NO310472B1 - Biomasse og fremgangsmåte for fremstilling av virus/virusantigen - Google Patents
Biomasse og fremgangsmåte for fremstilling av virus/virusantigen Download PDFInfo
- Publication number
- NO310472B1 NO310472B1 NO19922622A NO922622A NO310472B1 NO 310472 B1 NO310472 B1 NO 310472B1 NO 19922622 A NO19922622 A NO 19922622A NO 922622 A NO922622 A NO 922622A NO 310472 B1 NO310472 B1 NO 310472B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- virus
- biomass
- cell aggregates
- culture medium
- infected
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 83
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 45
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 45
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 45
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims description 42
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 20
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 18
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 claims description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 7
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 claims description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000000531 effect on virus Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24051—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører en biomasse og en fremgangsmåte ved produksjon av virus/virusantigen.
Fremgangsmåter ved fremstilling av virus/virus-antigen er kjent. Utgangsmaterialer er ofte såkalte primærcellekulturer som utvinnes fra humant eller animalsk vev. Disse primærceller infiseres med virus ("modervirus"), og ved virusformering dannes virusantigen.
En metode til formering av f.eks. forsommer-meningo-encef alitis-virus (FSME-virus) er beskrevet i AT -B 358.-167: Høneembryonalceller suspenderes i et cellekulturmed-ium, infiseres med viruset og anvendes som biomasse ved produksjon av FSME-virusantigen. Til dette formål holdes biomassen under aerobe betingelser ved en temperatur mellom 25 og 38°C mellom én og fem dager i suspensjon. Deretter skilles cellene og cellebruddstykkene ved sentrifugering, den oppnådde virussuspensjon inaktiveres ved hjelp av formalin eller S-propiolakton, og virusantigenet konsentre-res ved ultrafiltrering, renses og bearbeides videre på konvensjonell måte til vaksiner.
Ved vanlige preparasjoner av primærcellekulturer legges spesielt vekt på å oppnå enkeltceller eller helst små celleaggregater. For å oppnå dette, må vevet forminskes mest mulig mekanisk og enzymatisk. Behandlingen fører imidlertid også samtidig til at mange celler dør. Hvis slike cellepreparater setter seg på overflaten av egnede bærermaterialer, forblir de døde cellene i resten og kan fjernes. Ved anvendelse av slike cellepreparater i suspen-sjonskulturer ved fremstilling av FSME-virusantigen, foreligger det imidlertid ingen mulighet å skille levende celler fra døde hhv. skadede celler. Lyseringen som etter-hvert finner sted i cellene, fører følgelig til en høy forurensning fra celleproteinene i mediet og som vanskelig lar seg fjerne fra det ønskede produkt.
Også reproduserbarheten av virus/virusantigen-fremstillin-gen er liten ved bruk av enkeltceller eller små celleaggregater i suspensjon, fordi det fører til en sterk celleskade f.eks. på grunn av skjærkreftene ved omrøring.
Oppfinnelsens oppgave består i å fjerne disse ulemper og således å tilveiebringe en biomasse for produksjon av virus/virusantigen som ved kultivering utvikler en høy produksjonsytelse på virus/virusantigen, som er enkel å håndtere og som kan brukes i storteknisk målestokk ved produksjon av virus/virusantigen, hvorved virus/virusantigenet kan utvinnes fra kulturmediet med høy renhet.
Biomassen ifølge oppfinnelsen, som tilfredsstiller de nevnte krav, består av celleaggregater med en diameter på mellom lOOptm og 1000/xm, og er infisert med virus.
Celleaggregatene av biomassen ifølge oppfinnelsen kan oppnås ved hjelp av mekanisk og enzymatisk behandling av humant eller animalsk vev, idet vevet som på mekanisk måte er desintegrert, kan ved ytterligere oppløsning av celleaggregatene forminskes ytterligere med en protease såsom trypsin, kymotrypsin eller elastase inntil den ønskede celleaggregatstørrelse er oppnådd.
Celleaggregatene av biomassen ifølge oppfinnelsen kan imidlertid også oppnås fra humane eller animalske enkeltceller, idet disse behandles med celleaggregerende substanser såsom agglutinin.
Separarering av celleaggregater og enkeltceller med en diameter større enn 1000/xm hhv. mindre enn 100 fim, kan foretas ved siktning eller fortrinnsvis ved sedimentering. Sedimentasjonen er i sammenligning med siktning enklere å gjennomføre, fordi en sikt med en porestørrelse på 100/xm meget lett kan tilstoppes. Dessuten greier sedimentasjonen seg uten kostbare separatorer og byr også på fordeler i sterilteknisk henseende. Det har vist seg at celleaggregatene med en diameter på mellom 100/zm og lOOO^m sedimenterer med en hastighet større enn 1 cm/min, mens de mindre celleaggregatene sedimenterer med en hastighet på mindre enn 1 cm/min. Separasjonen av partiklene med en størrelse mindre enn 1000/xm kan foretas på enkel måte ved siktning, fordi faren for tilstoppelse her er mindre.
En foretrukket utførelsesform av biomassen ifølge oppfinnelsen er karakterisert ved at den, i kulturmediumsuspen-dert tilstand, har en høy metabolsk aktivitet. Målt på glukoseforbruket ligger den metabolske aktivitet mellom 3 og 5 mg glukose pr. gram biomasse pr. time.
Celleaggregatene som anvendes ved tilberedning av biomassen ifølge oppfinnelsen, har dessuten den fordel at de allerede ved en infeksjon med en relativt liten mengde av modervirus produserer store mengder virusantigen. Det har vist seg at man ved infeksjon av celleaggregater som er mindre enn 100/xm eller større enn 1000/xm, må bruke vesentlig mere modervirus for å produsere den samme mengde virus/virusantigen.
Virus/virusantigenproduksjonen kan økes ytterligere, når biomassen ifølge oppfinnelsen holdes ved en oksygenkonsentrasjon på minst 0,01 mmol/1, fortrinnsvis på minst 0,06 mmol i kulturmediet.
Det er fordelaktig når kulturmediet har en celleaggregatkonsentrasjon på minst 10 mg celleaggregat pr. ml.
Biomassen ifølge oppfinnelsen egner seg spesielt godt til produksjon av forsommer-meningoencefalitis-virus (FSME-virus)/virusantigen, når den består av celleaggregater av fuglembryonalceller, spesielt høneembryonalceller, idet en virus/virusantigen-produksjonsytelse økes ytterligere, når det i kulturmediet innstilles en oksygen-overføringshastig-het på større enn 1,60 mmol 02.l"1.h 2, fortrinnsvis mellom 1,65 og 2,40 mmol 02.l"<1.>h"<1.>
Oksygen-overføringshastigheten (oxygen transfer rate, OTR) , uttrykt i mmol 02. 1' X . h' 1, er som kjent en målestokk for innføring av oksygen i cellekultur. Oksygen-opptagelses-hastigheten (oxygen uptake rate, OUT) er igjen en målestokk for den metabolske ytelse av en celle generelt, og således indirekte for virus/virusantigen-synteseytelsen av en celle.
Ved alle de idag kjente metoder for produksjon av FSME-virusantigen er den spesifikke produksjonsytelse på virusantigen begrenset, fordi det ved nærvær av en stor mengde infiserte celler i kulturmediet kan komme til en senkning av pH-verdien og således til en uønsket inaktivering av virustiteren og ødeleggelse av virusantigenet.
Det ble funnet at pH-verdien i en slik sterkt ventilert kultur ikke synker og at en konstant og høy produksjonsytelse av virus/virusantigen kan opprettholdes, når det innføres tilstrekkelige mengder av oksygen i kulturvæsken, f.eks. ved innrøring eller ved hjelp av statiske og/eller dynamiske gassfordelere.
Målinger har vist at FSME-produksjonen reduseres i større målestokk ved en kultur med en celletetthet på 2 x 10<7 >celler pr. milliliter, som utelukkende via overflaten står i forbindelse med oksygen-atmosfæren. Hvis derimot oksygen innføres aktivt i kulturen, så kan antigenutbyttet økes meget sterkt.
En fremgangsmåte ved produksjon av virus/virusantigen under anvendelse av en biomasse som beskrevet ovenfor er angitt i krav 5.
En foretrukket utførelsesform av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen består i at man innstiller oksygen-overfø-ringshastigheten til større enn 1,65 mmol 02.l~<1>.h~<1>, fortrinnsvis mellom 1,65 og 2,40 mmol 02.l"<1>.h"<1>, hvorved den fuktige cellemasse helst er på maksimalt 30 g pr. liter kulturmedium.
Forsøk har vist at FSME-virus/virusantigenproduksjonen av konsentrasjonen av de ifølge oppfinnelsen anvendte celleaggregater er proporsjonal. Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan også utføres ved en celleaggregatkonsentrasjon på mindre enn 10 mg/ml. I motsetning til dette ble det funnet at det i tilfellet kultivering av infiserte enkeltceller kreves en minstekonsentrasjon på 10 mg/ml for en virus/ant igenproduks j on.
De høye modervirustiterne som er nødvendige for infeksjon av en primærcellekultur, oppnås vanligvis bare ved formering av viruset i musehjerner. Fordi celleaggregatene ifølge oppfinnelsen kan infiseres med en vesentlig mindre virusmengde, kan moderviruset som er nødvendig for infeksjon av biomassen også utvinnes fra cellekulturrester. Dette minsker tydelig muligheten for en kontaminasjon med mushjerneprotein. Det har dessuten vist seg at biomassen ifølge oppfinnelsen, som består av celleaggregater fra fugle-embryonalceller, egner seg likeledes til produksjon av influensa-, vaccinia- eller avipox-virusantigen.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved de etterfølgende utførelseseksempler.
Eksempel 1: Celleaggregatstørrelsens påvirkning på
antigenutbyttet.
SPF-(specific pathogen free)-hønseegg ble ruget i 12 dager ved 37°C, testet med et Schlierapparat ("Schliergeråt") på embryoveksten, desinfisert med alkohol og åpnet i en sterilboks. Embryoene ble tatt ut, vasket og grovhakket ved hjelp av en kutteanordning. Deretter skjedde en enzymatisk spaltning av det embryonale vev ved tilsetning av proteo-lytiske enzymer (1 mg/embryo) ved 37°C i 20 minutter. Fra denne vevsuspensjonen ble det separert vevs tykker > 100 /xm over en sikt med en maskevidde tilsvarende > 1000 /xm. En ytterligere oppdeling av disse celleaggregater kunne oppnås ved hjelp av en sedimentasjonsfremgangsmåte idet det som oppdelingskriterium ble valgt en sedimentasjonsrate på = 1 cm/min. Til dette ble cellesuspensjonen med en flyterate på 1 cm/min. pumpet nedenifra oppover gjennom et sedimen-tas jonskar. Enkeltcellene hhv. små celleaggregater forble i suspensjon, mens større celleaggregater satte seg på bunnen av karet. Undersøkelser ved hjelp av siktning av foreskjellige porestørrelser viste at celleaggregatene som avsetter seg under disse betingelser, har en størrelsesfor-deling på < 1000 /xm, > 100 /xm. Størrelsen av celleaggregatene som forblir i suspensjon var således < 100 /xm.
På denne måte ble det oppnådd tre fraksjoner celleaggregater
Fra disse fraksjoner ble det suspendert de samme biomasse-konsentrasjoner (30 g pr. liter) i et kul'turmedium (Med 199) , og infisert med FSME-virus (1 x IO<5> pfu pr. mg biomasse).. Virusformeringen skjedde ved 37°C, idet cellene holdes under jevn omrøring i suspesjon. Etter fire dager ble den dannede virusantigenmengde bestemt ved hjelp av
ELISA.
I tilfellet fraksjon 1 (celleaggregater mindre enn lOO/xm) var virus/virusantigenproduksjonen 4,9 /xg/ml; i tilfellet fraksjon 2 (celleaggregater større enn 1000/xm) var virus/- virusantigenproduksjonen 4,7 /xg/ml; i tilfellet fraksjonen ifølge oppfinnelsen var virus/virusantigenproduksjonen 9,3 /xg/ml.
Eksempel 2: Celleaggregatstørrelsens påvirkning på
forurensningen med CEC(chick embryo cell)-protein
De i eksempel 1 oppnådde kulturmedier fra fraksjon 1 og 3 ble undersøkt på CEC-protein-innholdet to dager etter kultiveringsstart. Kulturmediet fra fraksjon 1 inneholdt 1,80 mg CEC-protein/ml, mens kulturmediet fra fraksjon 3 hadde kun 0,84 mg CEC-protein/ml.
Eksempel 3: Påvirkning av mengden modervirus på virus/
antigenproduksjonen
Biomasser, som beskrevet i eksempel 1, ble kultivert med celleaggregatstørrelser fra fraksjonene 1 og 3, og virus /antigenproduksjonen ble bestemt, idet det for infeksjon ble anvendt fire forskjellig mengder modervirus (3,2.10<3 >pfu, 1.10<4> pfu, 3,2. IO4 pfu og 1.10<5> pfu, hver pr. mg biomasse) pr. fraksjon. Resultatene er angitt i den etter-følgende tabell 1, hvorav det fremgår at fraksjon 3 ifølge oppfinnelsen ved samme mengde modervirus har en vesentlig større produksjon av virus/virusantigen.
Eksempel 4: Oksygenkonsentrasjonens påvirkning på
antigenproduksjonen
Ifølge betingelsene angitt i eksempel 1, ble biomassen ifølge oppfinnelsen kultivert ved forskjellige oksygenkon-sentrasjoner i kulturmedium, og mengden virus/virusantigen ble bestemt. Resultatene er angitt i den etterfølgende tabell 2, idet utbyttet ble beregnet på virus/virusantigen under en oksygenkonsentrasjon på 0,06 mmol/1 med 100 %.
Eksempel 5: Oksygenoverføringspåvirkning på virus/
antigenutbytte
Biomasse ble slik som beskrevet i eksempel 1, infisert med celleaggregater fra fraksjon 3, kultivert i forskjellige store kulturkar og gasset med luft for å oppnå forskjellige OTR-verdier. Suspensjonen ble i 4 dager holdt ved en temperatur på 33°C - 37°C, og virus/antigenutbytte ble bestemt. (Sml. tabell 3).
Fra resultatene i tabell 3 kan det avledes at det ved en OTR større enn 2 virus/antigen-utbytte, kan oppnås ca. 6 /xg/ml.
Claims (11)
1. Biomasse ved produksjon av virus/virusantigen, karakterisert ved at biomassen består av celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm, hvilken biomasse er infisert med virus.
2. Biomasse som angitt i krav 1, karakterisert ved at celleaggregatene oppnås ved mekanisk og enzymatisk behandling av humant eller animalsk vev.
3. Biomasse som angitt i krav 1, karakterisert ved at celleaggregatene oppnås fra humane eller animalske enkeltceller ved behandling med celleaggregerte substanser.
4. Biomasse som angitt i krav 1, karakterisert ved at den metabolske aktivitet av biomassen som er suspendert i kulturmedium utgjør pr. time mellom 3 og 5 mg glukose pr. gram biomasse, målt på glukosef orbruket.'
5. Fremgangsmåte ved produksjon av virus/virusantigen under anvendelse av en biomasse med celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm ifølge ett eller flere av kravene 1 til 4,
karakterisert ved at den gjennomføres i et kulturmedium ved en oksygenkonsentrasjon på minst 0,01 mmol/1, fortrinnsvis minst 0,06 mmol/1, og hvor det blir foretatt en separasjon av biomassen før den infiseres med et virus.
6. Fremgangsmåte som angitt i krav 5, karakterisert ved at den gjennomføres i et kulturmedium som har minst 10 mg celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm pr. ml, og hvor det blir foretatt en separasjon av biomassen før den infiseres med et virus.
7. Fremgangsmåte ved produksjon av forsommer-meningoencefalitis-virus(FSME-virus)/virusantigen som angitt i krav 5,
karakterisert ved at det som kulturmedium anvendes en biomasse bestående av celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm av fuglembyronalceller, spesielt høneembryonalceller, og hvor det blir foretatt en separasjon av biomassen før den infiseres med et virus.
8. Fremgangsmåte som angitt i krav 7, karakterisert ved at det som kulturmedium anvendes en biomasse bestående av celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm og ved at det i kulturmediet innstilles en oksygen-overføringshastighet større enn 1,60 mmol 02 • l"1.h"1, fortrinnsvis mellom 1,65 og 2,4 0 mmol 02.l"<1>.h"<1>, og hvor det blir foretatt en separasjon av biomassen før den infiseres med et virus.
9. Fremgangsmåte som angitt i krav 8, karakterisert ved at det som kulturmedium anvendes en biomasse bestående av celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm og ved at det ved en oksygen-overføringshastighet på 1,65 mmol 02.l"<1>.h"<1> anvendes en biomasse på maksimalt 30 g pr. liter kulturmedium, og hvor det blir foretatt en separasjon av biomassen før den infiseres med et virus.
10. Fremgangsmåte ved produksjon av influensa-, vaccinia-eller avipox-virus/virusantigen som angitt i krav 5, karakterisert ved at det som kulturmedium anvendes en biomasse bestående av celleaggregater av fuglembyronalceller med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm, og hvor det blir foretatt en separasjon av biomassen før den infiseres med et virus.
11. Anvendelse av celleaggregater med en diameter mellom 100/xm og 1000/xm ved fremstilling av en biomasse ifølge krav 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT18/90A AT393277B (de) | 1990-01-04 | 1990-01-04 | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| PCT/AT1991/000003 WO1991009937A1 (de) | 1990-01-04 | 1991-01-03 | Biomasse zur produktion von virus/virusantigen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO922622D0 NO922622D0 (no) | 1992-07-02 |
| NO922622L NO922622L (no) | 1992-07-23 |
| NO310472B1 true NO310472B1 (no) | 2001-07-09 |
Family
ID=3479351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19922622A NO310472B1 (no) | 1990-01-04 | 1992-07-02 | Biomasse og fremgangsmåte for fremstilling av virus/virusantigen |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5391491A (no) |
| EP (1) | EP0509008B1 (no) |
| JP (1) | JP2633392B2 (no) |
| AT (2) | AT393277B (no) |
| CA (1) | CA2073168C (no) |
| CZ (1) | CZ279725B6 (no) |
| DE (1) | DE59103696D1 (no) |
| DK (1) | DK0509008T3 (no) |
| ES (1) | ES2067921T3 (no) |
| FI (1) | FI106241B (no) |
| HR (1) | HRP921353A2 (no) |
| HU (1) | HU212597B (no) |
| NO (1) | NO310472B1 (no) |
| RU (1) | RU2099419C1 (no) |
| SK (1) | SK279200B6 (no) |
| WO (1) | WO1991009937A1 (no) |
| YU (1) | YU391A (no) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5719051A (en) * | 1989-12-22 | 1998-02-17 | Immuno Aktiengesellschaft | Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen |
| AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| US5698433A (en) * | 1994-11-10 | 1997-12-16 | Immuno Ag | Method for producing influenza virus and vaccine |
| US6146873A (en) * | 1994-11-10 | 2000-11-14 | Baxter Aktiengesellschaft | Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media |
| US5756341A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-26 | Immuno Ag | Method for controlling the infectivity of viruses |
| DK0791055T3 (da) | 1994-11-10 | 2012-04-16 | Baxter Healthcare Sa | Fremgangsmåde til fremstilling af biologiske produkter i proteinfri kultur |
| US5753489A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-19 | Immuno Ag | Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| BR9804283B1 (pt) * | 1998-03-18 | 2010-11-30 | processo para a produção de flavivìrus em baixa densidade de células em cultura e processo para a produção de flavivìrus recombinante em baixa densidade de células em cultura. | |
| US7445924B2 (en) * | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
| US20040023358A1 (en) * | 2001-12-21 | 2004-02-05 | Wyeth | Avian embryo particulate biomass for the production of virus antigens |
| ATE393212T2 (de) * | 2002-09-05 | 2008-05-15 | Bavarian Nordic As | Verfahren zur amplifikation von einem poxvirus in serumfreien verhältnissen |
| US7998488B2 (en) * | 2008-11-14 | 2011-08-16 | Baxter International Inc. | Vaccine formulations and uses thereof |
| CN103200962A (zh) | 2010-09-23 | 2013-07-10 | 巴克斯特国际公司 | 重组病毒载体及用于诱导对黄热病毒的免疫反应的方法 |
| AU2012212463B2 (en) | 2011-01-31 | 2016-07-07 | Nanotherapeutics, Inc. | Recombinant viral vectors and methods for inducing a heterosubtypic immune response to influenza A viruses |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4059485A (en) * | 1976-11-03 | 1977-11-22 | Monsanto Company | Adaptation of cell lines to suspension culture |
| US4195130A (en) * | 1978-04-20 | 1980-03-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Propagation of feline infectious peritonitis virus in tissue cultures |
| AT358167B (de) * | 1978-12-22 | 1980-08-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- -meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)- -vakzinen |
| US4335215A (en) * | 1980-08-27 | 1982-06-15 | Monsanto Company | Method of growing anchorage-dependent cells |
| AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| US5114855A (en) * | 1990-04-19 | 1992-05-19 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for aggregating cells with small microspheres |
-
1990
- 1990-01-04 AT AT18/90A patent/AT393277B/de not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-01-03 CA CA 2073168 patent/CA2073168C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 EP EP19910901647 patent/EP0509008B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 AT AT91901647T patent/ATE114713T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-01-03 DK DK91901647T patent/DK0509008T3/da active
- 1991-01-03 RU SU925052917A patent/RU2099419C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-01-03 HU HU9202127A patent/HU212597B/hu unknown
- 1991-01-03 JP JP50199791A patent/JP2633392B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-03 WO PCT/AT1991/000003 patent/WO1991009937A1/de active IP Right Grant
- 1991-01-03 DE DE59103696T patent/DE59103696D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-03 YU YU391A patent/YU391A/sh unknown
- 1991-01-03 ES ES91901647T patent/ES2067921T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 US US07/854,630 patent/US5391491A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-04 SK SK12-91A patent/SK279200B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1991-01-04 CZ CS9112A patent/CZ279725B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-02 NO NO19922622A patent/NO310472B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 FI FI923099A patent/FI106241B/fi active
- 1992-11-25 HR HRP921353 patent/HRP921353A2/xx not_active Application Discontinuation
-
1994
- 1994-12-01 US US08/352,077 patent/US5550051A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2067921T3 (es) | 1995-04-01 |
| US5550051A (en) | 1996-08-27 |
| JPH05503843A (ja) | 1993-06-24 |
| FI923099A (fi) | 1992-07-03 |
| ATA1890A (de) | 1991-02-15 |
| EP0509008B1 (de) | 1994-11-30 |
| JP2633392B2 (ja) | 1997-07-23 |
| FI106241B (fi) | 2000-12-29 |
| US5391491A (en) | 1995-02-21 |
| ATE114713T1 (de) | 1994-12-15 |
| DE59103696D1 (de) | 1995-01-12 |
| HU212597B (en) | 1996-08-29 |
| SK279200B6 (sk) | 1998-07-08 |
| CA2073168A1 (en) | 1991-07-05 |
| FI923099A0 (fi) | 1992-07-03 |
| DK0509008T3 (da) | 1995-04-18 |
| HUT64583A (en) | 1994-01-28 |
| NO922622D0 (no) | 1992-07-02 |
| CZ279725B6 (cs) | 1995-06-14 |
| WO1991009937A1 (de) | 1991-07-11 |
| NO922622L (no) | 1992-07-23 |
| AT393277B (de) | 1991-09-25 |
| YU391A (sh) | 1994-04-05 |
| RU2099419C1 (ru) | 1997-12-20 |
| CS9100012A2 (en) | 1991-08-13 |
| EP0509008A1 (de) | 1992-10-21 |
| HRP921353A2 (en) | 1995-10-31 |
| CA2073168C (en) | 1999-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO310472B1 (no) | Biomasse og fremgangsmåte for fremstilling av virus/virusantigen | |
| Busch | [51] Isolation and purification of nuclei | |
| US6168944B1 (en) | Methods for cultivating cells and propagating viruses | |
| US6783983B1 (en) | Methods for cultivating cells and propagating viruses | |
| CN104152408B (zh) | 亚全能干细胞的制备方法 | |
| WO1998033886A1 (en) | Methods for cultivating cells and propagating viruses | |
| US4169761A (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| CN114807008B (zh) | 一种番茄叶片原生质体单细胞悬液的制备方法及应用 | |
| JP2018157827A (ja) | 細胞培養上清の濾過 | |
| US3143470A (en) | Rabies virus propagation in embryonic cells maintained in a medium containing pancreatic digest of casein | |
| CN114107181A (zh) | 一种鲟鱼胚胎细胞系、培养基及其制备方法 | |
| CN117143806B (zh) | 一株斜带石斑鱼仔鱼细胞系及其构建方法和应用 | |
| Crowley | The effect of developing embryos on plant viruses | |
| CN105106948A (zh) | 一种利用细胞工厂制备猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的方法 | |
| JPH06256207A (ja) | 抗変異原物質，抗ウイルス物質及び細胞増殖促進物質 | |
| RU2140451C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки suis domestica l. для культивирования вирусов животных | |
| CN116536257A (zh) | 一种用于细胞肉的可食性微载体及其制备方法 | |
| RU2082432C1 (ru) | Способ получения вакцины против клещевого энцефалита | |
| CN100370023C (zh) | 利用大菱鲆鳍细胞系繁殖大菱鲆出血性败血症病毒的方法 | |
| SU576968A3 (ru) | Способ получени вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота | |
| SU649215A1 (ru) | Способ получени протеолитического фермента | |
| CN117535153A (zh) | 纤毛虫体外培养液及纤毛虫的培养、增殖和长期保存方法 | |
| CN117511849A (zh) | 一种大口黑鲈脊髓组织细胞系及其构建方法与应用 | |
| JP2002281961A (ja) | 植物プロトプラストの単離方法 | |
| US20180318368A1 (en) | A method for producing a medium containing steroidal glycosides from plant cells of the genus hoodia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |