NL7905979A - Streptomyces- metaboliet. - Google Patents
Streptomyces- metaboliet. Download PDFInfo
- Publication number
- NL7905979A NL7905979A NL7905979A NL7905979A NL7905979A NL 7905979 A NL7905979 A NL 7905979A NL 7905979 A NL7905979 A NL 7905979A NL 7905979 A NL7905979 A NL 7905979A NL 7905979 A NL7905979 A NL 7905979A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- thin
- days
- slightly
- velvety
- fawn
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/20—Reduction of greenhouse gas [GHG] emissions in agriculture, e.g. CO2
- Y02P60/22—Methane [CH4], e.g. from rice paddies
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
* f ..
# * « t . *
Imperial Chemical Industries Limited, te Londen, Groot-Brittannië.
Streptomyces-metaholiet.
De uitvinding heeft betrekking op een metaboliet, M. 139.6Q3, verkrijgbaar uit de aerobe cultuur van Streptomyces longisporoflavus, welk metaboliet blijkbaar een nieuwe verbinding is met de formule CocHc_0oNa. M. 139.603 is een natriumzout en de uitvin-5 ding heeft eveneens betrekking op het overeenkomstige "vrije zuur" en andere alkalimetaalzouten, die daaruit kunnen worden bereid. De verbindingen kunnen de hoeveelheid methaan, gevormd door herkauwingsfermentatie, verminderen en de hoeveelheid propionzuur in runderpensvloeistof vergroten en worden daarom aangenomen groeibevorderende eigenschappen te 10 bezitten bij herkauwers, waarbij het bekend is dat andere chemische verbindingen, die de hoeveelheid propionzuur in pensvloeistof vergroten, resulteren in grotere groeisnelheden wanneer zij worden, gevoerd aan (rund)vee of schapen. De nieuwe verbindingen volgens de uiteLnding bezitten eveneens een antibacteriele activiteit tegen gram-positieve 15 organismen en een anti-coccidiciale activiteit tegen Eimeria tenella bij in vitro proeven.
. Volgens de uitvinding wordt voorzien in de ver binding M. 139.603, die de volgende eigenschappen bezit: (a) moleculaire formule C^H^OgNa, zoals blijkt uit massaspectrometrie, 20 die een moleculair ion, M , met een massa van 624,361 vertoont (berekend voor C_cH.-o0oNa = 624,364), en door elementair analyse: C = 67,5, H ** 8,8 % (berekend voor CggHggOg.Na: C = 67,3, ïï = 8,5 %); (b) infraroodspectrum in nujol muil, zoals aangegeven in figuur 1, bevattende karakteristidce absorpties bij 3300, 1725, 1645, 1565 en 915 cm *; 25 (c) protonmagnetisch resonantiespectrum in deuteriochloroform, zoals aangegeven in figuur 2; (d) ultraviolet spectrum in ethanoloplossing vertoont karakteristieke absorpties bij 234 nm (ε = 12900) en 272 nm (ε = 10800); (e) smeltpunt 176-178°C; 30 (f) / a_7^ = -82° (c «* 0,2 in methanol); 7905979 * * 2 en de overeenkomstige "vrije zuur"vorm daarvan met de moleculaire formule C^H^Og, gekarakteriseerd door Rf = 0,55 (hij benadering) bij dunnelaag-chromatografie op silicagel (Merck's "Kieselgel 60F-254" - handelsmerk), dikte 0,25 mm, ontwikkeld met een mengsel. van diethylether, methanol en 5 mierezuur in een volumèverhouding van 95:4:1; UV in ethanol 274 nm (ε “ 13900), breed; en andere alkalimetaalzouten, die daaruit kunnen worden afgeleid.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt voorzien in een werkwijze ter bereiding van de bovengenoemde verbindingen 10 volgens de uitvinding, hierdoor gekenmerkt, dat men een M.139.603-vor-mende stam van Streptomyces longisporoflavus of een Μ. 139.603-vormende variant of mutant daarvan kweekt in een waterig voedingsmedium, bevattende een bron van assimileerbare koolstof, onder schudden en onder aerobe omstandigheden bij een temperatuur tussen 22 en 32°C, het aldus 15 verkregen fermentatiemengsel extraheert met een met water onmengbaar organisch oplosmiddel onder toepassing van gebruikelijke middelen en het oplosmiddel verdampt, waarna desgewenst het natriumzout, M. 139.603, kan worden omgezet in het "vrije zuur" en het "vrije zuur" kan worden omgezet in andere alkalimetaalzouten onder toepassing van gebruikelijke 20 methodes.
Een geschikte Μ. 139.603-vormende stam van S. longisporoflavus is die welke wordt aangeduid als NCIB 11426, die zonder beperking beschikbaar wordt gesteld door de National Collection of Industrial Bacteria, Ministry of Agriculture, Fisheries 25 and Food, Torry Research, Station, 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 8DG, Schotland, en die op de volgende wijze'wordt beschreven: / De gebruikte media worden bereid volgens de recepten voor de "International Streptomyces Project" (ISP) en zijn als beschreven door 30 Shirling, E.G. en Gottlieb D (International
Journal of Systematic Bacteriology, J_6, (3), 313-340 (1966) J.
Kweekomstandighedèn- ongeveer 25°C, daglicht.
ISP1 Tryptongist (maar met toegevoegde agar).
35 5 Dagen - Dun, enigszins vochtig, fluweelachtig, licht reebruin.
7905979 * 3 f - Achterzijde ongekleurd.
13 dagen - dun fluweelachtig - enigszins korrelvormig , licht reebruin.
- Achterzijde ongekleurd.
5 ISP2 Gis textract/moutextractagar.
5 dagen - dun, fluweelachtig, licht grijs.
- Achterzijde - zeer lichtgeel tot reebruin 13 dagen - fraai, verhoogd en gerimpeld, fluweel-10 achtig, licht geel/bruin/grijs.
- Achterzijde - reebruin.
ISP3 Havermeelagar..
5 dagen - spaarzaam tot dun, fluweelachtig, licht geel/grijs 15 - Achterzijde niet zichtbaar.
13 dagen - Dun, enigszins verhoogd, fluweelachtig, licht grijs.
- Achterzijde niet zichtbaar.
ISP4 Anorganische zouten-uitgangsagar.
20 5 dagen - dun, licht reebruin, enigszins korrel vormig.
- Achterzijde ongekleurd.
J3 dagen - dun, enigszins vochtig, reebruin.
- Achterzijde meer of minder ongekleurd.
