert fra natriumbenzofenon og diklormetan (CH2CI2), benzen (PhH), og toluen fra kalsiumhydrid. Vannfrie løsnings-midler er også oppnådd ved å føre dem gjennom kommersielt tilgjengelige aktiverte aluminiumoksidkolonner. Utbytte refererer til kromatografisk og spektrografisk (<*>H NMR) homogene materialer, med mindre annet er angitt. Alle oppløsninger anvendt i bearbeidingsprosedyrer er mettet med mindre annet er angitt. Alle reagenser er kjøpt med den høyeste kommersielle kvalitet og anvendt uten ytterligere rensing med mindre annet er angitt. Alle reaksjoner er overvåket ved hjelp av tynnsjiktskromatografi gjennomført på en 0,25 mm E. Merck silikagelplate (60F-254) ved bruk av UV-lys som visualiseirngsmiddel og 7% etanolisk fosfomolybdensyre eller p-anisaldehydoppløsning og varme som fremkallingsmidler. E. Merck silikagel (60, partikkelstørrelse 0,040-0,063 m) anvendes for hurtig-kolonnekromatografi. Preparative tynnsjiktskromatografi-separasjoner gjennomføres på 0,25,0,50 eller lmm E. Merck silikagelplater (60F-254). NMR-spektra er opptegnet på Bruker DRX-600, AMX-500, AMX-400 eller AC-250 instrumenter og kalibrert ved bruk av rest-udeuterert løsningsmiddel som en intern referanse. De følgende forkortelser ble anvendt for å forklare multiplisitetene: s, singlett; d, dublett; t, triplett; q, kvartett; m, multiplett; bånd, flere overlappende signaler; b, bred. IR-spektra er opptegnet på et Perkin-Elmer 1600 serie FT-IR-spektrometer. Optisk dreining er opptegnet på et Perkin-Elmer 241 polarimeter. Høyoppløsningsmassespektra (HRMS) er opptegnet på et VG ZAB-ZSE massespektrometer under hurtig atombombardering (FAB) "fast atom bombardment"-betingelser.
cis-Makrolaktondiol 7 som illustrert i skjema 3. Til en oppløsning av jodid 16 (305 mg, 0,491 mmol) i THF (8,2 ml, 0,06 M) ved 25°C tilsettes HF«pyr. (2,7 ml) og den resulterende oppløsning omrøres ved den samme temperatur i 27 timer. Reaksjonen stanses så ved forsiktig tilsetning til en blanding av mettet vandig NaHC03 (100 ml) og EtOAc (100 ml), og den resulterende tofaseblanding omrøres ved 25°C i 2 timer. Ekstraktene blir så separert og det organiske lag vasket med mettet vandig NaHC03 (100 ml) og saltløsning (100 ml), og tørkes så (MgSO,*). Rensing ved hjelp av hurtig kolonnekromatografering (silikagel, 20 til 50% EtOAc i heksaner) gir diolen 7 (208 mg, 84%).
Rf = 0,21 (silikagel, 25% EtOAc i heksaner); [a]<22>D -53,1 (c 1,37, CHC13); IR (tynnfilm) Vmaks 3499 (br), 2930,1732,1688,1469,1379,1259,1149,1093,1048,1006, 732 cm-<1>; lK NMR (500 MHz, CDC13) 8 6,43 (s, 1H, IC#=C(CH3)), 5,44 (ddd, J=10,5,10,5, 4,5Hz, 1H, CH=CHCH2), 5,34 (dd, J=9,5,2,0Hz, 1H, CHOCO), 5,32 (ddd, J=10,5, 10,5,5,5Hz, 1H, CH=CHCH2), 4,07 (ddd, J=11,0, 6,0, 3,0Hz, 1H, (CH3)2CCH(OH)), 3,73 (ddd, J=2,5,2,5,2,5Hz, 1H, CHOH(CHCH3)), 3,10 (qd, J=7,0, 2,5Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,84 (d, J=2,5Hz, 1H, CH(CH3CHOHCH(CH3)), 2,66 (ddd, J=15,0,9,5, 9,5Hz, 1H, =CHCH2CHO), 2,51 (dd, J=15,5,11,0Hz, 1H, CH2COO), 2,42 (dd, J=15,5, 3,0Hz, 1H, CH2COO), 2,35 (d, J=6,0Hz, 1H, (CH3)2CHOH), 2,21-2,12 (m, 2H), 2,05-1,97 (m, 1H), 1,88 (s, 3H, ICH=CCH3), 1,76-1,70 (m, 1H), 1,70-1,62 (m, 1H), 1,32 (s, 3H, C(CH3)2), 1,18 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CH(C=0)), 1,10 (s, 3H, C(CH3)2), 1,35-1,05
(m, 3H), 0,99 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CHCH2); HRMS (FAB), beregnet for C22H35IO5 (M+Cs<+>) 639.0584, funnet 639.0557.
trans-Makrolaktondiol 11 som illustrert i skjema 3. En oppløsning av jodid 17 (194 mg, 0,313 mmol) i THF (2,5 ml, 0,06 M) behandles med HF»pyr. (1,7 ml) ifølge prosedyren beskrevet for fremstillingen av diol 7 til etter hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 20 til 50% EtOAc i heksaner) å gi diol 11 (134 mg, 85%). Rf = 0,16 (silikagel, 25% EtOAc i heksaner); [cc]<22>D-20,0 (c 1,15, CHCI3); IR (film) 3478, 2930, 1732,1693 cm'<1>; <*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 6,37 (d, J=l,5Hz, 1H, ICH=CCH3), 5,35 (ddd, J=14,5, 7,0, 7,0Hz, 1H, CH=CHCH2), 5,24 (ddd, J=14,5, 7,0, 7,0Hz, 1H, CH=CHCH2), 5,17 (dd, J=6,5,3,5Hz, 1H, CHOCO), 4,41 (dd, J=8,0,3,5Hz, 1H, (CH3)2CCH(OTBS)), 3,85 (bs, 1H, CHOH(CHCH3)), 3,38 (bs, 1H, CHOH(CHCH3)), 3,18 (qd, J=7,0,6,5Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,68-2,34 (m, 4H), 2,44 (s, 3H, CH3Ar), 2,19-2,11 (m, 1H), 1,96 (s, 3H, CH3C=CH), 1,99-1,93 (m, 1H), 1,67-1,52 (m, 2H), 1,48-1,42 (m, 1H), 1,31-0,99 (m, 2H), 1,22 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CH(C=0)), 1,14 (s, 3H, C(CH3)2), 1,09 (s, 3H, C(CH3)2), 1,02 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CHCH2), 0,84 (s, 9H, SiC(CH3)3(CH3)2), 0,08 (s, 3H, SiC(CH3)3(CH3)2), -0,01 (s, 3H, SiC(CH3)3(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C22H35l05 (M+Cs*) 639.0584, funnet 639.0606.
2-Tiometyl-4-bromtiazol 21b som illustrert i skjema 4.2,4-dibromtiazol 20 (82 mg, 0,34 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i etanol (2,3 ml, 0,15 M) og behandles med natriumtiometoksid (75 mg, 1,02 mmol, 3,0 ekv.). Reaksjonsblandingen omrøres ved 25°C i 2 timer, hvoretter fullført reaksjon påvises ved hjelp av 'H NMR. Blandingen helles ut i vann (5 ml) og ekstraheres med eter (2x5 ml). De kombinerte organiske fraksjoner tørkes (MgS04), løsningsmidlene avdampes og resten renses ved hjelp av hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 5% EtOAc i heksaner) til å gi 2-tiometyl-4-bromtiazol 21b (77 mg, 92%). Rf = 0,58 (silikagel, 10% EtOAc i heksaner); IR (film) vws 3118, 2926,1459,1430,1388,1242, 1040, 966, 876, 818 cm'<1>; <l>H NMR (500 MHz, CDCI3) 8 7,07 (s, 1H, ArH), 2,69 (s, 3H, SCH3); GC/MS (EI), beregnet for C4H4BrNS2 (M<+>) 209/211, funnet 209/211.
2-Tiometyl-4-trimetylstannyltiazol 8b som illustrert i skjema 3. Til en oppløsning av bromtiazol 21b (51 mg, 0,24 mmol, 1,0 ekv.) i avgasset toluen (4,9 ml, 0,1M) tilsettes heksametylditinn (498 ul, 2,4 mmol, 10 ekv.) og Pd(PPh3)4 (14 mg, 0,012 mmol, 0,05 ekv.) og reaksjonsblandingen oppvarmes ved 80°C i 3 timer. Deretter avkjøles reaksjonsblandingen til 25°C og gir etter hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 5%
Et3N i heksaner), stannan 8b (71 mg, 100%). Rf = 0,67 (silikagel; forbehandlet med Et3N, 10% EtOAc); IR (film) 2981,2924,1382,1030, 772 cm"1; 1H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,25 (s, 1H, ArH), 2,70 (s, 3H, SCH3), 0,32 (s, 9H, Sn(CH3)3; HRMS (FAB), beregnet for C7Hi3NS2Sn (M+H<+>) 295.9588, funnet 295.9576.
Epotilon E (3) som illustrert i skjema 2 og 3. Til en oppløsning av lakton 18h (10,0 mg, 0,020 mmol, 1,0 ekv.) i metanol (600 (al, 0,03M) tilsettes acetonitril (32 ul, 0,606 mmol, 30 ekv.), KHC03 (10 mg, 0,102 mmol, 5 ekv.) og hydrogenperoksid (27 ul, 35% vekt/vekt i vann, 0,303 mmol, 15 ekv.) og reaksjonsblandingen omrøres ved 25°C i 3 timer. Ytterligere acetonitril (32 ul, 0,606 mmol, 30 ekv.), KHC03 (10 mg, 0,102 mmol, 5 ekv.) og hydrogenperoksid (27 ul, 35% vekt/vekt iv ann, 0,303 mmol, 15 ekv.) tilsettes så og omrøring fortsettes i ytterligere 3 timer. Reaksjonsblandingen føres så direkte gjennom en kort plugg av silikagel, med eluering med eter og filtratet konsentreres under redusert trykk. Preparativ tynnsjiktkromatografi (250 mm silikagelplate, 50% EtOAc i heksaner) gir ureagert utgangsmateriale 18h (5,0 mg, 50%) og epotilon E (3) (3,4 mg, 33%). Rf = 0,56 (silikagel, 66% EtOAc i heksaner); [a]<22>D = -27,5 (c 0,20, CHC13); IR (film) vws 3413,2928,2867,1731,1689,1462,1375,1257,1152,1061, 978,756 cm"1; *H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,13 (s, 1H, ArH), 6,61 (s, 1H, CH=CCH3), 5,46 (dd, J=8,l, 2,4Hz, 1H, CHOCO), 4,94 (d, J=5,2Hz, 2H, CH2OH), 4,16-4,12 (m, 1H, (CH3)2CCH(OH)), 3,82-3,78 (m, 1H, CHOH(CHCH3)), 3,66 (bs, 1H, OH), 3,23 (qd, J=6,8, 5,2Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 3,04 (ddd, J=8,l, 4,5,4,5Hz, 1H, CH2CH(0)CHCH2), 2,91 (ddd, J=7,3,4,5,4,1Hz, 1H, CH2CH(0)CHCH2), 2,61 (t, J=5,2Hz, 1H, CH2OH), 2,55 (dd, J=14,7,10,4Hz, 1H, CH2COO), 2,48 (bs, 1H, OH), 2,45 (dd, J=14,7,3,2Hz, 1H, CH2COO), 2,14-2,07 (m, 1H, CH2CH(0)CHCH2), 2,11 (s, 3H, CH=CCH3), 1,91 (ddd, J=15,l, 8,1, 8,1Hz, 1H, CH2CH(0)CHCH2), 1,78-1,66 (m, 2H, CH2CH(0)CHCH2), 1,52-1,38 (m, 5H), 1,36 (s, 3H, C(CH3)2), 1,18 (d, 3H, J=6,8Hz, CH3CH(C=0)), 1,10 (s, 3H, C(CH3)2), 1,01 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CHCH2); HRMS (FAB), beregnet for C26H39N07S (M+H<+>) 510.2525, funnet 510.2539.
