NO172903B - Fremgangsmaate for fremstilling av optisk aktive (+)-bicyklo(3.3.0)oktanol-derivater - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av optisk aktive (+)-bicyklo(3.3.0)oktanol-derivater Download PDF

Info

Publication number
NO172903B
NO172903B NO883109A NO883109A NO172903B NO 172903 B NO172903 B NO 172903B NO 883109 A NO883109 A NO 883109A NO 883109 A NO883109 A NO 883109A NO 172903 B NO172903 B NO 172903B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
bicyclo
cis
octane
carboxylic acid
dimethyl
Prior art date
Application number
NO883109A
Other languages
English (en)
Other versions
NO883109D0 (no
NO883109L (no
NO172903C (no
Inventor
Karl Petzoldt
Helmut Dahl
Werner Skuballa
Original Assignee
Schering Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Schering Ag filed Critical Schering Ag
Publication of NO883109D0 publication Critical patent/NO883109D0/no
Publication of NO883109L publication Critical patent/NO883109L/no
Publication of NO172903B publication Critical patent/NO172903B/no
Publication of NO172903C publication Critical patent/NO172903C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/72—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 spiro-condensed with carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C405/00—Compounds containing a five-membered ring having two side-chains in ortho position to each other, and having oxygen atoms directly attached to the ring in ortho position to one of the side-chains, one side-chain containing, not directly attached to the ring, a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, and the other side-chain having oxygen atoms attached in gamma-position to the ring, e.g. prostaglandins ; Analogues or derivatives thereof
    • C07C405/005—Analogues or derivatives having the five membered ring replaced by other rings
    • C07C405/0075—Analogues or derivatives having the five membered ring replaced by other rings having the side-chains or their analogues or derivatives attached to a condensed ring system
    • C07C405/0083—Analogues or derivatives having the five membered ring replaced by other rings having the side-chains or their analogues or derivatives attached to a condensed ring system which is only ortho or peri condensed, e.g. carbacyclins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/04—1,3-Dioxanes; Hydrogenated 1,3-dioxanes
    • C07D319/08—1,3-Dioxanes; Hydrogenated 1,3-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/004—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of alcohol- or thiol groups in the enantiomers or the inverse reaction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
    • C12P7/26—Ketones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for stereospesifikk acylat-hydrolyse av racemisk 3-acyloxy-bicyklo-[3.3.0]oktan-7-on-2-carboxylsyreester til optisk aktive 3-alkoholer. ved hjelp av enzymer eller mikroorganismer, nærmere bestemt en fremgangsmåte for fremstilling av optisk aktive (+)-bicyklo[3.3.O]oktanol-derivater av formel (+)-I:
hvori Rx og R2 sammen betegner et oxygenatom eller tobindings-resten -0-X-O- hvor X betegner rettkjedet eller forgrenet alkylen med 1-7 C-atomer, R3 betegner resten COOZ hvor Z betegner hydrogenatom, rettkjedet eller forgrenet alkyl med 1-7 C-atomer, fenyl eller benzyl, og R4 betegner rettkjedet eller forgrenet alkyl med 1-7 C-atomer eller (CH2)2COOH. Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at racemiske 3a-acyloxy-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-derivater av formel (±)-II
hvori Rlr R2, R3 og R4 har de ovenfor angitte betydninger, underkastes enzymatisk eller mikrobiologisk en stereospesifikk acylat-hydrolyse, med mikroorganismer valgt blant bakterier, sopp eller enzymer isolert fra disse, eller enzymer fra storfepankreas, svinelever eller svinepankreas, med evnen til stereospesifikk acylathydrolyse av (±)-II, og at det dannede (+)-bicyklo[3.3.0]oktanolderivat (+)-I separeres fra uforsåpet bicyklo[3.3.0]oktanolacylat-formelen (-)-II, eller at uforsåpete enantiomerer (+)-!! separerés fra forsåpet bicyklo-
[3.3.0]oktanolderivat (-)-I og deretter underkastes en kjemisk acylat-hydrolyse.
Når X betegner en rettkjedet eller forgrenet alkylen-rest med 1-7 C-atomer, menes derved følgende rester: -(CH2)n_, hvori n = 1 - 7 (methylen, ethylen, tri-, tetra-, penta-, hexa- og heptamethylen) , -C(CH3)2—, -CH(CH3)-, -CH(CH3)-CH2-, -C(CH3)2-CH2-, -CH2"CH(CH3)-, CH2~C(CH3)2, CH2-CH(CH3)-CH2-, -CH2-C(CH3) 2-CH2-, -CH-(C^) - , -C (C2H5) 2~, -CH(C2H5)-CH2-, -C(C2H5)2-CH2-, -CH2-CH (C^) - , CH2-C (C^) 2~,
-CH2-CH(C2H5)-CH2-, -CH2-C(C2H5)2-<C>H2- osv.
Z og R4 som rettkjedede eller forgrenede alkylrester med 1-7 C-atomer betyr methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sek.-butyl, tert.-butyl, n-pentyl, isopentyl, sek.-pentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, n-heptyl, isoheptyl.
Optisk aktiv 6a-carbaprostacyklin og i særdeleshet enkelte derav avledede forbindelser utviser som stabile analoger av det naturlige prostacyklin (PGI2) en høy terapeutisk verdi [R.C: Nickolson, M.H. Town, H. Vorbriiggen: Prostacyclin-Analogs, Medicinal Research Reviews, Vol. 5. Nr. 1, s. 1-53
(1985)]. De angitte synteser i denne nyere oversikt er lange og fører delvis bare til racemiske carbacykliner. Særlig kost-bar er syntesene som fører til carbacykliner svarende til den absolutte konfigurasjon av det naturlige PGI2. Dette beror på at godt tilgjengelige, egnede utgangsmaterialer er achirale og at den optiske aktivitet først må innføres i synteseforløpet i egnede mellomtrinn for dette.
Flere synteser utgår fra optisk aktive 7a-hydroxy-60-hydroxymethy1-2-oxa-bicyklo[3.3.0]oktan-3-on-derivater. Dermed er problemet med innføring av den optiske aktivitet løst. Det må imidlertid utføres ytterligere flertrinns syntesesekvenser for substitusjon av 2-oxa-funksjonen med en methylengruppe for å oppnå derivater av 3a-hydroxy-2(3-hydroxymethyl-bicyklo-[3.3.0]oktan-7-on som egner seg for oppbygning av a- og w-kjeder som er typiske for carbacyklinanaloger.
En nyere publikasjon beskriver anvendelse av cis-bicykloL3.3.0]oktan-3,7-dion-derivater for syntese av optisk aktive carbacykliner. Kojima et al. beskriver i Chem. Pharm. Bull. 33, 2688 (1985) en fremgangsmåte som omfatter separering av de diastereomere salter av racemisk 7,7-ethylendioxy-3a-hydroxy-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2-carboxylsyre.
Også denne fremgangsmåte krever ytterligere syv reaksjonstrinn for å oppnå utgangsmaterialet for carbacyklin-analogene ut fra 3-oxoglutarestere. Dessuten gjennomføres et ustabilt 3-ketosyre-mellomtrinn.
For fremstilling av optisk aktive carbacyklinanaloger slik som ovenfor beskrevet, er det ikke kjént noen syntese-vei som tillater en enkel fremstilling.
Som enzymer for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen egner seg fortrinnsvis
Lipase-PL fra Alcaligenes (Fa. Meito Sangyo)
Lipase My fra Candida cylindracea (Fa. Meito Sangyo)
Lipase "Saiken" fra Rhizopus (Fa. Nagase)
Lipase "Sclerotinia" (Fa. Nagase)
oc-Chymotrypsin fra storfepankreas (Fa. Chemical Dynamics Corporation)
Alcalase T (Fa. Novo Industrias)
Esterase fra svinelever (Fa. Boehringer Mannheim)
Lipase fra svinepankreas (Fa. Chemical Dynamics Corporation)
Subtilisin fra Bacillus subtilis (Fa. Boehringer Mannheim), hvorved enzymet kan anvendes såvel i oppløst, suspendert eller eksempelvis i mobilisert form på BrCN-aktivert Sepharose eller på oxiranakrylperler i en hvilken som helst annen immobilisert form.
Som mikroorganismer for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen egner seg fortrinnsvis
Alcaligenes marshallii ATCC 21030
Mucor rouxil ATCC 8097
Corynebacterium equi ATCC 21107
Trichoderma koningi CBS 8506 8
Sarcina lutea ATCC 9341
Penicillium citrinum ATCC 8506
Flavobacterium lutescens IFO 3085
Alcaligenes paradoxus ATCC 17713
Det kan imidlertid også anvendes enzymet isolert fra mikroorganismen i oppløst eller immobilisert form.
De ifølge fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, frem-stillbare optisk aktive bicyklooktan-derivater av formel (+)-I
utgjør verdifulle mellomprodukter for syntesen av farmakologisk aktive prostacyklinderivater. Flertallet av de stereospesifikt hydrolyserende enzymer og mikroorganismer forsåper de racemiske 3a-acyloxy-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-derivater av formel (+)-II til optisk aktive alkoholer av formel (+)-I, hvilke i deres absolutte konfigurasjon tilsvarer det naturlige prostacyklin PGI2. Dette fremgår ved sammenligning av de spektrale og optiske egenskaper med sammenligningssubstanser som kan fremstilles fra mellomtrinn ved en konvensjonell syntese av optisk aktive carbacyklinanaloger. De således erholdte produkter kan etter separering av den uforsåpede "falske" enantiomer (-)-I direkte anvendes for syntese av analoger tilsvarende det naturlige prostacyklin PG^.
Det er imidlertid også mikroorganismer og enzymer slik som eksempelvis a-chymotrypsin eller Alcalase T som av begge komponenter av racematet (+)-II forsåper den "falske" unaturlig konfigurerte enantiomer til (-)-I. I dette tilfelle anvendes den gjenværende uforsåpede enantiomer (+)-Il for syntese av PG^-analoge carbacykliner.
Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen arbeides det ellers etter alminnelig kjente fremgangsmåtebetingelser som vanligvis anvendes ved enzymatiske reaksjoner henholdsvis mikrobiologiske omvandlinger, og som fremgår fra eksemplene. For-løpet av den enzymatiske eller mikrobiologiske omvandling føl-ges ved analyse av løpende uttatte prøver. Som analysemetoder egner seg HPLC eller tynnsjiktskromatografiske hurtiganalyser (kieselgelplater fra Fa. Merck/Darmstadt, fremkalling ved hjelp av ether, avfarging ved hjelp av svovelsyre/ethanol).
Reaksjonen avbrytes og blandingen opparbeides når
50 % av det anvendte racemiske substrat er omdannet.
Foreliggende enzymatiske eller mikrobiologiske stereo-spesifikke acylat-forsåpning egner seg i særdeleshet for acylat-forsåpning av følgende racemiske prostacyklin-mellomtrinn:
Fra optisk aktive 3oc-hydroxy-forbindelser av generell formel (+)-I fremstilt ifølge fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan farmakologisk virksomme prostacykliner fremstilles. Eksempelvis erholdes ut fra (+)-I virkestoffet Iloprost (beskrevet i EP 11591).
Den 11. november 86 ble stammene Mucor rouxii (DSM 3897) og Alcaligenes marshallii (DSM 3900) deponert ved den tyske sammenligning av mikroorganismer.
Fremstilling av utgangsforbindelser:
Eksempel A 1
7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- cis- bicyklo[ 3. 3♦ 0] oktan- 3-on- 2- carboxylsyre- methylester
38,34 g 55 - 60 % natriumhydrid ble suspendert i 616 ml dimethylcarbonat, ble oppvarmet under nitrogen til 50° C og ble tilsatt en liten mengde av en løsning av 49,31 g 3,3-(2,2-dimethyltrimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-7-on i 370 ml dimethylcarbonat. Etter tilsetning av 2 ml methanol ble reaksjonen startet, resten av løsningen ble tilsatt og blandingen ble omrørt totalt i 7,5 timer ved 50° C. Reaksjonsblandingen ble avkjølt på isbad, overskudd av natriumhydrid ble spal-tet med methanol, vann ble tilsatt og løsningen ble nøytrali-sert med eddiksyre. Produktet ble ekstrahert med diklormethan, konsentrert i vakuum og produktet ble krystallisert med hexan. Det ble erholdt 532,44 g produkt med smeltepunkt 72° C.
Eksempel A 2
7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- 3a- hydroxy- cis- bicyclo-[ 3. 3. 03oktan- 2( B- carboxylsyre- methylester
Metode A
52,0 g 7 ,7-( dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-3-on-2-carboxylsyremethylester ble oppløst under oppvarming i 1000 ml methanol og ble avkjølt til -40° C. 20,91 g natriumborhydrid ble deretter tilsatt, blandingen ble omrørt i 30 minutter og ble langsomt tilsatt 171 ml aceton og nøytralisert etter ytterligere 1 time med eddiksyre. Etter avdestillering av hovedmengden av løsningsmiddel ble det tilsatt vann og diklormethan, den organiske fase ble tørket med
natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Residuet ble tatt opp i 550 ml methanol, ble tilsatt 9,94 g natriummethylat og ble oppvarmet 105 minutter til 40° C. Reaksjonsblandingen ble avkjølt på isbad, nøytralisert og opparbeidet som tidligere beskrevet. Det erholdte råprodukt ble kromatografert på kiselgel med diklormethan-ethylacetatblandinger. Det ble erholdt 47 g av den ønskede forbindelse som ble krystallisert med hexan og utviste et smeltepunkt på 43° C.
Metode B
56,6 g 7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-3-on-2-carboxylsyremethylester ble løst i 300 ml ethylacetat, og ble etter tilsetning av 5,1 g platina-dioxyd hydrogenert ved 22° C under normaltrykk til hydrogen-opptaket var avsluttet. Katalysatoren ble filtrert fra og løsningen ble konsentrert i vakuum. Det ble erholdt 56,8 g av den ønskede forbindelse hvis renhet var tilstrekkelig for fremstilling av den krystalliserende ester. Produktet kan krystalliseres fra hexan, og det ble erholdt 44,4 g hovedkry-stallisat med smeltepunkt 43°C.
Eksempel A 3
7, 7- ( 2 , 2- dimethyl- trimethylendioxy) - 3ot- hydroxy- cis- bicyclo-[ 3. 3. 0 3oktan- 2ft- carboxylsyremethylester- 3- ester
a) Acetat (+)-1
100 g av råproduktet erholdt i foregående eksempel
etter Metode B ble oppløst i 57 ml pyridin og 57 ml eddiksyre-anhydrid, og ble oppvarmet i 3 timer til 40° C. Etter avkjø-ling ble isvann tilsatt, blandingen ble ekstrahert med diklormethan, den organiske fase ble vasket med 2-normal svovelsyre, natriumhydrogencarbonatløsning og natriumkloridløsning, ble tørket med natriumsulfat, konsentrert i vakuum og residuet ble krystallisert fra hexan. Det ble erholdt 97,6 g produkt med smeltepunkt 54° C.
b) Benzoat (+)- 3
5,0 g av hydroxyester-råproduktet ble oppløst i 10
ml pyridin, ble tilsatt 2,47 ml benzoylklorid og ble omrørt i
4 timer ved 22° C. 100 ml isvann ble deretter langsomt tilsatt, blandingen ble omrørt i 30 minutter og krystallisatet ble fra-skilt. Etter tørking og omkrystallisering fra methanol ble det erholdt 5,97 g produkt med smeltepunkt 102° C.
c) Isobutyrat (+)-7
4,265 g av den krystalliserte hydroxyester ble opp-løst i 40 ml diklormethan, ble tilsatt 4,16 ml triethylamin og langsomt 3,14 ml isobutyrylklorid. Etter 2,5 timer ved 22° C ble 40 ml mettet natriumhydrogencarbonatløsning tilsatt, den organiske fase ble fråskilt og vasket med 2n svovelsyre under isavkjøling, og med vann, ble tørket med natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Det urene produkt ble kromatografert på kieselgel med hexan-ethylacetat-blandinger. Det ble erholdt 4,91 g produkt med smeltepunkt 43° C.
d) Butyrat (+)-6
4,265 g av den krystalliserte hydroxyester ble opp-løst i 10 ml pyridin, ble tilsatt 4,90 ml smørsyreanhydrid og ble omrørt i 20 timer ved 22° C. Blandingen ble tilsatt isvann, ekstrahert med diklormethan og denne ble ekstrahert med natriumhydrogencarbonatløsning, hvorpå reaksjonsløsningen under isavkjøling ble tilsatt 2n svovelsyre og vann, tørket med natriumsulfat, konsentrert i vakuum og kromatografert på kiselgel med hexan-ethylacetat-blandinger. Det ble erholdt 5,03 g produkt som farveløs olje.
e) Hemisuccinat (+)-£
4,265 g av den krystalliserte hydroxyester oppløst i
10 ml pyridin, 1,833 g 4-dimethylaminopyridin og 1,501 g rav-syrearihydrid ble tilsatt, og blandingen ble omrørt i 20 timer ved 22° C. Reaksjonsblandingen ble deretter helt over i isvann, ble surgjort med 2n-svovelsyre til pH lik 3, ble ekstrahert med diklormethan, vasket med natriumkloridløsning, tørket med natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Residuet ble tatt opp med natriumhydrogencarbonatløsning, ble ekstrahert med diethylether, vannfasen ble surgjort til pH 3, ekstrahert med diklormethan, og denne vasket med natriumkloridløsning, ble tørket med natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Det ble erholdt 5,04 g produkt som fargeløs olje.
Eksempel A 4
3a- acetoxy- 7 , 7- ethylendioxy- cis- bicyklo[ 3. 3. 0 ] oktan- 2| 3- carboxyl-syremethylester ( U- 2
10,0 7 , 7-ethylendioxy-3a-hydroxy-cis-bicyklo[ 3. 3 . 0 ]oktan-2|3-carboxylsyremethylester ble omsatt under de betingelser som er beskrevet i eksempel A 3a), og det urene produkt ble kromatografert på kiselgel med hexan-ethylacetat-blandinger. Det ble erholdt 10,2 8 g produkt med smeltepunkt 50° C.
Eksempel A 5
7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- 3a- hydroxy- cis- bicyclo-[ 3. 3. 0] oktan- 2tf- carboxylsyre
5,0 g av den krystallinske hydroxyester fra eksempel A 2 ble omrørt med 17,6 ml ln-natronlut i 30 minutter ved 22°C, ble ekstrahert med ethylacetat, den vandige fase ble surgjort under isavkjøling med 2n-svovelsyre til pH 3, ble ekstrahert med diklormethan, vasket med natriumkloridløsning, tørket med natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Det ble erholdt 4,66 g produkt som var tilstrekkelig rent for den videre reaksjon.
Eksempel A 6
3a- acetoxy- 7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- cis-bicyklo[ 3 . 3. 0] oktan- 2| 3- carboxylsyre ( + ) -9
3,13 g av hydroxysyren fra eksempel A 5 ble løst i
15 ml pyridin og ble omrørt etter tilsetning av 2,74 ml eddik-syreanhydrid i 20 timer ved 22° C. Isvann ble tilsatt, blandingen ble omrørt i 30 minutter, ble ekstrahert med diklormethan, vasket med vann, tørket med natriumsulfat, konsentrert i vakuum og kromatografert på kieselgel med hexan-ethylacetat-blandinger. Det ble erholdt 3,04 g produkt som farveløs olje.
Eksempel A 7
7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- 3oc- hydroxy- cis- bicyklo-[ 3. 3. 0] oktan- 2| 3- carboxylsyreethy lester
4,78 g av den i eksempel A 5 erholdte hydroxysyre ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling i 2 dager med 50 ml aceton, 4,90 g kaliumcarbonat og 5,72 ml jodethan. Etter avkjøling ble blandingen filtrert, filtratet ble konsentrert i vakuum, ble tilsatt vann, ekstrahert med diklormethan, denne løsning ble tørket med natriumsulfat, konsentrert og residuet ble renset på kieselgel med hexan-ethylacetat-blandinger. Det ble erholdt 3,65 g produkt som farveløs olje.
Eksempel A 8
3a- acetoxy- 7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- cis-bicyklo[ 3 . 3 . 0] oktan- 2| 3- carboxylsyreethylester ( + ) -10
3,10 g av hydroxyesteren fra eksempel A 7 ble omsatt under de betingelser som angitt i eksempel A 3 a) og det urene produkt ble kromatografert på kieselgel med hexan-ethylacetat-blandinger. Det ble erholdt 3,20 g produkt som farveløs olje.
Eksempel A 9
7 , 7- ( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy) - 3oc- hydroxy- cis- bicyklo-[ 3. 3. 0 ] Qktan- 2| 3" rcarboxylsyrebenzylester
3,52 g av den i eksempel A 5 erholdte hydroxysyre ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling i 5 dager med 50 ml aceton, 3,59 g kaliumcarbonat og 3,0 ml benzylklorid og ble opparbeidet som beskrevet i eksempel A 7. Det ble erholdt 2,07 g produkt som farveløs olje.
Eksempel A 10
3a- åcetoxy-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- cis- bicyklo[ 3. 3. 0]-oktan- 2fl- carboxylsyrebenzylester ( + )- li
1,89 g av hydroxyesteren fra eksempel A 9 ble omsatt under de betingelser som er angitt i eksempel A 3 a), og det urene produkt ble kromatografert på kieselgel med hexan-ethylacetat-blanding. Det ble erholdt 1,78 g produkt som farveløs ol je.
Eksempel A 11
7, 7-( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy)- cis- bicyklo-[ 3. 3. 0] oktan- 3- on- 2- carboxylsyrebenzylester
Til en løsning av 2,5 g 7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy ) -cis-bicyklo[3.3.0]oktan-3-on-2-carboxylsyremethylester i 50 ml toluen ble tilsatt 1,2 ml benzylalkohol og 217 mg dimethylaminopyridin, og løsningen ble oppvarmet i 8 timer ved tilbakeløpstemperaturen. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til 25° C, ble tilsatt mettet natriumkloridløsning, ble ekstrahert med methylenklorid, vasket med saltvann, tørket med magnesiumsulfat og inndampet i vakuum. Residuet ble renset ved søylekromatografi på kieselgel. Med hexan/eddikester,
8:2, ble det eluert 2,6 g av tittelforbindelsen som farveløse krystaller. Etter omkrystallisering fra eddikester/hexån ble det erholdt 1,8 g farveløse krystaller med smeltepunkt 78° C.
Eksempel A 12
7 , 7- ( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy) - 3oc- hydroxy- cis- bicyklo-[ 3. 3. 0] oktan- 2( 3- carboxylsyrebenzylester
1,5 g 7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3.3.0]oktan-3-on-2-carboxylsyrebenzylester (eksempel 11) ble oppløst i 25 ml methanol ved tilbakeløpstemperaturen. Reaksjonsløsningen ble deretter avkjølt til -40° C, ble tilsatt 470 mg natriumborhydrid og ble omrørt i 1 time ved -40° C.
3,8 ml aceton ble tilsatt, blandingen ble omrørt i 1 time ved -40° C, ble nøytralisert med ca. 0,7 ml iseddik og ble inndampet i vakuum. Residuet ble tilsatt 100 ml vann, ble ekstrahert med methylenklorid, vasket med saltvann, tørket med magnesiumsulfat og inndampet i vakuum. Etter kromatografi på kieselgel ble det med hexan/eddikester (6+4) erholdt 1,4 g av tittelforbindelsen som farveløs olje.
IR(CNC13); 3600, 2960, 2870, 1722, 1447 cm<-1>.
Eksempel A 13
7, 7- ( 2, 2- dimethyl- trimethylendioxy) - 3oc- benzyloxy- cis- bicyklo-[ 3. 3. 0] oktan- 2p- carboxylsyrebenzylester
Til en løsning av 1,35 g 7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -3oc-hydroxy-cis-bicyklo[ 3 .3.0] oktan-2|3-carboxylsyre-benzylester (eksempel A 12) i 14 ml methylenklorid ble ved 0° C tilsatt 1,4 ml pyridin og 0,62 ml benzoylklorid, og blandingen ble omrørt i 1/2 time ved 0° C og i 2 timer ved 25° C. Deretter ble tilsatt 0,2 ml vann, blandingen ble om-rørt i 1 time, ble fortynnet med methylenklorid, ristet sukses-sivt med vann, 5 % natriumhydrogencarbonatløsning og vann. Løsningen ble tørket over magnesiumsulfat og residuet ble kromatografert på kieselgel. Med hexan/eddikester (3+2) ble det erholdt 1,36 g av tittelforbindelsen som farveløs olje. IR(CNC13), 2960, 2870, 1725, 1603 cm<-1>.
Eksempler
De følgende utførelseseksempler tjener til å belyse den oppfinneriske fremgangsmåte.
Eksempel 1
3 g (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3. 3 . 0 ] oktan-2|3-carboxylsyre-methylester ble løst i 100 ml ethanol og ble forenet med en løsning av 1,5 g Lipase-PL fra Alcaligenes (Fa. Meita Sangyo) i 1 liter 0,1 M fosfatbuffer, pH 7, i en 2 liters Erlenmeyer-kolbe. Suspensjonen ble ristet på en rotasjonsrister ved 30° C, hvorved reaksjonsforløpet ble fulgt ved analyse av løpende uttatte prøver. Etter 21 timers reaksjonstid var 50 % av det anvendte substrat anvendt. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med methylisobutylketon, ekstraktene ble forenet, inndampet til tørrhet i vakuum og ble kromatografert over en kieselgelsøyle for separering av det uomsatte esteracylat (gradient: methylenklorid-methylenklorid / 10 % aceton). Det ble erholdt 1,15 g ren enantiomer (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2p-carboxylsyre-methylester som etter krystallisering fra hexan/isopropylether smeltet ved 64 - 66° C.
([a]^° + 26,2°, c=l,255 i HCC13).
Eksempel 2
30O mg (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3. 3 . 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester ble
suspendert i 100 ml 0,1 M fosfatbuffer, pH 7, 750 mg Lipase My fra Candida cyclindracea (Fa. Meito Sangyo) ble tilsatt og suspensjonen ble homogenisert med en Ultra-Turrax. Blandingen ble deretter ristet på en rotasjonsrister ved romtemperatur. Etter 30 timers reaksjonstid var substratet omsatt til 50 %. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med ether, ekstraktene ble forenet og inndampet til tørrhet i vakuum. Det gjenværende residuum ble for separering av det ikke omsatte utgangsmateriale kromatografert ved hjelp av en løsningsmiddelgradient av methylenklorid-methylenklorid/5 % aceton over en kieselgel-søyle. Det ble erholdt 105 mg ( + )-3ot-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester som etter krystallisering fra hexan utviste et smeltepunkt på 62 - 63° C og en dreiningsverdi på
[oc]^ + 25° (c=l,01 i HCCl-j) . Ved sammenligningsmåling med en autentisk sammenligningsstandard ble det fastslått et enantiomeroverskudd på 93,6 %.
Eksempel 3
300 mg ( + ) -3oc-acetoxy-7 , 7-(2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2[}-carboxylsyre-methylester ble løst i ethanol og tilsatt til en suspensjon av 750 mg Lipase "Saiken" fra Rhizopus (Fa. Nagase) i 100 ml 0,1 M fosfatbuffer, pH 7. Etter 96 timers risting på en ristemaskin ved 28° C ble blandingen ekstrahert med methylisobutylketon, ekstraktet ble inndampet til tørrhet og kromatografert over en kieselgelsøyle. Det ble erholdt 112 mg ( + ) -3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3.3.0] oktan-2(3-carboxylsyre-methylester med smeltepunkt 64 - 65° C etter krystallisering fra hexan. Dreieverdien utgjorde [a]^° + 23,8° (c=l,02 i HCC13), enantiomeroverskuddet etter sammenligningsmåling mot autentisk standard 92,5 % ee.
Eksempel 4
300 mg ( + ) -3oc-acetoxy-7 ,7- (2,2-dimethyl-trimethylendioxy ) -cis-bicyklo [ 3.3 . 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester ble suspendert i 100 ml 0,1 M fosf atbuf fer, pH 7. 750 mg oc-chymotrypsin fra Rinderpankreas (Fa. Chemical Dynamics
Corporation) ble tilsatt og homogenisert med Ultra-Turrax-anordningen. Reaksjonsblandingen ble deretter ristet ved 28° C på en rotasjonsrister til det anvendte esteracylat-substrat var omsatt til 50 %. Blandingen ble deretter ekstrahert flere ganger med methylisobutylketon, de forenede ekstrak-ter ble inndampet til tørrhet i vakuum og ble kromatografert over en kiselgelsøyle med en løsningsmiddelgradient av methylenklorid/methylenklorid/5 % aceton med det formål å separere den unaturlige konfigurerte, i dette tilfelle forsåpede enantiomer. Fraksjon 1 inneholdt den uforsåpede enantiomer (+)-II svarende til i sin absolutte konfigurasjon til naturlig prostacyklin PG^ 2' Etter inndampning til tørrhet ble det erholdt 115 mg (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-23-carboxylsyre-methylester som ikke-krystalliserende olje med en dreieverdi på ta]^ <+> 2,6°
(c=l,035 i kloroform).
Eksempel 5
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 4 ble 300 mg (+)-3a-acetoxy-7,7-ethylendioxy-cis-bicyklo[3.3.0]-oktan-2(3-carboxylsyre-methylester i fosfatbuffer, pH 7, omsatt med 750 mg Substilisin fra Bacillus subtilis (Fa. Boehringer Mannheim). Etter 10 timers risting ved 28° C ble blandingen ekstrahert med methylisobutylketon, ekstraktet ble inndampet til tørrhet og kromatografert over en kieselgelsøyle. Ved hjelp av løsningsmiddelgradienten methylenklorid/methylenklorid/4 % aceton ble som første fraksjon den uforsåpete, (+)-enantiomer svarende den naturlige prostacyklinkonfigura-sjon eluer.t. Etter inndamping av fraksjonen til tørrhet ble det erholdt 130 mg ( + ) -3oc-acetoxy-7 , 7-ethylendioxy-cis-bicyklo-[3.3.0]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester som en oljeaktig væske med en dreiningsverdi på to<]^<0> + 2,4° (c=l,085 i kloroform) .
Eksempel 6
En 2 liters Erlenmeyer-kolbe inneholdende 500 ml av en klaringsløsning sterilisert i autoklav i 30 minutter ved 120° C av 0,1 % pepton, 0,2 % maisstøpvæske, 0,5 % glucose og 0,5 % gjærekstrakt, med pH innstilt på 7,5, ble podet med en skrårørkultur av stammen Alcaligenes marshallii ATCC 21030 og ble ristet på en rotasjonsrister i 48 timer. Med 300 ml av denne startkultur ble en 10 liters fermentator podet, som var fylt med 5 liter av et sterilisert næringsmedium med samme sammensetning som startkulturen. Under tilsetning av silicon SH som antiskumningsmiddel ble blandingen spiret ved 29° C under gjennomluftning (5 l/min) og omrøring (220 omdr./min). Etter én tilvekstfase på 36 timer ble substratet i form av en steril filtrert løsning av 30 g ( + ) -3a-acetoxy-7 , 7- (2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3.3. 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester i 125 ml ethanol tilsatt, og reaksjons-forløpet ble fulgt ved analyse av løpende uttatte prøver. 10 timer etter substrattilsetningen var 50 % av det tilsatte substrat omsatt. Fermenteringsinnholdet ble deretter ekstrahert fire ganger, hver gang med 3 liter methylisobutylketon, ekstraktene ble forenet og inndampet til tørrhet i vakuum. Det gjenværende residuum ble oppløst i methanol og ble filtrert gjennom et foldefilter for fjerning av silikonolje. Filtratet ble igjen bragt til tørrhet i vakuum og residuet ble kromatografert over en kieselgelsøyle for separering av den uomsatte unaturlige konfigurerte (-)-II enantiomere (fraksjon 1) (gradient: methylenklorid-methylenklorid/2 0 % aceton). Etter krystallisering fra hexan ble det i fraksjon 2 erholdt 10,7 g ( + )-3ot-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]-oktan-2|3-carboxylsyre-methylester med smeltepunkt 63 - 64° C, hvilket tilsvarer et enantiomerutbytte på 81,9 % teoretisk. Dreieverdien utgjorde [a]D^ + 26,1° (c=l,3 i kloroform), enantiomeroverskuddet 97,5 % ee.
Eksempel 7
En 2 liters Erlenmeyer-kolbe som inneholdt 500 ml
av en ved 120° C og i 30 minutter i autoklav, sterilisert . næringsløsning av 3 % glukose, 1,0 % maisstøpvæske, 0,2% NaNO^, 0,1 % KH2P04, 0,2 % K2HP04, 0,05 % MgS04.7 H20, 0,002 % FeSo^.7 H20 og 0,05 % KC1, ble podet med en skrårørkultur av stammen Mucor rouxii (ATCC 8097) og ble ristet i 2,5 dag ved 30° C på en rotasjonsrister.
Med innholdet av to av disse startkulturer ble en
20 liters fermenteringsanordning innpodet som var fylt med
14 liter av et medium med samme sammensetning som startkulturen og som var sterilisert i 60 minutter ved 121° C og 1,1 bar overtrykk. Under tilsetning av silikon SH som antiskumningsmiddel ble blandingen spiret ved 29° C med 0,7 bar overtrykk under gjennomluftning (15 l/min) og omrøring (220 omdr./min). Etter en vekstfase på 15 timer ble substratet i form av en steril filtrert løsning av 9 g (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-23-carboxylsyre-methylester i 220 ml ethanol tilsatt, og reaksjonsforløpet ble fulgt ved analyse av løpende uttatte prøver. 2 timer etter substrattilsetningen var 50 % av det tilsatte substrat omsatt. Fermenteringsinnholdet ble deretter ekstrahert tre ganger, hver gang med 10 liter methylisobutylketon, ekstraktene ble forenet og inndampet til tørrhet i vakuum. Det gjenværende residuum ble oppløst i methanol og ble filtrert gjennom et foldefilter for fjerning av silikon-oljen. Filtratet ble igjen bragt til tørrhet i vakuum og residuet ble kromatografert over en kieselgelsøyle for separering av det uomsatte utgangsmateriale (gradient: 5 liter methylenklorid - 5 liter - methylenklorid/10 % aceton). Det ble erholdt 3,3 g ( + ) -3oc-hydroxy-7 , 7- (2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy )-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2p-carboxylsyre-methylester som etter krystallisering fra hexan/isopropylether smeltet ved 64 - 65° C. Dreieverdien utgjorde [a]^ + 25,7° (c=l,045 i HCCl^)• Ved sammenligningsmåling mot en autentisk standard ble det bestemt et enantiomeroverskudd med 96 % ee.