25 ISP5 Glycerol-asparagine-agar.
5 dagen - dun, enigszins korrelvormig, licht reebruin.
- Achterzijde - ongekleurd.
13 dagen - dun, fluweelachtig, licht grijs.
30 - Achterzijde - ongekleurd.
ISP7 Tyrosine-agar.
5 dagen - spaarzaam tot dun, enigszins korrelvormig, fluweelachtig, licht reebruin/ grijs.
35 - Achterzijde ongekleurd.
790 59 79 4 β 13 dagen - dun, fluweelachtig, enigszins verhoogd, reebruin.
- Achterzijde - reebruin-grijs
Op ISP7, bij veroudering, wordt de cultuur in het 5 algemeen meer roodachtig reebruin, maar vertoont deze enkele gebieden met een meer donkere kleuring, die verband houdt met een zwaardere sporulatie.
ISP9 - Koolstofverbruik agar.
Score 10 15 dagen - Geen koolstof - zeer spaarzaam, submers - - Glucose - dun/fraai, fluweelachtig, reebruin + - Arabinose - spaarzaam _+ 15 - Fructose - dun, fluweelachtig, reebruin + - Inositol - zeer spaarzaam - Mannitol - dun- fluweelachtig + 20 - Raffinose - zeer spaarzaam - Rhamnose - spaarzaam +_ - Xylose - spaarzaam +_
Algemeen.
Geen melaminen worden gevormd.
25 Geen achterzijde-pigmenten worden gevormd.
Geen oplosbare pigmenten worden gevormd.
Sporen worden gedragen in open en stevige spiralen, dikwijls gescheitfen van de hoofdas door een rechtere ondersteunende "hypha" of misschien keten van sporen. De sporen zelf zijn moeilijk te 30 zien via normale microscopie omdat zij zeer dicht aan elkaar hechten.
De spore-wanden (E.M. op een 4 %’s uranylacetaat-preparaat) zijn glad.
Deze stam van S. longisporoflavus wordt eveneens zonder enige beperking beschikbaar gesteld door het Centraal Bureau voor Schimmelcultures, P.O. Box 273m Oosterstraat lm 3740 AG Baam, Nederland, 35 onder referentienummer CBS 312.79.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt 7905978 5 voorzien in Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 en M.139.603-vormende varianten en mutanten daarvan.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt voorzien in het fermentatiemengsel, dat verkregen wordt door kweken van 5 een M. 139.603-vormende stam van Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 of een M. 139.603-vormende variant of mutant daarvan.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt voorzien in een extract, dat wordt verkregen door kweken van een M. 139.603-vormende stam van Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 of 10 een M. 139.603-vormen é. variant of mutant daarvan, zoals hierboven beschreven, en extraheren van het fermentatiemengsel met met water onmeng-baar organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld ethylacetaat.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt voorzien in de verbinding M. 139.603, indien gevormd door de cultuur van 15 Streptony ces longisporoflavus NCIB 11426 of een variant of mutant daar van, zoals hierboven beschreven, of door een voor de hand liggen dequi-valent daarvan.
Het "vrije zuur", overeenkomende met het natrium-zout M. 139.603, kan worden verkregen door aanzuren van een oplossing 20 van M. 139.603 en extraheren van de zure oplossing met een met water on- mengbaar organisch oplosmiddel en andere alkalimetaalzouten kunnen worden verkregen door behandeling van een oplossing van het "vrije zuur" met een geschikt alkalimetaalhydroxyde, bijvoorbeeld lithiumhydroxyde, kaliumhydroxyde, cesiumhydroxyde of rubidiumhydroxyde. Indien natrium-25 hydroxyde wordt gebruikt wordt weer Μ. 139.603 gevormd, waaruit blijkt dat geen structurele verandering plaats vindt bij deze reacties.
Zoals hierboven werd vermeld vertonen de verbindingen het effect van het vergroten van de hoeveelheid propionzuur in pensvloeistof en in het bijzonder van het vergroten van de hoeveelheid 30 propionzuur ten koste van methaan en/of azijnzuur. Dit is bekend een wenselijk effect te zijn bij de voeding van herkauwers omdat propionzuur een veel meer doeltreffende precursor is van glucose, waaraan het dier zijn energie en groei ontleent, dan azijnzuur; terwijl het gedeelte van de door het dier opgenomen voeding, dat wordt omgezet in methaan, eenvou-35 dig verloren gaat voor het dier, waarbij het methaan wordt uitgescheiden door oprisping (boeren). De modificatie van het pens-metabolisme, bewerk- 7905979 c 6 stelligd door de verbindingen volgens de uitvinding, is dus een in hoge mate bruikbaar effect en dit wordt aangenomen de groeisnelheid en het voeromzettingsrendement van herkauwende dieren te vergroten.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt 5 daarom voorzien in een werkwijze ter toepassing in de veetesLt van herkauwende dieren ter vergroting van hun groeisnelheid en/of ter vergroting van het voeromzettingsrendement, hierdoor gekenmerkt, dat men aan de dieren oraal een verbinding, fermentatieprodukt of extract volgens de uitvinding als hierboven beschreven toedient.
10 Bij de werkwijze volgens de uitvinding worden de verbindingen volgens de uitvinding bij voorkeur oraal aan de dieren toegediend als een supplement van hun normale dieet, dat wil zeggen in een mengsel met gewone vaste voedingsstof, in voerblokken of zout-lik-stukken, opgelost in het drinkwater, of, voor jonge dieren, zoals 15 lammeren of kalveren, opgelost in volle melk of afgeroomde melk. De verbindingen volgens de uitvinding worden opgenomen in voer, voerblokken, zout-likstukken, drinkwater, volle melk of taptemelk in een zodanige hoeveelheid, dat elk behandeld dier 0,01 mg/kg lichaamsgewicht tot 30 mg/kg lichaamsgewicht per dag en bij voorkeur 0,01 mg/kg tot 10 mg/kg per dag 20 van een verbinding volgens de uitvinding zal ingesteren.
De verbindingen volgens de uitvinding kunnen anderzijds oraal aan dieren worden toegediend in de vorm van een intra-her-kauwingspellet of -bolus met langzame afgifte, zodat het dier een analoge hoeveelheid per dag van de verbindingen volgens de uitvinding zal 25 absorberen.
