NO156201B - En streptomyces metabolitt m139603 som ved tilsetning til foret forbedrer veksthastigheten hos droevtyggere. - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse gjelder en metabolitt, M139603,

som oppnås fra den aerobe kultur av Streptomyces longisporoflavus og som er en ny forbindelse med formelen C^H^OgNa. M139603 er et natriumsalt, og oppfinnelsen gjelder også den tilsvarende "frie syre" og andre alkalimetallsalter som kan oppnås derfra. Forbind-

elsene er effektive for å redusere mengden metan som frembringes ved fermentering i rumen, og øke mengden propionsyre i rumenvæsken hos kveg, og antas derfor å ha vekstfremmende egenskaper hos drøv-

tyggere, idet det er vel kjent at andre kjemiske forbindelser som øker propionsyrenivået i rumenvæsken resulterer i økede vekstrater når det gis i foret til kveg eller sauer. Forbindelsen M139603

har strukturformelen

hvor

A er hydrogen eller et alkalimetall.

Forbindelsen ifølge oppfinnelsen har følgende egenskaper:

(a) molekylf orme 1 C^H^OgNa som indikert ved massespektrometri ,

som viser et molekylært ion, M<+>, med masse 624 , 361 (beregnet for <C>^Hj-^<OgN>a = 624,364), og ved elementæranalyse:

C = 67,5, H = 8,8% (beregnet for C^<H>^OgNa: C = 67,3,

H = 8,5%) ;

(b) infrarødt spektrum i nujol "mull", som vist i figur 1, med karakteristiske absorpsjoner ved 3300, 1725, 1645, 1565 og

915 cm<-1>;

(c) proton-magnetisk resonans-spektrum i deuteriokloroform som vist i figur 2; (d) ultrafiolett-spektrum i etanol-løsning viser karakteristiske absorpsjoner ved 234 nm (e = 12900) og 272 nm (r. = 10800) ; (e) smeltepunkt 176-8°C; (f) fa]p<3> = -82° (c = 0,2 i metanol);

og den tilsvarende "frie syre"-formen derav med molekylformelen <C>35H54°8' karakter:i-sert ved Rp 0,55 (omtrentlig) ved tynnskiktkromatografi på silikagel (Merck's "kiselgel 60F-254") med 0,25 mm tykkelse og utviklet med en blanding av dietyleter, metanol og maursyre i forholdet 95:4:1 volumdeler; UV i etanol 274 nm

(e = 13900), bredt; og andre alkalimetallsalter som kan oppnås derfra.

Ovennevnte forbindelse kan fremstilles ved å

dyrke en M139603-produserende stamme av Streptomyces longisporoflavus, eller en Ml39603-produserende variant eller mutant derav, i et vandig næringsmedium inneholdende en kilde for assimilerbart karbon, under rystede, aerobe betingelser ved en temperatur på

mellom 22 og 32°C, ekstrahere fermenteringsblandingen oppnådd på denne måten med et vannblandbart, organisk løsningsmiddel ved konvensjonelle metoder, og fordampe løsningsmidlet, hvorefter natriumsaltet av M138603 om ønsket kan omdannes til den "frie syren", og den "frie syren" kan omdannes til andre alkalimetallsalter ved konvensjonelle metoder.

En egnet M139603-produserende stamme av S. longisporoflavus er den som identifiseres som NCIB 11426, som er tilgjengelig uten innskrenkninger fra National Collection of Industrial Bacteria, Ministry of Agriculture, Fisheries and Food, Torry Research

Station, 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 8DG, Skottland, og som

har følgende beskrivelse:

[De media som brukes er sammensatt overensstemmende med oppskriftene for "International Streptomyces Project" (ISP) og er som beskrevet av Shirling, E.G. & Gottlieb, D (International Journal of Systematic Bacteriology, 16 (3), 313-340, 1966)]. Betingelser ved inkuberingen: ca. 25°C

dagslys.

I SPl Trypton-gjær (men med tilsatt agar)

5 dager - Tynn, litt fuktig, fløyelsaktig, lys brun.

- Motsatt side uf?rvet.

13 dager - Tynn fløyelsaktig - svakt granulær, lys brun.

- Motsatt side ufarvet.

ISP2 Gjærekstrakt/maltekstrakt-agar

5 dager - Tynn, fløyelsaktig, lysegrå

- Motsatt side, meget blek, gul, lysbrun.