Eksempel 8
En 2 liters Erlenmeyer-kolbe fylt med 50 0 ml av en steril næringsløsning av 0,1 % pepton, 0,2 % maisstøpvæske, 0,5 % glucose og 0,5 % gjærekstrakt, pH 7,3, ble podet med en skråagarkultur av stammen Corynebacterium equi (ATCC 21107)
og ristet i 48 timer ved 30° C. Med innholdet av to av disse startkulturer ble en 20 liters fermenteringsanordning innpodet, som var fylt med 14 liter sterilt næringsmedium med samme
sammensetning som startkulturene. Under tilsetning av silikon SH som antiskumningsmiddel ble blandingen spiret ved 29° C og 0,7 bar overtrykk under gjennomluftning (15 l/min) og omrøring (220 omdr./min). Etter 16 timers veksttid ble substratet i form av en steril filtrert løsning av 6 g (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester i 150 ml ethanol tilsatt, og blandingen ble ytterligere omrørt og luftet. Tre timer etter substrattilsetningen var 50 % av det tilsatte substrat omvandlet. Blandingen ble deretter ekstrahert med methylisobutylketon og ekstrakten ble inndampet til tørrhet i vakuum. Det gjenværende residuum ble befridd for silikonolje ved methanol-behandling og ble kromatografert over en kieselgelsøyle. Det ble erholdt 1,9 g (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy ) -cis-bicyklo [3.3. 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester som etter krystallisering fra hexan/isopro<p>ylether smeltet ved 63 - 65° C. Dreieverdien utgjorde [a]^°+ 25,2° (c=l,04 i HCCC13).
Eksempel 9
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 7
ble 6 g (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3 . 3 . 0 ] oktan-2|3-carboxylsyre-iæthylester omsatt med en kultur av stammen Trichoderma koningi (CBS 85068) etter en fermenteringstid på 28,5 timer til 2,0 g (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy ) -cis-bicyklo [ 3 . 3 . 0 ] oktan-2(3-carboxylsyre-methylester. Dreieverdien av den fra hexan krystalliserte substans utgjorde [a]^° + 24,2° (c=l,015 i HCC13).
Eksempel 10
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 8
ble 6 g (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklot 3 . 3 . 0 ] oktan-2|3-carboxylsyre-methylester omdannet med en kultur av stammen Sarcina lutea (ATCC 9341) etter 125 timers fermenteringstid til 1,85 g (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[3.3.0]oktan-23-carboxylsyre-methylester. Dreieverdien utgjorde [a]^° + 23,6° (c=l,010 i HCCC13).
Eksempel 11
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 7
ble 6 g ( + )-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3. 3. 0 ] oktan-2|3-carboxylsyre-methylester omsatt med en kultur av stammen Penicillium citrinum (ATCC 8506) etter en 8 timers fermenteringstid til 2,3 g ( + )-3oc-hydroxy-7 , 7- (2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3 .3.0] oktan-2(3-carboxylsyre-methylester. Dreieverdien utgjorde [°c]^ + 21,8°
(c=l,05 i HCC13).
Eksempel 12
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 8
ble 6 g ( + ) -3oc-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3. 3. 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester omsatt med en kultur av stammen Flavobacterium lutescens (IFO 3085) etter 48 timers f ermenteringstid til 1,8 g ( + )-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3 . 3 . 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester. Dreieverdien utgjorde [a]^°+ 21,8° (c=l,145 i HCC13).
Eksempel 13
300 mg ( + )-3oc-butyryloxy-7 , 7-(2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3 . 3. 0]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester ble løst i 9 ml ethanol og ble forenet med en løsning av 750 g Lipase "Saiken" fra Rhizopus (Fa. Nagase) i 100 ml 0,1 M fosfatbuffer, pH 7. Suspensjonen ble ristet i 150 timer ved 28° C på en rotasjonsrister, og ble deretter ekstrahert med methylisobutylketon. Ekstraktet ble inndampet til tørrhet i vakuum og residuet ble kromatografert over en kieselgelsøyle for separering av uomsatt esteracylat. Det ble erholdt 95 mg (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3 . 3. 0 ]oktan-2|5-carboxylsyre-methylester med en dreieverdi på [a]£° + 22,8° (c=0,905 i HCC13).
Eksempel 14
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 13
ble 300 mg (+)-3a-butyryloxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy ) -cis-bicyklo[ 3.3.0]oktan-2(3-carboxylsyre-methylester i fosfatbuffer, pH 7, omsatt i nærvær av 750 mg Alcalase T (Fa.
Novo Industrias). Etter 2,5 times risting ved 28° C ble blandingen ekstrahert med methylisobutylketon og ekstraktet ble kromatografert på kieselgel. Det ble erholdt 100 mg (-)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [3.3.0]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester med en dreieverdi på [a]^°-24,9° (c=l,020 i HCC13).
Eksempel 15
300 mg (+)-3a-dimethylacetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy ) -cis-bicyklo [ 3 . 3 . 0 3 oktan-2|3-carboxylsyre-methylester ble løst i 9 ml ethanol og ble forenet med en løsning av 1,5 ml 1:40-fortynnet esterase fra svinelever (Fa. Boehringer) i 100 ml 0,1 M fosfatbuffer, pH 7. Blandingen ble ristet i 1 time ved 28° C på ristemaskinen, ble deretter ekstrahert med methylisobutylketon og det i vakuum inndampede ekstrakt ble kromatografert over en kieselgelsøyle. Det ble erholdt 114 mg (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3.3. 0 ]oktan-2j3-carboxylsyre-methylester som olje, som langsomt gjennomkrystalliserte. Sm.p. 64 - 65° C [a]^°+25,l°
(c=l,010 i HCC13).
Eksempel 16
300 mg (+)-3a-carboxypropionyloxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3. 3. 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester ble løst i 9 ml ethanol og ble forenet med en løs-ning av 750 mg Lipase "Sclerotinia" (Fa. Nagase) i 100 ml 0,1 M fosfatbuffer, pH 7. Etter 30 timers risting på ristemaskinen ved 28° C ble pH-verdien på løsningen innstilt til pH 9,0 med 0,ln NaOH, og ble deretter ekstrahert med methylisobutylketon og ekstraktet ble inndampet til tørrhet i vakuum. Det ble erholdt 105 mg (+)-3a-hydroxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3.3. 0 3oktan-2(5-carboxylsyre-methylester med en dreieverdi på [a]^°+24,0° (c=l,08 i HCC13).
Eksempel 17
300 mg (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3 . 3 . 0 3 oktan-2(5-carboxylsyre— ethylester ble oppløst i 9 ml ethanol og ble forenet med en løsning av 750 mg
Lipase fra svinepankreas (Fa. Chemical Dynamics Corporation) i 100 ml fosfatbuffer, pH 7. Løsningen ble ristet på en rotasjonsrister ved 28° C, hvorved reaksjonsforløpet ble fulgt ved analyse av løpende tatte prøver. Etter 1 times reaksjonstid var 50 % av det tilsatte substrat omvandlet. Blandingen ble deretter ekstrahert tre ganger med methylisobutylketon, ekstraktene ble forenet, inndampet til tørrhet i vakuum og kromatografert over en kieselgelsøyle for separering av uomsatt esteracylat (gradient: methylenklorid-methylenklorid/10 % aceton). Det ble erholdt 110 mg (+)-3oc-hydroxy-7, 7- (2,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3. 3 . 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre—ethylester med en dreieverdi på [a]^°+23,8°
(c=l,215 i HCC13).
Eksempel 18
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 17 ble 300 mg (+)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3.3.0] oktan-2|3-carboxylsyre— ethylester behandlet i 1 time med en løsning av 1,5 ml (fortynnet 1:40) esterase fra svinelever (Fa. Boehringer Mannheim) i 100 ml fosfatbuffer,
pH 7. Etter ekstraksjon med methylisobutylketon og kromatografi over en kiselgelsøyle ble det erholdt 118 mg ( + )-3ct-hydroxy-7, 7- (2 ,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[3.3.0]oktan-2|3-carboxylsyre-methylester med en dreieverdi på [a] ^+24,3°
(c=l,075 i HCC13).
Eksempel 19
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 17 ble 300 mg (+)-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklot 3 . 3 . 0 ] oktan-23-carboxylsyre-benzylester behandlet i 1 time med en løsning av 750 mg Lipase-PL fra Alcaligenes (Fa. Meito Sangyo) i 100 ml fosfatbuffer, pH 7. Deretter ble blandingen ekstrahert med methylisobutylketon, ekstraktet ble inndampet til tørrhet og residuet kromatografert over en kisel-gelsøyle. Det ble erholdt 105 mg ( + ) -3oc-hydroxy-7,7- (2 ,2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3 . 3 . 0 ]oktan-2(3-carboxylsyre-benzylester med en dreieverdi på [ot] ^+23, 9°
(c=l,045 i HCC13).
Eksempel 20
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 17 ble 300 mg (i )-3ct- acetoxy-7 , 7- (2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo [ 3. 3 . 0 ] oktan-2|3-carboxylsyre-benzylester behandlet i 3 timer med en løsning av 750 ml Lipase My fra Candida cyclindracea (Fa. Meito Sangyo) i 100 ml fosfatbuffer, pH 7. Blandingen ble deretter ekstrahert med methylisobutylketon, ekstraktet ble inndampet til tørrhet og residuet kromatografert over en kieselgelsøyle. Det ble erholdt 115 mg ( + ) -3ot-hydroxy-7, 7- (2 , 2-dimethyl-trimethylendioxy) -cis-bicyklo[ 3.3. 0 ]oktan-2|3-carboxylsyre-benzylester med en dreieverdi på [ot]^+24,5°
(c=l,l45 i HCC13) .
Eksempel 21
Under de betingelser som er beskrevet i eksempel 8 ble 6 g (-)-3a-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo [ 3. 3. 0 ] oktan-2|3-carboxylsyre-methylester omsatt med en kultur av stammen Alcaligenes paradoxus (ATCC 17713). Fire timer etter tilsetning av substratet var 50 % av det tilsatte racemat omvandlet. Blandingen ble ekstrahert med methylisobutylketon og ekstraktet ble inndampet til tørrhet i vakuum.
Det gjenværende residuum ble kromatografert over en kieselgel-søyle for separering av den unaturlige konfigurerte, forsåpete enantiomer. Herved fremkom i fraksjon 1 den i sin absolutte konfigurasjon av det naturlige prostacyclin PGI,,, tilsvarende, uforsåpede gjenværende enantiomer (+)-II. Etter at fraksjonen var blitt inndampet til tørrhet ble det erholdt 2,4 g ( + )-3oc-acetoxy-7,7-(2,2-dimethyl-trimethylendioxy)-cis-bicyklo[3.3.0]-oktan-2p-carboxylsyre-methylester som ikke krystalliserende olje med en dreieverdi på [oc]D 2 0+2,2°(c=l,ll i kloroform).

Claims (4)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av optisk aktive ( + )-bicyklo[3.3.O]oktanol-derivater av formel (+)-!: hvori Rx og R2 sammen betegner et oxygenatom eller tobindings-resten -0-X-O- hvor X betegner rettkjedet eller forgrenet alkylen med 1-7 C-atomer, R3 betegner resten COOZ hvor Z betegner hydrogenatom, rettkjedet eller forgrenet alkyl med 1-7 C-atomer, fenyl eller benzyl, og R4 betegner rettkjedet eller forgrenet alkyl med 1-7 C-atomer eller (CH2)2COOH, karakterisert ved at racemiske 3a-acyloxy-cis-bicyklo[3.3.0]oktan-derivater av formel (±)-II hvori Rj_, R2, R3 og R4 har de ovenfor angitte betydninger, underkastes enzymatisk eller mikrobiologisk en stereospesifikk acylat-hydrolyse, med mikroorganismer valgt blant bakterier, sopp eller enzymer isolert fra disse, eller enzymer fra storfepankreas, svinelever eller svinepankreas, med evnen til stereospesifikk acylathydrolyse av (±)-II, og at det dannede (+)-bicyklo[3.3.0]oktanolderivat (+)-I separeres fra uforsåpet bicyklo[3.3.0]oktanolacylat-formelen (-)-II, eller at uforsåpete enantiomerer (+)-II separeres fra forsåpet bicyklo-[3.3.0]oktanolderivat (-)-I og deretter underkastes en kjemisk acylat-hydrolyse.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som enzym anvendes Lipase-PL fra Alcaligenes, Lipase My fra Candida cylidracea, Lipase Saiken fra Rhizopus, Lipase Sclerotinia, a-Chymotrypsin fra storfepankreas, Alcalase T., esterase fra svinelever, Lipase fra svinepankreas eller Subtilisin fra Bacillus subtilis i oppløst, suspendert eller immobilisert form på BrCN-aktivert Sepharose eller på Oxiranakrylperler.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som mikroorganisme anvendes Alcaligenes marshallii, Mucor rouxii, Corynebacterium equi, Trichoderma koningi, Sarcina lutea, Penicillium citrinum, Flavobacterium lutescens eller Alcaligenes paradoxus.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved at det som enzymer anvendes isolerte enzymer fra de i krav 3 angitte mikroorganismer, i oppløst, suspendert eller immobilisert form.
NO883109A 1986-11-13 1988-07-12 Fremgangsmaate for fremstilling av optisk aktive (+)-bicyklo(3.3.0)oktanol-derivater NO172903C (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19863638758 DE3638758A1 (de) 1986-11-13 1986-11-13 Racematspaltung von 3-acyloxy-bicyclo(3.3.0)octan-7-on-2- carbonsaeureestern durch stereospezifische enzymatische oder mikrobiologische acylat-hydrolyse
PCT/DE1987/000513 WO1988003567A1 (fr) 1986-11-13 1987-11-12 Clivage racemique de 3-acyloxy-bicyclo [3.3.0] octane-7-one-2 esters d'acide carboxylique par hydrolyse d'acylate stereospecifique enzimatique ou microbiologique

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO883109D0 NO883109D0 (no) 1988-07-12
NO883109L NO883109L (no) 1988-07-12
NO172903B true NO172903B (no) 1993-06-14
NO172903C NO172903C (no) 1993-09-22

Family

ID=6313858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO883109A NO172903C (no) 1986-11-13 1988-07-12 Fremgangsmaate for fremstilling av optisk aktive (+)-bicyklo(3.3.0)oktanol-derivater

Country Status (20)

Country Link
US (1) US4894336A (no)
EP (1) EP0271432B1 (no)
JP (2) JP2736066B2 (no)
AT (1) ATE80664T1 (no)
AU (1) AU613328B2 (no)
BG (1) BG48099A3 (no)
CA (1) CA1301100C (no)
CS (1) CS268542B2 (no)
DD (1) DD264233A5 (no)
DE (2) DE3638758A1 (no)
DK (1) DK174394B1 (no)
ES (1) ES2044969T3 (no)
FI (1) FI92499C (no)
GR (1) GR3006013T3 (no)
HU (1) HU202596B (no)
IE (1) IE61662B1 (no)
NO (1) NO172903C (no)
RU (1) RU1788968C (no)
WO (1) WO1988003567A1 (no)
ZA (1) ZA878542B (no)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8600245D0 (en) * 1986-01-07 1986-02-12 Shell Int Research Preparation of 2-arylpropionic acids
DE3638760A1 (de) * 1986-11-13 1988-05-26 Schering Ag Verfahren zur herstellung von optisch aktiven bicyclo(3.3.0)octandioncarbonsaeureestern
JPH01257484A (ja) * 1987-12-14 1989-10-13 Idemitsu Kosan Co Ltd 光学活性な二級アルコールの製造方法
CA2118795A1 (en) * 1991-09-20 1993-04-01 John Crosby Pyranones

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4644068A (en) * 1983-08-19 1987-02-17 Sagami Chemical Research Center Bicyclo[3.3.0]octenylaldehyde derivatives
US4681951A (en) * 1983-12-27 1987-07-21 Sagami Chemical Research Center Bicyclo(3.3.0)octene derivatives
JPS61280294A (ja) * 1985-06-04 1986-12-10 Nisshin Flour Milling Co Ltd 光学活性カルバサイクリン中間体の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
ES2044969T3 (es) 1994-01-16
EP0271432B1 (de) 1992-09-16
AU8236487A (en) 1988-06-01
JP2786437B2 (ja) 1998-08-13
GR3006013T3 (no) 1993-06-21
AU613328B2 (en) 1991-08-01
CS268542B2 (en) 1990-03-14
DK174394B1 (da) 2003-01-27
DK389188A (da) 1988-07-12
US4894336A (en) 1990-01-16
NO883109D0 (no) 1988-07-12
ZA878542B (en) 1988-10-26
FI92499C (fi) 1994-11-25
DE3638758A1 (de) 1988-05-26
HUT47157A (en) 1989-01-30
HU202596B (en) 1991-03-28
JPH1057095A (ja) 1998-03-03
ATE80664T1 (de) 1992-10-15
FI92499B (fi) 1994-08-15
DK389188D0 (da) 1988-07-12
IE873046L (en) 1988-05-13
BG48099A3 (en) 1990-11-15
CA1301100C (en) 1992-05-19
EP0271432A2 (de) 1988-06-15
FI883316A0 (fi) 1988-07-12
NO883109L (no) 1988-07-12
FI883316A (fi) 1988-07-12
DD264233A5 (de) 1989-01-25
JP2736066B2 (ja) 1998-04-02
NO172903C (no) 1993-09-22
JPH01501202A (ja) 1989-04-27
CS815187A2 (en) 1989-06-13
EP0271432A3 (en) 1988-06-22
RU1788968C (ru) 1993-01-15
IE61662B1 (en) 1994-11-16
DE3781775D1 (de) 1992-10-22
WO1988003567A1 (fr) 1988-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2249917T3 (es) Resolucion de trans-2-(alcoxicarboniletil9-lactamas utiles en la sintesis de 1-(4-fluorofenil)-3(r)-3(s)-hidroxi-3-(4-fluorofenil)-propil)-4(s)-(4-hidroxifenil)-2-azetidinona.
US4882451A (en) Optically active compounds and process for producing thereof
HU217814B (hu) Eljárás Corey-féle lakton-diolok rezolválására
NO172903B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av optisk aktive (+)-bicyklo(3.3.0)oktanol-derivater
EP1062358B1 (fr) Nouveau procede de preparation de la fexofenadine
AU670088B2 (en) Enzymatic process to separate racemic mixtures of delta valerolactones
US5102793A (en) Stereospecific keto reduction of bicyclooctandione-carboxylic acid esters by microorganisms
EP0528607B1 (en) Process for preparing optically active 3-phenylglycidic acid esters
US5128252A (en) Process for producing optically active compound
US5248609A (en) Racemic separation of 7α-acyloxy-6β-hydroxymethyl-2-oxabicyclo[3.]-octan-3-ones by stereospecific enzymatic acylate hydrolysis
US5459067A (en) Method for producing optically active norborneol by ester hydrolysis
US5391494A (en) Process for selectively producing optically active 1-derivatized-2-diol using lipase CES and triglyceride
US5702928A (en) Process for producing optically active triazole compounds and method of racemizing optically active triazole compounds
JPH1087613A (ja) 光学活性アジリン類およびその製造法
MXPA01003373A (en) Resolution of trans-2 -(alkoxycarbonylethyl) -lactams useful in the synthesis of 1- (4-fluorophenyl) -3(r) -[3(s) -hydroxy-3 -(4-fluorophenyl) -propyl)]-4(s) -(4-hydroxyphenyl) -2-azetidinone
HU176104B (hu) Üj eljárás (+)13B-alkiI-3-metoxi-17-oxo-gonaének mikrobiológiai előállítására

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired