JPS584720B2 - 抗コクシジウム物質およびそれの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、以降３７４５４ＲＰと称する新規抗生物質、
それの製造方法およびそれを含有する組成物に関する。

本発明は、式 を有する抗生物質３７４５４ＲＰおよびそれの金属およ
び窒素含有塩基との塩を提供する。

これらは、それらの示す抗コクシジウム活性のゆえにき
わめて興味ある物質である。

３７４５４ＲＰは、以降に、より詳細に記載する新規微
生物を培養することによりうろことができる。

これはストレプトマイセス属に属しストレプトミセス
ジプセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｙｐｓｅｕｓ
ＤＳ２７４６１ （ＮＲＲＬＩ１１６８）（微工研寄
託番号第４６５２号）〕と称される。

３７４５４ＲＰは酸性物質で約９６０の中和当量（酸型
のものをメタノールと水との７０対３０容量比の混合物
に溶解し０．１規定水酸化ナトリウム溶液で滴定して測
定）を有する。

３７４５４ＲＰのナトリウム塩は実験式Ｃ４８Ｈ８１０
１８Ｎａを有し、つぎの物理化学的性状を有する。

外観：白色の微細結晶状粉末。

溶解度：（フランス薬局方、第９版、１９７２に準じて
測定）：３７４５４ＲＰ（ナトリウム塩）は見掛け上水
に不溶で、ヘキサンに僅溶で、塩素化溶媒たとえば塩化
メチレンおよびクロロホルム、アルコールたとえばメタ
ノール、ケトンたとえばアセトン、エステルたとえば酢
酸エチルおよびジメチルホルムアミドに可溶である。

元素分析百分率（得られた化合物について測定）：３７
４５４ＲＰ（ナトリウム塩）は、炭素、水素、酸素およ
びナトリウムを含有する。

実験値は、Ｃ５９．２７％Ｈ８．４５％０２８．３２％
Ｎａ２．３６％（Ｃ４８Ｈ８、０．８Ｎａとしての計算
値：Ｃ５９．４９％Ｈ８．２４％０２９．７２％Ｎａ２
．３７％）。

減圧での重量減：６０度Ｃ／３ｍｍＨｇ＝０．３％０融
点（キャピラリーチューブで測定）：１９８−１９９．
５度Ｃ。

旋光度（メタノール中０．９７４％重量／重量で測定）
。

３７４５４ＲＰ（ナトリウム塩）におおよそつぎのよう
である。

（ａ）２０Ｄ−プラス２．３±０．６度 （ａ）２０４３６−プラス１．３＋０．６度紫外部スペ
クトル：３７４５４ＲＰ（ナトリウム塩）は特徴的吸収
を示さない。

赤外部スペクトル：臭化カリウムの錠剤について測定。

このスペクトルは第１図に示す。

上方の横軸にはミクロンで下方の横軸には波数（Ｃｒ−
１）を目盛り、縦軸には光学密度を目盛る。

３７４５４ＲＰの主要な赤外吸収帯を次表に示す。

重水素化クロロホルム中のプロトン核磁気共鳴スペクト
ル このスペクトルは第２図に示すが、重水素化クロロホル
ム中約４３ｍ９／ｃｃ含有溶液について２５０Ｍｅ／ｓ
の周波数でＣＡＭＥＣＡ ＴＮＳ−２５０で測定したも
のである。

次表２に示す特性を有する。

化学シフトは、ＴＭＳ（テトラメチルシラン内部標準に
対して低磁場の方へ正にとりｐｐｍで表わす。

約７．３のケミカルシフ（を有するシグナルは、重水素
化クロロホルム溶媒中のＣＨＣｌ３に由来するものであ
る。

このスペクトルによると、３７４５４ＲＰ（ナトリウム
塩）は５個のメトキシ基を含有する。

重水素化クロロホルム中での１３Ｃ核磁気共鳴スペクト
ル スペクトルは第３図に示すが、これは、重水素溶液中約
２００ｍｐ／ｃｃを含有する溶液について２２．６３Ｍ
ｃ／ｓの周波数でＢｒｕｋｅｒ ＷＨ９０スペクトロメ
ーターで記録したものである。