13 dager - Antagelig, hevet og rynket, fløyelsaktig, lysegul/brun/ grå

- Motsatt side - lysebrun

ISP3 Havremel-agar

5 dager - Sparsom til tynn, fløyelsaktig, lysegul/grå

- Motsatt side ikke synlig

13 dager - Tynn, svakt hevet, fløyelsaktig, lysegrå

- Bakside ikke synlig

ISP4 Uorganiske salter - start-agar

5 dager - Tynn, lysebrun, svakt granulær - Bakside ufarvet

13 dager - Tynn, litt fuktig, lysebrun

- Bakside mer eller mindre ufarvet.

ISP5 Glycerol-asparagin-agar

5 dager - Tynn, svakt granulær, lysebrun - Bakside ufarvet

13 dager - Tynn, fløyelsaktig, lysegrå

- Bakside - ufarvet

I SP7 Tyrosin-agar

5 dager - Tynn til sparsom, svakt granulær, fløyelsaktig, lysebrun/grå

- Bakside ufarvet

13 dager - Tynn, fløyelsaktig, svakt hevet, lysebrun

- Bakside - lysebrun/grå

Med ISP7 blir kulturen med tiden generelt mer rosa-lysebrun, men viser noen områder med mørkere farve, forbundet med kraftigere sporedannelse.

ISP9 - Karbonutnyttende agar

Generelt

Ingen melaniner fremstilles

Ingen motsatte pigmenter fremstilles.

Ingen løselige pigmenter fremstilles.

Sporer bæres i åpne og tette spiraler, ofte separert fra hoved-aksen ved en rettholder som bærer "hypha" eller kanskje en sporekjede. Sporene er selv ganske vanskelige å se med normal mikroskopi idet de er meget tett forent med hverandre. Spore-veggene (E. M. på 4% uranylacetat-preparat) er glatte.

Denne stamme av S. longisporoflavus er også tilgjengelig uten innskrenkning fra Centraalbureau voor Schimmelcultures, PO Box 273, Oosterstraat 1, 3740 AG Baarn, Nederland, under referanse CBS 312.79.

Foruten Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426, kan man også anvende andre M139603-frembringende varianter og mutanter derav.

Forbindelsen kan anvedes i form av den fermenteringsblanding som oppnås ved å dyrke en Ml39603-produserende stamme av Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426, eller en M139603-produserende variant eller mutant derav.

Forbindelsen kan også anvendes i form av en ekstrakt som oppnås ved å dyrke en Ml3960 3-produserende stamme av Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426, eller en M139603-produserende variant eller mutant derav, som beskrevet ovenfor, og ekstrahere fermenteringsblandingen med et vannblandbart, organisk løsningsmiddel, som f.eks. etylacetat.

Den "frie syre" som tilsvarer natriumsaltet, M139603,

kan oppnås ved surgjørinq av en løsning av M139603 og ckstrahering av den sure løsningen med et vannblandbart, organisk løsningsmiddel; og andre alkalimetallsalter kan oppnås ved behandling av en løsning av den "frie syren" med et egnet alkalimetallhydroksyd, f.eks. litiumhydroksyd, kaliumhydroksyd, cesiumhydroksyd eller rubidiumhydroksyd. Dersom det anvendes natriumhydroksyd, regenereres M139603, hvilket viser at det ikke foregår noen strukturell forandring i disse reaksjoner.

Som konstatert ovenfor har forbindelsene den virkning

at dé øker mengden propionsyre i rumenvæsken,. og øker spesielt mengden propionsyre på bekostning av metan og/eller eddiksyre. Dette er kjent for å være en ønskelig virkning i drøvtygger-ernæring, fordi propionsyre er en meget mer effektiv forløper for glukose, fra hvilken dyrene oppnår sin energi og vekst, enn eddiksyre; mens den del av dyrets forinntak som omdannes til metan, ganske enkelt går tapt for dyret, idet metanet utskilles ved raping. Modifisering av rumen-metabolismen som forårsakes av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er således en meget nyttig virkning, og antas å øke veksthastigheten og for-omdannelseseffektiviteten hos drøvtyggende dyr.

Forbindelsen eller en komposisjon inneholdende denne

kan således anvendes ved nold av drøvtyggere for å øke deres veksthastighet og/eller øke effektiviteten ved deres forom-dannelse, hvilken omfatter oral administrering av en forbindelse, formenteringsprodukt eller -ekstrakt ifølge oppfinnelsen som beskrevet ovenfor, til dyrene.

Forbindelsene administreres fortrinnsvis oralt til

dyrene som et tillegg til deres normale diett, dvs. sammenblandet med et vanlig, fast for, i forblokker eller saltslikkestener oppløst i drikkevannet eller, for unge dyr som f.eks. lam eller kalver, oppløst i helmelk eller skummet melk. Forbindelsene innblandes i for, forblokker, saltslikkestener, drikkevann, helmelk eller skummet melk i en slik mengde at hvert behandlet dyr vil fortære fra 0,01 til 30 mg/kg kroppsvekt pr.

dag, fortrinnsvis fra 0,01 til 10 mg/kg pr. dag, av en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen.

Dyrene kan motta forbindelsene ifølge oppfinnelsen

i hovedsak i hele sin vekstperiode, eller i bare en del av denne periode, f.eks. den første del og/eller den periode som fører

frem til slakt. Økningen i veksthastighet, oppnådd ved å bruke metoden ifølge oppfinnelsen, muliggjør at dyr som oppfores for kjøttproduksjon, kan bringes til slakte- eller markedsvekt i løpet av en kortere vekstperiode enn normalt eller det produ-seres tyngre dyr ved slutten av en normal vekstperiode. Den for-bedrede effektivitet ved f5romdannelsen som oppnås ved å anvende metoden ifølge oppfinnelsen, gjør det mulig for behandlede dyr å oppnå en ønsket vekt ved konsum av mindre for enn ubehandlede dyr som vokser til samme vekt. Ved optimale vekstfremmende nivåer observeres det ingen toksisk effekt på grunn av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen.

Ifølge et ytterligere trekk ved oppfinnelsen tilveie-bringes et preparat som omfatter den nye forbindelse eller et fermenteringsprodukt eller en fermenteringsekstrakt inneholdende denne, sammen med et fast eller flytende, spiselig, ikke-

toksisk fortynningsmiddel eller bærer.

En egnet, flytende fortynner eller bærer er eksempelvis drikkevann, helmelk eller skummet melk.

En egnet, fast, spiselig, ikke-toksisk fortynner eller bærer kan eksempelvis være et konvensjonelt, ernæringsmessig avveiet forstoff for drøvtyggere, f.eks. en typisk kveg- eller saue-diett bestående av kornprodukter, som f.eks. byggmcl, maismel eller hvetefor, nøtte- og frø-produkter, som f.eks. avskallet jordnøttkake eller bomullsfrøkake, eller ekstrahert bomullsfrøkake, sammen med mindre mengder av eksempelvis fjærmel, tangmel, benmel, kritt, salt, urinstoff, melasse, vitaminer og spormineraler; eller den kan være en inert, fast fortynner eller bærer uten energiverdi, f.eks. kaolin, talk, kalsiumkarbonat, valkejord, attapulgitt-leire, malte østersskjell eller malt kalksten; eller den kan være stivelse eller laktose.

Preparatet ifølge oppfinnelsen kan ha form av et for med tilsetninger for direkte foring til dyr, i hvilket tilfelle det vil inneholde fra 5 til 3000 ppm av forbindelsen fremstilt ifølge oppfinnelsen sammenblandet med et konvensjonelt drøvtygger-for; eller det kan ha form av en konsentrert premiks for for-tynning med et konvensjonelt drøvtyggerfor for å gi et supplementert for som er egnet for direkte foring, og en slik premiks vil inneholde fra 0,3 til 50% vekt/vekt av forbindelsen fremstilt ifølge oppfinnelsen sammenblandet med enten et konvensjonelt, ernæringsmessig avveiet drøvtyggerfor, et inert, fast fortynningsmiddel uten energiverdi, f.eks. malt kalksten, eller stivelse eller laktose.

I alle preparater ifølge oppfinnelsen som er beskrevet ovenfor, kan naturligvis forbindelsen ifølge oppfinnelsen er-stattes av en fermenteringsblanding eller en ekstrakt inneholdende en ekvivalent mengde av M139603.

Et fast preparat kan fremstilles ved å blande jevnt én forbindelse, fermenteringsblanding eller -ekstrakt ifølge oppfinnelsen med en fast, spiselig, ikke-toksisk fortynner eller bærer.

Forbindelsen med formel I fortynnes fortrinnsvis i

serie med fortynningsmidlet eller bæreren i to eller flere suksessive trinn for å sikre jevn sammenblanding.

