NO20111232A1 - BAFF-reseptor (BCMA), et immunoregulatorisk middel - Google Patents

BAFF-reseptor (BCMA), et immunoregulatorisk middel Download PDF

Info

Publication number
NO20111232A1
NO20111232A1 NO20111232A NO20111232A NO20111232A1 NO 20111232 A1 NO20111232 A1 NO 20111232A1 NO 20111232 A NO20111232 A NO 20111232A NO 20111232 A NO20111232 A NO 20111232A NO 20111232 A1 NO20111232 A1 NO 20111232A1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
baff
cells
amino acid
cell
polypeptide
Prior art date
Application number
NO20111232A
Other languages
English (en)
Other versions
NO344346B1 (no
Inventor
Pascal Schneider
Fabienne Mackay
Jeffrey Browning
Christine Ambrose
Jurg Tschopp
Jeffrey Thompson
Original Assignee
Topotarget Switzerland Sa
Biogen Ma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27386828&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20111232(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Topotarget Switzerland Sa, Biogen Ma Inc filed Critical Topotarget Switzerland Sa
Publication of NO20111232A1 publication Critical patent/NO20111232A1/no
Publication of NO344346B1 publication Critical patent/NO344346B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Description

OMRÅDE FOR OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av en receptor for BAFF, som er en p-celle-aktiverende faktor som tilhører familien tumornekrosefaktor ("TNF"), og dens blokkerende midler for å enten stimulere eller inhibere ekspresjonen av B-celler og immunoglobuliner. Denne receptor har anti-kreft- og immunoregulatoriske anvendelser samt nytte ved behandling av immunosuppressive forstyrrelser såsom HIV. I tillegg spiller receptoren og dens blokkerende midler en rolle ved utvikling av hypertensjon og de forbundne forstyrrelser. Videre kan celler som er blitt transfisert med genet for denne receptor, brukes i genterapien for å behandle svulster, lymfomaer, autoimmune sykdommer eller arvelige genetiske forstyrrelser omfattende B-celler. Blokkerende midler, såsom rekombinante varianter eller antistoffer som er spesifikke for receptoren, har også immunoregulatoriske anvendelser. Man tenker på en anvendelse av receptoren for BAFF som en B-celle-stimulator for immun-sviktsykdommer omfattende f.eks. anvendelser for pasienter som gjennomgår organtransplantasjon (f.eks. benmargstransplantasjon) samt å komme seg etter kreftbehandling for å stimulere produksjonen av B-celler. Anvendelse av receptoren for BAFF som hjelpemiddel og/eller kostimulator for å øke og/eller gjenopprette B-cellenivået til omtrent et normalt nivå, overveies også. Løselige former for receptoren for BAFF som blokkerer B-cellefunksjonen, kan også brukes for å inhibere B-celle-medierte sykdommer.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse vedrører en ny receptor i TNF-familien. En ny receptor er blitt identifisert, nemlig BAFF-R (eller "BCMA").
TNF-familien består av ligandpar, og deres spesifikke receptorer benevnes TNF-familieligander og TNF-familiereceptorer (Bazzoni og Beutler, 1996). Familien er omfattet i reguleringen av immunsystemet og muligens også andre, ikke-immunologiske systemer. Reguleringen er ofte på "hovedbryter"-nivå, slik at TNF-familiesignalering kan føre til et stort antall påfølgende hendelser som best typifi-seres ved TNF. TNF kan initiere den generelle beskyttende inflammatoriske respons i en organisme mot fremmed invasjon som omfatter en endret fremvisning av ad-hesjonsmolekyler omfattet i celletrafikken, kjemokinproduksjon for å drive bestemte celler mot bestemte avdelinger, og en priming av forskjellige effektorceller. Som sådant har en regulering av disse banene et klinisk potensiale.
Induksjon av forskjellige cellulære responser som medieres av slike TNF-familiecytokiner, antas å initieres ved deres binding til bestemte cellereceptorer. Minst to forskjellige TNF-receptorer med en omtrentlig størrelse på 55 kDa (TNFR1) og 75 kDa (TNFR2) er blitt identifisert [Hohman et al., J. Biol. Chem. 264: 14927-14934 (1989), og Brockhaus eta/., PNAS, 87: 3127-3131 (1990)]. Omfattende po-lymorfisme er blitt forbundet med begge TNF-receptorgener. Begge TNFR'er har til felles en typisk struktur av celleflatereceptorer omfattende ekstracellulær, transmembran og intracellulær domene. Det ekstracellulære parti av TNFR type 1 og type 2 inneholder et gjentatt aminosyresekvensmønster med fire cysteinrike domener (CDR'er). Et lignende gjentatt mønster av CDR'er foreligger i flere andre celleflateproteiner, omfattende bl.a. p75 nervevekstfaktorreceptor og B-celleantigenet CD40.
Receptorene er kraftige verktøy for å belyse de biologiske baner, fordi de er enkle å omdanne til immunoglobulin-fusjonsproteiner. Disse dimere løselige receptorformer er gode inhibitorer av hendelser som medieres av enten utsondrede eller flate-bundne ligander. Ved en binding til disse ligander, hindrer de liganden fra å veksel-virke med celleforbundne receptorer som kan signalere. Ikke bare er disse receptor/Ig-fusjonsproteiner nyttige i eksperimentell forstand, men i tilfellet av TNF-R/Ig er de blitt klinisk brukt med fremgang for å behandle inflammatorisk tarmsykdom, rheumatoid artritt og akutt klinisk syndrom som ledsager OKT3-administrasjon (Ea-son eta/., 1996; Feldmann eta/., 1996; van Dullemen eta/., 1995). En kan se for seg at en manipulasjon av de mange hendelser som medieres ved en signalering via TNF-receptorfamilien, vil finne en bred anvendelse ved behandling av immunba-serte sykdommer og også i det brede utvalg av menneskelige sykdommer som har patologiske følger som skyldes immunsystemets innblanding. En løselig form for en nylig beskreven receptor, nemlig osteoprotegerin, kan blokkere tapet av benmasse, og dermed er hendelsene som reguleres av TNF-receptorfamiliens signalering, ikke nødvendigvis begrenset til en regulering av immunsystemet. Antistoffer mot receptoren kan blokkere ligandbinding og kan derfor også finne klinisk anvendelse. Slike antistoffer er ofte meget lengelevende, og kan ha fordeler over løselige receptor/Ig-fusjonsproteiner, som har en kortere halveringstid i blodet.
Selv om en inhibering av den receptor-medierte bane representerer den mest ut-bredte terapeutiske anvendelse av disse receptorer, var det opprinnelig en aktivering av TNF-receptorene som virket klinisk lovende (Aggarwal og Natarajan, 1996). En aktivering av TNF-receptorene kan initiere celledød i målcellen, og derfor var og er en anvendelse mot svulster attraktiv (Eggermont eta/., 1996). Receptoren kan aktiveres enten ved administrasjon av liganden, dvs. den naturlige bane, eller noen antistoffer som kan fornette receptoren, er også sterke agonister. Antistoffer ville være fordelaktige innen onkologien, siden de kan holde seg i blodet over lange tids-rom, mens ligandene generelt har en kort levetid i blodet. Idet mange av disse receptorer kan uttrykkes mer selektivt i svulster, eller de kan kun signalere celledød eller differensiering i svulster, kunne agonistantistoffer være gode våpen ved behandling av kreft. Likeledes medieres mange positive immunologiske hendelser via TNF-receptorfamilien, f.eks. inflammatoriske reaksjoner i verten, antistoffproduk-sjon osv., og derfor kunne agonistiske antistoffer ha gunstige virkninger i andre, ikke-onkologiske anvendelser.
Paradoksalt nok, kan en inhibering av en bane ha en klinisk fordel ved behandling av svulster. F.eks. uttrykkes Fas-liganden av noen svulster, og denne ekspresjon kan føre til døden av Fas-positive lymfocytter og dermed forenkle svulstens evne til å unngå immunsystemet. I dette tilfellet ville en inhibering av Fas-systemet tillate immunsystemet å reagere på svulsten på andre måter, nå da en tilgang er blitt mulig (Green og Ware, 1997).
SAMMENFATNING AV OPPFINNELSEN
Søkerne har identifisert en cDNA-klon som koder for et polypeptid og som i foreliggende søknad benevnes "BAFF-R" eller "BCMA", som binder tumornekrosefaktoren BAFF, som er en B-celleaktiverende faktor som tilhører familien tumornekrosefaktor ("TNF"). BAFF er det samme molekyl som tidligere er blitt beskrevet i W099/12964, innlemmet heri ved henvisning.
I én utførelse tilveiebringer oppfinnelsen fremgangsmåter ved anvendelse av BAFF-R. Omfattet av slike metoder er metoder ved inhibering av B-cellevekst,
dendrittcelle-indusert B-cellevekst og -modning eller immunoglobulinproduksjon i et dyr ved bruk av BAFF-R-polypeptid. Også omfattet er fremgangsmåter ved stimulering av B-cellevekst, dendrittcelle-indusert B-cellevekst og -modning eller immunoglobulinproduksjon i et dyr ved bruk av BAFF-R-polypeptid, eller ko-stimulering av
B-cellevekst, dendrittcelle-indusert B-cellevekst og -modning eller immunoglobulinproduksjon i et dyr ved bruk av BAFF-R-polypeptid og et anti-T-antistoff, en CD40-ligand eller en anti-CD40-ligand.
I en annen utførelse tilveiebringer oppfinnelsen fremgangsmåter ved anvendelse av BAFF-R ved behandling av autoimmune sykdommer, hypertensjon, kardiovaskulære forstyrrelser, nyreforstyrrelser, B-celle-lymfoproliferative forstyrrelser, immunosuppressive sykdommer, organtransplantasjon og HIV. Også omfattet er fremgangsmåter ved anvendelse av midler for behandling, undertrykkelse eller endring av en immunrespons som omfatter en signaleringsbane mellom BAFF-R og dens ligand, og fremgangsmåter ved inhibering av betennelse ved å administrere et antistoff som er spesifikt for et BAFF-R eller en epitop derav.
Fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse utføres fortrinnsvis ved å administrere en terapeutisk virksom mengde av et BAFF-R-polypeptid, et kimært molekyl omfattende et BAFF-R-polypeptid kondensert med en heterolog aminosyresekvens, eller en anti-BAFF-R-antistoffhomolog.
I én utførelse tilveiebringer oppfinnelsen farmasøytiske sammensetninger omfattende et BAFF-R-polypeptid og en farmasøytisk akseptabel eksipiens.
I en annen utførelse tilveiebringer oppfinnelsen kimære molekyler omfattende BAFF-R-polypeptid kondensert med et heterologt polypeptid eller en aminosyresekvens. Et eksempel på et slikt kimært molekyl omfatter en BAFF-R kondensert med et Fc-parti av et immunoglobulin eller en epitop-taggesekvens.
I en annen utførelse tilveiebringer oppfinnelsen et antistoff som spesifikt bindes til et BAFF-R-polypeptid. Valgfritt er antistoffet et monoklonalt antistoff.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE
Fig. 1 viser nukleinsyresekvensen (SEKV ID NR: 2) av et cDNA for humant BAFF-R (BCMA) og dens avledede aminosyresekvens (SEKV ID NR: 1). Potensiell transla-sjonsstart ved enten nukleinsyreresiduum 219 eller 228; cysteinrik domene (CRD) ved nukleinsyreresiduene 240-341 av SEKV ID NR: 2 (aminosyreresiduene 8-41 av SEKV ID NR: 1) og potensielt transmembrant parti ved nukleinsyreresiduene 375-459 av SEKV ID NR: 2. Fig. 2 viser nukleinsyresekvensen (SEKV ID NR: 4) og dens avledede aminosyresekvens (SEKV ID NR: 3) av pJST538, et plasmid som koder for BAFF-R/Fc: nukleinsyreresiduene 1-69: murin IgG-kappasignalsekvens; nukleinsyreresiduene 70-222: BAFF-R (nukleinsyreresiduene 1-153); nukleinsyreresiduene 223-906: humant IgG. Fig. 3 viser nukleinsyresekvensen av pJST535, et plasmid som koder for hellengdes humant BAFF-R og dens avledede aminosyresekvens.
Fig. 4 viser en struktursammenligning av TNF-R55 og BAFF-R.
Fig. 5 viser 293EBNA-celler som er transfisert med enten (a) CH269 (1.0 jig) eller (b) pJST535 (0,1^g), plasmidet som uttrykker hellengdes BAFF-R, og flekket med 0,5^g/ml flag-hBAFF i plateassayformatet. Fig. 6(a) viser FACS-overlagring av 293EBNA transfisert med pJST535 og flekket som følger: ingen ligand (sort histogram), 1^g/ml flag-hCD40L (lyserødt) eller flag-hBAFF (grønt). Alle prøvene ble deretter flekket med anti-flag-M2 fulgt av esel-anti-muse-IgG slik det beskrives i metodene i eksempel 2. Fig. 6(b) viser FACS-histogrammer med statistikker fra det samme eksperiment. Flekkingen er som følger: (1) uflekket, (2) kun 7AAD, (3) kun andre trinn og 7AAD, (4) 9 jig/ml flag-hBAFF, (5) 3 jig/ml flag-hBAFF, (6) 1 jig/ml flag-hBAFF, (7) 0,33ug/ml flag-hBAFF, (8) 0,11ug/ml flag-hBAFF, (9) flag-hCD40L 1ug/ml. Fig. 7 viser immunofelninger med BAFF-R/Fc slik det beskrives i metodene i eksempel 4. Molekylvektstandarder i kDa er slik som det oppgis på venstre side av figu-ren. Bane (1): 12,5 ng flag-hTWEAK, (2): 12,5 ng flag-hBAFF, (3): immunofelning av flag-hBAFF med 0,5 ml BAFF-R/Fc-kondisjonert medium, (4): immunofelning av flag-hTWEAK med 0,5 ml BAFF-R/Fc-kondisjonert medium, (5) immunofelning av ingen ligand med 0,5 ml BAFF-R/Fc-kondisjonert medium, (6): immunofelning av flag-hBAFF med 0,5 ml kondisjonert medium fra utransfiserte 293EBNA, (7): immunofelning av flag-hTWEAK med 0,5 ml kondisjonert medium fra utransfiserte 293EBNA. Fig. 8 viser en plott av resultatene fra et splenocytt-proliferasjonsassay hvor tel-lingene pr. minutt (CPM) innlemmet i muse-splenocyttceller er plottet mot mengden humant BAFF som ble tilsatt (jig/ml). Fig. 9 viser en plott av resultatene av et BAFF-blokkeringsassay som analyserer BAFF-bindingen til Raji-celler hvor avlesningen av MFI (den midlere fluorescensintensitet) er plottet mot mengden R:hIgGl (ng/ml). Fig. 10(a) viser plotter av ekspresjonen av IgM vs. CD1 i en FACS-analyse for Baff-Tg-mus som fikk h-Ig (midlere rute) eller hBCMA/Ig (nederste rute) og for villtypekontroller fra samme kull som fikk PBS-injeksjoner (øvre rute) slik det beskrives i eksempel 11. Fig 10(b) viser plotter av ekspresjonen av CD21 vs. IgM i FACS-analyse ved uteluk-king på IgD-positive populasjoner for Baff-Tg-mus som fikk h-Ig (midtre rute) eller hBCMA/Ig (nedre rute), og for villtype-kullkamerater som fikk PBS-injeksjoner (øvre rute), slik det beskrives i eksempel 11. Fig. 10(c) viser plotter av ekspresjonen av CD21 vs. IgM i FACS-analyse ved ute-lukking på IgD-negative populasjoner for Baff-Tg-mus som fikk h-Ig (midtre rute) eller hBCMA/Ig (nedre rute), og for villtype-kullkamerater som fikk PBS-injeksjoner (øvre rute), slik det beskrives i eksempel 11. Fig. 11 viser miltvekten for alle grupper av Baff-Tg-mus (oppgitt som vekten i mg standardavviket). Fig. 12 viser en plott av proteinurea (mg/dl) vs. injeksjonsantallet for Baff-Tg-mus som var blitt behandlet med PBS, hig eller hBCMA/Ig, og for kontroller fra samme kull. Fig. 13 viser en plott av det midlere arterietrykk (mmHg) i Baff-Tg-mus og villtypekontroller. Fig. 14 viser en plott over det individuelle midlere arterietrykk (mmHg) for Baff-Tg-mus og villtypekontroller. Fig. 15 viser et stolpediagram av prosentdelen SNFl-mus som oppviste alvorlig nefritt etter behandling med BAFF-R/Ig (BCMA/Ig), HuIgG eller PBS. Fig. 16 viser en graf over det samlede CDllc<+->DC-celleantall (i millioner) for mus behandlet in vivo med 20 jig BCMA/Ig, 50 jig BCMA/Ig, HuIgG eller PBS. CDllc<+->DC-cellepopulasjonene som ble undersøkt, var: (1) CD8a" CD4", (2) CD8a<+>CD4" og (3) CD8a_CD4<+.>
DETALJERT BESKRIVELSE
1. Definisjoner
