MXPA06013755A - Formulacion de estabilidad incrementada que contiene biomolecula. - Google Patents

Abstract

Una formulacion en suspension para uso terapeutico incluye un vehiculo hidrofobico no acuoso que presenta caracteristicas de fluido viscoso, una formulacion en particulas solidas que comprende una biomolecula dispersa en el vehiculo, y un agente tensioactivo incorporado en por lo menos uno del vehiculo hidrofobico y formulacion en particulas secas; una formulacion en particulas secas incluye un interferon, un regulador de pH, un agente tensioactivo, y uno o mas estabilizadores seleccionados del grupo que consiste de un carbohidrato, un antioxidante, y un aminoacido.

Description

FORMULACIÓN DE ESTABILIDAD INCREMENTADA QUE CONTIENE BIOMOLECULA ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La invención se refiere generalmente a formulaciones que se pueden suministrar mediante sistemas de liberación sostenida, tales como dispositivos de suministro de fármaco implantables e inyecciones de deposición. Los interferones son un grupo de citocinas de glicoproteína producidas por las células en respuesta a varios estímulos, tales como la exposición a virus, bacterias, parásitos u otro antígeno. Los interferones tienen actividades antivirales, inmunomoduladoras y antiproliferativas. Los interferones se clasifican como tipo I o tipo II. Los interferones clasificados como tipo I se unen a un receptor común llamado el interferón tipo I o un receptor ß y son producidos por leucocitos, fibroblastos o linfoblastos en respuesta a virus o inductores de interferón. El interferón tipo I incluye interferón alfa (IFN-a), interferón beta (IFN-ß), e interferón omega (IFN-?), pero el IFN-? tiene homología limitada a IFN-a humano (aproximadamente 60%) y IFN-ß humano (aproximadamente 29%). Los interferones clasificados como tipo II son producidos por linfocitos T. El interferón tipo II incluye interferón gamma (IFN-?). Los interferones se usan para tratamiento de hepatitis viral, esclerosis múltiple y ciertos cánceres. El IFN-? en particular ha sido indicado para tratamiento de poblaciones de hepatitis B y C. La forma inyectable de IFN-? está actualmente en estudios clínicos de fase II. Esta forma inyectable es a base de solución y no se formula para suministro sostenido. Hay interés en suministrar ¡nterferones a pacientes de una manera controlada durante un período prolongado sin intervención. Por ejemplo, el suministro sostenido de IFN-? puede mejorar el efecto terapéutico de IFN-? por reducción o eliminación de efectos relacionados con el nivel en el plasma pico de inyecciones de bolo múltiples, reduciendo así al mínimo potencialmente los efectos colaterales sistémicos tales como fatiga y síntomas similares a los de la influenza. El suministro sostenido de un agente benéfico sin intervención puede ser provisto por dispositivos de suministro de fármaco implantables, v.gr., implantes de bomba osmótica, mecánica o electromecánica, e inyecciones de deposición. Los dispositivos de suministro de fármaco implantables son atractivos por un número de razones. Por ejemplo, los dispositivos de suministro de fármaco implantables se pueden diseñar para proveer dosis terapéuticas del fármaco durante períodos de semanas, meses o incluso un año. Las inyecciones de deposición típicamente proveen dosis terapéuticas durante períodos de semanas. Los dispositivos de suministro de fármaco implantables una vez insertados proveen dosis terapéuticas durante períodos de semanas. Los dispositivos de suministro de fármaco implantables una vez insertados en el paciente no son fácilmente manipulados indebidamente por el paciente. Por lo tanto, el acatamiento por el paciente es generalmente asegurado. El suministro sostenido de un interferón requiere que el interferón sea contenido dentro de una formulación que es sustancialmente estable a temperatura elevada, v.gr., 37°C o mayor, durante la vida de funcionamiento del dispositivo de fármaco de suministro implantable. El interferón es una biomolécula, específicamente una proteína. Hablando en términos generales, las formulaciones de proteína que son estables a temperatura elevada por una duración larga, v.gr., semanas, meses o un año, son difíciles de diseñar. Las proteínas son naturalmente activas en ambientes acuosos. Por lo tanto, sería conveniente formular proteínas como soluciones acuosas. Infortunadamente, las proteínas son típicamente sólo marginalmente estables en formulaciones acuosas por una duración larga. Una razón de esto es que las proteínas se pueden degradar mediante un número de mecanismos, tales como desamidación (usualmente por hidrólisis), oxidación, intercambio de disulfuro, y racemización, y el agua es un reactivo en muchas de estas vías de degradación. El agua también actúa como un plastificante y facilita la desnaturalización y/o agregación de moléculas de proteína. Las formulaciones de proteína acuosas se pueden reducir a formulaciones de proteína en partículas secas usando técnicas de secado tales como secado por congelamiento (o liofilización), secado por aspersión, y desecación. Dichas formulaciones de proteína en partículas secas pueden presentar estabilidad significativamente incrementada con el tiempo a temperatura ambiente e incluso elevada. Sin embargo, es difícil suministrar de manera controlable formulaciones en partículas secas de un dispositivo de suministro de fármaco implantable a una velocidad de flujo deseada. Se ha sugerido suspender la formulación de proteína en partículas secas en un vehículo fluidizable no acuoso. Preferiblemente, el vehículo de suspensión tiene una alta viscosidad, v.gr., 1 kP o más, por lo que las partículas son sustancialmente dispersas uniformemente en la suspensión por una duración deseada. Además, la formulación en suspensión debe ser estable en condiciones de almacenamiento y suministro por la duración deseada y mantiene su capacidad de flujo para la vida de funcionamiento del dispositivo de suministro de fármaco implantable. Los vehículos en suspensión no acuosos para agentes benéficos de suministro mediante dispositivos de suministro de fármaco implantables se han descrito en la literatura. Por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5,904,935 (Eckenhoff et al.) enseña vehículos de suspensión no acuosa que incluyen ceras que tienen una temperatura de reblandecimiento a temperatura corporal o menor que ésta, aceites vegetales hidrogenados, aceite de silicio, monoglicéridos de ácido graso de cadena mediana y polioles. La viscosidad de estos vehículos de suspensión se puede incrementar a un nivel deseado usando agentes espesantes tales como hidrogeles, como éteres de celulosa, v.gr., hidroxipropilcelulosa y povidona. La patente de E.U.A. No. 6,264,990 (Knepp et al.) describe vehículos de suspensión no acuosos, anhidros, apróticos, hidrofóbicos, no polares con baja reactividad. Ejemplos de dichos vehículos incluyen perfluorodecalina, metoxiflurano y perfluorotributilamina.