cis-Makrolakton 18b som illustrert i skjema 3. En oppløsning av vinyljodid 7 (9,2 mg, 0,018 mmol, 1,0 ekv.), stannan 8b (10,7 mg, 0,036 mmol, 2,0 ekv.) og Pd(PPh3)4 (2,1 mg, 0,0018 mmol, 0,1 ekv.) i avgasset toluen (180 ul, 0,1 M) oppvarmes ved 100°C i 40 minutter, ifølge prosedyren beskrevet for syntesen av lakton 18h, til etter preparativ tynnsjiktkromatografi (250 mm silikagelplate, 75% eter i heksaner), å gi makrolakton 18b (4,1 mg, 44%). Rf = 0,50 (silikagel, 50% EtOAc i heksaner); [a]<22>D -38,6 (c 0,21, CHC13); IR (tynnfilm) 3444, 2925,1732,1682,1259,1037, 756 cm"<1>; <*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 6,99 (s, 1H, CH=C(CH3)), 6,52 (bs, 1H, ArH), 5,45 (ddd, J=10,5,
10,5,4,0Hz, 2H, CH=CHCH2), 5,39 (ddd, J=10,5,10,5,4,0Hz, 1H, CH=CHCH2), 5,29 (d, J=8,0Hz, 1H, CHOCO), 4,20 (ddd, J=11,0, 5,5,2,5Hz, 1H, (CH3)2CCH(OH)), 3,75-3,73 (m, 1H, CHOH(CHCH3)), 3,13 (qd, J=6,5, 2,0Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,98 (d, J=2,0Hz, 1H, CHOH(CHCH3)), 2,93 (d, J=5,5Hz, 1H, (CH3)2CCH(OH)), 2,71 (ddd, J=15,0,10,0,10,0Hz, 1H, CH=CHCH2), 2,70 (s, 3H, SCH3), 2,51 (dd, J=15,5,11,5Hz, 1H, CH2COO), 2,30 (dd, J=15,0, 2,5Hz, 1H, CH2COO), 2,28-2,16 (m, 2H), 2,13 (d, J=l,0Hz, 3H, CH=CCH3), 2,06-1,98 (m, 1H), 1,79-1,60 (m, 2H), 1,40-1,06 (m, 3H), 1,33 (s, 3H, C(CH3)2), 1,19 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CH(C=0)), 1,09 (s, 3H, C(CH3)2), 1,00 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CHCH2); HRMS (FAB), beregnet for C26H39N05S2 (M+Cs<+>) 642.1324, funnet 642.1345.
trans-Makrolakton 19b som illustrert i skjema 3. En oppløsning av vinyljodid 11 (6,9 mg, 0,014 mmol, 1,0 ekv.), stannan 8b (8,2 mg, 0,028 mmol, 2,0 ekv.) og Pd(PPh3)4 (1,6 mg, 0,0014 mmol, 0,1 ekv.) i avgasset toluen (140 ul, 0,1M) oppvarmes ved 100°C i 40 minutter ifølge prosedyren beskrevet for syntesen av lakton 18h til etter preparativ tynnsjiktkromatograri (250 mm silikagelplate, 75% eter i heksaner), å gi makrolakton 19b (5,0 mg, 72%). Rf = 0,47 (silikagel, 50% EtOAc i heksaner); [cc]22D - 32,9 (c 0,35, CHC13); IR (film) <y>maks 3488, 2928,1728,1692,1259,1036, 800,757 cm"
'; 'H NMR (500 MHz, CDC13) 6 7,00 (s, 1H, ArH), 6,48 (s, 1H, CH=CCH3), 5,53 (ddd, J=15,0,7,5,7,5Hz, 1H, CH=CHCH2), 5,40 (d, J=8,0Hz, 1H, CHOCO), 5,39 (ddd, J=15,0, 7,5,7,5Hz, 1H, CH=CHCH2), 4,12 (ddd, J=11,0,2,5,2,5Hz, 1H, (CH3)2CCHOH), 3,77-3,74 (m, 1H, CHOH(CHCH3)), 3,24 (m, 1H, CH=CHCH2), 3,07 (m, 1H, CH3CH(C=0)), 2,70 (s, 3H, SCH3), 2,61 (d, J=3,5Hz, 1H, CHOH(CHCH3)), 2,59-2,44 (m, 5H), 2,19-2,12 (m, 1H), 2,13 (s, 3H, CH=CCH3), 2,02-1,94 (m, 1H), 1,70-1,55 (m, 2H), 1,48-1,41 (m, 1H), 1,29 (s, 3H, C(CH3)2), 1,18 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CH(C=0)), 1,08 (s, 3H, C(CH3)2), 0,99 (d, J=7,0Hz, 3H, CH3CHCH2); HRMS (FAB), beregnet for C26H39N05S2 (M+Cs<+>) 642.1324, funnet 642.1298.
Silyleter 25 som illustrert i skjema 7. Til en oppløsning av alkohol 13 (12,96 g, 54,4 mmol, 1,0 ekv.) i DMF (180 ml, 0,3M) ved 0°C tilsettes imidazol (10,2 g, 150,0 mmol, 2,8 ekv.) etterfulgt av tert-butyldimetyklorsilan (13,5 g, 89,8 mmol, 1,7 ekv.). Etter oppvarming til 25°C i 7 timer fjernes løsningsmidlet under redusert trykk og den resulterende oljen fordeles mellom eter (200 ml) og mettet vandig NH4CI (200 ml). Det vandige laget ekstraheres med eter (200 ml) og de kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (550 ml), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 0 til 5% EtOAc i heksaner) gir silyleter 25 som en olje (16,03 g, 84%). Rf = 0,48 heksaner); [a]<22>D -17,5 (c 1,65, CHC13); IR (tynnfilm) Vmaks 2954, 2928, 2857, 1472,1361, 1278,1252,1082, 914, 836, 776, 677 cm"<1>;<*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 6,15 (s, 1H, CH=CCH3), 5,74-5,66 (m, 1H, CH=CH2), 5,03 (bm, 1H, CH=CH2), 5,01 (s, 1H, CH=CH2), 4,16 (dd, J=6,5, 6,5Hz, 1H, CHOH), 2,25 (m, 1H, CH2=CHCH2), 1,77 (s, 3H, CH=CCH3), 0,88 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), -0,01 (s, 3H, Si(CH3)2).
Aldehyd 26 som illustrert i skjema 7. Til en oppløsning av olefin 25 (16,0 g, 45,3 mmol, 1,0 ekv.) i en blanding av THF (206 ml), t-BuOH (206 ml) og H20 (41 ml) ved
0°C tilsettes 4-metylmorfolin N-oksid (NMO) (5,84 g, 49,8 mmol, 1,1 ekv.) etterfulgt av Os04 (5,2 ml, 2,5% vekt/volum i t-BuOH, 0,453 mmol, 0,01 ekv.). Blandingen omrøres kraftig i 13 timer ved 25°C og deaktiveres deretter med mettet vandig Na2S03 (125 ml). Den resulterende oppløsningen omrøres i 2 timer og fordeles så mellom EtOAc (150 ml) og vann (150 ml). Den organiske fase separeres og den vandige fase ekstraheres med EtOAc (2x200 ml). De kombinerte organiske ekstrakter tørkes (MgS04), filtreres og løsningsmidlene fjernes under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 50 til 90% eter i heksaner) gir ureagert utgangsmateriale (1,0 g, 6%) og de ønskede dioler som en ca. 1:1 blanding av diastereoisomerer (15,5 g, 89%). Rf = 0,44 (silikagel, 50% EtOAc i hekasner); IR (tynnfilm) 3387, 2952, 2928, 1252, 1080, 837, 77 cm" l; <*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 6,28 og 6,26 singletter, 1H total, CH=CCH3), 4,47-4,42 (m, 1H, CHOSi), 3,86-3,76 (m, 1H, CHOH), 3,61-3,55 og 3,49-3,39 (m, 2H total, CH2OH), 3,33 og 3,15 (2 dubletter, J=2,0 og 3,5Hz, 1H total, CHOH), 2,46 og 2,45 (tripletter, J=5,5 og 5,5Hz, CH2OH), 1,78 og 1,76 (singletter, 3H total), 1,63-1,60 og 1,58-1,53 (m, 2H total, CH2), 0,88 og 0,87 (singletter, 9H total, SiC(CH3)3), 0,08 og 0,07 (singletter, 3H total, Si(CH3)2), 0,01 og 0,00 (singletter, 3H total, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for Ci3H27I03Si (M+Na+) 409.0672, funnet 409,0662.
Diolene (oppnådd som beskrevet i det foregående) (23,3 g, 60,2 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i en blanding av MeOH (400 ml) og vann (200 ml) og oppløsningen avkjøles til 0°C. NaI02 (77,2 g, 361,1 mmol, 6,0 ekv.) tilsettes så porsjonsvis i løpet av 5 minutter, og den resulterende slurry omrøres kraftig i 30 minutter ved 25°C. Etter fullført reaksjon, fordeles blandingen mellom CH2C12 (500 ml) og vann (500 ml) og den organiske fasen separeres. Det vandige lag ekstraheres med CH2C12 (500 ml) og de kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (11), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 17 til 50% eter i heksaner) gir aldehyd 26 som en olje (19,6 g, 92%). Rf = 0,35 (silikagel, 20% eter i heksaner); [cc]<22>D -34,1 (c 2,8, CHC13); IR (tynnfilm) v/maks 2954,2928,2885,2856, 1728,1471,1279,1254,1091, 838, 777,677 cm"<1>; 'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 9,73
(dd, J=2,5,2,5Hz, 1H, CHO), 6,34 (s, 1H, CH=CCH3), 4,70 (dd, J=8,0,4,0Hz, 1H, CHOSi), 2,68 (ddd, J=16,0, 8,3, 2,5Hz, 1H, (CHO)CH2), 2,44 (ddd, J=16,0,4,0,2,5Hz, 1H, (CHO)CH2), 1,80 (s, 3H, CH=CCH3), 0,85 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,05 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,01 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for Ci2H23I02Si (M+Na<+>) 377.0410, funnet 377.0402.