De dieren kunnen de verbindingen volgens de uitvinding gedurende nagenoeg hun gehele groeiperiode of gedurende slechts een gedeelte van hun groeiperiode, bijvoorbeeld gedurende het begin-gedeelte en/of gedurende de periode, die resulteert in de slacht, ont-30 vangen. De vergroting van de groeisnelheid, verkregen door toepassing van de werkwijze volgens de uitvinding, maakt het mogelijk de voor de vleesproduktie gefokte dieren in een kortere groeiperiode dan normaal op het marktgewicht of slachtgewicht te brengen of maakt het mogelijk zwaardere dieren te verkrijgen aan het eind van de normale, groeiperiode. 35 Het verbeterde voeromzettingsrendement, verkregen bij tclassing van de werkwijze volgens de uitvinding, maakt het mogelijk dat de behandelde 7905979 it 7 Ύ dieren een willekeurig gewenst gewicht bereiken terwijl deze minder voer verbruiken dan tot het zelfde gewicht gegroeide onbehandelde dieren.
Bij optimale groeibevorderende opnemingshoeveelheden worden geen aanwijzingen voor enig toxisch effect als gevolg van de verbindingen volgens 5 de uitvinding waargenomen.
Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt voorzien in een preparaat, dat een verbinding, fermentatieprodukt of extract volgens de uitvinding, samen met een vast of vloeibaar, eetbaar niet-toxisch verdunningsmiddel of dragermateriaal bevat.
10 Een geschikt vloeibaar verdunningsmiddel of dra germateriaal is bijvoorbeeld drinkwater, volle melk of taptemelk.
Een geschikt vast eetbaar niet-toxisch verdunningsmiddel of dragermateriaal kan bijvoorbeeld zijn een gebruikelijk voor wat betreft de voedingsmiddelen uitgebalanceerd herkauwers voer, 15 bijvoorbeeld een typisch runder- of schapendieet, bestaande uit graan- produkten, zoals gerstmeel, maïsmeel of tarwevoer, noten- en zaadproduk-ten, zoals gepelde gemalen notenkoek of katoenzaadkoek, of geëxtraheerde katoenzaadkoek, samen met kleine hoeveelheden van bijvoorbeeld veder-meel, zeewiermeel, beendermeel, beenderbloem, kalk, zout, ureum, 20 melasses, vitaminen en sporen-mineralen, of kan bijvoorbeeld zijn een inert vast verdunningsmiddel of dragermateriaal zonder energie-waarde, bijvoorbeeld kaolien, talk, calciumcarbonaat, vollersaarde, attapulgus-klei, gemalen oesterschelpen of gemalen kalksteen, of kan bijvoorbeeld zijn zetmeel of lactose.
25 Het preparaat volgens de uitvinding kan in de vorm zijn van een gesupplementeerd voer voor de directe voeding aan de dieren, in welk geval het 5-3000 dpm van de verbinding volgens de uitvinding in een mengsel met een gebruikelijk herkauwersvoer zal bevatten, of in de vorm zijn van een geconcentreerd voormengsel voor de verdunning met 30 een gebruikelijk herkauwersvoer onder vorming van een gesupplementeerd voer dat geschikt is voor de directe voeding, en een dergelijk voormengsel zal 0,3-50 gew.% van de verbinding volgens de uitvinding in een mengsel met een gebruikelijk, voor wat betreft de voedingsstoffen uitgebalanceerd herkauwersvoer, een inert vast verdunningsmiddel zonder 35 energie-waarde, bijvoorbeeld gemalen kalksteen of zetmeel of lactose bevatten.
790 59 79 8 - «
In alle hierboven beschreven preparaten volgens de uitvinding kan de verbinding volgens de uitvinding natuurlijk worden vervangen door het fermentatiemengsel volgens de uitvinding of een extract volgens de uitvinding, bevattende een equivalente hoeveelheid M. 139.603.
5 Volgens een verder aspect van de uitvinding wordt voorzien in een werkwijze ter bereiding van een vast preparaat volgens de uitvinding, hierdoor gekenmerkt, dat men een verbinding, fermentatiemengsel of extract volgens de uitvinding mengt met een vast, eetbaar, niet-toxisch verdunningsmiddel of dragermateriaal.
10 De verbinding volgens, (feuitvinding wordt bij voor keur serie-gewijze verdund met het verdunningsmiddel of dragermateriaal in twee of meer achtereenvolgende trappen teneinde een gelijkmatige menging te bewerkstelligen.
Zoals hierboven werd vermeld bezitten de verbin-15 dingen volgens de uitvinding eveneens een anti-coccidiciale activiteit.
Dit kan worden aangetoond door een weefselcultuurproef in kippennier-cellen, geïnoculeerd met"sporozoïten van Eimeria tenella, volgens de standaardproef-procedure, beschreven in Journal of Parasitology, vol. 58, 664-668 (1972). Bij deze proef voorkomt N.139.603 de groei van 20 de sporozoïten bij een concentratie van of minder dan 0,001 delen per miljoen en vertoont het pas: toxische effecten op de gastheercellen bij een concentratie van of meer dan 0,33 delen per miljoen.
De verbinding M. 139.603 bezit eveneens gramr positieve antibacteriële eigenschappen en is bij wijze van voorbeeld 25 gebleken de groei te voorkomen van Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Clostridium welchii en Corynebacterium acne bij een concentratie van of minder dan lO^ug per ml en kan daarom worden gebruikt als groeibevorderend middel bij niet-herkauwende dieren, bijvoorbeeld gevogelte en varkens:.
3Q De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet beperkt door de volgende voorbeelden.
Voorbeeld I
Streptomyces species NGIB 11426 liet men groeien in een Erlenmeyer-kolf van 500 ml op trypton-gist-agar, bevattende 35 Trypton - "Oxoid" L42 (handelsmerk) 0,5 % g/v
Gistextract - "Oxoid" L21 (handelsmerk) 0,3 % g/v, 790 59 79 τ 9 dat van te voren was gesteriliseerd door behandeling in een autoclaaf gedurende 20 minuten bij normale druk. De pH van het medium was ongeveer 7,0. De kolf werd bij 25°C gedurende 120 uren op een roterend schud-apparaat geschud.