Oppfinnelsen skal illustreres, men ikke begrenses av følgende eksempler: Oppfinnelsen skal illustreres, men ikke begrenses av følgende eksempler:

Eksempel 1

Streptomyces-arten NCIB 11426 ble dyrket i en 500 ml Erlenmeyer-kolbe på trypton-gjær-agar inneholdende: Trypton - "Oxoid" L42 (varemerke) 0,5% vekt/volum Gjærekstrakt - "Oxoid" L21 (varmerke) 0,3% vekt/volum som var forhåndssterilisert ved autoklavbehandling i 20 minutter ved normalt trykk. Mediets pH var ca. 7,0. Kolben ble rystet

ved 25°C i 120 timer på en rotasjonsrystemaskin.

Innholdet i kolben ble så brukt til inokulering av ytterligere 10 lignende kolber som hver inneholdt 200 ml av følgende medium:

Mediet ble forhåndssterilisert ved autoklavbehandling ved 120°C i 20 minutter efter at pH var justert til 7,2: De inokulerte kolbene ble rystet ved 25°C i 120 timer på en rotasjonsrystemaskin, og innholdet i kolbene ble så samlt og pH justert til 3 ved forsiktig tilsetning av 0,1N saltsyre. Mediet ble ekstrahert med etylacetat (2 x 600 ml), ekstraktene kombinert og tørket over natriumsulfat, og løsningsmidlet inndampet slik at det ble oppnådd en oljeaktig rest (290 mg).

Etylacetatekstrakten ble renset ved preparativ skiktkromatografi på to silikagel-plater (Mercks "kiselgel" 60F-254, 20 x 20 cm, 2 mm tykkelse) ved å bruke etylacetat som eluerings-middel. Båndet ved Rp = 0,39 (ca.) ble skrapet av platene og ekstrahert med etylacetat og løsningsmidlet ble inndampet slik at det ble oppnådd en viskøs gummi (21 mg), som in vitro viste antibakteriell aktivitet mot S. aureus. Denne aktive fraksjon ble ytterligere renset ved preparativ skiktkromatografi på en silikagelplate (Mercks "kiselgel" 60F-254, 20 x 20 cm, 0,25 mm tykkelse) ved å anvende en blanding av dietyletcr, metanol og maursyre i forholdet 95:4:1 (volumdeler). Båndet ved R r=0,55 (ca.) ble skrapet av platen og ekstrahert med etylacetat slik at det efter inndampning av løsningsmidlet ble oppnådd en viskøs gummi

(9 mg). Gummien ble omdannet til et natriumsalt, M139603,

ved å ryste en kloroformløsning med en løsning av natriumhydroksyd (0,1N). Kloroformskiktet ble fraseparert og tørket over natriumsulfat, og løsningsmidlet ble inndampet slik at M139603 ble oppnådd som et hvitt faststoff (8 mg), sm.p. 129-132°C, infrarødt spektrum (figur 1) oppviste følgende maksima: 3300, 1725, 1645, 1565 og 915 cm<-1.>

Elementæranalyse:

Beregnet for C^H^OgNa: C 67,3, H 8,5%

Funnet: C 6 7,5, H 8,8.

Massespektrum: M = 624,361, beregnet for C35<H>53<0gN>a = 624,364.

Rp = 0,39 (tynnskiktkromatografi) på Mercks 60F-254, 0,25 mm

plater utviklet med etylacetat, synliggjort som en brun flekk efter påsprøyting med 3N svovelsyre og oppvarmhing til 100°C.

Det protonmagnetiske resonansspektrum i deuteriokloroform

er gjengitt i figur 2.

E ksempel 2

Evnen hos M139603 til å hindre produksjonen av metan

i rumen hos drøvtyggere, og øke mengden propionat på bekostning av acetat (Ac/Pr) i de produserte flyktige fettsyrer, påvises som følger: Rumen-væske oppsamles på en regulær rutinebasis fra to okser, som fores på samme høy-pluss-konsentrat-diett. Prøve-tagningstiden standardiseres så godt som mulig, og væsken fra de to dyrene samles på 50/50-basis. Store, partikkelformige stoffer fjernes ved filtrering av den samlede væske gjennom fire skikt av musselin-tøy. Filtratet fortynnes så i forholdet ett volum filtrat til tre volumer av en kunstig rumenvæske (fremstilt som beskrevet av G.L. Bales et al., Journal of Diary Science, 1976, vol. 59, side 1850, men med utelatelse av eddiksyre), og pH i blandingen justeres til 6,9-7,0 med mettet, vandig natriumkarbonat-løsning. Alikvotcr (50 ml) av denne blanding fordeles til 100 ml koniske kolber inneholdende tørket, malt høy (0,5 g), og hver kolbe brukes for å teste en testforbindelse

ved en spesiell konsentrasjon.

Testforbindelsen tilsettes til den koniske kolben som

en løsning i etanol, kolben gjennomblåses med karbondioksydgass, tettes med en "suba"-forsegling og inkuberes ved 39°C i 15-16 timer. Efter én times forløp innføres en nål gjennom "suba"-forseglingen for å avlaste gasstrykket, og nålen trekkes ut 30 minutter før inkuberingen avsluttes. Fermenteringen stanses så ved å plassere kolben i is, og efter 15 minutters avkjøling analyseres gassen over væsken på metan ved gasskromatografi. Kolbeinnholdet filtreres så gjennom en på forhånd tørket, sintret glasstrakt.

Tre prøver av filtratet analyseres ved gasskromatografi på VFA,

og ved sammenligning med det på forhånd bestemte før-inkuberings-nivå av VFA bestemmes netto VFA (acetat og propionat) produsert under inkuberingen.

Følgende resultater ble oppnådd, uttrykt som % av kontrollverdier oppnådd når det ikke anvendes noen testforbindelse. Monensin, en kjent vekstfremmer som virker ved å

påvirke rumen, anvendes som positiv kontroll.

Eksempel 3

Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 ble dyrket som skråkulturer på ISP7-agar (45 ml) i 7 dager ved 30°C. Tre slike skrå-agarkulturer ble enkeltvis skrapet over i tre kolber med 100 ml sterilt vann, og de således oppnådde suspensjoner ble brukt til inokulering av tre 2 liters kolber som hver inneholdt 1 liter av følgende medium:

som på forhånd var sterilisert ved autoklavbehandling ved normalt trykk i 1/2 time, idet pH var ca. 6,7.

De tre på denne måten preparerte kolber ble så rystet ved 30°C i 5 dager i en rotasjonsrystemaskin. Innholdet i de tre kolbene ble så kombinert og brukt til inokulering av en fermenteringsbeholder av rustfritt stål inneholdende 30 1 sterilisert medium fremstilt av følgende:

Innholdet i fermenteringsbeholderen ble omrørt ved 30°C i 70 timer ved å bruke en turbin med 4 flate blad som roterte med cn hastighet av 350 rpm, og luftet med en mengde på 15 liter pr. minutt. Før autoklavbehandlingen var det til blandingen tilsatt 30 ml "Silicolapse", et silikon-antiskum-middel. Ved høstingen var pH 7,9, og den resulterende fermenteringsblanding (22 liter) ble blandet og omrørt med et like stort volum etylacetat. Efter 30 minutters forløp ble blandingen separert i en sentrifuge-separator, og etylacetatekstrakten (ca. 18 1) ble tørket over vannfritt natriumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk slik at det ble oppnådd en oljeaktig rest (10,7 g).

M139603 ble oppnådd fra ovenstående konsentrat ved hjelp av følgende fremgangsmåte:

Den oljeaktige resten (10,7 g) ble oppløst i et minimalt volum etylacetat, og den resulterende løsning ble påført på toppen av en kolonne med nøytralt aluminiumoksyd (Woelm N, 200 g, 18 cm x 4 cm) fremstilt som en oppslemming i etylacetat. Kolonnen ble først eluert med etylacetat, fulgt av en 50% vekt/vekt blanding av etylacetat og metanol, og til slutt med metanol. Følgende fraksjoner ble oppsamlet etter at løsningsmiddeltronten var kommet frem fra kolonnen:

Fraksjonene 7-11, inklusive, ble ved hjelp av tynnskiktkromatografi på silikagel utviklet med 20% vekt/vekt aceton i petroleter (k.p. 60-80°C), påvist å inneholde M139603

(R„ r ^ 0,22) og de ble kombinert og inndampet slik at det ble

oppnådd en viskøs gummi (840 mg) som ble renset ytterligere ved preparativ skiktkromatografi på silikagel (Mercks "kiselgel 60F-250", 40 cm x 20 cm, 2 mm tykkelse) ved å bruke en blanding av 20% vekt/vekt aceton i petroleter (k.p. 60-80°C) som eluerings-middel. Det UV-synlige båndet ved Rp MD,22 (ca.) ble skrapet fra de to platene og ekstrahert med etylacetat, og ekstrakten ble inndampet til tørrhet for å gi en viskøs gummi (240 mg), som krystalliserte ved tilsetning av petroleter (k.p. 60-80°C).

Dette materiale ble omkrystallisert fra petroleter (k.p. 60-80°C) for å gi M139603 som farveløse krystaller som ble avfiltrert og tørket (210 mg), sm.p. 176-178°C. Ultrafiolett spektrum i etanol viste absorpsjoner ved 234 nm (r = 12900) og 272 nm ( z = 10800). Infrarødt og kjernemagnetisk resonans-spektrum var identiske med de som ble oppnådd fra produktet i eksempel 1.

Eksempel 4

M139603 (40 mg) ble oppløst i en blanding av aceton

(10 ml) og vann (2 ml), 1 ml 2N saltsyre ble tilsatt og blandingen ble omrørt kraftig i 5 minutter. Destillert vann (20 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med diklormetan (2 x 10 ml). Det organiske skiktet ble fraskilt og vasket med 2N saltsyre, fulgt av destillert vann. Diklormetanskiktet ble så konsentrert for å gi en viskøs gummi (33 mg) av den "frie syren" som er ekvivalent med M139603.

Elementæranalyse:

Beregnet for C35H54<0:> C 69,8, H 9,0

Funnet: C 69,5, H 8,1

IR-spektrum i nujol "mull", som vist i figur 3, inneholdende karakteristiske absorpsjoner ved 3500, 1765, 1685, 1650,

1575 cm ^ ; det protonmagnetiske resonans-spektrum i deuteriokloroform er vist i figur 4.

Eksempel 5

Den "frie syren" som er ekvivalent med M139603 (30 mg) ble oppløst i en blanding av tetrahydrofuran (7 ml) og vann (1 ml). Et alkalimetallhydroksyd, X0H (2N, 2 ml) ble tilsatt til den vandige tetrahydrofuranblandingen som så ble omrørt kraftig i 10 minutter. Vann (10 ml) ble tilsatt og oppløsningen ble ekstrahert med eter (2 x 15 ml). Eterekstraktene kombineres og inndampes for å gi de alkalimetallsalter som tilsvarer natriumsaltet, M139603.

Når X = kalium dannes kaliumsaltet, sm.p. 146-150°C, molekylformel C35fI53°gK som indikert ved massespektrometri ,

som viser et molekylært ion, M<+>, med masse 640.335 (beregnet for <C>35H53°gK= 640,339), og ved elementæranalyse:

Beregnet for C^H^OgK: C = 65,6%, H 8,3%,

funnet: C = 65,7%, H 8,3%).

Når X er rubidium dannes rubidiumsaltet, sm.p. 95-120°C, molekylformel C-^Hc-30gRb, som indikert ved massespektrometri,

som viser et molekylært ion, M<+>, med masse 686,279 (beregnet for C35H530gRb=686,286).

Eksempel 6

Evnen for M139603 til a øke mengden propionat på bekostning av acetat i rumenvæsken hos sauer ble påvist som følger: 23 sauer ble holdt i hvert sitt rom og foret med samme diett på 1 kg av tørkede gressterninger pr,, dyr pr. dag. Dyrene ble fordelt tilfeldig med 13 som negative kontroller, 5 som positive kontroller ved bruk av monensin, en kjent rumen-manipulator, og 5 som ble tilført M139603. De behandlede dyrene ble gitt monensin eller M139603 oralt i en mengde av 0,5 mg/kg på hver av de fire suksessive dager, og prøver av rumenvæske ble oppsamlet ved maverør 6 timer efter behandling på dag 4. Rumenvæskeprøvene ble så analysert på acetat og propionat som beskrevet i eksempel 2. De resultater som ble oppnådd, var som følger:

Acetatresponsen for M138603 er signifikant ved p<0,02, sammenlignet med den positive kontrollen, monensin; og propionat-responsen for M139603 er signifikant ved p<0,001 sammenlignet med den positive kontrollen, monensin.

Claims (2)

1. Forbindelse som anvendes til å forbedre veksthastigheten ved tilsetning i foret hos drøvtyggere, karakterisert ved at den har formelen hvor A er hydrogen eller et alkalimetall.

2. Komposisjon for å forbedre veksthastigheten ved tilsetning i foret hos drøvtyggere, karakterisert ved at den inneholder 5 ppm til 50 vekt% av forbindelsen med formel I blandet med et fast eller flyktig, spiselig, ugiftig fortynningsmiddel eller bæremiddel.