Metylester 28 som illustrert i skjema 7. En blanding av aldehyd 26 (19,6 g, 55,2 mmol, 1,0 ekv.) og stabilisert ylid 27 (50,2 g, 134,0 mol, 2,4 ekv.) [fremstilt fra 4-brom-1-buten ved: (i) fosfoniumsaltdannelse; (ii) aniondannelse med KHMDS; og (iii) deaktivering med MeOC(O)Cl)] (Se Marshall, J.A., et al., J. Org. Chem. 51,1735-1741
(1986) og Bestman, H.J., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1965, 645-60) i benzen (550 ml, 0,1 M) oppvarmes under tilbakeløp i 1,5 timer. Etter avkjøling til 25°C filtreres blandingen og løsningsmidlet fjernes under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 9 til 17% eter i heksaner) gir metylester 28 (24,5 g, 98%). Rf = 0,37 (silikagel, 20% eter i heksaner); [a]<22>D -7,25 (c 1,6, CHC13); IR (tynnfilm) 3078, 2952, 2920, 2856, 1720,1462, 1434,1276,1253,1208,1084, 836, 776, 672 cm'1; !H NMR (600 MHz, CDC13) 8 6,81 (dd, J=7,4, 7,4Hz, 1H, CH=CCOOCH3), 6,22 (s, 1H, CH=CCH3), 5,83-5,75 (m, 1H, CH=CH2), 4,99-4,98 (m, 1H, CH=CH2), 4,96 (m, 1H, CH=CH2), 4,22 (dd, J=7,5, 5,1Hz, 1H, CHOSi), 3,72 (s, 3H, COOCH3), 3,05 (d, J=6,0Hz, 2H, CH2C(C02Me)), 2,40 (ddd, J=15,0, 7,5, 7,5Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,33 (ddd, J=15,0, 7,5,5,1Hz, 1H, CH2CHOSi), 1,77 (s, 3H, CH=CCH3), 0,85 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2), -0,02 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for Ci8H3iI03Si (M+Cs<*>), 583.042, funnet 583.0159.
Allylalkohol 29 som illustrert i skjema 7. Metylester 28 (24,5 g, 54,3 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i THF (280 ml) og oppløsningen avkjøles til -78°C. DIBAL (163,0 ml, IM i CH2C12,163,0 mmol, 3,0 ekv.) tilsettes dråpevis ved -78°C i løpet av 50 minutter, og reaksjonsblandingen omrøres i ytterligere 80 minutter. Reaksjonsblandingen blir så deaktivert med mettet vandig natriumkaliumtartrat (150 ml) og den resulterende blanding får oppvarme seg til 25°C i løpet av 16 timer. Det organiske lag separeres og den vandige fase ekstraheres med eter (3x250 ml). De kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (650 ml), tørkes (MgSO-t) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 17 til 50% eter i heksaner) gir alkohol 29 (22,9 g, 100%). Rf = 0,11 (silikagel, 20% eter i heksaner); [a]<22>D -7,25 (c 1,6, CHC13); IR (tynnfilm) 3346, 3078,2954,2928,2857,1637,1471,1361,1276,1252,1078, 1005,836, 775, 674, 558 cm-<1>; <l>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 6,16 (s, 1H, CH=CCH3), 5,81-5,73 (m, 1H, CH=CH2), 5,45 (dd, J=6,5, 6,5Hz, 1H, CH=CCH2OH), 5,03 (m, 2H, CH=CH2), 4,16 (dd, J=6,5, 6,5Hz, 1H, CHOSi), 4,02 (d, J=4,5Hz, 2H, CH2OH), 2,85 (dd, J=15,0, 5,1Hz, 1H, CH2CH=CH2), 2,84 (dd, J=15,0, 5,0Hz, 1H, CH2CH=CH2), 2,27 (ddd, J=15,0,6,5,6,5Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,25 (ddd, J=15,0, 6,5, 6,5Hz, 1H, CH2CHOSi), 1,78 (s, 3H, CH=CCH3), 0,88 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2), - 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for Ci7H3iI02Si (M+Cs<+>), 555.0192, funnet 555.0177.
Trifenylmetyleter 30 som illustrert i skjema 7. Alkohol 29 (23,5 g, 55,7 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i DMF (300 ml, 0,15 M) og 4-DMAP (11,3 g, 92,5 mmol, 1,7 ekv.) og tritylklorid (22,1 g, 79,3 mmol, 1,4 ekv.) tilsettes. Reaksjonsblandingen omrøres ved 80°C i 21 timer, avkjøles til romtemperatur og løsningsmidlet fjernes under redusert trykk. Den resulterende rest renses ved hjelp av hurtig kolonnekromatografi for å gi den ønskede eter 30 som en olje (35,3 g, 95%). Rf = 0,88 (silikagel, 20% eter i heksaner); [a]<22>D -0,74 (c 0,3, CHC13); IR (tynnfilm) 3058,2927,2854,1488,1470,1448, 1250,1082, 836, 702,632 cm-<1>; 'H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,45-7,43 (m, 5H, Ph), 7,32-7,21 (m, 10H, Ph), 6,19 (s, 1H, CH=CCH3), 5,61 (m, 2H, CH=CH2, CH=CH2), 4,87 (m, 2H, CH=CH2, CH(C)CH2OTr), 4,19 (dd, J=6,8, 6,8Hz, 1H, CHOSi), 3,46 (s, 2H, CH2OTr), 2,78 (dd, J=15,4,6,7Hz, 1H, CH2CH=CH2), 2,73 (dd, J=15,4, 6,3Hz, 1H, CH2CH=CH2), 2,33 (ddd, J=14,5,6,8,6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,31 (ddd, J=14,5, 6,8, 6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 1,80 (s, 3H, CH=CCH3), 0,87 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,00 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C36H45I02Si (M+Cs<+>), 797.1288, funnet 797.1309.
Alkohol 31 som illustrert i skjema 7. Olefin 30 (35,3 g, 53,1 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i THF (53 ml, 1,0M) og oppløsningen avkjøles til 0°C. 9-BBN (149 ml, 0,5M i THF, 74,5 mmol, 1,4 ekv.) tilsettes dråpevis i løpet av 1,5 timer og den resulterende blandingen omrøres i 9 timer ved 0°C. Vandig NaOH (106 ml av en 3N oppløsning, 319,0 mmol, 6,0 ekv.) tilsettes, etterfulgt av vandig H202 (32 ml, 30% vekt/vekt i vann, 319,0 mmol, 6,0 ekv.). Omrøring fortsettes i 1 time ved 0°C hvoretter reaksjonsblandingen fortynnes med eter (500 ml) og vann (500 ml). Det organiske lag separeres og den vandige fase ekstraheres med eter (2x500 ml). De kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (11), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 9 til 50% eter i heksaner) gir primær alkohol 31 (34,6 g, 95%). Rf = 0,54 (silikagel, 60% eter i heksaner); [cc]22D - 3,5 (c 0,2, CHC13); IR (tynnfilm) i^s 3380, 3058, 3032,2926,2855,1489,1449, 1278,1251,1078, 835, 706,632 cm-<1>; lK NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,47-7,45 (m, 5H, Ph), 7,32-7,22 (m, 10H, Ph), 6,22 (s, 1H, CH=CCH3), 5,58 (dd, J=7,l, 7,1 Hz, 1H, C=CHCH2), 4,22 (dd, J=6,8, 6,0Hz, 1H, CHOSi), 3,52 (bm, 2H, CH2OH), 3,50 (s, 2H, CH2OTr), 2,33 (dd, J=14,5, 6,8, 6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,28 (ddd, J=14,5,6,8,6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,14 (m, 2H, CH2CH2CH2OH), 1,82 (s, 3H,CH=CCH3), 1,46 (m, 2H, CH2CH2OH), 0,90 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,06 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C36H47l03Si (M+Cs<+>), 815.1394, funnet 815.1430.
Jodid 32 som illustrert i skjema 7. En oppløsning av alkohol 31 (34,6 g, 50,73 mmol, 1,0 ekv.) i en blanding av eter (380 ml) og MeCN (127 ml) avkjøles til 0°C. Imidazol (17,3 g, 253,7 mmol, 5,0 ekv.) og PPh3 (33,3 g, 126,8 mmol, 2,5 ekv.) tilsettes så og blandingen omrøres inntil alle faststoffene er oppløst. Jod (33,5 g, 131,9 mmol, 2,6 ekv.) tilsettes og blandingen omrøres i 45 minutter ved 0°C. Reaksjonen stanses ved tilsetning av mettet vandig Na2S203 (150 ml) og lagene separeres. Den vandige fase blir så ekstrahert med eter (2x250 ml) og de kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (750 ml), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 5 til 9% eter i heksaner) gir jodid 32 (39,2 g, 97%). Rf= 0,88 (silikagel, 60% eter i heksaner); [ct]<22>D -2,9 (c 2,6, CHC13); IR (tynnfilm) Vmaks 3057,2926,2855,1481,1448,1251,1083,939, 836, 774,706, 632 cm-<1>; lU NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,49-7,45 (m, 5H, Ph), 7,33-7,23 (m, 10H, Ph), 6,23 (s, 1H, CH=CCH3), 5,67 (dd, J=7,2, 7,1Hz, 1H, CH2C=CH), 4,22 (dd, J=6,8, 6,8Hz, 1H, CHOSi), 3,51 (s, 2H, CH2OTr), 3,07 (dd, J=7,l, 7,0Hz, 2H, CH2I), 2,34 (ddd, J=14,5, 6,8, 6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,25 (ddd, J=14,5, 6,8, 6,8Hz, CH2CHOSi), 2,13 (m, 2H, CH2CH2CH2I), 1,84 (s, 3H, CH=CCH3), 1,75 (m, 2H, CH2CH2CH2I), 0,90 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C36H46I202Si (M+Cs<+>), 925.0411, funnet 925.0450.