次表３に特徴を示す。

ＴＭＳより７７．０ｐｐｍの重水素化クロロホルムを内
部標準として、低磁場側をプラスとして、ＴＭＳを０と
して、ＴＭＳに対するｐｐｍで表わしたものである。

このスペクトルによると、３７４５４ＲＰ（ナトリウム
塩）は４８個の炭素原子を含有する。

マススペクトル：ナトリウム塩についてのフィールドテ
イソープションマススペクトルは、９６８の質量数（理
論値：９６８）に相当する分子ピークを示す。

クロマトグラフの移動：３７４５４ＲＰ（ナトリウム塩
）は、シリカゲル上の上昇クロマトグラフイーで特徴づ
けうる。

メチレンクロライドとメタノールとの９４対６容量比の
混合液を展開溶媒に使用する。

Ｒｆは０．７５ｏインビトローの静菌活性：３７４５４
ＲＰ（ナトウム塩）の静菌活性は、この目的でふつうに
使用されている希釈法のうちのひとつにより、いくつか
の微生物について測定した。

それぞれの微生物について、規定の条件下での適当なブ
ロス培地中に見掛けの発育を阻害する活性物質の最小濃
度を測定した。

種々の測定の結果を次表４に示す。

ここで最小静菌濃度を、試験培地ＣＣについての物質の
マイクログラムで表わしてある。

急性毒性：マウス、５０％致死量（ＬＤ５０）は、経口
１回投与で９０ｎ９／ｋｇ。

抗コクシジウム活性：特に、Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅ
ｌｌａおよびＥｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａで
感染されたひなとりについて抗コクシジウム活性を測定
した。

ひなどりの餌中に添加した３７４５４ＲＰ（ナトリウム
塩）の抗コクシジウム活性は、飼料中０．００５から０
．０４重量％で示される。

抗生物質３７４５４ＲＰを生産する微生物は、Ａｌｇｅ
ｒｉａで採取された土壌試料より分離されたストレプト
マイセスの１株で、ＤＳ２７４６１０番号が与えられて
いる。

この微生物の１試料はｔｈｅＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇ
ｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＡＲＳ）、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａ
ｒｔｍｅｎｔ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｔ Ｐ
ｅｏｒｉａ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ（Ｕ．Ｓ．Ａ．に１９７
７年７月２９日に寄託され、 ＮＲＲＬｌ１１６８の番号を受けている。

Ｓ．ｇｙｐｓｅｕｓ（ＮＲＲＬ１１１６８）の試料は、
本明細書に関するものとして、だれでも受け取ることが
できる。

この微生物は、また、日本の微生物工業技術研究所（Ｊ
ａｐａｎｅｓｅ ＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａ
ｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）に寄託され微工研受理番
号第４６５２を受けている。

この微生物は、既に記載されているいずれの種とも一致
しえない特徴を示す。

それで、新種と考えざるを得す、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓＤＳ２７４６１の名称を受けてい
る。

この菌株は、土壌の少量試料を無菌蒸留水に懸濁液させ
、懸濁液を種々の濃度に希釈し、各希釈液の少容量を寒
天培地を含有するペトリ皿の表面に拡げることより成立
つ一般的方法で分離された。

２６度Ｃで数日間培養したあとで、発育した微生物のコ
ロニーより、さらに調べようとするコロニーを採取し、
寒天培地に移して、より豊富な培養物とする。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７
４６１は卵状胞子を形成する。

大きさは、０．９から１．２ミクロン／０，５から０，
８ミクロンで、電子顕微鏡でみて、壁は平滑である。

胞子鎖はふつう１０から２０個の胞子を含有し、鎖はふ
つうコイル状に巻いて、■から３または４回巻きの多か
れ少なかれ開いたスパイラルを形成する。

そしてもつとも一般的にいって、多かれ少なかれ伸びた
クラスターを形成するフィラメントを形成するグループ
とされる。

この胞子形成の態様によれば、この株は、Ｐｒｉｄｈａ
ｍの分類によるＳｐｉｒａ ｓｅｃｔｉｏｎに分類され
ることになる。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７
４６１は２６度Ｃおよび３７度Ｃでよく発育するが、５
０度Ｃでは発育しない。