Materiales poliméricos, tales como polivinilpirrolidona (PVP), también se pueden usar como vehículos de suspensión. La publicación de patente de E.U.A. No. US-2004-0224903-A1 , describe vehículos de suspensión hechos de composiciones fluidizables, viscosas de una sola fase que están sustancialmente formadas por materiales no poliméricos hidrofóbicos. Los materiales no poliméricos usados en la formación de estos vehículos de suspensión incluyen, pero no se limitan a, materiales de sacárido hidrofóbicos, organogeles, o materiales lipidíeos que se comportan como vehículos de una sola fase. De conformidad con la publicación, materiales de sacáridos ilustrativos que se pueden usar en la formulación de un vehículo de suspensión incluyen, pero no se limitan a, esteres de sacarosa sustituidos que existen como fluidos a temperaturas ambiente o fisiológica, tales como isobutirato-acetato de sacarosa (SAIB). Estos materiales no poliméricos permiten que la formulación de suspensiones de proteína no sólo sea únicamente estable a temperaturas ambiente y fisiológica sino también que sea capaz de mantener una dispersión sustancialmente uniforme de las partículas de proteína. Los vehículos hidrofóbicos, tales como SAIB, particularmente cuando se usan sin añadir excipientes, pueden comportarse como una deposición en presencia de un medio hidrofílico. Esto significa que la proteína suspendida en el vehículo no fuera instantáneamente liberada del vehículo en presencia del medio hidrofílico. Para aplicaciones de inyección de deposición, el efecto de deposición del vehículo de suspensión es típicamente deseable.

Para dispositivos de suministro implantables, cuando el vehículo de suspensión se comporta como una deposición en el medio de liberación, e control de liberación por el vehículo de suspensión es acumulativo al control de liberación por el dispositivo de suministro. Este control de liberación adicional por el vehículo de suspensión puede o no ser deseable dependiendo de la aplicación. No obstante, la liberación no instantánea de la proteína desde el vehículo de suspensión sólo sería aceptable si la proteína fuera estable en el vehículo en presencia del medio de liberación y durante la transición del vehículo de suspensión al medio de liberación. A partir de lo anterior, se sigue deseando formulaciones estables mejoradas de biomoléculas, particularmente proteínas, muy particularmente interferones, que pueden ser suministradas mediante un sistema de suministro sostenido, tal como un dispositivo de suministro de fármaco implantable o inyección de deposición.

BREVE DESCRIPCIÓN INVENCIÓN En un aspecto, la invención se refiere a una formulación en suspensión para uso terapéutico que comprende un vehículo hidrofóbico no acuoso que presenta características de fluido viscoso, una formulación en partículas sólidas que comprende una biomolécula dispersa en el vehículo, y un agente tensioactivo incorporado en por lo menos uno del vehículo hidrofóbico y formulación en partículas secas.