5 De inhoud van de kolf werd vervolgens gebruikt voor de inoculatie van nog tien analoge kolven, die elk 200 ml van het volgende medium bevatten: glucose-stroop 3,0 % g/v calciumcarbonaat 0,25% g/v 10 natriumchloride 0,5 % g/v magnesiumsulfaat-heptahydraat 0,05% g/v sporenelementen-concentraat 0,1 % v/v bacteriologisch pepton ("Oxoid" L37 - handelsmerk) 0,1 % g/v 15 runderextractpoeder ("Oxoid" L29, "Lab Lemco" - handelsmerk) 0,5 % g/v gedeïoniseerd water tot 100
De pH werd ingesteld op 7,2 en het medium werd voorgesteriliseerd door 20 behandeling in een autoclaaf bij 120°C gedurende 20 minuten. De geïnocu-leerde kolven werden bij 25°C gedurende 120 uren op een roterend schud-apparaat geschud en de inhoud van de kolven werd vervolgens gecombineerd en ingesteld op een pH van 3 door voorzichtige toevoeging van 0,1 N.
f chloorwaterstofzuur. Het medium werd geëxtraheerd met ethylacetaat (2 x 25 600 ml), de extracten werden gecombineerd en gedroogd boven natrium- sulfaat en het oplosmiddel werd afgedampt, waarbij een olie-achtig residu (290 mg) werd verkregen.
Het ethylacetaatextract werd gezuiverd door pre-paratieve laagchromatografie op twee silicaplaten (MerckTs "Kieselgel" 30 60F-254- handelsmerk, 20 x 20 cm, 2 mm dik) onder gebruikmaking van ethylacetaat als elueermiddel. De band bij Rf = 0,39 (bij benadering) werd van de platen geschrapt en geëxtraheerd met ethylacetaat en het oplosmiddel werd af gedampt, waarbij een viskeuze gom (21 mg) werd verkregen, die een in vitro antibacteriële activiteit tegen S. aureus 35 bleek te vertonen. Deze actieve fractie werd verder gezuiverd door preparatieve laagchromatografie op één silicagelplaat (Merck's "Kiesel- 790 5979 Γ 10 gel" 60F-254, 20 χ 20· cm, 0,25 mm dik) onder gebruikmaking van een mengsel diethylether, methanol en mierezuur in een volumeverhouding van respectievelijk 95:4:1. De band bij Rf = 0,55 (bij benadering) werd van de plaat geschrapt en geëxtraheerd met ethylacetaat, waarbij na de af-5 damping van het oplosmiddel een viskeuze gom (9 mg) werd verkregen. De gom werd omgezet in een natriumzout, M. 139.603, door schudden van een chloroformoplossing met een oplossing van natriumhydroxyde (0,1 M). De chloroformlaag werd afgescheiden en gedroogd boven natriumsulfaat en het oplosmiddel werd afgedampt, waarbij M. 139.603 werd verkregen als een 10 witte vaste stof (8 mg), smeltpunt = 129-I32°C, waarvan het infrarood-spectrum (figuur 1) de volgende maxima vertoonde, namelijk 3300, 1725, 1645, 1565 en 915 cm *. Elementair-analyse: gevonden C = 67,5, H = 8,8 %; berekend voor C^H^OgNa:. C = 67,3, H = 8,5 %. Massaspectrum: M+ = 624.361, berekend voor C^H^OgNa = 624.364. Rf = 0,39 (dunnelaag-15 chromatografie op Merck’s 60F-254, 0,25 mm platen, ontwikkeld met ethylacetaat, zichtbaar gemaakt als een bruine vlek na besproeiing met 3N. zwavelzuur en verhitting op lOOoC. Het protonmagnetische resonantie-spectrum in deuteriochloroform is weergegeven in figuur 2.
Voorbeeld II
20
Het vermogen van M.139.603 de vorming van methaan in de pens van herkauwende dieren te remmen en de hoeveöheid propionaat te vergroten ten koste van acetaat (Ac/Pr) in de gevormde vluchtige vetzuren (VFA) wordt op de volgende wijze aangetoond.
Pensvloeistof wordt verzameld op regelmatige 25 routinebasis uit twee jonge ossen (stieren), die worden gevoed op hetzelfde hooi-plus-concentraat-dieet. De monstertrekkingstijd wordt zoveel mogelijk gestandaardiseerd en de vloeistof uit de twee dieren wordt gecombineerd op een 50/50 basis. Grote deeltjesvormige materialen worden verwijderd door filtratie van de verzamelde vloeistof door vier lagen 3Q mousseline-doek. Het filtraat wordt vervolgens verdund in een verhouding van 1 volume filtraat per 3 volumina van een kunstmatige pensvloeistof (bereid zoals beschreven door G.L. Bales c.s., Journal of Diary Science, vol. 59, 1850 (1976), maar onder weglating van azijnzuur) en de pH van het mengsel wordt met verzadigde waterige natriumcarbonaatoplossing inge-35 steld op 6,9-7,0. Monsters (50ml) van dit mengsel worden gebracht in conische kolven van 100 ml, bevattende gedroogde gemalen hooi (0,5 g), 7905979 * 11 en elke kolf wordt gebruikt voor het onderzoeken van een proefverbin-ding bij een speciale concentratie.
De proef verbinding wordt aan de conische kolf toegevoegd als een oplossing in ethanol, de kolf wordt gespoeld met kool-5 dioxydegas, afgesloten met een ,,suba,,-afdichting en geïncubeerd bij 39°C gedurende 15-16 uren. Na 1 uur wordt een naald met een nauwe boring door de suba-afdichting gestoken teneinde de gasdruk op te heffen en de naald wordt 30 minuten voordat de incubatie wordt beëindigd verwijderd.
De fermentatie wordt vervolgens stopgezet door de kolf in ijs te plaat-10 sen en na 15 minuten koeling wordt het gas boven de vloeistof door gaschromatografie geanalyseerd op methaan. De inhoud van de kolf wordt vervolgens afgefiltreerd, «bor een van te voren gedroogde gesinterde glastrechter. Drie monsters van het filtraat worden door gaschromatografie geanalyseerd op vluchtige vetzuren (VFAs) en door vergelijking met 15 de van te voren bepaalde voorincubatie-hoeveelhei d van VFAs wordt de hoeveelheid VFAs (acetaat en propionaat), gevormd gedurende de incubatie, bepaald.
De hieronder aangegeven resultaten werden verkregen, uitgedrukt als percentage van de controle-waarden, verkregen wan-20 neer geen proefverbinding werd gebruikt. Monensine, een bekend groei-bevorderend middel, dat werkt door een effect op de pens, is opgenomen als een positieve controle.
Verbinding Concentratie Methaan - Acetaat/propionaat- ug per ml % t.o.v. verhouding % t.o.v.
