NO327706B1

NO327706B1 - Nye tiazolo-(4,5-D)pyrimidinforbindelser, fremgangsmate for fremstilling derav, farmasoytisk preparat og mellomprodukter

Info

Publication number: NO327706B1
Application number: NO20021448A
Authority: NO
Inventors: Roger Victor Bonnert; Paul Andrew Willis; Simon Fraser Hunt; Iain Alistair Stewart Walters
Original assignee: Astrazeneca Uk Ltd
Priority date: 1999-10-01
Filing date: 2002-03-22
Publication date: 2009-09-14
Also published as: CN1210279C; UA73521C2; DK1222195T3; ZA200202380B; MXPA02003263A; JP4824889B2; EP1348709B1; DE60007768D1; HUP0204246A2; BR0014334A; DE60007768T2; CN1402730A; PT1222195E; WO2001025242A1; DE60037836D1; ES2213043T3; AU777872B2; US20040224961A1; JP2003511384A; NZ517880A

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører visse tiazolopyrimidinonforbindelser, fremgangsmåter og mellomprodukter som benyttes ved deres fremstilling, farmasøytiske preparater inneholdende slike forbindelser og deres anvendelse i terapi.

WO 98/08847 og EP0778277 beskriver hver en serie 6,5-hetero bicycliske forbindelser som angis å være nyttige som CRF-antagonister.

Kjemokiner spiller en viktig rolle i immun- og inflammatoriske responser i forskjellige sykdommer og forstyrrelser, inkludert astma og allergiske sykdommer, samt autoimmun patologier slik som reumatoid artritt og arterosklerose. Disse små utskilte molekylene er en voksende superfamilie v 8-14 kDa proteiner som er kjennetegnet ved et konservert 4-cystein motiv. Kjemokin-superfamilien kan deles i to hovedgrupper som utviser karakteristiske strukturelle motiver, Cys-X-Cys (C-X-C)- og Cys-Cys (C-C)-familiene. Disse utmerker seg på grunnlag av et enkelt aminosyreinnskudd mellom det NH-proksimale paret av cysteinrester og sekvenslikhet. C-X-C-kjemokinene inkluderer flere potente kjemoatraktanter og aktivatorer av neutrofiler slik som i nterleukin-8 (IL-8) og neutrofilaktiverende peptid 2 (NAP-2).

C-C-kjemokinene inkluderer potente kjemoattraktanter av monocytter og lymfocytter, men ikke neutrofiler slik som humane kjemotaktiske monocyttproteiner 1-3 (MCP-1, MCP-2 og MCP-3), RANTES (Regulated on Activation, Normal T Expressed and Secreted), eotaksin og inflammatoriske makrofagproteinr 1 a pg 1 6 (MIP-1 a og MIP-1 13).

Studier har vist at virkningene til kjemokinene formidles av underfamilier av G proteinkoblete reseptorer, blant hvilke er reseptorer betegnet CCR1, CCR2, CCR2A, CCQ2B, CCQ3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9. CCR10, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 og CX3CR1. Disse reseptorene representerer gode mål for legemid-delutvikhng for de midler som modulerer disse reseptorene ville være nyttige i behandlingen av forstyrrelser og sykdommer slik som de ovennevnte.

Ifølge foreliggende oppfinnelse er det derfor tilveiebragt en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav:

hvor

R<1> representerer tiadiazolyl eventuelt substituert med halogen eller en Ci.g alkylgruppe som eventuelt er substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra fenyl, fenoksy eller en 5- eller 6-leddet aromatisk ring valgt blant tiazolyl, furyl eller tienyl, idet fenyl- og de aromatiske ringene eventuelt er substituert med en eller flere substituenter uavhengig valgt fra halogenatomer, -OR<4>, -SO2R<10>, Ci-Cé alkyl eller trifluormetylgrupper;

R" er hydrogen;

R3 representerer pyrrolidinyl eventuelt substituert med OH eller Ci-Cs alkyl-, som eventuelt kan være substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra: (a) halogenatomer, -OR<4>, -NR<5>R<6>, -CONR5R6 og -NR<8>S02R<9>;

R<4> representerer hydrogen eller C1-C6 alkyl som eventuelt kan være substituert med en eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra halogenatomer, -OR<11> og -NR<1>2R1<3>; R<5> og R6 representerer uavhengig et hydrogenatom eller en C1-C6 alkylgruppe som eventuelt kan være substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra

-OR<14>,

eller

R<5> og R6 danner sammen med det nitrogenatom til hvilket de er festet et 4- til 7-leddet mettet heterocyclisk ringsystem eventuelt inneholdende et ytterligere heteroatom valgt fra oksygen- og nitrogenatomer, hvilket ringsystem eventuelt kan være substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra fenyl, -OR<14>, -COOR14, -NRI:)R16, -CONR<15>R<16>, -NR<15>COR<16>, -SONR<15>R<16>, NR<15>S02R<16> eller Ci-C6 alkyl, selv eventuelt substituert med en eller flere substituentgmpper uavhengig valgt fra halogenatomer og - NR<15>R,<6>og-OR,<7->griipper;

R1<0> representerer et hydrogenatom eller en C1-C6 alkylgruppe; og

hver av R<8>, R<9>, R<1>', R<12>, R<13>, R<14> representerer uavhengig et hydrogenatom eller en Ci. C6 alkylgruppe.

I foreliggende sammenheng kan, med mindre annet er angitt, en alkylgruppe eller en alkylgruppedel i en substituentgruppe være lineær eller forgrenet.

Visse forbindelser av formel (I) er i stand til å eksistere i stereoisomere former. Det vil forstås at oppfinnelsen innbefatter alle geometriske og optiske isomerer av forbindelsene av formel (I) og blandinger derav inkludert racemater. Tautomerer og blandinger derav utgjør også et aspekt ved foreliggende oppfinnelse.

I formel (I) ovenfor representerer gruppen R<1> tiadiazolyl eventuelt substituert med halogen eller en Ci-Cs alkylgruppe som eventuelt er substituert med en eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra fenyl, fenoksy eller en 5- eller 6-leddet aromatisk ring valgt blant tiazolyl, furyl eller tienyl, idet fenyl- og de aromatiske ringene eventuelt kan være substituert med én eller flere substituenter uavhengig valgt fra halogenatomer, -OR<4>, -SO2R<10>, Q-Cå alkyl- eller trifluormetylgrupper. Spesielt fordelaktige forbindelser av formel (I) er de hvor R<1> representerer en eventuelt substituert benzylgruppe. R<1> representerer mer foretrukket benzyl eller benzyl substituert med én eller flere C1-C6 alkyl, C1-C6 alkoksy eller halogenatomer.

Det er foretrukket at R3 er Ci-Cg alkyl substituert med hydroxy. Mer foretrukket R<3 >CH(CH3)CH2OH, CH(Et)CH2OH, C(CH3)2CH2OH eller CH(CH2OH)2. Når R<3> er CH(CH3)CH2OH eller CH(Et)CH2OH, så er de resulterende forbindelsene av formel (I) fortrinnsvis i form av (R)-isomeren.

Spesielt foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen inkluderer:

7-[(2-hydroksy-1, 1 -dimetyletyl)amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidm-2(3H)-on,

(R)-7-[[hydroksymetyl)propyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

(R)-7-[(2-hydroksy-l-metyletyl)amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(hydroksyetoksy)etyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(2-hydroksy-l-(hydroksyiiietyl)ethyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 7-[(2-aminoetyl)amino]-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio] 5-[[2,3-difiuorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksyethyl)amino] 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

N-[2-[[5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2,3-dihydro-2-okso5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimi 7-yl]amino]etyl]metansulfonamid,

(+/-)-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(2-hydroksyetoksy)-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-[(2-hydroksyetyl)amino]-l-rnetyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-(dimetylamino)-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[[4-(2-aminoetoksy)-3-klorfenyl]metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 - metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[3-klor-4-metoksyfenyl)metyl]tio]-7-[[7-( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

5-[[3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(3R,4R)-4-hydroksypyrrolidin-3-yl]amino]-tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(3R)-pyrrolidin-3-ylamino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[( 1 R)-2-hydorksy-1 -metyletyl]amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[2-hydroksy-l-(hydroksyiTietyl)etyl]amino]-5-[[(2-mtyl-4-tiazolyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazol)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[(2-hydroksy-l J-dimetyletyl)amino]-5-[[(2-metylfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[(2-ftiranylmetyl)tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5-[[(3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

(2S)-2-[[5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]2-3-dihydro-2-oksotiazolo[4,5-d]pvrimidin-7-yl] amino]-3 -hydroksy-propanamid,

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyk]amino]-5-[(2-tienylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-etyletyl]amino]-5-[[[3-metyl-4-(metylsulfonyl)fenyl]metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

5-[[[3-klor-4-(trifluormetoksy)fenyl]metyl]tio]-7-[[( l R)-2-hydroksy-1 -metyletyl] amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

5-[[[2-klorO-(trifluormetyl)fenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[(2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[[(2-metoksyfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[(2-fenoksyetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino]-5-[[(3-metylfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on,

5-[[(2-fluor-3-metylfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[(3-klorfenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[(3-bromofenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[[4-(dilfuormetoksy)fenyl]metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl] amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

(+/-)-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d] pyrimidin-2 (3 H)-on,

5-[[(2-bromofenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[[3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on,

(+/-)-5-[[23-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

5-[(5-klor-l,2,3-tiadiazol-4-yl)tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on,

og deres farmasøytiske akseptable salter og solvater.

Spesielle salter av forbindelser av formel (i) inkluderer: 5-[[(2-3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt,

5-[[3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt,

(+/-)-5 -[ [2,3 -di fluorfenyl)metyl] tio] -7-[[2-hydroksy-1 -(metoksymetyl)etyl] amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on natriumsalt,

7-[[2-hydroksy-1 -(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natruiumsalt, eller

7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt.

Ytterligere spesielle salter av forbindelser av formel (I) inkluderer: 7-[[(l R)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5- [[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on trifluoracetat,

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-[(2-hydroksyetyl)amino]-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on trifluoracetat,

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-(demetylamino)-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on

5"[[ [4-(2-aminoetoksy)-3 -klorfenyl] metyl] tio]-7-[[(1 R)-2-hydroksy-1-metyletyl] amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on tnfluoracetat,

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[2-[(dimetylamino)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on monokloroid, eller

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(3R)-pyrrolidin-3-ylamino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on dihydroklorid.

Ifølge oppfinnelsen er det også tilveiebragt en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse av formel (I) som innbefatter enten:

Behandling av en forbindelse med formel (IIA)

hvor R<1>, R<2> og R3 er som definert i formel (I), med en tiol R<!>SH i nærvær av en egnet base og eventuelt dannelse av et farmasøytisk akseptabelt salt. Reaksjonen kan utføres i et blandet oppløsningsmiddel av DMSO og etanol ved en temperatur mellom 0°C og 100°C ved bruk av natrium borhydrid som basen.

Forbindelser av formel (IIA) hvor R<1>, R2 og R<3> er som definert i formel (I) kan fremstilles ved behanding av forbindelser av formel (I) med et egnet oksidasjonsmiddel slik som okson. Reaksjonen kan utføres i et oppløsningsmiddel slik som acetonitril ved en temperatur mellom 0°C og 100°C.

Eller behandling av en forbindelse av formel (IIB):

hvor R<1>, R<2> og R3 er som definert i formel (I) og X er en avspaltningsgruppe, med et metall alkoksid, fulgt av behandling med en syre eller base og eventuelt dannelse av et farmasøytisk akseptabelt salt.

X er en hvilken som helst egnet avspaltningsgruppe slik som halogen. Reaksjonen kan utføres i et alkoholoppløsningsmiddel slik som metanol og fjerning av beskyttelse kan utføres i et oppløsningsmiddel slik som 1,4-dioksan. Eksempler på metalloksider inkluderer kaliummetoksid. Eksempler på egnede syrer inkluderer saltsyre. Forbindelsen av formel (1IB) blir fortrinnsvis behandlet med et metallalkoksid slik som kaliummetoksid fulgt av en syre slik som kons. HC1 i et oppløsningsmiddel slik som 1,4-dioksan.

Forbindelser av formel (IIB) hvor R<1>, R2 og R3 er som definert i formel (I) og X er et halogen, kan fremstilles fra tilsvarende forbindeler (IIB) hvor R<1>, R2 og R3 er som definert i formel (I) og X er NH2, ved behandling med et diazoteringsmiddel slik som isoamylnitrit og et halogeneringsmiddel slik som bromoform.

Forbindelser av formel (IIB) hvor R<1>, R2 og R3 er som definert i formel (I) og X er NH2 kan fremstilles enten ved behandling av en forbindelse av formel (HIA):

hvor R" og R er som definert i formel (I) og X er NH2, med en forbindelse av formel R<l>X hvor R' er som definert ovenfor og X er en avspaltningsgruppe slik som bromid i nærvær av en base slik som diisopropyletylamin i et inert oppløsningsmiddel slik som DMSO/N-metylpyrrolidinon ved en temperatur mellom 0°C og 100°C.

Forbindelser av formel (HIA) hvor R<2> og R<3> er som definert i formel (I) og X er NH2 kan fremstilles ved behandling av en forbindelse av formel (IIB) hvor R2 og R3 er som definert i formel (I), X er NH2 og R<1> er en egnet benzylgruppe slik som benzyl eller 2,3-difluorbenzyl, med et reduserende medium slik som natrium metall i flytende ammoniakk, eller ved behanding av en forbindelse av formel (UIB):

hvor R<1> er som definert i formel (I) og L er en avspaltningsgruppe slik som klor, med et amin HNR"R hvor R" og R er som definert i formel (I). Reaksjonen kan utføres i et oppløsningsmiddel sliksom N-metyl-pyrrolidin ved en temperatur mellom 0°C og 150°C.

Forbindelser av formel (UIB) hvor R<1> er som definert i formel (I) og L er et halogen, kan fremstilles ved behandling av en forbindelse av formel (UIB) hvor R<1> er som definert i formel (I) og L en hydroksylgruppe, med et halogeneringsmiddel slik som fosforoksyklorid. Reaksjonen kan utføres i nærvær av dimetylanilin ved tilbakeløp.

Forbindelser av formel (UIB) hvor R<1> er som definert i formel (I) og L er en hydroksylgruppe kan dannes enten ved behandling av en forbindelse av formel (IVA) med en forbindelse av formel R1 X hvor R<1> er som definert ovenfor og X er en avspaltningsgruppe slik som bromid i nærvær av en bane slik som kalium tert-butoksid i et inert oppløsningsmiddel slik som DMSO ved omgivelsestemperatur.

Eller ved oppvarming av en forbindelse av formel (IVB) hvor R<1> er som definert ovenfor.

Reaksjonen utføres fortrinnsvis i et egnet oppløsningsmiddel slik som DMF ved forhøyet temperatur, for eksempel ved ca. 120°C.

Forbindelser av formel (IVB) kan lett fremstilles ved omsetning av en forbindelse av en generell formel (V) hvor R<1> er som definer ovenfor, med kalium tiocyanat og brom i et inert oppløsningsmiddel slik som dimetylformamid/pyridin.

Forbindelser av formel (V) fremstilles hensiktsmessig ved omsetning av en forbindelse av formel (VI):

med en forbindelse av formel R'X hvor R<1> er som definert ovenfor og X er en avspaltningsgruppe slik som bromid i nærvær av en base slik som natriumhydrid i et inert oppløsningsmiddel slik som DMF ved omgivelsestemperatur.

Forbindelser av formel (IVA) og (VI) er enten kommersielt tilgjengelige eller er velkjente i litteraturen.

Det vil forstås av fagfolk innen teknikken at i de ovenfor beskrevne fremgangsmåter så kan det være at de funksjonelle gruppene (for eksempel hydroksylgrupper) i mellomproduktforbindelser må beskyttes med beskyttelsesgrupper. Sluttrinnet i fremstillingen av forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan innebære fjerning av en eller flere beskyttelsesgrupper. Beskyttelsen av og beskyttelsesfjerningen fra funksjonelle grupper er fullstendig beskrevet i "Protective Groups in Organic Chemistry", utgitt av J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973), og "Protective Groups in Organic Syntesis", 2. utgave, T. W. Greene & P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience (1991).

Nye mellomproduktforbindelser utgjør et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen. Forbindelser av formel (IIA), (IIB) og (HIA) som definert over, forutsatt at formel (IIB) ikke er forbindelsene

i) 2-[[2-brom-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-2-metyl-1-propanol;

ii) 2-[[2-brom-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyirmidin-7-yl]amino]-2-metyl-l-propanol.

er nye og utgjør aspekter ved oppfinnelsen.

Forbindelsene av formel (I) ovenfor kan omdannes til et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, fortrinnsvis et basisk addisjonssalt slik som natrium, kalium, kalsium, aluminium, litium, magnesium, sink, bensatin, klorprokain, koiln, dietanolamin, etanolamin, etyldiamin, meglumin, trometamin eller prokain, eller et syreaddisjonssalt slik som et hydroklorid, hydrobromid, fosfat, acetat, fumarat, maleat, tartrat, sitrat, oksalat, metansulfonat eller p-toluensulfonat.

Forbindelsene av formel (I) har aktivitet som farmasøytika, spesielt som modulatorer av kjemokinreseptorer, og kan benyttes i behandlingen (terapeutisk eller profylaktisk) av tilstander/sykdommer i menneske og ikke-humane dyr som er forverret eller forårsake av overdreven eller uregulert produksjon av kjemokiner. Eksempler på slike tilstander/sykdommer inkluderer: (1) (respirasjonskanalen) obstruktive luftveissykdommer inkludert kronisk obstruktiv pulmonal sykdom (COPD); astma, slik som bronkial, allergisk, intrinsikk, ekstrinsikk og støvastma, spesielt kronisk eller inveterert astma (for eksempel sen astma og luftveis-hyperresponsibilitet); bronkitt, akutt, allergisk, atrofisk rinitt og kronisk rinitt inkludert rhinitis caseosa, hypertrofisk rinitt, rhinitis purulenta, rhinitis sicca og rhinitis medikamentosa; membranøs rinitt, inkludert kruppøs, fibrinøs og pseudomembranøs rinitt og skrofuløs rinitt; årstidsbestemt rinitt inkludert rhinitis nervosa (høyfeber) og vasomotorisk rinitt; arkoidose, farmer's lunge og beslektede sykdommer, fibroid lunge og idiopatisk interstitiell pneumoni; (2) (ben og ledd) reumatoid artritt, seronegative spondyloartropatier (inkludert ankyloserende spondylitt, psoriatisk artritt og Reiter's sykdom), Behcefs sykdom, Sjøgrens syndrom og systemisk sklerose; (3) (hud) psoriasis, atopisk dermatitt, kontaktdermatitt og andre eksematøse dermitider, seborreisk dermatitt, Lichen planus, pemfigus, bulløs pemfigus, eidermolysis bullosa, urtikaria, angiodermier, vaskulitider, erytemaer, kutanøse eosinofilier, uveitt, Alopecia areata og vemal konjunktivitt; (4) (gastrointestinal kanal) cøliakisk sykdom, prkitt, eosinofil gastro-enetritt, mastocytose, Crohn's sykdom, ucerativ colitt, matrelaterte allergier som har effektiver fjernt fra maven, for eksempel migrene, rinitt og eksem; (5) (annen vev- og systemisk sykdom) multipl sklerose, aterosklerose, ervervet immunsviktssyndrom (AIDS), lups erythematosus, systemisk lupus, erythematosus, Hashimoto's tyroiditt, myastenia gravis, type I diabetes, nefrotisk syndrom, eosinofil fasciitt, hyper IgE-syndrom, leprøs lepra, Sézarys syndrom og idiopatisk trombocytopenia pupura; post-operative adhesjoner, og sepsis; (6) (allograft rejeksjon) akutt og kronisk etter for eksempel transplantasjon av nyre, hjerte, lever, lunge, benmarg, hud og kornea; og kronisk graft-versus-host-sykdom; (7) krefttyper, spesielt ikke-litencelle lungekreft (NSCLC), malign melanom, prostatakreft og skvamøs sarkom og tumor metastase; (8) sykdommer hvor angiogenese er forbundet med forhøyede CXCR2 kjemokinnivåer (for eksempel NSCLC-diabetisk retinopati); (9) cystisk fibrose, slag, reperfusjonsskade i hjertet, hjerne, perifere lemmer og andre organer; (10) brannsår og kroniske hudulcera; (11) reproduktive sykdommer (for eksempel forstyrrelser av ovulasjon, menstruasjon og implantasjon, pre-term veer, endometriose).

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer således en forbindelse av formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert ovenfor, for bruk i terapi.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen benyttes fortrinnsvis til å behandle sykdommer hvor kjemokinreseptoren tilhører CXC-kjemokinreseptorunderfamilien, mer foretrukket er målkjemokinreseptoren CXCR2-reseptoren.

Spesielle tilstander som kan behandles med forbindelsen ifølge oppfinnelsen er psoriasis, sykdommer hvor angiogenese er forbundet med forhøyede CXCR2-kjemokinnivårer, og COPD. Det er foretrukket at forbindelsen ifølge oppfinnelsen benyttes for behandling av psoriasis.

Ifølge et ytterligere aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse anvendelse av en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert ovenfor, i fremstillingen av et medikament for bruk i terapi.

I foreliggende sammenheng inkluderer betegnelsen "terapi" også "profylakse" med mindre det motsatte er spesielt angitt. Betegnelsen "terapeutisk" skal også oppfattes i overensstemmelse med dette.

For de ovennevnte terapeutiske anvendelsene vil den administrerte dosering naturligvis variere med forbindelsen som benyttes, administrasjonsmåten, den ønskede behandlign og den indikerte forstyrrelse.

Forbindelsene av formel (I) og farmasøytisk akseptable salter og solvater derav kan

benyttes alene, men vil generelt bli administrert i fonn av et farmasøytisk preparat hvor formel (I)-forbindelsen/saltet/solvatet (aktiv bestanddel) er forent med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer. Avhengig av administrasjonsmåten så vil det farmasøytiske preparatet fortrinnsvis innbefatte fra 0,05 til 99 vektprosent,

mer foretrukket fra 0,05 til 80 vektprosent, enda mer foretrukket fra 0,10 til 70 vektprosent, og ytterligere mer foretrukket fra 0,10 til 50 vektprosent, av aktiv bestanddel, hvor alle vektprosentandeler er basert på totalt preparat.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også et farmasøytisk preparat som innbefatter en forbindelse av formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert ovenfor, i forbindelse med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

Oppfinnelsen tilveiebringer ytterligere en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat ifølge oppfinnelsen, hvilket innbefatter blanding av en forbindelse av formel (1), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert ovenfor, med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

De farmasøytiske preparatene kan administreres topisk til for eksempel til lungen og/eller luftveiene eller til huden (i form av oppløsninger, suspensjoner, heptafluoralkan aerosoler og tørrpulverformuleringer; eller systemisk, for eksempel ved oral adminstra-sjon i form av tabletter, kapsler, siruper, pulvere eller granuler, eller ved parenteral administrasjon i form av oppløsninger eller suspensjoner, eller ved subkutan administrasjon eller ved rektal administrasjon i form av suppositorier eller transdermalt. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen blir fortrinnsvis administrert oralt.

Oppfinnelsen vil nå bh ytterligere illustrert under henvisning til følgende eksempler. I eksemplene ble de kjernemagnetiske ressonans (NMR)-spektra målt på et Varian Unity Inova 300 eller 400 MHz spektrometer og massespektrometri (MS)-spektra målt på et Finnigan Mat SSq7000 eller Micromass Platform spektrometer. Der det var nødvendig ble reaksjonene utført under en inert atmosfære av enten nitrogen eller argon. Kromatografi ble generelt utført ved bruk av Matrex Silica 60 (35-70 um) eller Prolabo Slica gel 60 ® (35-70 um) egnet for silica gel - flash kromotografi. Høytrykk-væskekromato-grafirensing ble utført ved baik av enten en Waters Micromass LCZ med en Waters 600 pumpestyreenhet, Waters 2487 detektor og Gilson FC027 fraksjonskollektor eller en Waters Delta Prep 4000. Forkortelsene smp og DMSO som benyttet i eksempelene står for henholdsvis smeltepunkt og dimetyl sulfoksyd.

Eksempel 1

7-[(2-hydroksy-14-dimeryletyl)amino]-5-[(fenylmetyl)tio]thiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) tiocyansyre, 6-amino-l,4-dihydro-4-okso-2-[(fenylmetyl)tio]-5-pyrimidinyl ester 6-amino-2-[(fenylmetyl)tio]-4(lH)-pyrimidinon (10,5g) [fremstilling som beskrevet I

WO 9635678] og kalium tiocyanat (25g) i N,N-dimetylformamid (200ml) ble oppvarmet sammen ved 65°C. Pyridin (6,3 ml) ble tilsatt og oppløsningen avkjølt til 5°C. Brom (2,2ml) ble langsomt tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt i 2 timer ved 5-10°C. Reaksjonsblandingen ble helt på isvann, omrørt i 1 time og det faste stoffet ble isolert vedfiltrering. Etter vasking med vann og eter ble det oppnådd en ren prøve etter triturering med varm metanol.

MS (APCI) 291 (m+H, 100%).

b) 2-amino-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-7(4H)-on Produktet i eksempel 1 trinn a) (7,35g) ble oppvarmet ved 120°C i N,N-dimetylformamid (40ml)/vann (lOml) i 10 timer. Etter avkjøling ble det resulterende faste stoffet frafiltrert, vasket med vann, deretter etylacetat hvilket ga undertittelforbindelsen.

smp. 325°C

MS (APCI) 291 (M+H, 100%).

c) 7-klor-5-[(fenylmetyl)tio|tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2-amin Produktet fra eksempel 1 trinn b) (0,89g), fosfor oksyklorid (12ml) og N,N-dimetylanilin (l,2ml) ble oppvarmet ved tilbakeløp i 2 timer. Den avkjølte reaksjonsblandingen ble helt på isvann og omrørt i 2 timer. Kromatografi (SiOi, metanol/diklormetan som elueringsmiddel) ga undertittelforbindelsen.

smp. 217-218,5°C

MS (APCI) 309 (M+H, 100%).

d) 2-[[2-amino-5-[(fenylmerji)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-2-metyl-l-propanol

Produktet fra eksempel 1 trinn c) (0,6g)og 1-amino-2-metyl-propan-2-ol (1,1 g) i tetrahydrofuran (lOml) ble oppvarmet i en forseglet beholder ved 100°C i 18 timer. Blandingen ble inndampet i tørrhet og renset (SiO?, etyl acetat somelueringsmiddel) hvilket ga undertittelforbindelsen (0,46g).

(MS (APCI) 362 (M+H<+>, 100%).

e) 2-[[2-brom-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-dJpyrimidin-7-yl]amino]-2-metyl-l-propanol

Til en oppløsning av produktet fra eksempl 1 trinn d) (0,1 g) I bromoform (5ml) ble tilsatt isoamylnitril (0,13ml) og blandingen ble oppvarmet til 60°C i 10 min. Blandingen ble inndampet til tørrhet og renset (SiCb, etylacetat: diklormetan 1:9 som elueringsmiddel) og dette ga undertittelforbindelsen som et fargeløst fas stoff (0,043g). MS (APCI) 427 (M+H<+>, 100%).

f) 2-[[2-metoksy-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-2-metyl-l-propanol

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 1 trinn e) (0,36g) i metanol (5ml) ble det tilsatt kalium hydroksyd (0,095g) og blandingen ble omrørt i 30 min. Blandingen ble nøytralisert med konsentrert saltsyre, deretter inndampet i tørrhet og renset (SiCb, etyl acetat: diklormetan 1:9 som elueringsmiddel) og dette ga undertittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff (0,245g).

MS (APCI) 377 (M+H<+>, 100%).

g) 7-[(2-hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]-5-[(fenyImetyl)]thio]tiazolo(4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 1 trinn f) (0,2lg) I 1,4-dioksan (5ml) ble det tilsatt vann (0,1 ml) og konsentrert saltsyre (1 dråpe). Blandingen ble oppvarmet ved 45°C i 3 timer og deretter inndampet i tørrhet. Omkrystallisering (acetonitril) ga tittelforbindelsen (0,110g).

smp. 207-8°C

MS (APCI) 363 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,37 (IH, s), 7,43-7,23 (5H, m), 6,61 (1H, bs), 4,81 (1H, t), 4,34 (2H, s), 3,55 (2H, bs), 1,32 (6H, s).

EKSEiMPEL 2

(R)-7-[fl-(hydroksymet>i)propyl|aminoj-5-[(fenylmetyl)tio|tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) (R)-2-[[2-amino-5-[(fenylmeryl)tio]tiazolo[4,5-d[pyrimidin-7-yl]aniino|-l-butanol

Til en blandingen av produktet I eksempel 1 trinn c) (2,5g) og (R)-(-)-2-amino-l-butanol (5g) i et oppløsningsmiddel av N-metylpyrrolidinon (lOml) ble N,N-diisopropyletylamin (5ml) tilsatt og den resulterende blanding oppvarmet ved 100°C i 10 timer. Blandingen ble helt i vann og produktet oppsamlet ved filtrering og dette ga undertittelforbindelsen (2,5g)

MS (APCI) 362 (M+H<+>, 100%)

b) (R)-2-[[2-brom-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-butanol

Fremstilt ved fremgangsmåten ieksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet I eksempel 2 trinn a).

MS (APCI 427 (M+H<+>, 100%)

c) (R)-2-[[2-metoksy-5-[(fenylmetyl)tio]tiazoIo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-butanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 2 trinn b).

MS (APCI) 377 (M+H<+>, 100%)

(d) (R)-7-[[l-(hydroksymetyl)propyl]aminol-5-[(fenylmetyl)tio]tiazoIo[4,5-d) pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 2

trinn c).

smp. 217-8 °C

MS (APCI) 363 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,37 (1H, s), 7,43-7,21 (6H, m), 4,68 (1H, t), 4,32 (2H, q), 4,09 (lH,bs), 3,47-3,32 (2H, m), 1,69-1,59 (1H, m), 1,48-1,41 (lH,m), 0,82 (3H,t).

EKSEMPEL 3

(R)-7-[(2-hydroksy-l-met}'leryl)amino]-5-[(fenylmet>l)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) (R)-2-l[2-amino-5-[(fenylmervl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl|arnino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 1 trinn c) og (R)-(-)-2-amino-l-propanol.

MS (APCI) 412 (M+H<+>, 100%).

b) (R)-2-[[2-brom-5-[(fenylmer}l]tio]tiazolo[4,5-d]pyriniidin-7-yl]aniino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 3 trinn a)

MS (APCI) 348 (M+H<+>, 100%).

c) (R)-2-[[2-metoksy-5-[(fenylmetyl)tio|tiazolo[4,5-d|pyrimidin-7-yl]amino|-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåte i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 3 trinn b)

MS (APCI) 363 (M+H<+>, 100%)

d) (R)-7- [(2-hydroksy-l-metyletyl)amino]-5-[(fenylmetyI)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 3 trinn c).

MS (APCI) 349 (M+H\ 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,38 (1H, s), 7,44-7,20 (6H, m), 4,72 (IH, t), 4,32 (2H, m), 4,23 (1H, m), 3,49-3,29 (2H, m), 1,11 (3H, d).

EKSEMPEL 4

5-[[2,3-difluorofenyl)met>llthio]-7-[(2-hydroksy-l,l-dimethyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(eH)-on

a) 2-amino-5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl|tio|tiazolo[4,5-d|pyrimiclin-7(4H)-on Kalium t-butoksydoppløsning (0,45ml av IM oppløsning i tetrahydrofura) ble tilsatt til

en omrørt oppløsning av 2-amino-5,6-dihydro-5-tiokso-tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7(4H)-on (0,09g) [Anført: Indian J. Chem., Sect. B (1989), 28B(11), 964-5.] og 2,3-difluorbenzyl bromid i dimetyl sulfoksyd (2ml). Etter omrøring i 3 dager ble reaksjonsblandingen helt på vann til oppnåelse av undertittelforbindelsen som ble isolert ved filtrering.

MS (APCI) 327 (M+H<+>, 100%)

b) 7-klor-5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-2-amin Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn c), ved bruk av produktet i eksempel 4

trinn a).

MS (APCI) 345 (M+H<+>, 100%)

c) 2-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyI)metyl]tio]tiazolo|4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-2-metyl-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b), og 2-amino-2-metylpropanol.

MS (APCI) 398 (M+H<+>, 100%)

d) 2- [[2-brom-5-[[2,3-difiuorfenyl)meryl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino|-2-metyI-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn c).

MS (APCI) 362 (M+H<+>, 100%)

e) 2-[|5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-2-metyl-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn d).

MS (APCI) 413 (M+H<+>, 100%)

(f) 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-l,l-dimet>l)amino]tiazolof4,5-d] pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn e).

MS (APCI) 399 (M+H", 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,41 (1H, s), 7,41-7,30 (2H, m), 7,21-7,13 (1H, m), 6,64 (1H, bs), 4,79 (lH,t), 4,41 (2H, s), 3,53 (2H, d), 1,29 (6H, s).

EKSEMPEL 5

5-[[2,3-dinuorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-merjierjl]aminoJtiazolo[4,5-d|pyrimidin-2(3H)-on

a) (2R)-2-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanoI

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og (R)-(-)-2-amino-l-propanol.

MS (APCI) 384 (M+H<+>, 100%)

b) (2R)-2-[[2-brom-5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 5 trinn a).

MS (APCI) 448 (M+H<+>, 100%)

c) (2R)-2-[f5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyI]tio]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel" 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 5 trinn b).

MS (APCI) 398 (M+H<+>, 100%).

d) 5-[[2,3-difluorfenyl)metylltio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyI]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 5 trinn c).

MS (APCI) 385 (M+H<+>, 100%)

NMR5H (D6-DMSO) 12,41 (1H, s), 7,41-7,11 (4H, m), 4,72 (1H, t), 4,39 (2H, m), 4,21 (1H, m), 3,47-3,29 (2H, m), 1,09 (3H, d).

EKSEiWPEL 6

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(hydroksy)etjl]aminoltiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[2-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tioltiazoIo[4,5-dlpyrimidin-7-yl]amino]ethoksy]etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og 2-(2-aminoetoksy)etanol.

MS (APCI) 414 (M+H<+>, 100%).

b) 2-[2-[[2-brom-5-[[2,3-difluorfenyl)metylltio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]etoksy]etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 6 trinn a).

MS (APCI) 478 (M+H", 100%).

c) 2-[2-[[5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]etoksy]etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 6 trinn b).

MS (APCI) 429 (M+H<+>, 100%).

d) 5-[[2,3-difluorfenyl)met>i]tio]-7-[I2-(2-hydroksy)etyllamino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 6 trinn c).

smp. 213-4°C

MS (APCI) 398 (M+H<+>, 100%).

NMR 5H (d6-DMSO) 12,41 (1H, s), 7,39-7,11 (4H, m), 4,57 (1H, t), 4,39 (2H, s), 3,57-3,38 (8H, m).

EKSEMPEL 7

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-2(3H)-on a) 2-[[amino-5-[[2,3-dinuorfenyl)merji]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-1,3-propanediol.

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og 2-amino-l,3-propandiol.

MS (APCI) 464 (M+H", 100%).

b) 2-[[2-brom-5-l[2,3-difluorfenyl)mer\i]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-1,3-propanediol,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 7 trinn a).

MS (APCI) 454 (M+H<+>, 100%).

c) 2-5-[[23-difluorfenyl)met>'lltio]-2-metoksytiazolo[4,5-tl]pyriniidin-7-yl]aniino]-1,3-propanediol,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 7 trinn b).

MS (APCI) 415 (M+H<+>, 100%)

(d) 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(hydorksymetyl)etyl]aminoJtiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 7 trinn c).

smp. 178-9°C

MS (APCI) 401 (M+H<+>, 100%).

NMR 8H (d6-DMSO) 12,41 (1H, s), 7,42-7,11 (4H, m), 4,66 (2H, s), 4,40 (2H, s), 4,19 (1H, m),3,49 (4H, m).

EKSEMPEL 8

7-[(2-aminoetyl)amino]-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-2(3H)-on

a) l2-[[2-amino-5-[f2,3-difluorfenyl)metyljtio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] etyl]-carbaminsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og (2-aminoetyl)-carbaminsyre, 1,1-dimetyletylester.

MS (APCI) 469 (M+H<+>, 100%).

b) [2-[[2-brom-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazoio[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]etyl]-carbaminsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 8 trinn a).

MS (APCI) 533 (M+H<+>, 100%).

c) [2-[[5-[[2,3-difluorfenyl)met}lltio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-ylJamino]etyl]-carbaminsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 8 trinn b)

MS (APCI) 489 (M+F<T>, 100%).

d) 7-[(2-aminoetjl)amino]-5-[[23-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåte i eksempel 1 trinn g) ved bruk av produktet i eksempel 8 trinn c).

smp2115-6°C

MS APCI) 370 (M+H", 100%).

NMR 8H (d6-DMSO) 12,00 (1H, s), 7,45-7,11 (3H, m), 6,35 (IH, bs), 4,37 (2H, s), 3,48 (2H, m), 2,92 (2H, t).

EKSEMPEL 9

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksyeryl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on,

a) 2-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og etanaolamin.

MS APCI) 370 (M+H<+>, 100%).

b) 2-[[2-brom-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 9 trinn a).

MS APCI) 434 (M+H<+>, 100%).

c) 2-[[5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 9 trinn b).

MS APCI) 385 (M+H<+>, 100%).

d) 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksyetyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 9 trinn c).

smp. 217-9°C

MS APCI) 371 (M+H<+>, 100%).

NMR 8H (de-DMSO) 12,43 (1H, s), 7,67-7,64 (1H, m), 7,39-7,33 (2H, m), 7,16-7,12 (1H, m), 4,73 (1H, t), 4,40 (2H, s), 3,52-3,42 (4H, m).

EKSEMPEL 10

N-[2-[[5-[[23-difluorfenyl)metyl]tioJ-2,3-dihydro-2-oksotiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] etyl] metansulfonamid, a) N-[2-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yI]amino]etyl]metansulfonamid,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved baik av produktet i eksempel 4 trinn b) og N-[2-aminoetyl]-metansulfonamid,

MS APCI) 448 (M+H<+>, 100%).

b) N-[2-[[2-brom-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] etyl] metansulfonamid,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempl 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 10 trinn a).

MS APCI) 511 (M+H<+>, 100%).

c) N- 82-[[5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]etyl]metansulfonamid,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved baik av produktet i eksempel 10 trinn b).

MS APCI) 462 (M+H<+>, 100%).

d) N-[2-[[5-[[2,3-difluorfenyl)met}l]tio]-2,e-dihydro-2-oksotiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]etyl]metansulfonamid,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved baik av produktet i eksempel 10 trinn c).

smp. 225-6°C

MS APCI) 448 (M+H<+>, 100%).

NMR 8H (d6-DMSO) 12,49 (1H, s), 7,72 (1H, t), 7,41-7,13 (4H, m), 4,43 (2H, bs), 3,49 (2H, m), 3,13 (2H, m), 2,89 (3H, s).

EKSEMPEL 11

(+/-)-5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(2-hydroksyetoksy)-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) (+/-)-2-[2-[[2-amino-5-[l2,3-difluorfenyl)metyl|tio]tiazolo[4,5-djpyrimidin-7-yl]amino]propyloksy]etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og (+/-)-2- [aminopropoksy]etanol,

MS APCI) 428 (M+H<+>, 100%).

b) (+/-)-2-[-[[2-brom-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]propoksy]etanol

Fremstilt ved fremgangsmåten eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 11 trinn a).

MS APCI) 492 (M+H<+>, 100%).

c) (+/-)-2-[2-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-ylj amino] propoksy] etanol,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel l trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 11 trinn b),

MS APCI) 443 (M+H<+>, 100%).

d) (+/-)-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(2-hydroksyetoksy)-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 11 trinn c).

smp. 221-2°C

MS APCI) 429 (M+P<T>, 100%).

NMR6H (d6-DMSO) 12,43 (1H, s), 7,47-7,30 (dH, m), 7,17-7,13 (1H, m), 4,56 (1H, t), 4,40 (2H, s), 4,35 (1H, m), 3,49-3,32 (6H, m), 1,10 (3H, d).

EKSEMPEL 12

7-[[(lR)-2-amino-l-meryletyljaminol- 5-[[2,3-difluorfenyl)meryl]tio]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-2(3H)-on trifluoracetat a) (2R)-2-[[-amino-5-[[23-difluorfenyl)metylltio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] propanamid,

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og (2R)-2-amino-propanamid hydroklond,

MS APCI) 397 (M+H<+>, 100%).

b) N<7->[(lR)-2-amino-l-mer>ieryl]-5-[[2,3-difluorfenyl)meryl]tio]tiazolo[4,5-

d] py rimidin-2,7-diamin

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 12 trinn a) (0,3 g) i tørr tetrahydrofuran (10 ml) ble det tilsatt 2M boran i THF (10 ml) og blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 6 timer. Reaksjonen ble stoppet mens den var varm med metanol (30 ml), og reaksjonsblandingen ble inndampet i tørrhet og resten opptatt i metanol (30 ml) inneholdende noen dråper konsentrert saltsyre. Blandingen ble deretter oppvarmet under tilbakeløp i ytterligere 1 time, inndampet i tørrhet hvilket ga et blekgult fast stoff. MS APCI) 383 (M+H<+>, 100%).

c) [(2R)-2-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]propyl]karbaminsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 12 trinn b) (1,6 g) i THF (50 ml) ble det tilsatt di-tert-butyldikarbonat (0,9lg) og blandingen omrørt i 2 dager. Inndampning til tørrhet ga 2,0 g.

MS APCI) 483 (M+H", 100%).

d) [(2R)-2-[[2-brom-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]propyl]karbaminsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 12 trinn c).

MS APCI) 547 (M+H<+>, 100%).

e) [(2R)-2-[[5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]propyl|karbaminsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 12 trinn d).

MS APCI) 498 (M+H<+>, 100%).

f) 4-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]- 5-[[2,3-difluorfenyl)metyI]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on trifluoracetat

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 12 trinn e) og renset ved fremgangsmåten i eksempel 15 trinn f).

MS APCI) 384 (M+H<+>, 100%).

NMR8H (d6-DMSO) 12,55 (1H, s), 7,81 (3H, bs), 7,45-7,31 (4H,m), 7,18-7,13 (1H, m), 4,51-4,34 (3H, m), 2,95 (2H, m), 1,14 (3H, d).

EKSEMPEL 13

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-[(2-hydroksyetyl)amino]-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-3(3H)-on trifluoracetat

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 12 trinn f) (lOOmg) i tørr THF (5 ml) ble det tilsatt [[(l,l-dimetyletyl)diemtylsily]oksy]-acatatdehyd (49 mg) fulgt av natrium triacetoksyborhydrid (61 mg) og blandingen ble omrørt i 1 time. Blandingen ble surgjort med konsentrert saltsyre, omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter inndampet til tørrhet. Produktet ble renset (HPLC, Novapak® Cl 8 kolonne, 0,1% vanndig TFA:acetonitril, gradienteluering 75:25 til 5:95 i løpet av 15 minutter) hvilket ga tittelforbindelsen (0,021 g).

MS APCI) 428 (M+H<+>, 100%).

NMR 8H (d6-DMSO) 7,39-7,29 (2H, m), 7,17-12 (1H, m), 6,92 (1H, m), 4,91 (1H, s), 4,48-4,32 (3H,m), 3,54 (2H, m), 2,94-2,82 (4H, m), 1,12 (3H, m).

EKSEMPEL 14

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-(diemtylamino)-l-metyIetyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten eksempel 13 ved bruk av produktet i eksempel 12, trinn

f), og 40% vanndig formaldehyd oppløsning.

MS APCI) 461 (M+H<+>, 100%).

NMR 8H (d6-DMSO) 12,00 (1H, s), 7,39-7,31 (2H, m), 7,18-7,09 (2H, m), 4,39 (2H, q), 4,30 (1H, m), 3,31 (6H, bs). 2,43-2,38 (1H, m), 2,24-20 (IH, m), 1,07 (3H, d).

EKSEMPEL 15

5-[[[4-(2-aminoetoksy)-3-klorfenyljmetyl]tio]-7-l[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on trifluoracetat

a) 2-(2-klor-4-formylfenoksy)acetatamid,

Til en oppløsning av 3-klor-4-hydroksybenzaldehyd (1 Og) i methanol (100 ml) ble det

tilsatt 1,0 M kalium t-butoksyd (64 ml). Til blandingen ble det tilsatt 2-kloracetamid (5,96g) og blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp natten over. Blaningen ble inndampet til resten, triturert med vann (500 ml) og det faste stoffet oppsamlet til oppnåelse av undertittel forbindelse (4,4g).

NMR5H (CDCL3) 9,89 (1H, s), 7,97 (1H, d), 7,82 (1H, dd), 7,04 (1H, d), 6,73 (1H, s), 5,87 (l H, s), 4,63 (2H, s).

b) 2- [2-kIor-4-(hydroksymetyi)fenoksy]acetamid

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 15 trinn a) 4,4g) i etanol (500 ml) ble det

tilsatt natrium borhydrid (l,56g) og blandingen ble omrørt i 1 time. Den ble deretter surgjort med isedikk, inndampet i tørrhet og ekstrahert i etylacetat, vasket med vann og dette ga undertittelforbindelsen (4,3g).

NMR 5H (CDCL3) 7,44 (1H, d), 7,29 (1H, d), 6,90 (1H, d), 6,81 (1H, s), 5,85 (1H, s), 4,63 (2H, s), 4,48 (2H, s), 1,96 (1H, s)

c) 2-[4-[(acetyltio)metyl]-2-klorfenoksy]acetamid

Diisopropylazokarboksylat (5,5 ml) ble tilsatt til en omrørt oppløsning av trifenylfosfin

(7,3 lg) i THF ved 0°C. Ved fullføringen av tilsetningen ble det avsatt et fargeløst bunnfall. Til denne suspensjonen ble det tilsatt en blanding av produktet fra eksempel 15 trinn b) (0,3g) og tioledikksyre (2,00ml) i THF (30 ml) ved 0°C. Blandingen fikk nå romtemperatur natten over, ble inndampet i tørrhet og resten rensett (SiCh, 10% etyl acetat: 90% eter som elueringsmiddel) og dette ga undertittelforbindelsen (3,5g). NMR 8H (CDCL3) 7,35 (1H, d), 7,17 (1H, dd). 6,84 (1H, d), 6,76 (1H, s), 5,81 (1H, s), 4,54 (2H, s), 4,04 (2H, s), 2,35 (3H, s).

d) 2-[2-klor-r-MerkaptometyI)fenoksy]acetamid,

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 15 trinn c) (l,0g) i metanol (50 ml) ble det

tilsatt natnumhydroksyd pellets (0,15g) og blandingen ble omrørt i 2 dager. Blandingen ble fortynnet med vann og undertittelforbindelsen oppsamlet ved filtrering (0,7g).

NMR 8H (DMSO) 7,44 (1H, s), 7,38 (1H, d), 7,21 (1H, dd), 6,98 (1H, d), 4,55 (2H, s), 3,76 (2H, s).

e) 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-meryletyl]amino]-5-[fenyImetyl)sulfonyl]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 3 trinn d) (240 mg) i acetonitril (100 ml) og vann (100 ml) ble det tilsatt okosn (2,4 g) og blandingen ble oppvarmet ved 40° i 2 timer. Acetonitrilen ble fjernet ved rotasjonsfordamning og undertittelforbindelsen oppsamlet ved filtrering (235 mg).

MS (APCI) 381 (M+H<+>, 100%).

f) 5-[[[4-(2-aminoetoksy)-3-kIorfenyl]metyl]tioJ-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletylJamino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on trifluoracetat

Til en blanding av produktet fra eksempel 15 trinn 3) (100 mg), produktet fra eksempel 15 trinn d), (3,29 mg) og natrium borhydrid (50 mg) i en oppløsning av DMSO (1 ml) og etanol (10 ml) ble oppvarmet ved 55-60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble inndampet i tørrhet og resten renset (HPLC, Novapak<®> Cl8 kolonne, 0,1 % vanndig TFA:acetonitril, gradienteluering 95:5 til 5:95 i løpet av 15 minutter) og dette ga tittelforbindelsen (0,023g).

MS (APCI) 442 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (D20) 7,46 (1H, bs), 7,32 (1H, d), 7,00 (1H, d), 4,36-4,20 (5H, m), 3,61 (2H, m),3,46 (2H, m), 1,20 (3H, d).

EKSEMPEL 16

5-[[2-klor-4-metoksyfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 3-klor-4-metoksybenzenmetanetiol

Tiourea (3,04 g, 0,04 mol) ble tilsatt til en oppløsning av 3-klor-4-metoksybenzyl

bromid (4,0g. 0,02 mol) i etanol (200 ml) og tilbakeløpskokt i 16 timer.

Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og resten ble deretter oppløst i vanndig natriumhydroksydoppløsning (30g, 0,75 mol i 300ml vann) og oppvarmet ved 80°C i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt i et isbad og surgjort ved tiletning av konsentert saltsyre. Produktet ble isolert ved ekstraksjon tre ganger i dietyleter. De kombinerte

organiske fasene ble tørket over vannfntt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i

vakuum, og dette ga undertittelforbindelsen som en fargeløs olje i et utbytte å 83%

(3,0g).

NMR 8H (CDCL3) 7,34 (1H, m,), 7,18 (1H, dd,), 6,86 (1H, d), 3,89 (3H, s), 3,68 (2H,

d), 1,76 (lH,t)

b) 5-[[3-kIor-4-metoksyfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyIetyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

3-klor-4-metoksybenzenmetantiol (0,128g, 0,68 mmol), fremstilt i eksempel 16 trinn a), produktet i eksempel 15 trinn e) (0,13Og, 0,349 mmol) og natrium borhydrid (0,026g, 0,68 mmol) ble tilbakeløpskokt ved 50°C i en blanding av dimetylsulfoksyd og etanol (lOml). Etter 3 timer og igjen etter fem timers reaksjonstid ble ytterligere porsjoner av natrium borhydrid (0,05g, 1,3 mmol) i etanol (2ml) tilsatt til reaksjonsblandingen og tilbakeløpskoking fortsatt ved 50°C inntil omdannelsen var fullstendig ifølge hplc ms (15 timer totalt). Reaksjonsblandingen ble nøytralisert ved tilsetting av konsentrert saltsyre og etanolen fjernet i vakuum. Resten ble renset ved reversfase-kromatografi på Symmetry C8, ved eluering med en gradienet av 25% til 95% acetonitril i 0,1M vanndig ammoniumacetat i løpet av 10 minutter. Produktet ble frysetørket fra metanol/vann/acetonitril for oppnåelse av undertittelforbindelsen i et utbytte på 33% som et hvitt lyofylat (0,046g).

MS (APCI) 413 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,39 (1H, bs), 7,47 (1H, m), 7,36 (1H, m), 7,35 (1H, d), 7,06 (1H, d), 4,72 (1H, t), 4,32-4,21 (3H, m), 3,82 (3H, s), 3,49-3,30 (2H, m), 1,11 (3H, d).

EKSEMPEL 17

5-[[3-kIor-2-fluorfenyl)metyIJtio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-2(3H)-on

a) 3-klor-2-fluorbenzenmetantiol

Undertittelforbindelsen ble fremstilt som en fargeløs olje i et utbytte på 65% (2,5lg)

ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 16 trinn a) fra 3-klor-2-fluorbenzyl bromid (5,0g, 0,022 mol).

NMR8H (CDCL3) 7,32-7,21 (2H, m), 7,04 (1H, 5), 3,75 (2H, d), 1,90 (1H, t).

b) 5-[[3-kIor-2-lfuorfenyl)meryl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl] amino] tiazolo [4,5-dJ pyrimidin-2(3H)-on

Tittelforbindelsen ble fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 16 trinn b) fra 3-klor-2-fluorbenzenmetantiol, fremstilt i eksempel 17 trinn a), og produktet i eksempel 15 trinn e).

Produktet ble oppnådd et utbytte på 12% som et hvitt lyofylat (0,038g).

smp 234-5°

MS (APCI) 401 M+H<+>, 100%)

NMR8H (d6-DMSO) 12,4 (1H, bs), 7,55 (1H, m), 7,48 (1H, t), 7,26 (1H, d), 7,17 (1H, t), 4,72 (1H, bs), 4,38 (2H, m), 4,19 (1H, m), 3,3 (2H, m), 1,08 (3H, d).

EKSEMPEL 18

5-[[2,3-difluorfenyl)metyi]tio]-7-[[(3R,4F)-4-hydroksypyrrolidin-3-yl]amino]-tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 3-[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyi]tio]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-7-yl]amino]4-hydroksy-(3R,4R)-l-pyrrolidinkarboksyIsyre, 1,1-dimetyletyl ester

(3R, 4R)-3-amino-4-hydroksy-l-pyrrolidinkarboksylsyre, 1,1-dimetyletyl ester (0,73g), diisopropyletylamin (1,0 ml) og produktet i eksempel 4 trinn b), ble omrørt i NMP (lOml) ved 100°C 128 timer. Den avkjølte blandingen ble helt på vann og det faste stoffet oppsamlet, vasket med vann og lufttørket. Råmeterialet ble renset (SiOi, etyl acetat som elueringsmiddel) hvilket ga undertittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff (0,58g).

smp. 182-5°

MS (APCI) 511 (M+H<x>, 100%).

b) 3-[[2-brom-5-[[2,3-difIuorfenyl)metyl]tio]tiazoIo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-4-hydroksy-(3R, 4R)-l-pyrrolitlinkarboksylsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 18 trinn a).

MS (APCI) 572 (M-P<T>), 100%)

c) 3-[5-[[(2,3-difluorfenyl)metylltio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-4-hydroksy-(3R, 4R)-l-pyrrolidinkarboksylsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 18 trinn b).

MS (APCI) 526 (M+H<+>, 100%)

d) 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(3R,4R)-4-hydroksypyrrolidin-3-yl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved baik av produktet i eksempel 18 trinn c).

smp. 270°C (dekomp.)

MS (APCI) 412 (M+H<+>, 100%).

NMR 8H (d6-DMSO) 7,32 (2H, m), 7,14 (1H, m), 6,46 (1H, d), 5,57 (1H, s), 4,39 (2H, s), 4,30 (2H, m), 3,39 (2H, m), 3,12 (1H, dd), 2,98 (1H, d).

EKSEMPEL 19

5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(3R)-pyrrolidin-3-ylamino]tiazolo[4,5-d] pyrimidin-2(3H)-on dihydroklorid

a) 3-[[2-amino-5-[[2,3-difluorfenyl)metyI]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(3R)-l-pyrrolidinkarboksylsyre,l,ldimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 18 trinn a) ved bruk av (R)-3-amino-1-pyrrohdinkarboksylsyre, 1,1-dimetyletyl ester og produktet i eksempel 4 trinn b).

MS (APCI) 495 (M+H<+>, 100%)

b) 3-[[2-brom-5-[[(2-3-difluorfenyl)metyl]tio|tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(3R)-l-pyrrolidincarboksylsyre, 1,1-dimetyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 19 trinn a).

MS (APCI) 559 (M+H<+>, 100%).

c) 3-[[5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(3R)-l-pyrrolidinkarboksylsyre, 1,1-dimetyletyl ester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempl 1 trinn f), ved baik av produktet i eksempel 19 trinn b).

MS (APCI) 510 (M+H<+>, 100%)

d) 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(3R)-pyrrolidin-3-ylamino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, dihydroklorid

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g) ved bruk av produktet i eksempel 19 trinn c), deretter omdannet til salt.

smp 178-181°C

MS (APCI) 396 (M+H<+>, 100%).

NMR5H (d6-DMSO) 12,75 (1H, s), 9,19 (2H, bd), 7,91 (1H, d), 7,37 (2H, m), 7,17 (1H, m), 4,66 (1H, m), 4,43 (2H, dd), 3,10-3,50 (4H, m), 2,17 (1H, m), 1,96 (1H, m).

EKSEMPEL 20

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-f[(2-metyl-4-tiazoIyl)meryl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 6-amino-2-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio]-4(3H)-pyrimidinon 4-amino-6-hydroksy-2-merkaptopyrimidin hydrat (16,lg) og pulverformig natrium

hydroksyd (8,0g) ble omrørt i tørr DMF (00 ml) i 20 min. 4-klormetyl-2-metyltioazol hydroklorid monohydrat (20g) ble tilsatt porsjonsvis og den resulterende suspensjon omrørt i 18 timer. Blandingen ble helt på vann og det faste stoffet oppsamlet, vasket med vann og tørket og dette ga undertittelforbindelsen (24,3g).

MS (APCI) 255 (M+H", 100%).

b) 2-amino-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)meryl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7(6H)-on Produktet fra eksempel 20 trinn a) (24,3g) og kalium tiocyanat (37,lg) ble omrørt i tørr

DMF (400 ml) med pyridin (13,1 ml) ved 0°C. Brom (4,5 ml) ble tilsatt i løpet av 1 time. Etter omrøring i 2 timer ble blandingen helt i vann. Den resulterende oppløsning ble konsentrert til lavt volum og deretter ble vann tilsatt. Det resulterende faste stoffet ble oppsamlet, opptatt i 2M saltsyre og utfelt ved tilsetning av et natrium dikarbonat oppløsning. Det faste stoffet ble oppsamlet og vasket med vann og tørket og dette ga undertittelforbindelsen, (8,7g).

MS (APCI) 312 (M+H<+>, 100%).

c) 7-klor-5-[[(2-met>1-4-tiazolyl]metyl|tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2-amin Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn c), ved bruk av produktet i eksempel

20 trinn b), (4,3g).

MS (APCI) 330/332 (M+H", 100%)

d) (2R)-2-[[2-amino-5-[[(2-metyl-4-tiazoIyI)met>i]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 18 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 20 trinn c).

smp 220-2°C

MS (APCI) 369 (M+H<+>, 100%)

e) (2R)-2-[[2-brom-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 20 trinn d).

MS (APCI) 433 (M+P<T>, 100%)

f) (2R)-2-[[2-metyoksy-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 20 trinn e).

MS (APCI) 384 (M+H", 100%)

g) 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)meryl] tio] tiazolo [4,5-d] pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 20 trinn f),

smp. 208-9°C

MS (PACI) 370 (M+H<+>, 100%)

NMR8H (de-DMSO) 12,37 (1H, s), 7,35 (1H, s), 7,32 (1H, d), 4,73 (1H, t), 4,36 (2H, s), 4,21 (1H, m), 3,38 (2H, m), 2,62 (3H, s), 1,10 (3H, d).

EKSEMPEL 21

7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymer}l)et)i]amino[-5-[[2-met>i-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyriniidin-2(3H)-on

a) 2-f[2-amino-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)mctyl]tio]tiazolo|4,5-dJpyrimidin-7-yl]amino]-l,3-propandiol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 18 trinn a), ved baik av produktet i eksempel 20 trinn c) og 2-amino-l,3-propandiol

Smp. 158-160°C

MS (APCI) 385 (M+H<+>, 100%)

b) 2-[[2-brom-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l,3-propandiol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 21 trinn a).

MS (APCI) 448 (M+H<+>, 100%)

c) 2-[[2-metoksy-5-[[(2-met}i-4-tiazoIyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-7-yl]amino]-l,3-propandiol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 21 trinn b).

MS (APCI) 400 (M+H<+>, 100%)

d) 7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazolyI)metyI]tio]tiazolo[4,5-djpyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 21 trinn c).

smp. 239-243°C

MS (APCI) 386 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,37 (1H, s), 7,38 (1H, s), 7,24 (1H, d), 4,67 (2H, t), 4,36 (2H, s), 4,20 (1H, m), 3,50 (4H, m), 2,62 (3H, s).

EKSEMPEL 22

7-[(hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]-5-[[(mety'l-4-tiazolyl)metylltio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino5-[[(metyl-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-2-metyl-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 18 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 20 trinn c) og 2-amino-2-metylpropanol

smp. 250-252°C

MS (APCI) 383 (M+H<+>, 100%)

b) 2-[[2-brom-5-[[(2-metyl-4-tiazoIyl)met}i]tiojtiazolo[4,5-dlpyrimidin-7-yllamino]-2-metyl-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 22 trinn a).

MS (APCI) 446 (M+H<+>, 100%)

c) 2-[[2-metoksy-5-[[(2-metyI-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-2-metyl-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 22 trinn b).

MS (APCI) 398 (M+H<+>, 100%)

d) 7-[(2-hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempl 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 22 trinn c).

smp. 231-2°C

MS (APCI) 384 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,36 (1H, s), 7,37 (1H, s), 6,61 (1H, bs), 4,80 (1H, t), 4,37 (2H, s), 3,55 (2H, d), 2,62 (3H, s), 1,31 (6H, s).

EKSEMPEL 23

7-[(2-hydroksy-l,l-dimeryleryl)amino]- 5-[[(2-metylfenyl)metyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2-(3H)-on

a) 7-[(2-hydroksy-l-l,dimetyletyl)aminoj-5-[(fenylnietyl)sulfonyl]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

En omrørt oppløsning av produktet fra eksempel 1 trinn g) (0,14g) i isedikk (30 ml) ble behandlet med peredikksyre (36/40% i edikksyre, 2 ml) omrørt i 2 timer, deretter ved 50°C i 1 time. Reaksjonen i oppløsningen ble stoppet med et overskudd av dimetyl sulfoksyd og deretter ble det foretatt inndampning og dette ga en gummi.

MS (APCI) 395 (M+H<+>, 100%)

b) 7-[(2-hydroksy-l,l-dimerylet\'l)amino]-5-[[(2-mer>'lfenyl)met>l)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Produktet fra eksempel 22 trinn a) ble opptatt i DMSO (1,73 ml), behandlet med kalium '"butoksyd og delt i 3 porsjoner. En porsjon ble behandlet med 2-metylfenylmetyl merkaptan (0,053 g), omrørt ved 50°C i 1 time og deretter i 2 timer, nøytralisert med isedikk og utsatt for preparativ reversfase HPLC på en 19 x 50 mm C8-symmetrikolonne ved bruk av 10 til 60% acetonitril i 0,1% vanndig ammoniumacetat i løpet av 6 min ved 20 ml/min og dette ga tittelforbindelsen.

MS (APCI) 377 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 1,33 (s, 6H); 2,35 (s, 3H); 3,57 (d, 2H); 4,33 (s,2H); 4,82 (t, 1H); 6,47 (bred s, 1H); 7,12-7,20 (mult., 3H); 7,41 (d, 1H); 12,37 (bred s, 1H).

EKSEMPEL 24

5-[(2-furanylmetyl)tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-mctylet>i|amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyleryl]amino]-5-[fenylmet)i)sulfonyl]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3)-on

Undertittelforbindelsen ble fremstilt fra produktet i eksempel 3 trinn d), ved bruk av fremgangsmåten i eksempel 23, trinn a).

MS (ES) 381 (M+H+, 100%)

b) 5-[(2-furanylmetyl)tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyler>'l]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra produktet i eksempel 24 trinn a), ved bruk av fremgangsmåten i eksempel 23 trinn b), ved bruk av furfuryl merkaptan MS (APCI) 339 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d4-metanol) 1,12 (d, 3H); 3,41-3,45 (mult., 1H); 3,49-3,53 (mult., 1H); 4,24-4,32 (mult, 3H); 6,18-6,22 (mult., 2H); 7,29 (bred s, 1H).

EKSEMPEL 25

7-f[(lR)-2-amino-l-merylet>llamino]-5-[[(3-klor-2-fluorfenyl|metyl|tio]tiazolo[4,5-djpj rimidin-2(3H)-on

a) [(lR)-2-amino-l-metyI-2-oksoetyljkarbaminsyre, 9H-fluoren-9-ylmet>lester En oppløsning av D-alaninamid hydroklorid (3 g) i 10% natrium karbonatoppløsning

(50 ml) og dioksan (50 ml) ble behandlet med FMOC-klorid (6,24 g) i dioksan (40 ml)

og fikk omrøres natten over. Blandingen ble fortynnet med vann (500 ml) og produktet oppsamlet ved filtrering og tørket i vakuum og dette ga 9,0 g av undertittelforbindelsen. MS (ESK) BP 311 (+H) b) [(lR)-2-amino-l-metyletyl]karbaminsyre, 9H-fluoren-9-ylmetylester Til en oppløsning av produktet fra eksempel 25 trinn a) (6,9 g) i THF (100 ml) ble det

tilsatt boran-metylsulfid-komleks (4,4 ml) og blandingen oppvarmet under tilbakeløp i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble forsiktig stoppet ved tilsetning av metanol (100 ml), inndampet til tørrhet og resten opptatt i metanol (100 ml) og surgjørt til pH 1-2 med konsentrert saltsyre. Blandingen ble deretter oppvarmet under tilbakeløp i 30 min hvoretter den ble inndampet i tørrhet. Resten ble triturert med eter og dette ga et fast stoff som ble oppsamlet ved filtrering, oppløst i vann og den fri basen utfelt ved tilsetning av vanndig natrium bikarbonat oppløsning hvilket ga undertittelforbindelsen (3,1).

MS (ESI) BP 297 (+H)

c) (2R)-[2-(9H-fluoren-9-ylmetoksykarbonylamino)-propyl]karbaminsyre, 1,1-dimetyletylester

Til en omrørt oppløsning av produktet fra eksempel 25 trinn b) (3,0 g) i THF (100 ml) ble det tilsatt ditert-butyldikarbonat (2,2 g) og blandingen omrørt ved romtemperatur i 30 min. Blandingen ble inndampet i tørrhet og råproduktet renset (S1O2, diklormetan som elueringsmiddel) hvilket ga undertittelforbindelsen (3,8 g).

NMR 8H (CDCL3) 7,76 (2H, m), 7,42 (2H, m), 7,39-26 (4H, s), 5,01 (1H, s), 4,85 (1H, s), 4,38 (2H, d), 4,19 (1H, t), 3,77 (1H, m), 3,18 (2H, m), 1,27 (9H, s). d) [(2R)-2-aminopropylJkarbaminsyre, 1,1-dimetyletylester Til en oppløsning av produktet fra eksempel 25 trinn c) (3,8 g) i THF (100 ml) ble det tilsatt piperidin (5 ml) og blandingen hensatt i 1 time ved romtemperatur. Blandingen ble inndampet i tørrhet og resten renset (SiC>2, 5% metanol:diklormetan som elueringsmiddel) og dette ga undertittelforbindelsen som en fargeløs olje (1,7 g). NRM 8H (CDCL3) 4,95 (1H, s), 3,13 (1H, m), 2,99 (1H, m), 2,87 (IH, m), 1,38 (9H, s), 1,08 (3H, d).

e) [(2R)-2-[[2-amino-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminolpropyl]karbaminsyre, 1,1-dimetyletylester

Produktet fra eksempel 1 trinn c) (2,0 g) og produktet fra eksempel 25 trinn d) (1,3 g) i et opplsningsmiddel av NMP (10 ml) inneholdende Hunigs base (3 ml) ble oppvarmet ved 100°C i 10 timer. Blandingen ble inndampet i tørrhet og renset (SiCh, (1:1) diklormetametyl acetat som elueringsmiddel) hvilket ga undertittelforbindelsen (1,9 g). MS (ESI) BP 447 (+H)

f) [(2R)-2-[[2-amino-5-[(fenylmetyl)sulfonyl]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]propyl]karbaminsyre, 1,1-dimetylester

Til en oppløsning avOXONE (7,0 g) i vann (400 ml) ble det tilsatt natrium hydrogen karbonat inntil pH-verdien var justert til 7,4. Til denne oppløsningen ble det tilsatt en oppløsning av produktet fra eksempel 25 trinn e) (1,9 g) i acetonitril (100 ml) og blandingen oppvarmet ved 40°C i 2 timer. Ved fullføring av reaksjonen ble acetonitnlen fjernet ved rotasjonsfordampning og dette ga undertittelforbindelsen (1,7

g) .

MS (ESI) BP 479 (+H)

g) 3-klor-2-fluor-bensenmetanetiol

En blanding av 3-klor-2-fluorbenzylbromid (5,0 g), tiourea (3,4 g) i et

oppløsningsmiddel av etanol (200 ml) ble oppvarmet under tilbakeløp i 16 timer. Blandingen ble inndampet i tørrhet og resten ble tilsatt til en oppløsning av natrium hydroksyd (30 g) i vann (300 ml) og blandingen oppvarmet under tilbakeløp i 1 time. Deretter fikk blandingen avkjøles til romtemperatur og ble surgjort med konsentrert saltsyre, produktet ble ekstrahert i eter og dette ga undertittelforbindelsen som en oje (2,51 g).

NNR 5H (CDCL3) 7,32-21 (2H, m), 7,04 (1H, t), 3,75 (2H, d), 1,90 (1H, t)

h) [(2R)-2-[[2-amino-5-[[(3-klor-2-fluorfenyl)metylltio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl] amino] propyl]karbaminsyre, 1,1-dimetyletylester

Til en blanding av produktet fra eksempel 25 trinn f) (1,2 g), produktet fra eksempel 25 trinn g) (1,6 g) i et blandet oppløsningsmiddel av etanol (30 ml) og DMSO (5 ml), ble det tilsatt natrium borhydrid (100 mg) og blandingen ble oppvarmet ved 50°C i 2 timer. Etanolet ble fjernet ved rotasjonsfordampning og råproduktet ekstrahert i etylacetat og vasket med vann. Undertittelforbindelse ble oppnådd ved rensing (SiOi,

1:1 )diklormetan:etylacetat som elueringsmiddel) og dette ga undertittelforbindelsen (1,95 g).

MS (ESI) BP 499-(+H)

i) [(2R)-2-f[2-brom-5-[[(3-klor-2-fluorfenyl)met}'l]tio]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-7-yl]amino]propyl]karbaminsyre, 1,1-dimetyletylester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel l trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 25 trinn h).

MS (APCI) 562 (M+H<+>, 100%)

j) [(2r)-2-[[5-[[(3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyriniidin-7-yl] amino] propyljkabaminsy re, 1,1-dimetyletylester

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 25 trinn i).

MS (APCI) 514 (M+H<+>, 100%)

k) 7-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5-[[(3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2-(3H)-on

Fremstilt ved fremgangmsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 25 trinn j).

smp. 241-3°C

MS (APCI) 400 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6DMSO) 7,56 (1H, m), 7,49 (1H, m), 7,17 (1H, m), 7,05 (1H, bs), 4,44 (1H, m), 4,39 (2H, ab), 2,92 (2H, d), 1,13 (3H, d).

EKSEMPEL 26

(2S)-2-[[5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2,3-dihydro-2-oksotiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-3-hydroksy-propanamid

a) (2S)-2-[[2-amino-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-3-hydroksy-propanamid

Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge eksempel 2 trin a) ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) (2 g, 6 mmol), 1-serinamid (0,66 g, 6 mmol), NMP (80 ml), og diisopropyletylamin (2 ml) hvilket ga undertittelforbindelsen (1,36 g).

smp. 145-151°C

MS (APCI) 413 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 8,10 (2H, brs), 7,40-7,07 (6H, m), 4,57 (1H, q), 4,36 (1H, d), 3,71 (2H, d).

b) (2S)-2--[[5-|[(2,3-difluorfenyl)metyl]tiol2,3-dihydro-2-oksotiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl|amino]-3-hydroksy-propanamid

Fremstilt ved konsekutiv bruk av fremgangsmåtene i eksempel 1 trinne e), f), og g) bed bruk av produktet i eksempel 26 trinn a). Forbindelsene dannet under de separate trinnene ble ikke renset eller karakterisert.

MS (APCI) 414 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,47 (1H, bf), 7,47 (1H, bf), 7,42 (1H, s), 7,34 (2H, m), 7,13 (1H, m), 7,09 (1H, s), 4,90 (1H, t), 4,58 (1H, m), 4,39 (2H, m), 3,70 (2H, m).

EKSEMPEL 27

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-meryletyljamino]-5-[(2-tienylmeryl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimklin-2(3H)-on

a) 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metylet>i]amino]-5-[(2-tienylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Tittelforbindelsen ble fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 16 trinn b) fra produktet i eksempel 15 trinn e) (0,300 g, 0,79 mmol) og 2-tiofenmetantiol (0,32 ml, 3,9 mmol).

Produktet ble oppnådd i et lavt utbytte på 3% som et hvitt lyofylat (0,010 g).

MS (APCI) 355 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,50 (1H, bs), 7,36 (lH,m), 7,16 (1H, bs), 7,07 (1H, m), 6,92 (1H, m), 4,72 (1H, bs), 4,55 (2H, d), 4,26 (1H, m), 3,44 (2H, m), 1,12 (3H, d).

EKSEMPEL 28

7-l[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5[[[3-metyl-4-(metylsulfonyl)fenyl]metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 3-metyl-4-(metyltio)benzaldehyd

Tinn (IV) klorid (13,6 ml, 0,116 mol) ble tilsatt til en isbadavkjølt oppløsning av 1-metyl-2-(metyltio)benzen (10 g, 0,073 mol) i vannfri diklormetan (200 ml) under nitrogen og ble omrørt i ytterligere 2 timer ved 0°C. a, a-diklormetylmetyleter (6,56 ml, 0,073 mol) ble introdusert og reaksjonsblandingen omrørt i 1 time ved <10°C før avkjølingen ble fjernet. Etter oppnåelse av romtemperatur ble reaksjonsblandingen helt i is/vann (400 ml), omrørt og deretter ekstrahert med diklormetan (x3). De kombinerte organiske lagene ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert, konsentrert på silicagel og renset ved flashkromatografi, ved eluering med dietyl eter/isoheksan (10:1) og dette ga undertittelforbindelsen som en brun olje (6,54 g) i 54% utbytte.