Begrepene "BAFF-R" og "BCMA" omfatter når de brukes heri, BAFF-R med nativ sekvens og BAFF-R-varianter (som skal defineres nærmere heri). BAFF-R'et kan være isolert fra forskjellige kilder, såsom fra murine eller humane vevtyper eller fra en annen kilde, eller kan fremstilles ved rekombinante eller syntetiske metoder.
En "BAFF-R med nativ sekvens" omfatter et polypeptid som har den samme aminosyresekvens som BAFF-R avledet fra naturen. En slik BAFF-R med nativ sekvens kan isoleres fra naturen, eller kan fremstilles på rekombinant eller syntetisk måte. De naturlig forekommende avkortede eller utsondrede former for BAFF-R (f.eks. løselige former som f.eks. inneholder en ekstracellulær domenesekvens), naturlig forekommende variante former (f.eks. alternativt skjøtede former) og naturlig forekommende allele varianter av BAFF-R. I én utførelse av oppfinnelsen er den native BAFF-R-sekvens en moden eller hellengdes nativ BAFF-R-polypeptid-sekvens som omfatter aminosyrene 1 til 184 av SEKV ID NR: 1 eller et fragment derav.
"BAFF-R-ekstracellulær domene" eller "BAFF-R-ECD" viser til en form for BAFF-R som i det vesentlige er fri for transmembran og cytoplasmatisk domene av BAFF-R. Vanligvis vil BAFF-R-ekstracellulær domene ha mindre enn 1% av disse transmembrane og cytoplasmatiske domener, og vil fortrinnsvis ha mindre enn 0,5% av slike domener. Valgfritt vil BAFF-R-ECD omfatte aminosyreresiduene 8 til 41 av SEKV ID NR: 1, eller aminosyreresiduene 4 til 51 av SEKV. ID NR: 1, eller aminosyreresiduene 1 til 53 av SEKV. ID NR: 1. I en foretrukken utførelse av foreliggende oppfinnelse omfatter BAFF-R-ECD aminosyreresiduene 1 til 51 av SEKV ID NR: 1. I en annen foretrukken utførelse omfatter BAFF-R-ECD aminosyreresiduene 1 til 50 av SEKV. ID NR: 1. Fagmannen vil forstå at den transmembrane domene
som identifiseres for BAFF-R-polypeptidet ifølge foreliggende oppfinnelse, identifiseres idet man følger kriterier som rutinemessig anvendes innen faget for å identifisere denne type hydrofob domene. De nøyaktige grenser av en transmembran domene kan variere, men sannsynligvis ikke med mer enn ca. 5 aminosyrer i hver ende
av domenen som spesifikt nevnes heri. Følgelig kan BAFF-R-ECD valgfritt omfatte aminosyrene 8-41 (SEKV ID NR: 1).
"BAFF-R-variant" betyr et aktivt BAFF-R som definert i det følgende, som har minst ca. 80% aminosyresekvensidentitet med BAFF-R'en som har den avledede amino-
syresekvens som vises i SEKV ID NR: 1 for en hellengdes nativ BAFF-R-sekvens eller med en BAFF-R-ECD-sekvens. Slike BAFF-R-varianter omfatter f.eks. BAFF-R-polypeptider hvor én eller flere aminosyreresiduer tilsettes, eller slettes, i enden eller C-terminus av sekvensen av SEKV ID NR: 1. Vanligvis vil en BAFF-R-variant ha minst 80 eller 85% aminosyresekvensidentitet, mer foretrukket minst ca. 90% aminosyresekvensidentitet og enda mer foretrukket minst ca. 95% aminosyresekvensidentitet med aminosyresekvensen av SEKV ID NR: 1.
"Prosent (%) aminosyresekvensidentitet" med hensyn til BAFF-R-sekvenser som identifiseres heri, defineres som prosentdelen aminosyreresiduer i en kandidatsek-vens som er identiske med aminosyreresiduene i BAFF-R-sekvensen, etter at sekvensene er blitt linjestilt og det, om nødvendig, er blitt innført opphold for å oppnå en maksimal prosent sekvensidentitet, og idet man ikke anser konservative substitusjoner for å være en del av sekvensidentiteten. En linjestilling for å bestemme prosent aminosyresekvensidentitet kan oppnås på forskjellige måter som ligger innen kunnskapene innen faget, f.eks. ved bruk av ålment tilgjengelig dataprogram-vare såsom BLAST-, ALIGN- eller Megalign (DNASTAR)-programvare. Fagmannen kan bestemme de egnede parametere for måling av linjestillingen, også eventuelle algoritmer som er nødvendige for å oppnå en maksimal linjestilling over hele lengden av sekvensene som skal sammenlignes.
Begrepet "epitop-tagget" betyr når det brukes heri, et kimært polypeptid som omfatter BAFF-R eller en domenesekvens derav kondensert til et "tag-polypeptid". Tag-polypeptidet har tilstrekkelig mange residuer for å tilveiebringe en epitop som det kan lages et antistoff mot, eller som kan identifiseres med et annet middel, men er tilstrekkelig kort til å ikke forstyrre aktiviteten av BAFF-R. Tag-polypeptidet er fortrinnsvis også nokså ensartet, slik at antistoffet ikke kryssreagerer vesentlig med andre epitoper. Egnede tag-polypeptider har generelt minst 6 aminosyreresiduer og vanligvis mellom 8 og 50 aminosyreresiduer (fortrinnsvis ca. 10 til ca. 20 residuer).
"Isolert" betyr når det brukes til å beskrive de forskjellige polypeptider som beskrives heri, et polypeptid som er blitt identifisert og adskilt og/eller isolert fra en bestanddel av sitt naturlige miljø. Forurensende bestanddeler av dets naturlige miljø er materialer som vanligvis ville forstyrre en diagnostisk eller terapeutisk anvendelse av polypeptidet, og kan omfatte enzymer, hormoner og andre proteinholdige eller ikke-proteinholdige oppløste stoffer. I en foretrukken utførelse vil polypeptidet renses (1) i tilstrekkelig grad for å erholde minst 15 residuer av en N-terminal eller
intern aminosyresekvens ved bruk av en spinnekoppsekvenator, eller (2) til homo-genisitet SDSPAGE under ikke-reduserende eller reduserende betingelser ved bruk av Coomassie blue eller fortrinnsvis sølvflekking. Isolerte polypeptider omfatter polypeptider in situ i rekombinante celler, fordi minst én bestanddel av BAFF-R's naturlige miljø ikke vil foreligge. Vanligvis vil isolert polypeptid imidlertid fremstilles ved minst ett rensetrinn.
Begrepet "antistoff" brukes i sin videste betydning, og dekker spesielt enkelte BAFF-R-monoklonale antistoffer (omfattende agoniserende, antagoniserende og nøytraliserende antistoffer) og anti-BAFF-R-antistoffsammensetninger med polyepi-topisk spesifisitet. Begrepet "monoklonalt antistoff" som brukt heri viser til et antistoff erholdt fra en populasjon av i det vesentlige homogene antistoffer, dvs. at de enkelte antistoffer som utgjør populasjonen, er identiske unntatt for eventuelle naturlig forekommende mutasjoner som kan foreligge i mindre mengder.
Et "renset preparat" eller et "i det vesentlige rent preparat" av et polypeptid betyr slik det brukes her, et polypeptid som er blitt separert fra andre proteiner, lipider og nukleinsyrer som det naturlig foreligger sammen med. Fortrinnsvis er polypeptidet også adskilt fra andre stoffer, f.eks. antistoffer, matriser osv., som brukes for å rense det.
Begrepene "behandle", "behandling" og "terapi" viser slik de brukes heri, til en ku-rerende terapi, profylaktisk terapi og forebyggende terapi.
Begrepene "peptider", "proteiner" og "polypeptider" brukes synonymt heri.
"Biologisk aktiv" betyr slik det brukes heri, at det har en in vivo- eller in vitro-aktivitet som kan utføres direkte eller indirekte. Biologisk aktive fragmenter av BAFF-R kan ha f.eks. 70% aminosyrehomologi med det aktive sete av receptoren, mer foretrukket minst 80% og mest foretrukket minst 90% homologi. Identitet eller homologi med hensyn til receptoren defineres heri som prosentdelen aminosyreresiduer i kandidatsekvensen som er identiske med BAFF-R-residuene i SEKV ID NR: 1, eller som er identiske med et bestemt parti av aminosyreresiduene i SEKV ID NR: 1.
Begrepet "pattedyr" viser slik det brukes heri, til hvilket som helst dyr som klassifi-seres som pattedyr, omfattende mennesker, kyr, hester, hunder, mus og katter. I en foretrukken utførelse av oppfinnelsen er pattedyret et menneske.
Utøvelsen av foreliggende oppfinnelse vil, hvis intet annet er nevnt, benytte seg av konvensjonelle teknikker innen cellebiologi, cellkultur, molekylærbiologi, transgen-biologi, mikrobiologi, rekombinant DNA og immunologi, som ligger innen kunnska-pen innen faget. Slike teknikker beskrives i litteraturen.
Det skal nå henvises i større detalj til de for tiden foretrukne utførelser av oppfinnelsen. Foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av BAFF-R og BAFF-R-beslektede molekyler for å bevirke en vekst og modning av B-celler og en utsond-ring av immunoglobulin. Oppfinnelsen vedrører anvendelse av BAFF-R og BAFF-R-beslektede molekyler for å utløse responser i immunsystemet, slik det er nødvendig i immunrelaterte forstyrrelser. I tillegg omfatter oppfinnelsen en behandling av kreft og immunforstyrrelser ved anvendelse av et BAFF-R eller et BAFF-R-beslektet gen ved genterapeutiske metoder.
BAFF-R og homologer derav som produseres av verter som er blitt transformert med sekvensene ifølge oppfinnelsen, samt nativt BAFF-R som er blitt renset ved fremgangsmåtene som er kjent innen faget, eller produsert fra kjente aminosyre-sekvenser, er nyttige i forskjellige metoder for antikreft-, antisvulst- og immunoregulatoriske anvendelser. De er også nyttige i terapi og metoder rettet mot andre sykdommer.
Et annet trekk av oppfinnelsen vedrører anvendelse av polypeptidet som kodes for av den isolerte nukleinsyre som koder for BAFF-R i "antisense"-terapi. Anvendt heri viser "antisense"-terapi til en administrasjon eller in s/tu-generering av oligonukleotider eller deres derivater som spesifikt hybridiserer under cellulære betingelser med det cellulære mRNA og/eller DNA som koder for den aktuelle ligand, for å inhibere ekspresjonen av det kodede protein, dvs. ved å inhibere transkripsjonen og/eller translasjonen. Bindingen kan være konvensjonell basepar-komplementaritet eller, f.eks. i tilfellet av binding til DNA-duplekser, via spesifikke vekselvirkninger i hovedfuren på dobbeltheliksen. Generelt viser "antisense"-terapi til en rekke teknikker som generelt brukes innen faget, og omfatter hvilken som helst terapi som er avhengig av en spesifikk binding til oligonukleotidsekvenser.
Et antisense-konstrukt ifølge foreliggende oppfinnelse kan f.eks. leveres som et ekspresjonsplasmid, som når det transkriberes i cellen, danner RNA som er komp-lementært med i det minste et parti av det cellulære mRNA som koder for BAFF-ligand. Alternativt kan antisense-konstruktet være en oligonukleotidprobe som genereres ex vivo. Slike oligonukleotidprober er fortrinnsvis modifiserte oligonukleo tider som er resistente mot endogene nukleaser og som derfor er stabile in vivo. Eksempler på nukleinsyremolekyler for bruk som antisense-oligonukleotider er fos-foramidater, fosfotionat- og metylfosfonatanaloger av DNA (se f.eks. 5.176.996; 5.264.564 og 5.256.775). I tillegg finnes en oversikt over generelle fremgangsmåter ved konstruksjon av oligomerer som er nyttige i antisenseterapi, f.eks. i Van Der Krol et al., (1998) Biotechniques 6: 958-976; og Stein et al. (1988) Cancer Res 48: 2659-2668, uttrykkelig innlemmet heri ved henvisning.
BAFF-R ifølge oppfinnelsen er, slik det ble beskrevet ovenfor, et medlem av TNF-receptorfamilien. Proteinet, fragmenter eller homologer derav kan derfor finne bred terapeutisk og diagnostisk anvendelse.
Polypeptidene ifølge oppfinnelsen vekselvirker spesifikt med BAFF, som er et polypeptid som tidligere er blitt beskrevet i W099/12964, innlemmet heri ved henvisning. Imidlertid muliggjør peptidene og metodene som beskrives heri, en identifika-sjon av molekyler som spesifikt vekselvirker med BAFF-R eller fragmenter derav.
Oppfinnelsen som kreves beskyttet, omfatter i visse utførelser metoder for anvendelse av peptider avledet fra BAFF-R som har evnen til å binde BAFF. Fragmenter av BAFF-R'ene kan fremstilles på flere måter, f.eks. rekombinant, ved PCR, proteolytisk spaltning eller ved kjemisk syntese. Interne eller terminale fragmenter av et polypeptid kan genereres ved å fjerne ett eller flere nukleotider fra én ende eller begge ender av en nukleinsyre som koder for polypeptidet. Ekspresjon av det mu-tageniserte DNA danner polypeptidfragmenter.
Kimære molekyler for anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse kan også fremstilles ved bruk av teknikker som er kjent innen faget. Foreliggende oppfinnelse vurderer anvendelse av kimære molekyler omfattende et BAFF-R-polypeptid (eller en variant derav) kondensert til en heterolog aminosyresekvens, såsom IgG-Fc-domene av et immunoglobulin. Fortrinnsvis er slike kimære molekyler løselige og omfatter et løselig BAFF-R-polypeptid. In en foretrukken utførelse omfatter det kimære molekyl aminosyreresiduene 1 til 50 av SEKV. ID NR: 1 kondensert til en Fc-domene.
Polypeptidfragmenter kan også syntetiseres kjemisk ved bruk av teknikker som er kjent innen faget, såsom konvensjonell Merrifield fastfase-f-moc- eller t-boc-kjemi. F.eks. kan peptider og DNA-sekvenser ifølge foreliggende oppfinnelse deles opp i vilkårlige fragmenter av en ønsket lengde uten noen overlapping av fragmentet, eller deles opp i overlappende fragmenter av ønsket lengde. Metoder såsom disse skal beskrives i større detalj i det følgende.
Generering av løselige former for BAFF- R
Løselige former for BAFF-R kan ofte signalere virksomt, og kan derfor administreres som et legemiddel som nå etterligner den naturlige membranform. Det er mulig at BAFF-R'et som kreves beskyttet heri, utsondres naturlig i form av løselige cytoki-ner, men hvis ikke, kan en imidlertid omkonstruere genet for å fremtvinge en ut-sondring. For å skape en løselig utsondret form for BAFF-R, vil en på DNA-nivå fjerne N-terminus-transmembrane partier, og en del av stilkpartiet, og erstatte dem med en ledersekvens av type I, eller alternativt av type II, som vil muliggjøre en virksom proteolytisk spaltning i det valgte ekspresjonssystem. En fagman vil kunne variere lengden av stilkpartiet som bevares i utsondringsekspresjonskonstruktet for å optimere både ligandbindingsegenskapene og utsondringseffekten. F.eks. kunne konstrukter som inneholdt alle mulige stilklengder, dvs. N-terminale avkortelser, fremstilles slik at det ville dannes proteiner som starter ved aminosyre 1 til 51. Sti I kse kven sen med optimal lengde ville resultere fra denne type analyse.
I foretrukne utførelser av foreliggende oppfinnelse er det løselige BAFF-R-polypeptid: et isolert BAFF-R-polypeptid med nativ sekvens omfattende aminosyreresiduene 1 til 51 av SEKV ID NR: 1 eller et fragment derav; et isolert BAFF-R-polypeptid som har minst 80% (og mer foretrukket 90%) aminosyresekvensidentitet med BAFF-R-polypeptidet med nativ sekvens omfattende aminosyreresiduene 1 til 51 av SEKV ID NR: 1 eller et fragment derav; et isolert BAFF-R-polypeptid med nativ sekvens omfattende aminosyreresiduene 1 til 50 av SEKV. ID NR: 1 eller et fragment derav; eller et isolert BAFF-R-polypeptid omfattende aminosyreresiduene 8 til 41 av SEKV ID NR: 1 eller et fragment derav.
Generering av antistoffer som reagerer med BAFF- R
Oppfinnelsen omfatter også antistoffer som reagerer spesifikt med BAFF-R ifølge oppfinnelsen eller dens koreceptorer. Anti-protein/anti-peptid-antisera eller monoklonale antistoffer kan fremstilles ifølge standardprotokoller (se f.eks. Antibodies: A Laboratory Manual, utg. av Harlow og Lane (Cold Spring Harbor Press: 1988)). Et pattedyr såsom en mus, en hamster eller en kanin, kan immuniseres med en im-munogen form for peptidet. Teknikker ved formidling av immunogenisitet til et pro tein eller peptid omfatter konjugering med bærere eller andre teknikker som er vel-kjent innen faget.
Et immunogent parti av BAFF-R eller dens koreceptorer kan administreres i nærvær av et hjelpestoff. Immuniseringens fremskritt kan overvåkes ved påvisning av an-tistofftiteren i plasma eller serum. Standard ELISA- eller andre immunoassayer kan brukes med immunogenet som antigen for å bedømme nivået av antistoffer.
I en foretrukken utførelse er foreliggende antistoffer immunospesifikke for antigene determinanter av BAFF-R eller dens koreceptorer, f.eks. antigene determinanter av et polypeptid med SEKV ID NR: 1 eller en nært beslektet human eller ikke-human pattedyr-homolog (f.eks. 70, 80 eller 90% homolog, mer foretrukket minst 95% homolog). I enda en ytterligere, foretrukken utførelse av foreliggende oppfinnelse kryssreagerer anti-BAFF-R- eller anti-BAFF-koreceptorantistoffene ikke vesentlig (dvs. reagerer ikke spesifikt) med et protein som f.eks. er mindre enn 80% homologt med SEKV ID NR: 1, fortrinnsvis mindre enn 90% homologt med SEKV ID NR: 1 og mest foretrukket mindre enn 95% homologt med SEKV ID NR: 1. Med "kryssreagerer ikke vesentlig" menes at antistoffet har en bindingsaffinitet for et ikke-homologt protein som er mindre enn 10%, fortrinnsvis mindre enn 5% og enda mer foretrukket mindre enn 1%, av bindingsaffiniteten for et protein med SEKV ID NR: 1.
Begrepet antistoff skal slik det brukes heri, omfatte fragmenter derav som også reagerer spesifikt med BAFF-R eller dets receptorer. Antistoffer kan fragmenteres ved bruk av konvensjonelle teknikker, og fragmentsamlingen kan gjennomsøkes for å finne nyttige fragmenter på samme måte som ble beskrevet ovenfor for hele antistoffer. F.eks. kan F(ab')2-fragmenter genereres ved å behandle antistoffet med pepsin. Det dannede F(ab')2-fragment kan behandles for å redusere disulfidbroer for å danne Fab'-fragmenter. Antistoffene ifølge foreliggende oppfinnelse skal også omfatte biospesifikke og kimære molekyler som har anti-BAFF-R- eller anti-BAFF-koreceptor-aktivitet. Dermed kan både monoklonale og polyklonale antistoffer (Ab) rettet mot BAFF-R og deres koreceptorer, og antistoffragmenter såsom Fab' og
F(ab')2brukes til å blokkere virkningen av BAFF-R og dens tilhørende koreceptorer.
Forskjellige former for antistoffer kan også fremstilles ved bruk av standard rekombinante DNA-teknikker (Winter og Milstein, Nature 349: 293-299 (1991), uttrykkelig innlemmet heri ved henvisning). F.eks. kan det konstrueres kimære antistoffer hvor den antigenbindende domene fra et dyre-antistoff kobles til en human kons tant domene (f.eks. Cabilly et al., US 4.816.567, innlemmet heri ved henvisning). Kimære antistoffer kan nedsette de observerte immunogene responser som utløses av dyre-antistoffer når de brukes ved klinisk behandling av mennesker.
I tillegg kan det syntetiseres rekombinante "humaniserte antistoffer" som gjen-kjenner BAFF-R eller dens koreceptorer. Humaniserte antistoffer er kimærer som omfatter hovedsakelig humane IgG-sekvenser som man har innført partiene som er ansvarlige for den spesifikke antigenbinding, inn i. Dyr immuniseres med det øns-kede antigen, de tilsvarende antistoffer isoleres, og andelen av variabelt parti-sekvenser som er ansvarlige for den spesifikke antigenbinding, fjernes. De dyre-avledede antigenbindende partier klones deretter inn i den passende posisjon av humane antistoffgener hvor de antigenbindende partier er blitt fjernet. Humaniserte antistoffer minimerer anvendelsen av heterologe (dvs. inter-art-) sekvenser i humane antistoffer, og vil derfor mindre sannsylig utløse en immunrespons i individet som behandles.
En konstruksjon av forskjellige klasser av rekombinante antistoffer kan også oppnås ved å fremstille kimære eller humaniserte antistoffer som omfatter variable domener og humane konstante domener (CH1, CH2, CH3) isolert fra forskjellige klasser av immunoglobuliner. F.eks. kan antistoffer med en hevet antigenbindings-sete-valens fremstilles rekombinant ved å klone det antigenbindende sete inn i vektorer som bærer human kjede-konstante partier (Arulanandam et al., J. Exp. Med., 177: 1439-1450 (1993), innlemmet heri ved henvisning).
I tillegg kan standard rekombinante DNA-teknikker brukes for å endre bindingsaffiniteten av rekombinante antistoffer til sine antigener ved å endre aminosyreresiduer i området rundt antigenbindingssetene. Antigenbindingsaffiniteten av et humani-sert antistoff kan heves ved mutagenese på grunnlag av molekylær modellering (Queen et al., Proe. Nati. Acad. Sei. 86: 10029-10033 (1989), innlemmet heri ved henvisning).
Generering av analoqer: produksjon av endrede DNA- og peptidsekvenser
Analoger av BAFF-R kan skille seg fra de naturlig forekommende BAFF-R i aminosyresekvensen, eller på måter som ikke omfatter sekvensen, eller på begge måter. Ikke-sekvens-modifikasjoner omfatter in vivo- eller in wfro-kjemisk derivatisering av BAFF-R'en. Ikke-sekvens-modifikasjoner omfatter, men er ikke begrenset til, endringer i acetyleringen, metyleringen, fosforylasjonen, karboksylasjonen eller glykosylasjonen.
Foretrukne analoger omfatter BAFF-R biologisk aktive fragmenter derav, hvis sekvenser skiller seg fra sekvensen som er oppgitt i SEKV. ID NR: 1, ved én eller flere konservative aminosyresubstitusjoner, eller ved én eller flere ikke-konservative aminosyresubstitusjoner, delesjoner eller innføyelser som ikke forstyrrer aktiviteten av BAFF-liganden. Konservative substitusjoner omfatter vanligvis en erstatning av én aminosyre med en annen som har lignende egenskaper, f.eks. substitusjoner innenfor de følgende grupper: valin, glycin; glycin, alanin; valin, isoleucin, leucin; asparaginsyre, glutamsyre; asparagin, glutamin; serin, treonin; lysin, arginin; og fenylalanin, tyrosin.
Anvendelse
Hellengdes BAFF-R-gen (SEKV ID NR: 2) eller partier derav kan brukes som hybri-diseringsprober for en cDNA-samling for å isolere f.eks. enda flere gener som har en ønsket sekvensidentitet med BAFF-R-sekvensen som oppgis i SEKV ID NR: 2. Nukleotidsekvenser som koder for BAFF-R, kan også brukes til å konstruere hybri-diseringsprober for å kartlegge genet som koder for BAFF-R, og for en genetisk analyse av individer med genetiske forstyrrelser. Gjennomsøkingsassayer kan ut-vikles for å finne ledeforbindelser som etterligner den biologiske aktivitet av et BAFF-R. Slike gjennomsøkingsassayer vil omfatte assayer som kan benyttes til et høykapasitets søk gjennom kjemiske samlinger, hvorved de blir spesielt godt egnet til å identifisere småmolekylære legemiddelkandidater. Små molekyler som vurde-res, omfatter syntetiske organiske eller uorganiske forbindelser. Nukleinsyrer som koder for BAFF-R eller dens modifiserte former, kan også brukes til å generere enten transgene dyr eller "knock out"-dyr som i sin tur er nyttige ved utvikling av og søk etter terapeutisk nyttige reagensmidler.
Slik det beskrives heri, tilveiebringes i én utførelse av oppfinnelsen fremgangsmåter ved stimulering av B-cellevekst, dendrittcelle-indusert B-cellevekst og -modning eller immunoglobulinproduksjon i et dyr ved bruk av BAFF-R-polypeptid, eller kostimulering av B-cellevekst, dendrittcelle-indusert B-cellevekst og -modning eller immunoglobulinproduksjon i et dyr ved bruk av BAFF-R-polypeptid og et anti-T-antistoff, en CD40-ligand eller en anti-CD40-ligand. Også omfattet er fremgangsmåter ved inhibering av B-cellevekst, dendrittcelle-indusert B-cellevekst og
-modning eller immunoglobulinproduksjon i et dyr ved bruk av BAFF-R-polypeptid.
I en annen utførelse tilveiebringer oppfinnelsen fremgangsmåter ved bruk av BAFF-R ved behandling av autoimmune sykdommer, hypertensjon, kardiovaskulære forstyrrelser, nyreforstyrrelser, B-celle-lymfoproliferative forstyrrelser, immunosuppressive sykdommer, organtransplantasjon, betennelse og HIV. Også omfattet er fremgangsmåter ved bruk av midler for behandling, undertrykking eller endring av en immunrespons som omfatter en signaleringsbane mellom BAFF-R og dens ligand.
I én utførelse tilveiebringer oppfinnelsen farmasøytiske sammenstninger omfattende et BAFF-R-polypeptid og et farmasøytisk akseptabelt hjelpestoff. Egnede bærere for et BAFF-R-polypeptid for eksempel, og deres formulering, beskrives i Remin<q->ton' s Pharmaceutical Sciences. 16. utg., 1980, Mack Publishing Co., utg. av Oslo et al. Vanligvis brukes en egnet mengde av et farmasøytisk akseptabelt salt i formuleringen for å gjøre formuleringen isotonisk. Eksempler på bæreren omfatter buffere såsom salin, Ringers oppløsning og dekstroseoppløsning. pH av oppløsningen er fortrinnsvis fra ca. 5 til ca. 8, mer foretrukket fra ca. 7,4 til ca. 7,8. Videre bærere omfatter preparater med vedvarende frigivning, såsom semipermeable matriser av faste hydrofobe polymerer, hvilke matriser foreligger i form av formede gjenstan-der, f.eks. liposomer, filmer eller mikropartikler. Det vil være åpenbart for fagmannen at visse bærere kan være mer å foretrekke, avhengig f.eks. av administra-sjonsruten og konsentrasjonen av et BAFF-R-polypeptid som skal administreres.
Administrasjonen kan utføres ved injeksjon (f.eks. intravenøs, intraperitoneal, sub-kutan, intramuskulær) eller ved andre fremgangsmåter, såsom infusjon, som sikrer en levering til blodstrømmen i virksom form.
Utøvelse av foreliggende oppfinnelse vil, hvis intet annet er nevnt, omfatte konvensjonelle teknikker innen cellebiologi, cellekultur, molekylærbiologi, mikrobiologi, rekombinant DNA, proteinkjemi og immunologi, som ligger innen kunnskapene innen faget. Slike teknikker beskrives i litteraturen. Se f.eks. Molecular Cloninq: A Labo-ratorv Manual. 2. utg. (Sambrook, Fritsch og Maniatis, utg.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989; DNA Clonin<q>. vol. I og II (D.N. Glover, utg.), 1985; Oli-qonucleotide Svnthesis (M.J. Gait, utg.), 1984; US-patent nr. 4.683.195 (Mullis et al.)) NucleicAcid Hvbridization (B.D. Hames og S.J. Higgins, utg.), 1984; Transcri<p->tion and Translation (B.D. Hames og S.J. Higgins, utg.), 1984; Culture of Animal Cells (R.I. Freshney, utg.), Alan R. Liss, Inc., 1987; Immobilized Cells and En-zvmes.IRL Press, 1986; A Practical Guide to Molecular Cloninq (B. Perbal), 1984; Methods in Enzvmoloqy. vol. 154 og 155 (Wu et al., utg.), Academic Press, New York; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.H. Miller og M.P. Calos, utg.)/1987, Cold Spring Harbor Laboratory; Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biolo<qy>(Mayer og Walker, utg.), Academic Press, London 1987; Handbook of Experiment Immunoloqy. vol. I-IV (D.M. Weir og CC. Blackwell, utg.), 1986; Manipulatinq the Mouse Embryo. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1986.
De følgende eksempler bringes for å illustrere foreliggende oppfinnelse, og skal ikke oppfattes som å begrense den.
EKSEMPLER
Eksempel 1: Påvisning av BAFF- bindinq til BAFF- R ved bruk av et plateassav
I dette eksempel beskrives bindingen av BAFF til BAFF-R-transfiserte celler ved bruk av et plateassay.
Hellengdes humant BAFF-R ble generert fra BJAB-polyA<+->RNA ved bruk av Su-perscriptll-foramplifikasjonssettet (Life Technologies) for å generere cDNA-sjablonen, og amplifisert ved Pful ved bruk av primere som var komplementære med de 5'- og 3'-kodende sekvenser av BAFF-R. PCR-produktet ble klonet inn i CH269, som er et derivat av pCEP4 (Invitrogen). Den dannede klon ble benevnt pJST535. Humane embryoniske nyreceller som inneholdt EBNA-l-gen (293EBNA), ble podet inn i 6-brønners plater som var bestrøket med fibronektin, og transfisert ved lipofektamin (Life Technologies) med enten pJST535 i forskjellige fortynnelser, eller CH269 som bakgrunnskontroll. 48 timer etter transfeksjonen, ble de transfiserte celler testet for sin evne til å binde løselig flag-hBAFF (aminosyrene L83-L285) som følger. Alle inkubasjonene foregikk ved romtemperatur. Kondisjonert medium ble sugd opp fra brønnene, og cellene ble vasket med BHA-buffer (20 mM HEPES pH 7,0, 0,5 mg/ml BSA, 0,1% NaN3) og inkubert med 0,5 jig/ml flag-hBAFF fortynnet i PBS som inneholdt 1 mM MgCI2, 1 mM CaCI2og 0,1% NaN3. Etter 1 ti-mes inkubasjon, ble BAFF-oppløsningen fjernet, og cellene ble vasket med BHA. Cellene ble deretter inkubert i 30 minutter i en PBS-oppløsning som inneholdt 1jig/ml anti-flag-monoklonalt antistoff M2 (Sigma). Denne oppløsning ble sugd opp, og cellene ble vasket med BHA. Cellene ble deretter inkubert i 30 minutter i en l:3000-oppløsning av alkalifosfatase-konjugert geite-anti-muse-IgG-F(ab)'2(Jackson ImmunoResearch). Denne oppløsning ble sugd opp, og cellene ble vasket med BHA. For å nedsette mengden bakgrunnsflekking som skyldes endogent alkalifosfatase, ble cellene inkubert i 15 minutter i 2,5 mM levamisol (Vector Laboratories) som var fortynnet i 100 mM NaCI, 100 mM Tris-CI pH 9,5 og 5 mM MgCI2. For en kromogen påvisning av alkalifosfatase, ble inhibitoroppløsningen sugd opp, og cellene ble inkubert med en oppløsning av "fast red" og naftolfosfat (Pierce). Flekkingen ble observert og fotografert gjennom et laveffekts mikroskop.
Avsettelsen av "fast red "-fargestoff ble observert for alle brønnene som var blitt transfisert med den BAFF-R-uttrykkende plasmid pJST535. Frekvensen av signalet titrerte bort idet mengden av plasmid som var blitt transfisert inn i cellene, sank. Ingen flekking ble observert for cellene som var blitt transfisert med kontroll-ekspresjonsvektoren CH269. Heller ikke observerte man noen flekking på noen av de transfiserte celler når flag-hBAFF ble utelatt fra flekkingsprotokollen, eller når en annen ligand av TNF-familien, nemlig flag-tagget LIGHT, ble brukt istedenfor flag-hBAFF. Dermed virker flekkingen av BAFF-R-transfiserte celler med BAFF å være spesifikk.
Eksempel 2: BAFF- bindinq til BAFF- R- transfiserte celler ved FACS- analyse
Dette eksempel beskriver påvisningen av BAFF til BAFF-R-transfiserte celler ved bruk av FACS-analyse.
Plasmidet som kodet for hellengdes BAFF-R, nemlig pJST535, ble transfisert inn i 293EBNA-celler ved bruk av FuGene6 (Boehringer Mannheim). 24 eller 48 timer etter transfeksjonen, ble cellene fjernet fra platene ved bruk av 5 mM EDTA i PBS, og telt. Cellene ble vasket to ganger med FACS-buffer (PBS som inneholdt 10% føtalt bovint serum, 0,1% NaN3og 10 jig/ml hlgG (Jackson ImmunoResearch), og deretter ble 2,5 x IO<5>celler inkubert i 1 time på is med flag-hBAFF som var fortynnet inn i FACS-buffer i konsentrasjoner fra 9 jig/ml til 0,037 jig/ml. Cellene ble vasket med FACS-buffer og inkubert med anti-flag-monoklonalt antistoff M2 i konsentrasjonen 5jig/ml i 30 minutter på is. Cellene ble vasket med FACS-buffer og inkubert i 30 minutter på is i en oppløsning som inneholdt en l:100-fortynning av R-fykoerytrin-konjugert F(ab')2-esel-anti-muse-IgG og 10 jig/ml 7-AAD. Etter vasking av cellene med FACS-buffer, ble de resuspendert i FACS-buffer som inneholdt 1% paraformaldehyd. FACS-analyse fulgte, hvor de 7-AAD-positive (døde) celler ble utelukket.
Resultatene av FACS-analysen tyder på at en del av cellene som var transfisert med BAFF-R, har evnen til å binde BAFF. Ved BAFF-konsentrasjonen 9 jig/ml binder ca. 28% av cellene BAFF for en midlere fluorescensintensitet (MFI) på 366. Ved bruk av kun PE-merket esel-anti-muse-reagens, forekommer ingen betydelig for- skyvning av cellene. Kun 1,3% av cellene har en MFI på 23,5, hvor gjennomsnittet for alle celler er 5,5. Signalet på de BAFF-R-transfiserte celler titrerer ut med syn-kende mengder BAFF. Ved 100 ng/ml har 8,76% av cellene MFI-verdien 78,9.
Eksempel 3: FACS- analvse av BAFF/ BAFF- R- vekselvirkninqen omfattende en GFP-markør
I dette eksempel beskrives evnen av BAFF til å binde celler som er blitt kotransfi-sert med BAFF-R og et GFP-reporterplasmid.
293EBNA-cellene ble transfisert med pJST535 og et GFP-reporterplasmid, slik det ble beskrevet i eksempel 2. Reporterplasmidet koder for et membran-forankret GFP-molekyl. Ved bruk av ko-transfeksjon av de to plasmider, analyserte vi prosentdelen transfiserte celler som hadde evnen til å binde BAFF. Cellene ble fjernet fra platene og underkastet BAFF-binding og -påvisning slik det ble beskrevet i eksempel 2. Igjen ble 7-AAD innlemmet for å utelukke de døde cellene. Prøvene ble analysert ved FACS og plottet. Kvadranten øverst til høyre representerer celler med bundet BAFF (fykoerytrin-positive) som uttrykker GFP.
Selv om ikke alle de GFP-transfiserte celler virker å binde BAFF, foreligger en betydelig andel av cellene i den øverste høyre kvadrant sammenlignet med kontrollen. 33% av de transfiserte celler er øverst til høyre, sammenlignet med 8%. Det kan hende at det er nødvendig med et visst nivå av BAFF-R-ekspresjon for at BAFF skal bindes til cellene. Det er også mulig at det er nødvendig med en koreceptor for en høy-affinitets vekselvirkning, og at denne receptor er begrensende på 293EBNA-cellene.
Eksempel 4: Immunofelning av flag- hBAFF med BAFF- R/ Fc- fusionsprodukt
Dette eksempel beskriver den spesifikke vekselvirkning av flag-hBAFF med BAFF-R/Fc, som er et molekyl satt sammen av cysteinrik domene (CRD) av BAFF-R kondensert med Fc-domene av humant IgGl.
CRD av BAFF-R ble generert ved RT-PCR fra BJAB-polyA<+->RNA slik det ble beskrevet i eksempel 1, ved bruk av en oligo som var komplementær med nukleotidene 132-152 av den hBAFF-R-kodende sekvens, som 3'-primer. Det dannede PCR-fragment ble klonet inn i CH269 nedstrøms for en murin IgG-kappa-signalsekvens og oppstrøms for Fc-enheten av humant IgG. Dette konstrukt ble benevnt pJST538. Konstruktet pJST538 eller CH269 ble transfisert inn i 293EBNA med lipofektamin. Kondisjonerte medier og celleekstrakter ble samlet 20 timer etter transfeksjonen. Celler ble løseliggjort i 20 mM Tris pH 7,5/50 mM NaCI/0,5% NP40/0,5% deoksyko-linsyre, og avfallet ble bortsentrifugert. En alikvot av det kondisjonerte medium og celleekstraktene ble slått sammen med et likt volum 2xSDS-reduserende buffer, kokt og underkastet SDS-PAGE og "western transfer". For å bekrefte ekspresjonen, ble membranen probet med en l:3.000-fortynning av muse-anti-humant IgG konjugert med pepperrotperoksidase (HRP) i 5% fettfri tørrmelk i TBST ved romtemperatur i 30 minutter og vasket med TBST. Blottene ble utviklet med ECL (Amersham) og eksponert på film.
Immunofelninger ble utført ved å inkubere 25 ng enten flag-hBAFF eller flag-hTWEAK med 0,5 ml kondisjonert medium fra 293EBNA som var transfisert med enten pJST538 eller CH269, ved 4°C i 1 time under rysting, fulgt av tilsetningen av 30 \ i\ Protein A-Sepharose (Pharmacia), og rystingen ble fortsatt over natten. Protein A-Sepharose-perlene ble vasket to ganger med PBS og resuspendert i 2xSDS-reduserende prøvebuffer. Etter SDS-PAGE og "western transfer", ble blottene inkubert med 5 jig/ml anti-flag-monoklonalt antistoff M2 (Sigma) i 5% fettfri tørrmelk i TBST ved romtemperatur i 1 time. Blottene ble vasket med TBST og inkubert med en l:3.000-fortynning av geite-anti-muse-IgG/HRP-konjugat (Jackson Immunoresearch) i 5% fettfri tørrmelk i TBST ved romtemperatur i 30 minutter. Blottene ble utviklet med ECL (Amersham) og eksponert på film.
Etter transfeksjon av pJST538 inn i 293EBNA-celler, påviste man en ekspresjon av et ca. 43 kDa tungt protein i både celleekstraktet og det kondisjonerte medium, ved "western blot"-analyse med muse-anti-humant IgG (Jackson ImmunoResearch), hvilket tydet på at BAFF-R/Fc-fusjonsproduktet ble virksomt uttrykt og utsondret.
I immunofelningene ble et bånd observert utelukkende som et resultat av inkuba-sjonen av BAFF-R/Fc og flag-hBAFF. Dette bånd ko-migrerte med en direkte ladet prøve av flag-hBAFF. Ingen av de andre banene produserte noe signal, hvilket tydet på at vekselvirkningen mellom BAFF-R/Fc og flag-hBAFF er spesifikk.
Eksempel 5: Generering av løselige receptorformer
For å danne en receptorinhibitor for bruk på mennesker, trenger man den humane receptors cDNA-sekvens av den ekstracellulære domene. Hvis museformen er kjent, gjennomsøkes humane cDNA-samlinger ved bruk av muse-cDNA-sekvensen, og slike manipulasjoner utføres rutinemessig i dette område. Med en human cDNA-sekvens, kan en utforme oligonukleotidprimere for å PCR-amplifisere den ekstracellulære domene av receptoren i fravær av transmembran og intracellulær domene. Vanligvis innlemmer man de fleste aminosyrer mellom den siste disulfid-koblede "TNF-domene" og den transmembrane domene. En kan variere lengden av "stilkpartiet som skal innlemmes, for å optimere potensen av den dannede løselige receptor. Dette amplifiserte stykke ville konstrueres slik at det inneholdt egnede rest-riksjonsseter, for å muliggjøre en kloning inn i forskjellige C-terminale Ig-fusjons-kimærvektorer. Alternativt kan en innføye et stopp-signal i 3'-ende og danne en løselig form for receptoren uten å ty til bruken av et Ig-fusjonskimær. De dannede vektorer kan uttrykkes i de fleste systemer som brukes innen bioteknologien, omfattende gjær, insektceller, bakterier og pattedyrceller, og det finnes eksempler på alle typer ekspresjon. Forskjellige humane Fc-domener kan festes på for å optimere eller eliminere FcR- og komplement-vekselvirkninger etter ønske. Alternativt kan muterte former for disse Fc-domener brukes for å selektivt fjerne FcR- eller komplement-vekselvirkninger eller en festing av N-bundne sukkere til Fc-domene, hvilket har visse fordeler.
Eksempel 6: Generering av aqonistiske eller antagonistiske antistoffer
De ovenfor beskrevne løselige receptorformer kan brukes til å immunisere mus og fremstille monoklonale antistoffer ved konvensjonelle metoder. De dannede mAb'er som identifiseres ved ELISA-metoder, kan testes nærmere for sin agonistaktivitet, enten i form av løselige antistoffer eller immobilisert på plast i forskjellige in vitro-cellulære assayer. Ofte er døden av HT29-cellelinjen et bekvemt system som er føl-somt for signalering via mange TNF-receptorer. Hvis denne linje ikke har den aktuelle receptor, kan hellengdes receptor stabilt transfiseres inn i HT29-linjen for å nå gjøre det mulig for cytotoksisitetsassayet å fungere. Alternativt kan slike celler brukes i Cytosensor-apparatet for å bedømme om en aktivering av receptoren kan ut-løse en pH-endring som tyder på en signaleringshendelse. Receptorer i TNF-familien signalerer godt i et slikt format, og i denne fremgangsmåte er det ikke nødvendig å kjenne til de faktiske biologiske hendelser som utløses av receptoren. En ville "humanisere" de agonistiske mAb'er for klinisk bruk. Denne fremgangsmåte kan også brukes til å definere antagonistiske mAb'er. Slike mAb'er vil defineres ved en mangel på agonist-aktivitet og sin evne til å inhibere receptor/ligand-vekselvirkninger ifølge overvåking ved ELISA, klassisk binding eller BIAcore- teknikker. Til slutt kan en induksjon av kjemokinutsondring av forskjellige celler som respons på et agonist-antistoff, utgjøre et gjennomsøkingsassay.
Eksempel 7: Søk etter inhibitorer av receptor/ liqand- vekselvirkning
Ved bruk av receptor/Ig-fusjonsproteinet kan en søke gjennom enten kombinato-riske samlinger for å finne molekyler som kan binde receptoren direkte. Disse molekyler kan deretter testes i et ELISA-formatert assay ved bruk av receptor/Ig-fusjonsproteinet og en løselig form for liganden for sin evne til å inhibere receptor/ligand-vekselvirkningen. Dette ELISA kan brukes direkte for å søke gjennom forskjellige samlinger av naturlige produkter osv. for å finne inhibitoriske forbindelser. Receptoren kan transfiseres inn i en cellelinje såsom HT29-linjen for å danne et biologisk assay (i dette tilfelle cytotoksisitet), som deretter kan utgjøre gjennomsø-kingsassayet.
Eksempel 8: BAFF- R/ IgG forårsaker en reduksjon av antallet B- celler i normale mus
8 uker gamle BALB/c-mus av hunnkjønn ble ervervet fra The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Mus (3 per gruppe) fikk i.p. enten PBS, 400 jig humant BAFF-R/huIgGl (hBAFF-R/Ig)-fusjonsprotein (levert av Teresa Cachero, Biogen) eller 400 jig renset humant IgG (HuIgG) (Sandoz, Basel, Sveits) på dagene -8, -5, -1 og +2. Musene fikk 100 (il 10% røde blodceller fra sau (SRBC) (Colorado Serum Company, Denver, CO) på dag 0.
På tidspunktet for avlivningen samlet man blod ved hjertepunktur, inn i rør som inneholdt EDT, og de røde blodcellene ble spaltet i en hypotonisk buffer. Blod ble også samlet uten EDTA for serumpreparering. Enkeltcellesuspensjoner ble fremstilt fra milter og mesenteriske lymfeknuter (MLN), og røde blodceller ble spaltet i en hypotonisk buffer. Strømningscytometri ble utført ved bruk av PE-konjugert anti-CD45R/B220, anti-syndekan/CD138 og anti-B7.2, og FITC-konjugert anti-IgM og anti-CD45R/B220. Alle mAb'ene ble ervervet fra Pharmingen (San Diego, CA). Kort sagt ble Fc-receptorer blokkert med 10 jig/ml "Fc Block" (Pharmingen) i 15 minutter på is, hvoretter man tilsatte PE- og FITC-konjugerte mAb'er og inkuberte dem på is i 20-30 minutter. Cellene ble vasket én gang og suspendert i 0,5% paraformaldehyd. Cellefluorescensdataen ble innhentet på et "FACSCalibur"-strømningscytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA) og analysert ved bruk av "CELLQuest"-program va re (Becton Dickinson).
Etter behandling med hBAFF-R/Ig forelå ca. 50% reduksjon av antallet B-celler i perifert blod og i de perifere lymfeorganer som ble undersøkt. B220høyIgMlav-B-celler utgjorde henholdsvis 23,4% og 21,5% av cellene i de PBS-behandlede hhv. HuIgG-behandlede mus, mens denne populasjon kun utgjorde 9,9% av cellene i hBAFF-R/Ig-behandlede mus. Plasmacelleantallet (sndecan/CD138<+>) virket også å være noe nedsatt, idet det forelå 5,7% hhv. 4,8% i blodet av henholdsvis PBS-behandlede og HuIgG-behandlede mus, sammenlignet med 3,9% i hBAFF-R/Ig-behandlede mus. B7.2-molekylet ble oppregulert på henholdsvis 3,1% og 4,5% av B220<+->cellene i de PBS-behandlede hhv. HuIgG-behandlede mus, sammenlignet med 1,9% i de hBAFF-R/Ig-behandlede mus.
I milten var B220<høy->B-celleantallet merkbart redusert i hBAFF-R/Ig-behandlede mus, idet de utgjorde 18,8%, sammenlignet med 36,7% og 40% i henholdsvis de PBS- og HuIgG-behandlede mus. Denne reduksjon ble observert i både IgM<høy->og IgM<la>v-del<p>opulasjonen (se tabell 8A). Man observerte ingen endring i den nylig dannede B-celleavdeling i milten, B220lavIgMhø<y>(data ikke vist). Plasmacelleantallet (syndecan/CD138<+>) virket også å være noe nedsatt, hvor det forelå 3,3% hhv. 3,4% i milten av henholdsvis PBS-behandlede og HuIgG-behandlede mus, sammenlignet med 2,4% i hBAFF-R/Ig-behandlede mus.
MLN oppviste en reduksjon i B220<+->B-celleantallet, idet det forelå 14,1% i hBAFF-R/Ig-behandlede mus sammenlignet med 26,7% hhv. 35,8% i henholdsvis PBS-behandlede og HuIgG-behandlede mus. Dataen oppsummeres i tabell 8A. Den nedsatte andel av B7.2<+->B-celler i blod- og plasmaceller i blodet og miltene av hBAFF-R/Ig-behandlede mus etter immunisering med SRBCer tyder på at det foreligger en inhibering av B-celle-aktiveringen og/eller -modningen og eventuelt en hevet eliminering av aktiverte B-celler. En meget liten prosentdel antigen-spesifikke B-celler ville aktiveres og reagere på noe antigen, i dette tilfelle SRBC. Fordi hBAFF-R/Ig-behandlingen førte til en såpass dramatisk reduksjon av prosentdelen B-celler i alle de undersøkte vev, ca. 50%, virker aktiviteten av hBAFF-R/Ig også å rette seg mot hvilende, modne B-celler.
Man vurderer derfor at BAFF-R-fusjonsprotein kan brukes som et terapeutisk legemiddel med en klinisk anvendelse i B-celle-medierte sykdommer. Sykdommer omfatter slike som er autoimmune av natur, såsom systemisk lupus erythematose, myasthenia gravis, autoimmun hemolytisk anemi, ideopatisk trombocytopenia purpura, anti-fosfolipid-syndrom, Chagas sykdom, Graves sykdom, Wegeners granulomatose, polyarteritt Nodosa og raskt fremskridende glomerulonefritt. Det terapeutiske middel finner også anvendelse i plasmacelleforstyrrelser såsom multippelt myeloma, Waldenstroms makroglobulinemi, Heavey-kjede-sykdom, primær eller immunocytt-assosiert amyloidose og monoklonal gammopati av ubestemt signifikans (MGUS). Onkologimål omfatter B-celle-karsinomaer, leukemier og lymfomaer.
Eksempel 9: Blokkering av BAFF- indusert B- celleproliferasion in vitro ved bruk av løselig BAFF- R
I dette eksempel viser vi at det løselige BAFF-R/hlgGl-fusjonsprotein har evnen til å blokkere en BAFF-indusert B-celleproliferasjon i musesplenocytter.
Murine splenocytter (5xl0<5>celler/ml) fra Balb/c-mus ble isolert og dyrket i en 96-brønners plate i 100 (il RPMI (Life Technologies) supplementert med 10% føltalt kalveserum (JRH), 2 mM glutamin, 100 enheter/ml penicillin og 100 mg/ml strep-tomycin (Life Technologies). Deretter ble forskjellige mengder humant BAFF, 10 (ig/ml humant BAFF-R/hlgGl eller humant lg, samt 10^g/ml anti-muse-overflate-(i-Heavey-kjede (Jackson ImmunoResearch) tilsatt. Etter 48 timer i kultur ved 37°C, ble cellene pulsbehandlet i 24 timer med 1 jiCi/brønn [ metyl- 3H] tymidin (Dupont NEN) og samlet ved bruk av en cellesamler fra Tomtec (Orange, CT). Radioaktivite-ten ble målt i en Betaplate-væskescintillasjonsteller (Pharmacia Biotech).
Fig. 8 viser resultatene av splenocytt-proliferasjonsassayet. Vist er tellingen per minutt (CPM) innlemmet i muse-splenocyttceller mot mengden humant BAFF-reagensmiddel som ble tilsatt. Mengden anti-ji eller fusjonsprotein eller kontroll-hlgG holdes konstant ved 10jig/ml. De sorte firkanter representerer proliferasjons-nivået som induseres av BAFF alene. De sorte sirkler representerer proliferasjonen av cellene med BAFF og anti-ji. Kurven med de hvite triangler representerer inhiberingen som observeres når BAFF-R/hlgGl-BAFF tilsettes med anti-ji plus BAFF-R/hlgGl. De hvite ruter representerer inhiberingen som observeres med kontroll-humant lg.
Tilsetningen av BAFF plus anti-ji fører til en proliferasjon av muse-splenocytter in vitro. Mengden av<3>H-tymidin innlemmet i cellene er betydelig høyere enn nivået som oppnås ved tilsetning av enten kun BAFF eller kun anti-ji til splenocyttene. Behandlingen av splenocyttene med BAFF alene fører kun ved meget høye konsentrasjoner til en 3H-tymidin-innlemmelse. Tilsetningen av kun anti-ji fører ikke til noen proliferasjon. Når 10 jig/ml kontroll-humant lg ble tilsatt til splenocyttene med hevede mengder BAFF og 10 jig/ml anti-ji, forelå en svak nedsettelse av prolifera-sjonsnivået. Derimot når 10^g/ml humant BAFF-R/hlgGl-fusjonsprotein tilsettes til assayet under de samme betingelser, nedsettes proliferasjonen til det nivå som observeres for en behandling med kun BAFF. Dette tyder på at BAFF-R/hlgGl-fusjonsproteinet har evnen til å inhibere proliferasjonen av splenocytter som induseres av BAFF og anti-^i.