En otro aspecto, la invención se refiere a una formulación en partículas secas que comprende un interferón, un regulador de pH, un agente tensioactivo, y uno o más estabilizadores seleccionados del grupo que consiste de un carbohidrato, un antioxidante, y un aminoácido. En otro aspecto más, la invención se refiere a un dispositivo de suministro implantable que comprende una formulación en suspensión que comprende un vehículo hidrofóbico no acuoso que presenta características de fluido viscoso, una formulación en partículas secas que comprende un interferón disperso en el vehículo, y un agente tensioactivo incorporado en por lo menos uno del vehículo y formulación en partículas secas. El dispositivo de suministro implantable además incluye un depósito que contiene la formulación de suspensión en una cantidad suficiente para proveer suministro continuo del interferón en una dosis terapéuticamente efectiva en un ambiente de uso durante por lo menos un mes. En otro aspecto, la invención se refiere a un método para incrementar la liberación de interferón omega en un medio de velocidad de liberación hidrofílico que comprende suspender una formulación en partículas secas de interferón omega en un vehículo hidrofóbico no polimérico y que incorpora un agente tensioactívo en por lo menos una de la formulación en partículas secas y el vehículo hidrofóbico. Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra una imagen de microscopio electrónico de barrido (SEM) de partículas de IFN-? secadas por aspersión de conformidad con una modalidad de la invención. La figura 2 muestra una imagen de SEM de partículas de IFN-? secadas por aspersión con Pluronic F68. La figura 3 muestra una fracción de IFN-? recuperada de fase acuosa con el tiempo a 37°C. La figura 4 muestra IFN-? total recuperadas de fases acuosa y sólida con el tiempo a 37°C.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención se describirá ahora con detalle haciendo referencia a algunas modalidades preferidas, como se ilustra en los dibujos anexos. En la siguiente descripción, se exponen numerosos detalles específicos a fin de proveer una amplia comprensión de la invención. Sin embargo, será evidente para un experto en la técnica que la invención se puede poner en práctica sin algunos o todos estos detalles específicos. En otros casos, las características y/o pasos de procedimiento bien conocidos no se han descrito con detalle ahora para no oscurecer innecesariamente la invención. Las características y ventajas de la invención se puede entender mejor con referencia a los dibujos y discusiones que siguen. La invención provee formulaciones que incluyen biomoléculas que se pueden suministrar mediante sistemas de suministro sostenido, en particular dispositivos de suministro de fármaco ¡mplantables y posiblemente inyecciones de deposición. Las biomoléculas consideradas aquí son aquellas que pueden proveer un beneficio terapéutico a un sujeto animal o humano y presentan estabilidad incrementada cuando se formulan en una suspensión no acuosa. Las biomoléculas consideradas aquí son generalmente degradables en agua pero generalmente estables como partículas secas a temperaturas ambiente y fisiológica. Ejemplos de biomoléculas incluyen, pero no se limitan a, péptidos, polipéptidos, proteínas, aminoácidos, nucleótidos, polímeros de residuos de aminoácidos o residuos de nucleótidos, hormonas, virus, anticuerpos que se derivan naturalmente, se producen sintéticamente, o se producen recombinantemente, proteínas conjugadas, tales como lipoproteínas y formas post-traduccionalmente modificadas, v.gr., proteínas glicosiladas, y proteínas que tienen D-aminoácidos, aminoácidos modificados, derivados o que no ocurren naturalmente en la configuración D o L y/o unidades peptomiméticas como parte de su estructura. Ejemplos específicos de biomoléculas que pueden proveer un efecto terapéutico incluyen, pero no se limitan a, baclofen, GDNF, factores neurotróficos, conatoncina G, Ziconotida, clonidina, axocina, oligonucleótidos antisentido, hormona adrenocorticotrópica, angiotensina I y II, péptido natriurético atrial, bombesina, bradiquinina, calcitonina, cerebelina, dinorfina N, endorfina alfa y beta, endotelina, encefalina, factor de crecimiento epidermal, fertirelina, péptido de liberación de gonadotropina folicular, galanina, glucagon, gonadorelina, gonadotropina, goserelina, péptido de liberación de hormona de crecimiento, histrelina, insulina, interferones, leuprólido, LHRH, motilina, nafarerlina, neurotensína, oxitocina, relaxina, somatostatina, sustancias P, factor de necrosis tumoral, triptorelina, vasopresina, hormona de crecimiento, factor de crecimiento de nervio, factores de coagulación de la sangre, ribozimas y oligonucleótidos antisentido. Análogos, derivados, antagonistas, agonistas y sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de los agentes de los agentes antes mencionados también se pueden usar en formulaciones de la invención. De particular interés en esta invención son interferones. Los interferones pueden ser moléculas recombinantes que pueden activar el receptor de interferón tipo I (receptor a-ß) o receptor de interferón tipo II. Estas moléculas recombinantes pueden o no contener homología de secuencia a interferones tipo I o tipo II humanos nativos. Los interferones de conformidad con modalidades de la invención pueden ser seleccionados del grupo que consiste de proteínas que tienen la actividad biológica de interferón humano recombinante, análogos de interferón, isoformas de interferón, miméticos de interferón, fragmentos de ¡nterferón, proteínas de interferón híbridas, oligómeros de proteína de fusión y multímeros de los anteriores, homólogos de los anteriores, variantes de patrón de glicosilación de los anteriores, muteínas de los anteriores, y moléculas de interferón que contienen las modificaciones menores enumeradas anteriormente. Los interferones de conformidad con la invención no estarán limitados por el método de síntesis o fabricación e incluirán aquellos sintetizados o fabricados por métodos recombinantes (ya sea producidos de ADNc o ADN genómico), sintéticos, transgénicos y activados por genes. Ejemplos específicos de interferones incluyen, pero no se limitan a, IFN-a, IFN-ß, IFN-? y EFN-?. Las modalidades de la invención proveen formulaciones en partículas secas que incluyen biomoléculas. Las formulaciones en partículas secas de la invención tienen un contenido de humedad bajo, típicamente menor que 5 % en peso. De conformidad con una modalidad de la invención, una formulación en partículas secas incluye un interferón como se describió antes. La formulación de interferón en partículas secas también incluye estabilizadores. En una modalidad, los estabilizadores incluyen un carbohidrato, un antioxidante y/o aminoácido. La formulación de interferón en partículas secas también incluye un regulador de pH. Las cantidades de estabilizadores y regulador de pH en la formulación en partículas secas se puede determinar experimentalmente con base en las actividades de los estabilizadores y reguladores de pH y las características deseadas de la formulación. En una modalidad, la cantidad de carbohidrato en la formulación se determina por enfoques de agregación. En general, el nivel de carbohidrato no debe ser demasiado alto como para evitar promover el crecimiento de cristales en presencia de agua debido al exceso de carbohidrato no unido a interferón. En una modalidad, la cantidad de antioxidante en la formulación es determinado por enfoques de oxidación. En una modalidad, la cantidad de aminoácido en la formulación es determinada por enfoques de oxidación y/o formabilidad de partículas durante el secado por aspersión. En una modalidad, la cantidad de regulador de pH en la formulación es determinada por enfoques de pre-procesamiento, enfoques de agregación y formabilidad de partículas durante el secado por aspersión. El regulador de pH puede estabilizar el interferón durante el procesamiento, v.gr., secado por aspersión, cuando todos los excipientes son solubilizados. En general, demasiado regulador de pH puede producir un sistema regulador de pH en presencia de agua, que entonces puede conducir a cristalización. Ejemplos de carbohidratos que se pueden incluir en la formulación en partículas secas incluyen, pero no se limitan a, monosacáridos, tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa y sorbosa, disacáridos, tales como lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa, polisacáridos, tales como rafinosa, melezitosa, maltod extrinas, dextranos y almidones, y alditoles (polioles acíclicos), tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol sorbitol, piranosilsorbitol y mioinsitol. Los carbohidratos preferidos incluyen azúcares no reductores, v.gr., sacarosa, trehalosa, manitol y dextranos. Ejemplos de antioxidantes que se pueden incluir en la formulación en partículas secas incluyen, pero no se limitan a, metionina, ácido ascórbico, tiosulfato de sodio, catalasa, platino, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido cítrico, cisteína, tioglicerol, tioglicólico, tiosorbitol, hidroxanisol butilado, hidroxiltolueno butilado, galato de propilo.