GCMS 166 (M<+>, 100%)

NMR 5H (CDCI3) 9,91 (1H, s), 7,68 (1H, m), 7,62 (1H, s), 7,24 (1H, t), 2,54 (3H, s), 2,36 (3H, s).

b) 3-metyl-4-(metyltio)benzentemanol

Natrium borhydrid (1,40 g, 0,037 mol) ble tilsatt til en isbadavkjølt oppløsning av

produktet i eksempel 28 trinn a) (6,16 g, 0,037 mol) i etanol (50 ml). Etter 1 time ble reaksjonsblandingen nøytralisert ved forsiktig tilsetning av vanndig saltsyre (2 molar) og konsentrert i vakuum for å fjerne det organiske oppløsningsmiddelet. Den gjenværende vanndige oppløsningen ble deretter ekstrahert med etylacetat (x3). De kombinerte organiske lagene ble tørket over vannfntt magneisum sulfat, filtrert og konsentrert i vakuum og dette ga undertittelforbindelsen som en brun olje (6 g) i kvanititativt utbytte.

GCMS 168 (M<+>, 100%)

NMR SH (DCDI3) 7,18 (3H, m), 4,62 (2H, bs), 2,46 (3H, s), 2,33 (3H, s).

c) 3-metyl-4-(metyIsulfonyl)benzenmetanol

3-klorperoksybenzosyre (57-86% kvalitet, 20,4 g) ble omrørt i diklormetan (150 ml),

tørket over vannfritt magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble tilsatt dråpevis i løpet av 1 time til en isbadavkjølt, omrørt oppløsning av produktet fra eksempel 28 trinn

b) (5,67 g, 0,034 mol) i diklormetan (50 ml). Reaksjonsblandingen ble filtrert, filtratet vasket med vanndig natrium hydrogen karbonatoppløsning fulgt av vanndig natrium

ditionitt oppløsning (10g Na204S2 i 150 ml vann). Det organiske laget ble tørket over vannfritt magnesium sulfat, filtrert og konsentrert i vakuum før rensing ved flash kromatografi, ved eluering med diklormetan/metanol (100:2). Undertittelforbindelsen ble oppnådd som en gul olje (5,52 g) i et utbytte på 82%.

MS (APCI) 201,1 (M+H+, 94,3%)

NMR 8H (CDCL3) 7,87 (1H, d), 7,38 (2H, m), 5,40 (1H, q), 4,56 (2H, d), 3,18 (3H, s), 2,61 (3H, s).

b) 2-meryl4-(metylfulfonyl)benzenmetantiolacetat

Dietyl asodikarboksylat (4,33 ml, 0,028 mol) ble tilsatt til en isbadavkjølt oppløsning av

trifenylfosfin (7,20 g, 0,028 mol) i tetrahydrofuran (40 ml). Til den resulterende suspensjonen ble det tilsatt en oppløsning av produktet fra eksempel 28 trinn c) (5,5 g, 0,028 mol) oppløst 1 tetrahydrofuran (20 ml). Etter at bunnfallet var oppløst ble tioledikksyre tilsatt tilreaksjonsoppløsningen og avkjølingen ble fjernet. Etter 16 timer ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen konsentrert på silica gel og renset ved flash

kromatografi ved eluering med ispheksan/etylacetat (2:1). Undertittelforbindelsen ble oppnådd som et rosafarget fast stoff (2,46 g) i et utbytte på 35%.

NMR 8H (d6-DMSO) 7,84 (1H, d), 7,36 (sH, m), 4,16 (2H, s), 3,19 (3H, s), 2,61 (3H, s), 2,37 (3H, s).

e) bisf[3-meryl-4-(metylsulfonyl)fenyl]metylJdisulfid

En blanding av produktet i eksempel 28 trinn d) (1,98 g, 7,66 mmol) og 7 molar

metanolisk/ammoniakk (30 ml) ble omrørt i 24 timer. Produktet skjilte seg ut av oppløsningen som et hvitt fast fast stoff og ble isolert ved filtrering og tørket i vakuum. Filtratet ble likeledes behandlet med 7 molar ammoniakk imetanol og ga et annet utbytte av fast stoff, hvitt produkt. Totalt ble undertittelforbindelsen oppnådd i et utbytte på 32% (0,534 g).

MS (APCI) 451 (M+HH/, 98,9%)

NMR 5H (d6-DMSO) 7,88 (2H, s), 7,38-7,34 (4H, m), 3,88 (4H, s), 3,20 (6H, s), 2,64 (6H, s).

f) 7.[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[[[3-metyl-4-(metylsulfonyl)fenyl] metyl] tio]tiazolo[4,5-d] py rimidin-2(3H)-on

Tittelforbindelsen ble fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 16 trinn b) ved bruk av produktet i eksempel 15 trinn e) (0,20 g, 0,53 mmol) og produktet fra eksempel 28 trinn e) (0,34 g, 0,79 mmol) og dette ga 11% product som et hvitt lyofylat (0,025 g).

MS (APCI) 441 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (de-DMSO) 12,40 (1H, s), 7,81 (1H, d), 7,52 (2H, m), 7,33 (1H, d), 4,74 (1H, t), 4,35 (2H, s), 4,19 (1H, m), 3,41 (1H, m), 3,34-3,28 (1H, m), 3,18 (3H, s), 2,61 (3H, s), 1,08 (3H,d).

EKSEMPEL 29

5-[[[3-klor-4-(trifluormetoksy)fenyllmeryl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-2(3H)-on

a) 3-klor-4-trifluormetoksy)benzenmetanetiol

Til en oppløsning av 3-klor-4-(trifluonnetoksy)benzylbromid (5 g) i etanol (100 ml) ble

det tilsatt tiourea (5 g) og blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 2 timer. Blandingen ble inndampet i tørrhet og restet opptatt i vann (100 ml). Til denne oppløsningen ble det tilsatt natriumhydroksyd pellets (3 g) og blandingen oppvarmet

under tilbakeløp i 1 time. Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble surgjort med konsentrert saltsyre, blandingen ble ekstrahert med eter, tørket og inndampet og dette ga undertittelforbindelsen som et fargeløst voksaktig fast stoff (3,5 g).

NMR dH (CDCL3) 7,35-7,09 (3H, m), 3,58 (2H, s).

b) 5-[[[3-klor-4-trifluormetoksy)fenyl]metyl]tio]-7-[[ 1 R)-2-hydroksy-1-metyletyl] amino] tiazolo [4,5-d] py rimidin-2(3H)-on

Tittelforbindelsen ble fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 16 trinn b) ved bruk av produktet fra eksempel 15 trinn e) (0,40 g, 1,05 mmol) og produktet fra eksempel 29 trinn a) (0,71 g, 1,5 mmol) og dette ga 10% product som et hvitt lyofylat (0,046).

MS (APCI) 467 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,42 (1H, s), 7,75 (1H, m), 7,52 (2H, m), 7,43 (1H, d), 4,72 (1H, t), 4,34 (2H, d), 4,18 (1H, vkintett), 3,46-3,27 (2H, m), 1,07 (3H, d).

EKSEMPEL 30

5-[[[2-lfuor-3-(trifluormetyl)fenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl] amino] tiazolo [4,5-d] pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-fluor-3-(trifluormetyl)benzenmetantiol

Undertittelforbindelsen ble fremstilt fra 2-fluor-(3-trifluonnetyl)benzylbromid (10 g)

ved baik av fremgangsmåten i eksempel 29 trinn a).

NMR 5H (CDCL3) 7,68-7,18 (3H, m), 3,74 (2H, s), 1,98 (1H, s).

b) 5-[[[2-fluor-3-(trifluormetyl)fenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-meryletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrirnidin-2(3H)-on

Tittelforbindelsen ble fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 16 trinn b) og bruk av produktet i eksempel 15 trinn e) (0,47 g, 1,23 mmol) og produktet i eksempel 30 trinn a) (0,775 g, 3,7 mmol) og dette ga 5% product som et hvitt lyofylat (0,025 g).

MS (APCI) 435 (M+H<+>, 100%)

NMR SH (d6-DMSO) 12,42 (1H, s), 7,92 (1H, t), 7,68 (1H, t), 7,35 (2H, m), 4,71 (1H, bs), 4,42 (2H, m), 4,16 (1H, kvintett), 3,40-3,30 (2H, m), 1,07 (3H, d).

EKSEMPEL 31

5-[[(23-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[2-[(dimetylamino)eryl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on monohydroklorid

a) 2-brom-7-klor-5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin Produktet i eksempel 4 trinn b) (8,0 g) ble suspendert i bromoform (200 ml) fulgt av

tilsetning av tert-butylnitrit (8 ml) og det hele ble oppvarmet ved 60 °C i 30 minutter. Oppløsningsmiddelet ble fjernet ved redusert trykk og resten renset ved kolonnekromatografi (silica - 1:1 diklormetan/isoheksan) hvilket ga et gult fast stoff (5,6 g).

MS (APCI) 409/411 (M+H, 100%)

b) 7-klor-5-[(2,3-difluorfenylmeryl)tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin Produktet i eksempel 31 trinn a) (5,6 g) ble suspendert i methanol (150 ml) og kalium

hydroksydpulver (0,77 g) tilsatt. Det hele ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Blandingen ble justert til pH 7 med noen dråper konsentrert saltsyre før den ble inndampet til tørrhet. Rensing ved kolonnekromatografi (silica - 3:2 til 1:1 isoheksan/diklormetan) ga hvitt fast stoff (2,0 g).

MS (APCI) 360/362 (M+H, 100%)

c) 7-klor-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on Produktet fra eksempel 31 trinn b) (2,0 g) ble oppløst i dioksan (150 ml) fulgt av

tilsetting av konsentrert saltsyre (1 ml) og vann (1 ml) og det hele oppvarmet ved 40°C i 67 timer. Blandingen ble inndampet i tørrhet og renset ved kolonnekromatografi (silica

- diklormetan) og dette ga et hvitt fast stoff (1,4 g).

MS (APCI) 346/348 (M+H, 100%).

d) 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyI]tio]-7-f2-(dimetylaniino)etyllamino|tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on monohydroklorid

Produktet fra eksempel 31 trinn c) (1,4 g) ble oppløst i tørr tetrohydrofuran (5 ml) og til oppløsningen ble det tilsatt N,N-dimetyletylendiamin (0.25 g) i en "finger bombe" som ble oppvarmet ved 80°C i 24 timer. Oppløsningsmidlene ble fjernet ved redusert trykk og resten skilt mellom etylacetat og saltoppløsning. De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket (natrium sulfat) og inndampet ved redusert trykk for at den resulterende resten skulle bh renset ved kolonne kromatografi (silica - 5:1 etyl acetat/metanol) til oppnåelse av den frie basen som en klebrig fast stoff (0,095 g). Dette ble omdannet til monohydrokloridet ved suspendering av det faste stoffet i metanol (10 ml) fulgt av tilsetting av konsentrert saltsyre (3 dråper) for å sikre oppløsning, deretter vann (100 ml) for forbindelsen som skulle frysetørket hvilket resulterte i et brunt pulver (0,080 g).

smp. 263°C (dekomp.)

MS (APCI) 398 (M+H, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,57 (1H, s), 10,22 (1H, s), 7,94 (1H, t), 7,40 (1H, m), 7,34 (1H, m), 7,16 (1H, m), 4,43 (2H, s), 3,78 (2H, s), 3,21 (2H, m), 2,78 (6H, d)

EKSEMPEL 32

5-[[(2-fiuorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidn-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yI]aminol-(2R)-l-propanol

Produktet i eksempel 1 trinn c) (25,0 g), D-alaninol (12,3 g) og diisopropyletylamin (26,0 g) ble fortynnet i N-metylpyrrolidinon (250 ml) og omrørt ved 100°C i 24 timer før avkjøling og helling av reaksjonsblandingen i H20 (2,5 1). Utfellingen ble filtrert og tørket i vakuum før den ble preabsorbert på silica gel. Kromatografi ved bruk av EtOAc, 4%o MeOH/EtOAc som elueringsmidler ga det ønskede produktet som et gult fast stoff (9,0 g, 32%).

MS (APCI) 347 (M+H, 100%)

b) 2-[(2-amino-5-merkaptotiazolo[4,5-d|pyrimidin-7-yl)amino]-(2R)-l-propanol Natrium metal ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av produktet i eksempel 32 trinn a)

(5,0 g) i ammoniakk (150 ml) inntil en blå farging vedvarte. Ammonium klorid ble deretter tilsatt og oppløsningsmiddelet fikk fordampe. Resten ble oppløst i H20 (200 ml) og filtrert før nøytralisering med 2M HC1 oppløsning. Den gråfargede utfellingen ble filtrert, vasket med H20 (200 ml) og tørket i vakuum i 48 timer hvilket ga undertittelforbindelsen som et brunt fast stoff (3,0 g).

MS (APCI) 258 (M+H, 100%)

c) 2-[f2-amino-5-[[(2-fluorfenyllmetyl]tio]tiazolo[4,5-djpyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

2-fluorbenzylbromid (0,369 g) ble tilsatt porsjonsvis til en oppløsning av produktet i 3 eksempel 32 trinn b) (0,5 g) og diisopropyletylamin (0,26 g) i DMSO/N-

metylpyrrolidinon (4ml/0,5 ml) ved 50°C og omrøring opprettholdt i 1 time. Blandingen ble skilt mellom H20 (200 ml) og EtOAc (120 ml). De organiske materialene ble utvunnet og vasket ytterligere med H20 (200 ml), tørket over MgSCu og konsentrert på silica gel. Undertittelforbindelsen ble renset ved flash kromatografi og bruk av DCM, deretter EtOAc som elueringsmidler og dette ga et hvitt fast stoff (245 mg, 35%).

MS (APCI) 366 (M+H, 100%)

d) 2-[[brom-5-[[(2-fluorfenyllmetyl]tio|tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-1-propanol

Isoamil nitnt (0,3 ml) ble tilsatt til en suspensjon av produktet i eksempel 32 trinn c)

(0,23 g) i bromoform (15 ml) og acetonitril (15 ml) ved 50°C. Omrøring ble opprettholdt i 10 min før konsentrering ved ca. 3 ml. Resten ble renset ved kolonne kromatografi ved bruk av 20% EtOAc/DCM som elueringsmiddel hvilket ga undertittelforbindelsen som et gult fast stoff (102 mg, 38%).

MS (APCI) 429 (M+H, 100%)

e) 2—5-[ [(2-fluorfenylJ metyl] tio] -2-metoksy tiazolo [4,5-d] pyrimidin-7-yl] amino]-(2R)-l-propanol

Kalium hydroksyd (27 mg) ble tilsatt til en oppløsning av produktet i eksempel 32 trinn d) (0,1 g) i MeOH (10 ml). Blandingen ble omrørt i 24 timer før nøytralisering til pH 7 med 2M HC1 oppløsning. De flyktige stoffene ble fjernet i vakuum og produktet

benyttet direkte i det følgende trinnet.

MS (APCI) 381 (M+H, 100%)

f) -5-[[(2-fluorfenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyIetyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Produktet i eksempel 32 trinn e) ble oppløst i 1,4-dioksan (50 ml), H20 (1 ml) og konsentrert HCl-oppløsning (0,5 ml) og omrørt i 20 timer ved 40°C. De flyktige stoffene ble fjernet under redusert trykk og råproduktet renset ved prepartiv HPLC og dette ga undertittelforbindelsen som et hvitt fast stoff (21 mg).

MS(APCI) 367 (M+H, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,40 (1H, s), 8,14-7,11 (5H, m), 4,72 (1H, t). 4,35 (2H, m), 4,22 (1H, m), 3,47-3,29 (2H, m), 1,10 (3H, d)

EKSEMPEL 33

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyIetyl]amino]--5-[[(2-metoksyfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[(2-metoksyfenyl)met)i]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanoI

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn c), ved bruk av produktet i eksempel 32 trinn b).

MS (APCI) 378 (M+H<+>, 100%)

b) 2-[[2-brom-5-[[(2-metoksyfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino|-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved baik av produktet i eksempel 33 trinn a).

MS (APCI) 441 (M+H<+>, 100%).

c) 2-[[2-metoksy-5-[[(2-metoksyfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved baik av produktet i eksempel 33 trinn b).

MS (APCI) 393 (M+H", 100%)

d) 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]- 5-[[(2-metoksyfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 33 trinn c).

MS (APCI) 379 (M+H<+>, 100%)

NMR5H (d6-DMSO) 7,40 (1H, dd), 7,22 (1H, dt), 6.97 (1H, d), 6,84 (1H, dt), 6,00 (1H, d), 4,25 (2H, m), 4,15 (lH, m), 3,83 (3H, s), 3,48-3,31 (2H, m), 1,10 (3H, d).

EKSEMPEL 34

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyI]amino]- 5-[(2-fenoksyetyl)tio]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[(2-fenoksyetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn c) ved bruk av produktet i eksempel 32 trinn b).

MS (APCI) 378 (M+H<+>, 100%)

b) 2- [[2-brom-5-[(2-fenoksyetyl)tio]tiazolo[4,5-djpyrimidin-7-yljamino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved baik av produktet i eksempel 34 trinn a).

MS (APCI) 441 (M+H<+>, 100%).

c) 2-[[metoksy-5-[(2-fenoksyetyl)tio|tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanoll

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 34 trinn b).

MS (APCI) 393 (M+H<+>, 100%)

d) 7-[[(2R)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]5-[(2-fenoksyetyl)tio]tiazolo[4,5-d] pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 34 trinn c).

MS (APCI) 379 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,37 (1H, s), 7,30-7,26 (3H, m), 6,96-6,91 (3H, m), 4,71 (1H, 5), 4,23-4,14 (3H, m), 3,46-3,28 (4H, m), 1,08 (3H, d)

EKSEMPEL 35

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-met>letyl]amino]-5-[[(3-metylfenyl)metylltio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[(3-metvifenyl)metyl|tioltiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn c), ved baik av produktet i eksempel 32 trinn b).

MS (APCI) 362 (M+H<+>, 100%).

b) 2-[[2-brom-5-[[(3-mer>lfenyl)merylltio]tiazolo[4,5-djpyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved bruk av produktet i eksempel 35 trinn a).

MS (APCI) 425 (M+H<+>, 100%).

c) 2-[[2-metoksy-5-[[(3-metylfenyl)met>'l]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aniinol-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved baik av produktet i eksempel 35 trinn b).

MS (APCI) 377 (M+H<+>, 100%).

d) 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino|- 5-[[(3-metylfenyl)metyl|tio]tiazolo[4,5-dlpyrimidin-7-yl]amino|-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 35 trinn c).

MS (APCI) 363 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (dé-DMSO) 12,37 (1H, s), 7,23-7,16 (4H, m), 7,04 (1H, d), 4,73 (1H, t), 4,28 (2H, m), 4,24 (1H, m), 3,48-3,30 (2H, m), 2,28 (3H, s), 1,11 (3H, d).

EKSEMPEL 36

5-[[(2-fluor-3-metylfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[(2-fluor-3-metylfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn c), ved bruk av produktet i eksempel 32 trinn b)

MS (APCI) 380 (M+H<+>, 100%).

b) 2-[[2-brom-5-[[(2-fluor-3-metylfenyl)met>'l]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved bruk av produktet i eksempel 36 trinn a).

MS (APCI) 443 (M+H<*>, 100%)

c) 2-[[5-[[(2-fluor-3-met)ifenyl)metyl|tio]-2-metoksytiazolo|4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 36 trinn b).

MS (APCI) 395 (M+H<+>, 100%)

d) 5-[[(2-fluor-3-metylfenyl)metyl]tio]-7-[[(l R)-2-hydroksy-l-metyletyl] amino] tiazolo [4,5-d] py rimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved baik av produktet i eksempel 36 trinn c).

MS (APCI) 381 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,39 (1H, s), 7,37-7,00 (4H, m), 4,72 (1H, t), 4,33 (2H, m), 4,22 (1H, m), 3,47-3,30 (2H, m), 2,23 (3H, s), 1,11 (3H, d).

EKSEMPEL 37

5-[[(3-klorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-met>'letyllamino]tizolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[(3-klorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-(2R)-l-propanol

MS (APCI) 382 (M+H<+>, 100%)

b) 2-[[2-brom-5-[[(3-klorfenyl)metyl]tioltiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl|aminol-(2R)-1-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved bruk av produktet i eksempel 37 trinn a).

MS (APCI) 455 (M+H<+>, 100%)

c) 2-5-[[(3-klorfenyI)met)l]tio]2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yllamino]-(2R)-1-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved baik av produktet i eksempel 37 trinn b).

MS (APCI) 397 (M+Ff\ 100%)

d) 5-[[(3-klorfenyl)met>'l]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d] py rimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 37 trinn c).

MS (APCI) 383 (M+H<+>), 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,40 (1H, s), 7,49 (1H, d), 7,43-7,30 (4H, m), 4,72 (1H, t), 4,32 (2H, m), 4,21 (IH, m), 3,48-3,26 (2H, m), 1,09 (3H, d).

EKSEMPEL 38

5-[[3-bromfenyl)metyl]tioj-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[3-bromfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

MS (APCI) 426 (M+H\ 100%)

b) 2-[[2-brom-5-[[3-bromfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-ylJaminol-(2R)-1-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved baik av produktet i eksempel 38 trinn a).

MS (APCI) 491 (M+H<+>, 100%)

c) 2-5-[[3-bromfenyl)metyl]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 38 trinn b).

MS (APCI) 443 (M+P<T>, 100%)

d) 5-[[3-bromfenyl)met}'lltio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metjletyl]aminoltiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 38 trinn c)

MS (APCI) 427 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,40 (1H, s), 7,63 (1H, t), 7,46-7,24 (4H, m), 4,72 (IH, t), 4,31 (2H, m), 4,21 (1H, m), 3,48-3,26 (2H, m), 1,10 (3H, d)

EKSEMPEL 39

5-[[[4-(difluormetoksy)fenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyI]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[[4-(difluormetoksy)fenyl]metyljtio]tiazolof4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn d), ved bruk av produktet i eksempel 39 trinn a).

MS (APCI) 477 (M+H<+>, 100%)

c) 2-[[-5-[[[4-(difluormetoksy)fenylJmetyI]tio]-2-metoksytiazolo[4,5-d|pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn e), ved bruk av produktet i eksempel 39 trinn b).

MS (APCI) 429 (M+H<+>, 100%)

d) , -5-[[[4-(difluormetoksy)fenyllmeryl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyIeryl]amino]tiazoIo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 39 trinn c).

MS (APCI) 415 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,38 (IH, s), 7,48 (2H, dt),7,26 (IH, d), 7,19 (1H, t), 7,11 (2H, dd), 4,73 (IH, t),4,31 (2H, m),4,21 (IH, m), 3,47-3,30 (2H, m), 1,10 (3H, d)

EKSEMPEL 40

(+/-)5-[[(2,3-difluorfenyl)met>'l|tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymet>l)etyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) (+/-)-2-amino-3-metoksy-l-propanol hydroklorid

Til en suspensjon av DL-3-metoksy-alanin (1,0 g) i tørr THF (100 ml) ble det tilsatt

boran-metylsulfid-kompleks (10 ml) og blandingen oppvarmet under tilbakeløp i 16 timer. Reaksjonen ble deretter stoppet med metanol under tilbakeløpskoking, hvoretter

det ble foretatt inndamping til tørrhet og resten ble opptatt i metanolisk hydrogenklorid (100 ml) og oppvarmet under tilbakeløp i ytterligere 2 timer, inndampet til tørrhet og dette ga undertittelforbindelsen som en fargeløs gummi (1,0 g).

NMR 8H (D20) 3,40 (3H, s), 3,53-3,74 (4H, m), 3,81 (IH, m)

b) (+/-)-2-[[2-amino-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl|tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-3-metoksy-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 12 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 4 trinn b) og produktet i eksempel 40 trinn a).

MS (APCI) 414 (M+H<+>, 100%)

c) (+/-)-2-[[2-klor-5-[[(2,3-difluorfenyI)met>'l]tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-3-metoksy-l-propanol

Til en oppløsning av produktet fra eksempel 40 trinn b) (1,0 g) i en blanding av konsentrert saltsyre (40 ml) og vann (32 ml) avkjølt i isvann ble det tilsatt en oppløsning av natriumnitntt (0,4 g) i vann (5 ml), og omrøring foretatt ved denne temperaturen i 2 timer. Blandingen ble deretter ekstrahert i etylacetat, tørket og inndampet og dette ga undertittelforbindelsen (0,6 g).

MS (APCI) 434 (M+H", 100%)

d) (+/-)-5-[[(2,3-difluorfenyl)met>i]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel 40 trinn d).

MS (APCI) 415 (M+H<+>, 100%)

EKSEMPEL 41

7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[f2-amino-5-[(fenylmer\i)tio]tiazoIo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l,3-propandiol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 12 trinn a), ved bruk av produktet i eksempel 1 trinn c) og 2-amino-l,3-propandiol

MS (APCI) 364 (M+F<T>, 100%)

NMR 5H (dé-DMSO) 7,42-7,38 (IH, m), 7,28 (IH, t), 7,22 (IH, t), 5,30 (IH, d), 4,63 (IH, bs), 4,28 (2H, s), 4,03 (IH, m), 3,54-3,40 (4H, m).

b) 2-[[2-klor-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aniino]-l,3-propandiol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 40 trinn c), ved baik av produktet i eksempel 41 trinn a).

MS (APCI) 384 (M+H<+>, 100%)

c) 2-[[2-metoksy-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l,3-propandiol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 41 trinn b).

MS (APCI) 379 (M+H<+>, 100%)

d) 7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]- 5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g) ved bruk av produktet i eksempel 41 trinn c)

MS (APCI) 365 (M+H<+>, 100%)

EKSEMPEL 42

5-[[2-bromfenyl)met>iJtio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-dJpyrimidin-2(3H)-on

a) 2-[[2-amino-5-[[(2-bromfenyl)metyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]aminol-l,3-propandiol

MS (APCI) 428 (M+H<+>, 100%)

b) 2-f[2-brom-5-[[(2-bromfenyl)mer\'l)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 tnnn e), ved bruk av produktet i eksempel 42 trinn a).

MS (APCI) 491 (M+H<+>, 100%)

c) 2-[[5-[[(2-bromfenyl)meryl]tio]-2-mctoksytiazoIo[4,5-d|pyrimidin-7-yl]amino]-(2R)-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn f), ved bruk av produktet i eksempel 42 trinn b).

MS (APCI) 443 (M+P<T>, 100%)

d) 5-[[(2-bromfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyleyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g), ved bruk av produktet i eksempel

42 trinn c).

MS (APCI) 427 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 12,41 (IH, s), 7,65-7,14 (5H, m), 4,72 (IH, t), 4,42 (2H, s), 4,21 (IH, m), 3,47-3,30 (2H, m), 1,10 (3H, d).

EKSEMPEL 43

5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tiol-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyIlamino]tiazolo[4,5-d|pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt

Produktet fra eksempel 5 trinn d) ble suspendert i vann og til denne suspensjonen ble

det tilsatt en ekvivalent av 0,1 N natrium hydrokydoppløsning, fulgt av tilsetning av en liten alikvot tetrahydrofuran for å hjelpe oppløsning. Den resulterende oppløsning ble deretter lyofilisert og dette ga tittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff.

smp218-220°C

MS (APCI) 385 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 7,39-7,09 (3H, m), 5,60 (IH, d), 4,65 (IH, m), 4,34 (2H, 1), 4,09 (IH, m), 3,44-3,27 (2H, m), 1,06 (3H, d).

EKSEMPEL 44

5-[[3-kIor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyI]aminoltiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 43 ved bruk av produktet i eksempel 17 trinn

b).

MS (APCI) 401 (M+H", 100%)

EKSEMPEL 45

(+/-)-5-[[(2,3-difluorfenyl)met)'l[tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino]tioazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)- on natrium salt

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 43 ved bruk av produktet i eksempel 40 trinn

e).

smp>250°C

MS (APCI) 415 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (d6-DMSO) 7,39-7,04 (3H, m), 5,51 (IH, d), 4,68 (IH, t), 4,34 (2H, q), 4,22 (IH, m), 3,51-3,35 (4H, m), 3,32 (3H, s)

EKSEMPEL 46

7-[[2-hydroksy-l(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 43 ved bruk av produktet i eksempel 41 trinn

d).

smp23l-2°C

MS (APCI) 365 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 7,41-7,18 (5H,m), 4,30 (IH, d), 4,63 (2H, s), 4,28 (2H, s), 4,06 (IH, m),3,50 (4H, m).

EKSEMPEL 47

7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 43 ved bruk av produktet i eksempel 3 trinn

d).

smp. (krymper 100) smelter 221-225°C

MS (APCI) 349 (M+H<+>, 100%)

NMR 5H (D6-DMSO) 7,41-7,18 (5H, m), 5,58 (IH, d), 4,65 (IH, t), 4,28 (2H, q), 4,11 (IH, m), 3,49-3,31 (2H, m), 1,08 (3H, d).

EKSEMPEL 48

5-[(5-klor-l,2,3-tiacHazol-4-yl)tio|-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-mer5'leryl]aininol-tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on

a) (2R)-2-[[2-amino-5-[(5-klor-l,2,3-tiadiazol-4-yl)tio]tiazoIo[4,5-d|pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 32 trinn c), ved bruk av produktet i eksempel 32 trinn b) og 5-klor-4-(klormetyl)-l,2,3-tiadiazol

MS (APCI) 390 (M+H", 100%)

b) (2R)-2-[[2-klor-5-[(5-klor-l,2,3-tiadiazol-4-yl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-l-propanol

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 40 trinn c) og ved bruk av produktet i eksempel 48 trinn a).

MS (APCI) 409 (M+H<+>, 100%)

c) (2r)-2-[[5-[(5-klor-l,2,3-tiadiazol-4-yl)tio]-2-metoksytiazolo[4,5-dlpyrimidin-7-yl]amino]-l-propanoI

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 2 trinn f) og ved bruk av produktet i eksempel 48 trinn b).

MS (APCI) 405 (M+P<T>, 100%)

d) 5-[(5-kIor-l,2,3-tiadiazol-4-yl)tio]-7-[(lR)-2-hydroksy-l-metyet>i]amino]-tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on.

Fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 trinn g) og ved bruk av produktet i eksempel 48 trin c).

MS (APCI) 39 (M+H<+>, 100%)

NMR 8H (d6-DMSO) 12,39 (IH, s), 7,39(1 H, d), 4,76 (2H, AB), 4,70 (1H, t), 4,24 (1H, m), 3,48-3,30 (2H, m), 1,11 (3H, d)

Farmakologiske data

Ligand bindingsanalyse

[" I]IL-8 (human, rekombinant) ble innkjøpt fra Amersham, U.K. med en spesifikk aktivitet på 2.000Ci/mmol. Alle andre kjemikalier var av analytisk kvalitet. Høye nivåer av hrCXCR2 ble uttrykt i HEK 293 celler (humane embryo nyre 293 celler

ECACC nr. 85120602) (Lee et al. (1992) j: Biol. Chem. 267 sider 16283-16291). hrCXCR2 cDNA ble amplifisert og klonet fra human neutrofil mRNA. Nevnte DNA ble klonet inn i PCRScript (Strategene) og klonet ble identifisert ved bruk av DNA. Kodingssekvensen ble subklonet inn i den eukaryote ekspresjonsvektoren RcCMV (Invitrogen). Plasmid-DNA ble fremstilt ved baik av Quiagen Megaprep 2500 og transfisert inn i HEK 293 celler ved bruk av Lipofectamine-reagens (Gibco BRL). Celler av den høyest uttrykkende klonen ble høstet i fosfatbufret saltoppløsning inneholdende 0,2% (vv/v) etylendiamintetraedikksyre (EDTA) og sentrifugert (200 g, 5 min). Cellepelleten ble resuspendert i iskaldt homogeniseringsbuffer [10 mM HEPESS (pH 7,4), 1 mM ditiotreitol, 1 mM EDTA og et panel av proteaseinhibitorer (1 mM fenylmetylsulfonylfluorid, 2 ug/ml soyabønnetrybsin inhibitor, 3 mM benzamidin, 0,5 ug/ml leupeptin og 100 ug/ml bacitracin)] og cellene hensatt for svelling i 10 minutter. Cellepreparatet ble revet opp ved bruk av en håndholdt glassmorter/PTFE-støterhomogenisator og cellemembran høstet ved sentrifugering (45 minutter, 100.000 g, 4°C). Membranpreparatet ble lagret ved -70°C i homogeniseirngsbuffer supplertmed Tyrode's saltoppløsning (137 mM NaCl, 2,7 mM KCL, 0,4 mM NaH2P04, 0,1% (w/v) gelatin og 10% (v/v) glycerol

Alle analyser ble utført i 96-brønners MultiScreen 0,45 um-filtreirngsplater (Millipore, U.K.). Hver analyseprøve inneholdt ~50 pM [125I]IL-8 og membraner (ekvivalent med ~200.000 celler) i analysebuffer [Tyrode's saltoppløsning supplert med 10 mM HEPES (pH 7,4), 1,8 mM CaCl2,0,125 mg/ml bacitracin og 0,1% (w/v) gelatin]. I tillegg ble en forbindelse av formel (I) ifølge eksempelene oppløst på forhånd i DMSO og tilsatt til oppnåelse av en sluttkonsentrasjon på 1% (v/v) DMSO. Analysen ble initiert ved tilsetning av membraner og etter 1,5 timer ved romtemperatur ble membranene høstet ved filtrering ved baik av en Millipore MultiScreen-vakuummanifold og vasket to ganger med analysebuffer (uten bacitracin). Underlagsplaten ble fjernet fra MultiScreen-platesammenstillingen, filtrene tørket ved romtemperatur, utstanset og deretter telt på en Cobra y-teller.

Forbindelsene av fonnel (I) ifølge eksempelene ble funnet å ha [C50 verdier på mindre enn (<) 10 uM.

Intracellulær kalsium mobiliseringsanalyse

Human neutrofiler ble fremstilt fra EDTA-behandlet perifert blod, som beskrevet tidligere (Baly et al., (1997) Metods m Enzymology 287 sider 70-72), i lagringsbuffer

(Tyrodes saltoppløsning (137 mM NaCl, 2,7 mM Kcl, 0,4 mM NaFbPCt), supplert med 5,7 mM glucose og 10 mM HEPES (pH 7,4)].

Kjemokinet GROa (human, rekombinant) ble innkjøpt fra R&D Systems (Abingdon, U.K.). Alle andre kjemikalier var av analytisk kvalitet. Enringer i intracellulært fritt kalsium ble målt fluormetrisk ved ladning av neutrofiler med det kalsiumfølsomme fluoreserende fargestoffet flyo-3 som beskrevet tidligere (Merritt et al. (1990) Biochem. J. 269 sider 513-519). Celler ble ladet i 1 time ved 37°C i en ladningsbuffer (lagringsbuffer med 0,1 % (w/v) gelatin) inneholdende 5 uM fluo-3 AM ester, vasket med ladningsbuffer og deretter resuspendert i Tyrode's saltoppløsning supplert med 5,7 mM glucose, 0,1% (w/v) bovin serum albumin (BSA), 1,8 mM CaCh og 1 mM MgCl?. Cellene ble overført med pipette til sortveggete 96-brønners mikroplater med klar bunn (Costar, Boson, U.S.A.) og sentrifugert (200 g, 5 minutter, romtemperatur).

En forbindelse av formel (I) ifølge eksemplene ble forhåndsoppløst i DMSO og tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 0,1%) (v/v) DMSO. Analyser ble initert ved tilsetning av en A50 konsentrasjon av GROa og den forbigående økningen i fluo-3 fluorensens (yex = 490 nM og YEm = 520 nm) ble overvåket ved bruk av en FLIPR (fluorometrisk bildeplateleser, Moelcular Devices, Sunnyvale, U.S.A.).

Forbindelsen av formel (I) ifølge eksemplene ble testet å funnet å være antagonister av CXCR2-reseptoren i huamne neutrofiler.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved at den har formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav: hvor R<1> representerer tiadiazolyl eventuelt substituert med halogen eller en C\.% alkylgruppe som eventuelt er substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra fenyl, fenoksy eller en 5- eller 6-leddet aromatisk ring valgt blant tiazolyl, furyl eller tienyl, idet fenyl- og de aromatiske ringene eventuelt er substituert med en eller flere substituenter uavhengig valgt fra halogenatomer, -OR<4>, -SO2R<10>, C\- C(, alkyl eller trifluormetylgrupper; R2 er hydrogen; R3 representerer pyrrolidinyl eventuelt substituert med OH eller C\- C& alkyl-, som eventuelt kan være substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra: (b) halogenatomer, -OR<4>, -NR<5>R<6>, -CONR<5>R<6> og -NR<8>S02R<9>; R4 representerer hydrogen eller Q-C6 alkyl som eventuelt kan være substituert med en eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra halogenatomer, -OR<11> og -NR<l>2R1<3>; R<3> og R<6> representerer uavhengig et hydrogenatom eller en C|-C6 alkylgruppe som eventuelt kan være substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra-OR<14>, eller R<5> og R<6> danner sammen med det nitrogenatom til hvilket de er festet et 4- til 7-leddet mettet heterocyclisk ringsystem eventuelt inneholdende et ytterligere heteroatom valgt fra oksygen- og nitrogenatomer, hvilket ringsystem eventuelt kan være substituert med én eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra fenyl, -OR<14>, -COOR<14>, -NR15R16, -CONR<15>R<16>, -NR<15>COR<16>, -SONR<15>R<16>, NR<15>S02R<16> eller Ci-C6 alkyl, selv eventuelt substituert med en eller flere substituentgrupper uavhengig valgt fra halogenatomer og - NR15R1<6> og-OR<17->grupper; R<10> representerer et hydrogenatom eller en C1-C6 alkylgruppe; og hver av R8, R9, R1R12, R13, R1<4> representerer uavhengig et hydrogenatom eller en C\. C(, alkylgruppe.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at R<1 >representerer en eventuelt substituert benzylgruppe.

3. Forbindelse ifølge krav 1 eller krav 2, karakterisert ved at R3 er Ci-Cg alkyl substituert med hydroksy.

4. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra: 7-[(2-hydroksy-l, l-dimetyletyl)amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, (R)-7-[[hydroksymetyl)propyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, (R)-7-[(2-hydroksy-l-metyletyl)amino]-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(hydroksyetoksy)etyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(2-hydroksy-l- (hydroksymetyl)ethyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[(2-aminoetyl)amino]-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio] 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)arnino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksyethyl)amino] 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, N-[2-[[5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-2,3-dihydro-2-okso5-[[2)3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(2-hydroksy-l,l-dimetyletyl)amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidi 7-y 1] amino] etyl] metansulfonamid, (+/-)-5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-(2-hydroksyetoksy)-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d] pyrimidin-2(3 H)-on, 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-[(2-hydroksyetyl)amino]-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-(dimetylamino)-l- metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[[4-(2-aminoetoksy)-3-klorfenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[3-klor-4-metoksyfenyl)metyl]tio]-7-[[7-(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(l R)-2-hydroksy-l -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d] pyrimidin-2 (3 H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(3R,4R)-4-hydroksypyrrolidin-3-yl]amino]-tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(3R)-pyrrolidin-3-ylamino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-hydorksy-l-metyletyl]amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazolyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on, 7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[[(2-mtyl-4-tiazolyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]-5-[[(2-metyl-4-tiazol)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on, 7-[(2-hydroksy-1,1 -dimetyletyl)amino]-5-[[(2-metylfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[(2-furanylmetyl)tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino]tiazolo[4,5-d]pynmidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5-[[(3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, (2S)-2-[[5-[[2,3-dilfuorfenyl)metyl]tio]2-3-dihydro-2-oksotiazolo[4,5-d]pyrimid^ yl] amino] -3 -hydroksy-propanamid, 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyk]amino]-5-[(2-tienylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-etyletyl]amino]-5-[[[3-metyl-4-(metylsulfonyl)fenyl]metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 5-[[[3-klor-4-(trifluormetoksy)fenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 5-[[[2-klor-3-(trifluorrnetyl)fenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[(2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[[(2-metoksyfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[(2-fenoksyetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[[(3-metylfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[(2-fluor-3-metylfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 5-[[(3-klorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[(3-bromofenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[[4-(difluon-netoksy)fenyl]metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl] amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, (+/-)-5-[[(23-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 7-[[2-hydroksy-1 -(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[(2-bromofenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[( l R)-2-hydroksy-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[[3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(tR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d] pyrimidin-2(3 H)-on, (+/-)-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, 7-[[2-hydroksy-l-(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on, 5-[(5-klor-l,2,3-tiadiazol-4-yl)tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on, og deres farmasøytiske akseptable salter og solvater.

5. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra: 5-[[(2-3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt, 5-[[3-klor-2-fluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt, (+/-)-5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[2-hydroksy-l-(metoksymetyl)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3 H)-on natriumsalt, 7-[[2-hydroksy-1 -(hydroksymetyl)etyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natruiumsalt, eller 7-[[(l R)-2-hydroksy-l-metyletyl]amino]-5-[(fenylmetyl)tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on natriumsalt.

6. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra: 7-[[(lR)-2-amino-l-metyletyl]amino]-5- [[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on trifluoracetat, 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[( 1 R)-2-[(2-hydroksyetyl)amino]-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3H)-on trifluoracetat, 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[[(l R)-2-(demetylamino)-1 -metyletyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyirmidin-2(3 H)-on 5-[[[4-(2-aminoetoksy)-3-klorfenyl]metyl]tio]-7-[[(lR)-2-hydroksy-l-metyletyl]ami tiazolo[4,5-d]pynmidin-2(3 H)-on trifluoracetat, 5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[2-[(dimetylamino)etyl]amino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on monohydroklorid, eller 5-[[2,3-difluorfenyl)metyl]tio]-7-[(3R)-pyrrolidin-3-ylamino] tiazolo[4,5-d]pyrimidin-2(3H)-on dihydroklorid.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse av formel (I) som definert i krav 1, karakterisert ved at den innbefatter: (a) behandling av en forbindelse av formel (IIA): hvor R , R og R er som definert i formel (I), med en tiol R SH i nærvær av en egnet base, eller (b) behandling av en forbindelse av formel (IIB): hvor R<1>, R<2> og RJ er som definert i formel (I) og X er en avspaltingsgaippe, med et metalloksid, fulgt av behandling med en syre eller base, og eventuelt etter (a) eller (b), dannelse av et farmasøytisk akseptabelt salt.

8. Forbindelse, karakterisert ved at den har formel (IIA) eller (IIB) som definert i krav 7, forutsatt at formel (IIB) ikke kan representere forbindelsene: iii) 2-[[2-brom-5-[(fenylmetyl)tio]tiazolo[4,5-d]pyirmidin-7-yl]amino]-2-metyl-1-propanol; iv) 2-[[2-brom-5-[[(2,3-difluorfenyl)metyl]tio]tiazolo[4,5-d]pyirmidin-7-yl]amino]-2-metyl-l-propanol.

9. Forbindelse, karakterisert ved at den har formel (HIA): hvor R2 og R<3> er som definert i formel (I) og X er NPb.

10. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det innbefatter en forbindelse av formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 6, i forbindelse med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

11. Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat som definert i krav 10, karakterisert ved at den innbefatter blanding av en forbindelse av formel (I), eller et farmasøytisk akseptaelt salt eller solvat derav, som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 6, med en farmasøytisk akseptabel adjuvans, fortynningsmiddel eller bærer.

12. Forbindelse av formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 6, karakterisert v e d at den er beregnet for bruk i terapi.

13. Anvendelse av en forbindelse av formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, som definert i hvilket som helst av kravene 1 til 6, i fremstillingen av et medikament ved bruk i terapi.