Hydrazon 33 som illustrert i skjema 7. Diisopropylamin (5,0 ml, 35,28 mmol, 1,4 ekv.) tilsettes til en oppløsning av «-BuLi (22,0 ml, 1,6M i heksaner, 35,28 mmol, 1,4 ekv.) i 32 ml THF ved 0°C og omrøres i 1 time. SAMP hydrazonet av propionaldehyd (5,6 g, 32,76 mmol, 1,3 ekv.) i THF (16 ml), tilsettes til denne nyfremstilte oppløsning av LD A ved 0°C. Etter omrøring ved denne temperatur i 16 timer, avkjøles den resulterende gule oppløsning til -100°C og en oppløsning av jodid 32 (20,0 g, 25,23 mmol, 1,0 ekv.) i THF (32 ml) tilsettes dråpevis i løpet av en periode på 2 timer. Blandingen får oppvarmes til -20°C i løpet av 20 timer, og helles så inn i mettet vandig NH4CI (50 ml) og ekstraheres med eter (3x100 ml). Den kombinerte organiske ekstrakt tørkes (MgS04), filtreres og inndampes. Rensing ved hjelp av hurtig kolonnekromatografi på silikagel (5 til 50% eter i heksaner) gir hydrazon 33 (15,0 g, 71%) som en gul olje. Rf = 0,63 (silikagel, 40% eter i heksaner); [ct]<22>D -22,7 (c 0,2, CHC13); IR (tynnfilm) 3057, 2927,2854, 1489,1448,1251,1078, 940, 836, 775, 706, 668, 632 cm"<1>; 'H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,46-7,44 (m, 5H, Ph), 7,31-7,21 (m, 10H, Ph), 6,40 (d, J=6,5Hz, 1H, N=CH), 6,21 (s, 1H, CH=CCH3), 5,50 (dd, J=7,0, 7,0Hz, 1H, CH2C=CH), 4,20 (dd, J=6,0,6,0Hz, 1H, CHOSi), 3,54 (dd, J=9,2, 3,5Hz, 1H, CH2OCH3), 3,45 (s, 2H, CH2OTr), 3,41 (dd, J=9,5, 7,0Hz, 1H, CH2OCH3), 3,37 (s, 3H, CH2OCH3), 3,32-3,30 (m, 2H, CH2N), 2,60-2,55 (m, 1H), 2,34-2,20 (m, 3H), 2,04-1,95 (m, 1H), 1,98-1,73 (m, 5H), 1,82 (s, 3H, CH=CCH3), 1,38-1,21 (m, 4H), 0,96 (d, J=6,9Hz, 3H, CHCH3), 0,89 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,06 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,01 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C45H63IN203Si (M+Cs<*>), 967.2707, funnet 967.2740.
Nitril 34 som illustrert i skjema 7. Monoperoksiftalsyremagnesiumsalt (MMPP*6H20, 80%, 52,4 g, 84,8 mmol, 2,5 ekv.) tilsettes porsjonsvis i løpet av 10 minutter til en hurtig omrørt oppløsning av hydrazon 33 (28,3 g, 33,9 mmol, 1,0 ekv.) i en blanding av MeOH (283 ml), THF (100 ml) og pH 7 fosfatbuffer (283 ml) ved 0°C. Blandingen omrøres ved 0°C i 1,5 timer og deretter tilsettes mer THF (120 ml) i to porsjoner i løpet av 30 minutter for å hjelpe til med å oppløse utgangsmaterialet. Etter omrøring i ytterligere 1,5 timer helles reaksjonsblandingen inn i en mettet vandig oppløsning av NaHC03 (750 ml) og produktet ekstraheres med eter (750 ml) og deretter EtOAc (2x750 ml). De kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (11), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 9 til 20% eter i heksaner) gir nitril 34 som en fargeløs olje (21,8 g, 89%). Rf = 0,44 (silikagel, 20% eter i heksaner); [cc]<22>D +2,9 (c 1,2, CHC13); IR (tynnfilm) 3057, 2928,2855, 2238,1490,1448,1252,1081, 836, 775, 707,632 cm"<1>; <*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,47-7,45 (m, 5H, Ph), 7,33-7,23 (m, 10H, Ph), 6,22 (s, 1H, CH=CCH3), 5,56 (dd, J=6,8,6,8Hz, 1H, CH2C=CH), 4,21 (dd, J=6,8, 6,8Hz, 1H, CHOSi), 3,49 (s, 2H, CH2OTr), 2,48 (m, 1H, CH(CH3)), 2,29 (ddd, J=14,5,6,8, 6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,24 (ddd, J=14,5, 6,8,6,8Hz, 1H, CH2CHOSi), 2,07 (m, 2H, CH2(C)CH2OTr)), 1,82 (s, 3H, CH=CCH3), 1,58-1,23 (m, 4H), 1,24 (d, J=7,0Hz, 3H, CHCH3), 0,90 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,0 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C39H5oIN02Si (M+Cs<*>), 852.1710, funnet 852.1738.
Aldehyd 35 som illustrert i skjema 7. Nitril 34 (7,01 g, 9,74 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i toluen (195 ml, 0,05M) og avkjøles til -78°C. DIBAL (29,2 ml, 1,0M i toluen, 29,2 mmol, 3,0 ekv.) tilsettes dråpevis ved -78°C i løpet av 10 minutter. Reaksjonsblandingen omrøres ved -78°C inntil fullstendig omsetning er bekreftet ved hjelp av TLC (1 time). Metanol (10 ml) og HC1 (10 ml, 1,0N i vann) tilsettes i rekkefølge og den resulterende blanding bringes opp til 0°C i løpet av 1 time. Eter (250 ml) og vann (250 ml) tilsettes og lagene separeres. Den vandige fase ekstraheres med eter (2x250 ml) og de kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (500 ml), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 17 til 33% eter i heksaner) gir aldehyd 35 som en olje(6,18 g, 88%). Rf = 0,51 (silikagel, 20% eter i heksaner); [a]<22>D +2,0 (c 0,3, CHC13); IR (tynnfilm) vws 3057, 2927,2855,1726,1490,1448,1251,1081, 836, 775, 707,632 cm'<1>; <*>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 9,51 (d, J=l,9Hz, 1H, CHO), 7,46-7,45 (m, 5H, Ph), 7,32-7,22 (m, 10H, Ph), 6,20 (s, 1H, CH=CCH3), 5,54 (dd, J=7,0, 7,0Hz, 1H, CH2CH=CH), 4,20 (dd, J=6,5, 6,0Hz, 1H, CHOSi), 3,47 (s, 2H, CH2OTr), 2,34-2,20 (m, 3H, CH2CHOSi og CH(CH3)), 2,04 (m, 2H, CH2(C)CH2OTr), 1,82 (s, 3H, CH=CCH3), 1,66 (m, 1H), 1,30-1,19 (m, 3H), 1,02 (d, J=7,0Hz, 3H, CHCH3), 0,89 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,06 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,00 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C39H5iI03Si (M+Cs<*>), 855.1707, funnet 855.1672.
tris-(Silyletere) 37 og 38 som illustrert i skjema 8. En oppløsning av keton 36 (se Nicolaou, K.C., et al., J. Am. Chem. Soc. 119, 7974-91 (1997) (1,20 g, 2,99 mmol, 1,4 ekv.) i THF (4,3 ml) tilsettes dråpevis i løpet av 5 minutter til en nyfremstilt oppløsning av LD A [diisopropylamin (424 ul, 3,03 mmol, 1,45 ekv.) tilsettes til H-BuLi (2,00 ml, 1,52 M i hekaner, 3,04 mmol, 1,45 ekv.) ved 0°C, og etter 5 minutter tilsettes THF (4,3 ml)] ved -78°C. Etter omrøring i 1,5 timer ved -78°C, får oppløsningen oppvarme seg til
-40°C i løpet av en periode på 30 minutter. Reaksjonsblandingen avkjøles så til -78°C og en oppløsning av aldehyd 35 (1,51 g, 2,09 mmol, 1,0 ekv.) i THF (12,5 ml) tilsettes dråpevis i løpet av 15 minutter. Den resulterende blanding omrøres i 1 time ved -78°C og passiveres så ved dråpevis tilsetning av mettet vandig AcOH (3,1 ml av en IM oppløsning i THF, 3,10 mmol, 1,5 ekv.). Blandingen oppvarmes så til 25°C og fordeles mellom eter (25 ml) og mettet vandig NH4CI (25 ml). Den vandige fase ekstraheres med eter (3x25 ml) og de kombinerte organiske ekstrakter tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 4 til 20% eter i heksaner) gir ureagert keton (502 mg, 42%), uønsket aldolprodukt 38 (705 mg, 27%) og en blanding av ønsket aldonprodukt 37 og ureagert aldehyd 35 [1,36 g, (ca. 9:1 forhold for 37:35 ved hjelp av lU NMR)] (dvs. 39% utbytte av 37). Denne blanding anvendes direkte i det neste trinn. 37: (hovedmengde) (oppnådd som en fargeløs olje fra en blanding inneholdende 35, ved hjelp av hurtig kolonnekromatografi på silikagel (10 til 17% EtOAc i heksaner). Rf = 0,22 (silikagel, 10% eter i heksaner); [a]<22>D -20,0 (c 0,3, CHC13); IR (tynnfilm) 3486,2954,2928,2856,1682,1472,1253,1090, 994, 836, 775,706,668,632 cm'<1>; <J>H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,45-7,43 (m, 5H, Ph), 7,30-
7,19 (m, 10H, Ph), 6,19 (s, 1H, CH=CCH3), 5,51 (dd, J=7,0, 6,9Hz, 1H, C=CHCH2), 4,18 (dd, J=6,3,6,2Hz, 1H, CHOSi), 3,88 (dd, J=7,5, 2,6Hz, 1H, CHOSi), 3,65 (m, 1H, CH2OSi), 3,59 (m, 1H, CH2OSi), 3,46 (d, J=ll,2Hz, 1H, CH2OTr), 3,43 (d, J=ll,2Hz, 1H, CH2OTr), 3,27 (m, 1H, CH3CH(C=0)), 3,22 (d, J=9,3Hz, 1H, CHOH), 2,32-2,18 (m, 2H, C=CHCH2CHOSi), 2,00 (m, 2H, CH2(C)CH2OTr), 1,80 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,66 (m, 2H), 1,46 (m, 2H), 1,27 (m, 1H, CH(CH3), 1,19 (s, 3H, C(CH3)2), 1,07 (s, 3H, C(CH3)2), 0,99 (d, J=6,8Hz, 3H, CH(CH3)), 0,89 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,87 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,86 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,71 (d, J=6,7Hz, 3H, CH(CH3)), 0,10 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,03 (s, 6H, Si(CH3)2), -0,01 (s, 3H, Si(CH3)2), HRMS (FAB), beregnet for C6oH97l06Si3 (M+Cs<*>), 1257.4692, funnet 1257.4639. 38: (mindre mengde), fargeløs olje, Rf = 0,38 (silikagel, 20% eter i heksaner); [a]<22>D -11,9 (c 2,9, CHC13); IR (tynnfilm) 3501,2954, 2930,2856, 1682, 1469, 1254,1088, 836, 776, 705, 670 ran"<1>; <l>H NMR (500 MHz, CDC13) 8 7,46-7.44 (m, 5H, Ph), 7,31-7,21 (m, 10H, Ph), 6,21 (s, 1H, CH=CCH3), 5,52 (dd, J=7,0, 6,9Hz, 1H, C=CHCH2), 4,20 (dd, J=6,5,6,5Hz, 1H, CHOSi), 3,88 (dd, J=7,5,2,5Hz, 1H, CHOSi), 3,67 (m, 1H, CH2OSi), 3,60 (m, 1H, CH2OSi), 3,46 (s, 2H, CH2OTr), 3,30-3,21 (m, 2H, CHOH, CH3CH(C=0)), 2,30-2,25 (m, 2H, C=CHCH2CHOSi), 2,05-1,93 (m, 2H, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,81 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,63 (m, 1H, CH(CH3), 1.45 (m, 2H), 1,24 (m, 2H), (s, 3H, C(CH3)2), 1,05 (s, 3H, C(CH3)2), 1,01 (d, J=6,9Hz, 3H, CH(CH3)), 0,92 (s, 18H, SiC(CH3)3), 0,89 (s, 9H, SiC(CH3)3), 0,88 (uklar, d, 3H, CH(CH3)), 0,88 (s, 18H, SiC(CH3)3), 0,11 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,06 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 6H, Si(CH3)2), 0,01 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C6oH97l06Si3 (M+Cs<*>), 1257.4692, funnet 1257.4749.