Eksempel 10: Blokkering av BAFF- bindinqen til Rali- celler ved brukav BAFF- R/ hlaGl
I dette eksempel beskrives en forinkubasjon av BAFF med BAFF-R/hlgGl-fusjonsprotein som fører til en nedsettelse av BAFF-bindingen til Raji-B-cellelymfomalinjen.
I dette FACS-assay ble 200 ng/ml flag-tagget humant BAFF forhåndsinkubert med enten humant BAFF-R/hlgGl eller humant LTpR/hlgGl i to forskjellige fortynninger fra 20^g/ml til 39 ng/ml eller intet fusjonsprotein, i 30 minutter på is. Inkubasjo-nen fant sted i en FACS-buffer som inneholdt PBS uten Ca<2+>eller Mg<2+>plus 10% FCS (JRH) og 0,05% natriumazid. Etter forinkubasjonen, ble BAFF-fusjonsproteinblandingen tilsatt til 5 x IO<6>Raji (ATCC)-celler/ml. Denne inkubasjon fant sted i 30 minutter på is, og deretter ble cellene vasket med 2 ml FACS-buffer ved 4°C. For å påvise det bundne BAFF, tilsatte man 5^g/ml anti-flag-antistoff M2 (Sigma) til cellene, og inkuberte i 30 minutter på is. Cellene ble igjen vasket som beskrevet ovenfor, og deretter inkubert med en l:100-fortynning av PE-konjugert esel-anti-muse-Ig (Jackson ImmunoResearch) i 30 minutter på is. Etter at cellene igjen var blitt vasket med FACS-buffer, ble de fiksert med 1% paraformaldehyd og avlest ved "FACS" (Becton Dickinson and Co.).
Fig. 9 viser resultatene av BAFF-blokkeringsassayet. Vist er MFI-avlesningene (midlere fluorescensintensitet) fra en "FACS"-a na lyse som undersøkte BAFF-bindingen til Raji-celler. De sorte firkanter representerer dataen når humant BAFF-R/hlgGl forinkuberes med BAFF før binding til cellene. Sirklene viser kurven som resulterer fra en tilsetning av et ikke-spesifikt fusjonsprotein, humant LTpR/hlgGl, til BAFF. x-Aksen representerer mengden av fusjonsprotein som ble tilsatt til 200 ng/ml BAFF før inkubasjon med cellene.
Når intet fusjonsprotein ble forinkubert med humant BAFF, var den midlere fluorescensintensitet (MFI) av prøven 80. Når humant LTpR/hlgGl forinkuberes med BAFF, selv i konsentrasjonen 20 jig/ml, forblir verdien av BAFF-bindingen til Raji-celler uforandret. Når imidlertid humant BAFF-R/hlgGl forinkuberes med BAFF, observeres en betydelig nedsettelse av MFI, ned til 20-25 selv med 625 ng/ml fusjonsprotein. Bakgrunns-MFI-verdien for dette eksperiment er 7. Dermed er BAFF-R/hlgGl meget virksomt ved blokkering av BAFF-bindingen til Raji-B-celler.
Eksempel 11: BAFF- R/ IqG svekker lupus- liqnende autoimmune forstyrrelser i transgene mus
Dette eksempel beskriver virkningene av BAFF-R/Ig for å nedsette den perifere B-cellesamling og inhibere utviklingen av splenamegali og nefritt.
Fem måneder gamle BAFF-transgene (Tg)-mus (C57BL/6) og like gamle mus fra samme kull ble brukt i eksperimentet. BAFF-Tg-mus manifesterer lymfocyttiske forstyrrelser og en autoimmun fenotype som ligner systemisk lupus erythematose (Mackay et al., 1999). Denne fenotype omfatter hevede populasjoner av perifere B-celler, omfattende transisjonene 1 (Tl) og 2 (T2), modne (M), marginalsone (MZ) og CDlhøy/IgM<høy->B-celler.
Musene fikk i.p. PBS, 400 mg renset humant IgG (hig) (Sandoz, Basel, Sveits) (3 per gruppe) eller 400 ug CHO-avledet humant BAFF-R/huIgGl (hBCMA/Ig)-fusjonsprotein (2 per gruppe) på dagene 0, 4, 7, 11, 14, 18, 21, 25, 28, 32 og 35, og ble avlivet på dag 40.
På tidspunktet for avlivningen, ble miltvekten målt, og enkeltcellesuspensjoner ble preparert etter spaltning av røde blodceller i en hypotonisk buffer. Strømningscy-tometri ble utført ved bruk av FITC-konjugert anti-CD21/CD35, PE-konjugert anti-IgD og anti-CDl, cykrom-konjugert anti-CD45R/B220 og biotin-konjugert anti-IgM. Alle mAb'er ble ervervet fra Pharmingen (San Diego, CA). Kort sagt ble Fc-receptorer blokkert med 10 jig/ml "Fc Block" (Pharmingen) i 10 minutter på is, fulgt av en tilsetning av biotin-konjugerte mAb'er i 30 minutter på is, og cellene ble vasket én gang, fulgt av en tilsetning av FITC, PE, cykrom-konjugerte Ab'er, strep-avidin-APC og 10 jig/ml "Fc Block". Cellene ble inkubert i 30 minutter på is, vasket én gang og suspendert i 0,5% paraformaldehyd. Cellefluorescensdata ble innhentet på et "FACSCalibur"-strømningscytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA) og analysert ved bruk av "CELLQuesf-programvare (Becton Dickinson).
Nærværet av proteiner i muse-urin ble målt ved bruk av Multistix 10 SG-reagensstrimler for en urinanalyse (Bayer Corp., Diagnostics Division).
Resultatene vises i de følgende tabeller 11A og 11B:
Miltene av de 3 måneder gamle Baff-Tg-mus (n=3) og likegamle mus fra samme kull (n=2) ble isolert og underkastet en FACS-analyse slik det ble beskrevet i Materialer og metoder. Tl-, T2-, M- og MZ-cellene ble definert i henhold til ekspresjonen av de følgende overflatemarkører (hi: høy; lo: lav; int: mellomliggende):
Tl: IgD<->, IgM<hi>, CD2l'°
MZ: IgD-, IgM<hi>, CD21
T2: IgD<+>, IgM<hi>, CD21<hi>
M: IgD<+>, IgM<10>, CD21<int>
10 måneder gamle Baff-Tg-mus (n=3) og like gamle mus fra samme kull (n=3) ble underkastet FACS-analyse slik det ble beskrevet i tabell 1.
Etter administrasjon av hBAFF-R/Ig til Baff-Tg-mus var Tl-, 12-, M- og MZ-populasjonene og CDl<høy>/IgM<høy->B-cellene i milten betydelig nedsatt sammenlignet med de PBS- og hlg-behandlede Baff-Tg-mus, hvor det samlede antall Tl-, 12-, M-, MZ- og CDl<høy>/IgM<høy->B-celler var nedsatt til et nivå som var lignende eller lavere enn nivået for kontroll-kullkameratene som var blitt behandlet med PBS (fig. 10a, 10b, 10c).
BAFF-R/Ig-behandling av Baff-Tg-mus førte til en svekkelse av Baff-mediert autoimmun sykdom, slik det fremgår fra observasjonen at de BAFF-R-behandlede mus hadde en milt av normal størrelse, mens kontrollbehandlede Baff-Tg-mus oppviste splenamegali (fig. 11). I tillegg var utviklingen av proteinuria, en indikator for ny-redysfunksjon, inhibert i BAFF-R/Ig-behandlede mus, mens kontrollbehandlede Baff-Tg-mus utviklet nefritt ifølge bestemmelser av et hevet proteinurianivå (fig. 12).
Mus som er transgene for Baff, har et sterkt hevet antall perifere B-celler, og vår nærmere analyse avslørte overveiende hevede Tl-, T2-, MZ-B-celle-delpopulasjoner i disse mus. Det forbigående trinn av B-celle-utviklingen (Tl og T2) er kontrollpunktet hvor autoreaktive B-celler formodentlig elimineres. Antallet CDl<hi>/IgM<hi->B-celler, som tenderer til å holde seg i den marginale sone, var også sterkt hevet i Baff-Tg-mus. Denne sistnevnte populasjon av B-celler viste seg å være hovedkilden for autoantistoffproduksjonen i NZB/NZW-lupus-mus. Behandling av Baff-Tg-mus med BAFF-R/Ig fører til en nedsettelse av Tl-, T2-, MZ- og CDl<hi->B-celle-populasjonene til nivåer som ligner, eller er lavere enn, hva som finnes i villtype-kullkamerat-kontroller.
BAFF-R/Ig fungerte ved å nedsette antallet perifere B-celler og inhibere utviklingen av splenamegali og nefritt. Derfor er, i tillegg til dets nytte ved systemisk lupus erythematose og lupus nefritt, virkningen av BAFF-R/Ig også nyttig i B-celle-medierte sykdommer som er autoimmune av natur, såsom myasthenia gravis, autoimmun hemolytisk anemi, idiopatisk trombocytopenia purpura, anti-fosfolipid-syndrom, Chagas sykdom, Graves sykdom, Wegeners granulomatose, polyarteritt nodosa og raskt fremskridende glomerulonefritt. Dette terapeutiske middel finner også anvendelse i plasmacelleforstyrrelser såsom multippelt myeloma, Waldenstroms makroglobulinemi, Heavey-kjedesykdom, primær eller immunocytt-forbundet amyloidose og monoklonal gammopati av ubestemt signifikans (MGUS). Onkologimål omfatter B-cellekarsinomaer, leukemier og lymfomaer.
Eksempel 12: Midlere arterielt trykk i BAFF- transqene mus
Dette eksperiment beskriver målingen av blodtrykket i BAFF-transgene mus. Ob-servasjoner som ble gjort under fenotype-bedømmelsen av BAFF-transgene mus, tydet på et potensiale for hypertensjon i musene.
Baff-Tg-mus som beskrevet ovenfor, ble bedøvet med ketamin. Venstre karotidar-terie ble blottlagt via et innsnitt i halsen. Et kateter ble innført i karotidarterien for å måle blodtrykket og hjertehastigheten. Kateteret ble forbundet med en trykkom-vandler, og blodtrykket ble målt ved bruk av et Gould datainnhentingssystem (Po-Ne-Mah-datainnhentingssystem og Gould-polygraf). Fra den pulsformede trykkbøl-geform, avledet man det systolske trykk, det diastolske trykk, det midlere trykk og hjertehastig heten. To grupper av mus ble brukt: BAFF-transgene mus (n=8) og villtype-kontroller (n=9).
Fig. 13 viser det midlere arterietrykk (MAP, i mmHg) for de to grupper. Slik det vises, hadde de BAFF-transgene dyr et midlere MAP på 102±8 mmHg. Kontrollmuse-ne hadde et midlere MAP på 92±6 mmHg. Dermed demonstrerer BAFF-musene en 10 mmHg økning av MAP sammenlignet med kontrollene, selv om dette ikke med-førte noen statistisk signifikans (ANOVA).
En mer detaljert analyse av dataen vises på fig. 14. På denne figur vises resultatene fra hvert enkelt dyr. I villtype-kontrollene (BAFF-), følger fordelingen av dataen en typisk, binomial fordeling. Derimot virker trykket i de BAFF-transgene mus (BAFF<+>) å være delt opp i to grupper, hvor den ene gruppe ligger i området 120-130 mmHg og den andre gruppe ligger i området 80-90 mmHg.
Som populasjon har de BAFF-transgene mus en tendens til hypertensjon, sammenlignet med negative kontrollmus. En analyse av de individuellene nivåene av arterielt trykk tyder på at de BAFF-transgene mus er fordelt i to subpopulasjoner, én med høyt blodtrykk og én med normalt blodtrykk. Følgelig kan en administrasjon av et løselig BAFF-R-fusjonsprotein eller en antistoff-homolog lindre virkningene av hypertensjon.
Eksempel 13: BAFF- R/ Iq- behandlinq av SNFi^ mus med etablert sykdom sinker pro-gresjonen til alvorlig nefritt
Lupus-tilbøyelige (SWRxNZB)Fl(SNFi)-mus av hunnkjønn i alderen 21 uker som oppviste moderat nefritt (30-100 mg/dl proteinuria), fikk 200 jig fusjonsprotein humant BAFF-R/huIgGl (hBCMA/Ig), humant IgG (HuIgG) (Sandoz) eller 200 (il PBS i.p. ukentlig i 8 uker. Urinet fra hver mus ble overvåket ukentlig for proteinuria ved bruk av Albustix (Bayer Corp., Terrytown, NY). Proteinuria over 100 mg/dl ble vurdert som alvorlig nefritt. BAFF-R/Ig ble produsert medium fra forbigående transfiserte EBNA293-celler. Kondisjonert fra 293-celler som overuttrykte hBCMA/Ig, ble ladet på en protein A-kolonne. Protein ble eluert ved bruk av 25 mM fosfat 100 mM NaCI pH 2,8 etter nøytralisasjon med 1/20-volum av 0,5 M NaP04pH 8,6. Valgte fraksjoner basert i OD280 ble underkastet reduserende og ikke-reduserende SDS-PAGE-geler og "western blots" for å identifisere det rensede protein.
Tre uker etter at behandlingen var avsluttet, oppviste 50% av musene som var blitt behandlet med BAFF-R/Ig, alvorlig nefritt, sammenlignet med 75% hhv. 87,5% av musene som fikk henholdsvis HuIgG og PBS (se fig. 15). Denne data demonstrerer at den løselige BA FF-receptor, BCMA/Ig, kan fungere blokkerende på B-celle-mediert autoimmun sykdom såsom lupus nefritt, og føre til en merkbar sinking av sykdommens fremskridning.
Eksempel 14: BAFF- R/ Iq- behandlinq av normale mus fører til en nedsettelse av antallet milt- dendrittceller ( DC) og en atypisk miltlokalisasion
Syv uker gamle BALB/c-mus av hunnkjønn (3 per gruppe) fikk i.p. enten 20 jig eller 50^ig humant BAFF-R/IgGl (hBCMA/Ig), 50 humant IgG (HuIgG) eller 100ug PBS én gang per uke i 4 uker. hBCMA/Ig-fusjonsproteinet ble isolert fra kultur-supernatanter av en stabilt transfisert CHO-cellelinje. Milter ble tatt ut 8 dager etter den siste injeksjon, og spaltet med kollagenase (Sigma, katalognummer C-5138) i 1 time ved 37°C. En enkeltcellesuspensjon ble fremstilt, RBCene ble spaltet i en hypotonisk buffer, og cellene ble vasket tre ganger i PBS. Splenocyttene ble preparert for en strømningscytometrisk analyse ved å flekke cellene med anti-CDllc-biotin fulgt av streptavidin-APC, anti-CD8a-cykrom og anti-CD4-FITC for å bedøm-me DC-populasjonene.
I et adskilt eksperiment fikk BALB/c-mus av hunnkjønn (N = 3) i.p. 100^g hBCMA/Ig én gang per uke i 4 uker, hvoretter miltene ble sjokkfrosset i OCT ved bruk av 2-metylbutan avkjølt på C02. Kryosnitt ble skåret og fiksert i aceton. Snit-tene ble inkubert med anti-CDllc-biotin fulgt av streptavidin-AP og substrat BCIP (Pierce) for å visualisere DCer, mAb'et MOMA-1 fulgt av anti-rotte-IgG-HRP (Jackson ImmunoResearch) og substrat-3,3'-diaminobenzidin (Sigma, St. Louis, MO, katalognummer D-1293) for å visualisere metallofile makrofager, og anti-CD35-biotin fulgt av streptavidin AP og substrat ("Alkaline Phosphatase Substrate Kit I", Vector, katalognummer SK-5100) for å visualisere follikkel-dendrittceller (FDC).
Mus som var blitt behandlet in vivo med enten 20 jig eller 50 jig BCMA/Ig én gang per uke i 4 uker, oppviste et betydelig nedsatt antall (p<0,05 ifølge Students t-test) i milt-CDllc<+->DC'er sammenlignet med HuIgG- og PBS-behandlede kontroller. Denne reduksjon ble observert for alle CDllc<+->DC-populasjoner som ble undersøkt: CD8a"CD4-, CD8a<+>CD4_og CD8a CD4<+>(fig. 16, tabell 14A).
Dette nedsatte antall milt-DCer, som er kritiske antigenpresenterende celler, kan forstyrre B-celle-aktiveringen, -modningen og den humorale immunitet.
Frosne miltsnitt ble erholdt fra mus slik det ble beskrevet i Materialer og metoder. BCMA/Ig-behandlede mus oppviste et atypisk DC-målsøkingsmønster når de ble flekket med anti-CDllc. DCer plasserer seg normalt innen T-celle-området av hvit pulpa og innen den marginale sone, med en konsentrasjon ved de marginalsone-brodannende kanaler. Imidlertid fant man DCene fra BCMA/Ig-behandlede mus rundt omkretsen av den marginale sone, og kun få virket å ha evnen til å migrere videre innen hvit pulpa (data ikke vist). Derfor virker en blokkering av BAFF/BAFF-R-vekselvirkningen med løselig BAFF-receptor å forstyrre målsøkings-mønstret av DCer, hvilket kunne påvirke deres evne til å fungere som antigenpresenterende celler og dermed forstyrre B-celle-aktiveringen, -modningen og den humorale immunitet. Videre manglet miltene av BCMA/Ig-behandlede mus CD35<+->FDCer ifølge immunohistokjemiske bestemmelser (data ikke vist). Fordi FDCene presenterer antigen for B-celler innen de germinale sentre (GC), vil en mangel på slike celler ha en skadelig virkning på GC-strukturen og B-celle-affinitets-modningen.
Fagmannen vil forstå at det kan gjøres forskjellige modifikasjoner og variasjoner av polypeptidene, sammensetningene og fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen uten å fravike fra idéen eller rammen for oppfinnelsen. Dermed er det ment at foreliggende oppfinnelse skal dekke modifikasjonene og variasjonene av foreliggende oppfinnelse, forutsatt at de ligger innen rammen for de vedlagte krav og likeverdige krav.

Claims (13)

1. Et polypeptid for anvendelse som et medikament, hvori polypeptidet omfatter en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av: (a) en aminosyresekvens som er minst 80 % identisk med sekvensen vist fra aminosyre 1 til aminosyre 51 av SEQ ID NO:l; og (b) aminosyresekvensen vist fra aminosyre 8 til aminosyre 41 av SEQ ID NO:l.
2. Anvendelse av et polypeptid for fremstillingen av en farmasøytisk sammen-setning for å behandle en autoimmun forstyrrelse, en B-celle lymfoproliferativ forstyrrelse, eller inflammasjon i et pattedyr, hvori polypeptidet omfatter en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av: (a) en aminosyresekvens som er minst 80 % identisk med sekvensen vist fra aminosyre 1 til aminosyre 51 av SEQ ID NO:l; og (b) aminosyresekvensen vist fra aminosyre 8 til aminosyre 41 av SEQ ID NO:l.
3. Anvendelsen ifølge krav 2, hvori polypeptidet omfatter en aminosyresekvens som er minst 90 % identisk med sekvensen fra aminosyre 1 til aminosyre 51 av SEQ ID NO:l.
4. Anvendelsen ifølge kravene 2 eller 3, hvori polypeptidet omfatter aminosyresekvensen fra aminosyre 1 til aminosyre 51 av SEQ ID NO:l.
5. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 4, hvori polypeptidet videre omfatter et Fc-domene til et immunoglobulin.
6. Anvendelsen ifølge krav 5, hvori immunoglobulinet er IgG.
7. Anvendelsen ifølge krav 6, hvori immunoglobulinet er humant.
8. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 7, hvori medikamentet inhiberer B-cellevekst i pattedyret.
9. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 7, hvori medikamentet inhiberer immunoglobulinproduksjon i pattedyret.
10. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 7, hvori medikamentet inhiberer dendrittcelle-indusert B-cellevekst i pattedyret.
11. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 10, hvori pattedyret er humant.
12. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 11, hvori polypeptidet ikke omfatter et transmembrant domene.
13. Anvendelsen av ethvert av kravene 2 til 11, hvori polypeptidet er løselig.
NO20111232A 1999-08-17 2011-09-12 BAFF-reseptor (BCMA), et immunoregulatorisk middel NO344346B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14937899P 1999-08-17 1999-08-17
US18168400P 2000-02-11 2000-02-11
US18353600P 2000-02-18 2000-02-18
PCT/US2000/022507 WO2001012812A2 (en) 1999-08-17 2000-08-16 Baff receptor (bcma), an immunoregulatory agent

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20111232A1 true NO20111232A1 (no) 2011-09-12
NO344346B1 NO344346B1 (no) 2019-11-11

Family

ID=27386828

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20020789A NO331410B1 (no) 1999-08-17 2002-02-18 Antistoff mot BAFF-reseptor (BCMA) som et immunoregulatorisk middel
NO20111232A NO344346B1 (no) 1999-08-17 2011-09-12 BAFF-reseptor (BCMA), et immunoregulatorisk middel

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20020789A NO331410B1 (no) 1999-08-17 2002-02-18 Antistoff mot BAFF-reseptor (BCMA) som et immunoregulatorisk middel

Country Status (29)

Country Link
US (7) US7083785B2 (no)
EP (3) EP2314694A3 (no)
JP (4) JP4787439B2 (no)
KR (2) KR20090016772A (no)
CN (1) CN100447244C (no)
AT (1) ATE360693T1 (no)
AU (1) AU780240B2 (no)
BG (1) BG106519A (no)
BR (2) BRPI0013391B8 (no)
CA (1) CA2383154C (no)
CZ (1) CZ300364B6 (no)
DE (1) DE60034579T3 (no)
DK (1) DK1210425T4 (no)
EA (1) EA004635B1 (no)
EE (1) EE05673B1 (no)
GE (1) GEP20053685B (no)
HK (1) HK1043608B (no)
HU (3) HU227947B1 (no)
IL (3) IL148089A0 (no)
IS (1) IS2955B (no)
MX (1) MXPA02001665A (no)
NO (2) NO331410B1 (no)
NZ (1) NZ517782A (no)
PL (2) PL207501B1 (no)
RS (1) RS51157B (no)
SK (2) SK288603B6 (no)
TR (1) TR200201063T2 (no)
UA (1) UA75049C2 (no)
WO (1) WO2001012812A2 (no)

Families Citing this family (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8212004B2 (en) * 1999-03-02 2012-07-03 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha fusion proteins
US6812327B1 (en) 1996-10-25 2004-11-02 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha polypeptides
GB9828628D0 (en) 1998-12-23 1999-02-17 Glaxo Group Ltd Novel ligand
US7833529B1 (en) 1999-01-07 2010-11-16 Zymogenetics, Inc. Methods for inhibiting B lymphocyte proliferation with soluble ztnf4 receptor
US20030095967A1 (en) * 1999-01-25 2003-05-22 Mackay Fabienne BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of B-cell response and treatment of autoimmune disorders
US20050100548A1 (en) * 2001-07-24 2005-05-12 Biogen Idec Ma Inc. BAFF, inhibitors thereof and their use in the modulation of B-cell response
US6475987B1 (en) 1999-05-06 2002-11-05 National Jewish Medical And Research Center Tall-1 receptor homologues
BRPI0013391B8 (pt) 1999-08-17 2021-05-25 Apotech R&D S A uso de polipeptídeos bcma na preparação de uma composição farmacêutica para tratar uma doença autoimune ou um distúrbio linfoproliferativo de célula b
UA74798C2 (uk) * 1999-10-06 2006-02-15 Байоджен Айдек Ма Інк. Спосіб лікування раку у ссавця за допомогою поліпептиду, що протидіє взаємодії april з його рецепторами
EP1666052B1 (en) * 2000-02-16 2011-06-08 Genentech, Inc. Anti-APRIL monoclonal antibody and its use for the treatment of an immune related disease or cancer
US20040002068A1 (en) * 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US7371388B1 (en) * 2000-05-04 2008-05-13 Human Genome Sciences, Inc. Treatment of Sjogren's syndrome by administration of TR18 polypeptides
US20020086018A1 (en) 2000-05-12 2002-07-04 Theill Lars Eyde Methods and compositions of matter concerning APRIL/G70, BCMA, BLYS/AGP-3, and TACI
US7879328B2 (en) 2000-06-16 2011-02-01 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to B lymphocyte stimulator
WO2002002641A1 (en) 2000-06-16 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to blys
WO2002016411A2 (en) 2000-08-18 2002-02-28 Human Genome Sciences, Inc. Binding polypeptides and methods based thereon
UA83458C2 (uk) * 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
DE10049010A1 (de) * 2000-10-04 2002-04-18 Boehringer Ingelheim Int Transferrin-Polykation/DNS-Komplexe für die systemische Therapie von Tumorerkrankungen mit zytotoxischen Proteinen
CN1612750B (zh) 2001-05-24 2012-10-31 津莫吉尼蒂克斯公司 Taci-免疫球蛋白融合蛋白质
CA2453995A1 (en) * 2001-08-03 2003-02-20 Genentech, Inc. Tacis and br3 polypeptides and uses thereof
AU2003221256A1 (en) * 2002-02-21 2003-09-09 Biogen Idec Ma Inc. Use of bcma as an immunoregulatory agent
WO2004011611A2 (en) * 2002-07-25 2004-02-05 Genentech, Inc. Taci antibodies and uses thereof
EP1608730B1 (en) 2003-03-28 2013-11-06 Biogen Idec MA Inc. Truncated baff receptors
ES2538469T3 (es) * 2003-06-05 2015-06-22 Genentech, Inc. Terapia de combinación para trastornos de células B
US20050163775A1 (en) * 2003-06-05 2005-07-28 Genentech, Inc. Combination therapy for B cell disorders
AU2004285455A1 (en) 2003-10-20 2005-05-12 Biogen Idec Ma Inc. Therapeutic regimens for BAFF antagonists
US20070249530A1 (en) * 2004-01-29 2007-10-25 Genentech, Inc. Bcma Polypeptides and Uses Thereof
WO2006052493A1 (en) * 2004-11-04 2006-05-18 Genentech, Inc. Polypeptides that bind baff and/or april
EP1836224A1 (en) * 2004-12-23 2007-09-26 Laboratoires Serono S.A. Bcma polypeptides and uses thereof
AU2006209237B2 (en) * 2005-01-28 2010-06-24 Biogen Ma Inc. Use of BAFF to treat Th2-mediated conditions
WO2007019573A2 (en) 2005-08-09 2007-02-15 Zymogenetics, Inc. Methods for the treatment and prevention of abnormal cell proliferation using taci-fusion molecules
AR059945A1 (es) 2005-08-09 2008-05-14 Zymogenetics Inc Metodos para tratar afecciones malignas de celulas b que utilizan una molecula de fusion taci-ig
US9168286B2 (en) 2005-10-13 2015-10-27 Human Genome Sciences, Inc. Methods and compositions for use in treatment of patients with autoantibody positive disease
EA015860B1 (ru) * 2005-10-13 2011-12-30 Хьюман Дженом Сайенсиз, Инк. Способы лечения аутоиммунных заболеваний при использовании антагониста нейтрокина-альфа
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
EP1952150B1 (en) 2005-11-23 2016-12-14 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
US8211649B2 (en) 2006-03-31 2012-07-03 Human Genome Sciences, Inc. Methods of diagnosing and prognosing hodgkin's lymphoma
AR060935A1 (es) 2006-05-15 2008-07-23 Ares Trading Sa Metodos para tratar enfermedades autoinmunes utilizando una molecula de fusion taci- ig
GEP20146129B (en) 2008-07-17 2014-08-11 Novartis Ag Compositions and methods of therapeutic antibodies usage
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
EP2396035A4 (en) * 2009-02-12 2012-09-12 Human Genome Sciences Inc USE OF ANTAGONISTS OF PROTEIN STIMULATING LYMPHOCYTES B TO PROMOTE GRAFT TOLERANCE
PL2406284T3 (pl) 2009-03-10 2017-09-29 Biogen Ma Inc. Przeciwciała anty-bcma
JP5996429B2 (ja) 2009-09-03 2016-09-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 関節リウマチの治療、診断及びモニターするための方法
CN101781680B (zh) * 2009-10-19 2012-05-09 南通大学附属医院 测定对人baff-r基因启动子活性影响因素的方法
CN101781679B (zh) * 2009-10-19 2012-05-23 南通大学附属医院 人baff-r基因启动子活性的测定方法
WO2011108008A2 (en) * 2010-03-04 2011-09-09 Transgene Biotek Ltd. Antibody for targeted induction of apoptosis, cdc and adcc mediated killing of cancer cells, tbl-cln1
MX353143B (es) 2011-02-28 2017-12-20 Genentech Inc Marcadores biologicos y metodos para pronosticar respuesta a antagonistas de celulas b.
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
DK3415531T3 (da) * 2011-05-27 2023-09-18 Glaxo Group Ltd Bcma (cd269/tnfrsf17)-bindende proteiner
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
AU2013215332A1 (en) 2012-01-31 2014-09-04 Genentech, Inc. Anti-Ig-E M1' antibodies and methods using same
WO2015100246A1 (en) 2013-12-24 2015-07-02 Ossianix, Inc. Baff selective binding compounds and related methods
EP3102681B1 (en) 2014-02-07 2023-10-04 McMaster University Trifunctional t cell-antigen coupler and methods and uses thereof
ES2939760T3 (es) 2014-03-15 2023-04-26 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico para antígenos
EP3193915A1 (en) 2014-07-21 2017-07-26 Novartis AG Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars
CN106687483B (zh) 2014-07-21 2020-12-04 诺华股份有限公司 使用人源化抗-bcma嵌合抗原受体治疗癌症
KR20230149327A (ko) 2014-09-17 2023-10-26 노파르티스 아게 입양 면역요법을 위한 키메라 수용체에 의한 세포독성 세포의 표적화
NZ732568A (en) 2014-12-05 2023-03-31 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies targeting b-cell maturation antigen and methods of use
BR112017011909A2 (pt) 2014-12-05 2018-02-27 Eureka Therapeutics Inc ?antígeno de maturação de célula b alvo de receptores de antígeno quimérico e usos do mesmo?
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
CN114773476A (zh) 2015-04-13 2022-07-22 辉瑞公司 治疗性抗体和它们的用途
CN107980046B (zh) 2015-04-13 2021-12-24 辉瑞公司 靶向b细胞成熟抗原的嵌合抗原受体
EP3286211A1 (en) 2015-04-23 2018-02-28 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
EP3331913A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric cd3 receptor proteins
EP3380620A1 (en) 2015-11-23 2018-10-03 Novartis AG Optimized lentiviral transfer vectors and uses thereof
AU2016382512A1 (en) 2015-12-30 2018-07-12 Novartis Ag Immune effector cell therapies with enhanced efficacy
WO2017143069A1 (en) 2016-02-17 2017-08-24 Seattle Genetics, Inc. Bcma antibodies and use of same to treat cancer and immunological disorders
US11549099B2 (en) 2016-03-23 2023-01-10 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
WO2017214170A2 (en) * 2016-06-06 2017-12-14 City Of Hope Baff-r antibodies and uses thereof
KR20190053835A (ko) 2016-06-21 2019-05-20 테네오바이오, 인코포레이티드 Cd3 결합 항체
KR20230035706A (ko) 2016-09-14 2023-03-14 테네오원, 인코포레이티드 Cd3 결합 항체
WO2018111340A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Novartis Ag Methods for determining potency and proliferative function of chimeric antigen receptor (car)-t cells
KR20230052309A (ko) 2016-12-21 2023-04-19 테네오바이오, 인코포레이티드 항-bcma 중쇄-단독 항체
WO2018140725A1 (en) 2017-01-26 2018-08-02 Novartis Ag Cd28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
EP3577134A1 (en) 2017-01-31 2019-12-11 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric t cell receptor proteins having multiple specificities
EP3589647A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 Novartis AG Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy
WO2018201051A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
US20200055948A1 (en) 2017-04-28 2020-02-20 Novartis Ag Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
KR20200005596A (ko) 2017-05-12 2020-01-15 크리스퍼 테라퓨틱스 아게 세포를 엔지니어링하기 위한 물질 및 방법, 및 면역-종양학에서의 그의 용도
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
SG11201912774RA (en) 2017-06-20 2020-01-30 Teneobio Inc Anti-bcma heavy chain-only antibodies
JP7402521B2 (ja) 2017-07-11 2023-12-21 コンパス セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー ヒトｃｄ１３７に結合するアゴニスト性抗体およびその使用
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
CA3078637A1 (en) 2017-10-12 2019-04-18 Mcmaster University T cell-antigen coupler with y182t mutation and methods and uses thereof
WO2019079569A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Novartis Ag COMPOSITIONS AND METHODS FOR SELECTIVE DEGRADATION OF A PROTEIN
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
WO2019089753A2 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof
US20210179709A1 (en) 2017-10-31 2021-06-17 Novartis Ag Anti-car compositions and methods
MA49911A (fr) 2017-11-01 2020-06-24 Juno Therapeutics Inc Anticorps et récepteurs antigéniques chimériques spécifiques de l'antigene de maturation des lymphocytes b
SG11202003866QA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen (bcma)
CA3088095A1 (en) 2017-11-15 2019-05-23 Novartis Ag Bcma-targeting chimeric antigen receptor, cd19-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapies
EP3713961A2 (en) 2017-11-20 2020-09-30 Compass Therapeutics LLC Cd137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof
JP2021509009A (ja) 2017-11-30 2021-03-18 ノバルティス アーゲー Ｂｃｍａターゲティングキメラ抗原受容体及びその使用
CN112218651A (zh) 2018-01-08 2021-01-12 诺华公司 用于与嵌合抗原受体疗法组合的免疫增强rna
WO2019152660A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
WO2019160956A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
WO2019210153A1 (en) 2018-04-27 2019-10-31 Novartis Ag Car t cell therapies with enhanced efficacy
WO2019213282A1 (en) 2018-05-01 2019-11-07 Novartis Ag Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome
EP3790629A1 (en) 2018-05-11 2021-03-17 CRISPR Therapeutics AG Methods and compositions for treating cancer
WO2019227003A1 (en) 2018-05-25 2019-11-28 Novartis Ag Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
CR20200571A (es) 2018-06-01 2021-01-18 Novartis Ag Moléculas de únion contra bcma y usos de las mismas
WO2019237035A1 (en) 2018-06-08 2019-12-12 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunooncology
BR112020025048A2 (pt) 2018-06-13 2021-04-06 Novartis Ag Receptores de antígeno quimérico de bcma e usos dos mesmos
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
US11110123B2 (en) 2018-07-17 2021-09-07 Triumvira Immunologics Usa, Inc. T cell-antigen coupler with various construct optimizations
EP3823664A1 (en) 2018-07-19 2021-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific anti-bcma x anti-cd3 antibodies and uses thereof
EP3844265A2 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
SG11202101825QA (en) 2018-08-31 2021-03-30 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
WO2020128972A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Novartis Ag Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
CA3124935A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
WO2020165834A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
US20220152150A1 (en) 2019-02-25 2022-05-19 Novartis Ag Mesoporous silica particles compositions for viral delivery
WO2020191316A1 (en) 2019-03-21 2020-09-24 Novartis Ag Car-t cell therapies with enhanced efficacy
US20220168389A1 (en) 2019-04-12 2022-06-02 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
US20220251152A1 (en) 2019-04-24 2022-08-11 Novartis Ag Compositions and methods for selective protein degradation
MX2021013359A (es) 2019-04-30 2022-01-31 Crispr Therapeutics Ag Terapia de celulas alogénicas de neoplasias malignas de células b usando células t modificadas genéticamente dirigidas a cd19.
UY38748A (es) 2019-06-14 2021-01-29 Teneobio Inc Anticuerpos multiespecíficos de cadena pesada que se unen a cd22 y cd3
BR112021026832A2 (pt) 2019-07-02 2022-05-10 Hutchinson Fred Cancer Res Vetores ad35 recombinantes e aprimoramentos da terapia gênica relacionada
KR20220105664A (ko) 2019-11-26 2022-07-27 노파르티스 아게 Bcma 및 cd19에 결합하는 키메라 항원 수용체 및 이의 용도
US20230056470A1 (en) 2019-12-20 2023-02-23 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
CN115175695A (zh) 2020-02-27 2022-10-11 诺华股份有限公司 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
MX2022010685A (es) 2020-02-27 2022-09-23 Novartis Ag Metodos de produccion de celulas que expresan receptores de antigeno quimericos.
EP4186564A1 (en) 2020-04-29 2023-05-31 Teneoone, Inc. Multispecific heavy chain antibodies with modified heavy chain constant regions
CA3185455A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Novartis Ag Zbtb32 inhibitors and uses thereof
JP2023531676A (ja) 2020-06-23 2023-07-25 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピぺリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与レジメン
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
KR20230058427A (ko) 2020-08-21 2023-05-03 노파르티스 아게 Car 발현 세포의 생체내 생성을 위한 조성물 및 방법
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AU2022255506A1 (en) 2021-04-08 2023-11-09 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof
WO2022229853A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Novartis Ag Viral vector production system
US11453723B1 (en) 2021-06-25 2022-09-27 Mcmaster University BCMA T cell-antigen couplers and uses thereof
AU2022330406A1 (en) 2021-08-20 2024-03-07 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor–expressing cells
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2024089639A1 (en) 2022-10-26 2024-05-02 Novartis Ag Lentiviral formulations

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000040716A2 (en) * 1999-01-07 2000-07-13 Zymogenetics, Inc. Soluble receptor br43x2 and methods of using them for therapy

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
DK0897390T3 (da) 1996-03-14 2004-03-08 Human Genome Sciences Inc Human tumornekrosefaktor-delta og -epsilon
US6541224B2 (en) 1996-03-14 2003-04-01 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor delta polypeptides
EP0939804B2 (en) 1996-10-25 2011-06-15 Human Genome Sciences, Inc. NEUTROKINE alpha
AU5705898A (en) 1996-12-17 1998-07-15 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
US5969102A (en) 1997-03-03 1999-10-19 St. Jude Children's Research Hospital Lymphocyte surface receptor that binds CAML, nucleic acids encoding the same and methods of use thereof
CA2232743A1 (en) 1997-04-02 1998-10-02 Smithkline Beecham Corporation A tnf homologue, tl5
EP0975754B2 (en) 1997-04-16 2016-01-06 Amgen Inc., Osteoprotegerin binding proteins and their receptors
JP2002517977A (ja) 1997-06-06 2002-06-18 リジェネロン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド Ｔｎｆリガンドファミリーのｎｔｎ−２メンバー
AU743490B2 (en) 1997-06-06 2002-01-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. NTN-2 member of TNF ligand family
AU9376498A (en) 1997-09-05 1999-03-22 University Of Washington Tumor necrosis factor family receptors and ligands, encoding nucleic acids and related binding agents
AU738688B2 (en) 1997-09-12 2001-09-27 Apoxis Sa Cysteine rich receptors-train
AU9315298A (en) 1997-09-12 1999-03-29 Apotech S.A. Kay - a novel immune system protein
SK3542000A3 (en) * 1997-09-12 2000-08-14 Apotech R & D Sa Nucleic acid coding ligand april, a vector, a host cell, method for preparing ligand april, a polypeptide of ligand april, a pharmaceutical composition and an antibody, and use thereof
WO1999033980A2 (en) 1997-12-30 1999-07-08 Chiron Corporation Members of tnf and tnfr families
US6297367B1 (en) 1997-12-30 2001-10-02 Chiron Corporation Polynucleotide encoding TNFL1
DE69921718T2 (de) * 1998-04-01 2005-12-22 Solvay Solexis, Inc., Wilmington Verträgliche Mischungen aus Polyvinylidenfluorid und aromatischem Polyimid
AU1467000A (en) 1998-11-04 2000-05-22 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The A novel tumor necrosis factor family member, drl, and related compositions and methods
GB9828628D0 (en) 1998-12-23 1999-02-17 Glaxo Group Ltd Novel ligand
US7833529B1 (en) * 1999-01-07 2010-11-16 Zymogenetics, Inc. Methods for inhibiting B lymphocyte proliferation with soluble ztnf4 receptor
US20060067933A1 (en) * 1999-01-07 2006-03-30 Gross Jane A Soluble receptor BR43x2 and methods of using
DE60004635T2 (de) * 1999-01-25 2004-06-09 Biogen, Inc., Cambridge Baff, dessen inhibitoren und dessen verwendung zur modulierung der b-zell-antwort
US6475986B1 (en) 1999-02-02 2002-11-05 Research Development Foundation Uses of THANK, a TNF homologue that activates apoptosis
EP1157126A4 (en) 1999-02-24 2005-03-02 Gen Hospital Corp PROCESS FOR CLONING INTERMEDIATE PRODUCTS FOR SIGNAL TRANSDUCTION
AU3633000A (en) 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US6475987B1 (en) 1999-05-06 2002-11-05 National Jewish Medical And Research Center Tall-1 receptor homologues
BRPI0013391B8 (pt) * 1999-08-17 2021-05-25 Apotech R&D S A uso de polipeptídeos bcma na preparação de uma composição farmacêutica para tratar uma doença autoimune ou um distúrbio linfoproliferativo de célula b
UA74798C2 (uk) 1999-10-06 2006-02-15 Байоджен Айдек Ма Інк. Спосіб лікування раку у ссавця за допомогою поліпептиду, що протидіє взаємодії april з його рецепторами
JP2003521931A (ja) 2000-02-11 2003-07-22 バイオジェン インコーポレイテッド Ｔｎｆファミリーの異種ポリペプチド
EP1666052B1 (en) † 2000-02-16 2011-06-08 Genentech, Inc. Anti-APRIL monoclonal antibody and its use for the treatment of an immune related disease or cancer
US20040013674A1 (en) 2001-04-27 2004-01-22 Christine Ambrose Taci as an anti-tumor agent
US20020086018A1 (en) 2000-05-12 2002-07-04 Theill Lars Eyde Methods and compositions of matter concerning APRIL/G70, BCMA, BLYS/AGP-3, and TACI
WO2002002641A1 (en) 2000-06-16 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to blys
EP1309718A4 (en) 2000-08-15 2004-08-25 Human Genome Sciences Inc NEUTROKINE-ALPHA AND NEUTROKINE-ALPHA SPLICE VARIANT
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
WO2003055979A2 (en) 2001-11-16 2003-07-10 Human Genome Sciences, Inc. ANTIBODIES THAT IMMUNOSPECIFICALLY BIND TO BLyS
AU2003221256A1 (en) 2002-02-21 2003-09-09 Biogen Idec Ma Inc. Use of bcma as an immunoregulatory agent
US7083735B2 (en) 2003-09-03 2006-08-01 Laing David A High debris content strainer
DK3415531T3 (da) 2011-05-27 2023-09-18 Glaxo Group Ltd Bcma (cd269/tnfrsf17)-bindende proteiner
FR3005792B1 (fr) 2013-05-16 2017-12-29 Parknplug Procede de gestion dynamique et previsionnel du rechargement electrique de batteries

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000040716A2 (en) * 1999-01-07 2000-07-13 Zymogenetics, Inc. Soluble receptor br43x2 and methods of using them for therapy

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MADRY C et al., "The characterization of murine BCMA gene defines it as a new member og the tumor necrosis facto receptor superfamily", International Immunology, 1998, vol. 10, nr 11, s.1693-1702 ISSN 0953-8178, Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
DE60034579T3 (de) 2015-11-12
EP1210425B1 (en) 2007-04-25
HU230583B1 (hu) 2017-02-28
EP1806143A3 (en) 2007-07-18
EE200200071A (et) 2003-04-15
EA200200261A1 (ru) 2002-08-29
IS6273A (is) 2002-02-15
NO20020789D0 (no) 2002-02-18
EP1210425B2 (en) 2015-06-17
AU6911200A (en) 2001-03-13
PL207501B1 (pl) 2010-12-31
WO2001012812A2 (en) 2001-02-22
JP2014037434A (ja) 2014-02-27
SK500172015A3 (no) 2002-07-02
US20180273605A1 (en) 2018-09-27
US20020172674A1 (en) 2002-11-21
EA004635B1 (ru) 2004-06-24
WO2001012812A3 (en) 2001-09-07
EP1806143B1 (en) 2016-06-15
DE60034579T2 (de) 2008-01-31
GEP20053685B (en) 2005-12-12
EE05673B1 (et) 2013-08-15
CZ300364B6 (cs) 2009-04-29
NO20020789L (no) 2002-04-08
SK288287B6 (sk) 2015-07-01
PL211786B1 (pl) 2012-06-29
HU1000128D0 (en) 2010-05-28
HK1043608A1 (en) 2002-09-20
SK288603B6 (sk) 2018-10-01
US20200095305A1 (en) 2020-03-26
JP4787439B2 (ja) 2011-10-05
KR100897082B1 (ko) 2009-05-14
US20150139992A1 (en) 2015-05-21
DK1210425T4 (en) 2015-08-10
CA2383154C (en) 2013-04-30
IL230961A0 (en) 2014-03-31
US10494416B2 (en) 2019-12-03
JP2003507364A (ja) 2003-02-25
CA2383154A1 (en) 2001-02-22
RS51157B (sr) 2010-10-31
CN100447244C (zh) 2008-12-31
KR20020084842A (ko) 2002-11-11
US7691804B2 (en) 2010-04-06
US20100040627A1 (en) 2010-02-18
ATE360693T1 (de) 2007-05-15
PL354661A1 (en) 2004-02-09
AU780240B2 (en) 2005-03-10
HU227947B1 (en) 2012-06-28
JP2011063600A (ja) 2011-03-31
UA75049C2 (uk) 2006-03-15
EP1806143A2 (en) 2007-07-11
EP1210425A2 (en) 2002-06-05
DK1210425T3 (da) 2007-09-17
CN1379815A (zh) 2002-11-13
EP2314694A3 (en) 2013-12-11
MXPA02001665A (es) 2003-07-14
US20120214687A1 (en) 2012-08-23
BR0013391A (pt) 2002-07-09
CZ2002579A3 (cs) 2002-05-15
EP2314694A2 (en) 2011-04-27
JP2011116790A (ja) 2011-06-16
IL148089A (en) 2015-03-31
KR20090016772A (ko) 2009-02-17
JP5904985B2 (ja) 2016-04-20
NZ517782A (en) 2004-01-30
US8828669B2 (en) 2014-09-09
YU10602A (sh) 2005-06-10
NO344346B1 (no) 2019-11-11
IL230961A (en) 2016-06-30
BRPI0013391B8 (pt) 2021-05-25
IL148089A0 (en) 2002-09-12
US9650430B2 (en) 2017-05-16
US20020165156A1 (en) 2002-11-07
TR200201063T2 (tr) 2002-10-21
US7083785B2 (en) 2006-08-01
DE60034579D1 (de) 2007-06-06
HUP0203084A2 (en) 2002-12-28
HU227008B1 (en) 2010-04-28
HK1043608B (zh) 2007-12-07
SK2292002A3 (en) 2002-07-02
JP5379107B2 (ja) 2013-12-25
NO331410B1 (no) 2011-12-19
BG106519A (bg) 2003-04-30
IS2955B (is) 2016-12-15
BRPI0013391B1 (pt) 2018-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10494416B2 (en) Methods of modulating immune responses using BCMA polypeptide
ES2204502T5 (es) Receptor soluble BR43x2 y métodos de utilización en terapia
NO331683B1 (no) Anvendelse av et spesifikt polypeptid eller antistoff mot dette for fremstilling av et medikament til behandling av tumorceller som uttrykker APRIL.
JP2001516581A (ja) ＤｃＲ３ポリペプチドというＴＮＦＲ相同体
ZA200201201B (en) BAFF receptor (BCMA), an immunoregulatory agent.
Fisher Experimental therapies in primary Sjögren’s syndrome

Legal Events

Date Code Title Description
CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: TOPOTARGET SWITZERLAND SA, US

MK1K Patent expired