地中菌糸は一般的に帯灰色から帯褐灰色または帯淡黄褐
色に着色し、しかし、時として、グリセロールーアスパ
ラギン寒天またはグルコースーペプトン寒天のようなあ
る種の培地上では、ある部分は、帯赤色または紫色を示
す傾向がある。

培養に用いた大部分の培地上で、可溶性色素を形成し、
その色は、帯褐色から褐一灰色または淡黄一褐色、そし
て時として、帯ピンク褐色である。

２６度Ｃで実施した培養は、つぎの生化学的特徴を示す
。

表 ５ メラニンの形成：陰性 Ｈ２Ｓの生成：陰性 チロシン：陰性 ゲラチン液化：陽性 セルロースの利用：陰性 亜硝酸塩の生成 硝酸塩よりの生成：亜硝酸塩含有ブロス培地では衾性；
合成ブロスで陽 性 殿粉の氷解：陽性 スキムミルク上の培養：凝固またはペプトン化しない；
Ｈは１ケ月間不 変 発育を確実にするための種々の炭素原を用いる能力は、
ＰｒｉｄｈａｍおよびＧｏｔｔｌｉｅｂの方法の原則（
Ｊ．ｏｆ Ｂａｃｔ．５６、１０７−１１４、１９４８
）に従って測定した。

結果を次表６に示す。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙ
ｐｓｅｕｓ ＤＳ２７４６１の培養特性を次表に要約
する。

これらは、特に断わらぬ限り、２６度Ｃで約２から３週
間培養し、良好な発育段階に到達したものについて観察
したものである。

これらの特性はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓの菌株の形態
状の特徴の観察にふつうに用いられるニュトリエント寒
天培地およびブロス上で観察したものである。

寒天培地上の培養は、寒天斜面上で実施している。

いくつかの培地は、”ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ”，Ｓ．Ａ．ＷＡＫＳＭＡＮ，１９３−１９７頁、Ｃ
ｈｒｏｎｉｃａ ＢｏｔａｎｉｃａＣｏｍｐａｎｙ１Ｗ
ａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ，、Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９５０に
準じて調製されている。

この場合、それらは、”ｌｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ”に与えられた番号をＷの文字に付して示してあ
る。

他の培地の組成はつぎのようである。

参照Ａ．”Ｈｉｃｋｅｙ ａｎｄ Ｔｒｅｓｎｅｒ寒天
Ｉ−Ｔ．Ｇ．ＰＲＩＤＨＡＭ等、−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓＡｎｎｕａｌ、１９５６−１９５７、９５０頁。

参照Ｂ，”Ｂｅｎｎｅｔ寒天”一Ｓ．Ａ．ＷＡＫＳＭＡ
Ｎ−Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ，２巻、３３
１頁、Ｎｏ．３０−Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ
Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ
，１９６１。

参照Ｃ．”Ｅｍｅｒｓｏｎ寒天Ｉ（処方Ｗ−２３に２％
の寒天を添加。

参照Ｄ．１酵母エキス寒天”−Ｔ．Ｇ． ＰＲＩＤＨＡＭ等一Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ａｎｎｕ
ａｌ、１９５６−１９５７、９５０頁。

参照Ｅ．１トマトペーストオートミール寒天１−Ｔ．Ｇ
．ＰＲＩＤＨＡＭ−ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＡｎｎｕａ
ｌ，１９５６−１９５７、９５０頁。

参照Ｆ．′メラニン形成培地′（メラニン形成のための
チロシンー酵母エキス寒天）−Ｓ．Ａ，ＷＡＫＳＭＡＮ
−Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ．２巻、３３３
頁、Ｎｏ．４２−Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄＷ
ｉｌｋｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，
１９６１ｏ参照Ｇ，Ｋｒａｉｎｓｋｙカルシウムマレー
ト寒天、Ｗ．Ｅ．ＧＲＵＮＤＹ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍ、２、４０１、１９５２ｏ 参照Ｈ．′無機塩一殿粉寒天“−Ｔ．Ｇ．ＰＲＩＤＨＡ
Ｍ等一Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ａｎｎｕａｌ、１９５
６−１９５７、９５１頁。

参照Ｉ．式Ｗ−１に相当。

３％のスクロースに代えて１．５％のグルコース使用。

参照Ｊ．処方Ｗ−１に相轟。

３％のスクロースに代えて１．５％のグリセロース使用
。

参照Ｋ．処方Ｗ−１８に相当。

３％のスクロースに代えて１，５％のグルコース使用。

参照し．処方Ｗ−１８に相当。

スクロースを除き、ｒ紙の小片を液体中に浸す。

参照Ｍ．Ｂａｃｔｏ Ｎｉｔｒａｔｅ Ｂｒｏｔｈ（Ｄ
ｉｆｃｏ）。

参照Ｎ．Ｉプレインゲラチ７”−”Ｍａｎｕａｌｏｆ
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｕｒｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｓｔｕｄｙ ｏｆＢａｃｔｅｒｉａ”−Ｓｏｃｉｅｔｙ
ｏｆ ＡｍｅｒｉｃａｎＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｓ
ｔｓ，Ｇｅｎｅｖａ，Ｎ．Ｙ．−１５０−１８に準じて
製造の純１２％強度ゲラチン。

参照Ｐ．市販のスキムミルク粉末、製造者の指示に従っ
て再構成。

参照Ｑ．Ｈ．Ｄ．ＴＲＥＳＮＥＲおよびＦ．ＤＡＮＧＡ
による、Ｈ２Ｓ生成を調べるための培地。

Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，７
６，２３９−２４４、１９５８。

次表７に示す培地は、参照文字で示す。

文字Ｗで示される培地はつぎのようである。

Ｗ−７：グルコースーペプトン寒天。

Ｗ−５：ニュトリエント寒天。

Ｗ−１２：卵アルブミン寒天。

Ｗ−２：グルコースーアスパラギン寒天。

Ｗ−３：グリセロールーアスパラギン寒天。

Ｗ−１０：殿粉一硝酸塩寒天。

Ｗ−１：スクロース含有ツアペツク合成寒天。

Ｗ−１９：殿粉一硝酸塩ブロス。

Ｗ−２７：ばれい上の培養。

Ｗ−２８：にんじん上の培養。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７
４６１の示す特徴を総合してみると、一般なリファレン
スマニュアルであるＭａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，第７版、１
９５７年および第８版、１９７４年および”Ｔｈｅ Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ”、Ｓ．Ａ．Ｗａｌｓｍａｎ
，ｌｈｅ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ
Ｃｏｍｐａｎｙ、（１９６１）に記載の種の示すいずれ
の特徴とも一致しない。

それで、それは新種と考えざるを得ない。

事実、Ｓ．ｇｙｐｓｅｕｓＤＳ２７４６１は白色の胞子
形成した気菌糸を与え、有機培地でメラミン色素を生成
せず、スパイラル状にコイルする胞子鎖を形成し、電子
顕微鏡で観察した胞子壁は平滑状である。

記載された種のうちもつとも類似するものとしては、 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｓがあるが、これ
は、さらに、上記した４つの特徴を示す。

さらに、無色からクリーム色または帯褐色までの範囲に
ありうる地中菌糸を形成し、そして、可溶性色素を形成
する時に、培地を帯褐色に着色する。

しかし、Ｓ．ａｌｂｕｓは、一般的に、いずれの培地に
おいても可溶性色素を与えず、時たま帯褐色の可溶性色
素を与えるのみであるのに、Ｓ．ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ
２７４６１は、はるかに一般的に、帯褐色から褐一灰ま
たは淡黄一褐色の、そして、時として、帯ピンク褐色の
可溶性色素を寒天培地に生ずる。

さらに、Ｓ．ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７４６１は、３，
ａｌｂｕｓとは逆に、ある種の寒天培地では、特に、グ
ルコースーペプトン寒天およびグリセロールーアスパラ
ギン寒天、そしてさらに、スキムミルク上に培養すると
、帯赤ピンク色から帯紫青色または紫色に部分的に着色
する傾向のある地中菌糸を生成する。

さらに注目さるべきこととして、Ｓ．ｇｙｐｓｅｕｓ
ＤＳ２７４６１は、ゲラチン上で明黄色可溶性色素を形
成し、スキムミルクはペプトン化も凝固もせず、スキム
ミルクのｐＨを１ケ月間でほとんど変化させず、そして
、にんじん上では、きわめて貧弱な発育しが示さない。

他方、Ｓ．ａｌｂｕｓは、ゲラチン上可溶性色素を形成
せず、スキムミルクを凝固しそしてすみやかにペプトン
化し、それをアルカリ性とし、にんじん上ですぐれた発
育を示す。

最後に、Ｓ．ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７４６１は、Ｌ−
アラビノース、Ｌ−ラムノース、ラフイノースおよびイ
ノシトールを利用しそしてサリシンを利用しないのに、
Ｓ．ａｌｂｕｓは、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース
、ラフイノースおよびイノシトールを用いないで、サリ
シンを利用する。

本発明によれば３７４５４ＲＰまたはそれの金属または
窒素含有塩基との塩は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｙ
ｐｓｅｕｓ ＤＳ２７４６１またはそれの生産性変異株
（つまり３７４５４ＲＰを生産しうる変異株）を、同化
しうる、炭素源、窒素源および無機物質源を含有する培
地中に好気的に培養し、そして生成した３７４５４ＲＰ
をそのままかまたはそれの塩として分離することにより
製造される。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７
４６１の培養は、好気的表面培養または深部培養のいず
れがで行ないうる。

しかし、後者が、便宜さの点で有利である。

この目的では、発酵工業でふつうに用いられる種々の型
の装置が用いられる。

特に、つぎの操作を、培養を実施するのに用いうる。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７
４６１一保存培養物 ↓ 寒天上の培養 ↓ シェーカーフラスコ中の培養 ↓ 発酵槽中の種培養 ↓ 発酵槽中の生産培養 培地は、本質的に、同化可能の炭素原、同化可能の窒素
原、無機成分を含有せねばならない。

そして適当とあれば、発育要素を含有せねばならぬ。

これらの構成成分は、明確な物質としてまたは複合混合
物として、たとえば種々の由来の生物生成物に存在する
形として添加しうる。

同化可能の炭素原としては、グルコースまたはスクロー
スのような炭水化物、または他の炭素含有物質たとえば
糖アルコール（たとえばマンニトール）を用いうる。

ある種の動物油または植物油たとえばラード油、大豆油
を、これらの種々炭素原に代て有利でありうるし、また
は、それらに追加して用いる。

同化可能の窒素原は広く変動する。

それらは、非常に簡単な物質たとえば無機または有機ア
ンモニウム塩、尿素およびある種のアミノ酸がありうる
。

窒素はまた、複合物質により添加しうる。特に蛋白質の
形態の窒素、たとえば、カゼイン，ラクトアルブミン、
グルテンおよびそれらの氷解生成物、落花生粉、魚粉、
肉エキス、酵母エキス、デイステイラースンルブル、お
よびコーンステイープリカーがある。

添加しうる無機成分のあるものは、緩衝または中和効果
を有する。

たとえば、リン酸アルカリ金属塩、リン酸アルカリ士金
属塩、または炭酸カルシウムまたは炭酸マグネシウムが
そうである。

他は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｎｓ Ｄ
Ｓ２７４６１の発育および３７４５４ＲＰの生産のため
に必要なイオン平衡を提供する。

たとえば、アルカリ金属およびアルカリ士金属のクロラ
イドおよびスルフエートがある。

最後に、それらの化合物のいくらかは、より特殊に、Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓＤＳ２７４６
１の代謝反応の活性化剤として作用する。

たとえば、亜鉛、コバルト、鉄、銅およびマンガンの塩
である。

発育要素は、ビタミン性の物質で、たとえば、リボフラ
ビン、葉酸、およびパントテン酸である。

培養出発時の培地のｐＨは、６．２から７．８のあいだ
とすべきで、なるべくは、６．６から７，４までとする
。

培養に至適の温度は２５から３０度Ｃまでであるが、２
３かも３３度Ｃまでのあいだでも、満足な結果が得られ
る。

培地への通気はむしろ広範囲に変動しうる。

しかし、毎分、ブロスｌリットルについて０．３から３
１ットルの通気が特に適尚であると分った。

３７４５４ＲＰの最大収量は、４から８日の培養で達成
される。

この時間は、本質的には、用いる培地で変動する。

以上から分るように、３７４５４ＲＰを生産するための
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７
４６１を培養する一般的条件は、広く変動可能で、特定
の条件に適応させて選びうる。

３７４５４ＲＰは発酵ブロスよりつぎのように分離され
うる。

ブロスは、酸性ｐＨ、一般的には２から５、なるべくは
約３で沢過助剤の存在でｒ過する。

フィルターケーキに保留された活性は、適当な有機溶媒
たとえばメタノールのような低級アルコールまたは塩化
メチレンのような塩素化溶媒で抽出する。

粗生成物は、減圧で濃縮したあとで結晶化により抽出物
より分離しうる。

適当とあれば、３７４５４ＲＰを溶解しない溶媒または
溶解しにくい溶媒を加えて溶液を冷却する。

３７４５４ＲＰは、酸かまたは塩の形かに応じて、便宜
な方法で精製しうる。

たとえば、再結晶または種々の吸着剤上のクロマトグラ
フイーまたは向流分配がある。

酸である３７４５４ＲＰをその塩のひとつに変えること
またはその逆、および塩を別の塩に変えることは、従来
法を用いて実施しうる。

使用しうる塩の例としては、ナトリウム塩およびカリウ
ム塩がある。

本発明はまた、その範囲に、同化可能の炭素原、同化可
能の窒素原および無機物質を含有し、他の微生物を本質
的に含有しない合成培地を包含する。

本発明を、つぎに実施例を用いて説明する。

例１ （ａ）発酵 つぎの材料を１７０リットルの発酵槽に添加する。

ペプトン １２００グ酵母エキス
６００ググルコース１水和物
１２００グ寒天
２４０ｖ水 １１０リッ
トルとする
に十分量培地のｐＨは１０規定水
酸化ナｇ潟ウム溶液（２５ＣＣ）を加えて７．０とする
。

１２２度Ｃで４０分蒸気滅菌する。

冷却したあと、ブロスの容量は、蒸気の凝縮があって１
２０リットルである。

ｐＨは６：８５となっている。培地には、Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｅｕｓ ＤＳ２７４６１のエル
レンマイヤーフラスコ振とう培養物２００ＣＣを接種す
る。

振とうし無菌空気を通気しながら３０度Ｃ２７時間培養
する。

ここで生産培養に接種する適当な状態となる。

生産培養は、つぎの材料を加えた８００リットル発酵槽
中で実施する。

コーンステイープリカー（５０ ８ｋ９ ％固型物含量） グルコース１水和物 １２ｋｇ 硫酸アンモニウム ０．８ｋｇ 水 ３７０リット ルとするに十 分量 １０規定水酸化ナトリウム溶液（９１０ＣＣ）を加えて
ｐＨを７．２０とする。

そのあとで炭酸カルシウム ３ｋｇ を加える。

ここで培地のｐＨは７．３０である。

培地は１２２度Ｃで４０分滅菌する。

冷却後、蒸気の凝縮で、培地の容量は４００リットルで
ある。

ｐＨは７，ＩＯである。

培地には、上記の、１７０リットル発酵槽よりの種培養
物（４０リットル）を接種する。

２７度Ｃで１１６時間、２０５ｒｐｍのかくはん下で、
２０立方米／時の滅菌空気通気でかくはんする。

この段階でのｐＨは７．９０で、ブロスの容量は４００
リットル。

スタフイロコツカスを用いる希釈法でブロスの抗生物質
活性は８６０単位／ＣＣ０ （ｂ）抽出 上記のようにえたブロス（４００リットル）に６規定硫
酸（６リットル）を加えてｐＨを３とし、３０分かくは
んする。

ｒ過助剤（２０ｋｇ）を加え、フィルタープレスでブロ
スを沢過し、沢塊をフィルター上で水（１００リットル
）で洗う。

６規定硫酸を加えてｐＨを３とする。ｒ液および洗液は
すてる。

Ｐ塊はメタノール（２３０Ｊットル）に分散させ、混合
物のｐＨを６規定水酸化ナトリウム溶液（１．１５リッ
トル）を加えて７．８とする。

混合物は３０分かくはんする。

混合物はフィルタープレス上でｒ過し、沢塊はフィルタ
ー上で、メタノールー水混合物（７５対２５容量比、１
００リットル）で洗う。

ｒ液および洗液を合併し減圧（５から１０ｍｍＨｇ）で
濃縮して、水溶液（１５リットル）とする。

濃縮液はプラス４度Ｃで１５時間放置すると沈殿を生ず
る。

沈殿は遠心して液を除き、減圧（１から５ｍｍＨｇ）で
３０度Ｃで１５時間乾燥する。

このようにして３７４５４ＲＰの粗ナトリウム塩（９０
ｇ）をうる。

（ｅ）精製 得られた粗生成物は塩化メチレン（２リットル）に溶解
する。

溶液は１時間かくはんする。不溶物は遠心して除去する
。

上清液は、減圧（５から１０ｍｍＨｇ）で蒸留濃縮し２
ｏｏｃｃとする。

ついでｎ−へキサン（１０リットル）に加える。

沈殿は遠心除去する。上清は減圧（５から１０ｍｍＨｇ
）で濃縮して８００ＣＣの容量とし、放置する。

プラス４度Ｃに４８時間放置してから、生成結晶を沢取
し、マイナス１０度Ｃのヘキサン（ＩＯＯＣＣ）で洗い
、３５度Ｃで減圧（５ｍｍＨｇ）で乾燥する。

ナトリウム塩の形状の３７４５４ＲＰの結晶（６１１）
をうる。

（ｄ）再結晶 上記に得られた結晶をアセトン（１．２リットル）に溶
解し、溶液は３０分かくはんする。

不溶物は遠心して除く。

塩酸で洗った脱色炭（５ｇ）を加える。

混合物はふたたび３０分かくはんし、最後に脱色炭を遠
心除去する。

おだやかに沢液をかくはんしておいて、蒸留水（６００
ＣＣ）を加える。

３７４５４ＲＰのナトリウム塩をプラス４度Ｃでゆっく
りと結晶化させる。

結晶は沢取し、アセトンと水との５０対５０容量比混合
物２００ｃｃで洗い、減圧３５度Ｃで乾燥する。

純３７４５４ＲＰ（４２ｇ）のナトリウム塩をうる。

本発明は、３７４５４ＲＰまたはそれの金属または窒素
含有塩基との無毒の塩の０．００５から９９．９重量％
および動物により摂取されうる物質とあわせて含有する
抗コクシジウム組成物を動物に給餌することを、その範
囲内に包含する。

このような組成物は、混合動物飼料または動物飼育のた
めの濃厚混合物で、３７４５４ＲＰまたはそれの金属ま
たは窒素含有塩基との塩および場合により他の抗コクシ
ジウム剤をあわせて含有する。

本明細書中で使用する“無毒の塩”の用語は、使用する
投与量で動物に無害な陽イオンの塩を意味する。

適当な効果を生ずるに必要な投与量は、飼料それ自体の
性質に応じて、かなり広い範囲に変動しうる。

一般的に、動物に与える飼料が、０．００５から０，０
４重量％の３７４５４ＲＰまたはそれと金属または窒素
含有塩基との塩を含有すれば十分である。

３７４５４ＲＰまたはそれの金属または窒素含有塩基と
の塩は、上記投与量で、完成した複合餌料中に均一に分
布させうる。

または、添加用の飼料中に、もつともしばしば、ビタミ
ンおよび無機塩といった他の添加物とあわせて分配させ
うる。

これらの添加用の飼料は、通常飼料と混合して（ふつう
５から２０％）与えるかまたはそのままで与える。

完成した飼料を調製するのに用いるプレミックスまたは
添加用の飼料は、ふつう、０，０５から２０重量％の３
７４５４ＲＰまたはそれの金属または窒素含有塩基との
無毒の塩を、食用しうるイクステングーで希釈含有する
。

これらは、飼料中に活性物質を均一に分布さすことを容
易とする、便宜な中間体である。

プレミックス自体は、一般的に、９９、９から２０％の
３７４５４ＲＰまたはそれの金属または窒素含有塩基と
の無毒の塩を含有する濃縮物に、食用染料、風味剤、分
散剤または抗凝集剤および可食性の増量剤を加えて調製
しうる。

濃縮物およびプレミックスは一般的に粉末である。

添加用飼料および完全複合飼料は、常法で調製の粉末か
または力粒状でありうる。

つぎの例で本発明に準ずる組成物を説明する。

例２ つぎの組成の基礎飼料を調製する。

穀物の２級品 １３．４１％大麦粉
１３．４１％とうもろこし粉
１３．４１％小麦粉 ３１．３２
％魚粉 ８．９２％大豆粉
８、９２％乾燥飼い葉
４．５６％酵母エキス ２．３
３％乾燥ミルク粉 ２．６８％塩化ナト
リウム ０．０９％塩化カルシウム
０．８９％無機成分 ０．
０６％ビタミン複合物： ビタミンＡ ４０００ Ｉ．Ｕ．／ｋｇビタミンＤ３
１０００ Ｉ．Ｕ．／ｋｇコリン塩化物 １１
．５ｎ９／ｌｖリボフラビ塔 ２．２４ｎ９７ｋ
９０．０２％の３７４５４ＲＰを加えて均一に分配させ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は３７４５４ＲＰの赤外部スペクトルを示す。 第２図は、３７４５４ＲＰのプロトン核磁気共鳴スペク
トルを示す。 第３図は、３７４５４ＲＰの＋３Ｃ核磁気共鳴スペクト
ルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 を有する、３７４５４ＲＰと称する抗コクシジウム物質
   およびその金属塩および窒素含有塩基との塩。 ２ ３７４５４ＲＰのナトリウム塩である特許請求の範
   囲第１項記載の化合物。 ３ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｕｓ ＤＳ２
   ７４６１ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｙｐｓｕｓ （ＮＲＲｔ１１１６８）（微工研寄託番号第４６５２号
   ）またはその生産性変異株を、炭素、窒素および無機物
   質の同化可能の供給層を含有する培地中に好気的に培養
   し、培養で生成した３７４５４ＲＰを、そのままかまた
   は塩として分離することを特徴とする、３７４５４ＲＰ
   またはその金属塩または窒素含有塩基との塩の製造方法
   。 ４ ２３から３３度Ｃまでの温度で、６，２から７．８
   の開始時のｐＨで、深部好気条件で培養を行なう、特許
   請求の範囲第３項記載の方法。 ５ 開始時の培地のｐＨが６．６から７．４である、特
   許請求の範囲３項または４項記載の方法。 ６ ２５から３５度Ｃで培養を行なう、特許請求の範囲
   第３から第５項のいずれが１項に記載の方法。 ７ 毎分ブロス１リットルについて０．３から３リット
   ルの割合で培地に通気する、特許請求の範囲第３項から
   第６項のいずれか１項に記載の方法。 ８ ４から８日間培養を行なう、特許請求の範囲第３項
   から第７項までのいずれか１項に記載の方法。 ９ Ｐ過助剤の存在で酸性のｐＨで培地を沢過し、炭素
   原子１〜４個の低級アルコールまたは塩素化溶媒を用い
   て結晶化により沢塊より３７４５４ＲＰを抽出し、そし
   て、抽出物を減圧で濃縮し、そして要すれば、３７４５
   ４ＲＰを溶解しにくい溶媒または溶解しない溶媒を加え
   て、その溶液を冷却することを特徴とする、特許請求の
   範囲第３項から第８項までのいずれか１項に記載の方法
   。 １０ 培地を２から５のｐＨで沢過し、そして低級アル
   コールがメタノールであるかまたは塩素化溶媒が塩化メ
   チレンである、特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１ ３７４５４ＲＰをナ｝Ｉウム塩の形で分離する、
   特許請求の範囲第３項から第１０項までのいずれか１項
   に記載の方法。 １２ ３７４５４ＲＰまたはその金属または窒素含有塩
   基との無毒の塩の０．００５から９９．９重量％と、動
   物により摂取されうる物質とを含有する、動物飼料用添
   加剤。 １３ ３７４５４ＲＰまたはその金属または窒素含有塩
   基との無毒性塩の０．００５から０．０４重量％および
   動物飼料を含有する特許請求の範囲第１２項記載の添加
   剤。 １４ ３７４５４ＲＰまたはその金属または窒素含有塩
   基との無毒性塩の０．０５から２０重量％と可食性増量
   剤とを含有する、特許請求の範囲第１２項記載の添加剤
   。 １５ ３７４５４ＲＰまたはその金属もしくは窒素含有
   塩基との無毒性塩の２０から９９，９重量％および食用
   変性剤を含有する特許請求の範囲第１２項記載の添加剤
   。