CZ279725B6 - Biomasa pro výrobu vir/vir antigenu - Google Patents
Biomasa pro výrobu vir/vir antigenu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ279725B6 CZ279725B6 CS9112A CS1291A CZ279725B6 CZ 279725 B6 CZ279725 B6 CZ 279725B6 CS 9112 A CS9112 A CS 9112A CS 1291 A CS1291 A CS 1291A CZ 279725 B6 CZ279725 B6 CZ 279725B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- virus
- biomass
- antigen
- production
- cell
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 88
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title abstract description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title abstract description 44
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 16
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 claims abstract description 7
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 60
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 17
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 3
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 claims description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 5-fluoro-3-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1C(F)=CNC(=O)N1C1C2=CC=CC=C2C(=O)O1 LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24051—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Biomasa pro výrobu vir/vir antigenu sestává z buněčných agregátů s průměrem mezi 100 um až 1000 um. Biomasa má v suspensi v kultivačním médiu vysokou metabolickou aktivitu a je infikována virem. Dovoluje velkoprovozní výrobu čistého vir/vir antigenu a hodí se zejména pro výrobu FSME vir/vir antigenu.ŕ
Description
Biomasa pro výrobu vir/vir antigenu, její použití a způsob výroby vir/vir antigenu
Oblast techniky
Vynález se týká biomasy a způsobu výroby vir/vir antigenu.
Dosavadní stav techniky
Způsoby výroby vir/vir antigenu jsou známé. Výchozími materiály jsou často tak zvané primární buněčné kultury, které se získávají z lidských nebo zvířecích tkání. Tyto primární buňky se infikují virem /osevním virem/ a antigen viru se připraví pomnožením viru.
Metoda pomnožování například viru ranné letní meningoencefalitidy /FSME-viru/ je popsána v AT-B 358 167 : embryonální buňky kuřat se suspendují v kultivačním médiu pro buňky, infikují virem a používají jako biomasa pro výrobu antigenu FSME-viru. Za tím účelem se biomasa uchovává v suspenzi za aerobních podmínek při teplotě mezi 25 až 38 °C a to po dobu pěti dní. Potom se buňky a buněčné zlomky oddělí odstředěním, získaná suspenze virů se inaktivuje formalinem a B-propiolaktonem a antigen viru se koncentruje ultrafiltrací, čistí a obvyklým způsobem dále zpracovává na vakcíny.
Při obvyklých preparacích kultur primárních buněk se klade zejména váha na to, aby se získaly jednotlivé buňky nebo co možná nejmenší skupiny buněk. Aby se toto dosáhlo, musí se tkáň co možná nejvíce mechanicky a enzymaticky rozmělnit. Zpracování vede ale současně i k usmrcení četných buněk. Jestliže se takovéto buněčné preparáty usadí na povrchu vhodných materiálů nosičů, zůstanou mrtvé buňky nahoře a mohou se odstranit. Při použití takovýchto buněčných preparátů v suspenzích kultur pro výrobu antigenu FSME-viru neexistuje ale žádná možnost, oddělit živé buňky od mrtvých, popřípadě poškozených buněk. Během času se objevující lyse buněk vede následně k velkému znečištění buněčnými proteiny v médiu, které se dají jen těžko oddělit od požadovaného produktu.
I reprodukovatelnost výroby vir/vir antigenu je při použití jednotlivých buněk nebo malých buněčných agregátů v suspenzi malá, neboť zde dochází ke značnému poškození buněk například střižnými silami při míchání.
Vynález si klade za úkol odstranit tyto nedostatky a tím dát k dispozici biomasu pro výrobu vir/vir antigenu, která vyvíjí při kultivaci vysoký výrobní výkon vir/vir antigenu, dá se s ní jednoduše manipulovat a může se používat ve velkoprůmyslovém měřítku pro výrobu vir/vir antigenu, přičemž vir/vir antigen se může získat z kultivačního média ve vysoké čistotě.
Podstata vynálezu
Biomasa podle vynálezu, která odpovídá uvedeným požadavkům, sestává z buněčných agregátů s průměrem mezi 100 μιη až 1000 μιη.
-1CZ 279725 B6
Buněčné agregáty biomasy podle vynálezu se mohou získat mechanickým nebo enzymatickým zpracováním lidské nebo zvířecí tkáně, přičemž mechanickým způsobem dezintegrovaná tkáň se může pro další uvolnění buněčných agregátů dále rozmělnit s proteázou, jako například trypsinem, chymotrypsinem nebo elastázou až na požadovanou velikost buněčných agregátů.
Buněčné agregáty biomasy podle vynálezu se mohou ale také získat z lidských nebo zvířecích jednotlivých buněk tím, že se tyto zpracují s látkami, vytvářejícími buněčné agregáty, jako například aglutinem.
Oddělení buněčných agregátů a větším než 100 μπι, popřípadě menším prosíváním nebo s výhodou sedimentací, nání s prosíváním provést jednodušeji, pórů 100 μπι se velmi snadno bez nákladných a drahých separátorů a techniky sterilizace. Ukázalo se, mezi 100 až zatím co menší Oddělování částic s velikostí menší jednotlivých buněk s průměrem než 100 μπι, se může provádět Sedimentace se dá ve srovneboť síta a velikosti ucpávají. Dále se sedimentace obejde nabízí i výhody co se týká že buněčné agregáty s průměrem 1000 μπι sedimentují rychlostí větší buněčné agregáty rychlostí menší než 1000 μπι se může provádět jednoduše prosíváním, neboť nebezpečí ucpání je zde malé.
než 1 cm/min, než 1 cm/min.
Výhodná forma provedení biomasy podle vynálezu je charakterizována tím, že tato má v suspendovaném stavu v kultivačním médiu vysokou metabolickou aktivitu; měřeno na spotřebě glukózy činí metabolická aktivita pro hodinu mezi 3 až 5 mg glukózy na gram biomasy.
Buněčné agregáty, používané pro přípravu biomasy podle vynálezu, mají dále tu výhodu, že produkují již při infekci relativně malým množstvím osevního viru velká množství antigenu viru. Ukázalo se, že pro infekci buněčných agregátů, které jsou menší než 100 μπι nebo větší než 1000 μπι, se musí použít podstatně více osevního viru, aby se produkovala stejná množství vir/vir antigenu.
Produkce vir/vir antigenu se může dále zvýšit, když se biomasa podle vynálezu uchovává při koncentraci kyslíku nejméně 0,01 mmol/1, s výhodou alespoň 0,06 mmol/1 v kultivačním médiu.
Je výhodné, když kultivační médium vykazuje koncentraci buněčných agregátů nejméně 10 mg buněčných agregátů na 1 ml.
Biomasa podle vynálezu se hodí obzvláště dobře pro výrobu vir/vir antigenu viru ranné letní meningoencefalitidy /FSME/, když sestává z buněčných agregátů embryonálních buněk ptáků, zejména embryonálních buněk kuřat, přičemž výkon produkce vir/vir antigenu se dále zvýší, když se v kultivačním médiu nastaví množství transferu kyslíku větší než 1,60 mmolů 02·1-1 . h , s výhodou mezi 1,65 az 2,40 mmolu 02-l . h
Transfer množství kyslíku /oxygen transfer rate, OTR/, vyjádřeno v mmolech 02-l .h , je jak známo měřítkem pro vnášeni
-2CZ 279725 B6 kyslíku do buněčné kultury. Pohlcené množství kyslíku /oxygen uptake rate, OUR/ je opět měřítkem pro metabolický výkon buňky obecně a tedy nepřímo pro výkon syntézy vir/vir antigenu jedné buňky.
U všech dnes známých metod výroby antigenu viru FSME je specifický výkon produkce antigenu viru omezen, nebot za přítomnosti většího množství infikovaných buněk v kultivačním médiu může dojít k poklesu jeho hodnoty pH a tím k nežádoucí inaktivaci titru viru a zničení antigenu viru.
Bylo zjištěno, že hodnota pH takovéto silně provětrávané kultury se nesníží, a že se může udržet konstantní a vysoký výkon produkce vir/vir antigenu, když se do kultivační tekutiny vnáší dostatečné množství kyslíku, například vmícháváním nebo pomoci statického a/nebo dynamického rozvaděče plynu.
Z měření vyplynulo, že se u kultury s hustotou buněk 2 x 107 buněk na mililitr, které je ve spojeni s atmosférou kyslíku výlučně svým povrchem, produkce FSME ve velkém měřítku značně redukuje. Jestliže se naproti tomu kyslík vnáší do kultury aktivně, tak se může výtěžek antigenu velice zvýšit.
Výhodná forma provedení způsobu podle vynálezu spočívá v tom, že se množství transferu kyslíku nastaví větší než β _ 1 _ Ί e
1,65 mmolu O2.l . h , s výhodou mezi 1,65 až 2,40 mmolu — Ί — Ί
O2.l . h , pricemz vlhka buněčná hmota činí v nej lepším případě maximálně 30 g na litr kultivačního média.
Pokusy ukázaly, že produkce FSME-viru/vir-antigenu je přímo úměrná koncentraci buněčných agregátů, použitých podle vynálezu. Způsob podle vynálezu se dá provést i při koncentraci buněčných agregátů menši než 10 mg/ml. V protikladu k tomu bylo konstatováno, že v případě kultivace infikovaných jednotlivých buněk je bezpodmínečně nutná minimální koncentrace 10 mg/ml pro produkci viru/antigenu.
Vysoký titr osevního viru, nezbytný pro infekci kultury primárních buněk, se dosáhne pouze pomnožením viru v mozku myši. V důsledku toho, že buněčné agregáty podle vynálezu se mohou infikovat podstatně menším množstvím viru, může se osevní vir, potřebný pro infekci biomasy, získat i z přesahu buněčných kultur. To zmenšuje značně možnost kontaminace proteinem mozku myši.
Dále se ukázalo, že se biomasa podle vynálezu, sestávající z agregací buněk embryonálních ptačích buněk hodí rovněž pro výrobu antigenu viru influenzy, vaccinia viru, nebo avipox viru.
Příklady provedeni vynálezu
Vynález je blíže vysvětlen pomoci následujících příkladů provedení.
-3CZ 279725 B6
Příklad 1
Vliv velikosti agregátu buněk na výtěžek antigenu SPF /specific pathogen free/ kuřecí vejce byly inkubovány 12 dní při 37 °C, pomocí šlírovacího přístroje byl zjišťován následný růst embrya, alkoholem se provedla dezinfekce a ve sterilním boxu byla otevřena. Byly vyjmuty embryony, promyty a rozmělněny a řezacím strojem na hrubo rozmělněny. Potom následovalo enzymatické strávení embryonální tkáně přídavkem proteolytických enzymů /1 mg/ embryo /při 37 °C po dobu 20 minut. Z této tkáňové suspenze byly odděleny části tkáně > 1000 μιη přesátím přes síto s velikostí ok > 1000 μιη. Další dělení těchto buněčných agregátů se mohlo dosáhnout sedimentací, přičemž jako kritérium dělení byl zvolen výtěžek sedimentace > -1 cm/min. Za tímto účelem byla buněčná suspenze čerpána s rychlostí toku 1 cm/min zdola nahoru sedimentační nádobou. Jednotlivé buňky, popřípadě malé agregáty buněk zůstaly v suspenzi, zatím co větší shluky buněk se usadily na dně nádoby. Zkoušky pomocí prosívání síty různých velikostí pórů ukázaly, že shluky buněk, usazující se za těchto podmínek, vykazovaly velikostní rozděleni < 1000 μιη a > 100 μη. Velikost shluků buněk, zbývajících v suspenzi byla podle toho < 100 μη.
Tímto způsobem byly získány z buněčných agregátů tři frakce.
1. < 100 μπι
2. > 1000 μη
3. < 1000 μπι, > 100 μη
Z těchto frakcí byly suspendovány stejné koncentrace biomasy /30 g na litr/ v kultivačním médiu /Med 199/ a infikovány FSME virem /1 x 105 pfu na mg biomasy/. Pomnožení virů se provádělo při 37 °C, přičemž buňky byly uchovávány v suspenzi za rovnoměrného míchání. Po čtyřech dnech bylo vytvořené množství antigenu viru zjišťováno pomocí ELISA.
V případě frakce 1 /buněčné agregáty menší než 100 μη/όίηι13 produkce vir/vir antigenu 4,9 μg/ml; v případě frakce 2 /buněčné agregáty větší než 1000 μπι/ činila produkce vir/vir antigenu 4,7 μg/ml/,· v případě frakce,' použité podle vynálezu, činila produkce vir/vir antigenu 9,3 μg/ml.
Příklad 2
Vliv velikosti buněčného agregátu na znečištění CEC /chick embryo cell/ proteinem
Kultivační média frakcí 1 a 3, získaná v příkladu 1, byla dva dny po počátku kultivace zkoušena na jejich obsah CEC-proteinu. Kultivační médium frakce 1 obsahovalo 1,80 mg CEC-proteinu/ml, zatím co v kultivačním médiu frakce 3 bylo zjištěno pouze 0,84 mg CEC proteinu/ml.
-4CZ 279725 B6
Příklad 3 pro frakci byly pro osevního viru
Vliv množství osevního viru na produkci vir/antigenu Byly kultivovány, jak je popsáno s velikostí buněčných agregátů frakcí 1 a vir/antigenu, přičemž různě velká množství 3,2.104 r*” - Ί Ίη5 nat z následující tabulky 1, z čehož vyplývá, že frakce 3, tá podle vynálezu, při stejném množství osevního viru podstatně vyšší produkci vir/vir antigenu.
v příkladu 1, biomasy 3 a určována produkce infekci použity čtyři /3,2 . 103 pfu, 1.104 pfu, pfu a 1.10° pfu, vždy na 1 mg biomasy/. Výsledky lze sezpouživykazuje
Tabulka 1
| množství osevního viru | výtěžek vir/vir antigenu | |
| pro infekci | ^g/ml/ | |
| pfu pro mg biomasy | frakce 1 | frakce 3 |
| 3,2 . 103 pfu | 2,0 μg/ml | 8,8 μg/ml |
| 1 . 104 pfu | 3,2 μg/ml | 10,3 μg/ml |
| 3,2 . 104 pfu | 5,0 μg/ml | 11,0 μ9^1 |
| 1 . 105 pfu | 5,0 μg/ml | 11,0 μg/ml |
Příklad 4
Vliv koncentrace kyslíku na produkci antigenu
Podle podmínek, uvedených v příkladu 1, byla biomasa podle vynálezu kultivována při různých koncentracích kyslíku v kultivačním médiu a stanoveno množství vir/vir antigenu. Výsledky jsou reprodukovány v následující tabulce 2, přičemž výtěžek vir/vir antigenu při koncentraci kyslíku 0,06 mol/1 byl položen rovným 100 %.
Tabulka 2
| koncentrace kyslíku | výtěžek vir/vir antigenu |
| 0,06 mmolu/1 | 100 % |
| 0,02 mmolu/1 | 90 % |
| 0,004 mmolu/1 | 35 % |
| 0 | 10 % |
Příklad 5
Vliv transferu kyslíku na výtěžek vir/antigenu
Biomasa byla stejně, jako je to popsáno v příkladu 1, s buněčnými agregáty frakce 3 infikována virem, kultivována v různě velkých kultivačních nádobách a zaplynována vzduchem, aby se
-5CZ 279725 B6 dosáhlo vysokých hodnot OTR. Suspenze byla uchovávána 4 dny při teplotě 33 °C - 37 °C a byl stanovován výtěžek vir/antigenu viz tabulka 3 .
Tabulka 3
| kultivační nádoba | pracovní objem | OTR | výtěžek vir/vir antigenu |
| 0,5 1 přadlák | 0,1 | 2,38 | 5,9 |
| /technický.přadlák/ | 0,3 | 0,795 | 0,97 |
| 2 1 přadlák | 0,3 | 1,65 | 2,0 |
| /technický přadlák/ | 1,0 | 0,49 | 0,32 |
| 10 1 míchací láhev | |||
| /délka míchadla | |||
| 5,5 cm, 150-160 opm/ | 3,0 | 0,41 | 0,38 |
| 50 1 míchací láhev | |||
| /délka míchadla | |||
| 15 cm,80-90 opm/ | 18 | 1,10 | 0,97 |
| 30 | 0,87 | 0,22 |
Pracovní objem: litr, OTR: mmol O2.l-1.h-1 výtěžek vir/antigenu: μg/ml /stanoveno pomocí ELISA/.
Z výsledků uvedených v tabulce 3 lze odvodit, že při OTR větším než 2 se dají dosáhnout výtěžky vir/antigen asi 6 μg/ml.
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Biomasa pro výrobu vir/vir-antigenu, sestávající z buněčných agregátů s průměrem mezi 100 μιη až 1000 μιη, infikovaná virem.
- 2. Biomasa podle nároku 1, připravitelná mechanickým a enzymatickým zpracováním lidské nebo zvířecí tkáně.
- 3. Biomasa podle nároku 1, připravitelná z lidských nebo zvířecích jednotlivých buněk zpracováním s látkami, vyvolávajícími agregaci buněk.
- 4. Biomasa podle nároku 1, jejíž metabolická aktivita při suspendování v kultivačním médiu, měřená na spotřebě glukózy, činí za hodinu 1 až 5 mg glukózy pro gram biomasy.
- 5. Způsob výroby vir/vir-antigenu za použití biomasy podle jednoho nebo několika nároků 1 až 4 , vyznačující se tím, že se provádí v kultivačním médiu při koncentraci kyslíku alespoň 0,01 mmol/1, výhodně alespoň 0,06 mmol/1,-6CZ 279725 B6
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se provádí v kultivačním médiu, které obsahuje alespoň 10 mg agregátů pro mililitr.
- 7. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se pro výrobu FSME vir/vir-antigenu ranné letní meningoencefalitidy kultivují buněčné agregáty embryonálních buněk ptáků, zejména embryonální buňky kuřat.
8 . Způsob podle nároku 7, vyznačují c í se tím, že se v kultivačním médiu nastaví přenosové množství kyslíku větší než 1,60 mmol O2.l-1.h 1, výhodně v rozmezí 1,65 až 2,4 0 mmol 02·1 ^.h -1·. 9 . Způsob podle nároku 8, vyznačují c i se tím, že se při přenosovém množství kyslíku 1, 65 mmo1 0 2 nastaví množství biomasy maximálně 30g/l kultivačního média. - 10. Použití biomasy podle nároků 1 až 4, sestávající z buněčných agregátů embryonálních buněk ptáků, pro výrobu vir antigenu influenza-viru, vaccinia-viru nebo avipox-viru.
- 11. Použiti buněčných agregátů s průměrem v rozmezí 100 až 1000 μιη pro výrobu biomasy podle nároku 1.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT18/90A AT393277B (de) | 1990-01-04 | 1990-01-04 | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS9100012A2 CS9100012A2 (en) | 1991-08-13 |
| CZ279725B6 true CZ279725B6 (cs) | 1995-06-14 |
Family
ID=3479351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS9112A CZ279725B6 (cs) | 1990-01-04 | 1991-01-04 | Biomasa pro výrobu vir/vir antigenu |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5391491A (cs) |
| EP (1) | EP0509008B1 (cs) |
| JP (1) | JP2633392B2 (cs) |
| AT (2) | AT393277B (cs) |
| CA (1) | CA2073168C (cs) |
| CZ (1) | CZ279725B6 (cs) |
| DE (1) | DE59103696D1 (cs) |
| DK (1) | DK0509008T3 (cs) |
| ES (1) | ES2067921T3 (cs) |
| FI (1) | FI106241B (cs) |
| HR (1) | HRP921353A2 (cs) |
| HU (1) | HU212597B (cs) |
| NO (1) | NO310472B1 (cs) |
| RU (1) | RU2099419C1 (cs) |
| SK (1) | SK279200B6 (cs) |
| WO (1) | WO1991009937A1 (cs) |
| YU (1) | YU391A (cs) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5719051A (en) * | 1989-12-22 | 1998-02-17 | Immuno Aktiengesellschaft | Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen |
| AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| US6146873A (en) * | 1994-11-10 | 2000-11-14 | Baxter Aktiengesellschaft | Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media |
| EP2290053A1 (en) | 1994-11-10 | 2011-03-02 | Baxter Healthcare S.A. | Method for producing Influenza virus in protein-free cell culture medium |
| US5753489A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-19 | Immuno Ag | Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture |
| US5698433A (en) * | 1994-11-10 | 1997-12-16 | Immuno Ag | Method for producing influenza virus and vaccine |
| US5756341A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-26 | Immuno Ag | Method for controlling the infectivity of viruses |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| BR9804283B1 (pt) * | 1998-03-18 | 2010-11-30 | processo para a produção de flavivìrus em baixa densidade de células em cultura e processo para a produção de flavivìrus recombinante em baixa densidade de células em cultura. | |
| US7445924B2 (en) * | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
| US20040023358A1 (en) * | 2001-12-21 | 2004-02-05 | Wyeth | Avian embryo particulate biomass for the production of virus antigens |
| NZ538575A (en) * | 2002-09-05 | 2007-03-30 | Bavarian Nordic As | Method for the amplification of a virus wherein primary avian cells are cultivated in a serum-free medium comprising growth factors and attachment factors |
| US7998488B2 (en) | 2008-11-14 | 2011-08-16 | Baxter International Inc. | Vaccine formulations and uses thereof |
| JP2013538577A (ja) | 2010-09-23 | 2013-10-17 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 組み換えウイルスベクターおよび黄熱病ウイルスに対する免疫反応を惹起するための方法 |
| CN103458922B (zh) | 2011-01-31 | 2017-10-03 | 纳米医疗公司 | 诱导对甲型流感病毒的异源亚型免疫反应的重组病毒载体和方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4059485A (en) * | 1976-11-03 | 1977-11-22 | Monsanto Company | Adaptation of cell lines to suspension culture |
| US4195130A (en) * | 1978-04-20 | 1980-03-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Propagation of feline infectious peritonitis virus in tissue cultures |
| AT358167B (de) * | 1978-12-22 | 1980-08-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- -meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)- -vakzinen |
| US4335215A (en) * | 1980-08-27 | 1982-06-15 | Monsanto Company | Method of growing anchorage-dependent cells |
| AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
| US5114855A (en) * | 1990-04-19 | 1992-05-19 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for aggregating cells with small microspheres |
-
1990
- 1990-01-04 AT AT18/90A patent/AT393277B/de not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-01-03 EP EP19910901647 patent/EP0509008B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 RU SU925052917A patent/RU2099419C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-01-03 DK DK91901647T patent/DK0509008T3/da active
- 1991-01-03 DE DE59103696T patent/DE59103696D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-03 AT AT91901647T patent/ATE114713T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-01-03 YU YU391A patent/YU391A/sh unknown
- 1991-01-03 US US07/854,630 patent/US5391491A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 JP JP50199791A patent/JP2633392B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-03 WO PCT/AT1991/000003 patent/WO1991009937A1/de active IP Right Grant
- 1991-01-03 CA CA 2073168 patent/CA2073168C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 ES ES91901647T patent/ES2067921T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-03 HU HU9202127A patent/HU212597B/hu unknown
- 1991-01-04 CZ CS9112A patent/CZ279725B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-01-04 SK SK12-91A patent/SK279200B6/sk not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-02 NO NO19922622A patent/NO310472B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 FI FI923099A patent/FI106241B/fi active
- 1992-11-25 HR HRP921353 patent/HRP921353A2/xx not_active Application Discontinuation
-
1994
- 1994-12-01 US US08/352,077 patent/US5550051A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO310472B1 (no) | 2001-07-09 |
| US5391491A (en) | 1995-02-21 |
| YU391A (sh) | 1994-04-05 |
| NO922622D0 (no) | 1992-07-02 |
| DE59103696D1 (de) | 1995-01-12 |
| SK279200B6 (sk) | 1998-07-08 |
| WO1991009937A1 (de) | 1991-07-11 |
| FI106241B (fi) | 2000-12-29 |
| EP0509008A1 (de) | 1992-10-21 |
| AT393277B (de) | 1991-09-25 |
| FI923099A (fi) | 1992-07-03 |
| ES2067921T3 (es) | 1995-04-01 |
| CS9100012A2 (en) | 1991-08-13 |
| EP0509008B1 (de) | 1994-11-30 |
| HUT64583A (en) | 1994-01-28 |
| HRP921353A2 (en) | 1995-10-31 |
| FI923099A0 (fi) | 1992-07-03 |
| NO922622L (no) | 1992-07-23 |
| JPH05503843A (ja) | 1993-06-24 |
| RU2099419C1 (ru) | 1997-12-20 |
| DK0509008T3 (da) | 1995-04-18 |
| US5550051A (en) | 1996-08-27 |
| CA2073168C (en) | 1999-04-27 |
| ATE114713T1 (de) | 1994-12-15 |
| HU212597B (en) | 1996-08-29 |
| JP2633392B2 (ja) | 1997-07-23 |
| CA2073168A1 (en) | 1991-07-05 |
| ATA1890A (de) | 1991-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ279725B6 (cs) | Biomasa pro výrobu vir/vir antigenu | |
| Bratbak et al. | Viral control of Emiliania huxleyi blooms? | |
| Nadala et al. | Primary culture of lymphoid, nerve, and ovary cells from Penaeus stylirostris and Penaeus vannamei | |
| CN112410290B (zh) | 一种大口黑鲈心肌成纤维细胞系及应用 | |
| CA1093995A (en) | Rapid propagation of sv3t3 cells for production of mif and taf | |
| CN116640727B (zh) | 一种提高细胞活力的营养液及其制备方法、应用 | |
| EP0981601A1 (en) | Methods for cultivating cells and propagating viruses | |
| US4169761A (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| Wells Jr et al. | Viral neoplastic transformation of hamster pineal cells in vitro: retention of enzymatic function | |
| CN107858322B (zh) | 一种海马原代细胞培养体系的建立方法 | |
| Andresen et al. | Characterization and spontaneous neoplastic transformation of mouse embryo cells isolated and continuously cultured in vitro in chemically defined medium NCTC 135 | |
| CN112501115B (zh) | 一种兔肌肉干细胞的提取分离及纯化方法 | |
| Delalibera Jr et al. | Use of cell culture media for cultivation of the mite pathogenic fungi Neozygites tanajoae and Neozygites floridana | |
| CN110295137B (zh) | 一种乌斑鳢肾细胞系及其构建方法和应用 | |
| CN114107181A (zh) | 一种鲟鱼胚胎细胞系、培养基及其制备方法 | |
| Li et al. | A Method for Tissue Culture of Hydra Cells. | |
| CN117143806B (zh) | 一株斜带石斑鱼仔鱼细胞系及其构建方法和应用 | |
| Lieb et al. | Growth of rice root-derived callus tissue in suspension culture | |
| RU2102472C1 (ru) | Способ получения биомассы чумного микроба | |
| CN106434544A (zh) | 获得绒毛膜间充质干细胞的方法及试剂盒 | |
| RU2082432C1 (ru) | Способ получения вакцины против клещевого энцефалита | |
| Agrell et al. | Inherent growth capacity of chicken heart myoblasts | |
| CA1177424A (en) | Composition for cell culture | |
| Khoddamzadeh et al. | Establishment of a short-term storage method via encapsulation of protocorm-like bodies in Phalaenopsis bellina (Rchb. f.) Christenson | |
| CN118006538A (zh) | 一种梨小食心虫胚胎细胞系及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20100104 |