25 _controle_controle__ M. 139.603 1,0 58 62 0,3 72 64 0,1 87 70
Monensine 1,0 67 79 3Q 0,3 90 87 0,1 100 95 7905979 12
Voorbeeld III
Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 liet men groeien als schuine cultures op ISP-7 agar (45 ml) gedurende 7 dagen bij 30°C. Drie van dergelijke schuine cultures werden afzonderlijk 5 geschrapt in drie kolven met 100 ml steriel water en de aldus verkre gen suspensies werden gebruikt voor de inoculatie van drie kolven van 2 liter, elk bevattende 1 liter van het volgende medium: glycerol 3,0 % g/v bacteriologisch peton 10 ("Oxoid" L-37-handelsmerk) 2,0 % g/v KH2P04 0,024% g/v
MgS04.7H20 0,02 % g/v sporenelementen-concentraat 0,1 % v/v kalk 0,1 % g/v 15 gedeïoniseerd water tot 1 liter, dat van te voren was gesteriliseerd door behandeling in een autoclaaf onder normale druk gedurende 0,5 uur, waarbij de pH ongeveer 6,7 bedraagt.
De aldus bereide drie kolven van 2 liter werden gedurende 3 dagen bij 30°C op een rote send schudapparaat geschud. De 20 inhoud van de drie kolven werd vervolgens gecombineerd en gebruikt voor de inoculatie van een roestvrij stalen fermentor, bevattende 30 liter gesteriliseerd medium met de volgende samenstelling: glycerol , 3,0 % g/v sojabloem BSP 70 1,0 % g/v 25 kalk 0,25 % g/v cerelose 3,0 % g/v
NaCl 0,5 % g/v
MgS04.7H20 0,05 % v/v sporenelementen-concentraat 0,1 % g/v 30 gedestilleerd water tot 30 liter
De inhoud van de fermentor werd gedurende 70 uren bij 30°C geroerd onder gebruikmaking van een turbine met vier vlakke bladen, die roteerden bij 350 rpm, en geaereerd bij een snelheid van 15 liter per minuut.
30 ml "Silcolapse" (handelsmerk), een silicon-antischuimmiddel, waren 35 toegevoegd aan het mengsel voor de behandeling daarvan in de autoclaaf.
De pH bij de verzameling was 7,9 en het resulterende fermentatiemengsel 7905979 13 (22 liter) werd gemengd en geroerd met een gelijk volume ethylacetaat.
Na 30 minuten werd het mengsel afgescheiden in een centrifugaalseparator en het ethylacetaatextract (ongeveer 18 liter) werd gedroogd boven water-vrij natriumsulfaat en afgefiltreerd. Het filtraat werd onder verminder-5 de druk geconcentreerd, waarbij een olie-achtig residu (10,7 g) werd verkregen.
M. 139.603 werd uit het bovengenoemde concentraat verkregen onder toepassing van de volgende procedure:
Het olie-achtige residu (10,7 g) werd opgelost 10 in het minimale volume ethylacetaat en de resulterende oplossing werd aangebracht op de top van een kolom van neutraal aluminiumoxyde (Woelm N, 200 g, 18 cm x 4 cm), bereid als een suspensie met ethylacetaat. De kolom werd eerst geëlueerd met ethylacetaat, vervolgens met een 50 vol.% mengsel van ethylacetaat en methanol en tenslotte met methanol. De vol-15 gende fracties werden verzameld nadat het oplosmiddelfront uit de kolom was getreden:
Fractie no. Volume Elueermiddel_ 1 150 ml ethylacetaat 2 150 ml ethylacetaat 20 3 150 ml ethylacetaat 4 150 ml ethylacetaat 5 150 ml ethylacetaat - methanol 50 % v/v 6 150 ml ethylacetaat - methanol 50 % v/v 7 150 ml ethylacetaat - methanol 50 % v/v 25 8 150 ml ethylacetaat - methanol 50 % v/v 9 200 ml methanol 10 200 ml methanol 11 200 ml methanol
Fracties 7-11 bevatten blijkens dunnelaagchroma-30 tografie op silicagel en ontwikkeling met 20 vol.% aceton in petroleum-ether (kookpunt = 60-80°C) M. 139.603 (Rf ongeveer 0,22) en deze fracties werden dus gecombineerd en ingedampt, waarbij een viskeuze gom (840 mg) werd verkregen, die verder werd gezuiverd door preparatieve laagchromatografie op silica (Merck's "Kieselgel 60F250", handelsmerk, 35 40 cm x 20 cm, 2 mm dik) onder gebruikmaking als elueermiddel van een mengsel van 20 vol.% aceton in petroleumether (kookpunt * 60-80°C).
790 5979 14
De in ultraviolet licht zichtbare hand bij een Rf van ongeveer 0,22 (bij benadering) werd van de twee platen geschrapt en geëxtraheerd met ethylacetaat en het extract werd drooggedampt, waarbij een viskeuze gom (240 mg) werd verkregen, die kristalliseerde bij toevoeging van petroleum-5 ether (kookpunt = 60-80°C). Dit materiaal werd herkristalliseerd uit petroleumether (kookpunt - 60-80°C), waarbij M.139.603 werd verkregen in de vorm van kleurloze kristallen, die werden afgefiltreerd en gedroogd (210 mg); smeltpunt = 176-178°C. Het ultraviolet spectrum in ethanol vertoonde absorpties bij 234 nm (ε = 12900) en 272 nm (ε *= 10800). 10 De infrarood- en kernmagnetische resonantiespectra waren identiek aan die welke werden verkregen met het produkt van voorbeeld I.
Voorbeeld IV
M. 139.603 (40 mg) werd opgelost in een mengsel van aceton (10 ml) en water (2 ml), 1 ml 2N. chloorwaters tof zuur werd toege-15 voegd en het mengsel werd gedurende 5 minuten heftig geroerd. Gedestilleerd water (20 ml) werd toegevoegd en het mengsel werd geëxtraheerd in dichloormethaan (2 x 10 ml). De organische laag werd afgescheiden en gewassen met 2N.·chloorwaterstofzuur, gevolgd door gedestilleerd water.
De dichloormethaanlaag werd vervolgens geconcentreerd, waarbij een vis-20 keuze gom (33 mg) werd verkregen van het "vrije zuur", equivalent aan M.139.603. Elementair analyse: gevonden: G = 69,5; H = 9,1 %. Berekend voor C_cHc/0o: C = 69,8; H = 9,0 %; infraroodspectrum in nujol muil, jj o zoals aangegaven in figuur 3, bevattende karakteristieke absorpties bij 3500, 1765, 1685, 1650 en 1575 cm Het protonmagnetische resonantie-25 spectrum in deuteriochloroform is weergegeven in figuur 4.
Voorbeeld V
Het "vrije zuur", equivalent aan M. 139.603 (30 mg), werd opgelost in een mengsel van tetrahydrofuran (7 ml) en water (1 ml) .