tetra-(Sily leter) 39 som illustrert i skjema 8. Alkohol 37(l,136gaven9:l blanding med aldehyd 35, 0,933 mmol, 1,0 ekv.) oppløses i CH2C12 (5,0 ml), avkjøles til -20°C og behandles med 2,6-lutidin (470 ul, 4,04 mmol, 4,3 ekv.) og tert-butyldimetylsilyltirfluormetansulfonat (695 ul, 3,03 mmol, 3,2 ekv.). Blandingen omrøres deretter i 2,5 timer med sakte oppvarming til 0°C. Reaksjonen blir så stanset med mettet vandig NaHC03 (25 ml) og den vandige fase ekstraheres med eter (3x25 ml). De kombinerte organiske ekstrakter vaskes med saltløsning (250 ml), tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 4 til 9% eter i heksaner) gir tetra-(silyleter) 39 som en fargeløs olje (1,04 g, 90%). Rf = 0,91 (silikagel, 20% eter i heksaner); [a]<22>D -16,8 (c 0,7, CHC13); IR (tynnfilm) 3058,2951,2856,1693,1471,1253,1079,1004, 836,706 cm"1; lH NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,46-7,43 (m, 5H, Ph), 7,29-7,19 (m, 10H, Ph), 6,19 (s, 1H, CH=CCH3), 5,49 (dd, J=7,0,7,0Hz, 1H, C=CHCH2), 4,18 (dd, J=6,3, 6,1Hz, 1H, CHOSi), 3,85 (dd,
J=7,6,2,5Hz, 1H, CHOSi), 3,70 (dd, J=6,7,2,0Hz, 1H, CHOSi), 3,67 (ddd, J=9,6,4,8, 4,8Hz, 1H, CH2OSi), 3,59 (ddd, J=9,7, 7,9, 7,9Hz, 1H, CH2OSi), 3,45 (d, J=l 1,2Hz, 1H, CH2OTr), 3,42 (d, J=ll,2Hz, 1H, CH2OTr), 3,08 (qd, J=6,8, 6,8Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,27 (ddd, J=14,4, 7,2, 7,2Hz, 1H, C=CHCH2CHOSi), 2,23 (ddd, J=14,5, 6,2,6,2Hz, 1H, C=CHCH2CHOSi), 1,97 (m, 2H, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,79 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,57 (m, 1H), 1,46 (m, 1H), 1,25 (m, 3H), 1,17 (s, 3H, C(CH3)2), 1,01 (d, J=6,8Hz, 3H, CH(CH3)), 0,95 (s, 3H, C(CH3)2), 0,87 (s, 18Hz, SiC(CH3)3), 0,86 (s, 18H, SiC(CH3)3), 0,09- -0,33 (m, 24H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C66HiiiI06Si4 (M+Cs<+>), 1371.5557, funnet 1371.5523.
Alkohol 40 som illustrert i skjema 8. Til en oppløsning av tetra-silyleter 39 (180 mg, 0,145 mmol) i THF (1,5 ml) ved 0°C tilsettes HF*pyr. i pyridin/THF-blanding (fremstilt fra en stamoppløsning inneholdende 420 ul HF»pyridin, 1,14 ml pyridin og 2,00 ml THF) (1,5 ml) og den resulterende oppløsningen omrøres i 2 timer ved 0°C. Mer HF»pyr. i pyridin/THF-blanding (0,5 ml) tilsettes så og omrøring fortsettes i ytterligere 1 time ved 0°C. Reaksjonen stanses ved forsiktig tilsetning av mettet vandig NaHC03 og produktet ekstraheres med EtOAc (3x25 ml). De kombinerte organiske ekstrakter blir så tørket (MgS04) og konsentrert under redusert trykk. Hurtig kromatografi (silikagel, 30% eter i heksaner) gir alkohol 40 som en blekgul olje (137 mg, 84%). Rf = 0,36 (silikagel, 40% eter i heksaner); [a]<22>D -26,0 (c 0,3, CHC13); IR (tynnfilm) Vmaks 3422, 2928, 2855, 1690,1490,1471, 1448,1360, 1252, 1086, 1004, 986, 836, 774, 706 cm'<1>; <*>H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,44-7,42 (m, 5H, Ph), 7,29-7,20 (m, 10H, Ph), 6,19 (s, 1H, CH=CCH3), 5,49 (dd, J=7,l, 7,1Hz, 1H, C=CHCH2), 4,17 (dd, J=6,2, 6,0Hz, 1H, CHOSi), 4,03 (dd, J=6,6, 3,7Hz, 1H, CHOSi), 3,73 (dd, J=7,2,1,7Hz, 1H, CHOSi), 3,65 (m, 2H, CH2OH), 3,45 (d, J=l 1,7Hz, 1H, CH2OTr), 3,42 (d, J=l 1,7Hz, 1H, CH2OTr), 3,06 (qd, J=6,9,6,9Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,28 (ddd, J=14,7, 7,3, 7,3Hz, 1H, C=CHCH2CHOSi), 2,22 (ddd, J=14,7, 6,3, 6,3Hz, lH,C=CHCH2CHOSi), 1,98 (m, 2H, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,79 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,56 (m, 2H), 1,24 (m, 3H), 1,18 (s, 3H, C(CH3)2), 1,03 (d, J=6,9Hz, 3H, CH(CH3)), 0,97 (s, 3H, C(CH3)2), 0,87 (3 singletter, 27H, SiC(CH3)3), 0,81 (d, J=6,7Hz, 3H, CH(CH3)), 0,97 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 9H, Si(CH3)2), 0,03 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,00 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C6oH97l06Si3 (M+Cs<*>), 1257.4692, funnet 1257.4780.
Aldehyd 41 som illustrert i skjema 8. Til en oppløsning av oksalylklorid (150 ul, 1,72 mmol, 2,0 ekv.) i CH2C12 (10 ml) ved -78°C tilsettes dråpevis DMSO (247 ul, 3,48 mmol, 4,0 ekv.). Etter omrøring i 10 minutter ved -78°C, tilsettes dråpevis en oppløsning av alkohol 40 (960 mg, 0,853 mmol, 1,0 ekv.) i CH2C12 (10 ml). Den resulterende oppløsning omrøres ved -78°C i 1 time og deretter tilsettes Et3N (714 ul, 5,12 mmol, 6,0 ekv.) og reaksjonsblandingen får oppvarme seg til 25°C i løpet av 30 minutter. Vann (30 ml) tilsettes og produktet ekstraheres med eter (3x40 ml). De kombinerte organiske ekstrakter tørkes (MgSCU), og blir så konsentrert under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 17 til 50% eter i heksaner) gir aldehyd 41 som en fargeløs olje (943 mg, 98%). Rf = 0,74 (silikagel, 40% eter i heksaner); [a]22D - 10,8 (c 0,1, CHC13); IR (tynnfilm) 2928, 2855,1728,1690,1471,1448,1260, 1252,1085, 987, 836, 774, 706 cm'1; *H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 9,74 (dd, J=2,4, 1,5Hz, 1H, CHO), 7,44-7,42 (m, 5H, Ph), 7,29-7,20 (m, 10H, Ph), 6,19 (s, 1H, CH=CCH3), 5,49 (dd, J=7,0,6,8Hz, 1H, C=CHCH2), 4,44 (dd, J=6,3, 5,0Hz, 1H, CHOSi), 4,18 (dd, J=6,9, 6,4Hz, 1H, CHOSi), 3,70 (dd, J=7,2,1,8Hz, 1H, CHOSi), 3,45 (d, J=ll,4Hz, 1H, CH2OTr), 3,42 (d, J=ll,4Hz, 1H, CH2OTr), 3,05 (qd, J=7,0, 7,0Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,49 (ddd, J=17,0,4,5,1,4Hz, CH2CHO), 2,38 (ddd, J=17,0, 5,4,2,8Hz, 1H, CH2CHO), 2,27 (ddd, J=14,0, 7,1, 7,1Hz, 1H, C=CHCH2CHOSi), 2,23 (ddd, J=14,5, 6,5,6,5Hz, 1H, C=CHCH2CHOSi), 1,98 (m, 2H, CH2(CH2OTr)=CH), 1,79 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,27 (m, 4H), 1,19 (s, 3H, C(CH3)2), 1,12 (m, 1H), 1,00 (d, J=6,8Hz, 3H, CH(CH3)), 0,98 (s, 3H, C(CH3)2), 0,87 (s, 27H, Si(CH3)3), 0,80 (d, J=6,7Hz, 3H, CH(CH3)), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,03 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,03 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,00 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C60H95IO6S13 (M+Cs<*>), 1255.4536, runnet 1255,4561.
Karboksylsyre 42 som illustrert i skjema 8. Til en oppløsning av aldehyd 41 (943 mg, 0,839 mmol, 1,0 ekv.) i /-BuOH (38,5 ml) og H20 (8,4 ml) tilsettes 2-metyl-2-buten (31,5 ml, 2M i THF, 63,0 mmol, 75 ekv.) og NaH2P04 (250 mg, 2,08 mmol, 2,5 ekv. etterfulgt av NaC102 (380 mg, 4,20 mmol, 5,0 ekv.) og den resulterende blanding omrøres ved 25°C i 40 minutter. Flyktige bestanddeler fjernes så under redusert trykk og resten fordeles mellom EtOAc (40 ml) og saltløsning (40 ml) og lagene separeres. Den vandige fase ekstraheres så med EtOAc (3x40 ml) og de kombinerte organiske ekstrakter tørkes (MgS04) og blir så konsentrert under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 60% eter i heksaner) gir karboksylsyre 42 som en olje (956 mg, 100%). Rf = 0,47 (silikagel, 40% eter i heksaner); [a]<22>D -19,6 (c 0,2, CHC13); IR (tynnfilm) v^ks 3389,2930,2856,1711,1469,1254,1085,988, 835, 775, 705 cm'<1>;
'H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,44-7,43 (m, 5H, Ph), 7,29-7,20 (m, 10H, Ph), 6,19 (s, 1H, CH=CCH3), 5,49 (dd, J=7,3, 7,1Hz, 1H,C=CHCH2), 4,34 (dd, J=6,4, 3,3Hz, 1H, CHOSi), 4,18 (dd, J=6,2, 6,2Hz, 1H, CHOSi), 3,72 (dd, J=7,2,1,7Hz, 1H, CHOSi), 3,45 (d, J=l 1,4Hz, 1H, CH2OTr), 3,41 (d, J=l 1,4Hz, 1H, CH2OTr), 3,07 (qd, J=7,0, 7,0Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,46 (dd, J=16,3, 3,1Hz, 1H, CH2C02H), 2,32-2,18 (m, 3H,
CH2C02H og C=CHCH2CHOSi), 1,97 (m, 2H, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,80 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,31-1,19 (m, 5H), 1,19 (s, 3H, C(CH3)2), 1,02 (d, J=6,9Hz, 3H, CH(CH3)), 0,99 (s, 3H, C(CH3)2), 0,87 (s, 27H, Si(CH3)3), 0,80 (d, J=6,8Hz, 3H, CH(CH3)), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,03 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,00 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C6oH95l07Si3 (M+Cs<+>), 1271.4485, funnet 1271.4550.
