SK279200B6 - Biomasa na výrobu vírus/vírus antigénu jej použiti - Google Patents
Biomasa na výrobu vírus/vírus antigénu jej použiti Download PDFInfo
- Publication number
- SK279200B6 SK279200B6 SK12-91A SK1291A SK279200B6 SK 279200 B6 SK279200 B6 SK 279200B6 SK 1291 A SK1291 A SK 1291A SK 279200 B6 SK279200 B6 SK 279200B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- virus
- production
- viruses
- antigen
- biomass
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 80
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title abstract description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title abstract description 44
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 17
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 10
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24051—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka biomasy a spôsobu výroby vírus/vírus antigénu ako aj použitia biomasy.
Doterajší stav techniky
Spôsoby výroby vírus/vírus antigénu sú známe. Východiskovými materiálmi sú často tzv. primáme bunkové kultúry, ktoré sa získavajú z ľudských alebo zvieracích tkanív. Tieto primáme bunky sa infikujú vírusom (osevným vírusom) a antigén vírusu sa pripraví množením vírusu.
Metóda množovania napríklad vírusu ranej letnej meningoencefalitídy (FSME-vírusu) je opísaná v AT-B 358.167; embryonálne bunky kureniec sa suspendujú v kultivačnom médiu na bunky, infikujú vírusom a používajú ako biomasa na výrobu antigénu FSME-vírusu. S týmto cieľom sa biomasa uchováva v suspenzii za aeróbných podmienok pri teplote medzi 25 až 38 °C, a to počas piatich dní. Potom sa bunky a bunkové zlomky oddelia odstredením, získaná suspenzia vírusov sa inaktivuje formalínom a β-propiolaktónom a antigén vírusu sa koncentruje ultrafiltráciou, čistí a bežným spôsobom ďalej spracováva na vakcíny.
Pri zvyčajných preparáciách kultúr primárnych buniek sa kladie hlavne dôraz na to, aby sa získali jednotlivé bunky alebo pokiaľ možno najmenšie skupiny buniek. Aby sa toto dosiahlo, musí sa tkanivo pokiaľ možno najviac mechanicky a enzymaticky rozdrviť. Spracovanie vedie ale súčasne i k usmrteniu mnohých buniek. Ak sa takéto bunkové preparáty usadia na povrchu vhodných materiálov nosičov, zostanú mŕtve bunky hore a môžu sa odstrániť. Pri použití takýchto bunkových preparátov v suspenzných kultúrach na výrobu antigénu FSME-vírusu neexistuje ale žiadna možnosť oddeliť živé bunky od mŕtvych, prípadne poškodených buniek. V priebehu času sa objavujúca lýza buniek vedie následne k veľkému znečisteniu bunkovými proteínmi v médiu, ktoré sa dajú len ťažko oddeliť od požadovaného produktu.
I reprodukovateľnosť výroby vírus/vírus antigénu je pri použití jednotlivých buniek alebo malých bunkových agregátov v suspenzii malá, lebo tu dochádza k značnému poškodeniu buniek napríklad strižnými silami pri miešaní.
Vynález si kladie za úlohu odstrániť tieto nedostatky a tým dať k dispozícii biomasu na výrobu vírus/vírus antigénu, ktorá vyvíja pri kultivácii vysoký výrobný výkon vírus/vírus antigénu, dá sa s ňou jednoducho manipulovať a môže sa používať vo veľkopriemyselnom meradle na výrobu vírus/vírus antigénu, pričom vírus/vírus antigén sa môže získať z kultivačného média s vysokou čistotou.
Podstata vynálezu
Biomasa podľa vynálezu, ktorá zodpovedá uvedeným požiadavkám, pozostáva z bunkových agregátov s priemerom medzi 100 pm až 1 000 pm, je infikovaná vírusom.
Bunkové agregáty biomasy podľa vynálezu sa môžu získať mechanickým alebo enzymatickým spracovaním ľudského alebo zvieracieho tkaniva, pričom mechanickým spôsobom dezintegrované tkanivo sa môže pre ďalšie uvoľnenie bunkových agregátov ďalej rozdrviť s proteázou ako napríklad trypsinom, chymotrypsínom alebo elastázou až na požadovanú veľkosť bunkových agregátov.