Ejemplos de aminoácidos que se pueden incluir en la formulación en partículas secas incluyen, pero no se limitan a, arginina, metionina, glicina, histidina, alanina, L-leucina, ácido glutámico, Iso-leucina, L-treonina, 2-fenilamina, valina, norvalína, pralina, fenilalanina, tritofano, serina, asparaginas, cisteína, tirosina, lisina y norleucina. Los aminoácidos preferidos incluyen aquellos que se oxidan fácilmente, v.gr., cisteína, metionina y tritofano. Ejemplos de reguladores de pH que se pueden incluir en la formulación en partículas secas incluyen, pero no se limitan a, citrato, histidina, succinato, fosfato, maleato, tris, acetato, carbohidrato y gly-gly. Los reguladores de pH preferidos incluyen citrato, histidina, succinato y tris. La formulación en partículas secas puede incluir otros excipientes seleccionados de, por ejemplo, agentes tensioactivos, agentes formadores de cuerpo y sales. Ejemplos de agentes tensioactivos incluyen, pero no se limitan a, Polysorbate 20, Polysorbate 80, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68 y docecilsulfato de sodio (SDS). Ejemplos de agentes formadores de cuerpo incluyen, pero no se limitan a, manitol y glicina. Ejemplos de sales incluyen, pero no se limitan a, cloruro de sodio, cloruro de calcio y cloruro de magnesio. Posibles ventajas de incorporación de un agente tensioactivo en la formulación en partículas secas se describirá posteriormente en esta descripción. El cuadro 1 siguiente muestra intervalos de composición de la formulación en partículas de proteína de conformidad con algunas modalidades de la invención. En una modalidad, una formulación de interferón en partículas secas incluye 1 :2:1 :1.5-2.5 interferón: carbohidrato: antioxidante y/o aminoácido: regulador de pH. Un ejemplo de una formulación de interferón en partículas secas es 1 :2:1 :1.5-2.5 IFN-?: sacarosa: metionina: citrato. En otro ejemplo específico, una formulación de interferón en partículas secas incluye 1 :2:1 :1.5-2.5:0.06 interferón: carbohidrato: antioxidante y/o aminoácido: regulador de pH: agente tensioactivo.