Hydroksysyre 43 som illustrert i skjema 8. En oppløsning av karboksylsyre 42 (956 mg, 0,839 mmol, 1,0 ekv.) i THF (17 ml) ved 0°C behandles med TBAF (5,0 ml, 1,0M i THF, 5,00 mmol, 6,0 ekv.) og blandingen får oppvarme seg til 25°C i løpet av 19 timer. Reaksjonen blir så stanset ved tilsetning av mettet vandig NH4CI (40 ml) og produktet ekstraheres med EtOAc (3x40 ml). De kombinerte organiske ekstrakter tørkes (MgS04) og konsentreres under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 5% MeOH i CH2C12) gir hydroksysyre 43 som en gul olje (817 mg, 95%). Rf = 0,27 (silikagel, 5% MeOH i CH2C12); [a]22D -11,4 (c 0,2, CHC13); IR (tynnfilm) vmaks 3364, 3057,2938, 2856,1712,1694,1469,1254, 1086, 1053, 988, 836, 776, 734, 705 cm'1; *H NMR (600 MHz, CDC13) 8 7,43-7,42 (m, 5H, Ph), 7,30-7,21 (m, 10H, Ph), 6,32 (s, 1H, CH=CCH3), 5,46 (dd, J=7,2,7,2Hz, 1H, C=CHCH2), 4,353 (dd, J=6,3, 3,2Hz, 1H, CHOH), 4,21 (dd, J=6,4, 6,3Hz, 1H, CHOSi), 3,73 (dd, J=7,3,1,2Hz, 1H, CHOSi), 3,52 (d, J=12,lHz, 1H, CH2OTr), 3,48 (d, J=12,lHz, 1H, CH2OTr), 3,06 (m, 2H, CH3CH(C=0) og OH), 2,45 (dd, J=16,4, 3,0Hz, 1H, CH2C02H, 2,35 (m, 2H, C=CHCH2CHOH), 2,29 (dd, J=16,4, 6,5Hz, 1H, CH2C02H), 2,07-1,94 (m, 2H, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,85 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,71 (m, 1H), 1,39 (m, 1H, CH(CH3)), 1,27 (m, 3H), 1,18 (s, 3H, C(CH3)2), 1,02 (uklar d, 3H, CH(CH3)), 1,02 (s, 3H, C(CH3)2), 0,87 (s, 18H, Si(CH3)3), 0,81 (d, J=6,8Hz, 3H, CH(CH3)), 0,09 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,07 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,04 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,02 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C54H8iI07Si2 (M+Cs<+>), 1157.3620, funnet 1157.3669.
Makrolakton 44 som illustrert i skjema 8. Til en oppløsning av hydroksysyre 43 (1,06 g, 1,04 mmol, 1,0 ekv.) i THF (15 ml, 0,07M) tilsettes Et3N (870 ul, 0,24 mmol, 6,0 ekv.) og 2,4,6-triklorbenzoylklorid (390 ul, 2,50 mmol, 2,4 ekv.). Reaksjonsblandingen omrøres ved 0°C i 1,5 timer og tilsettes deretter sakte i løpet av en periode på 2 timer via en sprøytepumpe til en oppløsning av 4-DMAP (280 mg, 2,29 mmol, 2,2 ekv.) i toluen (208 ml, 0,005M basert på 43) ved 75°C. Blandingen omrøres ved denne temperatur i ytterligere 0,5 timer og konsentreres så under redusert trykk. Den resulterende rest filtreres gjennom en plugg av silikagel under eluering med 50% eter i heksaner. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 17% eter i heksaner) gir makrolakton 44 som et fargeløst skum (877 mg, 84%). Rf = 0,19 (10% eteT i heksaner); [cc]<22>d -7,4 (c 0,2, CHC13); IR (tynnfilm) 2929, 2855,1742,1695,1468, 1381, 1253,1156,1065, 985, 834, 774, 733, 706 cnT<1>; <l>H NMR (600 MHz, CDCI3) 8 7,44-7,42 (m, 5H, Ph), 7,29-7,20 (m, 10H, Ph), 6,39 (s, 1H, CH=CCH3), 5,51 (dd, J=9,5, 6,8Hz, 1H, C=CHCH2), 5,07 (d, J=9,3Hz, 1H, CHOCO), 4,02 (d, J=9,2Hz, 1H, CHOSi), 3,82 (d, J=8,9Hz, 1H, CHOSi), 3,46 (d, J=ll,5Hz, 1H, CH2OTr), 3,42 (d, J=l 1,5Hz, 1H, CH2OTr), 2,95 (dq, J=8,7, 7,0Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,72 (m, 2H, C=CHCH2CHO og CH2COO), 2,54 (dd, J=16,2,9,7hz, 1H, CH2COO), 2,29 (m, 1H, C=CHCH2CHO), 2,12 (dd, J=14,3, 5,1Hz, 1H, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,98 (m, CH2C(CH2OTr)=CH), 1,88 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,44-1,23 (m, 5H), 1,18 (s, 3H, C(CH3)2), 1,10 (s, 3H, C(CH3)2), 1,07 (d, J=6,8Hz, 3H, CH(CH3)), 0,92 (s, 9H, Si(CH3)3), 0,82 (d, J=6,9Hz, 3H, CH(CH3)), 0,72 (s, 9H, Si(CH3)3), 0,08 (s, 3H, Si(CH3)2, 0,05 (s, 3H, Si(CH3)2), 0,05 (s, 3H, Si(CH3)2), -0,32 (s, 3H, Si(CH3)2); HRMS (FAB), beregnet for C54H79l06Si2 (M+Cs<+>), 1139,3514, funnet 1139,3459.
Triol 24 som illustrert i skjema 8. Til en oppløsning av makrolakton 44 (608 mg, 0,604 mmol, 1,0 ekvi.) i THF (45 ml) ved 0°C tilsettes HF«pyr. (15 ml). Den resulterende blandingen får oppvarme seg til 25°C i løpet av 15 timer og avkjøles så til 0°C og passiveres ved forsiktig tilsetning av mettet vandig NaHC03 (50 ml). Produktet ekstraheres så med EtOAc (3x50 ml), og de kombinerte organiske ekstrakter tørkes (MgS04) og blir så konsentrert under redusert trykk. Hurtig kolonnekromatografi (silikagel, 60% EtOAc i heksaner) gir triol 24 som et fargeløst skum (280 mg, 86%). Rf = 0,32 (silikagel, 60% EtOAc i heksaner); [a]<22>D -32,1 (c 0,2, CHC13); IR (tynnfilm) Vmaks 3413, 2923, 2857,1731,1686, 1461,1379,1259,1148, 1046, 737 cm"<1>;<l>HNMR (600 MHz, CDCI3) 8 6,43 (s, 1H, CH=CCH3), 5,38 (dd, J=9,7, 5,4Hz, 1H, C=CHCH2), 5,29 (dd, J=8,8,1,9Hz, 1H, CHOCO), 4,08 (m, 1H, CHOH), 4,06 (d, J=13,0Hz, 1H, CH2OH), 4,00 (d, J=13,0Hz, 1H, CH2OH), 3,69 (dd, J=3,5, 3,4Hz, 1H, CHOH), 3,12 (qd, J=6,9, 3,1Hz, 1H, CH3CH(C=0)), 2,76 (bs, 1H, OH), 2,67 (ddd, J=15,0, 9,7, 9,7Hz, 1H, C=CHCH2CHO), 2,45 (dd, J=15,4,10,6Hz, 1H, CH2COO), 2,38 (bs, 1H, OH), 2,33 (dd, J=15,4, 3,0Hz, 1H, CH2COO), 2,21 (m, 2H, CH2C(CH2OH)=CH), 2,06 (m, 1H, C=CHCH2CHO), 1,87 (s, 3H, CH=C(CH3)), 1,71 (m, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,32 (s, 3H, C(CH3)2), 1,29-1,24 (m, 3H), 1,17 (d, J=6,9Hz, 3H, CH(CH3)), 1,08 (s, 3H, C(CH3)2), 0,99 (d, J=7,0Hz, 3H, CH(CH3)); HRMS (FAB), beregnet for C^^IOe (M+Cs<*>), 669.0689, funnet 669.0711.
Tubulinpolymerisasjon og cytotoksisitetsprøver
Tubulinpolymerisasjon bestemmes ved hjelp av den filtrasjon-kolorimetriske metode, utviklet av Bollag et al. Cancer Res. 1995, 55,2325-2333. Renset tubulin (1 mg/ml) inkuberes ved 37°C i 30 minutter i nærvær av hver forbindelse (20 mM) i MEM-buffer [(100 mM 2-(N-morfolino)etansulfonsyre, pH 6,75,1 mM etylenglykol bis(B-aminoetyleter), N,N,N',N'-tetraeddiksyre, og 1 mM MgCk], blandingen blir så filtrert for å fjerne upolymerisert tubulin ved bruk av en 96 brønners Millipore Multiscreen Durapore hydrofil 0,22 (im porestørrelse filtreringsplate; det samlede polymeriserte tubulin farges med amido svart oppløsning og kvantifiseres ved å måle adsorbans av den fargede oppløsning på en Molecular Devices Microplate Reader. Veksten av alle cellelinjer bedømmes ved kvantitering av proteinet i 96 brønners plater som beskrevet tidligere. Kort sagt, blir 500 celler podet i hver brønn i platene og inkubert med de forskjellige konsentrasjoner av epotilonene ved 37°C i en fuktig 5% C02-atmosfære i fire dager. Etter cellefiksering med 50% trikloreddiksyre, måles den optiske densitet tilsvarende mengden av proteiner i 25 mM NaOH-oppløsning (50% metanol:50% vann) ved en bølgelengde på 564 nm. IC50 defineres som den dose medikament som er nødvendig for å inhibere celleveksten med 50%.

Claims (8)

1. Forbindelse, karakterisert ved at den representeres ved formel I hvori bølgebindingen indikerer at binding "a" er til stede enten i cis- eller i transform; (i) R.2 er fraværende eller oksygen; "a" kan være enten en enkel eller dobbelt binding; "b" kan være enten fraværende eller en enkel binding; og "c" kan være enten fraværende eller en enkel binding, med den betingelse at hvis R2 er oksygen, så er "b" og "c" begge en enkel binding og "a" er en enkel binding; hvis R2 er fraværende, så er "b" og "c" fraværende og "a" er en dobbelt binding; og hvis "a" er en dobbelt binding, så er R2, "b" og "c" fraværende; R3 er et radikal valgt fra gruppen bestående av C1-C7 alkyl; -CH=CH2; -C = CH; -CH2F; -CH2CI; -CH2-OH; -CH2-0-(Ci-C6-alkyl); og -CH2-S-(Ci-C6-alkyl); R4 og R5 er uavhengig valgt fra hydrogen eller metyl; og Ri er et radikal valgt fra: eller et salt derav hvor en eller flere saltdannende grupper er til stede.
2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den har formel Id hvori A er metyltio og D er hydrogen, fluor, hydroksy eller metyl.
3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den har formel le, hvori A er metyltio og D er hydrogen, fluor, hydroksy eller metyl.
4. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra gruppen bestående av forbindelser med de følgende formeler: eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor saltdannende grupper er til stede.
5. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 4 og en farmasøytisk akseptabel bærer.
6. Forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 4 for bruk ved behandling av en proliferativ sykdom.
7. Anvendelse av en forbindelse med formel I ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 4 for fremstilling av et medikament for behandling av en proliferativ sykdom.
8. Fremgangsmåte for syntese av en forbindelse med formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter a) kobling av et jodid med formel II, hvori R.2, Rj, R4, R5, a, b og c og bølgebindingen har de betydninger som er angitt under formel I i krav 1, med en tinnforbindelse med formel III, R,-Sn(R)3 (III) hvori Ri har betydningene gitt under formel I og R er C1-C7 alkyl, særlig metyl eller n-butyl, eller b) kobling av en tinnforbindelse med formel IV, hvori R.2, R3, R4, R5, a, b og c og bølgebindingen har betydningene gitt under formel I, med et jodid med formel V, hvori Ri har betydningene gitt under formel I i krav 1; og, om ønsket, omdannes en oppnådd forbindelse med formel I til en annen forbindelse med formel I, en oppnådd fri forbindelse med formel I omdannes til et salt av en forbindelse med formel I, og/eller et oppnådd salt av en forbindelse med formel I omdannes til en fri forbindelse med formel I eller til et annet salt av en forbindelse med formel I, og/eller en stereoisomerblanding av forbindelser med formel I separeres til de tilsvarende isomerer.
NO20006378A 1998-06-22 2000-12-14 Epotilonderivater samt deres syntese og anvendelse NO328417B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/102,602 US6380394B1 (en) 1996-12-13 1998-06-22 Epothilone analogs
PCT/EP1999/004287 WO1999067252A2 (en) 1998-06-22 1999-06-21 Epothilone derivatives and their synthesis and use

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20006378D0 NO20006378D0 (no) 2000-12-14
NO20006378L NO20006378L (no) 2001-02-21
NO328417B1 true NO328417B1 (no) 2010-02-15

Family

ID=22290705

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20006378A NO328417B1 (no) 1998-06-22 2000-12-14 Epotilonderivater samt deres syntese og anvendelse

Country Status (28)

Country Link
US (3) US6380394B1 (no)
EP (2) EP1741715A1 (no)
JP (1) JP4681732B2 (no)
KR (3) KR20090066332A (no)
CN (1) CN1192031C (no)
AT (1) ATE343573T1 (no)
AU (1) AU757854B2 (no)
BR (1) BR9911420A (no)
CA (1) CA2334342C (no)
CY (1) CY1105863T1 (no)
CZ (1) CZ301783B6 (no)
DE (1) DE69933767T2 (no)
DK (1) DK1089998T3 (no)
ES (1) ES2273502T3 (no)
HK (1) HK1038358A1 (no)
HU (1) HUP0102711A3 (no)
ID (1) ID28210A (no)
IL (3) IL139784A0 (no)
MX (1) MXPA00012443A (no)
NO (1) NO328417B1 (no)
NZ (1) NZ508622A (no)
PL (1) PL197648B1 (no)
PT (1) PT1089998E (no)
RU (1) RU2227142C2 (no)
SK (2) SK285647B6 (no)
TR (1) TR200003844T2 (no)
WO (1) WO1999067252A2 (no)
ZA (1) ZA200007059B (no)

Families Citing this family (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2218328T5 (es) 1995-11-17 2011-11-11 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Derivados de epotilón, su preparación y utilización.
CA2269118C (en) * 1996-11-18 2012-05-29 Gesellschaft Fur Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf) Epothilone c, d, e and f, production process, and their use as cytostatic as well as phytosanitary agents
US20050043376A1 (en) * 1996-12-03 2005-02-24 Danishefsky Samuel J. Synthesis of epothilones, intermediates thereto, analogues and uses thereof
EP1386922B1 (en) * 1996-12-03 2012-04-11 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereof, analogues and uses thereof
US6204388B1 (en) * 1996-12-03 2001-03-20 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
US6867305B2 (en) * 1996-12-03 2005-03-15 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
US6660758B1 (en) * 1996-12-13 2003-12-09 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
US6605599B1 (en) * 1997-07-08 2003-08-12 Bristol-Myers Squibb Company Epothilone derivatives
US6365749B1 (en) 1997-12-04 2002-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of ring-opened epothilone intermediates which are useful for the preparation of epothilone analogs
FR2775187B1 (fr) * 1998-02-25 2003-02-21 Novartis Ag Utilisation de l'epothilone b pour la fabrication d'une preparation pharmaceutique antiproliferative et d'une composition comprenant l'epothilone b comme agent antiproliferatif in vivo
US6498257B1 (en) 1998-04-21 2002-12-24 Bristol-Myers Squibb Company 2,3-olefinic epothilone derivatives
US6399638B1 (en) 1998-04-21 2002-06-04 Bristol-Myers Squibb Company 12,13-modified epothilone derivatives
DE19820599A1 (de) * 1998-05-08 1999-11-11 Biotechnolog Forschung Gmbh Epothilonderivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
DE19826988A1 (de) * 1998-06-18 1999-12-23 Biotechnolog Forschung Gmbh Epothilon-Nebenkomponenten
US6410301B1 (en) 1998-11-20 2002-06-25 Kosan Biosciences, Inc. Myxococcus host cells for the production of epothilones
KR20070087132A (ko) 1998-11-20 2007-08-27 코산 바이오사이언시즈, 인코포레이티드 에포틸론 및 에포틸론 유도체의 생산을 위한 재조합 방법및 물질
ATE254615T1 (de) * 1999-02-22 2003-12-15 Biotechnolog Forschung Gmbh C-21 modifizierte epothilone
US20020058286A1 (en) * 1999-02-24 2002-05-16 Danishefsky Samuel J. Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
CZ302788B6 (cs) 1999-04-15 2011-11-09 Bristol-Myers Squibb Company ´N-(2-Chlor-6-methylfenyl)-2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]-2-methyl-4-pyrimidinyl]amino]-5-thiazolkarboxamid, jeho použití a farmaceutický prostredek s jeho obsahem
US7125875B2 (en) 1999-04-15 2006-10-24 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic protein tyrosine kinase inhibitors
WO2001038317A2 (en) * 1999-11-24 2001-05-31 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Fungicidal melithiazole derivatives
US6518421B1 (en) * 2000-03-20 2003-02-11 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of epothilone analogs
AU2001266583A1 (en) * 2000-05-26 2001-12-11 Kosan Biosciences, Inc. Epothilone derivatives and methods for making and using the same
AU2001291876C1 (en) * 2000-09-22 2006-11-23 Gesellschaft Fuer Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf) Triazolo-epothilones
US6989450B2 (en) * 2000-10-13 2006-01-24 The University Of Mississippi Synthesis of epothilones and related analogs
KR20030071853A (ko) 2001-01-25 2003-09-06 브리스톨-마이어스스퀴브컴파니 에포틸론 유사체를 함유한 비경구용 제제
NZ526871A (en) 2001-01-25 2006-01-27 Bristol Myers Squibb Co Pharmaceutical dosage forms of epothilones for oral administration
ATE389401T1 (de) 2001-01-25 2008-04-15 Bristol Myers Squibb Co Verfahren zur herstellung von pharmazeutischen zusammensetzungen enthaltend epothilon-analoga zur krebsbehandlung
CA2438598A1 (en) 2001-02-20 2002-08-29 Francis Y. F. Lee Epothilone derivatives for the treatment of refractory tumors
IL156988A0 (en) 2001-02-20 2004-02-08 Bristol Myers Squibb Co Pharmaceutical compositions containing epothilone derivatives
DE60211124T2 (de) * 2001-02-27 2006-11-30 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Abbau von Epothilonen
PL368973A1 (en) 2001-03-14 2005-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Combination of epothilone analogs and chemotherapeutic agents for the treatment of proliferative diseases
CA2449077A1 (en) * 2001-06-01 2002-12-12 Gregory D. Vite Epothilone derivatives
CA2456280A1 (en) * 2001-08-23 2003-03-06 Novartis Ag Cyclopropyl and cyclobutyl epothilone analogs
WO2003026744A1 (en) * 2001-09-25 2003-04-03 Alcon, Inc. The use of epothilones and analogs in conjunction with ophthalmic surgery
JP2005506366A (ja) * 2001-10-25 2005-03-03 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤を含む組合せ剤
WO2003048774A1 (en) * 2001-12-07 2003-06-12 Novartis Ag Use of alpha-tubulin acetylation levels as a biomarker for protein deacetylase inhibitors
MXPA04006822A (es) 2002-01-14 2004-12-08 Novartis Ag Combinaciones que comprenden epotilonas y anti-metabolitos.
TW200303202A (en) * 2002-02-15 2003-09-01 Bristol Myers Squibb Co Method of preparation of 21-amino epothilone derivatives
AU2003218107A1 (en) 2002-03-12 2003-09-29 Bristol-Myers Squibb Company C12-cyano epothilone derivatives
SI1483251T1 (sl) * 2002-03-12 2010-03-31 Bristol Myers Squibb Co C cian epotilonski derivati
TW200403994A (en) * 2002-04-04 2004-03-16 Bristol Myers Squibb Co Oral administration of EPOTHILONES
TW200400191A (en) * 2002-05-15 2004-01-01 Bristol Myers Squibb Co Pharmaceutical compositions and methods of using C-21 modified epothilone derivatives
US7405234B2 (en) 2002-05-17 2008-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic modulators of androgen receptor function
AU2003243561A1 (en) 2002-06-14 2003-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination of epothilone analogs and chemotherapeutic agents for the treatment of proliferative diseases
ATE381569T1 (de) * 2002-08-02 2008-01-15 Novartis Pharma Gmbh Epothilonderivate
US7649006B2 (en) 2002-08-23 2010-01-19 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
US6921769B2 (en) 2002-08-23 2005-07-26 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
MXPA05002113A (es) * 2002-08-23 2005-06-03 Sloan Kettering Inst Cancer Sintesis de epotilonas, intermediarios para ellas, analogos y usos de los mismos.
US7384964B2 (en) * 2002-08-23 2008-06-10 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereto, analogues and uses thereof
AU2003275068B2 (en) 2002-09-23 2009-09-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods for the preparation, isolation and purification of epothilone B, and X-Ray crystal structures of epothilone B
SI1553938T1 (sl) * 2002-10-15 2007-06-30 Univ Louisiana State Uporaba epotilonskih derivatov za zdravljenje hiperparatiroidizma
US7632858B2 (en) 2002-11-15 2009-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Open chain prolyl urea-related modulators of androgen receptor function
US20050171167A1 (en) * 2003-11-04 2005-08-04 Haby Thomas A. Process and formulation containing epothilones and analogs thereof
EP1559447A1 (en) 2004-01-30 2005-08-03 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Use of epothilones in the treatment of neuronal connectivity defects such as schizophrenia and autism
US7820702B2 (en) 2004-02-04 2010-10-26 Bristol-Myers Squibb Company Sulfonylpyrrolidine modulators of androgen receptor function and method
US7378426B2 (en) 2004-03-01 2008-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Fused heterotricyclic compounds as inhibitors of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3
US7696241B2 (en) 2004-03-04 2010-04-13 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic compounds as modulators of androgen receptor function and method
US7625923B2 (en) 2004-03-04 2009-12-01 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic modulators of androgen receptor function
GB0405898D0 (en) * 2004-03-16 2004-04-21 Novartis Ag Organic compounds
US10675326B2 (en) 2004-10-07 2020-06-09 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Compositions comprising cupredoxins for treating cancer
EP1674098A1 (en) 2004-12-23 2006-06-28 Schering Aktiengesellschaft Stable and tolerable parental formulations of highly reactive organic drug substances with low or no solubility in water
CN101535492A (zh) 2005-02-11 2009-09-16 南加州大学 表达含有二硫键的蛋白质的方法
JP4954983B2 (ja) 2005-05-18 2012-06-20 ファーマサイエンス・インコーポレイテッド Ｂｉｒドメイン結合化合物
WO2007015929A2 (en) * 2005-07-27 2007-02-08 University Of Toledo Epothilone analogues
JP2009516753A (ja) * 2005-11-22 2009-04-23 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート 高度に効力を持つエポチロンの化学合成
US7653731B2 (en) * 2006-02-24 2010-01-26 Microsoft Corporation Management of connections to external data
EP2029156A4 (en) * 2006-05-01 2010-07-21 Univ Southern California POLY THERAPY FOR TREATING CANCER
CN101535300B (zh) 2006-05-16 2014-05-28 埃格拉医疗公司 Iap bir域结合化合物
CN101600728A (zh) 2006-12-04 2009-12-09 伊利诺斯大学理事会 使用铜氧还蛋白和富含CpG的DNA治疗癌症的组合物和方法
MX2009008508A (es) 2007-02-08 2010-04-21 Univ Illinois Composiciones y m?todos para prevenir el c?ncer con cupredoxinas.
WO2008118327A1 (en) * 2007-03-23 2008-10-02 University Of Toledo Conformationally restrained epothilone analogues as anti-leukemic agents
EP2065054A1 (en) 2007-11-29 2009-06-03 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Combinations comprising a prostaglandin and uses thereof
EP2070521A1 (en) 2007-12-10 2009-06-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Surface-modified nanoparticles
DE102007059752A1 (de) 2007-12-10 2009-06-18 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Funktionalisierte, feste Polymernanopartikel enthaltend Epothilone
EP2321325A1 (en) * 2008-07-03 2011-05-18 Pharma Mar S.A. Antitumoral macrolides
WO2010056901A2 (en) 2008-11-13 2010-05-20 University Of Southern California Method of expressing proteins with disulfide bridges with enhanced yields and activity
EP2210584A1 (en) 2009-01-27 2010-07-28 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Stable polymeric composition comprising an epothilone and an amphiphilic block copolymer
CN102985439B9 (zh) 2010-02-12 2016-08-03 制药科学股份有限公司 Iap bir结构域结合化合物
CN105797168A (zh) 2010-05-18 2016-07-27 天蓝制药公司 用于治疗自身免疫性疾病或其它疾病的组合物和方法
CN103442737B (zh) 2011-01-20 2017-03-29 得克萨斯系统大学董事会 Mri标记、递送和提取系统及其制造方法和用途
CN102863474A (zh) 2011-07-09 2013-01-09 陈小平 一类治疗细胞增殖性疾病的铂化合物、其制备方法和应用
CN102993239A (zh) 2011-09-19 2013-03-27 陈小平 离去基团含氨基或烷胺基的丁二酸衍生物的铂类化合物
US9717803B2 (en) 2011-12-23 2017-08-01 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
US10132799B2 (en) 2012-07-13 2018-11-20 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
WO2014072482A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
CN104768962B (zh) 2012-11-17 2017-04-05 北京市丰硕维康技术开发有限责任公司 离去基团是含氨基或烷氨基的丙二酸衍生物的铂类化合物
US9862692B2 (en) * 2013-01-23 2018-01-09 The University Of Toledo Highly selective anti-cancer agents targeting non-small cell lung cancer and other forms of cancer
EP2968582B1 (en) 2013-03-15 2020-07-01 Innate Pharma Solid phase tgase-mediated conjugation of antibodies
WO2014202773A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
JP6744212B2 (ja) 2013-06-21 2020-08-19 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． ポリペプチドの酵素的結合
CA3002027A1 (en) * 2015-10-16 2017-04-20 William Marsh Rice University Epothilone analogs, methods of synthesis, methods of treatment, and drug conjugates thereof
WO2019092148A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Innate Pharma Antibodies with functionalized glutamine residues

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4138042C2 (de) 1991-11-19 1993-10-14 Biotechnolog Forschung Gmbh Epothilone, deren Herstellungsverfahren sowie diese Verbindungen enthaltende Mittel
ES2218328T5 (es) 1995-11-17 2011-11-11 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Derivados de epotilón, su preparación y utilización.
NZ334821A (en) 1996-08-30 2000-12-22 Novartis Ag Method for producing epothilones
CA2269118C (en) 1996-11-18 2012-05-29 Gesellschaft Fur Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf) Epothilone c, d, e and f, production process, and their use as cytostatic as well as phytosanitary agents
EP1386922B1 (en) 1996-12-03 2012-04-11 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of epothilones, intermediates thereof, analogues and uses thereof
US6660758B1 (en) * 1996-12-13 2003-12-09 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
US6441186B1 (en) 1996-12-13 2002-08-27 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
CN1128803C (zh) 1997-02-25 2003-11-26 生物技术研究有限公司(Gbf) 环氧噻嗪酮b－n－氧化物及其制备方法
US6605599B1 (en) 1997-07-08 2003-08-12 Bristol-Myers Squibb Company Epothilone derivatives
EP1847540A1 (de) 1997-08-09 2007-10-24 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Neue Epothilonderivate, Herstellungsverfahren dafür und ihre pharmazeutische Verwendung
DE19744135C1 (de) 1997-09-29 1999-03-25 Schering Ag Beschichtete medizinische Implantate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung zur Restenoseprophylaxe

Also Published As

Publication number Publication date
US6531497B1 (en) 2003-03-11
HK1038358A1 (en) 2002-03-15
TR200003844T2 (tr) 2001-04-20
KR100864742B1 (ko) 2008-10-22
DE69933767T2 (de) 2007-09-13
EP1089998A2 (en) 2001-04-11
KR20090066332A (ko) 2009-06-23
ZA200007059B (en) 2002-01-30
AU4774899A (en) 2000-01-10
NZ508622A (en) 2003-07-25
ID28210A (id) 2001-05-10
PL345327A1 (en) 2001-12-17
MXPA00012443A (es) 2004-12-03
WO1999067252A3 (en) 2000-03-16
IL182744A (en) 2010-05-17
HUP0102711A3 (en) 2002-09-30
KR20080045298A (ko) 2008-05-22
CZ301783B6 (cs) 2010-06-23
EP1741715A1 (en) 2007-01-10
DE69933767D1 (de) 2006-12-07
DK1089998T3 (da) 2007-01-15
CN1192031C (zh) 2005-03-09
US6380394B1 (en) 2002-04-30
RU2227142C2 (ru) 2004-04-20
CA2334342A1 (en) 1999-12-29
IL182744A0 (en) 2007-07-24
ES2273502T3 (es) 2007-05-01
IL139784A (en) 2010-05-17
CZ20004769A3 (cs) 2001-07-11
EP1089998B1 (en) 2006-10-25
CY1105863T1 (el) 2011-02-02
US7579366B2 (en) 2009-08-25
IL139784A0 (en) 2002-02-10
SK285647B6 (sk) 2007-05-03
KR20010083060A (ko) 2001-08-31
HUP0102711A2 (hu) 2001-12-28
NO20006378L (no) 2001-02-21
PL197648B1 (pl) 2008-04-30
JP2002518504A (ja) 2002-06-25
JP4681732B2 (ja) 2011-05-11
CA2334342C (en) 2012-07-17
SK287864B6 (sk) 2012-02-03
US20030203938A1 (en) 2003-10-30
ATE343573T1 (de) 2006-11-15
PT1089998E (pt) 2007-01-31
NO20006378D0 (no) 2000-12-14
WO1999067252A2 (en) 1999-12-29
CN1306531A (zh) 2001-08-01
AU757854B2 (en) 2003-03-06
BR9911420A (pt) 2001-03-20
SK19712000A3 (sk) 2001-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO328417B1 (no) Epotilonderivater samt deres syntese og anvendelse
CA2505368C (en) Trans-9,10-dehydroepothilone c and d, analogs thereof and methods of making the same
US6958401B2 (en) Method for synthesizing epothilones and epothilone analogs
WO1999067253A2 (en) Desmethyl epothilones
MXPA01008374A (es) Epotilonas c-21 modificadas.
JP2009007367A (ja) シクロプロピルおよびシクロブチルエポチロンアナログ
DE60318224T2 (de) Epothilonderivate
WO2018049127A1 (en) 1,2-dithiolane compounds useful in neuroprotection, autoimmune and cancer diseases and conditions
EP0275312A1 (en) Thiazole derivatives
JP2008504324A (ja) チアゾリノン非置換型キノリン
US7317100B2 (en) Epothilone derivatives
US20050014767A1 (en) Benzoxazole, benzothiazole, and benzimidazole derivatives for the treatment of cancer and other diseases
AU2005223325B2 (en) Epothilone derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees