NL9300001A - Remmers van zowel no-synthase als cyclooxygenase, werkwijze voor de bereiding ervan en therapeutische preparaten die ze bevatten. - Google Patents

Remmers van zowel no-synthase als cyclooxygenase, werkwijze voor de bereiding ervan en therapeutische preparaten die ze bevatten. Download PDF

Info

Publication number
NL9300001A
NL9300001A NL9300001A NL9300001A NL9300001A NL 9300001 A NL9300001 A NL 9300001A NL 9300001 A NL9300001 A NL 9300001A NL 9300001 A NL9300001 A NL 9300001A NL 9300001 A NL9300001 A NL 9300001A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
compound
general formula
precursor
compounds
arginine
Prior art date
Application number
NL9300001A
Other languages
English (en)
Other versions
NL194889C (nl
NL194889B (nl
Original Assignee
Scras
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Scras filed Critical Scras
Publication of NL9300001A publication Critical patent/NL9300001A/nl
Publication of NL194889B publication Critical patent/NL194889B/nl
Application granted granted Critical
Publication of NL194889C publication Critical patent/NL194889C/nl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C65/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C65/01—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C65/03—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups monocyclic and having all hydroxy or O-metal groups bound to the ring
    • C07C65/05—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing hydroxy or O-metal groups monocyclic and having all hydroxy or O-metal groups bound to the ring o-Hydroxy carboxylic acids
    • C07C65/10—Salicylic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/02—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C07C211/03—Monoamines
    • C07C211/04—Mono-, di- or tri-methylamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/52—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C229/54—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C229/56—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring with amino and carboxyl groups bound in ortho-position
    • C07C229/58—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring with amino and carboxyl groups bound in ortho-position having the nitrogen atom of at least one of the amino groups further bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring, e.g. N-phenyl-anthranilic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C279/14—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/30—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to nitro or nitroso groups
    • C07C279/32—N-nitroguanidines
    • C07C279/36—Substituted N-nitroguanidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/30—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/02—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
    • C07C69/12—Acetic acid esters
    • C07C69/14—Acetic acid esters of monohydroxylic compounds
    • C07C69/145—Acetic acid esters of monohydroxylic compounds of unsaturated alcohols
    • C07C69/157—Acetic acid esters of monohydroxylic compounds of unsaturated alcohols containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D209/26—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with an acyl radical attached to the ring nitrogen atom
    • C07D209/28—1-(4-Chlorobenzoyl)-2-methyl-indolyl-3-acetic acid, substituted in position 5 by an oxygen or nitrogen atom; Esters thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

^ . : ./ au
REMMERS VAN ZOWEL· NO-SYNTHASE ALS CYCLOOXYGENASE. WERKWIJZE VOOR DE BEREIDING ERVAN EN THERAPEUTISCHE PREPARATEN DIE ZE BEVATTEN
De uitvinding heeft betrekking op verbindingen met een tweeledige biologische activiteit, een werkwijze voor de bereiding ervan en farmaceutische preparaten die ze bevatten. Deze verbindingen hebben een tweeledige biologische activiteit, in die zin dat zij zowel de L-argini-ne/stikstofmonoxyde(NO) route als de cyclooxygenase-route remmen.
Gezien de potentiële rol van NO-synthase en cyclooxygenase in de fysiopathologie kunnen de verbindingen doeltreffend en gunstig zijn bij de behandeling van: - cardiovasculaire en cerebrovasculaire aandoeningen, met inbegrip van bijvoorbeeld migraine, beroerte, infarcten, ischemie, septische, endotoxische en hemorragi-sche shock, pijn; - de verschillende vormen van ontsteking, met inbegrip van bijvoorbeeld acute reumatische koorts, reuma-toïde artritis of andere typen artritis, osteoartrose, astma; immuunaandoeningen, met inbegrip van virus- of niet-virusinfecties, auto-immuunziekten, verkeerd gebruik van geneesmiddelen, kanker en alle pathologieën waarbij een overmatige produktie van stikstofmonoxide en/of arachidon-zuurmetabolieten betrokken is bij mensen of dieren.
Remmers van cyclooxygenase of aspirine-achtige geneesmiddelen, dat wil zeggen acetylsalicylzuur en sali-cylzuur, gemethyleerde indoolderivaten, zoals indomethacine (1- (4-chloorbenzoyl) -5-methoxy-2-methyl-lH-indool-3-azijn- zuur) en sulindac (5-fluor-2-methyl-l-[[4-(methyl-sulfi-nyl) fenyl]-methyleen]-lH-indeen-3-azijnzuur, derivaten van N-fenylanthranilzuren (meclofenamaat, fenamaten), propion-zuurderivaten zoals ibuprofen (p-isobutylhydratropinezuur), naproxen en fenoprofen, worden op grote schaal gebruikt en zijn uitgebreid bewezen, met echter enige ongewenste neveneffecten bij hoge doses, als doeltreffende therapie van ontstekingen (R. Flower, S. Moncada en J. Vane, Mechanism of action of aspirin-like drugs - In the pharmacological basis of therapeutics Goodman and Gilman 1985, 29, 674-715) . Bovendien zijn deze verbindingen gebruikt bij zowel acute als profylactische behandeling van migraine. De waarde van deze geneesmiddelen staat buiten kijf, hoewel hun therapeutische respons vaak onvolledig is en zij door sommige patiënten niet als een geschikte behandeling worden beschouwd. Gezien hun werking tegen ontstekingen en tegen bloedplaatjesaggregatie zijn deze verbindingen ook gebruikt bij trombose en met bewijs van een vermindering van oedeem in hersenischemiemodellen, en derhalve voorgesteld bij de behandeling en preventie van infarcten, beroertes en cere-brovasculaire aandoeningen (W. Armstrong, Recent trends in research and treatment of stroke, SCRIP, PJB publications, 1991).
Biologische activiteit van remmers van stikstofmo-noxide-synthase is pas onlangs ontdekt en hun potentiële therapeutische toepassing wordt op dit moment overwogen. Deze stoffen, waarvan structuren worden voorgesteld door L-arginine-analoga en worden beschreven in de Nederlandse octrooiaanvrage 9002720, zijn remmers van de vorming van stikstof monoxide (NO). Van de huidige kennis over NO is een uitgebreid overzicht verschenen in 1991 van Moncada et al, (S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs. Nitric oxide: Physiology, Pathophysiology, and Pharmacology. Pharmacological reviews 43, 2, 109-142). Kort samengevat lijkt het dat NO dient als een overdrachtsmechanisme voor het oplosbare guanylaatcyclase in vaatstelsel, bloedplaatjes, zenuwstelsel en als effectormolecuul in immunologische reacties in vele cellen en weefsels, met inbegrip van macrofagen of neutrofielen. NO wordt enzymatisch gevormd uit L-arginine door een enzym genaamd NO-synthase. Dit enzym komt in twee vormen voor: een constitutieve en een induceerbare vorm, die beide worden geremd door L-arginine-analoga zoals hieronder gedefinieerd. Bij sommige pathologieën kan een overmatige produktie van NO optreden, zoals reeds is aangetoond bij shock, zoals beschreven in de eerder genoemde Nederlandse octrooiaanvrage. In deze context zijn de remmers van NO-synthase doeltreffende geneesmiddelen voor het voorkomen van de vasculaire gevolgen en mortaliteit door de aandoeningen, in het bijzonder wanneer zij worden gecombineerd met remmers van cyclooxygenase zoals aspirine, indomethacine of meclofenamaat. Dergelijke gunstige effecten van de combinatie van twee werkzame bestanddelen in hetzelfde molecuul worden waarschijnlijk aangetroffen bij patiënten die lijden aan migraine, beroerte, infarcten, hersenischemie, pijn, ontstekingen en verschillende immunologische aandoeningen. De associatie van een remmer van stikstofmonoxide-synthase en een remmer van cyclooxygenase is beschreven in de eerder genoemde Nederlandse octrooiaanvrage voor de behandeling van shocktoestanden. Gevonden is nu echter dat de combinatie van dergelijke verbindingen een beter synergistisch effect geeft dan de associatie.
De uitvinding heeft betrekking op verbindingen met de algemene formule AB dat een zout of een amide kan zijn, waarin: - A een cyclooxygenase-remmer met een toegankelijke zuurfunctie voorstelt, die de algemene formule RCOOH heeft, waarbij COOH de toegankelijke zuurfunctie voorstelt en R de betreffende groep van de cyclooxygenaseremmer voorstelt, en - B de L-vorm van arginine-analoga met de formule 1 van bijgaand formuleblad voorstelt, waarin Rx een waterstofatoom of een methyl- of ethylgroep voorstelt, R2 een waterstofatoom of een nitrogroep voorstelt en R3 een amino-, methylamino-, ethylamino-, hydrazino-, methyl- of ethylgroep voorstelt, met dien verstande dat indien AB een zout is waarin R2 een waterstofatoom voorstelt, R3 dan niet een aminogroep voorstelt.
In een voorkeursuitvoeringsvorm is de cyclooxyge-nase-remmer met de algemene formule RCOOH salicylzuur, acetylsalicylzuur, mefenaminezuur, ibuprofen, indomethacine of sulindac.
De uitvinding verschaft tevens een werkwijze voor de bereiding van verbindingen met de hierboven gedefinieerde formule AB, welke werkwijze omvat de reactie, in nagenoeg equimolaire hoeveelheden, onder de juiste omstandigheden, van een verbinding A of een voorloper daarvan waarbij A de hierboven gedefinieerde betekenis heeft, met een verbinding B of een voorloper daarvan waarbij B de hierboven gedefinieerde betekenis heeft.
In het bijzonder omvat de werkwijze voor de bereiding van verbindingen in de vorm van een zout met de algemene formule 2 waarin R, Rlf R2 en R3 de hierboven gedefinieerde betekenissen hebben, de reactie, in water of een mengsel van water en alcohol, bij een temperatuur van kamertemperatuur tot het kookpunt van het reactiemengsel, van een verbinding met de algemene formule A of een voorloper daarvan waarbij A de hierboven gedefinieerde betekenis heeft, met een verbinding met de formule B of een voorloper daarvan waarbij B de hierboven gedefinieerde betekenis heeft. De voorloper van de verbinding A kan een zout van de verbinding A zijn, zoals bijvoorbeeld het natriumzout. De voorloper van de verbinding B kan bijvoorbeeld het acetaat of het hydrochloride van de verbinding B zijn. De alcohol die gemengd met water wordt gebruikt, kan methanol of ethanol zijn.
In het bijzonder omvat de werkwijze voor de bereiding van verbindingen in de vorm van een amide met de algemene formule 3 waarin R, Rlf R2 en R3 de hierboven gedefinieerde .betekenissen hebben, de reactie van een verbinding met de algemene formule B of een voorloper daarvan, in acetonitril bij een temperatuur van 0°C tot kamertemperatuur in aanwezigheid van een base, met de voorloper van de verbinding A met de formule RCOX waarbij R de hierboven gedefinieerde betekenis heeft en X een halo-geenatoom voorstelt. De voorloper van de verbinding B kan bijvoorbeeld het hydrochloride van de verbinding B zijn. De reactie kan worden uitgevoerd in aanwezigheid van triethyl-amine als een base.
Tenslotte verschaft de uitvinding een farmaceutisch preparaat dat een doeltreffende hoeveelheid van een verbinding met de algemene formule AB^.gemengd met een farmaceutisch aanvaardbaar verdunningsmiddel of drager omvat.
De volgende voorbeelden lichten de uitvinding toe.
Voorbeeld I
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=acetylsalicylzuur, B=N-monomethyl-L-arginine (L- NMMA) 99 mg (0,52 mmol) L-NMMA en 95 mg (0,52 mmol) acetylsalicylzuur werden opgelost in 10 ml ethanol (95%) bij kamertemperatuur. Er werd nog 3 uur bij kamertemperatuur geroerd. De oplossing werd drooggedampt en het verkregen residu werd behandeld met 25 ml water, en daarna gevriesdroogd onder verkrijging van 190 mg van de gewenste verbinding (witte vaste stof; smeltpunt = 170°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 7,80-6,60 (m, 4H, aromatisch); 3,50 (t, 1H, CHC02H); 3,10 (rn, 2H, CH2-NH); 2,60 (s, 3H, CH3-NH) ; 2,15 (s, 3H, CH3- CO); 1,90-1,30 (m, 4H, CH-CH2-CH2) .
Voorbeeld II
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=salicylzuur, B=N-monomethyl-L-arginine (L-NMMA) 0,52 mmol N-monomethyl-L-arginine-acetaat en 0,52 mmol natriumzout van salicylzuur werden .opgelost in water bij kamertemperatuur. Het roeren werd bij kamertemperatuur voortgezet tot de oplossing helder was. Het gevormde natriumacetaat werd verwijderd en de oplossing werd gevriesdroogd onder verkrijging van 160 mg van de gewenste verbinding (witte vaste stof; smeltpunt = 172-175°C).
^H-NMR (100 MHz, D20) : 7,75-6,70 (m, 4H, aromatisch); 3,55 (t, 1H, CH-COOH); 3,00 (m, 2H, CH2-NH); 2,60 (S, 3H, NH-CH3) ; 1,90-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld III
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=acetylsalicylzuur, B=N-o-nitro-L-arginine (L-NO) 500 mg (2,28 mmol) Ν-ω-nitro-L-arginine en 411 mg (2,28 mmol) acetylsalicylzuur werden opgelost onder verwarmen in een mengsel van ethanol/H20 (100 ml/70 ml). Er werd nog één uur verhit onder terugvloeiing en onder roeren. De oplossing werd drooggedampt en het verkregen residu werd behandeld met 100 ml water en daarna gevriesdroogd onder verkrijging van 900 mg van de gewenste verbinding (witte vaste stof; smeltpunt > 260°C).
^Ï-NMR (100 MHz, D20) : 7,85-6,70 (m, 4H, aromatisch); 3,70 (t, 1H, CH-COOH); 3,10 (m, 2H, CH2-NH) ; 2,16 (s, 3H, CH3) ; 1,90-1,35 (m, 4H, CH2-CH2).
Voorbeeld IV
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=salicylzuur, B=N-w-nitro-L-arginine (L-NO) 500 mg (2,28 mol) Ν-ω-nitro-L-arginine en 315 mg (2,28 mmol) salicylzuur werden opgelost onder verwarmen in een mengsel van ethanol/H20 (100 ml/70 ml). Er werd nog één uur verhit onder terugvloeiing en onder roeren. De oplossing werd drooggedampt en het verkregen residu werd behandeld met 100 ml water en daarna gevriesdroogd onder verkrijging van 810 mg van de gewenste verbinding (witte vaste stof; smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 7,78-6,71 (m, 4H, aromatisch), 3,53 (t, 1H, CH-COOH), 3,11 (m, 2H, CH2-NH) , 2,00-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld V
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=acetylsalicylzuur, B= methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine (L-NAME)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van acetylsalicylzuur en de methyles-ter van Ν-ω-nitro-L-arginine, volgens de methode van voorbeeld III (opbrengst 98,7%); (witte vaste stof; smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 7,8-6,70 (m, 4H, Ph) ; 3,80 (t, 1H, CH-C02H) ; 3,65 (s, 3H, C02CH3) ; 3,10 (m, 2H, CH2NH); 2,11 (s, 3H, CH3C0); 1,90-1,35 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld VI
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=indomethacine, B=N-e-nitro-L-arginine (L-NO)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van indomethacine en Ν-ω-nitro-L-arginine volgens de methode van voorbeeld III (opbrengst 97,8%); (witte vaste stof; smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHZ, D20) 7,70-6,35 (m, 7H, aromatisch); 3,95 (m, 1H, CH-COOH); 3,62 (s, 3H, CH30) ; 3,35 (S, 2H, CH2-COOH) ; 3,08 (m, 2H, CH2- NH); 2,10 (2S, 3H, CH3-C=); 1,72-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld VII
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=sulindac, B=N-e-methyl-L-arginine (L-NMMA) Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van het natriumzout van sulindac en N-ω-methyl-L-arginine-acetaat, volgens de methode van voorbeeld II (opbrengst 98%); (oranje vaste stof, smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 7,45 (m, 4H, Ph-SO); 6,95-6,60 (m, 3H, Ph-F); 6,29 (m, 1H, =C-H) ; 3,15 (m, 5H, CH-COOH, CH2-COOH, CH2NH) ; 2,72 (s, 3H, CH3-NH); 2,60 (S, 3H, CH3-SO); 1,83 (2s, 3H, CH3-C=); 1,40 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld VIII
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=ibuprofen, B=N-o>-nitro-L-arginine (L-NO)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van ibuprofen en Ν-ω-nitro-L-arginine, volgens de methode van voorbeeld III (opbrengst 99%); (witte vaste stof, smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 7 (m, 4H, aromatisch); 3,6-3,3 (m, 2H, 2CHC02H); 3,05 (m, 2H, CH2N); 2,35 (d, 2H, CH2Ph); 1,8-1,3 (m, 5H, CH2-CH2 en CH(CH3)2); 1,2 (d, 3H, CH-CH3) ; 0,9 (d, 6H, 2CH3) .
Voorbeeld IX
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=mefenaminezuur, Β=Ν-ω-ηitro-L-arginine (L-NO) Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van mefenaminezuur en. Ν-ώ-nitro-L-arginine, volgens de methode van voorbeeld III (opbrengst 98%); (witte vaste stof, smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 8 (m, 1H, H, arom. ortho t.o.v. C02H); 7,3-6,5 (m, 6H, aromatisch); 3,6 (t, 1H, CHC02H) ; 3,3 (m, 2H, CH2NH) ; 2,2 en 2,3 (2s, 6H, 2CH3); 1,85-1,6 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld X
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=indomethacine, B=N-o)-methyl-L-arginine (L-NMMA) Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van het natriumzout van indomethacine en Ν-ω-methyl-L-arginine-acetaat volgens de methode van voorbeeld II (opbrengst 99%); (gele vaste stof, smeltpunt > 260°C).
^•H-NMR (100 MHZ, D20) : 7,70-6,35 (m, 7H, aromatisch); 3,67 (2s, 3H, CH30); 3,47 (m, 1H, CH-COOH) ; 3,35 (s, 2H, CH2-COOH); 2,97 (m, 2H, CH2-NH); 2,57 (S, 3H, CH3-NH); 2,05 (2s, 3H, CH3-C=); 1,72-1,30 (m, 4H, ch2-ch2) .
Voorbeeld XI
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=sulindac, B=methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine (L-NAME)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van het natriumzout van sulindac en de methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine-hydrochloride, volgens de methode van voorbeeld II (opbrengst 98,6%); (oranje vaste stof, smeltpunt > 260°C).
^ï-NMR (100 MHz, D20) : 7,30 (m, 4H, Ph-SO); 6,70 (m, 3H, Ph-F); 6,11 (m, 1H,=C-H); 3,78 (m, 1H, CH-COOH); 3,62 (s, 3H, 0-CH3) ; 3,18 (bs, 2H, CH2-C00H); 3,00 (m, 2H, CH2-NH); 2,61 (s, 3H, CH3-S0); 1,83 (bs, 3H, CH3-C=); 1,90-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld XII
...... )
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=mefenaminezuur, B=N-o-methyl-L-arginine (L-NMMA) Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van mefenaminezuur en Ν-ω-methyl-L-arginine volgens de methode van voorbeeld III (opbrengst 99%); (witte vaste stof, smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 8 (m, 1H, H arom. ortho t.o.v. C02H); 7,3-6,5 (m, 6H, Ph); 3,56 (t, 1H, CHC02H); 3,2 (m, 2H, CH2NH) ; 2,85 (s, 3H, CH3NH); 2,2 en 2,3 (2s, 6H, 2CH3); 1,8-1,6 (m, 4H, CH2-CH2).
Voorbeeld XIII
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=sulindac, B=N-w-nitro-L-arginine (L-NO)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi- molaire hoeveelheden van sulindac en Ν-ω-nitro-L-arginine, volgens de methode van voorbeeld III (opbrengst 98%); (oranje vaste stof, smeltpunt > 260°C).
^-NMR (100 MHz, D20) : 7,30 (m, 4H, Ph-SO); 6,70 (m, 3H, Ph-F); 6,11 (m, 1H, =C-H); 3,78 (m, 1H, CH-COOH); 3,18 (bs, 2H, CH2-COOH); 3,00 (rn, 2H, CH2“NH); 2,61 (s, 3H, CH3-SO) ; 1,83 (bs, 3H, CH3-c=); 1,90-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld XIV
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=salicylzuur, B-methylester van Ν-ω-nitro-L- arginine (L-NAME)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van het natriumzout van salicylzuur en de methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine-hydrochloride, volgens de methode van voorbeeld II (opbrengst 97,8%); (witte vaste stof, smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20) : 7.70- 6,68 (m, 4H, Ph); 4,00 (t, 1H, CH-COOH); 3,65 (s, 3H, COOCH3); 3,11 (m, 2H, CH2-NH); 2,00-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld XV
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=indomethacine, B=methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine (L-NAME)
Deze verbinding werd bereid door mengen in equi-molaire hoeveelheden van het natriumzout van indomethacine en de methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine-hydrochloride, volgens de methode van voorbeeld II (opbrengst 98,5%); (gele vaste stof, smeltpunt > 260°C).
1H-NMR (100 MHz, D20): 7.70- 6,35 (m, 7H, aromatisch); 3,95 (m, 1H, CH-COOH); 3,67 (bs, 6H, CH30, COOCH3) ; 3,35 (s, 2H, CH2-C00H) ; 3,08 (m, 2H, CH2-NH); 2,10 (2s, 3H, CH3-C=); 1,72-1,30 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld XVI
Verbinding AB in de zoutvorm, waarin: A=acetylsalicylzuur, B=methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine (L-NAME)
De methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine-hydrochlo-ride (675 mg, 2,5 mmol) werd gesuspendeerd in watervrij acetonitril (15 ml). Vervolgens werd 0,7 ml triethylamine (5 mmol) onder roeren toegevoegd. De verkregen heldere oplossing werd tot 0°C afgekoeld, waarna acetylsalicoyl-chloride (0,5 g, 2,5 mmol) in acetonitril (8 ml) werd toegevoegd waardoor zich een neerslag vormde. Er werd nog gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geroerd, daarna werd het neerslag afgefiltreerd en werd het filtraat droogge-dampt; het verkregen residu werd gechromatografeerd op een silicakolom (CHCl3/MeOH, 95/5 als elutiemiddel) onder verkrijging van de gewenste verbinding (73%); (witte vaste stof, smeltpunt = 180°C).
1H-NMR (100 MHz, CDC13/D20) : 8,10-6,90 (m, 4H, Ph); 4,85 (m, 1H, CH-COOH); 3,82 (s, 3H, 0CH3) ; 3,40 (m, 2H, CH2-NH) ; 2,40 (s, 3H, CH3~CO) ; 2,20- 1,50 (m, 4H, CH2-CH2).
Voorbeeld XVII
Verbinding AB in de amidevorm, waarin: A=sulindac, B=methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine (L-NAME)
Deze verbinding werd bereid door toepassing van het chloride van sulindac en de methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine, volgens de methode van voorbeeld XVI (opbrengst 70%); (gele vaste stof, smeltpunt = 154-156°C).
^M-NMR (100 MHz, CDC13/D20) : 7,30 (m, 4H, Ph-SO); 6,70 (m, 3H, Ph-F); 6,11 (m, 1H, =C-H); 3,60 (s, 3H, 0CH3) ,* 3,15-3,05 (m, 5H, CH2CON, CHC02CH3, CH2NH); 2,61 (s, 3H, CH3SO); 2,05 (2s, 3H, CH3-C=); 1,8-1,3 (m, 4H, CH2-CH2) .
Voorbeeld XVIII
Verbinding AB in de amidevorm, waarin: A=ibuprofen/ B=methylester van Ν-ω-nitro-L-argini-ne (L-NAME)
Deze verbinding werd bereid door toepassing van het bromide van ibuprofen en de methylester van Ν-ω-nitro-L-arginine volgens de methode van voorbeeld XVI (opbrengst 78%); (witte vaste stof, smeltpunt = 213°C).
1H-NMR (100 MHz, CDC13/D20) : 7 (m, 4H, Ph); 3,6 (s, 3H, 0CH3) ; 3,5-3,3 (m, 2H, CHCON, CHC02CH3) ; 3,10 (t, 2H, CH2N) ; 2,35 (d, 2H, CH2, Ph) ; 1,8-1,3 (m, 5H, CH2-CH2, CH(CH3)2); 1,2 (d, 3H, CH-CH3); 0,8 (d, 6H, 2CH3).
De verbindingen volgens de uitvinding zijn onderworpen aan enige biologische proeven in vitro en in vivo teneinde hun activiteit te bewijzen voor wat betreft het blokkeren van het stikstofmonoxide-synthase (constitutief en induceerbaar) en het cyclooxygenase; bovendien werd gevonden dat de combinatie biologisch actiever is dan de eenvoudige associatie van de twee werkzame bestanddelen. Hun activiteit is ook beoordeeld in pathologische modellen bij dieren; zij zijn vergeleken met referentiestoffen zoals aspirine, indomethacine en L-NG-monomethyl-arginine (L-; NMMA) en de eenvoudige associatie van deze verbindingen.
1-In vitro effect op constitutief NO-svnthase in de geïsoleerde aorta van de rat
Preparaten van geïsoleerde aorta van de rat met endotheel werden vervaardigd zoals eerder is beschreven (M. Auguet, S. Delaflotte, P.E. Chabrier en P. Braquet -Comparative effects of endothelium and phorbol 12-13 dibutyrate in rat aorta, Life Sciences, 1989, 45, 2051-2059).
Mannelijke Sprague Dawley-ratten (270-360 g, Charles River, Parijs) werden gedood door dislocatie van de hals en de thorax aorta werd verwijderd en bevrijd van omringend weefsel. Ringen van 2 mm breed werden opgehangen in orgaanbaden die 10 ml fysiologische oplossing bevatten (voor de samenstelling, zie hieronder) onder een spanning van 2 g bij 37°C en begast met 02/C02 (95%/5%) . De contrac-tie-responsen werden gemeten onder toepassing van kracht-verplaatsingsoverbrengers (Statham UC2) gekoppeld aan een Gould 8000 S polygraaf. Een equilibratieperiode van één uur werd in acht genomen vóór de proef. De normale fysiologische oplossing bestond uit (mM): NaCl, 118; KC1 4,7; CaCl2, 2,5; KH2P04, 1,2; MgS04, 0,6; NaHC03, 25; glucose, 11. Na equilibreren in normaal medium werd het preparaat onderworpen aan een bijna maximale dosis (ongeveer 95%) fenylefrine (PE, 1 μΜ). Toen de contractie stabiel was, werd carbachol (10 μΜ) getest teneinde de aanwezigheid of afwezigheid van endotheel vast te stellen.
Na wassen van het preparaat en een verdere her-equilibreerperiode van 45 minuten werd het preparaat onderworpen aan PE (1 μΜ) en werd carbachol (10 μΜ) toegediend om een maximale relaxatie te bewerkstelligen. De antagonisten werden vervolgens getest op een cumulatieve dosis-wijze en de IC50 (50% remmende concentratie) om de relaxatie van carbachol tegen te gaan werd berekend. De resultaten zijn samengevat in tabel A in de eerste kolom van de resultaten, getiteld " Test op constitutief N0-synthase1'.
2- In vitro effect op induceerbaar NO-svnthase in de geïsoleerde aorta van de rat
De verbindingen werden getest op geïsoleerde aorta van ratten in een shocktoestand, volgens een eerder gepubliceerde methode (M. Auguet, J.M. Guillon, S. Delaflotte, E. Etiemble, P.E. Chabrier en P. Braquet - Endothelium independent protective effect of NG-monomethyl-L-Arginine on endotoxin-induced alterations of vascular reactivity, Life Sciences, 1991, 48, 189-193).
Mannelijke Sprague Dawley-ratten (240-320 g) werden intraperitoneaal geïnjecteerd met endotoxine (10 mg/ kg) of met oplosmiddel (zoutoplossing, 1 mg/kg) . Drie uur later vertoonden de met endotoxine behandelde dieren endotoxemie-verschijnselen met inbegrip van pilo-erectie, diarree en lethargie. De ratten werden gedood door dislocatie van de hals en de thorax aorta werd verwijderd en bevrijd van het omringende weefsel. Ringen met een breedte van 2 mm werden onder een spanning van 2 g opgehangen in een orgaanbad dat 10 ml Krebs-Henseleit-oplossing bevatte (mM): NaCl, 118; KCl, 4,7; CaCl2, 2,5; KH2P04, 1,2; MgS04, 1,2; NaHC03, 25; glucose, 11. Deze oplossing werd continu begast met 02/C02 (95%/5%). Het endotheel werd mechanisch verscheurd door zachtjes een kleine forceps over het luminale oppervlak van de ringen te rollen. Na een equili-breerperiode van 90 minuten werd contractie opgewekt door toepassing van een maximale concentratie fenylefrine (PE, 1 μΜ). Toen het contractie-onderzoek voltooid was, werd carbachol (10 μΜ) getest teneinde de integriteit van het endotheel te verifiëren (11). 45 Minuten voor toepassing van PE werden antagonisten aan het bad toegevoegd en de ÏCgQ werd berekend. De resultaten zijn samengevat in tabel A, in de tweede kolom van de resultaten getiteld "Test op induceerbaar NO-synthase".
TABEL A
Figure NL9300001AD00161
NA = niet actief 3- In vitro effect op induceerbaar NO-synthase in de met lipopolvsacchariden (LPS^ behandelde vasculaire qladde-spiercellen
Sommige van de verbindingen werden ook getest op de gladde-spiercellen in cultuur, waarbij het NO-synthase werd geïnduceerd door LPS (M. Auguet, M.O. Lonchampt, s. Delaflotte, P.E. Chabrier en P. Braquet - FEBS Letters, 1992, in druk).
Gladde-spiercellen werden geïsoleerd door enzymatische (elastase en collagenase) digestie van thorax aorta van de rat, zoals eerder beschreven (P.E.. Chabrier, P. Roubert, M.O. Lonchampt, P.Plas en P. Braquet - J. Biol. Chem., 1988, 263, 13199-13202). Zij werden vier dagen gekweekt in DMEM met 10% foetaal kalfsserum en gebruikt tussen passage 3 en 7. Cel-monolagen werden gewassen en het medium werd vervangen door 2 ml DMEM dat 2 mM glutamine, antibiotica, 0,1 mM isobutylxanthine (IBMX) bevatte, met of zonder LPS (Escherichia coli). Na 24 uur werd cGMP uit de cellen geëxtraheerd, door snel indampen van het medium en toevoegen van 1 ml 0,1 n HC1 aan elk putje. De monsters werden bevroren tot cGMP-bepaling door radioimmunoassay (NEN-kit). Om het remmende effect te onderzoeken werden cellen 24 uur geïncubeerd in RPMI 1640 (de concentratie L-arginine was 1,2 mM), met of zonder LPS (0,1 /ig/ml). IBMX (0,1 mM) werd 30 minuten voor de cGMP-extractie toegevoegd, al dan niet in aanwezigheid van de onderzochte stoffen (10~4 M). De vermindering van cGMP-produktie werd gemeten (percentage vermindering) en de verkregen resultaten zijn samengevat in tabel B.
TABEL B
Figure NL9300001AD00171
4- In vitro effect op door arachidonzuur opgewekte aggregatie van gewassen bloedplaatjes van het konijn
Dit protocol werd gebruikt om het effect van de verbindingen op het cyclooxygenase te toetsen. De bepaling van de bloedplaatjes-aggregatie werd uitgevoerd volgens
Cazenave et al (Ann. Biol. Chem. 1983, 41, 167-179). Bloed werd afgenomen uit de auriculaire slagader van mannelijke Nieuw Zeelandse konijnen (gemiddeld lichaamsgewicht 2,5 kg) op ACD (citroenzuur/natriumcitraat/dextrose) als anti-coaguleermiddel. De gewassen bloedplaatjes werden geprepareerd en daarna overgebracht in het cuvet van de aggrego-meter (Chronolog aggregometer Coultronics). De antagonisten en arachidonzuur (0,5 mM) werden toegevoegd en het percentage transmissie dat overeenkomt met aggregatie (of de remming daarvan) werd gemeten teneinde de IC50 te bepalen. De resultaten zijn samengevat in tabel C, waarin de afkorting NA betekent "niet actief".
TABEL C
Figure NL9300001AD00181
5- In vitro effect op de nitriet-produktie die opgewekt wordt door LPS + INFv op J774 A2 monociet/macro-faaq cellijn
Cellen van het macrofaag-type zoals de J774 A2 cellijn zijn interessant om te gebruiken aangezien zij belangrijke cellen zijn bij ontstekingen en grote hoeveelheden NO-(door de inductie van NO-synthase) en cyclooxyge-nase-produkten produceren. Zij worden geactiveerd met lipopolysaccharide (LPS) in aanwezigheid van γ-interferon (INFy). Deze bepaling werd gebruikt om de effecten van verbindingen volgens de uitvinding te vergelijken met de associatie van de afzonderlijke verbindingen waaruit ze zijn opgebouwd.
Muize-monocyt/macrofaagcellen werden gekweekt in Dubecco's gemodificeerd Eagle's medium bij 37°C. De cellen werden uitgeplaat op een cultuurplaat met 24 putjes (NUNC) en werden voor de proeven gebruikt in hoeveelheden van ongeveer 2 x 105 cellen/plaat. De cellen werden geactiveerd met LPS (1 jLtg/ml) uit E. coli (S055:B5) en muize-re-combinant-IFNy (50 U/ml) en vervolgens geïncubeerd al dan niet in aanwezigheid van de verbindingen. Na 48 uur werden de nitriet (N02~)spiegels die correleren met de activering van NO-synthase, bepaald in de cultuurmedia door de colo-rimetrische methode volgens Green et al (L. Green, D. Wagner, J. Glogowski, P. Skipper, J. Wishwok en S. Tannen-baum, Analysis of nitrate, nitrite and [15N] nitrate in biological fluids, Analytical Biochemistry 126, 131-138, 1982).
De produktie van N02- was niet detecteerbaar in aanwezigheid of afwezigheid van de verbindingen wanneer de cellen niet geactiveerd werden. In geactiveerde cellen was de IC50 voor L-NMMA, L-NO en L-NAME respectievelijk 8 x 10"6 M, 1,5 x 10"5 en ΙΟ-3 M, terwijl de cyclooxygenase-remmers salicylzuur, acetylsalicylzuur, indomethacine en meclofenamaat nagenoeg inactief waren en een niet-signifi-cante remming tussen 0,5 en 15% gaven.
Om de sterkere werking van de verbindingen in vergelijking met de associatie te illustreren zijn enige voorbeelden weergegeven in de onderstaande tabel D, die het percentage remming van de nitriet-produktie weergeeft, opgewekt door LPS + INF op de J774 cellijn.
TABEL D
Figure NL9300001AD00201
De resultaten tonen aan dat de verbindingen volgens de uitvinding meer actief zijn bij gelijkwaardige concentraties dan de associatie van de afzonderlijke verbindingen waaruit ze zijn opgebouwd. De resultaten duiden ook op een potentialiserend effect van de combinatie van een NO-synthase-remmer en een cyclooxygenase-rem-mer.
6- In vitro effect op de orostaalandineproduktie opgewekt door LPS + iFNy op J774 Ax monocvt/macrofaaa cellijn
In dezelfde experimenten zoals hierboven beschreven, werden de effecten van verbindingen volgens de uitvinding vergeleken met de associatie op de produktie van cyclooxygenase-produkten teneinde na te gaan of de toene ming van activiteit van de verbindingen ook gecorreleerd is met de remming van cyclooxygenase.
Concentraties van één van de belangrijkste cy-clooxygenase-produkten die door de J774 A-l cellijn geproduceerd worden (dat is: 6-keto-PGFla) het stabiele metabo-liet van PGI2, werden bepaald in de cultuurmedia met een specifieke radioimmunoassay (NEN, Kit NEK 025).
Eerst werd waargenomen dat de afgifte van 6-keto-PGFla in de cultuurmedia niet werd beïnvloed door L-NMMA, L-NAME of L-NO, maar op een dosis-afhankelijke wijze werd teniet gedaan door indomethacine en aspirine met een IC50 van ongeveer 10-6 M en 10-5 M.
Het percentage remming van de 6-keto-PGFl-produk-tie opgewekt door LPS + INF in de J774 A2 cellijn, is weergegeven in de onderstaande tabel E, die aantoont dat de combinaties een grotere activiteit hebben dan de associatie.
TABEL E
Figure NL9300001AD00211
7- In vitro effect op de nitriet-produktie uit geactiveerde muize-macrofaqen
Ter bevestiging van de in de J774 cellijn verkregen resultaten die een sterkere werking aantonen van de gesynthetiseerde verbindingen vergeleken met de associatie van een remmer van cyclooxygenase met een remmer van NO- synthase, werden soortgelijke proeven uitgevoerd op geactiveerde muize-macrofagen.
Peritoneale macrofagen werden verkregen uit de peritoneale holte van vrouwelijke BBA/2 muizen met een leeftijd 7-8 weken, drie dagen na injectie van thioglyco-laat (3% 1,5 ml/muis). De macrofagen (2.105 cellen/putje) werden geactiveerd bij 37°C met LPS (E. coli: 0111B4) (0,1 jug/ml) en muize recombinant-INFy (100 U/ml) in putjes van een microplaat met 96 putjes gedurende 20 uur op RPMI 1640, 10% FBS, vervolgens gewassen en nogmaals gedurende 24 uur geïncubeerd. De cellen werden al dan niet in aanwezigheid van de verschillende verbindingen geïncubeerd en de nitriet-spiegels werden bepaald in de cultuurmedia zoals reeds is beschreven.
Het percentage van de variatie vergeleken met de controle is 56% voor de combinatie van indomethacine en L-NMMA (voorbeeld X), 32% voor de associatie van indomethacine en L-NMMA en minder dan 30% voor elke afzonderlijke verbinding.
Bovendien is het percentage 48% voor de combinatie van indomethacine en L-NAME (voorbeeld XV), 25% voor indomethacine en minder dan 15% voor L-NAME en de associatie.
8- In vitro effect op letaliteit opgewekt door NMDA (N-methvl-D-aspartaat)
Glutamaat en aspartaat zijn belangrijke neuro-excitotix mediatoren die betrokken zijn bij hersenische-mie. Hun werkingen worden in het bijzonder gemedieerd door de activering van NMDA-receptor. IV-injectie van een grote dosis NMDA wekte de mortaliteit op bij muizen in minder dan 35 seconden. Verbindingen die de periode tot doodgaan kunnen verlengen bij deze proef worden beschouwd als potentiële anti-ischemische verbindingen. Aangezien de effecten van glutamaat of aspartaat mogelijk gemedieerd worden door een overmatige afgifte van NO, werd deze proef gebruikt om de verbindingen te onderzoeken en om in vivo een onderscheid te maken tussen het effect van een combinatie en van een associatie van de afzonderlijke verbindingen.
Mannelijke OFl-muizen (20-22 g, Charles River) werden geïnjecteerd met 250 mg/kg NMDA (iv) 1 uur na toediening van de stoffen langs orale weg. De overlevings-tijd werd gemeten. De resultaten zijn samengevat in onderstaande tabel F. Uit de resultaten blijkt dat de combinatie veel actiever is dan de afzonderlijke verbindingen, alleen of in associatie. De resultaten duiden ook op een synergistisch effect voor de combinatie.
TABEL F
Figure NL9300001AD00231
9- In vivo effect op neuronale dood na focale hersenischemie bii muizen
Systemische intraperitoneale (ip) toediening van de verbindingen werd uitgevoerd 5 uur na corticaal infarct opgewekt door de occlusie van de middelste hersen-slagader bij mannelijke Zwitserse muizen (20-22 g), volgens Duver-ger et al. - Pharmacology of cerebrali schemia in Krie-glstein and Oberpichler. Wissenchaftliche Verslagsgesell-schaft, Stuttgart, 1990, 409-413. Vier dagen later werden de muizen onthoofd en werden hun hersenen verwijderd en ingevroren en vervolgens tot kransvormige plakjes met een dikte van 10 μια gesneden. Het infarct oppervlak werd gemeten door beeldanalyse. De vermindering van het door infarct getroffen volume werd gemeten en vergeleken met niet-behandelde dieren. Het percentage gaf de gemiddelde vermindering van het infarct van 6 dieren per groep aan. MK801, een NMDA antagonist, werd als een controlestof gebruikt. De verkregen resultaten zijn samengevat in tabel G.
TABEL G
Figure NL9300001AD00241
' » 10- In vivo effect op met endotoxine behandelde rat waarvan het ruqqemerq is dooraesneden
Zoals eerder vermeld, heeft de associatie van - een remmer van NO-synthase en een remmer van cyclooxygenase een synergistisch effect voor wat betreft het herstellen van de bloeddruk en de vasculaire reactiviteit bij endotoxische of septische dieren.
Bij mannelijke Sprague Dawley-ratten (lichaamsgewicht 280-320 g) werd het ruggemerg doorgesneden. 1 Uur daarna werd aan de dieren endotoxine (EDTX, Escherichia coli, lipopolysaccharide, 0 III, B4 = 300 Mg/kg/h) gedurende 60 minuten toegediend. Dit leidde tot een belangrijke hypotensie en een verlies aan vasculaire reactiviteit ten opzichte van vasopressormiddelen, zoals methoxamine.
Na 60 minuten perfusie van de dieren met endotoxine werd een dosis-responskromme op methoxamine geconstrueerd op cumulatieve wijze en werd een ED50-waarde (50% van de effectieve dosis voor het herstellen van normale activiteit op methoxamine) bepaald door regressie-analyse voor elk dier. De verkregen resultaten zijn in tabel H samengevat.
TABEL H
Figure NL9300001AD00251
Toxicologie
De produkten werden per os (p.o.) of via de intraperitoneale route (i.p.) toegediend, in groepen van 10 muizen met toenemende doses. De LD50 (50% letale doses) ligt tussen 100 en 1000 per os en tussen 150 en 500 i.p.
Posoloqie
De verbindingen volgens de uitvinding kunnen worden toegediend in een dosis van 1 tot 300 mg per dag.

Claims (8)

1. Verbinding met de algemene formule AB in de vorm van een zout of een amide, waarin: A een cyclooxygenase-remmer voorstelt met een toegankelijke zuurfunctie en met de algemene formule RCOOH waarbij COOH de toegankelijke zuurfunctie voorstelt en R de betreffende groep van de cyclooxygenase-remmer voorstelt, en B de L-vorm van arginine-analoga met de formule 1 voorstelt, waarin R2 een waterstofatoom of een methyl- of ethylgroep voorstelt, R2 een waterstofatoom of een nitrogroep voorstelt en R3 een amino-, methylamino-, ethylamino-, hydrazino-, methyl- of ethylgroep voorstelt, met dien verstande dat indien AB een zout is waarin R2 een waterstofatoom voorstelt, R3 dan niet een aminogroep voorstelt.
2. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de cyclooxygenase-remmer met de algemene formule RCOOH salicylzuur, acetylsalicylzuur, mefenamine-zuur, ibuprofen, indomethacine of sulindac is.
3. Verbinding volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat deze voorkomt in de vorm van een zout met de algemene formule 2, waarin R, Rlf R2 en R3 de in conclusie 1 of 2 gedefinieerde betekenissen hebben.
4. Verbinding volgens conclusie l of 2, met het kenmerk, dat deze voorkomt in de vorm van een amide met de algemene formule 3, waarin R, Rlf R2 en R3 de in conclusie 1 of 2 gedefinieerde betekenissen hebben.
5. Werkwijze voor de bereiding van verbindingen volgens conclusie 1, welke werkwijze omvat de reactie, in nagenoeg equimolaire hoeveelheden onder de geschikte - omstandigheden,:van een verbinding A of een voorloper daarvan waarin A de in conclusie 1 of 2 gedefinieerde betekenis heeft, met een verbinding B of een voorloper daarvan, waarin B de in conclusie 1 gedefinieerde betekenis heeft.
6. Werkwijze volgens conclusie 5, voor de bereiding van verbindingen in de vorm van een zout, met het kenmerk, dat de werkwijze omvat de reactie, in water of een mengsel van water en alcohol bij een temperatuur van kamertemperatuur tot het kookpunt van het reactiemengsel, van een verbinding met de algemene formule A of een voorloper daarvan waarbij A de in conclusie 1 of 2 gedefinieerde betekenis heeft, met een verbinding met de formule B of een voorloper daarvan waarbij B de in conclusie 1 gedefinieerde betekenis heeft.
7. Werkwijze volgens conclusie 5, voor de bereiding van verbindingen in de vorm van een amide, met het kenmerk, dat de werkwijze omvat de reactie van een verbinding met de algemene formule B of een voorloper daarvan, in acetonitril bij een temperatuur van 0°C tot kamertemperatuur in aanwezigheid van een base, met de voorloper van de verbinding A met de formule RCOX waarbij R de in conclusie 1 of 2 gedefinieerde betekenis heeft en X een halogeenatoom voorstelt.
8. Farmaceutisch preparaat dat een doeltreffende hoeveelheid van tenminste één verbinding volgens één der conclusies 1 tot 4, gemengd met een farmaceutisch aanvaardbaar verdunningsmiddel of drager omvat.
NL9300001A 1992-01-04 1993-01-04 Remmer van zowel NO-synthase als cyclooxygenase, werkwijzen voor de bereiding daarvan en therapeutisch preparaat dat deze omvat. NL194889C (nl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB929200114A GB9200114D0 (en) 1992-01-04 1992-01-04 Dual inhibitors of no synthase and cyclooxygenase
GB9200114 1992-01-04

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NL9300001A true NL9300001A (nl) 1993-08-02
NL194889B NL194889B (nl) 2003-02-03
NL194889C NL194889C (nl) 2003-06-04

Family

ID=10708115

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL9300001A NL194889C (nl) 1992-01-04 1993-01-04 Remmer van zowel NO-synthase als cyclooxygenase, werkwijzen voor de bereiding daarvan en therapeutisch preparaat dat deze omvat.

Country Status (34)

Country Link
US (2) US5480999A (nl)
JP (1) JP2984498B2 (nl)
KR (1) KR100287539B1 (nl)
AT (1) AT401054B (nl)
AU (1) AU664399B2 (nl)
BE (1) BE1006227A3 (nl)
CA (1) CA2085555C (nl)
CH (1) CH685629A5 (nl)
DE (1) DE4244539B4 (nl)
DK (1) DK157592A (nl)
DZ (1) DZ1657A1 (nl)
ES (1) ES2052452B1 (nl)
FI (1) FI925883A (nl)
FR (2) FR2685869B1 (nl)
GB (2) GB9200114D0 (nl)
GR (1) GR1001443B (nl)
HK (1) HK22296A (nl)
HU (1) HU220218B (nl)
IE (1) IE71675B1 (nl)
IT (1) IT1256761B (nl)
LU (1) LU88208A1 (nl)
MA (1) MA22753A1 (nl)
MY (1) MY109846A (nl)
NL (1) NL194889C (nl)
NO (1) NO302943B1 (nl)
NZ (1) NZ245499A (nl)
OA (1) OA10050A (nl)
PL (1) PL169432B1 (nl)
PT (1) PT101165B (nl)
RU (1) RU2104999C1 (nl)
SE (1) SE511568C2 (nl)
TN (1) TNSN93001A1 (nl)
TW (1) TW267152B (nl)
ZA (1) ZA9210080B (nl)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807886A (en) * 1994-05-07 1998-09-15 Astra Aktiebolag Bicyclic amidine dervatives as inhibitors of nitric oxide synthetase
AU704059B2 (en) * 1994-05-11 1999-04-15 Jes Olesen Use of no scavengers, inhibitors or antagonists in the treatment of migraine
US6066333A (en) * 1994-09-22 2000-05-23 William Harvey Research Limited Pharmaceutical control of inflammation
CA2132690A1 (en) * 1994-09-22 1996-03-23 Dean Willis Control and modulation of inflammatory response in humans in need of such control and modulation
FR2727111B1 (fr) * 1994-11-21 1997-01-17 Hoechst Lab Nouveaux analogues soufres d'aminoacides, leur procede de preparation et leurs applications comme medicaments
PT793646E (pt) 1994-11-23 2002-03-28 Biovitrum Ab Carboxilatos de aminoguanidina destinados ao tratamento de diabetes mellitus nao-insulinodependente
JPH08333258A (ja) 1994-12-14 1996-12-17 Japan Tobacco Inc チアジン又はチアゼピン誘導体及びそれら化合物を含有してなる一酸化窒素合成酵素阻害剤
ES2096524B1 (es) * 1994-12-22 1997-11-16 Sanchez Manuel Guerra Uso de la ng-monometil-l-arginina, para aumentar la capacidad de hacer ejercicio fisico.
FR2730930B1 (fr) 1995-02-27 1997-04-04 Oreal Utilisation d'inhibiteurs de no-synthase pour diminuer l'effet irritant cutane de produits utilises dans le domaine cosmetique ou pharmaceutique
GB9504350D0 (en) * 1995-03-04 1995-04-26 Sod Conseils Rech Applic Arginine derivatives
US5703073A (en) * 1995-04-19 1997-12-30 Nitromed, Inc. Compositions and methods to prevent toxicity induced by nonsteroidal antiinflammatory drugs
GB9514518D0 (en) * 1995-07-15 1995-09-13 Sod Conseils Rech Applic Guanidine salt inhibitors of NO synthase and cyclooxygenase
JP2000506852A (ja) * 1996-03-05 2000-06-06 チルドレンズ ホスピタル メディカル センター シクロオキシゲナーゼの阻害剤としてのメルカプト誘導体
US5955617A (en) * 1996-05-21 1999-09-21 Pharmacia & Upjohn Company Aminoguanidine carboxylate lactams for the treatment of non-insulin-dependent diabetes mellitus
US5872145A (en) * 1996-08-16 1999-02-16 Pozen, Inc. Formulation of 5-HT agonist and NSAID for treatment of migraine
US8022095B2 (en) * 1996-08-16 2011-09-20 Pozen, Inc. Methods of treating headaches using 5-HT agonists in combination with long-acting NSAIDs
US6586458B1 (en) 1996-08-16 2003-07-01 Pozen Inc. Methods of treating headaches using 5-HT agonists in combination with long-acting NSAIDs
US5789395A (en) * 1996-08-30 1998-08-04 The Research Foundation Of State University Of New York Method of using tetracycline compounds for inhibition of endogenous nitric oxide production
IT1288123B1 (it) * 1996-09-04 1998-09-10 Nicox Sa Uso di nitroderivati per l'incontinenza urinaria
US6066092A (en) * 1997-11-06 2000-05-23 Cady; Roger K. Preemptive prophylaxis of migraine device and method
IT1301966B1 (it) 1998-07-30 2000-07-20 Zambon Spa Composizioni farmaceutiche ad attivita' analgesica
US6207700B1 (en) * 1999-01-07 2001-03-27 Vanderbilt University Amide derivatives for antiangiogenic and/or antitumorigenic use
US7345051B2 (en) * 2000-01-31 2008-03-18 Genaera Corporation Mucin synthesis inhibitors
AU2001234671B2 (en) * 2000-01-31 2006-05-18 Genaera Corporation Mucin synthesis inhibitors
AU2003247792B2 (en) * 2002-07-03 2009-09-24 Nicox S.A. Nitrosated nonsteroidal antiinflammatory compounds, compositions and methods of use
CA2493156A1 (en) * 2002-07-29 2004-02-05 Nitromed, Inc. Cyclooxygenase-2 selective inhibitors, compositions and methods of use
US7332183B2 (en) * 2002-12-26 2008-02-19 Pozen Inc. Multilayer dosage forms containing NSAIDs and triptans
WO2004110492A2 (en) * 2003-06-06 2004-12-23 Glaxo Group Limited Composition comprising triptans and nsaids
CN1835942A (zh) * 2003-06-19 2006-09-20 金纳莱公司 粘蛋白合成抑制剂
CA2530408A1 (en) * 2003-06-25 2005-01-06 Vanderbilt University Cox-2-targeted imaging agents
JP2007534702A (ja) * 2004-04-26 2007-11-29 バンダービルト・ユニバーシティ 胃腸毒性の低い治療薬としてのインドール酢酸、及びインデン酢酸誘導体
AU2006204523A1 (en) * 2005-01-04 2006-07-13 Novartis Ag X-ray structure of human FPPS and use for selecting FPPS binding compounds
CN101528222A (zh) * 2006-06-19 2009-09-09 范德比尔特大学 用于诊断性和治疗性靶向cox-2的方法和组合物
WO2013059245A1 (en) 2011-10-17 2013-04-25 Vanderbilt University Indomethacin analogs for the treatment of castrate-resistant prostate cancer
TWM469254U (zh) 2013-08-29 2014-01-01 J D Components Co Ltd 自行車之三件式豎管

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR6838M (nl) * 1967-12-08 1969-03-31
ES423794A1 (es) * 1974-03-01 1976-05-01 Medicinales S A Promesa Prod Procediemiento de obtencion de una nueva sal soluble de acido acetilsalicilico.
FR2320759A1 (fr) * 1975-08-11 1977-03-11 Union Pharma Scient Appl Solution d'acide acetylsalicylique extemporanee injectable
IT1127274B (it) * 1979-12-04 1986-05-21 Selvi & C Spa Sali dell'acido 5-fluoro-2-metil-1-(p-(metilsulfinil)-benzilidene)-indene-3-acetico
JPS5781409A (en) * 1980-11-10 1982-05-21 Toko Yakuhin Kogyo Kk External plaster
CA1213888A (en) * 1983-09-28 1986-11-12 Warner-Lambert Company L-arginine isoxicamate
US5081184A (en) * 1985-08-02 1992-01-14 General Electric Company Solvent-resistant, compatible blends of polyphenylene ethers and linear polyesters
JPS6393718A (ja) * 1986-10-07 1988-04-25 Green Cross Corp:The 注射剤
US5059712A (en) * 1989-09-13 1991-10-22 Cornell Research Foundation, Inc. Isolating aminoarginine and use to block nitric oxide formation in body
US5028627A (en) * 1989-09-13 1991-07-02 Cornell Research Foundation, Inc. Method of using arginine derivatives to inhibit systemic hypotension associated with nitric oxide production or endothelial derived relaxing factor
DK0424028T3 (da) * 1989-10-17 1996-01-29 Merck & Co Inc S(+)-ibuprofen-L-aminosyre og S(+)-ibuprofen-D-aminosyre som et forbedret smertestillende middel med fremskyndet indtrædelse
GB8929076D0 (en) * 1989-12-22 1990-02-28 Scras Treatment of shock by blocking agents of edrf effect or formation
US5468476A (en) * 1994-03-16 1995-11-21 Ahluwalia; Gurpreet S. Reduction of hair growth

Also Published As

Publication number Publication date
ITMI922953A1 (it) 1994-06-23
AU3049892A (en) 1993-07-08
PT101165A (pt) 1994-02-28
IE922954A1 (en) 1993-07-14
US5480999A (en) 1996-01-02
ES2052452B1 (es) 1995-02-01
CH685629A5 (fr) 1995-08-31
ATA256092A (de) 1995-10-15
DK157592A (da) 1993-07-05
HK22296A (en) 1996-02-16
JP2984498B2 (ja) 1999-11-29
NL194889C (nl) 2003-06-04
BE1006227A3 (fr) 1994-06-14
JPH05286916A (ja) 1993-11-02
HU220218B (hu) 2001-11-28
ES2052452A1 (es) 1994-07-01
GB9200114D0 (en) 1992-02-26
GB9227026D0 (en) 1993-02-17
NO302943B1 (no) 1998-05-11
FR2685869B1 (fr) 1995-06-09
AT401054B (de) 1996-06-25
NZ245499A (en) 1995-07-26
HUT64047A (en) 1993-11-29
ZA9210080B (en) 1993-08-02
PT101165B (pt) 1999-09-30
US5360925A (en) 1994-11-01
DE4244539A1 (nl) 1993-07-08
NO924835L (no) 1993-07-05
GB2263111B (en) 1995-08-16
GB2263111A (en) 1993-07-14
IE71675B1 (en) 1997-02-26
FI925883A0 (fi) 1992-12-28
SE9203825L (sv) 1993-07-05
MA22753A1 (fr) 1993-07-01
FR2685869A1 (fr) 1993-07-09
LU88208A1 (fr) 1993-04-15
TW267152B (nl) 1996-01-01
TNSN93001A1 (fr) 1994-03-17
FR2685916A1 (fr) 1993-07-09
KR930016389A (ko) 1993-08-26
AU664399B2 (en) 1995-11-16
DE4244539B4 (de) 2006-10-26
HU9204173D0 (en) 1993-04-28
DK157592D0 (da) 1992-12-30
FI925883A (fi) 1993-07-05
NL194889B (nl) 2003-02-03
KR100287539B1 (ko) 2001-04-16
OA10050A (fr) 1996-10-14
GR1001443B (el) 1993-12-30
NO924835D0 (no) 1992-12-14
SE511568C2 (sv) 1999-10-18
PL297247A1 (en) 1993-09-06
PL169432B1 (pl) 1996-07-31
SE9203825D0 (sv) 1992-12-18
DZ1657A1 (fr) 2002-02-17
FR2685916B1 (fr) 2001-09-28
CA2085555C (en) 2004-07-20
RU2104999C1 (ru) 1998-02-20
CA2085555A1 (en) 1993-07-05
MY109846A (en) 1997-08-30
IT1256761B (it) 1995-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NL9300001A (nl) Remmers van zowel no-synthase als cyclooxygenase, werkwijze voor de bereiding ervan en therapeutische preparaten die ze bevatten.
US6040341A (en) Compounds and their compositions having anti-inflammatory and anti-thrombotic activities
EP2057139B1 (en) Hydrogen sulfide derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs
JPH09512798A (ja) 消炎、鎮痛および抗血栓活性を有するニトロ化合物およびそれらの組成物
RU2167856C2 (ru) Соли производных амидина и ингибитора циклооксигеназы, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе
RU2482109C2 (ru) Производные диоксоантрацен сульфоната
SU563912A3 (ru) Способ получени амидов моноаминотрийодизофталевой кислоты
PT95166A (pt) Processo para a preparacao de derivados fosfolipidicos e de composicoes que os contem
FR2505330A1 (fr) Nouvelle substance carcinostatique a base d'un derive de n-(4-(3-aminopropyl) aminobutyl)-2-((s)-7-guanidino-3-hydroxyhaptanamido)-2-hydroxyethanamide et son procede de preparation
JPS6117828B2 (nl)
CA2447184A1 (fr) Derives de 5-cyano-1h-indole antagonistes des recepteurs de l'interleukine-8
WO2006072783A1 (en) Sulfasalazine analogues as nf-kb inhibitors
RU2657803C1 (ru) Средство, обладающее противовоспалительным и анальгезирующим действием
US4338331A (en) Isoindoline derivative and a therapeutic composition thereof
JPH10158225A (ja) ウイルス産生阻害剤

Legal Events

Date Code Title Description
BV The patent application has lapsed
BA A request for search or an international-type search has been filed
BB A search report has been drawn up
BC A request for examination has been filed
V1 Lapsed because of non-payment of the annual fee

Effective date: 20090801