CUADRO1 Formulaciones en partículas secas de conformidad con modalidades de la invención se pueden preparar mediante secado por aspersión, liofilización, u otra técnica disponible en la técnica para formar partículas a partir de una mezcla de componentes. Un procedimiento de secado por aspersión típico puede incluir cargar una solución de aspersión que contiene una proteína y excipientes estabilizadores en una cámara de muestra, que se puede mantener en refrigeración a temperatura ambiente. La refrigeración generalmente promueve estabilidad de la proteína. Una bomba de alimentación después rocía la solución de aspersión en un atomizador de boquilla. Al mismo tiempo, el gas atomizado (típicamente, aire, nitrógeno o gas inerte) es dirigido en la salida del atomizador de boquilla para formar una niebla de gotas de la solución por aspersión. La niebla de gotas son llevadas a contacto inmediatamente con un gas de secado en una cámara de secado. El gas de secado remueve solvente de las gotas y porta las partículas secas en una cámara de recolección. Las formulaciones en suspensión de conformidad con modalidades de la invención se preparan incorporando formulaciones en partículas secas de conformidad con modalidades de la invención en vehículos hidrofóbicos no acuosos. Los vehículos hidrofóbicos no acuosos pueden ser cualquier combinación de solvente, polímero líquido o no líquido, material no polimérico líquido o no líquido, y agente tensioactivo. En una modalidad, un vehículo hidrofóbico no acuoso usado en una formulación en suspensión de la invención es biodegradable, es decir, se desintegra o se rompe durante un período en respuesta a un ambiente biológico. Este rompimiento puede tener lugar por uno o más procedimientos físicos o químicos, tales como por acción enzimática, oxidación, reducción, hidrólisis (v.gr., proteólisis), desplazamiento o disolución por solubilización, emulsión o formación de micelas. En una modalidad, los componentes del vehículo se seleccionan de tal manera que el vehículo tenga una viscosidad en un intervalo de 1 kP a 1 ,000 kP, preferiblemente 5 kP a 250 kP, muy preferiblemente 5 kP a 30 kP. En una modalidad, para mantener la estabilidad de la biomolécula a temperatura elevada, v.gr., 37°C o mayor, durante un período, los componentes del vehículo se escogen de tal manera que el vehículo no reaccione con la biomolécula. Los componentes del vehículo se pueden escoger de tal manera que el vehículo tenga poca o nada de solubilidad para la biomolécula seleccionada y excipientes en partículas, manteniendo así la biomolécula seleccionada y excipientes como partículas secas, logrando así estabilidad de la biomolécula seleccionada. En otra modalidad, una formulación en suspensión se hace suspendiendo una formulación en partículas secas de conformidad con una modalidad de la invención en un vehículo hidrofóbico no acuoso de una sola fase incluyendo un material no polimérico. Ejemplos de materiales no poliméricos adecuados para usarse incluyen, pero no se limitan a, materiales de sacárido hidrofóbicos, organogeles o materiales lipidíeos que se comportan como vehículos de una sola fase, v.gr., geles lipidíeos tales como dioleoil-fosfatidilcolina (DOPC). Materiales de sacárido ilustrativos incluyen, pero no se limitan a, esteres de sacarosa que existen como fluidos a temperatura ambiente o fisiológica, tal como acetato-isobutirato de sacarosa (SAIB). El vehículo puede o no incluir uno o más solventes. Por ejemplo, SAIB, un material no polimérico líquido, se puede usar en forma "neta," es decir, sin la adición de otros excipientes. Ejemplos de solventes para crear vehículo de gel lipídico (con DOPC) incluyen, pero no se limitan a, n-metilpropanol, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, aceite de frijol de soya, vitamina E, aceite de ricino, Polysorbate 80, y N-dimetilacetamida. El vehículo hidrofóbico no acuoso de una sola fase anteriormente descrito también puede incluir excipientes tales como agentes tensioactivos, conservadores y estabilizadores. Los agentes tensioactivos se pueden incluir en el vehículo para facilitar la liberación de la biomolécula del vehículo una vez que la formulación es suministrada a un ambiente de uso o para ayudar a mantener la estabilidad de la biomolécula cuando la biomolécula es suspendida en el vehículo. En donde se incluyen, los agentes tensioactivos típicamente representarán menos de 20% en peso, preferiblemente menos de 10% en peso, muy preferiblemente menos de 5% en peso del vehículo. Generalmente, los conservadores se incluyen en el vehículo sólo en cantidades suficientes para lograr el efecto conservador deseado. Ejemplos de agentes tensioactivos que se pueden usar en el vehículo incluyen, pero no se limitan a, Tweens, Pluronics, Span 20, Span 40, Span 60, Span 80, caprilato de glicerilo, laurato de glicerilo, glicéridos de ácido caprílico de PEG-8, oleato de poliglicerilo-6, dioctilo-sodio, sulfosuccinato y Vitamina E TPGS. Los conservadores que se pueden usar en el vehículo incluyen, por ejemplo, antioxidantes y agentes antimicrobianos. Ejemplos de antioxidantes potencialmente útiles incluyen, pero no se limitan a, tocoferol (vitamina E), ácido ascórbico, palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitouleno butilado, y galato de propilo. En una modalidad, una formulación en suspensión de conformidad con una modalidad de la invención incluye una formulación de interferón en partículas secas, como se describió antes, suspendida en un vehículo hidrofóbico no acuoso. Cantidades variables de la formulación de interferón en partículas secas se pueden cargar en el vehículo para proveer una formulación que permite la dosificación del interferón a una velocidad deseada durante un período escogido. La formulación en suspensión puede incluir 0.1 a 40% en peso, preferiblemente 0.1 a 20% en peso, de un interferón. La formulación en suspensión puede incluir más que 60% en peso, preferiblemente más que 80% en peso, del vehículo de suspensión. Las formulaciones en suspensión de conformidad con modalidades de la invención se pueden formular para suministrarse desde un dispositivo de suministro de fármaco implantable o para usarse como una inyección de deposición. El dispositivo de suministro de fármaco implantable puede ser modalizado por cualquier dispositivo capaz de suministrar una formulación fluidizable a una velocidad controlada durante un período sostenido después de la implantación en un sujeto. Un ejemplo de un dispositivo de suministro de fármaco implantable adecuado es un implante de bomba osmótica, tal como está disponible bajo el implante con nombre comercial DUROS®. También se pueden usar implantes que no son de bomba osmótica. La formulación en suspensión se puede formular para suministrar a velocidades de flujo de hasta 5 ml/día, dependiendo de la biomolécula que ha de ser suministrada y el dispositivo de suministro de fármaco implantable usado para suministrar la formulación de suspensión. En donde la biomolécula es suministrada desde un implante de bomba osmótica diseñado para proveer velocidades de flujo bajas, la formulación preferiblemente se formula para el suministro de entre 0.5 y 5 µl/día, siendo particularmente preferidas las velocidades de flujo de aproximadamente 1.5 µl/día y 1.0 µl/día, En una modalidad, una formulación en suspensión de conformidad con una modalidad de la invención se formula para suministrar interferón desde un dispositivo implantado en un intervalo de 1 ng/día a 600 µg/día durante un mes, preferiblemente durante tres meses, muy preferiblemente durante un año. Como se describió anteriormente, los vehículos hidrofóbicos no acuosos se pueden comportar como una deposición cuando es liberado en un medio hidrofílico. Este efecto de deposición puede o no ser deseable dependiendo de la aplicación. Sin embargo, en donde el efecto de deposición es deseable o aceptable, es importante que la biomolécula suspendida en el vehículo hidrofóbico permanezca estable en el vehículo hidrofóbico en presencia del medio hidrofílico y durante la liberación del vehículo hidrofóbico en el medio hidrofílico. Los inventores han encontrado que la adición de una pequeña cantidad de agente tensioactivo directamente en las formulaciones en partículas secas de la invención y/o en vehículos hidrofóbicos que incorporan las formulaciones en partículas secas de la invención pueden incrementar la estabilidad de las biomoléculas en las formulaciones en partículas secas a medida que las formulaciones en partículas secas son liberadas de los vehículos hidrofóbicos en los medios hidrofílicos. Aunque no se desea estar limitado por la teoría, los inventores creen que la adición de la pequeña cantidad de agente tensioactivo directamente en las formulaciones en partículas secas o vehículos de suspensión de la invención pueden haber modificado el comportamiento interfacial de las biomoléculas en las formulaciones en partículas secas, conduciendo a reducción en la desnaturalización y agregación de las biomoléculas como la transición de biomoléculas de un vehículo hidrofóbico en un medio hidrofílico. En particular, los agentes tensioactivos pueden haber ayudado a formar partículas que tienen excipientes más hidrofóbicos en el exterior y excipientes más hidrofílicos en el interior. Esta distribución biomolecular puede haber jugado un papel importante en la estabilidad de la biomolécula durante la liberación del vehículo hidrofóbico en el medio hidrofílico. Los agentes tensioactivos que se pueden incorporar en formulaciones en partículas secas y/o vehículos de suspensión de conformidad con modalidades de la invención pueden ser iónicos o no iónicos. Algunos ejemplos de agentes tensioactivos incluyen, pero no se limitan a, Polysorbate 20, Polysorbate 80, Tweens, Pluronic F68, dodecilsulfato de sodio (SDS), Span 20, Span 40, Span 60, Span 80, Vitamina E TPGS, caprilato de glicerilo, laurato de glicerilo, glicéridos caprílico-cápricos de PEG-8, oleato de poliglicerilo-6, Pluronics y sulfosuccinato de dioctilisodio. El cuadro 2 siguiente muestra la carga de agente tensioactivo para formulaciones en partículas secas y vehículos de suspensión de conformidad con algunas modalidades de la invención.

CUADRO 2 Se condujo un estudio para evaluar el efecto del agente tensioactivo sobre la liberación de formulaciones de interferón en partículas secas de conformidad con modalidades de la invención de vehículos hidrofóbicos en medio de velocidad de liberación hidrofílico. En el estudio, el vehículo hidrofóbico es SAIB y el medio de velocidad de liberación hidrofílico es solución reguladora de pH de fosfato. SAIB es un líquido hidrofóbico de alta viscosidad con solubilidad en agua limitada. Tiene una viscosidad de aproximadamente 3.2 kP a 370C. SAIB es producido por esterificación controlada de azúcar natural (sacarosa) con anhídridos acético e isobutírico. Los materiales usados para el estudio se listan en el cuadro 3 siguiente.

CUADRO 3 EJEMPLO 1 Partículas sólidas de omega-interferón se obtuvieron mediante secado por aspersión de IFN-? con sacarosa y metíonina a partir de una solución 25 mM de citrato con una concentración de solución que contenía 3.3, 6.6, 3.3 y 7.1 mg/ml de IFN-?, sacarosa, metionina y citrato, respectivamente para dar una composición final de 1 :2:1 :2.15 (IFN-?: sacarosa: metionina: citrato). La imagen de SEM de las partículas se muestra en la figura 1. El tamaño de partícula promedio es 6.51 µm.

EJEMPLO 2 Partículas sólidas de IFN-? con 1% de agente tensioactivo Pluronic F68 se obtuvo mediante secado por aspersión de IFN-? con sacarosa y metionina y Pluronic F68 (copolímero de óxido de polietileno-óxido de polipropileno) a partir de solución de citrato 25 mM con una concentración de solución que contenía 3.3, 6.6, 3.3 7.1 y 0.2 mg/ml de IFN-?, sacarosa, metionina, citrato y Pluronic F68, respectivamente para dar una composición final de 1 :2:1 :2.15:0.06 (IFN-?: sacarosa: metionina: citrato: Pluronic F68). La adición de 1 % de Pluronic F68 a la solución de IFN-?/excipiente se secó por aspersión exitosamente con un rendimiento de aproximadamente 49% en un tamaño de lote de 55 ml (1.1 g de sólido). La imagen de SEM de las partículas se muestra en la figura 2. Las partículas tienen una forma esférica lisa. El tamaño de partícula promedio es de 4.03 µm.

EJEMPLO 3 Cuatro suspensiones (A, B, C y D) se prepararon en la caja seca y se listan en el cuadro 4. La cantidad apropiada de SAIB se pesó y se añadió en un vial de vidrio de escintilación. La cantidad apropiada de agente tensíoactivo se añadió al mismo vial si se especificaba. El vial se calentó a 50°C y se mezcló manualmente mediante una espátula. La cantidad apropiada de partículas de IFN-? (como se prepara en el ejemplo 1 ó 2) se pesó y se añadió al vial. El vial se calentó a 40°C o temperatura inferior. La suspensión se mezcló usando una espátula.

CUADRO 4 Muestras de estabilidad de suspensión de IFN-?/SAIB en PBS se obtuvieron pesando aproximadamente 8 mg de suspensión de IFN-?/SAIB en un tubo de vidrio Vacutainer® de 5 ml y añadiendo 2 ml de PBS al tubo. Las muestras se almacenaron a 37°C para prueba de estabilidad. En cada punto de tiempo de estabilidad, la muestra se recogió de la cámara de estabilidad. El líquido se decantó en un vial de CLAR (cromatografía de líquidos de alto rendimiento) y fue analizado directamente por un método de CLAR-FI (cromatografía de líquidos de alto rendimiento de fase inversa) rápida. Para el gel de SAIB, se añadió 0.5 ml de ACN al 50% con 0.1 % de SDS al tubo, y el gel se disolvió durante 60 minutos, después se añadió 2 ml de PBS al tubo. La solución turbia se centrifugó y la capa líquida se transfirió al vial de CLAR para análisis de CLAR-FI rápida. La recuperación de proteína de la fase líquida y fase sólida y la recuperación total se calcularon. Muestras de estabilidad de suspensión de IFN-?/SAIB en depósitos del dispositivo implantable en PBS se exponen en el cuadro 5. Las muestras se analizaron en el inicio, 3 días y 7 días.

CUADRO 5 Durante la liberación de proteína de la suspensión no toda la proteína fue liberada instantáneamente en el medio de velocidad de liberación porque SAIB no es soluble en agua. La recuperación de la proteína de la fase acuosa durante puntos de tiempo de estabilidad seleccionados a 37°C se muestra en la figura 3. Para la formulación A (IFN-?/SAIB), la fracción de proteína recuperada después de 7 días es de aproximadamente 53%. Para la formulación B (IFN-?/SAIB+Pluronic F68), la fracción de proteína recuperada después de 7 días es de aproximadamente 73%. Para la formulación C (IFN- ?/SAIB+Span-40), la fracción de proteína recuperada después de 7 días es de aproximadamente 80%. Para la formulación D (IFN-?+Pluronic F68/SAIB), la fracción de proteína recuperada después de 7 días es de aproximadamente 69%. Los resultados muestran que la adición de agentes tensioactivos al vehículo SAIB o formulación de IFN-? en partículas secas incrementaron la liberación de IFN-? en la fase acuosa después de 7 días. El IFN-? total recuperado de la fase acuosa y fase sólida de SAIB (gel) se muestra en la figura 4. Para la formulación A (sin agente tensioactivo), la recuperación total disminuyó con el tiempo, v.gr., se observaron caídas promedio de aproximadamente 10% después de 3 días y 25% después de 7 días en PBS a 37°C. La adición de agentes tensioactivos al vehículo de suspensión o formulación en partículas secas (formulaciones B-D) dio por resultado aproximadamente 90-100% de recuperación total después de aproximadamente 7 días. El estudio muestra que los agentes tensioactivos se pueden añadir a una formulación de IFN-? en partículas secas o vehículo de suspensión para incrementar la liberación de IFN-? desde el vehículo de suspensión al medio de velocidad de liberación. Aunque la invención se ha descrito con respecto a un número limitado de modalidades, los expertos en la técnica, que tienen el beneficio de esta descripción, apreciarán que se pueden contemplar otras modalidades que no se aparten del alcance de la invención como se describe aquí. Por consiguiente, el alcance de la invención debe ser limitado únicamente por las reivindicaciones anexas.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Una formulación en suspensión que puede suministrarse mediante un dispositivo de suministro implantable que comprende: un vehículo hidrofóbico no acuoso que presenta características de fluido viscoso; y una formulación en partículas secas que comprende una biomolécula dispersa en el vehículo; en donde un primer agente tensioactivo es incorporado en el vehículo y un segundo agente tensioactivo es incorporado en la formulación en partículas secas. 2.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el vehículo hidrofóbico es no polimérico. 3.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el vehículo hidrofóbico comprende sustancialmente acetato-isobutirato de sodio. 4.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la biomolécula es un interferón. 5.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque suministra interferón desde un dispositivo de suministro de fármaco implantable a 1 ng/día a 600 µ/día durante por lo menos un mes. 6.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la biomolécula es un interferón omega. .- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la biomolécula es secada por aspersión con el agente tensioactivo. 8.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la formulación en partículas secas además comprende uno o más estabilizadores y un regulador de pH. 9.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque los estabilizadores son seleccionados del grupo que consiste de carbohidrato, antioxidante y aminoácido. 10.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el vehículo hidrofóbico está presente en una cantidad mayor que 60% en peso. 11.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la formulación en partículas secas está presente en un intervalo de 0.01 a 40% en peso. 12.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque una carga de agente tensioactivo en la formulación en partículas secas está en el intervalo de 0 a 10% en peso. 13.- La formulación en suspensión de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque una carga de agente tensioactivo en el vehículo está en el intervalo de 0 a 20% en peso. 14.- Una formulación en partículas secas que comprende: un interferón, un regulador de pH, un agente tensioactivo y uno o más estabilizadores seleccionados del grupo que consiste de un carbohidrato, un antioxidante y un aminoácido. 15.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque es secada por aspersión. 16.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el interferón es interferón omega. 17.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el interferón está presente en una cantidad que varía de 0.1 a 99.9% en peso. 18.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada además porque una relación en peso de cada estabilizador al interferón está en el intervalo de 0.1 a 99.9. 19.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque una relación en peso de cada estabilizador al interferón es mayor que 0.5. 20.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque una relación en peso del carbohidrato al interferón es mayor que 1.0. 21.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque una concentración del regulador de pH está en el intervalo de 5 mM a 50 mM. 22.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque un pH del regulador de pH está en el intervalo de 5.0 a 8.0. 23.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque interferón, carbohidrato, antioxidante y/o aminoácido, regulador de pH y agente tensioactivo están presentes en una relación de 1 :2:1.5-2.5:0.06. 24. La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el ¡nterferón es interferón omega, el carbohidrato es sacarosa, el antioxidante y/o aminoácido es metionina, y el regulador de pH es citrato. 25.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el agente tensioactivo está presente en un intervalo de 0.01 a 10% en peso. 26.- La formulación en partículas secas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el agente tensioactivo está presente en un intervalo de 0.01 a 5% en peso. 27.- Un dispositivo de suministro implantable que comprende: una formulación en suspensión que comprende un vehículo hidrofóbico no acuoso que presenta características de fluido viscoso, y una formulación en partículas secas que comprende un interferón disperso en el vehículo, en donde un primer agente tensioactivo es incorporado en el vehículo y un segundo agente tensioactivo es incorporado en la formulación en partículas secas; y un depósito que contiene la formulación de suspensión en una cantidad suficiente para proveer suministro continuo del interferón en una dosis terapéuticamente efectiva en un ambiente de uso durante por lo menos un mes. 28.- Un método para incrementar la liberación de interferón omega en un medio de velocidad de liberación hidrofílico, que comprende: suspender una formulación en partículas secas de interferón omega en un vehículo hidropónico no acuoso; e incorporar un primer agente tensioactivo en la formulación en partículas secas y un segundo agente tensioactivo en el vehículo hidrofóbico.