CN114736863B - 花鲈脑细胞系及其建立方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种花鲈脑细胞系及其应用，通过选用花鲈鱼苗的脑组织，并采用合适的浓度的胰酶以及设置合理的消化条件，分离得到花鲈脑细胞，并首次建立了花鲈脑细胞系LMB‑S，其主要表现为纤维样细胞，可以稳定传代超过60代，本发明的花鲈脑细胞系在病毒学、毒理、生理、分子遗传学以及发育生物学领域具有很高的研究及应用价值，例如：在病毒的鉴定与毒株分离中的应用，在制备预防或治疗虹彩病毒的疫苗中的应用，作为用于药物筛选、药物制备、药物评价的生物模型中的应用等。

Description

花鲈脑细胞系及其建立方法与应用
技术领域
本发明属于细胞生物学领域，特别涉及一种花鲈脑细胞系及其建立方法与应用。
背景技术
花鲈(Lateolabrax maculatus)隶属于鲈形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，花鲈属(Lateolabrax)是一种广温、广盐性近岸中下层鱼类，广泛分布于中国、朝鲜、日本等地。花鲈属包含3个种，分别为高体鲈(L.latus)、日本鲈(L.japonicus)和花鲈(L.maculatus)。中国花鲈(L.maculatus)与日本鲈(L.japonicus)长期被认为属于同一个物种。后续在针对花鲈属的分类学、形态学的不断研究中，证明中国花鲈(L.maculatus)与日本鲈(L.japonicus)属于不同物种，后来在遗传学与分子生物学方面的研究也进一步支持了这一观点。花鲈年养殖量超过18万吨，是我国重要的海水养殖对象。
鱼类细胞系是进行病毒学、毒理、生理、分子遗传学以及发育生物学等研究的重要基础材料。目前，虽然已有针对日本鲈(L.japonicus)的细胞系建立的相关研究，但是即便是同一物种的遗传结构、遗传多样性和遗传差异，也是不容忽视的，不同的物种的生物学特性存在较大的差异，不同的鱼类细胞系更是具有不同的优势或局限性，而目前花鲈(L.maculatus)的脑细胞系建立及其应用研究仍处于空白。因此，有必要提供一种花鲈脑细胞系及其应用，以丰富可以用于病毒学、毒理、生理、分子遗传学以及发育生物学等研究的鱼类细胞系种类。
发明内容
基于此，本发明的目的包括提供一种花鲈脑细胞系及其应用。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种花鲈脑细胞系，保藏编号为CCTCC NO：C2018167。该细胞系已于2018年8月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2018167，邮政编码为430072；该细胞系于2018年8月23日由保藏中心收到并登记入册，保藏中心于2018年8月30日检测完毕，结果为存活。
本发明还提供了上述保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞系的建立方法，具体技术方案如下：
保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞系的建立方法，包括以下步骤：
(1)取花鲈鱼苗的脑组织，洗涤、剪碎，胰酶消化；所述胰酶消化为：向花鲈鱼苗脑组织中加入0.04％～0.06％胰酶，于25±1℃消化14～16min后，于25±1℃、250～300g离心5±1min，弃上清，重悬；
(2)将步骤(1)消化得到的细胞采用含10％～15％胎牛血清的DMEM培养基，于25±1℃培养，得原代花鲈脑细胞；
(3)将原代花鲈脑细胞，采用含10％～15％胎牛血清的DMEM培养基，于25±1℃培养，传代至超过50～60代后，得到花鲈脑细胞系LMB-S。
在其中一些实施例中，所述胰酶消化为：于25±1℃消化14～16min后，于25±1℃、200～300g离心5±1min，弃上清，重悬，即得；
所述重悬为：使用含有体积百分比为10％～15％的胎牛血清重悬细胞沉淀。
本发明还提供一种上述保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞的应用，具体技术方案如下：
保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞系在构建毒理学、生理学、分子遗传学或发育生物学的生物研究模型中的应用。
保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞系在病毒的毒株分离中的应用。
在其中一些实施例中，所述病毒为虹彩病毒。
在其中一些实施例中，花鲈脑细胞系在虹彩病毒的毒株分离中，步骤如下：
(1)取虹彩病毒感染的花鲈脑组织，加入培养基进行匀浆，静置过夜后离心取上清液；
(2)取如上所述的花鲈脑细胞系，向培养基中加入步骤(1)所述上清液，置于25±1℃培养；
(4)7～8天后出现细胞病变，分离得到花鲈虹彩病毒株LMIV-1706或鳜蛙虹彩病毒MRV。
在其中一些实施例中，所述花鲈虹彩病毒感染的花鲈脑组织中提取得到的DNA，采用核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所述的引物扩增到的序列，与真鲷虹彩病毒核苷酸一致性为(99±0.2)％。
在其中一些实施例中，所述鳜蛙虹彩病毒的鉴别引物如SEQ ID NO.9和SEQ IDNO.10所示。所述鉴别引物用于扩增MCP，对应的扩增产物与MPV核酸一致性为100％。
在其中一些实施例中，步骤(1)所述的加入培养基进行匀浆为：向虹彩病毒感染的花鲈脑组织中加入8～10倍体积的DMEM培养基进行匀浆；所述DMEM培养基中含有体积百分比为10％～15％胎牛血清。
在其中一些实施例中，步骤(2)所述向培养基中加入步骤(1)所述上清液中，所述上清液与所述培养基的体积比为1：(9～11)。
在其中一些实施例中，步骤(1)所述的静置过夜后离心取上清，具体步骤为：于4±0.5℃静置过夜，于(3000±100)×g离心(20±1)min，取上清。
保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞系在制备预防或治疗虹彩病毒的疫苗中的应用。
保藏编号为CCTCC NO:C2018167的花鲈脑细胞系作为用于药物筛选、药物制备、药物评价的生物模型中的应用。
在其中一些实施例中，所述药物评价包括：药物的药效评价、药物安全性评价、药物代谢分析。
在其中一些实施例中，所述药物为用于预防或治疗神经系统相关疾病的药物。
在其中一些实施例中，所述药物为用于预防或治疗与虹彩病毒感染所致的疾病的药物。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
本发明通过发明人的大量创造性劳动，通过选用花鲈鱼苗的脑组织，并采用合适的浓度的胰酶以及设置合理的消化条件，分离得到花鲈脑细胞，并首次建立了花鲈脑细胞系LMB-S，其主要表现为纤维样细胞，可以稳定传代超过60代，具有高表达Wnt5ɑ基因与BMP-7基因以及对鳜蛙虹彩病毒更为敏感的特点。
本发明建立得到的花鲈脑细胞系LMB-S可应用于花鲈虹彩病毒、鳜蛙虹彩病毒的毒株分离，在病毒学、毒理、生理、分子遗传学以及发育生物学领域具有很高的研究及应用价值，例如：在病毒的鉴定与毒株分离中的应用，在制备预防或治疗虹彩病毒的疫苗中的应用，作为用于药物筛选、药物制备、药物评价的生物模型中的应用等。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中分离的花鲈脑细胞培养初期的细胞形态图；
图2为本发明实施例1中显微镜下观察到的花鲈脑细胞系LMB-S细胞形态图；
图3为本发明实施例1中不同血清浓度下的LMB-S生长曲线；
图4为本发明实施例1中不同温度条件下的LMB-S生长曲线；
图5为本发明实施例1中质粒转染花鲈脑细胞系LMB-S后表达EGFP蛋白的结果图；
图6为本发明实施例2镜检观察到的LMB-S中期分裂相细胞的染色体数目分布图；
图7为本发明实施例3花鲈脑细胞系LMB-S线粒体细胞色素b基因(Cytb)进化分析图；
图8为本发明实施例4花鲈脑细胞系LMB-S Wnt5ɑ基因表达分析图；
图9为本发明实施例4花鲈脑细胞系LMB-S BMP-7基因表达分析图；
图10为本发明实施例5中花鲈虹彩病毒感染后的细胞病变及透射电镜观察结果；
图11为本发明实施例6中花鲈脑细胞对MRV敏感性的比较结果图。
本发明提供的花鲈脑细胞系LMB-S，该细胞系已于2018年8月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2018167，邮政编码为430072；该细胞系于2018年8月23日由保藏中心收到并登记入册，保藏中心于2018年8月30日检测完毕，结果为存活。
具体实施方式
下面结合附图、实施方式和实施例，对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为充分地理解，应理解，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
具体实施例
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。
下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。
实施例1、花鲈脑细胞的分离与花鲈脑细胞系LMB-S的建立
无菌条件下，取3尾健康花鲈鱼苗(10cm)的脑组织，PBS洗涤3次，混合剪碎，加入0.05％胰酶(0.25％胰酶:PBS＝1:4，v:v)5mL，25℃消化15min，取消化液1mL，300g 25℃离心5min，弃上清，细胞沉淀用含有15％胎牛血清(Gibco)、青霉素(400U/mL)、链霉素(400μg/mL)的DMEM(Gibco)培养基悬浮，接种6孔板，置于25℃培养。每3天更换50％培养基。细胞长满后胰酶消化，转至25cm2细胞培养瓶，待细胞生长至>90％融合度后，0.05％胰酶消化，1:2传代培养。
消化的脑组织细胞接种12h后贴壁生长，3周后长满培养孔，消化后转入25cm2细胞培养瓶继续传代培养，1:2传代后，3d～5d可长至>90％融合度。早期(1代～10代)细胞形态多样，包括上皮样细胞、纤维样细胞以及小胶质样细胞等(如图1)，随传代次数增加，30代后，纤维样细胞逐渐占据优势。细胞以及传代超过60代，主要表现为纤维样细胞，如图2所示，该细胞系命名为花鲈脑细胞系S(花鲈脑细胞系LMB-S)。
上述花鲈脑细胞系LMB-S已于2018年8月23日保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO：C2018167。；该细胞系于2018年8月23日由保藏中心收到并登记入册，保藏中心于2018年8月30日检测完毕，结果为存活。
传代细胞的冻存与复苏：
传代细胞生长至>90％融合度后，0.05％胰酶消化，加入适量完全DMEM培养基(15％胎牛血清，100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)吹打混匀，300g 25℃离心5min，弃上清，细胞计数后，用细胞冻存液(胎牛血清:DMSO＝9:1，v:v)将细胞调整到1～3×106/mL，1mL/管分装，放入Nalgene冻存盒置-80℃过夜，次日转入液氮冻存。细胞在液氮中冻存1个月后复苏，冻存管放入30℃水浴，轻轻晃动冻存管，使细胞快速解冻，将细胞悬液加入含有10mL完全DMEM培养基的25cm2细胞培养瓶，置25℃培养，细胞贴壁后(约12h)更换新鲜的完全DMEM培养基，继续传代培养。
培养基中不同血清浓度对花鲈脑细胞生长的影响实验：
4×104/mL的细胞100μL/孔接种于96孔板，将DMEM培养基中的胎牛血清浓度调整为5％、10％、15％，置25℃培养，连续培养8天，每天取样，采用CCK-8(Genview)试剂盒分析细胞增殖情况。
结果如图3所示，可见，10％以上的血清浓度可以维持细胞的正常生长。
不同温度下培养对花鲈脑细胞生长的影响实验：
4×104/mL的细胞500μL/孔接种于24孔板(15％胎牛血清)，将细胞分别置于20℃、25℃、30℃、37℃，连续培养8天，每天取样，采用血球计数板分析细胞增殖情况，结果如图4所示，可见，花鲈脑细胞系在较高温度下(30℃、37℃)，细胞虽然能够生长，但是细胞状态不佳，细胞老化，细胞变形，空泡增多等问题普遍存在，而在20℃的条件下，细胞的生长十分缓慢甚至停滞，因此选择25℃作为细胞的培养温度。
转染试验：
250μL
Figure BDA0003575877320000071
I与3μg pEGFP-n1质粒混匀后加入250μL/>
Figure BDA0003575877320000072
I与3μL InstantFECT转染试剂的混合物，两者混匀后制备转染复合物。传代细胞胰酶消化后300g25℃离心5min，细胞沉淀用/>
Figure BDA0003575877320000081
I调整为3×105/mL，取500μL与上述转染复合物等体积混合，转入12孔板，置25℃培养。12h后加入1mL/孔DMEM培养基(10％胎牛血清)，荧光倒置显微镜观察。
转染48h后EGFP蛋白获得表达(图5)，因此，LMB-S细胞具备表达外源蛋白的能力。
实施例2、花鲈脑细胞系LMB-S的染色体分析
选择花鲈脑细胞系LMB-S的>75％融合度的第50代传代细胞，加入终浓度1μg/mL的秋水仙素，诱导16h，胰酶消化，25℃200g离心5min收集细胞，加入固定液(甲醇:冰醋酸＝3:1)固定30min，重复固定2次，冷滴片法滴片；室温干燥后吉姆萨染色20min，镜检。
统计了100个中期分裂相细胞的染色体数目，结果显示，花鲈脑细胞系LMB-S染色体数目在28～92之间，其众数为48。结果如图6所示。
实施例3、花鲈脑细胞系LMB-S线粒体细胞色素b基因片段的扩增
采用基因组提取试剂盒(Tiangen)，提取花鲈脑细胞系基因组DNA。采用引物L15312与H15682扩增花鲈线粒体细胞色素b基因(Cytb)的部分片段，扩增片段测序后采用MEGA6软件进行进化分析。引物为：
L15312(SEQ ID NO.1)：5’-ATGGCAARCCTACGAAAAAC-3’，
H15682(SEQ ID NO.2)：5’-TGTCCTCATGGAAGGACRTA-3’。
采用MEGA6软件构建N-J进化树，Bootstrap值为1000。本研究扩增的410bp花鲈细胞Cytb部分序列。与Genbank中的高体鲈、日本鲈进化分析显示，本研究扩增的基因序列与花鲈的其他序列聚类在同一分支，结果如图7所示。
实施例4、花鲈脑细胞系LMB-S标志分子分析
对花鲈脑细胞系LMB-S细胞系进行转录组测序分析后，发现与脑组织相比，该细胞系高表达Wnt5ɑ基因与BMP-7基因。
设计引物：
Wnt5αF(SEQ ID NO.3):TGCACAACAAGATTTTCCA，
Wnt5αR(SEQ ID NO.4):GGCCTACGTTTATAGTCCCT；
BMP-7F(SEQ ID NO.5):CGCATCAGCATCTACCAG，
BMP-7R(SEQ ID NO.6):CACGTCAAACACCAACCA。
建立qPCR方法对上述基因表达进行验证，结果显示：Wnt5α的表达量是脑组织表达量的111.34倍(p<0.05)(图8)，BMP-7的表达量是脑组织表达量的103.85倍(p<0.05)(图9)。Wnt5ɑ基因与BMP-7基因可以作为该细胞系的分子标志物。
实施例5、虹彩病毒的分离
提取疑似虹彩病毒感染的花鲈脑组织DNA，以PCR扩增引物扩增到的序列测序后经BLAST在线比对证实该病毒与真鲷虹彩病毒核苷酸(GenBank:AB104413.1)一致性为99％。
PCR扩增引物：
4F(SEQ ID NO.7)：5’-CGGGGGCAATGACGACTACA-3’，
4R(SEQ ID NO.8)：5’-CCGCCTGTGCCTTTTCTGGA-3’。
取上述感染病毒的花鲈脑组织加入9倍体积的DMEM培养基(15％胎牛血清，500U/mL青霉素、500μg/mL链霉素)进行匀浆，4℃静置过夜。次日4℃3000×g离心20min分离上清，将上清按照1:10加入上述制备的花鲈传代脑细胞，置于25℃培养，每日观察细胞病变(CPE)情况。待CPE出现后取样进行透射电镜观察。感染病毒的组织匀浆接种1周后出现细胞病变，相对于正常细胞株(图10中A图)，病变细胞的圆形细胞增多、脱壁，贴壁细胞出现空泡化(图10中B图)，透射电镜表明，分离到的病毒在120nm左右(图10中C图)，将其命名为LMIV-1706株。
采用上述方法分离了一株鳜鱼源鳜蛙虹彩病毒(MRV)，相对于正常细胞株(图10中D图)可以引起LMB-S的细胞收缩、脱壁等细胞病变(图10中E图)，以引物进行了病毒分子鉴定，并进行了电解观察，分离到的MRV病毒粒子在130nm左右(图10中F图)，引物如下：
MRVMCP-F(SEQ ID NO.9):ATGTCTTCTGTTACGGGTTCTGGC，
MRVMCP-R(SEQ ID NO.10):TTACAGGATGGGGAAACCCATGG。
实施例6、花鲈脑细胞对MRV敏感性的比较
采用实施例5中的方法，将MRV感染组织的匀浆接种于实验室建立的3株脑组织来源的细胞系：LMB-S、LMB-M、LMB-L，其中LMB-M、LMB-L是采用类似方法建立的，不同细胞形态的细胞系。病毒连续传代5次后，采用引物进行qPCR对病毒进行定量分析，引物如下：
MCP-F63(SEQ ID NO.11):TTGACAAAGCGCTGTACGGTGGA，
MCP-R213(SEQ ID NO.12):TGAGCACATAGTCGCCCGACCTG。
结果表明，花鲈脑细胞系LMB-S对MRV具有最高的敏感性，病毒拷贝数是LMB-M细胞的3.84倍(p<0.05)，LMB-L细胞的2.78倍(p<0.05)(图11)，在疫苗生产中具有显著优势。
实施例7、花鲈脑细胞系LMB-S在抗虹彩病毒药物筛选的应用
按实施例5所述的方法，采用分离的MRV接种于花鲈脑细胞系LMB-S，然后分别加入不同浓度的五味子水提物，每日观察细胞病变(CPE)情况，在接毒2天后，采用进行qPCR，检测药物对病毒增殖的抑制效果，引物如下：
MCP-F63(SEQ ID NO.13):TTGACAAAGCGCTGTACGGTGGA，
MCP-R213(SEQ ID NO.14):TGAGCACATAGTCGCCCGACCTG。
结果发现，加入10mg/mL、6mg/mL、2mg/mL、0mg/mL五味子后，病毒copy数分别为3.75×106copy/mL、1.39×107copy/mL、3.29×108copy/mL、3.76×108copy/mL。相对于对照组(0mg/mL)，10mg/mL、6mg/mL的五味子能够显著降低MRV拷贝数，与对照组有显著性差异(p<0.05)。该细胞系可以用于药物筛选。
综上，本发明通过选用花鲈鱼苗的脑组织，并采用合适的浓度的胰酶以及设置合理的消化条件，分离得到花鲈脑细胞，并首次建立了花鲈脑细胞系LMB-S，其主要表现为纤维样细胞，可以稳定传代超过60代，具有高表达Wnt5ɑ基因与BMP-7基因以及对鳜蛙虹彩病毒更为敏感的特点。本发明建立得到的花鲈脑细胞系LMB-S可应用于花鲈虹彩病毒、鳜蛙虹彩病毒的毒株分离，在病毒学、毒理、生理、分子遗传学以及发育生物学领域具有很高的研究及应用价值，例如：在病毒的鉴定与毒株分离中的应用，在制备预防或治疗虹彩病毒的疫苗中的应用，作为用于药物筛选、药物制备、药物评价的生物模型中的应用等。
以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。
序列表
<110> 广东省农业科学院动物卫生研究所
<120> 花鲈脑细胞系及其建立方法与应用
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcaarcc tacgaaaaac 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tgtcctcatg gaaggacrta 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgcacaacaa gattttcca 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggcctacgtt tatagtccct 20
<210> 5
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cgcatcagca tctaccag 18
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cacgtcaaac accaacca 18
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cgggggcaat gacgactaca 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
ccgcctgtgc cttttctgga 20
<210> 9
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
atgtcttctg ttacgggttc tggc 24
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ttacaggatg gggaaaccca tgg 23
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ttgacaaagc gctgtacggt gga 23
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tgagcacata gtcgcccgac ctg 23
<210> 13
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ttgacaaagc gctgtacggt gga 23
<210> 14
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tgagcacata gtcgcccgac ctg 23

Claims (8)

1.一种花鲈脑细胞系，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：C2018167。
2.如权利要求1所述的花鲈脑细胞系在构建毒理学、生理学、分子遗传学或发育生物学的生物研究模型中的应用。
3.如权利要求1所述的花鲈脑细胞系在病毒的毒株分离中的应用；所述病毒为虹彩病毒；所述虹彩病毒为鳜鱼源鳜蛙虹彩病毒。
4.如权利要求1所述的花鲈脑细胞系在制备预防或治疗虹彩病毒的疫苗中的应用；所述虹彩病毒为鳜鱼源鳜蛙虹彩病毒。
5.如权利要求1所述的花鲈脑细胞系作为用于药物筛选、药物制备、药物评价的生物模型中的应用。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物评价包括：药物的药效评价、药物安全性评价、药物代谢分析。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物为用于预防或治疗神经系统相关疾病的药物。
8.根据权利要求5~7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物为用于预防或治疗与虹彩病毒感染所致的疾病的药物；所述虹彩病毒为鳜鱼源鳜蛙虹彩病毒。
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