Een alkalimetaalhydroxyde, ΧΟΗ (2N, 2 ml), werd toegevoegd aan het wa-30 terige tetrahydrofuranmengsel, dat vervolgens gedurende 10 minuten heftig werd geroerd. Water (10 ml) werd toegevoegd en de oplossing werd geëxtraheerd in ether (2x15 ml). De etherextracten worden gecombineerd en ingedampt, waarbij de alkalimetaalzouten, overeenkomende met het natrium-zout, M.139.603, werden verkregen.
35 Wanneer X = kalium wordt het kaliumzout gevormd; smeltpunt = 146-150°C; moleculaire formule C _Hco0o.K, zoals blijkt uit
jj JJ O
790 5979 15 * massaspectrometrie, die een moleculair ion, M , met een massa van 64Q.335 vertoont (berekend voor ^35^53^3^ = 640.338), en uit de elementair analyse: gevonden: C = 65,7; H = 8,5 % (berekend voor C35H53Og.K: C = 65,6; H = 8,3 %).
5 Wanneer X - rubidium wordt het rubidiumzout ge vormd; smeltpunt = 95-120°C; moleculaire formule C^H^O^.Rb, zoals blijkt uit mas saspectrome trie, die een moleculair ion, M , met een massa van 686.279 vertoont (berekend voor C^H^gOg.Rb = 686.286).
Voorbeeld VI
10 Het vermogen van M. 139.603 de hoeveelheid propio- naat te vergroten ten koste van acetaat in de pensvloeistof van schapen werd op de volgende wijze aangetoond.
23 schapen werden afzonderlijk gehuisvest en gevoed met hetzelfde dieet van 1 kg gedroogde grasblokken per dier per 15 dag, verdeeld in twee voedingen per dag. De dieren werden willekeurig verdeeld in 13 als negatieve controles, 5 als positieve controles onder gebruikmaking van monensine, een bekende pensmanipulator, en 5 waaraan M. 139.603 werd toegediend. Aan de behandelde dieren werd monensine of M. 139.603 oraal toegediend in een hoeveelheid van 0,5 mg/kg op elke 20 van vier achtereenvolgende dagen en monsters van pensvloeistof werden via een maagbuis 6 uren na de behandeling op dag 4 verzameld. De pensvlo eis tof monsters werden vervolgens geanalyseerd op acetaat en propionaat op de in voorbeeld II beschreven wijze. De verkregen resultaten zijn aangegeven in onderstaande tabel.
25 , , ,. Mol.% van totale VFAs
Behandelingsgroepen __ _acetaat_propionaat
Negatieve controle 69,9 19,8
Positieve controle - monensine 0,5 mg/kg 57,1 32,3 30 M. 139.603 - 0,5 mg/kg 54,2 39,9
De acetaat-respons op M. 139.603 is significant bij p < 0,02 in vergelijking met de positieve controle, monensine, en de propionaat-respons op M. 139.603 is significant bij p < 0,001 in 35 vergelijking met de positieve controle, monensine.
790 5 979
Claims (11)
1. De verbinding M.139.603, die de volgende eigenschappen bezit, namelijk (a) moleculaire formule ^35^53^3^ zoa^s blijkt 5 uit massaspectrometrie, die een moleculair ion M+, met een massa van 624.361 vertoont (berekend voor Cg^H^gOgNa - 624.364), en uit elementair analyse: C = 67,5; H = 8,8 % (berekend voor C^H^gOg'Na: c = 67,3; H = 8,5 %), 10 (b) infrarood spectrum in nujol muil, zoals aan gegeven in figuur 1, bevattende karakteristieke absorpties bij 3300, 1725, 1645, 1565 en 915 cm (c) protonmagnetische resonantiespectrum in deu- 15 teriochloroform, zoals aangegeven in figuur 2, (d) ultravioletspectrum in inethanoloplossing vertoont een karakteristieke absorptie bij 234 nm (ε = 12900) en 272 nm (e = 10800), (e) smeltpunt = 176-178°C, 20 (f) / " -82° (c = 0,2 in methanol), en de overeenkomstige "vrije zuur" vorm daarvan met de moleculaire formule C^H^Og, gekarakteriseerd door een Rf = 0,55 (bij benadering) bij dutmelaagchromatografie op silicagel (Merck’s "Kieselgel 60F-254", handelsmerk), dikte 0,25 mm, ontwikkeld met een mengsel van diethyl-25 ether, methanol en mierezuur in een volumeverhouding van 95:4:1; UV in ethanol 274 nm (ε = 13900), breed; en andere alkalimetaalzouten, die daaruit kunnen worden verkregen.
2. Werkwijze ter bereiding van de in conclusie 1 30 gedefinieerde verbindingen, niét hét kenmerk, dat men een M. 139.603- vormende stam van Streptomyces longisporoflavus in een waterig voedings-medium, bevattende een bron van assimileerbare koolstof, onder schudden en onder aerobe omstandigheden bij een temperatuur tussen 22 en 32°C kweekt, het aldus verkregen fermentatiemengsel extraheert met een met 35 water onmengbaar organisch oplosmiddel onder toepassing van gebruikelijke middelen en het oplosmiddel afdampt, waarna men desgewenst het 7905979 k natriumzout, M. 139.6Q3, omzet in het "vrije zuur" en het "vrije zuur" desgewenst omzet in andere alkalimetaalzouten onder toepassing van gebruikelijke middelen.
3. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, 5 dat de M. 139.603-vormende stam van S.longisporoflavus een stam is, die geïdentificeerd is als NCIB 11426, die op de volgende wijze wordt beschreven: /_De gebruikte media worden bereid volgens de recepten voor de "International Streptomyces 10 Project" (ISP) en zijn als beschreven door Shirling, E.G. en Gottlieb D. (International Journal of Systematic Bacterilogy, J_6, (3), 313-340 (1966)_7· Kweekomstandigheden - ongeveer 25°C, daglicht. J5 ISP1 Tryptongist (maar met toegevoegde agar),
4. Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 en Μ. 139.603-vormende varianten en mutanten daarvan.
5. Het fermentatiemengsel, verkregen door kweken 15 van een M. 139.603-vormende stam van Streptomyces longisporoflavus of een M. 139.603-vormende variant of mutant daarvan in een waterig voe-dingsmedium, bevattende een bron van assimileerbare koolstof, onder schudden en aerobe omstandigheden bij een temperatuur tussen 22 en 32°C.
5 Geen achterzijde-pigmenten worden gevormd. Geen oplosbare pigmenten worden gevormd. Sporen worden gedragen in open en stevige spiralen, dikwijls gescheiden van de hoofdas door een rechtere ondersteunende "hypha” of misschien keten van sporen. De sporen zelf zijn moeilijk te 10 zien via normale microscopie omdat zij zeer dicht aan elkaar hechten. De spore-wanden (E.M. op een 4 %’s uranylacetaat-preparaat) zijn glad.
5. Achterzijde meer of minder ongekleurd. ISP5 Glycerol-asparagine-agar. 5 dagen - dun, enigszins korrelvormig licht reebruin. - Achterzijde - ongekleurd. 10 13 dagen - dun, fluweelachtig, licht grijs. - Achterzijde - ongekleurd. XSP7 Tyrosine-agar. 5 dagen - spaarzaam tot dun, enigszins korrelvormig, fluweelachtig, licht reebruin/ 15 grijs,. - Achterzijde ongekleurd. 13 dagen - dun, fluweelachtig, enigszins verhoogd, reebruin. - Achterzijde - reebruin-grijs.
20 Op ISP7, bij veroudering, wordt de cultuur in het algemeen meer roodachtig reebruin, maar vertoont deze enkele gebieden met een meer donkere kleuring, die verband houdt met een zwaardere sporulatie. ISP9 - Koolstofverhruik agar.
25 Score 15 dagen - Geen koolstof - zeer spaarzaam, submers - Glucose - dun/fraai, fluweelachtig, reebruin +
30. Arabinose - spaarzaam +_ - Fructose- dun, fluweelachtig, reebruin + - Inositol- zeer spaarzaa, - Mannitol - dun - fluweel- 35 achtig + - Raffinose - zeer spaarzaam - 7905979 \ * - Rhamnose - spaarzaam + - Xylose - spaarzaam + Algemeen. Geen melaminen worden gevormd.
5 Dagen - Dun, enigszins vochtig, fluweeladtig, licht reebruin. - Achterzijde ongekleurd. 13 dagen - dun fluweelachtig - enigszins korrel-20 vormig, licht reebruin. - Achterzijde ongekleurd. ISP2 Gistextract/moutextractagar. 5 dagen - dun, fluweelachtig, licht grijs, - Achterzijde - zeer lichtgeel totjee- 25 bruin 13 dagen - fraai, verhoogd en gerimpeld, fluweelachtig, licht geel/bruin/grijs. - Achterzijde - reebruin. ISP3 Havermeelagar. 30. dagen - spaarzaam tot dun, fluweelachtig, licht geel/grijs - Achterzijde niet zichtbaar. 13 dagen - Dun, enigszins verhoogd, fluweelachtig, licht grijs.
35. Achterzijde niet zichtbaar. ISP4 Anorganische zouten - uitgangsagar. 790 59 79 5 dagen - dun, licht reebruin, enigszins korrelvormig. - Achterzijde ongekleurd. 13 dagen - dun, enigszins vochtig, reebruin.
6. Het extract, verkregen door extraheren van het fermentatiemengsel, verkregen in conclusie 5, met een met water onmengbaar organisch oplosmiddel.
7. De verbinding M. 139.603 als gedefinieerd in conclusie I, bereid volgens de werkwijze van conclusies 2 of 3 of 25 een voor de hand liggende equivalente werkwijze.
8. Werkwijze voor het telen van herkauwende huisdieren, met het kenmerk,dat men aan de dieren oraal toedient een verbinding als gedefinieerd in conclusie 1, een fermentatieprodukt als gedefinieerd in conclusie 5 of een extract als gedefinieerd in conclu- 30 sie 6.
9. Een in de veeteelt bruikbaar preparaat, met het kenmerk, dat het een verbinding als gedefinieerd in conclusie I, een fermentatiemengsel als gedefinieerd in conclusie 5 of een extract als gedefinieerd in conclusie 6, samen met een vast of vloeibaar, eet-35 baar, niet-toxisch verdunningsmiddel of dragermateriaal, bevat. 790 59 79 6 Λ \
10. Werkwijze ter b.ereiding van een vast preparaat als gedefinieerd in conclusie 9, met het kenmerk, dat men een verbinding als gedefinieerd in conclusie 1, een fermentatieprodukt als gedefinieerd in conclusie 5 of een extract als gedefinieerd in conclu- 5 sie 6 uniform mengt met een vast niet-toxisch eetbaar verdunningsmiddel of dragermateriaal.
11. Verbindingen, preparaten en werkwijzen als beschreven in de beschrijving en/of voorbeelden. i /Λ / · / 790 5 9 79 / // ~
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB7832172 | 1978-08-03 | ||
| GB7832172 | 1978-08-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL7905979A true NL7905979A (nl) | 1980-02-05 |
Family
ID=10498845
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL7905979A NL7905979A (nl) | 1978-08-03 | 1979-08-03 | Streptomyces- metaboliet. |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4279894A (nl) |
| JP (1) | JPS5551097A (nl) |
| AT (2) | AT367450B (nl) |
| AU (1) | AU530316B2 (nl) |
| BE (1) | BE878042A (nl) |
| BG (1) | BG40659A3 (nl) |
| CA (1) | CA1142107A (nl) |
| CH (1) | CH649780A5 (nl) |
| CS (1) | CS221514B2 (nl) |
| DE (2) | DE2954593C2 (nl) |
| DK (1) | DK151257C (nl) |
| FI (1) | FI66184C (nl) |
| FR (1) | FR2433578A1 (nl) |
| HK (1) | HK26185A (nl) |
| HU (1) | HU179207B (nl) |
| IE (1) | IE48204B1 (nl) |
| IL (1) | IL57919A (nl) |
| IT (1) | IT1162363B (nl) |
| KE (1) | KE3433A (nl) |
| MY (1) | MY8500754A (nl) |
| NL (1) | NL7905979A (nl) |
| NO (1) | NO156201C (nl) |
| NZ (1) | NZ191105A (nl) |
| PL (1) | PL130950B1 (nl) |
| PT (1) | PT70023A (nl) |
| RO (1) | RO79259A (nl) |
| SE (1) | SE447910C (nl) |
| SG (1) | SG54784G (nl) |
| SU (2) | SU1212328A3 (nl) |
| YU (1) | YU42489B (nl) |
| ZA (1) | ZA793772B (nl) |
| ZW (1) | ZW13679A1 (nl) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0070622B1 (en) * | 1981-07-16 | 1987-01-14 | Imperial Chemical Industries Plc | Derivatives of m.139,603 useful as growth promotors |
| JPS60141293A (ja) * | 1983-12-28 | 1985-07-26 | Kitasato Inst:The | 新規制癌性抗生物質８１−４８４およびその製造法 |
| AU581691B2 (en) * | 1985-10-14 | 1989-03-02 | Balfour Manufacturing Company Limited | Process for the production of feedstuffs |
| US4675270A (en) * | 1986-02-10 | 1987-06-23 | Loctite (Ireland) Limited | Imaging method for vapor deposited photoresists of anionically polymerizable monomer |
| US5023086A (en) * | 1987-03-13 | 1991-06-11 | Micro-Pak, Inc. | Encapsulated ionophore growth factors |
| US4876273A (en) * | 1987-08-13 | 1989-10-24 | Eli Lilly And Company | Antibotic A80577 and process for its production |
| US5985907A (en) * | 1998-08-12 | 1999-11-16 | Health Research, Inc. | Method for inhibiting growth of methanogens |
| CN113150995A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-07-23 | 贵州安康医学检验中心有限公司 | 一种用于转运过程中的细菌转运保藏培养基及其配制方法 |
-
1979
- 1979-07-23 ZW ZW136/79A patent/ZW13679A1/xx unknown
- 1979-07-24 ZA ZA00793772A patent/ZA793772B/xx unknown
- 1979-07-24 AU AU49194/79A patent/AU530316B2/en not_active Ceased
- 1979-07-24 NZ NZ191105A patent/NZ191105A/xx unknown
- 1979-07-25 US US06/060,682 patent/US4279894A/en not_active Expired - Lifetime
- 1979-07-29 IL IL57919A patent/IL57919A/xx unknown
- 1979-07-31 DE DE2954593A patent/DE2954593C2/de not_active Expired
- 1979-07-31 DE DE19792931082 patent/DE2931082A1/de active Granted
- 1979-08-01 DK DK325179A patent/DK151257C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-08-01 PL PL1979217506A patent/PL130950B1/pl unknown
- 1979-08-02 FR FR7919883A patent/FR2433578A1/fr active Granted
- 1979-08-02 IT IT49943/79A patent/IT1162363B/it active
- 1979-08-02 SE SE7906553A patent/SE447910C/sv unknown
- 1979-08-02 BE BE0/196575A patent/BE878042A/fr not_active IP Right Cessation
- 1979-08-02 NO NO792537A patent/NO156201C/no unknown
- 1979-08-02 CS CS795335A patent/CS221514B2/cs unknown
- 1979-08-02 AT AT0531779A patent/AT367450B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-08-02 SU SU792798603A patent/SU1212328A3/ru active
- 1979-08-02 YU YU1880/79A patent/YU42489B/xx unknown
- 1979-08-02 CH CH7107/79A patent/CH649780A5/de not_active IP Right Cessation
- 1979-08-03 FI FI792420A patent/FI66184C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-08-03 BG BG7944552A patent/BG40659A3/xx unknown
- 1979-08-03 HU HU79IE880A patent/HU179207B/hu not_active IP Right Cessation
- 1979-08-03 NL NL7905979A patent/NL7905979A/nl not_active Application Discontinuation
- 1979-08-03 PT PT70023A patent/PT70023A/pt unknown
- 1979-08-03 JP JP9877079A patent/JPS5551097A/ja active Granted
- 1979-08-03 CA CA000333117A patent/CA1142107A/en not_active Expired
- 1979-08-03 RO RO7998350A patent/RO79259A/ro unknown
- 1979-08-08 IE IE1403/79A patent/IE48204B1/en not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-07-15 SU SU802949055A patent/SU1324575A3/ru active
-
1981
- 1981-04-06 AT AT0160081A patent/AT366892B/de not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-01 KE KE3433A patent/KE3433A/xx unknown
- 1984-08-06 SG SG547/84A patent/SG54784G/en unknown
-
1985
- 1985-04-04 HK HK261/85A patent/HK26185A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-12-30 MY MY754/85A patent/MY8500754A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS584720B2 (ja) | 抗コクシジウム物質およびそれの製造方法 | |
| NL7905979A (nl) | Streptomyces- metaboliet. | |
| SU818492A3 (ru) | Способ получени деоксинаразино-ВОгО АНТибиОТичЕСКОгО КОМплЕКСА | |
| US4229535A (en) | Method for preparing multhiomycin | |
| US4670260A (en) | Antibiotic for animal feeds | |
| JPH0215085A (ja) | ポリエーテル坑生物質 | |
| GB2027013A (en) | Compound M.139603 from Streptomyces longisporoflavus, and its use in ruminants | |
| PL131791B1 (en) | Process for preparing novel antibiotic | |
| JPS61233695A (ja) | エフオマイシン類及びその製造方法 | |
| JPS6191190A (ja) | 抗生物質ａ８０１９０ | |
| PL92972B1 (nl) | ||
| PL98718B1 (pl) | Sposob wytwarzania nowego antybiotyku antibioticum bay g 7299 | |
| US4141974A (en) | Veterinary method employing certain aureolic acid compounds | |
| SE461101B (sv) | Anvaendning av stammar fraan gruppen bacillus foer utvinning av sackarasinhibitorer samt saett att framstaella sackarasinhibitorer | |
| JPS5826959B2 (ja) | 新抗生物質３１５５９ｒｐの製造方法 | |
| Solunke | Fermentation production of α-Ketglutaric Acid | |
| EP0158179B1 (en) | Antibiotic 6270, process for its production, and its use as an anticoccidiosis agent and a feed additive | |
| JPS6211A (ja) | 新規抗生物質プラノチオシンａまたはｂを含有してなる組成物 | |
| US3891754A (en) | Antibiotic ensanchomycin and process of producing the same | |
| PL92975B1 (nl) | ||
| PL99855B1 (pl) | Sposob wytwarzania nowego antybiotyku bay g 7020 | |
| PL97341B1 (pl) | Sposob wytwarzania nowego zwiazku 38295 o charakterze antybiotyku | |
| JPS61177951A (ja) | 粗製タンパク質の品質の改良 | |
| JPS61251693A (ja) | 抗生物質ｃｔ−ｂ、ｃｔ−ｃ及びｃｔ−ｄ物質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| DNT | Communications of changes of names of applicants whose applications have been laid open to public inspection |
Free format text: IMPERIAL CHEMICAL INDUSTRIES PLC |
|
| CNR | Transfer of rights (patent application after its laying open for public inspection) |
Free format text: PITMAN-MOORE, INC. TE LAKE FOREST |
|
| BV | The patent application has lapsed |