Bunkové agregáty biomasy podľa vynálezu sa môžu ale tiež získať z ľudských alebo zvieracích jednotlivých buniek tým, že sa tieto spracujú s látkami vytvárajúcimi bunkové agregáty, ako napríklad aglutinínom.
Oddelenie bunkových agregátov a jednotlivých buniek s priemerom väčším ako 100 pm, prípadne menším ako 100 pm, sa môže vykonávať preosievaním alebo výhodne sedimentáciou. Sedimentácia sa dá v porovnaní s preosievaním vykonať jednoduchšie, lebo sitá s veľkosťou pórov 100 pm sa veľmi ľahko upchávajú. Ďalej sa sedimentácia zaobíde bez nákladných a drahých separátorov a ponúka i výhody, čo sa týka techniky sterilizácie. Ukázalo sa, že bunkové agregáty s priemerom medzi 100 až 1 000 pm sedimentujú rýchlosťou väčšou ako 1 cm/min., zatiaľ čo menšie bunkové agregáty rýchlosťou menšou ako 1 cm/min. Oddeľovanie častíc s veľkosťou menšou ako 1 000 pm sa môže vykonávať jednoducho preosievaním, lebo nebezpečenstvo upchania je tu malé.
Výhodná forma uskutočnenia biomasy podľa vynálezu je charakterizovaná tým, že táto má v suspendovanom stave v kultivačnom médiu vysokú metabolickú aktivitu; merané na spotrebe glukózy je metabolická aktivita na hodinu medzi 3 až 5 mg glukózy na gram biomasy.
Bunkové agregáty používané na prípravu biomasy podľa vynálezu majú ďalej tú výhodu, že produkujú už pri infekcii relatívne malým množstvom osevného vírusu veľké množstvá antigénu vírusu. Ukázalo sa, že na infekciu bunkových agregátov, ktoré sú menšie ako 100 pm alebo väčšie ako 1000 pm, sa musí použiť podstatne viac osevného vírusu, aby sa produkovali rovnaké množstvá vírus/vírus antigénu.
Produkcia vírus/vírus antigénu sa môže ďalej zvýšiť, keď sa biomasa podľa vynálezu uchováva pri koncentrácii kyslíka najmenej 0,01 mmól/1, výhodne aspoň 0,06 mmól/1 v kultivačnom médiu.
Je výhodné, keď kultivačné médium vykazuje koncentráciu bunkových agregátov najmenej 10 mg bunkových agregátov na 1 ml.
Biomasa podľa vynálezu sa hodí obzvlášť dobre na výrobu vírus/vírus antigénu ranej letnej meningoeneefalitídy (FSME), keď pozostáva z bunkových agregátov embryonálnych buniek vtákov, hlavne embryonálnych buniek kureniec, pričom výkon produkcie vírus/vírus antigénu sa ďalej zvýši, keď sa v kultivačnom médiu nastaví množstvo transferu kyslíka väčšie ako 1,60 mmólov O2l'h·', výhodne medzi 1,65 až 2,40 mmólov C^-H-h-l.
Transfer množstva kyslíka (oxygén transfer rate, OTR), vyjadrené v mmóloch O2-lFh'l, je ako známe meradlo na vnášanie kyslíka do bunkovej kultúry. Pohltené množstvo kyslíka (oxygén uptake rate, OUR) je opäť meradlom na metabolický výkon bunky všeobecne, a teda nepriamo na výkon syntézy vírus/vírus antigénu jednej bunky.
Pri všetkých dnes známych metódach výroby antigénu vírusu FSME je špecifický výkon produkcie antigénu vírusu obmedzený, lebo za prítomnosti väčšieho množstva infikovaných buniek v kultivačnom médiu môže dôjsť k poklesu jeho hodnoty pH, a tým k nežiaducej inaktivácii titru vírusu a zničeniu antigénu vírusu.
Zistilo sa, že hodnota pH takejto silne prevetrávanej kultúry sa nezníži, a že sa môže udržať konštantný a vysoký výkon produkcie vírus/vírus antigénu, keď sa do kultivačnej tekutiny vnáša dostatočné množstvo kyslíka, naprí2 klad vmiešavaním alebo pomocou statického a/alebo dynamického rozvádzača plynu.
Z meraní vyplynulo, že sa pri kultúre s hustotou buniek 2 x 10? buniek na mililiter, ktoré je v spojení s atmosférou kyslíka výlučne svojím povrchom, produkcia FSME vo veľkom meradle značne redukuje. Ak sa proti tomu kyslík vnáša do kultúry aktívne, tak sa môže výťažok antigénu veľmi zvýšiť.
Výhodná forma uskutočnenia spôsobu podľa vynálezu spočíva v tom, že sa množstvo transferu kyslíka nastaví väčšie ako 1,65 mmólov výhodne medzi 1,65 až 2,40 mmólov 02.1' .hpričom vlhká bunková hmota je v najlepšom prípade maximálne 30 g na liter kultivačného média.
Pokusy ukázali, že produkcia FSME-vírus/vírus antigénu je priamo úmerná koncentrácii bunkových agregátov použitých podľa vynálezu. Spôsob podľa vynálezu sa dá uskutočniť i pri koncentrácii bunkových agregátov menšej ako 10 mg/ml. V protiklade k tomu bolo konštatované, že v prípade kultivácie infikovaných jednotlivých buniek je bezpodmienečne nutná minimálna koncentrácia 10 mg/ml na produkciu vírus/antigénu.
Vysoký titer osevného vírusu nevyhnutný na infekciu kultúry primárnych buniek sa dosiahne iba množením vírusu v mozgu myši. V dôsledku toho, že bunkové agregáty podľa vynálezu sa môžu infikovať podstatne menším množstvom vírusu, môže sa osevný vírus potrebný na infekciu biomasy získať i z presahu bunkových kultúr. To zmenšuje značne možnosť kontaminácie mozgu myši proteínom.
Ďalej sa ukázalo, že sa biomasa podľa vynálezu, pozostávajúca z agregácií buniek embryonálnych vtáčích buniek hodí rovnako na výrobu antigénu vírusu influenzy, vaccinia vírusu alebo avipox vírusu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Vynález je bližšie vysvetlený pomocou nasledujúcich príkladov uskutočnení.
Príklad 1
Vplyv veľkosti agregátu buniek na výťažok antigénu
SPF (specific pathogen free) kuracie vajcia boli inkubované 12 dní pri 37 °C, pomocou šifrovacieho prístroja bol zisťovaný následný rast embrya, alkoholom sa vykonala dezinfekcia a v sterilnom boxe boli otvorené. Boli vybrané embryá, premyté a rozmrvené a rezacím strojom na hrubo rozdrvené. Potom nasledovalo enzymatické strávenie embryonálneho tkaniva prídavkom proteolytických enzýmov (1 mg/embryo) pri 37 °C počas 20 minút. Z tejto tkanivovej suspenzie boli oddelené časti tkaniva > 1000 pm preosiatím cez sito s veľkosťou ôk zodpovedajúcou > 1000 pm. Ďalšie delenie týchto bunkových agregátov sa mohlo dosiahnuť sedimentáciou, pričom ako kritérium delenia bol zvolený výťažok sedimentácie >-l cm/min. S týmto cieľom bola bunková suspenzia čerpaná s veľkosťou toku 1 cm/min. zdola nahor sedimentačnou nádobou. Jednotlivé bunky, prípadne malé agregáty buniek, zostali v suspenzii, zatiaľ čo väčšie zhluky buniek sa usadili na dne nádoby. Skúšky pomocou preosievania rôznych veľkostí pórov ukázali, že zhluky buniek usadzujúce sa za týchto podmienok vykazovali veľkostné rozdelenie < 1 000 pm, >
100 pm. Veľkosť zhlukov buniek, zostávajúcich v suspenzii, bola podľa toho < 100 pm.
Týmto spôsobom boli získané z bunkových agregátov tri frakcie:
1. < 100 pm
2. > 1 000 pm
3. < 1 000 pm> 100 pm.
Z týchto frakcií boli suspendované rovnaké koncentrácie biomasy (30 g na liter) v kultivačnom médiu (Med 199) a infikované FSME vírusom (1 x 10$ pfu na mg biomasy). Množenie vírusov sa vykonávalo pri 37 °C, pričom bunky boli uchovávané v suspenzii za rovnomerného miešania. Po štyroch dňoch bolo vytvorené množstvo antigénu vírusu zisťované pomocou ELISA.
V prípade frakcie 1 (bunkové agregáty menšie ako 100 pm) bola produkcia vírus/vírus antigénu 4,9 pm/ml; v prípade frakcie 2 (bunkové agregáty väčšie ako 1 000 pm) bola produkcia vírus/vírus antigénu 4,7 pm/ml; v prípade frakcie použitej podľa vynálezu bola produkcia vírus/vírus antigénu 9,3 pm/ml.
Príklad 2
Vplyv veľkosti bunkového agregátu na znečistenie CEC (chick embryo celí) proteínom
Kultivačné médiá frakcií 1 a 3, získané v príklade 1, boli dva dni po začiatku kultivácie skúšané na ich obsah CEC-proteínu. Kultivačné médium frakcie 1 obsahovalo 1,80 mg CEC-proteínu/ml, zatiaľ čo v kultivačnom médiu frakcie 3 bolo zistené iba 0,84 mg CEC-proteínu/ml.
Príklad 3
Vplyv množstva osevného vírusu na produkciu vírus/antigénu
Boli kultivované, ako je opísané v príklade 1, biomasy s veľkosťou bunkových agregátov frakcii 1 a 3 a určovaná produkcia vírus/antigénu, pričom pre frakciu boli na infekciu použité štyri rôzne veľké množstvá osevného vírusu (3,2.1θ3 pfu, 1.10** pfu, 3,2.10^ a 1.10^ pfu, vždy na 1 mg biomasy). Výsledky možno spoznať z nasledujúcej tabuľky 1, z čoho vyplýva, že frakcia 3 použitá podľa vynálezu pri rovnakom množstve osevného vírusu vykazuje podstatne vyššiu produkciu virus/vírus antigénu.
Tabuľka 1
| Množstvo osevného vírusu na Infekciu /pfu pre mg biomasy | Výťažok vírus/vírus antigénu (pg/ml) | |
| frakcia 1 | frakcia 3 | |
| 3,2 103pfu | 2.0 pg/ml | 8,8 pg/ml |
| 1 .104 pfu | 3,2 pg/ml | 10,3 pgénl |
| 3,2 .10« pfu | 5.0 pg/ml | 11.0 pg/ml |
| 1.10® pfu | 5,0 pg/ml | 11.0 pg/ml |
Príklad 4
Vplyv koncentrácie kyslíka na produkciu antigénu
Podľa podmienok uvedených v príklade 1 bola biomasa podľa vynálezu kultivovaná pri rôznych koncentráciách kyslíka v kultivačnom médiu a stanoví sa množstvo vírus/vírus antigénu. Výsledky sú reprodukované v nasledujúcej tabuľke 2, pričom výťažok vírus/vírus antigénu sa počítal z koncentrácie kyslíka 0,06 mól/1, ktorá sa rovnala 100%.
Tabuľka 2
| Koncentrácia kyslíka | Výťažok vínjsMruu antigénu |
| 0.06 mmói/l | 100% |
| 0.02 mmól/1 | 90% |
| 0.004 mmól/1 | 35% |
| 0 mmól/1 | 10% |
Príklad 5
Vplyv transferu kyslíka na výťažok vírus/antigénu
Biomasa bola rovnako ako je to opísané v príklade 1, s bunkovými agregátmi frakcie 3 infikovaná vírusom, kultivovaná v rôzne veľkých kultivačných nádobách a zaplynovaná vzduchom, aby sa dosiahli vysoké hodnoty OTR. Suspenzia bola uchovávaná 4 dni pri teplote 33 °C - 37 °C a bol stanovovaný výťažok vírus/antigénu (pozri tabuľku 3).
Tabuľka 3
7. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že sa na výrobu FSME vírus/vírus-antigénu ranej letnej menigoencefalitídy kultivujú benkové agregáty embryonálnych buniek vtákov, hlavne embryonálne bunky kureniec.
8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa t ý m , že sa v kultivačnom médiu nastaví prenosové množstvo kyslíka väčšie ako 1,60 mmól C^.ľ’.lť1, výhodne v rozmedzí 1,65 až 2,40 mmól O2.r‘.hl.
9. Spôsob podľa nároku 8, vyznačujúci sa t ý m , že sa pri prenosovom množstve kyslíka 1,65 mmól Oj.r’.h’1 nastaví množstvo biomasy maximálne 30 g/1 kultivačného média.
10. Použitie biomasy podľa niektorého z nárokov 1 až 4, pozostávajúcej z bunkových agregátov embryonálnych buniek vtákov, na výrobu vírus antigénu influenza - vírusu, vaccinia - vírusu alebo avipox - vírusu.
11. Použitie bunkových agregátov s priemerom v rozmedzí 100 až 1000 pm na výrobu biomasy podľa nároku 1.
| Kultivačná nádoba | Pracovný objem | OTR | Výťažok vírus/antigénu |
| 0,51 | 0.1 | 2.38 | 5.8 |
| (technická kult, rád.) | 0.3 | 0.795 | 0.87 |
| 21 | 0.3 | 1,65 | 2.0 |
| (technická kult, rád.) 101 miešacia fľaša (dĺžka miešadia | 1.0 | 0.49 | 0.32 |
| 5,5 cm, 150 -160 opm) 501 miešacia fľaša (dĺžka miešadia | 3.0 | 0.41 | 0.38 |
| 15 cm, 80 - 90 opm) | 18 | 1.10 | 0.97 |
| 30 | 0.87 | 0.22 |
Koniec dokumentu
Pracovný objem: liter, OTR: mmól O2.H h’1 výťažok vírus/antigénu: pg/ml (stanovené pomocou ELISA).
Z výsledkov uvedených v tabuľke 3 možno odvodiť, že pri OTR väčšej ako 2 sa dajú dosiahnuť výťažky vírus/antigén asi 6 pg/ml.
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Biomasa na výrobu vírus/vírus-antigénu pozostávajúca z bunkových agregátov s priemerom medzi 100 pm až 1000 pm, infikovaná vírusom.
- 2. Biomasa podľa nároku 1, pripraviteľná mechanickým a enzymatickým spracovaním ľudského alebo zvieracieho tkaniva.
- 3. Biomasa podľa nároku 1, pripraviteľná z ľudských alebo zvieracích jednotlivých buniek spracovaním s látkami vyvolávajúcimi agregáciu buniek.
- 4. Biomasa podľa nároku 1, vyznačujúca sa t ý m , že jej metabolická aktivita pri suspendovaní v kultivačnom médiu, meraná na spotrebe glukózy, je za hodinu 1 až 5 mg glukózy na gram biomasy.
- 5. Spôsob výroby virus/vírus-antigénu s použitím biomasy podľa jedného alebo niekoľkých nárokov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že sa vykonáva v kultivačnom médiu pri koncentrácii kyslíka aspoň 0,01 mmól/1, výhodne aspoň 0,06 mmól/1.
- 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že sa vykonáva v kultivačnom médiu, ktoré obsahuje aspoň 10 mg agregátov na mililiter.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT18/90A AT393277B (de) | 1990-01-04 | 1990-01-04 | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK279200B6 true SK279200B6 (sk) | 1998-07-08 |
Family
ID=3479351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK12-91A SK279200B6 (sk) | 1990-01-04 | 1991-01-04 | Biomasa na výrobu vírus/vírus antigénu jej použiti |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5391491A (sk) |
| EP (1) | EP0509008B1 (sk) |
| JP (1) | JP2633392B2 (sk) |
| AT (2) | AT393277B (sk) |
| CA (1) | CA2073168C (sk) |
| CZ (1) | CZ279725B6 (sk) |
| DE (1) | DE59103696D1 (sk) |
| DK (1) | DK0509008T3 (sk) |
| ES (1) | ES2067921T3 (sk) |
| FI (1) | FI106241B (sk) |
| HR (1) | HRP921353A2 (sk) |
| HU (1) | HU212597B (sk) |
| NO (1) | NO310472B1 (sk) |
| RU (1) | RU2099419C1 (sk) |
| SK (1) | SK279200B6 (sk) |
| WO (1) | WO1991009937A1 (sk) |
| YU (1) | YU391A (sk) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5719051A (en) * | 1989-12-22 | 1998-02-17 | Immuno Aktiengesellschaft | Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen |
| AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| ES2378409T3 (es) | 1994-11-10 | 2012-04-12 | Baxter Healthcare S.A. | Método para producir sustancias biológicas en cultivo sin proteínas |
| US5753489A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-19 | Immuno Ag | Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture |
| US6146873A (en) * | 1994-11-10 | 2000-11-14 | Baxter Aktiengesellschaft | Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media |
| US5756341A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-26 | Immuno Ag | Method for controlling the infectivity of viruses |
| US5698433A (en) * | 1994-11-10 | 1997-12-16 | Immuno Ag | Method for producing influenza virus and vaccine |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| BR9804283B1 (pt) * | 1998-03-18 | 2010-11-30 | processo para a produção de flavivìrus em baixa densidade de células em cultura e processo para a produção de flavivìrus recombinante em baixa densidade de células em cultura. | |
| US7445924B2 (en) | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
| US20040023358A1 (en) * | 2001-12-21 | 2004-02-05 | Wyeth | Avian embryo particulate biomass for the production of virus antigens |
| CA2494379C (en) * | 2002-09-05 | 2012-11-06 | Bavarian Nordic A/S | Method for the cultivation of primary cells and for the amplification of viruses under serum free conditions |
| US7998488B2 (en) * | 2008-11-14 | 2011-08-16 | Baxter International Inc. | Vaccine formulations and uses thereof |
| JP2013538577A (ja) | 2010-09-23 | 2013-10-17 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 組み換えウイルスベクターおよび黄熱病ウイルスに対する免疫反応を惹起するための方法 |
| JP6169494B2 (ja) | 2011-01-31 | 2017-07-26 | ナノセラピューティクス・インコーポレイテッドＮａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． | インフルエンザａウイルスに対するヘテロサブタイプ免疫応答を誘導するための組換えウイルスベクターおよび方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4059485A (en) * | 1976-11-03 | 1977-11-22 | Monsanto Company | Adaptation of cell lines to suspension culture |
| US4195130A (en) * | 1978-04-20 | 1980-03-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Propagation of feline infectious peritonitis virus in tissue cultures |
| AT358167B (de) * | 1978-12-22 | 1980-08-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- -meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)- -vakzinen |
| US4335215A (en) * | 1980-08-27 | 1982-06-15 | Monsanto Company | Method of growing anchorage-dependent cells |
| AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| US5114855A (en) * | 1990-04-19 | 1992-05-19 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for aggregating cells with small microspheres |
-
1990
- 1990-01-04 AT AT18/90A patent/AT393277B/de not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-01-03 DE DE59103696T patent/DE59103696D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-03 RU SU925052917A patent/RU2099419C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-01-03 AT AT91901647T patent/ATE114713T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-01-03 JP JP50199791A patent/JP2633392B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-03 YU YU391A patent/YU391A/sh unknown
- 1991-01-03 DK DK91901647T patent/DK0509008T3/da active
- 1991-01-03 ES ES91901647T patent/ES2067921T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 WO PCT/AT1991/000003 patent/WO1991009937A1/de active IP Right Grant
- 1991-01-03 CA CA 2073168 patent/CA2073168C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 US US07/854,630 patent/US5391491A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 HU HU9202127A patent/HU212597B/hu unknown
- 1991-01-03 EP EP19910901647 patent/EP0509008B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-04 CZ CS9112A patent/CZ279725B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-01-04 SK SK12-91A patent/SK279200B6/sk not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-02 NO NO19922622A patent/NO310472B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 FI FI923099A patent/FI106241B/fi active
- 1992-11-25 HR HRP921353 patent/HRP921353A2/xx not_active Application Discontinuation
-
1994
- 1994-12-01 US US08/352,077 patent/US5550051A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HRP921353A2 (en) | 1995-10-31 |
| EP0509008A1 (de) | 1992-10-21 |
| AT393277B (de) | 1991-09-25 |
| RU2099419C1 (ru) | 1997-12-20 |
| YU391A (sh) | 1994-04-05 |
| CA2073168C (en) | 1999-04-27 |
| JP2633392B2 (ja) | 1997-07-23 |
| CA2073168A1 (en) | 1991-07-05 |
| ATA1890A (de) | 1991-02-15 |
| HU212597B (en) | 1996-08-29 |
| WO1991009937A1 (de) | 1991-07-11 |
| FI106241B (fi) | 2000-12-29 |
| DK0509008T3 (da) | 1995-04-18 |
| US5391491A (en) | 1995-02-21 |
| NO922622L (no) | 1992-07-23 |
| DE59103696D1 (de) | 1995-01-12 |
| JPH05503843A (ja) | 1993-06-24 |
| NO922622D0 (no) | 1992-07-02 |
| FI923099A0 (fi) | 1992-07-03 |
| CS9100012A2 (en) | 1991-08-13 |
| ES2067921T3 (es) | 1995-04-01 |
| CZ279725B6 (cs) | 1995-06-14 |
| HUT64583A (en) | 1994-01-28 |
| US5550051A (en) | 1996-08-27 |
| NO310472B1 (no) | 2001-07-09 |
| EP0509008B1 (de) | 1994-11-30 |
| FI923099A (fi) | 1992-07-03 |
| ATE114713T1 (de) | 1994-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK279200B6 (sk) | Biomasa na výrobu vírus/vírus antigénu jej použiti | |
| CN109068710B (zh) | 一种用于生产和使用菌丝体化的高蛋白质食物组合物的方法 | |
| CN100335619C (zh) | 大规模生产病毒抗原的方法 | |
| Van Hemert et al. | Homogeneous cultivation of animal cells for the production of virus and virus products | |
| KR101831284B1 (ko) | 무혈청 배지에서 부유배양 되는 Vero 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 | |
| JP5096920B2 (ja) | ウイルス物質の製造方法 | |
| US4169761A (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| US3935066A (en) | Cell lines | |
| RU2082757C1 (ru) | Субстрат для культивирования флавивирусов или ареновирусов на основе культуры клеток и способ получения антигена флавивируса или ареновируса | |
| CN105779373A (zh) | 一种适宜稻曲病菌产孢的核糖培养基及其应用方法 | |
| US5719051A (en) | Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen | |
| SU1090261A3 (ru) | Способ получени биомассы базидиомицетов | |
| RU2102472C1 (ru) | Способ получения биомассы чумного микроба | |
| CN105779374A (zh) | 一种适宜稻曲病菌产孢的木糖培养基及其应用方法 | |
| RU2353649C2 (ru) | Способ культивирования лептоспир | |
| Yu et al. | Reproduction of Strain Sof'in Forest-Spring Encephalitis in Vero Cell Line Cultured on Microcarrier under Pseudo-submerged Conditions | |
| RU2121501C1 (ru) | Штамм перевиваемой культуры клеток почки кошки пк-91 для репродукции парвовирусов плотоядных | |
| US3712944A (en) | Stemlon and its production | |
| Shameem et al. | In Vitro Difference between an Attenuated ML-17 and its Parental Virulent JaOH0566 Strain of Japanese Encephalitis Virus | |
| GB2082202A (en) | Method of increasing virus yield | |
| WO2011047900A2 (en) | Novel process | |
| UA56033C2 (en) | A method for producing the paste-like enthomocide biological preparation based on bacillus thuringiensis | |
| JPS5951996B2 (ja) | 酵母溶解微生物用培地 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20100104 |